JPH0477445A - ナフトール誘導体またはその塩およびこれを用いる過酸化水素の定量方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野］ 本発明は、ナフトール誘導体またはその塩およびこれを
用いる過酸化水素の定置方法に関する。

〔従来技術・発明が解決しようとする課題〕多成分系で
ある血清や尿等の体液のような検体を、そのまま共存分
析方式で分析する臨床化学分析は酵素反応を存効に応用
することができる。それは酵素反応が基質を認識する特
異性が高いためである。その酵素センサーとして用いら
れる反応または検出系には■過酸化水素■ＮＡＤ　（Ｐ
）Ｈ■チアンニアを信号とするのが一般的であり、これ
を定量することにより検体中の正確な基質の定量が可能
となるのである。このうち、■の過酸化水素を信号とす
る分析の例として、グルコース、コレステロール、尿酸
等をそれぞれに特異的なオキシダーゼ、グルコースオキ
シダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ウリカーゼに
よって酸化させて過酸化水素を生成させる例がある。生
成した過酸化水素は、パーオキシダーゼのような過酸化
作用ををする物質の存在下に色原体と反応して有色物質
が生成される。この有色物質によって呈色した反応液の
吸光度を測定すると過酸化水素が定置できる。

従来、この過酸化水素定量の色原体となる化合物の開発
、新規反応よりなる過酸化水素定量法の開発等に向けて
多くの研究者が努力してきた。例えば、特開昭６２−２
４５９６３号公報および特開昭５７−１１０１９７号公
報には、ナフトール類やフェノール類とジアミン化合物
による定量法が開示されている。また、特開昭５９−１
８３６９８号公報では、ナフトール誘導体と過酸化水素
とのペルオキシダーゼによる反応を体液中に存在する誤
差を与える物質の影響を排除する目的に使っている０例
えば、血清中のトリグリセライド測定でグリセロールの
影響の除去にこの反応を利用している。

しかしながら、これら従来技術においても呈色の安定性
、感度の点で必ずしも満足できるものではなかった。

さらに、当該技術分野における技術の豊富化のために、
過酸化水素の色原体となる新規化合物の提供、さらには
発色機構が従来法とは全く異なる呈色の安定性に優れた
過酸化水素の測定方法の提供が待望されているのが実情
である。

本発明の目的は、上記従来の問題点の解決された、過酸
化水素の色原体となる新規化合物を提供することである
。

本発明のその他の目的は、臨床検査用や食品添加物分析
用等のナフトール誘導体を用いる過酸化水素の定量方法
であって、高感度に導く発色機構が従来法とは全く異な
る呈色の安定性に優れた過酸化水素の測定方法を提供す
ることである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意研究を重
ねた結果、後記一般式（Ｉ）で表わされるナフトール誘
導体またはその塩を創製すると共に、当該化合物を包含
する後記一般式（ｎ）で表される化合物〔化合物（■）
］が過酸化水素の色原体となること、および過酸化作用
を有する物質の存在下、過酸化水素により化合物（Ｉｔ
）が、容易にその酸化型ナフトール（ナフトキノン）類
に酸化され、さらに塩基の存在下、β−ケトエステル類
を反応させると発色性の化合物が得られ、この反応液の
吸光度を測定することにより過酸化水素を定量できるこ
とを見出して本発明を完成した。

即ち、本発明の要旨は次の通りである。

〔式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ水素、低級アルキ
ル、低級アルカノイルまたは一般式（ただし、ｎは１〜
５の整数、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ低級アルキルを
示す）で表される基を示す。ただし、Ｒ１およびＲ２は
同時に水素または低級アルカノイルを示さない〕 で表わされるナフトール誘導体またはその塩。

（２）過酸化作用を有する物質の存在下、過酸化水素含
有試料中にて、一般式（ＩＩ） 〔式中、Ｒ３およびＲ６は、それぞれ水素、低級アルキ
ル、低級アルカノイルまたは一般式（ただし、ｎは１〜
５の整数、Ｒ１およびＲ１は、それぞれ低級アルキルを
示す）で表される基を示す〕 で表わされるナフトール誘導体またはその塩を〔以下余
白〕 で表される化合物とした後、当該化合物（ｎｌ）に塩基
の存在下、一般式 〔式中、Ｒ１は置換されていてもよいアリール、置換さ
れていてもよいピリジル、置換されていてもよいスチリ
ル、アルコキシカルボニルアルキルを示し、Ｒ，は低級
アルキルを示す〕 で表わされるβ−ケトエステル類を反応させて得られる
発色性の化合物の呈色度を測定することを特徴とする過
酸化水素の定量方法。

本明細書において、各記号および各基は次のことを意味
するか、または次のものが例示される。

Ｒ３およびＲ２に関して、低級アルキルとしては炭素数
１〜４のもの（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル
、１ＳＯ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル等）が例
示され、特にメチルおよびエチルが好ましい。

低級アルカノイルとしては、炭素数１〜４のもの（例え
ば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イ
ソブチリル等）が例示され、特にアセチルが好ましい。

に関して、ｎは１〜５の整数であり、特に３が好ましい
。

また、Ｒ３およびＲ４に間して低級アルキルとしては、
炭素数１〜４のもの（例えば、メチル、エチル、ｉ−プ
ロピル、１ｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル等
）が例示され、特にメチルおよびエチルが好ましい。

Ｒ？に関して、置換されていてもよいアリールとしては
、例えばフェニル、ｐ−ニトロフェニル、ｐ−メトキシ
カルボニルフェニル、ｐ−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）
−フェニル、ｐ−クロロフェニル等が例示され、ピリジ
ルとしては、４−ピリジル、２−メチル−４−ピリジル
等が例示され、置換されていてもよいスチリルとしては
、スチリル、ｐ−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）−スチリ
ル、ｐ−ニトロスチリル等が例示される。また、アルコ
キシカルボニルアルキルにおいて、アルコキシ部分とし
ては炭素数１〜４の低級アルコキシが、アルキル部分と
しては炭素数１〜４の低級アルキルが好適であり、例え
ばメトキソカルポニルメチル等が好１１なものとして例
示される。

Ｒ８に関して、低級アルキルとしては、炭素数１〜４の
もの（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１ｓＯ
−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル）等が例示され、
特にメチル、エチルまたはｔ−ブチルが好ましい。

一般式（１）においてＲ３およびＲ，Ｃ一般式（ｎ）に
おいてはＲ１およびＲ，）が、アセチルおよびジメチル
アミノプロピルである化合物は、ブランク発色が低く、
特に好ましいものである。

一般式（１）および（ＩＩ）で表わされるナフトール誘
導体はＲ１および／またはＲ２が一般式（式中、Ｒ１お
よびＲ４は前記と同意義）で表される基である場合には
、塩酸塩、硫酸塩等の無機酸塩、酢酸塩等の有機酸塩の
態様であってもよい。ナフトール誘導体（Ｉ［）は臨床
化学分析に利用する場合、多くは水溶性であることが望
ましく、特にアミンの塩酸塩であることが好ましい。

本発明のナフトール誘導体Ｎ）を包含するナフトール誘
導体は次の方法によって製造される。

第１法 （ＩＩＩ）　　　　　　　　　　　　　　　（Ｉ［−１
）化合物（Ｉｌｌ）を、例えば酢酸、ジメチルホルムア
ミド等の溶媒に溶解し、還元剤（例えば、亜鉛、水素、
水素化ホウ素ナトリウム、塩化スズ等）で還元すること
によって上記化合物（ＩＩ−１）が製造される。

当該還元反応における反応条件は、例えば次の通りであ
る。

反応温度は室温〜１００’Ｃ２好ましくは８０　’Ｃで
あり、反応時間は５分〜２時間、好ましくは２０分間で
あり、常圧〜散気圧、好ましくは常圧下に撹拌または振
盪する。

第２法 （ｎ−２） 化合物（Ｉ［−１）をアルカノイル化することによって
、化合物（ｎ−２）が製造される。

アルカノイル化には自体既知の手段を通用すれば十分で
ある。アルカノイル剤としては、例えば酸無水物（例え
ば、無水酢酸、無水プロピオン酸等）等が好適に使用さ
れる。当該アルカノイル化は、適当な酸触媒（例えば、
ρ−トルエンスルボン酸、硫酸、メタンスルホン酸、ベ
ンゼンスルボン酸等）の存在下に行うことが好ましい。

当該反応における反応条件は、例えば次の通りである。

反応温度は室温〜１００″Ｃ１好ましくは７０　’Ｃで
あり、反応時間は５〜６０分、好ましくは１０分間であ
る。

第３法 である。

反応温度は室温〜８ｏ″Ｃ１好ましくは２５〜３０℃、
反応時間は１０〜６０分、好ましくは１５分間である。

第４法 υＨ 化合物（ＩＩ−２）を加アンモニア分解に付することに
よって化合物（１−１）が製造される。

加アンモニア分解は、化合物（ＩＩ−２）に脂肪族第一
級アミン（例えば、ｎ−プロピルアミン、メチルアミン
）等を反応させることによって実施される。当該反応は
、反応に不活性な溶媒、例えばＤＭＦ、テトラヒドロフ
ラン、メタノール、エタノール等の溶媒の存在に行うこ
とが好ましい、また、当該反応は窒素気流下に行うこと
が好ましい。

当該反応における反応条件は、例えば次の通り（＋−２
） 化合物Ｈ−１）を０−アルキル化することによって化合
物（１−２）が製造される。０−アルキル化は、例えば
、ハロゲン化アルキル（例えば、ヨウ化メチル）、硫酸
エステル（例えば、ジメチル硫酸）、ジアゾメタン、ジ
アゾエタン等を反応させることによって実施される。当
該反応は、反応に不活性な溶媒、例えばエーテル、テト
ラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン等の溶
媒の存在に行うことが好ましい。

当該反応における反応条件は、例えば次の通りである。

例えば、化合物（１−１）をエーテルに溶解し、ジアゾ
メタンのエーテル溶液を水冷下、徐々に加え、通常１〜
６０分、好ましくは３０分間反応させる。

第５法 化合物（１−２）を加アンモニア分解に付することによ
って化合物（１−３）を製造することができる。当該前
アンモニア分解は第３法と同様にして行われる。

第６法 化合物（１−１）と式 （ただし、Ｘは塩素、臭素、アルキルスルホニルオキシ
等の反応性基を示し、ｎ、Ｒ３およびＲ４は前記と同意
１１） で表される化合物とを反応させることによって、化合物
（１−，４）を製造することができる。

当該反応における反応条件は、例えば次の通りである。

反応温度は４０〜１００°Ｃ１好ましくは５０　’Ｃで
あり、反応時間は１０〜２０時間である。溶媒としてア
セトン、ＴＨＦ、ＤＭＦ等の不活性溶媒を使用すること
が好ましく、特にアセトンが好ましい。

当該反応に際しては、通常中和剤を使用することが好ま
しく、中和剤としては、例えば無水炭酸カリウム、無水
炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウ
ム等が例示される。

〔以下余白〕

第７法 ０■ （ただし、ｎ、Ｒ３およびＲ４は前記と同意義）化合物
（１−４）を加アンモニア分解することによって、化合
物（１−５）を製造することが出来る。

当該前アンモニア分解は第３法と同様にして行われる。

Ｒ１および／またはＲ２が一般式 とβ−ケトエステルＩｆ　（ＩＶ）による過酸化水素の
定量方法を反応式によって示せば次の通りである。

なお、以下の記載において、遊離の化合物のみについて
式示したが、塩層様の化合物についても同様に反応は進
行する。

（ＩＩ） で表される基である一般式（Ｉ）または（ＩＩ）で表さ
れるナフトール誘導体に、好ましくは等モル量の無機酸
または有機酸の水溶液、好ましくは１０％塩酸水溶液を
加えることによって、ナフトール誘導体（１）および（
ＩＩ）の塩が製造される。

本発明のナフトール誘導体１目またはその塩（ＩＩ［） ［ （Ｖ）　　　　　　　　　　　　　　　　（Ｖ　’　）
（上記式中、Ｒ＋　、Ｒｚ　、Ｒｓ　、Ｒ１、Ｒ，およ
びＲ，は前記と同意義） まず、ナフトール誘導体（Ｉｔ）は過酸化作用を有する
物質の存在下、過酸化水素により定量的に酸化されて化
合物（Ｉｌｌ）となる。

化合物（Ｉ［ｌ）は淡黄色で比色定量には不適切である
が、炭酸カリウムや１．８−ジアザビシクロ［５，４，
０）−７−ウンデセン（ＤＢＵ）の如き塩基（特に、弱
塩基）の存在下、β−ケトエステルＩｆ　（ＩＶ）と容
易に反応して化合物（Ｖ）になり、さらに長波長吸収極
大を示すアニオン（Ｖ゛）になると推定される。

本発明者らは、この点を詳細に研究した結果、適切な塩
基の存在下に、化合物（Ｉ［［）とβ−ケトエステルｗ
４（ＩＶ）とを反応させることによって、化合物（Ｖ）
が得られ、当該化合物は塩基性下であれば、アニオン（
Ｖ′）となってその反応液は青色を呈すること、即ち化
合物（ＩＩ）から化合物（ＤＩ）を経て、化合物（Ｖ′
）に到る反応を利用して過酸化水素を高感度に定量する
ことができることを見出した。

以下に本発明の定量方法について詳説する。

ナフトール誘導体（ＩＩ）をＤＭＦ等の溶媒に０、００
１〜１０ｇ／Ｍ１、好ましくは０．１−１■／−となる
よう溶解させる。この溶液ｌ１１１当たり被検物質であ
る過酸化水素含有液５〜２００μ！、好ましくは２０〜
１００ｕｊ２および過酸化作用を有する物１ｔｏ、０１
〜Ｉ　００１　Ｕ／ｄ、好マシ＜ハ１〜５０１Ｕ／ｄを
ｌｄ加え、室温〜４５℃、好ましくは２５〜３７°Ｃに
加温して反応させる。当該反応は中性付近が好ましく、
反応時間は５〜３０分間が好ましい、ナフトール誘導体
（Ｉｔ）は過酸化水素の量に比例して化合物（Ｉｌｌ　
、）に酸化される。

この反応液にβ−ケトエステルＩ！　（■）をＤＭＦ等
の溶媒に０．１〜５００ｇ／ｄ、好ましくは１０〜１０
０■／ｄとなるよう溶解した液１ｄ当たり適当な塩基２
０μｌを加え、室温〜４５°Ｃ１好ましくは２５〜３７
℃に加温し、５分以上、好ましくは５〜１５分間反応さ
せる。

本発明において使用されるβ−ケトエステル類（ｒＶ）
としては、例えばヘンジイル酢酸エチル（ＩＶ−１）　
、マロン酸ジメチル（ＩＶ−２）、シンナモイル酢酸エ
チル（ＩＶ−３Ｌ　シンナモイル酢酸ｔ−ブチル（ＩＶ
−４）、ｐ−フタロイル酢Ｍｔ−ブチル（ＩＶ−５）、
ｐ−ジメチルアミノシンナモイル酢酸ｔ−ブチル（ＴＶ
−６）、ｐ−ジメチルベンゾイル酢酸エチル（ＩＶ−７
）、ｐ−ニトロベンゾイル酢酸ｔブチル（ＩＶ−８）、
イソニコチノイル酢酸メチル（ＩＶ−９）等の化合物が
例示される。

本発明において用いられるβ−ケトエステル類（ＩＶ）
は、例えば次の方法によって製造される。

（■）　　　　　　　　　（■） （ただし、Ｒ１およびＲ１は前記と同意義）化合物（■
）を、乾燥ＤＭＦ、塩化メチレン、ＴＨＦ、クロロホル
ム、アセトニトリル等の不活性溶媒に溶解し、Ｎ、Ｎ’
−カルボニルイミダゾール（ＣＤＩ）　、カルボニルジ
トリアゾール等を加えて、通常、２０〜１２０分間、好
ましくは、３０〜６０分間、０゛Ｃ〜室温、好ましくは
室温にて撹拌する。

当該反応は窒素気流下に行うことが好ましい０反応液に
マグネシウムハーフエステル（■）を加えて、１０〜２
４間、好ましくは、１晩撹拌する。反応終了後、反応液
に、水、希塩酸等を加えて、酢酸エチル、エーテル、ク
ロロホルム、塩化メチレン等にて抽出する。これをシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー法、再結晶法または減
圧蒸留法等により精製することによりβ−ケトエステル
類（ＩＶ）が製造される。

本発明における過酸化作用を有する物質としては、ペル
オキシダーゼ（例えば、西洋わさび、ジャガイモ、大根
、いちしくの樹液、カブラ等の植物起源のペルオキシダ
ーゼ、Ａｒｔｈｒｏｍ　ｃｅｒｓ　ｒａｍｏｓｕｓ等の
微生物起源のペルオキシダーゼ）、ラクトペルオキシダ
ーゼ（牛乳由来）、ベルドペルオキシダーゼ（白血球由
来）、合成ペルオキシダーゼ（Ｔｈｅｏｒｅｉｌ、Ｍａ
ｅｔｈｌｙ、Ａｃｔａ、Ｃｈｅｗ、５ｅｃａｎｄ、　１
４．４２２〜４３４（１９５０）参照〕、メトヘモグロ
ビン、オキシヘモグロビン、ヘモグロビン、アルカリ性
ヘマチン、ヘミンおよびヘミン誘導体、チオシアン酸鉄
、スズ酸鉄、フェロシアン酸第−鉄およびシリカゲルに
吸着させた第ニクロム塩等が例示されるが、特に西洋わ
さび由来のペルオキシダーゼが好ましい。

本発明で使用する塩基としては、炭酸カリウム、トリエ
チルアミン（Ｅ　ＬＡＮ）　、１，８−ジアザビシクロ
（５，４，０）−７−ウンデセン（ＤＢＵ）、ｌ、５ジ
アザビシクロ［４，３，０）ノン−５−エン（ＤＢＮ）
、１．４〜ジアザビシクロＣ２，２，２）オクタン（Ｄ
ＡＢＣＯ）、重炭酸カリウム、苛性アルカリ（ＫＯＨ，
Ｌｉ０）Ｉ、ＮａＯＨ，Ｂａ（ＯＨ）ｚ等）、ジメチル
アニリン、コハク酸イミドカリウム、フェノオキシドア
ルカリ（ナトリウムフェノラート、カリウムフェノラー
ト等）およびトリトン−Ｂ　（Ｂｅｎｚｙｌｔｒｉｍｅ
ｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍＨｙｄｒｏｘｉｄｅ）等が例
示され、特にトリエチルアミン、ＤＢＵ、炭酸カリウム
等が好ましい。

本発明において、ナフトール誘導体（Ｉ）としては２，
３−ジクロロ−４−ハイドロキシ−１−（３Ｎ、Ｎ−ジ
メチルアミノ）プロピルオキシナフタレン（１−５Ａ）
、β−ケトエステル類（ＩＶ）としでは、ヘンジイル酢
酸エチル（ＩＶ−１）　、塩基としては、ＤＢＵの組み
合わせが、呈色の安定性および感度の点で最も好ましい
。

［発明の効果］ ナフトール誘導体（■）〔当該化合物は、ナフトール誘
導体（１）を包含するものである〕は、過酸化作用を有
する物質の存在下、過酸化水素により定量的に酸化され
て化合物（ＩＩＩ）となる。化合物（Ｉｌｌ）は淡黄色
で比色定量には不適切であるが、塩基の存在下、β−ケ
トエステル類（ＩＶ）と容易に反応して化合物（Ｖ）に
なり、さらに長波長吸収極大を示すアニオン（Ｖ′）に
なる、従って、化合物（ｎ）から化合物（Ｉ［ｌ）を経
て化合物（Ｖ′）に到る反応を利用すれば過酸化水素を
高感度に定量することができる。

ナフトール誘導体（ＩＩ）は、反応後の色素がλｍａｘ
５７０ｎｍ以上であり、検体中のヘモグロビン、ビリル
ビン、乳び等の影響を受けにくいので測定値の誤差を生
しにくく、感度がよく、しかも呈色の安定性がよい。

従って、本発明のナフトール誘導体またはその塩および
これを用いる過酸化水素の定量方法によって、グルコー
ス、コレステロール、尿酸、遊離脂肪酸、リン脂質、ト
リグリセライド、コリンエステラーゼ等を高感度に測定
することができ、臨床上極めて有用なものである。

〔実施例〕

本発明をより詳細に説明するために実施例を挙げるが、
本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。

実施例１ ２０ｇ　（８８，１＋ｕ＋ｏｌ）を酢酸２００Ｉ１１に
溶解し、亜鉛（４０ｇ）を加えて加熱した。ヌンチェで
亜鉛を除去し、濾液・に水を加えて析出した結晶をろ取
すると化合物（ＩＩ−１）が得られる。これを精製する
ことなく、無水酢酸（９０ＩＩｌ）とＰ−）ルエンスル
ホン酸を加えて加熱し、その後冷却して析出した結晶を
ろ取し、酢酸エチルにて再結晶すると化合物（ＩＩ−２
Ａ）が得られる。収量１６．３４　ｇ（５９，３％Ｌ　
ｍｐ、２４８〜２５，１°ＣＩＲシ：’：＃”３Ｃｍ−
”　１７７０実施例２ （■） （ＩＩ−１） （Ｉ［−２Ａ） ２．３−ジクロル−１，４−ナフトキノン〔化合物（■
）〕（ＩＩ−２Ａ）　　　　　　　　　　　　　　（Ｉ
−ＩＡ）化合物（Ｉ［−２Ａ）　５　ｇ　（１６，０ａ
ａｏｌ）をＤＭＦｌｏｏｌｄに溶解し、窒素雰囲気下、
ロープロピルアミンを１．３１１　ａｌ（１６ａａｏｌ
）滴下し、３０分撹拌、反応終了後、反応液に水を加え
てエーテル抽出し、エーテル層を無水硫酸ナトリウムで
乾燥後、溶媒を減圧留去した。得られた粗結晶を、エー
テル−〇−ヘキセン混合溶媒により再結晶すると化合物
（１−ＩＡ）が得られる。収量２．４０７ｇ　（５５，
５％）、ｍｐ、１６３〜１６５°Ｃ Ｉ　Ｒｐ　ｍａ’＊　ｃｍ−’　：　３７００　１７５
０’　Ｈ−Ｎ　Ｍ　Ｒ（８０ＭＨｚ）　　δｐｐｍ　：
２．４９　（ｓ、　３Ｈ，−Ｃｈ） （１−ＩＡ）　　　　　　　　　　　　　　　（１−３
Ａ）化合物（１−ＩＡ）　１．６９４ｇ　（６，２５ｍ
ｍｏｌ）のエーテル溶液にジアゾメタンを泡の発生を見
ながら加え、１時間室温にて撹拌した。溶媒を減圧留去
した残渣にｎ−プロピルアミン５ｄを加え、室温にて撹
拌した。３０分後、溶媒を留去し、１０％塩酸を加えて
エーテル抽出し、エーテル層を無水硫酸ナトリウムで乾
燥後、溶媒を留去し得られた結晶をｎ−へキサンにて再
結晶すると、化合物（Ｉ３Ａ）が得られる。収量１．１
５１ｇ（７５，７７％）、ｍｐ、１１６〜１１８°Ｃ Ｉ　Ｒｖ　二：’、　ｃｔｍ−’　：　３７００．１５
７０’　ＨＮ　ＭＲ（８０Ｍｌ（ｚ）　　（ＣＤＣｈ）
　　　δｐｐｍ　　：３．９７　（ｓ、　３Ｈ，０−Ｃ
ｈ） ５．９７　（ｂｒ−ｓ、　ＩＨ，−０Ｈ）７．５２〜８
．２７　（ｍ、　４Ｈ，Ａｒ−旦）ＥＡ、　　　　　Ｃ
，、Ｈ＋＋Ｏ□Ｃｌ２＝２４３理論値　Ｃ：５４．３５
　　Ｈ：３．３２　　Ｎ：０．ＯＯ実験値　Ｃ：５４．
３０　　Ｈ：３．５３　　Ｎ：Ｏ，０Ｏ５４，２６３，
２５０，００ 実施例４ （１−ＩＡ）　　　　　　　　　　　　　　　（１−４
Ａ）化合物（Ｉ　　ＩＡ）Ｉｇ（３，６９＋ｍｏｌ）を
アセトン６、Ｏｄに溶解し、３〜ジメチルアミノプロピ
ルクロリド塩酸塩７００ｍ　（４，４２８＋＋ｎｏｌ）
および無水炭酸カリウム２．０４　ｇ　（１４，７Ｆ＋
＋５ｏｌ）を加え、窒素雰囲気下、３０時間還流する０
反応終了後、溶媒を留去し１０％塩酸にて抽出、水層を
無水炭酸カリウムでアルカリ性にし、酢酸エチルにて抽
出、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を留去し、残渣
をシリカゲルを用いたカラムクロマトにて分離精製（ク
ロロホルム：メタノール＝５＝１）シた。溶媒留去後、
得られた粗結晶をｎ−へキサンにより再結晶すると、化
合物（Ｉ−４Ａ）が得られる。収量６２７ｇ（５０％）
、ｍｐ、６３〜６４℃ Ｉ　　ＲνＨｇ：　　ｃｓ＋−’　　：　　１７５５．
　１２００’　ＨＮ　Ｍ　Ｒ（８０ＭＨ２）　　（ＣＤ
Ｃ１３）　　　δｐｐｍ　　：２．０２〜２．４７　　
（鵬、　　８１（、−Ｃｈ−、Ｎ−（Ｃ旦□）、）２．
５０〜２．７０　（ＩＩ、　ｓＬ　０−Ｃ１，０−ＣＯ
Ｃｊｌｌ）４．１６　（ｔ、　２Ｂ、　Ｎ−Ｃｊｉｌ−
、Ｊ＝６１１ｚ）７．２５〜Ｂ−２０（ｍ、　　４Ｈ，
Ａｒ−Ｈ）〔以下余白〕 実施例５ （［−４Ａ）　　　　　　　　　　　　　（Ｉ−５Ａ）
化合物（ｌ　　４　Ａ）　１００ｇ　（０，２９４ｇｍ
ｏｌ）にｎ−プロピルアミン０．５　ｄを加えて、窒素
雰囲気下、室温撹拌し、１５分後に溶媒留去を行う。残
渣に希塩酸を加えて析出した結晶を濾取し、乾燥後イソ
プロパツールにより再結晶すると、化合物（１−５Ａ）
が得られる。

収量５０ｇ（７０，０％）、ｍｐ、１８７〜１８８℃Ｉ
　　Ｒｙ　二：”、　　ｃｍ−’　　：　３２００．　
１５６５．　１３６０ＨＮ　Ｍ　Ｒ（８０ＭＨｚ）　（
ＤＭＳＯ−ｄＪ　　δｐｐｍ　：２．２１〜２．５５　
　（−、２Ｈ，−Ｃｈ−）２．８９　（ｓ、　６８．−
Ｎ−（Ｃｊｊ、１）ｚ）３．５０　（ｓ、　２Ｈ，Ｏ−
Ｃ，１ｉｌ−）４．０８　（ｔ、　２Ｈ，Ｎ−Ｃｈ−、
Ｊ＝６Ｈｚ）７．５８〜８．４７　　（ａ、　　４Ｈ，
Ａｒ−旦）１０．４４〜１１．０７　（ｍ、　ＩＨ，−
吐）実施例６ 桂皮酸２９６．３２１１ｇ　（２ｍ＋＊ｏｌ）に乾燥Ｄ
ＭＦ　２ｄを加え、窒素雰囲気下、ＣＤ　Ｉ　（Ｎ、Ｎ
’−カルボニルジイミダゾール）３２２．８■（２ｍｍ
ｏｌ　）を加えて、３０分間室温にて撹拌した。反応液
にマグネシウムハーフエステルのエチルエステル３００
．６２■（２，１ｍｍｏｌ　）を加えて６時間撹拌した
。反応終了後、反応液に水を加えて酢酸エチルにて抽出
した。

酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を留
去し、残渣をシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフ
ィーにて分離着装後、ｎ−ヘキサンにより再結晶すると
化合物（ＩＶ−３）が得られる。

収量２４９［（５７，１１％）　、ｍｐ、　ｉ２６〜１
２８°Ｃ１２８° Ｃ実施２９６．３２１ｇ（２ｎｎｏｌ）を乾燥ＤＭＦに
溶かし、窒素雰囲気下、ＣＤｌ３２２．８■（２ｏｌｍ
ｏｌ　）を加えて、３０分間室温にて撹拌した。反応液
にマグ７シウムハーフエステルのｔ−ブチルエステル３
５９．４２１ｇ　（２，１１ＩｎＩＯ＋）を加えて一晩
撹拌した。

反応終了後、反応液に水を加えて酢酸エチルにて抽出し
た。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒
を留去し、残渣をシリカゲルを用いたカラムクロマトグ
ラフィーにて分離精製（溶媒、酢酸エチル）した。溶媒
留去後、析出した結晶をエタノールにて再結晶すると化
合物（ＩＶ−４）が得られる。収量３６０■（７３，１
７％）、ｍｐ１２４〜１２６°Ｃ 実施例８ テレフタル酸メチル３６０．３２■（２ｍｍｏｌ　）を
窒素雰囲気下、乾燥ＤＭＦ２ｍに懸濁し、ＣＤｌ３２２
、８■（２ｓｍｏｌ　）を加えて３０分間室温にて撹拌
した。反応液にマグネシウムハーフエステルのｔ−ブチ
ルエステル３５９．４２■（２，１ｓｍｏｌ）を加えて
一晩撹拌した。反応終了後、反応液に水を加えて酢酸エ
チルにて抽出した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウム
で乾燥後、溶媒を留去し、残渣を減圧蒸留にて精製する
と化合物（ＩＶ−５）が得られる。収量２３２■（４１
，７％）、ｂｐ、１３０’（／　３　ｍｍＨｇ 実施例９ を加えて酢酸エチルにて抽出した。酢酸エチル層を無水
硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を留去し、残渣をシリカ
ゲルを用いたカラムクロマトグラフィーにて分離精製（
溶媒、酢酸エチル）した。溶媒留去後、析出した結晶を
エタノールにて再結晶すると無色針状晶の化合物（ＩＶ
−６）が得られる。

収量１５１．６　ｇ（４２２）　、ｍ　ｐ、１６（１−
１６２°Ｃ実施例１０ （ＩＶ−６） ｐ−ジメチルアミノ桂皮Ｍ３８２■（２ｗｌ１ｏｌ　）
を乾燥ＤＭＦに溶かし、窒素雰囲気下、ＣＤｌ３２２．
８■（２＋ｍｏｌ）を加えて、３０分間室温にて撹拌し
た０反応液にマグネシウムハーフエステルのｔ−ブチル
エステル３５９．４２［（２，１ｍ　ｍｏｌ）を加えて
一晩撹拌した０反応終了後、反応液に水ｐ−ジメチルア
ミノ安患香酸３２６．３８■（２ｎｎｏｌ　）を窒素雰
囲気下、乾燥ＤＭＦ２ａｆに懸濁し、ＣＤｌ３２２、８
■（２ｓ＋ｍｏｌ　）を加えて、３０分間室温にて撹拌
した０反応液にマグネシウムハーフエステルのエチルエ
ステル３００．６２■（２，１ｍ５ｏｌ　）を加えて２
時間撹拌した０反応終了後、反応液に水を加えて酢酸エ
チルにて抽出した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウム
で乾燥後、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルを用いたカ
ラムクロマトグラフイ−にて分離精製（溶媒、酢酸エチ
ル）した、溶媒留去後、析出した結晶を酢酸エチルにて
再結晶すると化合物（ＩＶ−７）が得られる。収量３３
０■（７０，２１％）、ｍｐ、８５〜８８°Ｃ。

実施例１１ （ＩＶ−８） ｐ−二トロ安息香＃３３４■（２＋ｕｓｏｌ　）を窒素
雰囲気下、乾ＲＤＭＦ２ｄｌに懸濁し、ＣＤｌ３２２．
８■（２ｍｍｏｌ　）を加えて、３０分間室温にて撹拌
した０反応液にマグネシウムハーフエステルのｔ−ブチ
ルエステル３５９．４２■（２，１ｍ＋＊ｏｌ　）を加
えて２時間撹拌した０反応終了後、反応液に水を加えて
酢酸エチルにて抽出した。酢酸エチル層を無水硫酸ナト
リウムで乾燥後、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルを用
いたカラムクロマトグラフィーにて分＃精製（溶媒、酢
酸エチル）した。溶媒留去後、析出した結晶を酢酸エチ
ルにて再結晶すると無色針状晶の化合物（ＩＶ−８）が
得られる。収量９２ｍｇ　（３５％）、ｍｐ。

１７７〜１　８０　”Ｃ 実施例Ｉ２ イソニコチンＭ　２４６．２２１ｇ　（２’ａ　ｍｏｌ
）を窒素雰囲気下、乾燥ＤＭＦ２ｄに懸濁し、ＣＤ　Ｉ
　３２２．８■（２＋＋ｕｓｏｌ　）を加えて、３０分
間室温にて撹拌した。

反応液にマグネシウムハーフエステルのメチルエステル
２７１．２１　ｍｇ　（２，１ｍｍｏｌ）を加えて一晩
室温にて撹拌した。反応終了後、反応液に少量の水を加
えて酢酸エチルにて抽出した。酢酸エチル層を無水硫酸
ナトリウムで乾燥後、溶媒を留去し、残渣をベンゼンに
て再結晶すると化合物（ＩＶ−９）が得られる。収量１
３９ｍ（２３％）、ｍｐ、６８〜７０°Ｃ Ｉ　　Ｒｌ’　二：Ｓ”ｘ　　Ｃ１１−’　　：　　１
２６０ＨＮ　Ｍ　Ｒ（８０ＭＨｚ）　（ＣＤＣ１ｚ）　
δｐｐｍ　：３．８３　（ＩＩ、　　６Ｈ，ｏ−ｃｏ、
、　　−ｃＨ−）７．７６〜８．８８　　（ｍ、　　４
Ｈ，ｐｙｒｉｄｉｎｅ）〔余白〕 実施例１３ ５０ｍＭ）リス・塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）中に５０　
ｒ　Ｕ／ｄＰＯＤを含有する試験溶液（１）を作る。

化合物（１−５Ａ）をＤＭＦに１１ｇ／ｄとなるよう溶
解し、これを試験溶液（２）とする。ベンゾイル酢酸エ
チルをＤＭＦに０．１ｇ／Ｉｉとなるよう溶解し、これ
を試験溶液（３）とする０層長１ｃｍの吸光度測定用セ
ルに試験溶液（Ｉｌｌａｄおよび試験溶液（２）■−を
入れ、３７℃にて約５分間加温する。過酸化水素水５．
２　ｍ　Ｍを５０ｕｌ、試験溶液（３）　１　ｄおよび
ＤＢＵ２０μｌを加え、よく混和し３７°Ｃに加温する
。上記の反応液の吸収曲線を水を対照に採取すると５分
後に反応はほとんど完了し、６０２ｎｍの吸収極大で吸
光度は０．６０２であった０反応液は２０分後も安定な
呈色を示した。

実施例１４ ５０ｍＭ）リス・塩酸緩衝液（ｐ　Ｈ７，５）中に、５
０１　Ｕ／ｄＰＯＤを含有する試験溶液（１）を作る。

化合物（１−５Ａ）をＤＭＦに１■／−となるよう溶解
し、これを試験溶液（２）とする、ベンゾイル酢酸エチ
ルをＤＭＦに０．２ｇ／ｘｄとなるよう溶解し、これを
試験溶液（３）とする。層長１　ｃｍの吸光度測定用セ
フ１．Ｎ試験溶１（１１１ａｆ、ＥＭｉ液（２１１ｙｄ
ｔ＝よび過酸化水素水５．２　ｍ　Ｍを１００ｔＩｆ入
れ、３７°Ｃにて５分間加温する。試験溶！（３）　ｔ
　＊およびトリエチルアミン０．１　ｄを加え、よく混
和し３７°Ｃに加温する。上記の反応液の吸収曲線を水
を対照に採取すると１５分後に反応はほとんど完了し、
６０３ｎｍの吸収極大をもつ濃青色であった。６１０ｎ
ｍにおける吸光度は０．９４５であった０反応液は２時
間後も安定な呈色を示した。

実施例１５ 実施例Ｉ４と同様に反応させ検量線を作成した。

ただし、５．２ｍＭ過酸化水素水の量を２０．５０．７
０．１００μｌと変化させた。測定時間はトリエチルア
ミンを加えてから１５分後とし、６１０ｎｍにおける吸
光度を測定した。

〔以下余白〕

〔結果〕 〔以下余白〕 実施例１６ 下記の組み合わせにて、実施例１３と同様にして、 １収極大を示す波長を測定した。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は、それぞれ水素、低級ア
   ルキル、低級アルカノイルまたは一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （ただし、ｎは１〜５の整数、Ｒ＿３およびＲ＿４は、
   それぞれ低級アルキルを示す）で表される基を示す。た
   だし、Ｒ＿１およびＲ＿２は同時に水素または低級アル
   カノイルを示さない〕 で表わされるナフトール誘導体またはその塩。
2. （２）過酸化作用を有する物質の存在下、過酸化水素含
   有試料中にて、一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） 〔式中、Ｒ＿５およびＲ＿６は、それぞれ水素、低級ア
   ルキル、低級アルカノイルまたは一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （ただし、ｎは１〜５の整数、Ｒ＿３およびＲ＿４は、
   それぞれ低級アルキルを示す）で表される基を示す〕 で表わされるナフトール誘導体またはその塩を式 ▲数式、化学式、表等があります▼（III） で表される化合物とした後、当該化合物（III）に塩基
   の存在下、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） 〔式中、Ｒ＿７は置換されていてもよいアリール、置換
   されていてもよいピリジル、置換されていてもよいスチ
   リル、アルコキシカルボニルアルキルを示し、Ｒ＿８は
   低級アルキルを示す〕 で表わされるβ−ケトエステル類を反応させて得られる
   発色性の化合物の呈色度を測定することを特徴とする過
   酸化水素の定量方法。