JPH0517831B2 - - Google Patents
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- JPH0517831B2 JPH0517831B2 JP1171752A JP17175289A JPH0517831B2 JP H0517831 B2 JPH0517831 B2 JP H0517831B2 JP 1171752 A JP1171752 A JP 1171752A JP 17175289 A JP17175289 A JP 17175289A JP H0517831 B2 JPH0517831 B2 JP H0517831B2
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- JP
- Japan
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- amylase
- streptomyces
- culture
- amylase inhibitor
- aiu
- Prior art date
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- Expired - Lifetime
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
（技術分野）
本発明は新規な微生物であるストレプトマイセ
スsp.Y−125及びこれからアミラーゼ阻害物質を
製造する方法に関するものである。 （背景技術） 一般的に、人体に必要である三大栄養素の一つ
である炭水化物はその大部分が二糖類又は多糖類
の形態で摂取された後に、体内に吸収される直前
にアミラーゼ又はマルターゼ又はサツカラーゼ等
の配糖体加水分解酵素の作用により分解され、こ
の際体内て過量の糖が生成すると糖尿病、肥満
症、過脂肪症、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等の
原因になる。 従つて、これらの疾病を予防、治療するために
は配糖体加水分解酵素の阻害物質を使用して体内
に存在する各種の配糖体加水分解酵素の作用を抑
制する事により過量の糖が生成するのを防止する
方法が知られており（米国特許第4307194号、同
第4451455号）、このような配糖体加水分解酵素阻
害物質は放線菌、特にストレプトマイセス
（Streptomyces）によつて産生されることが多い
物質として知られている。 従来の配糖体加水分解酵素はその分子量によつ
て高分子量のものはアミラーゼに対する阻害効果
が優れ、これに対し低分子量のものはマルターゼ
又はサツカラーゼに対する阻害効果が優れている
と報告されているが、本発明方法で得られるのは
比較的低分子量でありながらアミラーゼに対して
特異的な阻害効果を示すアミラーゼ阻害物質であ
る。 従来知られているアミラーゼ阻害物質の製造方
法としては、生物学的方法以外な方法、すなわ
ち、サルチル酸又はアビスシン（abiscine）のよ
うな低分子物質の物理的吸着によつて非特異的に
酵素を阻害するか、あるいは酵素を変成、沈澱さ
せる高分子物質を利用して製造する方法もある。 しかし、このような従来のアミラーゼ阻害物質
は唾液アミラーゼのみに影響を及ぼすにすぎず、
膵臓アミラーゼにはほとんど影響を及ぼすことが
できず（E.Kneen、R.M.Standtest、「Arch.
Biochem.Biophys.」９、235（1946））、そのほか
のアミラーゼに対しても非特異的であつてほとん
ど阻害作用を及ぼすことができない欠点があると
同時に、熱に対して不安定であり、トリプシンに
よつて不活性になるため、活性度が比較的低いと
報告されている（米国特許第4282318号）。 そこで本発明者等はアミラーゼ阻害物質を産生
する高い活性を有する新規な微生物を発見し、そ
の分離及び利用に関して広範囲な研究を行つた結
果、上記新規な微生物が産生するアミラーゼ阻害
物質が従来のアミラーゼ阻害物質に比べてその活
性及び安定性が一層優れた物質であることを見い
出し、本発明に至つたものである。 本発明の目的はアミラーゼ阻害物質を産生する
新規な菌株及びこれを利用して高収率でアミラー
ゼ阻害物質を効果的に製造する方法を提供するこ
とにある。 （発明の開示） 本発明の微生物であるストレプトマイセスsp.
Y−125は大韓民国江原道春川及び京畿道烏山で
採取された土壌試料から分離培養した新菌株で、
1988年７月５日付けにて韓国科学技術院に受託番
号KCTC8387Pで受託され、1989年３月31日付け
にてアメリカン・タイプ・カルチヤー・コレクシ
ヨン（American Type Culture Collection）
（ATCC）に受託番号ATCC53890で受託されてい
る。 以下に、新菌株ストレプトマイセスsp.Y−125
の系統学的特性を逐次に説明する。特性の測定は
インターナシヨナル・ストレプトマイセス・プロ
ジエクト（Intarnational Streptomyces
Project）（ISP）によつて勧奨されている方法お
よび「バーゲイス・マニユアル・オブ・デイター
ミネイテイブ・バクテリオロジー（Bergey′s
Manual of Determinative Bacteriology）」第
２巻（1986）に記載されている方法に準拠して行
つた。以下に、次の５種の公知のストレプトマイ
セス属微生物との特性比較データを示した： 微生物１：ストレプトマイセス・カルプス（St.
carves）（ジヤーナル・オブ・ザ・アンチビオ
テイクス（J.Antibiotics）35：1156〜1159
（1982）） 微生物２：ストレプトマイセス・コルコルシー
（St.Corchorusii）（アグリカルチヤル・アン
ド・バイオロジカル・ケミストリイ（Agric.
Biol.chem.）49(1)、107〜110（1985）） 微生物３：ストレプトマイセス・ジアスタテイク
ス（St.diastaticus）の亜種であるアミロスタ
テイクス（amylostatics）（アグリカルチヤ
ル・アンド・バイオロジカル・ケミストリイ、
41(6)、919〜924（1977）） 微生物４：ストレプトマイセス・グリスコスポレ
ウス（St.griscosporeus）（アグリカルチヤ
ル・アンド・バイオロジカル・ケミストリイ、
45(11)、2599−2604（1981）） 微生物５：ストレプトマイセス・スピリツス
（St.spiritus）（米国特許第4254256） (1) 培養学的特性 次の９種の培地を使用して培養学的特性の測
定を行つた： (1) ISP No.２＝イースト・麦芽寒天培地 (2) ISP No.３＝オートミル寒天培地 (3) ISP No.４＝スターチ・無機塩寒天培地 (4) ISP No.５＝グリセリン・アスパラギン寒
天培地 (5) ISP No.６＝ペプチド・イースト・鉄寒天
培地 (6) ISP No.７＝チロシン寒天培地 (7) SM＝脱脂牛乳寒天培地 (8) NT＝栄養寒天培地 (9) GA＝グルコース・アスパラギン寒天培地 (注) ISP＝インターナシヨナル・ストレプト
マイセス・プロジエクト（International
Streptomuces Project）培地 本発明の新菌株であるストレプトマイセス
sp.Y−125は胞子の色が灰色系列に属する豊富
な連続菌系体を生成するので、このような培養
上の特性は次の表１に示すようにオートミール
寒天培地（ISP No.３）、スターチ・無機塩寒
天培地（ISP No.４）、チロシン寒天培地（ISP
No.７）上で現われるし、特にオートミール寒
天培地（ISP No.３）で生育状態及び色相を明
確に観察することができる。裏面の色相は黄褐
色で、この色相はPHの影響を受けない。チロシ
ン寒天培地では黄色色素が、脱脂牛乳寒天培地
では淡黄色色素が生成し、これ以外の培地上で
は可溶性色素が生成しなかつた。表２に、スト
レプトマイセスsp.Y−125と上述の５の公知の
ストレプトマイセス属微生物との比較データを
示す。
スsp.Y−125及びこれからアミラーゼ阻害物質を
製造する方法に関するものである。 （背景技術） 一般的に、人体に必要である三大栄養素の一つ
である炭水化物はその大部分が二糖類又は多糖類
の形態で摂取された後に、体内に吸収される直前
にアミラーゼ又はマルターゼ又はサツカラーゼ等
の配糖体加水分解酵素の作用により分解され、こ
の際体内て過量の糖が生成すると糖尿病、肥満
症、過脂肪症、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等の
原因になる。 従つて、これらの疾病を予防、治療するために
は配糖体加水分解酵素の阻害物質を使用して体内
に存在する各種の配糖体加水分解酵素の作用を抑
制する事により過量の糖が生成するのを防止する
方法が知られており（米国特許第4307194号、同
第4451455号）、このような配糖体加水分解酵素阻
害物質は放線菌、特にストレプトマイセス
（Streptomyces）によつて産生されることが多い
物質として知られている。 従来の配糖体加水分解酵素はその分子量によつ
て高分子量のものはアミラーゼに対する阻害効果
が優れ、これに対し低分子量のものはマルターゼ
又はサツカラーゼに対する阻害効果が優れている
と報告されているが、本発明方法で得られるのは
比較的低分子量でありながらアミラーゼに対して
特異的な阻害効果を示すアミラーゼ阻害物質であ
る。 従来知られているアミラーゼ阻害物質の製造方
法としては、生物学的方法以外な方法、すなわ
ち、サルチル酸又はアビスシン（abiscine）のよ
うな低分子物質の物理的吸着によつて非特異的に
酵素を阻害するか、あるいは酵素を変成、沈澱さ
せる高分子物質を利用して製造する方法もある。 しかし、このような従来のアミラーゼ阻害物質
は唾液アミラーゼのみに影響を及ぼすにすぎず、
膵臓アミラーゼにはほとんど影響を及ぼすことが
できず（E.Kneen、R.M.Standtest、「Arch.
Biochem.Biophys.」９、235（1946））、そのほか
のアミラーゼに対しても非特異的であつてほとん
ど阻害作用を及ぼすことができない欠点があると
同時に、熱に対して不安定であり、トリプシンに
よつて不活性になるため、活性度が比較的低いと
報告されている（米国特許第4282318号）。 そこで本発明者等はアミラーゼ阻害物質を産生
する高い活性を有する新規な微生物を発見し、そ
の分離及び利用に関して広範囲な研究を行つた結
果、上記新規な微生物が産生するアミラーゼ阻害
物質が従来のアミラーゼ阻害物質に比べてその活
性及び安定性が一層優れた物質であることを見い
出し、本発明に至つたものである。 本発明の目的はアミラーゼ阻害物質を産生する
新規な菌株及びこれを利用して高収率でアミラー
ゼ阻害物質を効果的に製造する方法を提供するこ
とにある。 （発明の開示） 本発明の微生物であるストレプトマイセスsp.
Y−125は大韓民国江原道春川及び京畿道烏山で
採取された土壌試料から分離培養した新菌株で、
1988年７月５日付けにて韓国科学技術院に受託番
号KCTC8387Pで受託され、1989年３月31日付け
にてアメリカン・タイプ・カルチヤー・コレクシ
ヨン（American Type Culture Collection）
（ATCC）に受託番号ATCC53890で受託されてい
る。 以下に、新菌株ストレプトマイセスsp.Y−125
の系統学的特性を逐次に説明する。特性の測定は
インターナシヨナル・ストレプトマイセス・プロ
ジエクト（Intarnational Streptomyces
Project）（ISP）によつて勧奨されている方法お
よび「バーゲイス・マニユアル・オブ・デイター
ミネイテイブ・バクテリオロジー（Bergey′s
Manual of Determinative Bacteriology）」第
２巻（1986）に記載されている方法に準拠して行
つた。以下に、次の５種の公知のストレプトマイ
セス属微生物との特性比較データを示した： 微生物１：ストレプトマイセス・カルプス（St.
carves）（ジヤーナル・オブ・ザ・アンチビオ
テイクス（J.Antibiotics）35：1156〜1159
（1982）） 微生物２：ストレプトマイセス・コルコルシー
（St.Corchorusii）（アグリカルチヤル・アン
ド・バイオロジカル・ケミストリイ（Agric.
Biol.chem.）49(1)、107〜110（1985）） 微生物３：ストレプトマイセス・ジアスタテイク
ス（St.diastaticus）の亜種であるアミロスタ
テイクス（amylostatics）（アグリカルチヤ
ル・アンド・バイオロジカル・ケミストリイ、
41(6)、919〜924（1977）） 微生物４：ストレプトマイセス・グリスコスポレ
ウス（St.griscosporeus）（アグリカルチヤ
ル・アンド・バイオロジカル・ケミストリイ、
45(11)、2599−2604（1981）） 微生物５：ストレプトマイセス・スピリツス
（St.spiritus）（米国特許第4254256） (1) 培養学的特性 次の９種の培地を使用して培養学的特性の測
定を行つた： (1) ISP No.２＝イースト・麦芽寒天培地 (2) ISP No.３＝オートミル寒天培地 (3) ISP No.４＝スターチ・無機塩寒天培地 (4) ISP No.５＝グリセリン・アスパラギン寒
天培地 (5) ISP No.６＝ペプチド・イースト・鉄寒天
培地 (6) ISP No.７＝チロシン寒天培地 (7) SM＝脱脂牛乳寒天培地 (8) NT＝栄養寒天培地 (9) GA＝グルコース・アスパラギン寒天培地 (注) ISP＝インターナシヨナル・ストレプト
マイセス・プロジエクト（International
Streptomuces Project）培地 本発明の新菌株であるストレプトマイセス
sp.Y−125は胞子の色が灰色系列に属する豊富
な連続菌系体を生成するので、このような培養
上の特性は次の表１に示すようにオートミール
寒天培地（ISP No.３）、スターチ・無機塩寒
天培地（ISP No.４）、チロシン寒天培地（ISP
No.７）上で現われるし、特にオートミール寒
天培地（ISP No.３）で生育状態及び色相を明
確に観察することができる。裏面の色相は黄褐
色で、この色相はPHの影響を受けない。チロシ
ン寒天培地では黄色色素が、脱脂牛乳寒天培地
では淡黄色色素が生成し、これ以外の培地上で
は可溶性色素が生成しなかつた。表２に、スト
レプトマイセスsp.Y−125と上述の５の公知の
ストレプトマイセス属微生物との比較データを
示す。
【表】
【表】
【表】
＋：生成する； −：生成せず； ±：不明瞭。
×：データなし。
(2) 形態学的特性 オートミール寒天上で生育したストレプトマ
イセスsp.Y−125の形態学的特性を観察した結
果、分裂していない分枝状菌糸体が生成し、胞
子嚢は生成しなかつた。又、気生菌糸のふちに
は胞子体が生成し、気生菌糸は波状形態であ
り、胞子は球形又は棒形である。胞子の表面は
柔らかく平滑であり、その大きさは0.7〜1.2×
1.2〜1.8μｍであつた。この際、形態学的特性
は光学顕微鏡で調査し、胞子の表面及び大きさ
は走査型電子顕微鏡で観察した。表３にストレ
プトマイセスsp.Y−125と上述の公知の５種の
ストレプトマイセス属微生物との比較データを
示す。
×：データなし。
(2) 形態学的特性 オートミール寒天上で生育したストレプトマ
イセスsp.Y−125の形態学的特性を観察した結
果、分裂していない分枝状菌糸体が生成し、胞
子嚢は生成しなかつた。又、気生菌糸のふちに
は胞子体が生成し、気生菌糸は波状形態であ
り、胞子は球形又は棒形である。胞子の表面は
柔らかく平滑であり、その大きさは0.7〜1.2×
1.2〜1.8μｍであつた。この際、形態学的特性
は光学顕微鏡で調査し、胞子の表面及び大きさ
は走査型電子顕微鏡で観察した。表３にストレ
プトマイセスsp.Y−125と上述の公知の５種の
ストレプトマイセス属微生物との比較データを
示す。
【表】
(3) 生理学的特性
次の表４はストレプトマイセスsp.Y−125と
上述の公知の５種のストレプトマイセス属微生
物との比較データを示す。表４に示した炭素利
用度すなわち炭素源の同化性は、滅菌した炭素
源を加えて最終濃度を1.0％にしたプリドハ
ム・ゴドリーブ寒天培地を使用して炭素利用度
を測定した結果である。培養温度は30℃とし、
14日後に測定を行つた。
上述の公知の５種のストレプトマイセス属微生
物との比較データを示す。表４に示した炭素利
用度すなわち炭素源の同化性は、滅菌した炭素
源を加えて最終濃度を1.0％にしたプリドハ
ム・ゴドリーブ寒天培地を使用して炭素利用度
を測定した結果である。培養温度は30℃とし、
14日後に測定を行つた。
【表】
(注) −：利用されない； ＋：利用される；
±：不明瞭； ×：データなし
表４に示すように、ストレプトマイセスsp.
Y−125はスターチを加水分解するが、ゼラチ
ンを液化（すなわち加水分解）せず、脱脂牛乳
を凝固およびペプトン化せず、硝酸塩を亜硝酸
塩に還元せず、又セルロースを分解しなかつ
た。又、これらの菌株は20〜80℃で生育し、特
に25〜30℃で増殖が旺盛であり、好気性で、チ
ロシン寒天（ISP No.７）上でメラニン様色素
を生成した。 上述のように、本発明のストレプトマイセス
sp.Y−125は、培養学的、形態学的及び生理学的
特性を公知の類似種の特性と比較すると、公知の
種と種々の点で異なるので、これを新規な菌株に
分離した（参照：バーゲイス・マニユアル・オ
ブ・デイターミネイテブ・バクテリオロジー」第
２巻、第1383〜1418頁（1986））。 本発明の新菌株であるストレプトマイセスsp.
Y−125が産生するアミラーゼ阻害物質は多糖類
とアミノ酸とから構成される物質で、その活性は
12000AIU／mg以上で非常に高く、100℃で120分
間加熱しても優れた阻害活性を示した。 アミラーゼ阻害物質１単位（1AIU）はアミラ
ーゼの単位が50％阻害された時の阻害物質の量と
定義し、アミラーゼ１単位は１分間に澱粉から
1μMのグルコースが生成する時の酵素量と定義
し、生成するグルコースは３，５−ジニトロサリ
チル酸で還元糖を測定し、マルトースで標準曲線
を求めた 又、本発明に係るアミラーゼ阻害物質の活性は
次の方法で測定した。すなわち、５ｍＭの塩化カ
ルシウムを含む100ｍＭトリス塩酸緩衝液（PH
7.0）中に２×10-2％のアミラーゼ溶液（10〜
20AIU／ml）0.5mlを溶解し、これに0.5mlの阻害
物質溶液（０〜300μｇ）又は培養液を加え、混
合した後にこれを37℃で10分間反應させ、次いで
100ｍＭトリス塩酸緩衝溶液中に溶解した1.5％の
可溶性澱粉溶液２mlを添加し、10分間反應させ
る。次いで、２mlの３，５−ジニトロサリチル酸
を加え、５分間加熱後充分に冷却し、蒸留水で10
倍稀釈し、しかる後に546nｍで吸光度を測定し
た。なお、対照試験は阻害物質溶液の代わりに蒸
留水0.5mlを加えた点を除いて上述と同一の方法
で実施し、空試験はアミラーゼ溶液の代わりに10
ｍＭトリス塩酸緩衝液（PH7.0）0.5mlを加え、阻
害物質溶液の代わりに蒸留水0.5mlを加えた点を
除いて上述と同一の方法で実施した。吸光度の測
定値から次式に基づいて阻害率（％）を求めた： 阻害率（％）＝（Ｂ−Ｔ）−Ｃ／Ｂ−Ｃ×100 上式においてＴ、Ｃ及びＢはそれぞれ阻害物質
の試験、対照試験及び空試験のそれぞれで得られ
た吸光度を示す。 本発明に係るアミラーゼ阻害物質はPHに対する
安定性が極めて高く、PH2.0ないし12.0の範囲に
おいて安定であり、従つて分解過程においてその
活性が低下することはない。 本発明に係るアミラーゼ阻害物質は、セフアテ
クス（Sephadex）Ｇ−25（商品名）で測定した分
子量が700〜1500であり、分子量が比較的低いに
もかかわらずアミラーゼ、マルターゼ、及びサツ
カラーゼに対して充分な阻害効果を示し、特に唾
液アミラーゼに対するよりも膵臓アミラーゼに対
する阻害効果が一層優れていることが分つた。 本発明のストレプトマイセスsp.Y−125
（KCTC8387P、ATCC53890）菌種が産生するア
ミラーゼ阻害物質は、これを活性成分とし、これ
に薬学的に許容できる担体又は希釈剤を含有させ
ることにより、肥満症、糖尿病、胃炎、過脂肪
症、胃潰瘍、十二指腸潰瘍の予防及び治療剤とし
て使用することができ、また本発明のストレプト
マイセスsp.Y−125（KCTC8387P、ATCC53890）
菌種が産生するアミラーゼ阻害物質は食品添加剤
として有用である。 以下に、本発明の新菌株であるストレプトマイ
セスsp.Y−125の培養方法及びその培養物からア
ミラーゼ阻害物質を分離する方法を詳述する。 (1) 菌株の培養 酵母抽出物、脱脂大豆、ペプトンのような窒
素源、可溶性澱粉、グルコースのような炭素
源、及び塩化ナトリウムのような無機塩を含有
する培地に希薄塩酸水溶液を加えてそのPHを
6.0〜7.0に調節し、121℃で15分間殺菌した後
に、菌を接種して好気性条件下に25〜30℃で２
〜４日間培養を行つた。 次の表５には種々の炭素源（濃度１％）に対
する阻害物質の活性を示す。表６には窒素源に
対する阻害物質の活性を示す。表５及び表６か
ら分るように、炭素源が可溶性澱粉で、窒素源
が酵母抽出物とホリペプトン（polypeptone）
の混合物である場合に活性は最も高かつた。 此の際、消泡剤を使用することもでき、消泡
剤は一般的に過度の泡を防止するのに有用であ
る。シリコーン消泡剤のように普通に使用され
る消泡剤を使用した。
±：不明瞭； ×：データなし
表４に示すように、ストレプトマイセスsp.
Y−125はスターチを加水分解するが、ゼラチ
ンを液化（すなわち加水分解）せず、脱脂牛乳
を凝固およびペプトン化せず、硝酸塩を亜硝酸
塩に還元せず、又セルロースを分解しなかつ
た。又、これらの菌株は20〜80℃で生育し、特
に25〜30℃で増殖が旺盛であり、好気性で、チ
ロシン寒天（ISP No.７）上でメラニン様色素
を生成した。 上述のように、本発明のストレプトマイセス
sp.Y−125は、培養学的、形態学的及び生理学的
特性を公知の類似種の特性と比較すると、公知の
種と種々の点で異なるので、これを新規な菌株に
分離した（参照：バーゲイス・マニユアル・オ
ブ・デイターミネイテブ・バクテリオロジー」第
２巻、第1383〜1418頁（1986））。 本発明の新菌株であるストレプトマイセスsp.
Y−125が産生するアミラーゼ阻害物質は多糖類
とアミノ酸とから構成される物質で、その活性は
12000AIU／mg以上で非常に高く、100℃で120分
間加熱しても優れた阻害活性を示した。 アミラーゼ阻害物質１単位（1AIU）はアミラ
ーゼの単位が50％阻害された時の阻害物質の量と
定義し、アミラーゼ１単位は１分間に澱粉から
1μMのグルコースが生成する時の酵素量と定義
し、生成するグルコースは３，５−ジニトロサリ
チル酸で還元糖を測定し、マルトースで標準曲線
を求めた 又、本発明に係るアミラーゼ阻害物質の活性は
次の方法で測定した。すなわち、５ｍＭの塩化カ
ルシウムを含む100ｍＭトリス塩酸緩衝液（PH
7.0）中に２×10-2％のアミラーゼ溶液（10〜
20AIU／ml）0.5mlを溶解し、これに0.5mlの阻害
物質溶液（０〜300μｇ）又は培養液を加え、混
合した後にこれを37℃で10分間反應させ、次いで
100ｍＭトリス塩酸緩衝溶液中に溶解した1.5％の
可溶性澱粉溶液２mlを添加し、10分間反應させ
る。次いで、２mlの３，５−ジニトロサリチル酸
を加え、５分間加熱後充分に冷却し、蒸留水で10
倍稀釈し、しかる後に546nｍで吸光度を測定し
た。なお、対照試験は阻害物質溶液の代わりに蒸
留水0.5mlを加えた点を除いて上述と同一の方法
で実施し、空試験はアミラーゼ溶液の代わりに10
ｍＭトリス塩酸緩衝液（PH7.0）0.5mlを加え、阻
害物質溶液の代わりに蒸留水0.5mlを加えた点を
除いて上述と同一の方法で実施した。吸光度の測
定値から次式に基づいて阻害率（％）を求めた： 阻害率（％）＝（Ｂ−Ｔ）−Ｃ／Ｂ−Ｃ×100 上式においてＴ、Ｃ及びＢはそれぞれ阻害物質
の試験、対照試験及び空試験のそれぞれで得られ
た吸光度を示す。 本発明に係るアミラーゼ阻害物質はPHに対する
安定性が極めて高く、PH2.0ないし12.0の範囲に
おいて安定であり、従つて分解過程においてその
活性が低下することはない。 本発明に係るアミラーゼ阻害物質は、セフアテ
クス（Sephadex）Ｇ−25（商品名）で測定した分
子量が700〜1500であり、分子量が比較的低いに
もかかわらずアミラーゼ、マルターゼ、及びサツ
カラーゼに対して充分な阻害効果を示し、特に唾
液アミラーゼに対するよりも膵臓アミラーゼに対
する阻害効果が一層優れていることが分つた。 本発明のストレプトマイセスsp.Y−125
（KCTC8387P、ATCC53890）菌種が産生するア
ミラーゼ阻害物質は、これを活性成分とし、これ
に薬学的に許容できる担体又は希釈剤を含有させ
ることにより、肥満症、糖尿病、胃炎、過脂肪
症、胃潰瘍、十二指腸潰瘍の予防及び治療剤とし
て使用することができ、また本発明のストレプト
マイセスsp.Y−125（KCTC8387P、ATCC53890）
菌種が産生するアミラーゼ阻害物質は食品添加剤
として有用である。 以下に、本発明の新菌株であるストレプトマイ
セスsp.Y−125の培養方法及びその培養物からア
ミラーゼ阻害物質を分離する方法を詳述する。 (1) 菌株の培養 酵母抽出物、脱脂大豆、ペプトンのような窒
素源、可溶性澱粉、グルコースのような炭素
源、及び塩化ナトリウムのような無機塩を含有
する培地に希薄塩酸水溶液を加えてそのPHを
6.0〜7.0に調節し、121℃で15分間殺菌した後
に、菌を接種して好気性条件下に25〜30℃で２
〜４日間培養を行つた。 次の表５には種々の炭素源（濃度１％）に対
する阻害物質の活性を示す。表６には窒素源に
対する阻害物質の活性を示す。表５及び表６か
ら分るように、炭素源が可溶性澱粉で、窒素源
が酵母抽出物とホリペプトン（polypeptone）
の混合物である場合に活性は最も高かつた。 此の際、消泡剤を使用することもでき、消泡
剤は一般的に過度の泡を防止するのに有用であ
る。シリコーン消泡剤のように普通に使用され
る消泡剤を使用した。
【表】
【表】
【表】
(2) アミラーゼ阻害物質の分離
菌株培養物から培養液と菌体とを分離する工
程は遠心分離法またはセライト（Celite、商品
名）のような濾過助情を使用する濾過法等のよ
うな従来方法で行うことができる。このように
して分離された培養液からアミラーゼ阻害物質
を分離する工程は、従来方法、すなわち培養液
の凍結乾燥、塩析、又は有機溶媒による沈澱、
吸着等のような方法、ならびにイオン交換樹脂
による吸着、ゲル濾過のような方法を使用して
行うことができる。以下にこれらの方法を一層
具体的に説明する。 (イ) 菌株培養地を遠心分離（30000〜
40000rpm）して菌体と培養液とを分離した
後に、培養液を50〜70℃において減圧（10〜
50mmHg）下に1/5〜1/10に濃縮する。次いで
沈澱物を濾別する。得られた濃縮液は所要に
応じて凍結乾燥させる。 (ロ) 遠心分離された培養液または濃縮液に有機
溶媒としてメタノール、アセトンのような親
水性溶媒を加えて阻害物質を沈澱させる。不
純物は低濃度において沈澱し、濃度60〜70％
程度の場合に不純物の除去が容易である。 (ハ) 硫酸アンモニウムまたは塩化ナトリウムの
ような塩類を使用して沈澱物を沈澱分離す
る。沈澱物は遠心分離又は有機溶媒で直接洗
浄して透析、乾燥させる。 (ニ) イオン交換樹脂による吸着：この方法はア
ミラーゼ阻害物質が極性を有している場合
に、この物質を分離するに最も適当な方法で
あつて、イオン強度の変化またはPHの変化に
よつて溶出させ、分子量の大きさを利用した
ゲル濾過によつてアミラーゼ阻害物質を分離
する。 上述のような分離方法のほかに、熱変成による
不純物の沈澱、分子量による分子膜の透過性、限
外濾過等を利用することも出来る。 （実施例） 次に本発明を実施例について説明する。 実施例 １ ２しんとうフラスコに0.1％の可溶性澱粉、
１％のグルコース、0.5％の肉汁、0.5％のペプト
ン、及び0.3％の塩化ナトリウムを含有するPH7.0
の培地400mlを入れ、121℃で15分間殺菌した後
に、予め培養しておいたストレプトマイセスsp.
Y−125菌液20mlを接種し、28℃で４日間培養し
た。 培養後に、この培養液を遠心分離により菌体と
培養液とに分離し、得られた15AIU／mlである
培養液270mlを40〜60℃において減圧（10〜50mm
Hg）下に濃縮して30mlの濃縮液を得た。この濃
縮液に90％エタノールを加え、生成した沈澱を遠
心分離し、次いでこの濃縮液を蒸留水に溶解し、
しかる後に36時間凍結乾燥して２×104AIU／ｇ
である0.07ｇのアミラーゼ阻害物質を得た。 実施例 ２ ２しんとうフラスコ５個に、１％の可溶性澱
粉、0.5％のペプトン、0.5％の肉汁、及0.3％の塩
化ナトリウムを含有するPH7.0の培地をそれぞれ
400mlづつ入れ、121℃で15分間殺菌した後に、予
め培養しておいたストレプトマイセスsp.Y−125
菌液をそれぞれ20mlづつ接種し、28℃で４日間培
養した。 次いで、この培養物を遠心分離により菌体と培
養液とに分離して85AIU／mlである培養液1500
mlを得、この培養液50〜60℃において減圧下に
150mlまで濃縮し、濾過して不純物沈澱を除去し、
しかる後に60％エタノールで処理し、生成した沈
澱を濾過して除去し、濾液を濃縮した。この濃縮
物を24時間凍結乾燥して３×105AIU／ｇである
6.4ｇのアミラーゼ阻害物質を得た。 実施例 ３ ２しんとうフラスコ10個を使用し、実施例２
と同様にして培養を行つて培養液3000mlを得た。
この培養液を60〜70℃において減圧下に1/10に濃
縮し、次いで90％エタノールで処理し、生成した
沈澱を濾過して除去し、濾液を再度濃縮し、生成
した濃縮物を蒸留水に溶解し、しかる後に24時間
凍結乾燥して4.7×105AIU／ｇである10.2ｇのア
ミラーゼ阻害物質を得た。 実施例 ４ ２しんとうフラスコ５個に、２％の可溶性澱
粉、0.5％のポリペプトン、0.5％の肉汁、及び0.3
％の塩化ナトリウムを含有するPH7.0の培地をそ
れぞれ400mlづつ入れ、これを121℃で15分間殺菌
した後に、予め培養しておいたストレプトマイセ
スsp.Y−125菌液を20mlづつ接種し、28℃で３日
間培養し、しかる後にこの培養物を遠心分離によ
り菌体と培養液とに分離した。 このようにして得た218AIU／mlの培養液1550
mlを60〜70℃において減圧下に1/10まで濃縮し、
濾過して不純物沈澱を除去し、次いでこの濃縮液
を90％メタノールで処理し、生成した沈澱を再度
濾過して除去し、しかる後に濾液を濃縮して濃縮
物を得た。この濃縮物を蒸留水に溶解し、36時間
凍結乾燥した結果、5.5×105AIU／ｇである8.2ｇ
のアミラーゼ阻害物質を得た。 実施例 ５ ２しんとうフラスコ５個に、１％のとうもろ
こし澱粉、0.5％のポリペプトン、0.5％の肉汁、
0.3％の塩化ナトリウムを含有するPH7.0の培地を
それぞれ400mlづつ入れ、これを121℃で15分間殺
菌した後に、予め培養しておいたストレプトマイ
セスsp.Y−125菌液20mlをそれぞれ接種し、28℃
で４日間培養した。 次いで、この培養液を遠心分離により菌体と培
養液とに分離して186AIU／mlである培養液1600
mlを得、この培養液を1/10まで濃縮し、沈澱を濾
過して除去した。次いで濃縮液に90％エタノール
を加えて処理し、生成した沈澱を再度濾別し、し
かる後に濾液を濃縮して濃縮物を得た。この濃縮
物を蒸留水に溶解し、42時間凍結乾燥した結果、
５×105AIU／ｇである9.8ｇのアミラーゼ阻害物
質を得た。 実施例 ６ １％のとうもろこし澱粉を含有する培地を使用
した点を除いて実施例５と同一の条件で培養した
結果、培養液は220AIU／mlであり、このように
してアミラーゼ阻害物質を12.0ｇ（5.8×
105AIU／ｇ）得た。 実施例 ７ ２しんとうフラスコ５個に、2.5％の可溶性
澱粉、0.5％のポリペプトン、0.5％の酵母エキ
ス、及び0.3％の塩化ナトリウムを含有し、PH6.0
に調節した培地をそれぞれ400mlづつ入れ、これ
を121℃で15分間殺菌した後に、予め培養してお
いたストレプトマイセスsp.Y−125菌液を20mlづ
つを接種し、28℃で３日間培養した。 次いで、この培養物を遠心分離により菌体と培
養液とに分離して2750AIU／mlである培養液
1550mlを得た。この培養液を60〜70℃において減
圧下に濃縮して濃縮液200mlを得、これを濾過し
て不純物沈澱を除去した後に90％エタノールで処
理し、生成した沈澱を濾過して除去し、濾液を濃
縮した。濃縮物を24時間凍結乾燥した結果、70×
105AIU／ｇである阻害物質を得た。この阻害物
質を再度蒸留水に溶解した後に、セフアデツクス
Ｇ−10カラム（1.8×30cm）を使用してゲル濾過
を行つた。この際、溶出には蒸留水を使用し、活
性を有する部分のみを集めて凍結乾燥した結果、
2.1×103AIU／mgであるアミラーゼ阻害物質0.8ｇ
を得た。 実施例 ８ ２しんとうフラスコ10個を使用し、実施例７
と同様にして培養を行つて3000AIU／mlである
3000mlの培養液を得た。 次いで、この培養液を300mlまで濃縮し、次い
で90％エタノールで処理し、生成した沈澱を濾過
して除去し、濾液を濃縮して濃縮物を得た。この
濃縮物を再度蒸留水に溶解し、しかる後に24時間
凍結乾燥して7.1×105AIU／ｇである阻害物質
15.5ｇを得た。これを再度蒸留水に溶解し、セフ
アデツクスＧ−10カラム（2.1×30cm）に通して
ゲル濾過を行い、活性を有する部分のみを集めて
凍結乾燥した結果、2700AIU／mgであるアミラ
ーゼ阻害物質1.02ｇを得た。 実施例 ９ 消泡剤として0.1％のシリコーンＡ（シグマ社
製、商品名）を添加した点を除いて実施例８と同
様にして培養を行つた結果、7.3×105AIU／ｇで
ある阻害物質16.4ｇを得た。さらにセフアデツク
スＧ−10カラム（2.1×30cm）を使用し、実施例
８と同様にして3100AIU／mgであるアミラーゼ
阻害物質1.2ｇを得た。 実施例 10 ２しんとうフラスコ10個に2.5％の可溶性澱
粉、0.5％のポリペプトン、0.5％の酵母抽出物、
0.3％の塩化ナトリウム、及び0.05％の消泡剤を
含有し、PH6.0に調節した培地を400mlづつ入れ、
これを121℃で15分間殺菌した後に予め培養して
おいた菌液を20mlづつ接種し、28℃で３日間培養
して得た培養物を遠心分離して5250AIU／mlの
培養液3000mlを得た。 この培養液を60〜70℃において減圧（10〜50mm
Hg）下に1/10まで濃縮し、濾過して不純物を除
去し、これを90％エタノールで処理し、生成した
沈澱を濾過して除去し、濾液をエタノールが完全
に除去されるまで濃縮した。 次いで、濃縮液を凍結乾燥して7.5×105AIU／
ｇであるアミラーゼ阻害物質を得てた。これをセ
フアデツクスＧ−10カラム（1.8×40cm）に通し
てゲル濾過した結果、3300AIU／mgであるアミ
ラーゼ阻害物質1.70ｇを得た。得られた阻害物質
1.70ｇをセフアデツクスＧ−25カラム（2.6×60
cm）を通してゲル濾過した結果、15200AIU／mg
の阻害物質350mgを得た。 血糖値の変化特性 実施例10で得たアミラーゼ阻害物質を使用して
動物実験を実施した。使用した動物は17〜20ｇの
マウスで、５匹を一群にして過血糖症を誘発さ
せ、これらのマウスについて５、15及び30分の間
隔で血糖値の変化を測定した。過血糖症を誘発さ
せるには、2.5ｇの澱粉又はマルトースを2.5ｇ／
Kgマウスの用量で経口投与するか、あるいは5.0
ｇ／Kgマウスのサツカロースを経口投与した。血
糖値の測定はグルコースオキシターゼを使用して
行つた。
程は遠心分離法またはセライト（Celite、商品
名）のような濾過助情を使用する濾過法等のよ
うな従来方法で行うことができる。このように
して分離された培養液からアミラーゼ阻害物質
を分離する工程は、従来方法、すなわち培養液
の凍結乾燥、塩析、又は有機溶媒による沈澱、
吸着等のような方法、ならびにイオン交換樹脂
による吸着、ゲル濾過のような方法を使用して
行うことができる。以下にこれらの方法を一層
具体的に説明する。 (イ) 菌株培養地を遠心分離（30000〜
40000rpm）して菌体と培養液とを分離した
後に、培養液を50〜70℃において減圧（10〜
50mmHg）下に1/5〜1/10に濃縮する。次いで
沈澱物を濾別する。得られた濃縮液は所要に
応じて凍結乾燥させる。 (ロ) 遠心分離された培養液または濃縮液に有機
溶媒としてメタノール、アセトンのような親
水性溶媒を加えて阻害物質を沈澱させる。不
純物は低濃度において沈澱し、濃度60〜70％
程度の場合に不純物の除去が容易である。 (ハ) 硫酸アンモニウムまたは塩化ナトリウムの
ような塩類を使用して沈澱物を沈澱分離す
る。沈澱物は遠心分離又は有機溶媒で直接洗
浄して透析、乾燥させる。 (ニ) イオン交換樹脂による吸着：この方法はア
ミラーゼ阻害物質が極性を有している場合
に、この物質を分離するに最も適当な方法で
あつて、イオン強度の変化またはPHの変化に
よつて溶出させ、分子量の大きさを利用した
ゲル濾過によつてアミラーゼ阻害物質を分離
する。 上述のような分離方法のほかに、熱変成による
不純物の沈澱、分子量による分子膜の透過性、限
外濾過等を利用することも出来る。 （実施例） 次に本発明を実施例について説明する。 実施例 １ ２しんとうフラスコに0.1％の可溶性澱粉、
１％のグルコース、0.5％の肉汁、0.5％のペプト
ン、及び0.3％の塩化ナトリウムを含有するPH7.0
の培地400mlを入れ、121℃で15分間殺菌した後
に、予め培養しておいたストレプトマイセスsp.
Y−125菌液20mlを接種し、28℃で４日間培養し
た。 培養後に、この培養液を遠心分離により菌体と
培養液とに分離し、得られた15AIU／mlである
培養液270mlを40〜60℃において減圧（10〜50mm
Hg）下に濃縮して30mlの濃縮液を得た。この濃
縮液に90％エタノールを加え、生成した沈澱を遠
心分離し、次いでこの濃縮液を蒸留水に溶解し、
しかる後に36時間凍結乾燥して２×104AIU／ｇ
である0.07ｇのアミラーゼ阻害物質を得た。 実施例 ２ ２しんとうフラスコ５個に、１％の可溶性澱
粉、0.5％のペプトン、0.5％の肉汁、及0.3％の塩
化ナトリウムを含有するPH7.0の培地をそれぞれ
400mlづつ入れ、121℃で15分間殺菌した後に、予
め培養しておいたストレプトマイセスsp.Y−125
菌液をそれぞれ20mlづつ接種し、28℃で４日間培
養した。 次いで、この培養物を遠心分離により菌体と培
養液とに分離して85AIU／mlである培養液1500
mlを得、この培養液50〜60℃において減圧下に
150mlまで濃縮し、濾過して不純物沈澱を除去し、
しかる後に60％エタノールで処理し、生成した沈
澱を濾過して除去し、濾液を濃縮した。この濃縮
物を24時間凍結乾燥して３×105AIU／ｇである
6.4ｇのアミラーゼ阻害物質を得た。 実施例 ３ ２しんとうフラスコ10個を使用し、実施例２
と同様にして培養を行つて培養液3000mlを得た。
この培養液を60〜70℃において減圧下に1/10に濃
縮し、次いで90％エタノールで処理し、生成した
沈澱を濾過して除去し、濾液を再度濃縮し、生成
した濃縮物を蒸留水に溶解し、しかる後に24時間
凍結乾燥して4.7×105AIU／ｇである10.2ｇのア
ミラーゼ阻害物質を得た。 実施例 ４ ２しんとうフラスコ５個に、２％の可溶性澱
粉、0.5％のポリペプトン、0.5％の肉汁、及び0.3
％の塩化ナトリウムを含有するPH7.0の培地をそ
れぞれ400mlづつ入れ、これを121℃で15分間殺菌
した後に、予め培養しておいたストレプトマイセ
スsp.Y−125菌液を20mlづつ接種し、28℃で３日
間培養し、しかる後にこの培養物を遠心分離によ
り菌体と培養液とに分離した。 このようにして得た218AIU／mlの培養液1550
mlを60〜70℃において減圧下に1/10まで濃縮し、
濾過して不純物沈澱を除去し、次いでこの濃縮液
を90％メタノールで処理し、生成した沈澱を再度
濾過して除去し、しかる後に濾液を濃縮して濃縮
物を得た。この濃縮物を蒸留水に溶解し、36時間
凍結乾燥した結果、5.5×105AIU／ｇである8.2ｇ
のアミラーゼ阻害物質を得た。 実施例 ５ ２しんとうフラスコ５個に、１％のとうもろ
こし澱粉、0.5％のポリペプトン、0.5％の肉汁、
0.3％の塩化ナトリウムを含有するPH7.0の培地を
それぞれ400mlづつ入れ、これを121℃で15分間殺
菌した後に、予め培養しておいたストレプトマイ
セスsp.Y−125菌液20mlをそれぞれ接種し、28℃
で４日間培養した。 次いで、この培養液を遠心分離により菌体と培
養液とに分離して186AIU／mlである培養液1600
mlを得、この培養液を1/10まで濃縮し、沈澱を濾
過して除去した。次いで濃縮液に90％エタノール
を加えて処理し、生成した沈澱を再度濾別し、し
かる後に濾液を濃縮して濃縮物を得た。この濃縮
物を蒸留水に溶解し、42時間凍結乾燥した結果、
５×105AIU／ｇである9.8ｇのアミラーゼ阻害物
質を得た。 実施例 ６ １％のとうもろこし澱粉を含有する培地を使用
した点を除いて実施例５と同一の条件で培養した
結果、培養液は220AIU／mlであり、このように
してアミラーゼ阻害物質を12.0ｇ（5.8×
105AIU／ｇ）得た。 実施例 ７ ２しんとうフラスコ５個に、2.5％の可溶性
澱粉、0.5％のポリペプトン、0.5％の酵母エキ
ス、及び0.3％の塩化ナトリウムを含有し、PH6.0
に調節した培地をそれぞれ400mlづつ入れ、これ
を121℃で15分間殺菌した後に、予め培養してお
いたストレプトマイセスsp.Y−125菌液を20mlづ
つを接種し、28℃で３日間培養した。 次いで、この培養物を遠心分離により菌体と培
養液とに分離して2750AIU／mlである培養液
1550mlを得た。この培養液を60〜70℃において減
圧下に濃縮して濃縮液200mlを得、これを濾過し
て不純物沈澱を除去した後に90％エタノールで処
理し、生成した沈澱を濾過して除去し、濾液を濃
縮した。濃縮物を24時間凍結乾燥した結果、70×
105AIU／ｇである阻害物質を得た。この阻害物
質を再度蒸留水に溶解した後に、セフアデツクス
Ｇ−10カラム（1.8×30cm）を使用してゲル濾過
を行つた。この際、溶出には蒸留水を使用し、活
性を有する部分のみを集めて凍結乾燥した結果、
2.1×103AIU／mgであるアミラーゼ阻害物質0.8ｇ
を得た。 実施例 ８ ２しんとうフラスコ10個を使用し、実施例７
と同様にして培養を行つて3000AIU／mlである
3000mlの培養液を得た。 次いで、この培養液を300mlまで濃縮し、次い
で90％エタノールで処理し、生成した沈澱を濾過
して除去し、濾液を濃縮して濃縮物を得た。この
濃縮物を再度蒸留水に溶解し、しかる後に24時間
凍結乾燥して7.1×105AIU／ｇである阻害物質
15.5ｇを得た。これを再度蒸留水に溶解し、セフ
アデツクスＧ−10カラム（2.1×30cm）に通して
ゲル濾過を行い、活性を有する部分のみを集めて
凍結乾燥した結果、2700AIU／mgであるアミラ
ーゼ阻害物質1.02ｇを得た。 実施例 ９ 消泡剤として0.1％のシリコーンＡ（シグマ社
製、商品名）を添加した点を除いて実施例８と同
様にして培養を行つた結果、7.3×105AIU／ｇで
ある阻害物質16.4ｇを得た。さらにセフアデツク
スＧ−10カラム（2.1×30cm）を使用し、実施例
８と同様にして3100AIU／mgであるアミラーゼ
阻害物質1.2ｇを得た。 実施例 10 ２しんとうフラスコ10個に2.5％の可溶性澱
粉、0.5％のポリペプトン、0.5％の酵母抽出物、
0.3％の塩化ナトリウム、及び0.05％の消泡剤を
含有し、PH6.0に調節した培地を400mlづつ入れ、
これを121℃で15分間殺菌した後に予め培養して
おいた菌液を20mlづつ接種し、28℃で３日間培養
して得た培養物を遠心分離して5250AIU／mlの
培養液3000mlを得た。 この培養液を60〜70℃において減圧（10〜50mm
Hg）下に1/10まで濃縮し、濾過して不純物を除
去し、これを90％エタノールで処理し、生成した
沈澱を濾過して除去し、濾液をエタノールが完全
に除去されるまで濃縮した。 次いで、濃縮液を凍結乾燥して7.5×105AIU／
ｇであるアミラーゼ阻害物質を得てた。これをセ
フアデツクスＧ−10カラム（1.8×40cm）に通し
てゲル濾過した結果、3300AIU／mgであるアミ
ラーゼ阻害物質1.70ｇを得た。得られた阻害物質
1.70ｇをセフアデツクスＧ−25カラム（2.6×60
cm）を通してゲル濾過した結果、15200AIU／mg
の阻害物質350mgを得た。 血糖値の変化特性 実施例10で得たアミラーゼ阻害物質を使用して
動物実験を実施した。使用した動物は17〜20ｇの
マウスで、５匹を一群にして過血糖症を誘発さ
せ、これらのマウスについて５、15及び30分の間
隔で血糖値の変化を測定した。過血糖症を誘発さ
せるには、2.5ｇの澱粉又はマルトースを2.5ｇ／
Kgマウスの用量で経口投与するか、あるいは5.0
ｇ／Kgマウスのサツカロースを経口投与した。血
糖値の測定はグルコースオキシターゼを使用して
行つた。
【表】
【表】
【表】
毒性実験
実施例10で得たアミラーゼ阻害物質を使用して
毒性実験を行つた。使用した動物は17〜20ｇのマ
ウスで、５匹を一群にしてアミラーゼ阻害物質を
3000〜3000000AIU／Kgマウスの用量で使用し
た。観察の結果、死亡したマウスは認められず、
また特別な症状も見い出されなかつた。 体重変化に関する試験 実施例10で得たアミラーゼ阻害物質を濃度別に
マウスの飼料に混合して投与した後にマウスの体
重の変化を測定した。使用したマウスの体重は17
〜20ｇで、５匹を一群にして約60日間体重の変化
を観察した結果、アミラーゼ阻害物質が
3000AIU／ｇの場合には42日後に少しづつ体重
の減少が認められ、アミラーゼ阻害物質が
9000AIU／ｇの場合には21日後に体重の減少が
認められた。 次の表７にマウスの体重の減少（％）を示す。
毒性実験を行つた。使用した動物は17〜20ｇのマ
ウスで、５匹を一群にしてアミラーゼ阻害物質を
3000〜3000000AIU／Kgマウスの用量で使用し
た。観察の結果、死亡したマウスは認められず、
また特別な症状も見い出されなかつた。 体重変化に関する試験 実施例10で得たアミラーゼ阻害物質を濃度別に
マウスの飼料に混合して投与した後にマウスの体
重の変化を測定した。使用したマウスの体重は17
〜20ｇで、５匹を一群にして約60日間体重の変化
を観察した結果、アミラーゼ阻害物質が
3000AIU／ｇの場合には42日後に少しづつ体重
の減少が認められ、アミラーゼ阻害物質が
9000AIU／ｇの場合には21日後に体重の減少が
認められた。 次の表７にマウスの体重の減少（％）を示す。
【表】
実施例10で得たアミラーゼ阻害物質は次の特性
を示した。 (1) 分子量 アミラーゼ阻害物質の分子量を測定するため
に、アミラーゼ阻害物質をセフアデツクスＧ−
25カラムを使用してゲル濾過し、薄層クロマト
グラフイーにより展開させた結果、分子量は
700〜1500であることが分つた。この際、展開
溶媒としてエチルアセテート：メタノール：水
＝27：15：23の混合物を使用した。 (2) PH安定性 PH２〜12までの溶液にアミラーゼ阻害物質を
加え、37℃で30分間反應させた後に、人体の唾
液アミラーゼに対する活性を測定した。この結
果、酸性、中性、及び塩基性のいずれにおいて
も安定であつた（第１図参照）。 (3) 熱安定性 PH7.0の中性溶液に１％のアミラーゼ阻害物
質を添加し、100℃で30〜120分加熱した後に冷
却し、人体の唾液アミラーゼに対する活性を測
定した。この結果、30分加熱の時は全く安定で
あり、120分加熱の時でも85％の活性を示した
（第２図参照）。 (4) 他のアミラーゼに対する阻害効果 ヒトの唾液アミラーゼのほかに細菌、かび等
の微生物が産生するアミラーゼに対しても阻害
特性を試験した結果、次の表６に示すように微
生物アミラーゼに対しては50％未満の阻害度を
示したが、豚の膵臓アミラーゼ、ヒトの唾液の
アミラーゼ等の動物アミラーゼに対しては90％
以上の顕著な阻害効果を示した。
を示した。 (1) 分子量 アミラーゼ阻害物質の分子量を測定するため
に、アミラーゼ阻害物質をセフアデツクスＧ−
25カラムを使用してゲル濾過し、薄層クロマト
グラフイーにより展開させた結果、分子量は
700〜1500であることが分つた。この際、展開
溶媒としてエチルアセテート：メタノール：水
＝27：15：23の混合物を使用した。 (2) PH安定性 PH２〜12までの溶液にアミラーゼ阻害物質を
加え、37℃で30分間反應させた後に、人体の唾
液アミラーゼに対する活性を測定した。この結
果、酸性、中性、及び塩基性のいずれにおいて
も安定であつた（第１図参照）。 (3) 熱安定性 PH7.0の中性溶液に１％のアミラーゼ阻害物
質を添加し、100℃で30〜120分加熱した後に冷
却し、人体の唾液アミラーゼに対する活性を測
定した。この結果、30分加熱の時は全く安定で
あり、120分加熱の時でも85％の活性を示した
（第２図参照）。 (4) 他のアミラーゼに対する阻害効果 ヒトの唾液アミラーゼのほかに細菌、かび等
の微生物が産生するアミラーゼに対しても阻害
特性を試験した結果、次の表６に示すように微
生物アミラーゼに対しては50％未満の阻害度を
示したが、豚の膵臓アミラーゼ、ヒトの唾液の
アミラーゼ等の動物アミラーゼに対しては90％
以上の顕著な阻害効果を示した。
【表】
(5) アミラーゼ阻害物質の化学的特性
本発明に係るアミラーゼ阻害物質の化学的特
性は、次の表９に示すように、エルソン−モル
ガン反應に対して陽性である点のほか、赤外線
吸収スペクトルがオリゴ糖類の吸収波長におけ
る特性と類似している点においてもマルトペン
トース（maltopentose）と類似であつた（第
３図参照）。 また、還元糖測定値は塩酸による加水分解後
に顕著に増大することが分つた。 上述の結果から、本発明に係るアミラーゼ阻害
物質は３〜６個の糖化合物から構成され、純粋な
糖ではなく、ヘテロオリゴ糖
（heterooligoaccharide）であることが分る。ま
た、本発明に係るアミラーゼ阻害物質は糖とアミ
ノ酸とが結合した形態のものであると思われる。
又、水のみに可溶性であり、メタノール、エタノ
ール等には不溶性である。
性は、次の表９に示すように、エルソン−モル
ガン反應に対して陽性である点のほか、赤外線
吸収スペクトルがオリゴ糖類の吸収波長におけ
る特性と類似している点においてもマルトペン
トース（maltopentose）と類似であつた（第
３図参照）。 また、還元糖測定値は塩酸による加水分解後
に顕著に増大することが分つた。 上述の結果から、本発明に係るアミラーゼ阻害
物質は３〜６個の糖化合物から構成され、純粋な
糖ではなく、ヘテロオリゴ糖
（heterooligoaccharide）であることが分る。ま
た、本発明に係るアミラーゼ阻害物質は糖とアミ
ノ酸とが結合した形態のものであると思われる。
又、水のみに可溶性であり、メタノール、エタノ
ール等には不溶性である。
【表】
第１図は本発明方法により製造したアミラーゼ
阻害物質の一例の安定性を示すグラフ、第２図は
本発明方法により製造したアミラーゼ阻害物質の
一例の熱安定性を示すグラフ、第３図は本発明方
法により製造したアミラーゼ阻害物質の一例の赤
外スペクトルを示す図である。
阻害物質の一例の安定性を示すグラフ、第２図は
本発明方法により製造したアミラーゼ阻害物質の
一例の熱安定性を示すグラフ、第３図は本発明方
法により製造したアミラーゼ阻害物質の一例の赤
外スペクトルを示す図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ イースト・麦芽寒天培地において白色の気生
菌糸を生成し、オートミル寒天培地において胞子
を担持する波形形態の気生菌糸を生成し、Ｄ−グ
ルコースに対して炭素源の同化性を示さず、アミ
ラーゼ阻害物質産生能を有することを特徴とする
ストレプトマイセスsp.Y−125（KCTC8387P、
ATCC53890）。 ２ ストレプトマイセスsp.Y−125
（KCTC8387P、ATCC53890）の菌株を培養し、
その培養物からアミラーゼ阻害物質を分離するこ
とを特徴とするアミラーゼ阻害物質の製造方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019880010151A KR900007643B1 (ko) | 1988-08-09 | 1988-08-09 | 신규 미생물 스트렙토마이세스 sp.Y-125 및 이로부터 제조되는 아밀레이스 저해제 |
| KR88-10151 | 1988-08-09 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02131571A JPH02131571A (ja) | 1990-05-21 |
| JPH0517831B2 true JPH0517831B2 (ja) | 1993-03-10 |
Family
ID=19276821
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1171752A Granted JPH02131571A (ja) | 1988-08-09 | 1989-07-03 | 新規な微生物ストレプトマイセスｓｐ．ｙ―１２５およびこれらからアミラーゼ阻害物質を製造する方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02131571A (ja) |
| KR (1) | KR900007643B1 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL1026239C2 (nl) * | 2004-05-19 | 2005-11-22 | Ten Cate Thiolon Bv | Werkwijze voor het vervaardigen van een kunststofvezel voor toepassing in een kunstgrassportveld alsmede een dergelijke kunststofvezel. |
| CN114540213B (zh) * | 2021-11-11 | 2024-03-19 | 中国热带农业科学院海口实验站 | 一种具有抑菌活性的放线菌及其应用 |
-
1988
- 1988-08-09 KR KR1019880010151A patent/KR900007643B1/ko not_active Expired
-
1989
- 1989-07-03 JP JP1171752A patent/JPH02131571A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR900007643B1 (ko) | 1990-10-17 |
| JPH02131571A (ja) | 1990-05-21 |
| KR900003360A (ko) | 1990-03-26 |
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