JPH05103692A - 光学活性エステルの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】 １−アリールオキシ−２−アルキルアセテー
トのＲ体およびＳ体からなる混合物にカンジタ属、クリ
プトコッカス属、デバリオマイセス属、エンドマイセス
属、ハンゼヌラ属、クルイベロマイセス属、ピシア属、
ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属またはミ
クロコッカス属に属する微生物、これらの処理物または
これらに由来するリパーゼを作用させて該Ｒ体の１−ア
リールオキシ−２−アルキルアセテートをＲ体の１−ア
リールオキシ−２−アルカノールに変換させ、得られる
反応物から該アルコールを除去して残存するＳ体の１−
アリ−ルオキシ−２−アルキルアセテートを取得する。 【効果】 本願の特定の菌を用いた方法によれば、医・
農薬品並びに医・農薬品または液晶等の中間体として有
用なＳ体の１−アリールオキシ−２−アルキルアセテー
トを従来法と比較して効率よく生産することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、酵素法により光学活性
エステルを製造する方法に関するものである。詳しく
は、１−アリールオキシ−２−アルキルアセテートのＲ
体およびＳ体からなる混合物（ラセミ体）からＳ体の１
−アリールオキシ−２−アルキルアセテートを製造する
方法に関するものである。

【０００２】

【従来技術および発明が解決しようとする問題点】不斉
炭素を含む化合物を化学合成によって製造すると、目的
の化合物は、一般に、そのＲ体とＳ体のラセミ体として
得られる。Ｒ体またはＳ体の一方の光学活性体のみを得
る方法として、不斉合成法や光学分割法が知られてい
る。しかしながら、不斉合成法は合成ルートが煩雑であ
り、又、光学分割法はジアステレオマーを経るために効
率が悪く工業的に採用するのは困難であった。

【０００３】また、ラセミ体に特定の微生物由来の酵素
を作用させて一方の光学活性体を得る方法も知られてい
る。この方法は、不斉合成法や光学分割法に比べて一般
に効率よく光学活性体を得ることができるが、酵素の基
質特異性のために適用できる範囲が限られる。例えば、
医農薬或いは液晶などの中間体として有用な１−アリー
ルオキシ−２−アルキルアセテートは、化学合成によっ
て製造されるためＲ体エステルとＳ体エステルのラセミ
体として得られる。しかし、このエステルのラセミ体に
作用し、一方の光学活性体を取得し得るような酵素は、
本発明者らの知る範囲では未だない。

【０００４】

【問題点を解決するための手段】そこで本発明者らはか
かるエステルのラセミ体に作用し、Ｓ体のエステルを効
率良く取得し得るような酵素を提供すべく鋭意検討し
た。その結果、特定の微生物、これらの処理物またはこ
れらに由来するリパーゼを作用させることにより所期の
目的が達成されることを知得し、本発明を完成するに至
った。

【０００５】即ち、本発明の要旨は、１−アリールオキ
シ−２−アルキルアセテートのＲ体およびＳ体からなる
混合物に、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、クリプトコ
ッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、デバリオマイ
セス（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）属、エンドマイセス
（Ｅｎｄｏｍｙｃｅｓ）属、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｎ
ｕｌａ）属、クルイベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍ
ｙｃｅｓ）属、ピシア（Ｐｉｃｈｉａ）属、ブレビバク
テリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、コリネ
バクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、
ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する
微生物、これらの処理物またはこれらに由来するリパー
ゼを作用させて、該Ｒ体１−アリールオキシ−２−アル
キルアセテートのみをＲ体の１−アリールオキシ−２−
アルカノールに変換させ、得られる反応物から該アルコ
ールを除去して残存するＳ体の１−アリ−ルオキシ−２
−アルキルアセテートを取得することを特徴とする光学
活性エステルの製造方法に存する。

【０００６】以下、本発明について詳細に説明する。本
発明においては、１−アリ−ルオキシ−２−アルキルア
セテートのＲ体およびＳ体の混合物に上記微生物、これ
らの処理物またはこれらに由来するリパーゼを作用させ
る。該エステルのアリール基としてはフェニル基、ナフ
チル基、メチルフェニル基などが挙げられる。また、ア
ルキル基としてはメチル基、エチル基、プロピル基、ブ
チル基などの低級アルキル基が挙げられる。

【０００７】本発明においては、１−フェノキシ−２−
プロピルアセテートが特に好適に使用される。かかるエ
ステルのＲ体およびＳ体の混合物は、例えば、アルキレ
ングリコールα−モノアリールエーテルをエステル化す
ることによって製造される。本発明では、カンジダ（Ｃ
ａｎｄｉｄａ）属、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ）属、デバリオマイセス（Ｄｅｂａｒｙｏｍ
ｙｃｅｓ）属、エンドマイセス（Ｅｎｄｏｍｙｃｅｓ）
属、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属、クルイベロ
マイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、ピシア
（Ｐｉｃｈｉａ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒ
ｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ミクロコッカス（Ｍｉ
ｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物、これらの処理
物またはこれらに由来するリパーゼを使用する。

【０００８】Ｃａｎｄｉｄａ属に属する微生物として
は、Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ，Ｃａｎｄｉｄａ
ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ，Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉ
ｃａｌｉｓ，Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎ
ｄｉｉ，Ｃａｎｄｉｄａ ｒｏｂｕｓｔａ，などがあげ
られる。具体的にはＣａｎｄｉｄａ ｋｅｆｙｒ ＩＦ
Ｏ ０８８２（ＩＦＯ カタログ８版Ｐ１０ １９８８
記載）、Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉｉ ＣＢＳ６
７７４（ＣＢＳ カタログ ３１版 Ｐ３４２ １９８
７記載）、Ｃａｎａｄｉｄａ ｍｅｔｈａｎｏｓｏｒｂ
ｏｓａ ＣＢＳ ６８５２（ＣＢＳ カタログ３１版
Ｐ３４８ １９８７記載）等が挙げられる。

【０００９】Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属に属する微生
物としては、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒ
ｍａｎｓ，Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｌｂｉｄｕｓ，
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆｌａｖｕｓ，などがあげ
られる。具体的にはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｌａｕ
ｒｅｎｔｉｉ ＩＦＯ ０６０９（ＩＦＯ カタログ
８版 Ｐ１８ １９８８記載）等が挙げられる。

【００１０】Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ属に属する微生
物としては、Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｈａｎｓｅｎ
ｉｉ，Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｃｏｕｄｅｒｔｉ
ｉ，Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｍａｒａｍａ，などが
あげられる。具体的にはＤｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｖ
ａｎｒｉｊｉａｅ ＪＣＭ ２１６９（ＪＣＭ カタロ
グ ３版 Ｐ２０８ １９８６記載）等が挙げられる。

【００１１】Ｅｎｄｏｍｙｃｅｓ属に属する微生物とし
ては、Ｅｎｄｏｍｙｃｅｓ ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ，Ｅ
ｎｄｏｍｙｃｅｓ ｍａｇｎｕｓｉｉ，Ｅｎｄｏｍｙｃ
ｅｓｒｅｅｓｓｉｉ，などがあげられる。具体的にはＥ
ｎｄｏｍｙｃｅｓ ｄｅｃｉｐｉｅｎｓ ＩＦＯ ０１
０２（ＩＦＯ カタログ ８版 Ｐ２０ １９８８記
載）等が挙げられる。

【００１２】Ｈａｎｓｅｎｕｌａ属に属する微生物とし
ては、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ａｎｏｍａｌａ，Ｈａｎｓ
ｅｎｕｌａ ｂｉｍｕｎｄａｌｉｓ，Ｈａｎｓｅｎｕｌ
ａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ，Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｓａｔ
ｕｒｎｕｓ，などがあげられる。具体的にはＨａｎｓｅ
ｎｕｌａ ｇｌｕｃｏｚｙｍａ ＩＦＯ １４７２（Ｉ
ＦＯ カタログ ８版 Ｐ２４ １９８８記載）等が挙
げられる。

【００１３】Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属に属する微
生物としては、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘ
ｉａｎｕｓ，Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｐｈａｆｆ
ｉｉ，Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｔｈｅｒｍｏｔｏ
ｌｅｒａｎｓ，などがあげられる。具体的にはＫｌｕｙ
ｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ
ＩＦＯ ０６６２（ＩＦＯ カタログ ８版Ｐ２７ １
９８８記載）等が挙げられる。

【００１４】Ｐｉｃｈｉａ属に属する微生物としては、
Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ，Ｐ
ｉｃｈｉａ ｆａｒｉｎｏｓａ，Ｐｉｃｈｉａ ｏｈｍ
ｅｒｉ，などがあげられる。具体的にはＰｉｃｈｉａｂ
ｕｒｔｏｎｉｉ ＩＦＯ １１９６（ＩＦＯ カタログ
８版 Ｐ３０ １９８８記載）等が挙げられる。

【００１５】Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する
微生物としては、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉ
ｐｏｌｙｔｉｃｕｍ，Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｌｕｔｅｕｍ，Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍ
ｏｎｉａｇｅｎｅｓ，などがあげられる。具体的にはＢ
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｖａｒｉｃａｔｕｍ
ＮＲＲＬ ２３１１（ＢＩＯＣＨＩＭ ＢＩＯＰＨＹ
Ｓ ＡＣＴＡ ５８５（２）・１９７９ Ｐ２７３−２
８１．，ＡＧＲ．ＢＩＯＬ．ＣＨＥＭ ３７（１
１）．，１９７３ Ｐ２６８３−２６８４．，Ｊ．ＦＥ
ＲＭＥＮＴ．ＴＥＣＨＮＯＬ ５９（２）．，１９８１
１２５〜１３０）等が挙げられる。

【００１６】Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属す
る微生物としては、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｆａｓｃｉａｎｓ，Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ，などがあげられる。具体的
にはＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉ
ｃｕｍ ＡＴＣＣ １３０３２（ＡＴＣＣ カタログ
１６版 Ｐ５２ １９８５記載）、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ ＡＴＣＣ １３
０５９（ＡＴＣＣカタログ １６版 Ｐ５２ １９８５
記載）等が挙げられる。

【００１７】Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ属に属する微生物
としては、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓｒｏｓｅｕｓ，Ｍｉ
ｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｖａｒｉａｎｓ，Ｍｉｃｒｏｃｏ
ｃｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ，などがあげられ
る。具体的にはＭｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ
ＩＦＯ ３０６４（ＩＦＯ カタログ ８版 Ｐ７９
１９８８記載）等が挙げられる。

【００１８】これら微生物の培養に必要な栄養物として
は、とくに限られるものではなく、通常微生物の培養に
用いられるものが利用される。たとえば、炭素源として
は、グルコース、シュクロース、フラクトース、グリセ
ロール、ソルビトール、糖蜜、澱粉加水分解物等の糖
質、酢酸、フマル酸等の有機酸、等が利用される。窒素
源としては、硝酸塩類、アンモニウム塩類、コーンステ
ィープリカー、酵母エキス、肉エキス、酵母粉末、大豆
加水分解液、綿実粉、ポリペプトン、ベントン等が挙げ
られる。無機塩としては、リン酸カリウム、リン酸ナト
リウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム等が利用で
きる。

【００１９】培養温度は１０℃〜４５℃、好ましくは、
３０℃〜４０℃で、通常２０〜４８時間程度培養する。
その際、培養は好気的に行なわせ、十分に、例えば、Ｏ
Ｄ_{66 0} で５〜４０程度に菌を生育させる。本発明では、
菌体自身を作用させてもよいし、或いは、菌体の抽出
物、更にはそれを硫安分別、イオン交換クロマトグラフ
ィー、ゲル濾過等の公知の方法によって分離精製したも
のを作用させてもよい。即ち、本発明における「微生物
の処理物、またはこれらに由来のリパーゼ」とは、これ
らを意味する。

【００２０】菌体自身を作用させる場合、上記のように
して十分菌を生育させた後、エステルのラセミ体を添加
する。エステルのラセミ体の濃度は０．０１〜１０％、
好ましくは、０．０５〜２％の範囲で添加する。また、
菌体の抽出物或いは精製したリパーゼを作用させる場
合、タンパク質量で２〜１５mg程度の菌体抽出物を含む
０．０１〜１Ｍリン酸緩衝液（pH６〜９）等の溶液に、
エステルのラセミ体を上記範囲で添加する。添加後１０
〜４５℃、好ましくは、３０〜４０℃で６０時間以下、
通常約３〜６０時間反応を行わせる。

【００２１】本発明においては、使用する菌株の種類に
よって多少異なるが、前記反応時間程度であれば、上記
微生物、これらの処理物またはこれらに由来するリパー
ゼが選択的にＲ体の１−アリールオキシ−２−アルキル
アセテートに作用して加水分解し、Ｒ体の１−アリール
オキシ−２−アルカノールに変換され、Ｓ体エステルは
そのまま残存する。あまり長時間反応させるとＳ体のエ
ステルが徐々に加水分解されるので使用する菌株につい
て予め望ましい反応時間を求めておくのがよい。

【００２２】このようにして、Ｓ体エステルを効率よく
取得できるような時間で反応させて、得られる反応物か
ら公知の方法、例えば、酢酸エチル、ヘキサン等の溶媒
で抽出し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等
で精製することによって、目的のＳ体の１−アリールオ
キシ−２−アルキルアセテートを得ることができる。本
発明によって得られるＳ体の１−アリールオキシ−２−
アルキルアセテートは、医農薬品並びに医農薬品または
液晶等の中間体として有用である。

【００２３】

【発明の効果】本発明方法によれば、１−アリールオキ
シ−２−アルキルアセテートのラセミ体から、効率よく
そのＳ体のエステルを得ることが出来る。

【００２４】

【実施例】以下、実施例によりさらに本発明を詳細に説
明するが、その要旨を越えない限り、以下に限定されな
い。 実施例１ （１）基質の合成 １−フェノキシ−２−プロピルアセテートの合成プロピ
レングリコール−α−モノフェニルエーテル（東京化成
品）５３ｇとトルエン２５０ml、（Ｃ₂ Ｈ₅ ） ₃ Ｎ１１
０mlを１ｌフラスコへ仕込み、無水酢酸５０mlを滴下
後、１４０℃まで加熱した。４時間撹拌後、冷却し水５
０mlで２回、５％ＮａＨＣＯ₃ ５０mlで３回、更に水５
０mlで６回夫々洗浄した。濃縮後、０．２mmHg／８０℃
／浴温１１０℃にて蒸留し目的物（１−フェノキシ−２
−プロピルアセテートのラセミ体）を得た。

【００２５】（２）Ｒ体アルコールの取得 菌の培養はグルコース２０ｇ、蔗糖１０ｇ、肉エキス１
０ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス２ｇ、ＮａＣｌ５ｇ，
Ｋ₂ ＨＰＯ₄ ４ｇ，ＫＨ₂ ＰＯ₄ ２ｇ，ＭｇＳＯ₄ ・７
Ｈ₂ Ｏ２ｇ、コーンスティープリカーの粉末（ＰＣＭ）
１ｇ、蒸留水１ｌ、pH７．０の培地が５mlはいった試験
管１８φへＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔ
ａｍｉｃｕｍ ＡＴＣＣ １３０５９ ＭＯ−６菌をス
ラントより１白金耳植菌し、３０℃、２〜３日振盪培養
をおこなった。

【００２６】十分生育した培養液（ＯＤ₆₆₀ ２０）に前
記（１）で合成したエステルのラセミ体を０．１％（Ｗ
／Ｖ）となるように加え、引き続き３０℃、４８時間振
盪培養した。反応後菌体を分離し、上清液に同量の酢酸
エチルを加えて抽出した。次いで、抽出物を４０℃で減
圧乾固し、９０％メタノールにとかし、下記１）の条件
でＨＰＬＣにてアルコールとエステルを分離した。次い
で、得られたエステルを下記２）の条件でＨＰＬＣにて
Ｓ体エステルを精製した。４８時間培養後の反応物中の
エステル量は５５％（添加エステルに対して）で、その
エステル中のＳ体エステルは６０．８％であった。

【００２７】１）エステルの分析：分析条件は下記の通
り。 カラム：ＯＤＳ−１ＨＵ（４．６×２５０mm）三菱化成
（株）製 溶媒 ：９０％メタノール、 流速：０．５ml／min 検出 ：２５４nm

【００２８】２）エステル鏡像体の分析：分析条件は下
記の通り。 カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌｌ ＯＤ（４．６×２５０
mm）ダイセル化学工業（株）製 溶媒 ：５％イソプロパノール／９５％ヘキサン、 流
速：０．５ml／min 検出 ：２５４nm

【００２９】実施例２ 実施例１において、下記表１に示した菌株を用い、ま
た、培地は酵母用、細菌用の夫々の培地を用いる他は同
様にして培養を行った。４８時間培養後の反応物中のエ
ステルの割合および該エステル中のＳ体エステルの割合
は、表１に示す通りであった。

【００３０】

【００３１】

【表１】

【００３２】実施例３ 実施例１と同様の方法で培養して得た菌体ペレット５ｇ
を５０mlリン酸カリウム緩衝液（pH７．０）に懸濁し、
超音波破砕機（１９kHe ）で３０分間処理した。遠心分
離をしてその上清液を１昼夜、５０mMリン酸緩衝液（pH
７．０）に対して透析し、無細胞抽出液とした。

【００３３】この無細胞抽出液（タンパク質で５．５m
g）を含む５０mMリン酸緩衝液（pH７．０）に実施例１
の（１）で合成したラセミ体エステルを０．１％（Ｗ／
Ｖ）となるように加え、３０℃で３０分および１時間反
応させた。反応後、実施例１と同様にして反応物中のエ
ステル量およびそのエステル中のＳ体エステルの割合
は、反応後３０分および１時間において、夫々、７５％
および７０％（反応物中のエステル量）、３３．３％お
よび４２．９％（Ｓ体エステルの割合）であった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:78） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:15） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:84） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:265） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:01）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 １−アリールオキシ−２−アルキルアセ
   テートのＲ体およびＳ体からなる混合物に、カンジダ
   （Ｃａｎｄｉｄａ）属、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔ
   ｏｃｏｃｃｕｓ）属、デバリオマイセス（Ｄｅｂａｒｙ
   ｏｍｙｃｅｓ）属、エンドマイセス（Ｅｎｄｏｍｙｃｅ
   ｓ）属、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属、クルイ
   ベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、ピシ
   ア（Ｐｉｃｈｉａ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖ
   ｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏ
   ｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ミクロコッカス（Ｍ
   ｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物、これらの処
   理物またはこれらに由来するリパーゼを作用させて、該
   Ｒ体の１−アリールオキシ−２−アルキルアセテートの
   みをＲ体の１−アリールオキシ−２−アルカノールに変
   換させ、得られる反応物から該アルコールを除去して残
   存するＳ体の１−アリールオキシ−２−アルキルアセテ
   ートを取得することを特徴とする光学活性エステルの製
   造方法。