JPH05178824A

JPH05178824A - アスパラギン誘導体およびその用途

Info

Publication number: JPH05178824A
Application number: JP15967892A
Authority: JP
Inventors: Katsumi Ito; 克己伊藤; Koichi Kato; 光一加藤
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1991-08-05
Filing date: 1992-06-18
Publication date: 1993-07-20

Abstract

(57)【要約】（修正有）【目的】レトロウイルス性疾患の治療剤として有用なレ
トロウイルスプロテアーゼ阻害物質の提供。【構成】式（Ｉ）で表わされるアスパラギン誘導体、な
らびに該誘導体を含有するレトロウイルス性疾患治療
剤。［環Ａはピロリジン環等の５〜７員環を、Ｒ^１，Ｒ^２は
ともに水素原子を示すか、あるいは結合して縮合環を形
成してもよい。Ｒ^３はエステル化もしくはアミド化され
ていてもよいカルボキシル基、Ｒ^４は水素原子またはア
シル基を示し、Ｘは−ＣＨ（ＯＨ）−、または−Ｃ（＝
Ｏ）−を示す。］式（II）の化合物は上記アスパラギン
誘導体の代表的な例である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、レトロウイルスプロテ
アーゼ阻害活性を有する新規なアスパラギン誘導体およ
びその用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】レトロウイルスは、レトロウイルス科に
属するウイルスであって、遺伝子としてＲＮＡを持ち、
自身の有する逆転写酵素（ＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラ
ーゼ）の働きによりＲＮＡを鋳型としてＤＮＡを合成す
る段階を自己複製の第１段階とするウイルスの総称であ
る。レトロウイルス科は３つの亜科（オンコウイルス、
レンチウイルス、スプマウイルス）からなる。レトロウ
イルスは、鳥類や哺乳類の種々の動物を宿主として感
染、増殖し、肉腫、白血病、癌などを引き起こすものの
あることが知られている。ヒトを宿主とするレトロウイ
ルスとしては、成人Ｔ細胞白血病ウイルス（adult Ｔ−
cell leukemia virus, ＡＴＬＶ）、ヒトＴ細胞白血病
ウイルスＩ型（human Ｔ−cell leukemia virus type
Ｉ、ＨＴＬＶ−Ｉ）およびヒト免疫不全ウイルス（huma
n immunodeficiency virus, ＨＩＶ）などが報告されて
いるが、ＡＴＬＶは、ＨＴＬＶ−Ｉと同一のウイルスで
あることが証明された。ＨＴＬＶにはこの他に、Ｔ細胞
系のヘアリーセル白血病（hairycell leukemia）を誘導
するII型が存在する。ＨＩＶはＨＩＶ−１およびＨＩＶ
−２に分類され、ＨＩＶ−１は重篤な免疫不全症である
後天性免疫不全症候群（aquired immunodeficiency syn
drome, ＡＩＤＳ）の原因ウイルスであることが分かっ
ている。また、ＨＩＶ−２もＡＩＤＳの原因ウイルスと
されているが、ＨＩＶ−１ほどはっきりとは解明されて
いない。

【０００３】ＡＴＬＶによって引き起こされる成人Ｔ細
胞白血病は、日本の南西地域特に九州地方に多く見られ
る白血病であり、１９７７年にはじめて報告された。成
人Ｔ細胞白血病患者では、Ｔ４陽性Ｔ細胞が癌化して、
皮膚病変、リンパ節腫大、肝脾腫等を招来する。成人Ｔ
細胞白血病に対しては有効な治療法はなく、発病すると
ほとんどが１年以内に死亡する。

【０００４】ＨＩＶ−１によって引き起こされるＡＩＤ
Ｓは、予後不良の免疫不全症として最近注目を集めてい
る疾病であって、カリニ肺炎やカポシ肉腫などの臨床像
を特徴とする。ＨＩＶ−１は、Ｔ４陽性細胞に感染して
細胞内に侵入、増殖し、これを破壊することにより免疫
不全を招来する。現在ＡＩＤＳの治療薬としてアジドチ
ミジン（ＡＺＴ）が使用されており、症状の改善および
延命効果が認められている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】上記のように抗レトロ
ウイルス剤としてＡＺＴが使用されているものの、この
物質は副作用として骨髄抑制を起こすなどの欠点を有し
ており、さらに効果が高く副作用の少ない治療薬の出現
が期待されている。

【０００６】

【課題を解決するための手段】レトロウイルスのゲノム
にコードされているプロテアーゼは感染性成熟ウイルス
粒子の形成に際して重要な役割を果たしており、このプ
ロテアーゼ機能を欠損すると感染性粒子の形成の起こら
ないことが知られている［I. Katoh ら，ウィロロジー
（Virology）第１４５巻，２８０頁（１９８５年）］。

【０００７】したがって、該プロテアーゼの阻害剤はレ
トロウイルス性疾患の予防および治療薬に成り得るもの
と考えられ、最近になってペプスタチンＡ［フェブス
レターズ（FEBS Lett.），２４７，３４９（１９８
９）］、種々の合成ペプチド性誘導体［ネイチャー（Na
ture），３４３，９０（１９９０）、ジャーナル・オブ
・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.），
２６５，１４６７５（１９９０）、ジャーナル・オブ・
メディシナル・ケミストリー（J. Med. Chem.），３
３，１２８５（１９９０）、サイエンス（Science），
２４７，４５４（１９９０）および２４８，３５８（１
９９０）］や非ペプチド性化合物［サイエンス（Scienc
e），２４９，５２７（１９９０）、ジャーナル・オブ
・メディシナル・ケミストリー（J. Med. Chem.）、３
３，２６８７（１９９０）および３４，１２２５（１
９９１）］等のプロテアーゼ阻害剤が該治療剤として提
案されている。本発明者らの一人、加藤らは広く自然界
に該プロテアーゼ阻害物質を検索し、その結果、土壌中
から分離した１菌株が該プロテアーゼ阻害物質を産生す
ること、該菌株が放線菌の中のキタサトスポリア属に属
すること、該微生物の培養液から精製取得したペプチド
性の新規な化合物たるＲＰＩ−８５６、ＲＰＩ−８５
７、ＲＰＩ−８５８、ＲＰＩ−８５９が試験管内で該プ
ロテアーゼを強く阻害することを見出し、すでに特許出
願した（特願平２−２８２０２５，特願平３−１４５０
および特願平３−１７６０４号明細書参照）。本発明者
らは、これらのペプチド性化合物の化学構造に基づいて
ドラッグデザインを行い、関連化合物の合成研究を鋭意
行った結果、以下に示されるアスパラギン誘導体が高い
該プロテアーゼ阻害活性を示すことを見出し、さらに研
究を進め本発明を完成した。

【０００８】すなわち、本発明は、一般式（I）

【化３】［式中、環Ａは５〜７員環を示し、Ｒ¹，Ｒ²はともに水
素原子を示すか、または結合して縮合環を形成していて
もよく、Ｒ³はエステル化もしくはアミド化されていて
もよいカルボキシル基を示し、Ｒ⁴は水素原子またはア
シル基を示し、Ｘは

【化４】で表わされるアスパラギン誘導体およびその塩、および
化合物（I）を含有してなるレトロウイルス性疾患治療
剤を提供するものである。

【０００９】化合物（I）に関し、Ｒ¹，Ｒ²が結合して
縮合環を形成する場合、５〜６員環を形成することが好
ましく、なかでもＲ¹，Ｒ²が結合してベンゾ縮合、パー
ヒドロベンゾ縮合もしくはパーヒドロシクロペンタ縮合
を示すのが好ましい。この場合、具体的には式

【化５】などを挙げることができる。

【００１０】化合物（I）に関し、Ｒ¹，Ｒ²で表わされ
る基の好ましい例は、ともに水素原子であるものおよび
結合してパーヒドロベンゾ縮合であるものがあげられ
る。化合物（I）に関し、Ｒ³で表わされるエステル化も
しくはアミド化されていてもよいカルボキシル基として
は、例えばカルボキシル，カルバモイル，低級アルコキ
シカルボニル（例、メトキシカルボニル，エトキシカル
ボニル，プロポキシカルボニル，イソプロポキシカルボ
ニル，ブトキシカルボニル，イソブトキシカルボニル，
tert−ブトキシカルボニルなどのＣ_1-4アルコキシ−Ｃ
Ｏ−など），アラルキルオキシカルボニル（例、ベンジ
ルオキシカルボニル，ｐ−ニトロベンジルオキシカルボ
ニル，ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル，フェネ
チルオキシカルボニルなどの置換されていてもよいフェ
ニル−Ｃ_1-4アルコキシ−ＣＯ−など），低級アルキル
アミノカルボニル（例、メチルアミノカルボニル，エチ
ルアミノカルボニル，プロピルアミノカルボニル，イソ
プロピルアミノカルボニル，ブチルアミノカルボニル，
イソブチルアミノカルボニル，tert−ブチルアミノカル
ボニルなどのＮ−Ｃ_1-4アルキルアミノなど），アラル
キルアミノカルボニル（例、ベンジルアミノカルボニ
ル，フェネチルアミノカルボニルなどのＮ−フェニル−
Ｃ_1-4アルキルアミノ）などがあげられ、なかでも低級
アルコキシカルボニルおよび低級アルキルアミノカルボ
ニルが好ましく、とりわけ、tert−ブトキシカルボニル
およびtert−ブチルアミノカルボニルが好ましい。

【００１１】化合物（I）に関し、Ｒ⁴で表わされるアシ
ル基としては、例えば低級アルカノイル（例、ホルミ
ル，アセチル，プロピオニル，ブチリル，イソブチリル
などのＣ_1-5アルカノイルなど），低級アルコキシカル
ボニル（例、メトキシカルボニル，エトキシカルボニ
ル，プロポキシカルボニル，イソプロポキシカルボニ
ル，ブトキシカルボニル，イソブトキシカルボニル，te
rt−ブトキシカルボニルなどのＣ_1-4アルコキシ−ＣＯ
−など），アラルキルオキシカルボニル（例、ベンジル
オキシカルボニル，ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニ
ル，ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル，ナフチル
メチルオキシカルボニルなどの置換されていてもよいフ
ェニル−Ｃ_1-4アルコキシ−ＣＯ−など），アリールカ
ルボニル（例、ベンゾイル，ナフトイル，トルオイルな
ど），ヘテロアリールカルボニル（例、フロイル，テノ
イル，ニコチノイル，イソニコチノイル，キノリノイ
ル，イソキノリノイル，キナゾリノイルなど），アリー
ルスルホニル（例、ｐ−トルエンスルホニル，ベンゼン
スルホニル，ナフタレンスルホニルなど）などがあげら
れ、なかでも低級アルコキシカルボニル，アラルキルオ
キシカルボニル，ヘテロアリールカルボニルが好まし
く、とりわけ、tert−ブトキシカルボニル，ベンジルオ
キシカルボニル，２−キノリノイルが好ましい。

【００１２】化合物（I）に関し、環Ａとしては５〜６
員環，とりわけピロリジン環およびピペリジン環が好ま
しい。本発明化合物に属する好ましい化合物の具体例と
しては、例えば〔表１〕に示す化合物があげられる。

【００１３】

【表１】

【００１４】

【化６】［式中、各記号は前記と同意義。］で表わされる化合物
を酸化することによって製造することができる。

【００１５】反応は通常、ジメチルスルホキシド中、ピ
リジンおよびトリフルオロ酢酸の存在下に行うことが好
ましく、反応温度は０〜６０℃程度で行われ、反応時間
は１〜２４時間である。

【００１６】本発明化合物（I）は、たとえば式（II）

【化７】［式中、各記号は前記と同意義。］で表わされる化合物
と、式（III）

【化８】［式中、Ｒ⁴′はアシル基であり、他の記号は前記と同
意義。］で表わされる化合物を縮合させることによって
得ることができる。

【００１７】該縮合反応条件としては、たとえば縮合試
薬（例、ジシクロヘキシルカルボジイミド，カルボニル
ジイミダゾール，シアノリン酸ジエチル，ジフェニルリ
ン酸アジド等）などを用いるか、または化合物（III）
にたとえば２,４,５−トリクロロフェノール，ペンタク
ロロフェノール，ペンタフルオロフェノール，２−ニト
ロフェノールおよび４−ニトロフェノール等のフェノー
ル類、または、たとえばＮ−ヒドロキシスクシンイミ
ド，Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２,３−ジカ
ルボン酸イミド，１−ヒドロキシベンズトリアゾール，
Ｎ−ヒドロキシピペリジン等のＮ−ヒドロキシ化合物を
ジシクロヘキシルカルボジイミド等の触媒の存在下に縮
合させ、化合物（III）を活性なエステル体に変換した
後、化合物（II）と反応させることが好ましい。また化
合物（III）にたとえば、クロロ炭酸メチル，クロロ炭
酸エチル，クロロ炭酸イソブチルなどを、好ましくは有
機塩基（例、トリエチルアミン，Ｎ−メチルモルホリ
ン）の存在下に反応させ、混合酸無水物に変換した後、
化合物（II）と反応させることもできる。これらの反応
において、反応温度は通常約−３０℃〜＋５０℃であ
り、用いる溶媒としては、たとえばジオキサン，テトラ
ヒドロフラン，アセトニトリル，ジエチルエーテル，
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ，Ｎ−ジメチルアセ
トアミド，ジメチルスルホキシド，Ｎ−メチルピロリド
ン，クロロホルム，塩化メチレンなどが挙げられ、これ
ら溶媒は単独もしくは混合溶媒として用いてもよい。

【００１８】本発明化合物（I）は、たとえば式（IV）

【化９】［式中、Ｒ⁴′はアシル基であり、他の記号は前記と同
意義。］で表わされる化合物と式（V）

【化１０】［式中、各記号は前記と同意義。］で表わされる化合物
を縮合させることによって製造することができる。該縮
合反応条件としては、上述した（II）と（III）の縮合
反応において適用される条件と同様な反応条件が好まし
い。

【００１９】本発明化合物（I）においてＲ⁴が水素であ
る化合物は、式（I″）で表わされる化合物を脱保護反
応に付すことによって製造することができる。

【化１１】［式中、Ｒ⁴″はアミノ保護基を示し、他の記号は前記
と同意義。］また、本発明化合物（I）においてＲ³がカルボキシル基
である化合物は、式（I″′）で表わされる化合物を脱
保護反応に付すことによって製造することができる。

【化１２】［式中、Ｒ³′は保護されたカルボキシル基を示し、他
の記号は前記と同意義。］。

【００２０】該脱保護反応としては、その保護基の種類
あるいは、化合物（I″），（I″′）の脱保護条件下で
の安定性に応じて、酸あるいは塩基による方法、または
接触還元による方法を適宜選択して行うことができる。
酸による方法の場合には、保護基の種類その他の条件に
よって異なるが、酸として例えば塩酸、臭化水素、フッ
化水素、沃化水素、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンス
ルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、硫酸、リン
酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピ
オン酸等の有機酸の他、酸性イオン交換樹脂等が使用さ
れる。塩基による方法の場合には、保護基の種類その他
の条件によって異なるが、塩基として例えばナトリウ
ム，カリウム等のアルカリ金属もしくはカルシウム，マ
グネシウム等のアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩等
の無機塩基、金属アルコキサイド類、有機アミン類、第
四アンモニウム塩等の有機塩基の他、塩基性イオン交換
樹脂等が使用される。上記酸または塩基による方法の場
合において溶媒を使用する場合には、たとえば、水，メ
タノール，エタノール，酢酸エチル，クロロホルム，テ
トラヒドロフラン，ジオキサン，ピリジン，酢酸，アセ
トン，塩化メチレンなどを単一、もしくは混合して用い
ることができる。また金属と酸による方法においては
水，アセトン等が繁用されるが酸が液体のときは酸自身
を溶媒として使用することもできる。酸および塩基によ
る方法において反応温度は、通常冷却下ないし加温程度
で行なわれ、反応時間は約３０分ないし２０時間であ
る。

【００２１】一方接触還元による方法の場合には、水ま
たはたとえばメタノール，エタノール，ジオキサン，酢
酸エチルなどの有機溶媒あるいはそれらの混合溶媒中、
たとえばパラジウム−炭素などの適当な触媒の存在下に
行われる。本反応は常圧または１５０kg／cm²程度まで
の圧力下、常温ないし＋１００℃の温度で行われるが、
一般に常温，常圧で充分反応は進行する。

【００２２】本発明化合物（I）は分子内に不斉原子を
３個以上有しているので８個以上の立体異性体が存在し
得るが、その立体異性体ならびにそれらの混合物のいず
れも本発明に包含されるものである。とりわけアスパラ
ギン残基中の不斉炭素，ベンジル基とＸが結合した不斉
炭素およびＲ³が結合した不斉炭素のいずれもがＳ配置
である光学活性体が好ましい。

【００２３】化合物（I）は塩としても得られ、該塩と
しては、たとえば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸
塩、燐酸塩などの無機酸塩、たとえば酢酸塩、酒石酸
塩、クエン酸塩、フマール酸塩、マレイン酸塩、トリエ
ンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩などの有機酸塩、
たとえばナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、ア
ルミニウム塩などの金属塩、たとえば、トリエチルアミ
ン塩、グアニジン塩、アンモニウム塩、ヒドラジン塩、
キニーネ塩、シンコニン塩などの塩基との塩が挙げられ
る。

【００２４】かくして得られる化合物（I）は反応混合
物から通常の分離精製手段、たとえば抽出、濃縮、中
和、ろ過、再結晶、カラムクロマトグラフィー、薄層ク
ロマトグラフィーなどの手段を用いることによって単離
することができる。化合物（I）は少なくとも８個の立
体異性体が存在し得る。これら個々の異性体およびこれ
らの混合物のいずれも本発明に包含されるが、所望によ
りこれらの異性体を個別に製造することもできる。たと
えば原料化合物（I′），（II），（III），（IV）およ
び（V）のそれぞれの単一の異性体を用いて上記の反応
を行うことにより、化合物（I）の単一の異性体を得る
ことができるし、また生成物が二種類以上の異性体混合
物の場合には、これを通常の分離方法、たとえば光学活
性酸（例、カンファースルホン酸、酒石酸など）との塩
を生成させる方法や、各種のクロマトグラフィー、分別
再結晶などの分離手段によってそれぞれの異性体に分離
することもできる。

【００２５】化合物（Ｉ）の塩は必要に応じ前記した無
機酸あるいは有機酸を加えることによって生理学的に許
容される塩として得ることができる。本発明における合
成中間体（II）において、例えばＲ¹，Ｒ²がともに水素
原子であり、Ｒ³がtert−ブチルアミノカルボニルであ
り、環Ａがピロリジン環であり、Ｘが

【化１３】である化合物（XI）は次の反応式で示す方法で合成する
ことができる。

【００２６】

【化１４】ここで用いた（IX）はジャーナル・オブ・メディシカル
・ケミストリー（J. Med. Chem.）, ２０，５１０（１
９７７）に記載された方法で合成することができる。

【００２７】以下参考例および試験例においてＨＩＶ−
１プロテアーゼの調製法および該プロテアーゼに対する
本発明化合物（I）の阻害作用についてそれぞれ述べ
る。参考例１ＨＩＶ−１プロテアーゼ遺伝子の発現プラス
ミドの構築ＨＩＶ−１プロテアーゼはpol遺伝子にコードされた蛋
白質の１つであり、感染細胞内においてはgag−polのポ
リプロテインとして合成されたものが、プロテアーゼ自
身の作用によりプロセシングされることにより生成され
ると考えられている［J. M. Mc Cune ら、セル(Cell)第
５３巻，５５頁（１９８８年）］。一方、プロテアーゼ
領域を含むpol遺伝子の一部を大腸菌で発現させること
により、分子量１１キロダルトンの活性型ＨＩＶ−１プ
ロテアーゼが自身のオートプロセシング作用により生成
されることが既に知られている［M. C. Graves ら、プ
ロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー
・オブ・サイエンス（Proc. Natl. Acad. Sci. USA）第
８５巻，２４４９頁（１９８８年）］。

【００２８】そこで、まずＨＩＶ−１の全遺伝子を含有
するプラスミドｐＮＬ４−３［A. Adachi ら、ジャーナ
ル・オブ・ウイロロジー（J. Virol.）第５９巻，２８
４頁（１９８６年）］からプロテアーゼ領域を含有する
１.５kb のＢglII−ＢalI断片を取得した。次に、この
断片にリンカー５’−ＡＡＴＴＣＴＡＴＧＣＣＡ−３’ （配列番号：１）３’−ＧＡＴＡＣＧＧＴＣＴＡＧ−５’ （配列番号：２）を接続した後、ＥcoＲＩで消化し、さらにリンカー
［５’−ＣＴＡＧＣＴＡＧＣＴＡＧＡＡＴＴＣＴＡＧＣ
ＴＡＧＣＴＡＧ−３’］（配列番号：３）を接続した
後、ＥcoＲＩで消化した。次に、この断片の切断点をク
レノーフラグメントで埋めて平滑末端にした。一方、Ｔ
７プロモーターを含む大腸菌用発現ベクターｐＥＴ−３
ｃ［A. H. Rosenberg ら、ジーン（Gene）第５６巻，１
２５頁（１９８７年）］をＮdeＩで消化し、その切断点
をＴ４ＤＮＡポリメラーゼで埋めて平滑末端にした。次
に、これら両ＤＮＡ断片をＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて
接続し、Ｔ７プロモーターとプロテアーゼ遺伝子の向き
が同方向となったものをｐＨＩＶ７００４とした。

【００２９】参考例２組換え型ＨＩＶ−１プロテアー
ゼの調製 Escherichia coli ＭＭ２９４株にＴ７ファージのＲＮ
Ａポリメラーゼ遺伝子を組み込んだλファージＤＥ３
［F. W. Studier ら、ジャーナル・オブ・モレキュラー
・バイオロジー（J. Mol. Biol.）第１８９巻，１１３
頁（１９８６年）］を溶原化させてEscherichia coli
ＭＭ２９４（ＤＥ３）を作製した。参考例１で得られた
ｐＨＩＶ７００４を、Escherichia coli ＭＭ２９４
（ＤＥ３）に導入して、形質転換体Escherichia coli
ＭＭ２９４（ＤＥ３）／ｐＨＩＶ７００４を得た。本形
質転換体をアンピシリン５０μg／mlを含むＬＢ培地に
接種し、３７℃で一晩振盪培養した。この培養液０.２m
lを２０mlの同じ培地に接種し、３７℃で対数増殖期
（１８０−２００Ｋｌｅｔｔｕｎｉｔ）まで培養し
た。次に、最終濃度が０.４mＭになるようにイソプロピ
ル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトシド（ＩＰＴＧ）を加
え、さらに３７℃で２時間培養した。培養液２００mlか
ら、菌体を５０００rpm で５分間遠心することにより集
め、これを〔表２〕に記載した組成を持つ緩衝液Ａ２０
mlに懸濁した。懸濁液にニワトリ卵白リゾチーム２mgを
加え、氷冷下で１０分間放置後、ノニデットＰ４０（Ｎ
Ｐ４０）を最終濃度１％になるように加え、超音波破砕
装置を用いて菌体を破砕した。上記処理を行った溶菌液
を、日立工機社製のＲＲ−２４Ａローターを用いて１６
０００rpm で１０分間遠心分離し、ＨＩＶ−１プロテア
ーゼを含む粗抽出液２０mlを得た。

【００３０】

【表２】緩衝液Ａの組成５０mＭトリス塩酸緩衝液ｐＨ８.０５mＭエチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）０.１％ノニデットＰ４０（ＮＰ４０）０.０２％２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）１０％グリセリン１mＭフェニルメチルスルフォニルフルオリド
（ＰＭＳＦ）０.１mＭパラアミジノフェニルメタンスルフォニル
フルオリド（APMSF）

【００３１】試験例１ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害作
用ＨＩＶ−１ gagＰ１７とＰ２４の解裂部位を含む合成
ペプチドgag−１１（ＳＱＶＳＱＮＹＰＩＶＱＮＬ）
（配列番号：４）を基質とし、反応産物gag−１２（Ｓ
ＱＶＳＱＮＹ）（配列番号：５）の生成を指標としてＨ
ＩＶ−１プロテアーゼ阻害活性を測定した。即ち、基質
gag−１１３μg、種々の濃度の試料、ＨＩＶ−１プロ
テアーゼを含む５％グリセロール−１ＭＮaＣl−０.２
５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６.２）（３０μl）
中で３〜５時間反応させた。０.１３Ｍトリクロロ酢酸
−０.２６Ｍ酢酸ナトリウム−０.４Ｍ酢酸１５０μlを
加えることにより反応を停止した。室温で１０分間放置
した後遠心上清を得た。上記の上清のうち４８μlを０.
１％トリフロロ酢酸で平衡化したＹＭＣ−パックＦＬ−
ＯＤＳカラム（０.４６×３cm、ワイエムシィ社）に負
荷し、アセトニトリルの濃度勾配で溶出した。本条件下
において、gag−１２の生成量を５０％阻害するために
必要な反応液中の試料濃度をＩＣ₅₀値として表わした。
化合物（I）のＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害活性を〔表
３〕に示した。

【００３２】

【表３】試料ＩＣ₅₀（μＭ） (化合物番号) ────────────────────────── １０.０２０２０.０３４３０.０２１４０.０３１〔表３〕の結果から、本発明化合物（I）は非常に強い
ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害物質であることが明らかで
ある。

【００３３】以上のように、化合物（I）はレトロウイ
ルスのプロテアーゼ阻害活性を有しており、また毒性も
低いので、レトロウイルス性疾患治療剤として有用な物
質である。本発明化合物（I）を抗レトロウイルス剤
として用いる場合、希釈剤、賦形剤、担体などと混合し
て、薬学的に許容される製剤とし、経口的または非経口
的に投与する。例えば、注射剤として用いる場合は、化
合物（I）を水溶液剤として、成人１日当り０.１〜１０
mg／kgを静脈内投与する。

【００３４】

【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明をさらに具体
的に説明するが、これによって本発明が限定されるもの
ではない。実施例１１−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−プロリン（化合物
IV：２３.０ｇ，９２.２mmol）をテトラヒドロフラン
（１５０ml）に溶解し、氷冷下にトリエチルアミン（１
４.１ml，１０２mmol）を加えた。次に、クロロギ酸イ
ソブチル（１３.２ml，１０２mmol）のテトラヒドロフ
ラン（４３ml）溶液を滴下し、氷冷下で１時間撹拌した
後、tert−ブチルアミン（１９.４ml，１８４mmol）を
加えた。氷冷下で１時間、さらに室温で一夜撹拌した
後、溶媒を留去した。残渣に水，酢酸エチル（各２００
ml）を加えて分液し、酢酸エチル層を１０％リン酸ナト
リウム水溶液，５％重曹水，飽和食塩水の順で洗浄し、
乾燥（ＭgＳＯ₄）後、減圧留去した。得られた白色粉末
を酢酸エチル−ヘキサン（１：１，４０ml）から再結晶
し、１−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−tert−ブチル
−Ｌ−プロリンアミド（化合物VII：１５.５ｇ，５５
％）を白色結晶として得た。さらにろ液を減圧留去した
後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Kieselgel
６０，１００ｇ：酢酸エチル−ヘキサン＝１：１で溶
出）で精製すると追加のプロリンアミド体（化合物VI
I：５.９ｇ，２１.０％）が得られた。ｍｐ９０−９１℃ 元素分析値：Ｃ₁₇Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₃として Calcd：Ｃ，６７.０８；Ｈ，７.９５；Ｎ，９.２０ Found：Ｃ，６６.８５；Ｈ，７.９６；Ｎ，９.４５ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：３０５（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(d₆-DMSO)δ：1.18(6H,s),1.24(3H,s),1.7-
1.95(3H,m),1.95-2.2(1H,m),3.3-3.5(2H,m),4.1-4.2(1
H,m),4.9-5.10(2H,m),7.2-7.5(6H,m)

【００３５】実施例２１−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−tert−ブチル−Ｌ
−プロリンアミド（化合物VII：８.０ｇ，２６.３mmo
l）をメタノール−水（６：１，１４０ml）に溶解し、
１０％パラジウム−炭素（０.５ｇ）を加え、水素気流
中、１時間撹拌した。触媒をろ別し、触媒部分を洗浄
（１０％メタノール水溶液）し、ろ液と洗液を合わせて
減圧留去した。得られた油状物を減圧乾燥すると結晶化
した。これにジエチルエーテルと石油エーテルの混液を
加えてろ取すると、Ｎ−tert−ブチル−Ｌ−プロリンア
ミド（化合物VIII：３.４ｇ，７５.７％）が無色粉末晶
として得られた。ｍｐ７９−８０℃ 元素分析値：Ｃ₉Ｈ₁₈Ｎ₂Ｏとして Calcd：Ｃ，６３.４９；Ｈ，１０.６６；Ｎ，１６.
４５ Found：Ｃ，６３.４５；Ｈ，１０.８９；Ｎ，１６.
１５¹ Ｈ−ＮＭＲ(d₆-DMSO)δ：1.26(9H,s),1.5-1.7(3H,m),
1.8-2.0(1H,m),2.78(2H,ddd,J=6.1,6.5,9.7Hz),3.2-3.4
(1H,m),7.57(1H,br s)

【００３６】実施例３（２ＲＳ，３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミ
ノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸（化合物I
X：２.０ｇ，６.０７mmol）をジメチルホルムアミド
（２０ml）に溶解した。氷冷下にＮ−tert−ブチル−Ｌ
−プロリンアミド（化合物VIII：１.２４ｇ，７.２８mm
ol），シアノリン酸ジエチル（ＤＥＰＣ）（２.０９
ｇ，１２.２mmol）のジエチルホルムアミド（５ml）溶
液およびトリエチルアミン（１.７６ml，１２.２mmol）
を順次加え、氷冷下に１時間、さらに室温に戻して２.
５時間撹拌した。反応液に水（約５ml）を加えて１時間
撹拌した後、水（８０ml）を加え、酢酸エチル（１５０
ml）で抽出した。酢酸エチル層を１０％リン酸ナトリウ
ム水溶液、５％重曹水、飽和食塩水の順で洗浄し、乾燥
（Ｍg ＳＯ₄）した後、溶媒を留去した。残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（Kieselgel ６０，１
４０ｇ：酢酸エチル−ヘキサン＝２：１で溶出）で精製
すると１−［（３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニル
アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチリル］−Ｎ
−tert−ブチル−Ｌ−プロリンアミド（化合物X）のジ
アステレオマーＡ（極性大：０.６９５ｇ）及びジアス
テレオマーＢ（極性小：０.４１５ｇ）が無色粉末晶と
して得られた。ジアステレオマーＡ白色粉末晶ｍｐ６３−６６℃ 元素分析値：Ｃ₂₇Ｈ₃₅Ｎ₃Ｏ₅・1/2Ｈ₂Ｏとして Calcd：Ｃ，６６.１０；Ｈ，７.４０；Ｎ，８.５７ Found：Ｃ，６６.４０；Ｈ，７.４３；Ｎ，８.５４ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：４８２（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(CDCl₃)δ：1.29(9H,s),1.75-2.4(4H,m),2.
6-2.8(2H,m),3.6-4.25(5H,m),4.3-4.65(2H,m),4.99(2H,
s),5.43(1H,d,J=8.8Hz),6.49(1H,s),7.1-7.4(10H,m) ジアステレオマーＢ白色粉末晶ｍｐ１１４−１１５℃ 元素分析値：Ｃ₂₇Ｈ₃₅Ｎ₃Ｏ₅として Calcd：Ｃ，６７.３４；Ｈ，７.３３；Ｎ，８.７３ Found：Ｃ，６７.５１；Ｈ，７.２９；Ｎ，８.７７ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：４８２（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(CDCl₃)δ：1.29(9H,s),1.7-2.3(4H,m),2.9
5(2H,d,J=7.8Hz),3.0-3.4(2H,m),3.87(1H,d,J=5.6Hz),
3.95(1H,d,J=3.6Hz),4.10(1H,d,J=4.6Hz),4.22(1H,m),
5.03(2H,s),5.09(1H,br s),6.43(1H,br s),7.2-7.5(10
H,m)

【００３７】実施例４１−［（３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ
−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチリル］−Ｎ−tert
−ブチル−Ｌ−プロリンアミド（化合物X，ジアステレ
オマーＡ：３００mg，０.６２mmol）をメタノール−水
（４：１，８ml）に溶解し、１０％パラジウム−炭素
（４０mg）を加え、水素気流下、４時間撹拌した。触媒
をろ別し、触媒部分を洗浄（５０％メタノール水溶液）
し、ろ液と洗液を合わせて減圧留去した。残渣にジエチ
ルエーテルを加えて、析出した結晶をろ取すると１−
［（３Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニ
ルブチリル］−Ｎ−tert−ブチル−Ｌ−プロリンアミド
（化合物XI：２１０mg）が白色粉末晶として得られた。ｍｐ１５４.５−１５６.０℃ 元素分析値：Ｃ₁₉Ｈ₂₉Ｎ₃Ｏ₃として Calcd：Ｃ，６５.６８；Ｈ，８.４１；Ｎ，１２.０
９ Found：Ｃ，６５.３５；Ｈ，８.５５；Ｎ，１２.１
３¹ Ｈ−ＮＭＲ(CDCl₃)δ：1.29(9H,s),1.4-2.2(2H,br m),
1.7-2.4(4H,m),2.53(1H,dd,J=10.0,13.3Hz),2.95(1H,d
d,J=3.2,13.4Hz),3.0-3.2(1H,m),3.5-3.7(2H,m),4.27(1
H,d,J=5.4Hz),4.45-4.55(1H,m),6.57(1H,s),7.1-7.4(5
H,m)

【００３８】実施例５１−［（３Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フ
ェニルブチリル］−Ｎ−tert−ブチル−Ｌ−プロリンア
ミド（化合物XI：２４０mg，０.６９mmol）をジメチル
ホルムアミド（８ml）に溶解し、氷冷下にＮ^アルフア−ベン
ジルオキシカルボニル−Ｌ−アスパラギンのｐ−ニトロ
フェニルエステル（２６７mg，０. ６９mmol）を加え、
氷冷下に１時間、さらに室温で４時間撹拌した。溶媒を
減圧留去した後、残渣に水，酢酸エチル（各３０ml）
を加えて分液した。酢酸エチル層を１０％リン酸ナト
リウム水溶液，５％重曹水，飽和食塩水の順に洗浄し、
乾燥（ＭgＳＯ₄）した後、減圧留去した。得られた黄色
油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Kiesel
gel ６０，２０ｇ：酢酸エチル−メタノール＝９：１で
溶出）で精製すると１−［（３Ｓ）−３−（Ｎ^アルフア−ベ
ンジルオキシカルボニル−Ｌ−アスパラギニル）アミノ
−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチリル］−Ｎ−tert
−ブチル−Ｌ−プロリンアミド（化合物１：２００mg，
４８. ７％）が白色粉末晶として得られた。ｍｐ１０２−１０３℃（dec.）元素分析値：Ｃ₃₁Ｈ₄₁Ｎ₅Ｏ₇として Calcd：Ｃ，６２.５１；Ｈ，６.９４；Ｎ，１１.７
６ Found：Ｃ，６２.２０；Ｈ，７.０６；Ｎ，１１.６
６ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：５９６（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(d₆-DMSO)δ：１．２５（９Ｈ，ｓ），１．
７−２．１（４Ｈ，ｍ），２．２−２．４５（２Ｈ，
ｍ），２．５５−２．８（２Ｈ，ｍ），３．５−３．７
（２Ｈ，ｍ），４．０−４．２（１Ｈ，ｍ），４．２−
４．４（３Ｈ，ｍ），４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２
Ｈｚ），５．０１（２Ｈ，ｓ），６．８７（１Ｈ，
ｓ），７．０５−７．４（５Ｈ，ｍ），７．２２（１
Ｈ，ｓ），７．３５（５Ｈ，ｓ），７．５２（１Ｈ，
ｓ），７．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）

【００３９】実施例６ベンゼン（１ｍｌ）とジメチルスルホキシド（０.５m
l）の混液にジシクロヘキシルカルボジイミド（１０４m
g，０.５０４mmol）とピリジン（１４μl，０.１６８mm
ol）を加え、次いで氷冷下に１−［（３Ｓ）−３−（Ｎ
^アルフア−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−アスパラギニ
ル）アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチリル］
−Ｎ−tert−ブチル−Ｌ−プロリンアミド（化合物１：
１００mg，０. １６８mmol）を加えた。１０分後にトリ
フルオロ酢酸（６.６μl，０.０８４mmol）を加え、室
温で一夜撹拌した。反応液に酢酸エチル（２ml）を加
え、不溶物をろ別した。ろ液に酢酸エチル（２５ml）
を加え、これを水（３０ml× ３）で洗浄し、乾燥（Ｍg
ＳＯ₄）した後、減圧留去した。残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（Kieselgel ６０，１５ｇ：酢酸
エチル−塩化メチレン−メタノール＝５：５：１で溶
出）で精製すると１−［（３Ｓ）−３−（Ｎ^アルフア−ベン
ジルオキシカルボニル−Ｌ−アスパラギニル）アミノ−
２−オキソ−４−フェニルブチリル］−Ｎ−tert−ブチ
ル−Ｌ−プロリンアミド（化合物２：２０mg，２０.１
％）が白色粉末晶として得られた。ｍｐ８９−９３℃ ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：５９４（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(d₆-DMSO)δ：1.21(3H,s),1.24(6H,s),1.65
-2.0(4H,m),2.0-2.4(2H,m),2.75-3.1(1H,m),3.1-3.3(1
H,m),3.4-3.6(2H,m),4.2-4.5(2H,m),4.5-4.9(1H,m),4.9
-5.1(2H,m),6.88(1H,br s),7.1-7.3(5H,m),7.33(5H,s),
7.5-7.6(1H,m),8.15-8.6(1H,m)

【００４０】実施例７（２ＲＳ，３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミ
ノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸（化合物I
X：２.１６ｇ，６.５５mmol）をジメチルホルムアミド
（５ml）に溶解し、氷冷下にＬ−プロリン−tert−ブチ
ルエステル（１.２３ｇ，７.２１mmol）のジメチルホル
ムアミド（２.５ml）溶液，シアノリン酸ジエチル（１.
２３ｇ，７.２１mmol）のジメチルホルムアミド（２.５
ml）溶液およびトリエチルアミン（１.０ml，７.２１
mmol）を順次加えた。氷冷下に１時間、さらに室温で一
夜撹拌した後、溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチル
（８０ml）に溶解し、得られた溶液を冷５％塩酸，５％
重曹水，飽和食塩水の順で洗浄し、乾燥（ＭgＳＯ₄）し
た後、減圧留去した。残留物を酢酸エチル−ヘキサン
（１：１，１２ml）から結晶化し、１−［（３Ｓ）−３
−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−
４−フェニルブチリル］−Ｌ−プロリン−tert−ブチル
エステルのジアステレオマーＢ（極性小）を白色結晶と
して８００mg（２５.３％）得た。さらにろ液を減圧留
去した後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（Kieselgel ６０，３０ｇ：酢酸エチル−ヘキサン
＝１：２で溶出）で精製すると、追加のジアステレオマ
ーＢ１４０mg（４.４％）とジアステレオマーＡ（極性
大，非結晶性粉末）１.０３ｇ（３２.６％）が得られ
た。ジアステレオマーＡｍｐ５８−６０℃ ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：４８３（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(CDCl₃)δ：1.43(3H,s),1.45(6H,s),1.6-2.
3(4H,m),2.5-3.0(2H,m),3.6-3.9(2H,m),4.15-4.3(1H,
m),4.45-4.55(1H,m),4.60(1H,br s),5.00(2H,s),5.0-5.
1(1H,m),5.22(1H,d,J=8.4Hz),7.15-7.4(5H,m),7.27(5H,
s) ジアステレオマーＢｍｐ１５１.０−１５３.５℃ ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：４８３（ＭＨ⁺）元素分析値：Ｃ₂₇Ｈ₃₄Ｎ₂Ｏ₆として Calcd：Ｃ，６７.２０；Ｈ，７.１０；Ｎ，５.８０ Found：Ｃ，６７.１１；Ｈ，７.２５；Ｎ，５.５３¹ Ｈ−ＮＭＲ(CDCl₃)δ：1.43(9H,s),1.8-2.1(4H,m),2.9
4(1H,d,J=2.8Hz),2.98(1H,s),3.05-3.2(1H,m),3.15-3.4
(1H,m),3.97(1H,br s),4.1-4.3(3H,m),5.03(2H,d,J=4.0
Hz),5.14(1H,d,J=9.8Hz),7.2-7.4(10H,m)

【００４１】実施例８１−［（３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ
−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチリル］−Ｌ−プロ
リン−tert−ブチルエステルのジアステレオマーＢ（８
４０mg，１.７４mmol）をジオキサン（５ml）に溶解
し、４Ｎ塩酸−ジオキサン溶液（２ml）を加え、室温で
２４時間撹拌した。反応液にジオキサン（５ml）を加え
て減圧濃縮を３回くり返した。残渣をシリカゲルカラム
クロマトグラフィー（Kieselgel ６０，３０ｇ：酢酸エ
チル−ヘキサン＝２：１で溶出）で精製し、１−［（３
Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−ヒド
ロキシ−４−フェニルブチリル］−Ｌ−プロリンの非結
晶性粉末４１０mg（５５.３％）を得た。ｍｐ１５５.５−１５６.０℃ ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：４２７（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(CDCl₃)δ：1.55-1.75(1H,m),1.85-2.1(2H,
m),2.25-2.45(1H,m),2.85-3.15(2H,m),3.25-3.5(1H,m),
3.55-3.75(1H,m),4.12(1H,dd,J=7.2,8.4Hz),4.5-4.6(1
H,m),4.64(1H,d,J=5.2Hz),4.65-4.75(1H,m),5.03(2H,q,
J=10.8,32.8Hz),7.27(5H,s),7.15-7.4(6H,m)

【００４２】実施例９１−［（３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ
−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチリル］−Ｌ−プロ
リン（２７０mg，０.６３mmol）をジメチルホルムアミ
ド（４ml）に溶解し、氷冷下にｎ−ブチルアミン（１８
６μl，１.９０mmol），シアノリン酸ジエチル（２４０
mg，１.３９mmol）のジメチルホルムアミド（０.５ml）
溶液およびトリエチルアミン（１９４μl，１.３９mmo
l）を順次加え、氷冷下に１時間、さらに室温で一夜撹
拌した。反応液に水（５ml）を加え、１時間撹拌した
後、さらに水（３０ml）を加え、酢酸エチル（４０ml）
で抽出した。酢酸エチル層を１０％リン酸ナトリウム水
溶液，５％重曹水，飽和食塩水の順で洗浄し、乾燥（Ｍ
gＳＯ₄）した後、減圧留去した。残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（Kieselgel ６０，２０ｇ：酢酸
エチル−ヘキサン＝２：１で溶出）で精製した後、ヘキ
サンから結晶化し、１−［（３Ｓ）−３−ベンジルオキ
シカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブ
チリル］−Ｎ−ブチル−Ｌ−プロリンアミドの白色粉末
晶１５０mg（４９.２％）を得た。ｍｐ６６.５−６８.５℃ ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：４８２（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(CDCl₃)δ：0.90(3H,t,J=6.8Hz),1.2-1.6(4
H,m),1.75-2.1(3H,m),2.15-2.3(1H,m),2.8-3.4(6H,m),
3.87(1H,br s), 4.0-4.3(3H,m),5.03(2H,s),5.10(1H,d,
J=9.4Hz),6.57(1H,br s),7.2-7.4(5H,m),7.33(5H,s)

【００４３】実施例１０２−キノリンカルボン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ドエステル（１.０８ｇ，４.００ｍｍｏｌ）をジメチル
ホルムアミド（４ｍｌ）に溶解し、これにＬ−アスパラ
ギン・１水和物（６００ｍｇ，４．００ｍｍｏｌ）を加
え、室温で１００時間攪拌した。溶媒を減圧留去した
後、残渣にジクロロメタン（１８ｍｌ）を加え、室温で
３０分間攪拌した。生じた白色沈殿物を濾取し、ジクロ
ロメタン（４０ｍｌ）で洗浄するとＮ^アルフア−（２−キノ
リルカルボニル）−Ｌ−アスパラギン（１.０９ｇ，９
４.９％）が白色粉末晶として得られた。ｍｐ１８９ −１９３ ℃（分解）元素分析値：Ｃ₁₄Ｈ₁₃Ｎ₃Ｏ₄・０.２Ｈ₂Ｏとして計算値Ｃ，５７.８１；Ｈ，４.６４；Ｎ，１４.４４実測値Ｃ，５７.８６；Ｈ，４.６６；Ｎ，１４.５５ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：２８８（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(d₆-DMSO）δ：2.67-2.93(2H,m),4.78-4.87
(1H,m),7.01(1H,s),7.52(1H,s),7.74(1H,t,J=7.2Hz),7.
89(1H,t,J=7.2Hz), 8.09-8.21(3H,m),8.59(1H,d,J=8H
z),9.17(1H,d,J=8Hz)

【００４４】実施例１１Ｎ^アルフア−（２−キノリルカルボニル）−Ｌ−アスパラギ
ン（１４６ｍｇ，０.５０９ｍｍｏｌ）と１−［（３
Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブチ
リル］−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｌ−プロリンアミド
（化合物ＸＩ：１７５ｍｇ，０．５０９ｍｍｏｌ）をジ
メチルホルムアミド（３ｍｌ）に溶解し、−５℃以下
で、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（７３ｍｇ，
０．５４０ｍｍｏｌ）、次いでジシクロヘキシルカルボ
ジイミド（１１１ｍｇ，０．５４０ｍｍｏｌ）を加え、
−５℃以下で２時間、さらに室温で１６時間攪拌した。
生じた不溶物を濾別し、溶媒を減圧留去した。残渣に１
０％リン酸水溶液、酢酸エチル（各３０ｍｌ）を加えて
分液した。酢酸エチル層を５％重曹水，飽和食塩水の順
に洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）した後、減圧留去した。
得られた粉末をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（Kieselgel 60, １８ｇ：酢酸エチル：ジクロロメタ
ン：メタノール＝８：８：１で溶出）で２回精製すると
１−［（３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−［Ｎ^アルフア−（２
−キノリルカルボニル）−Ｌ−アスパラギニル］アミノ
−４−フェニルブチリル］−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｌ
−プロリンアミド（化合物３：１５０ｍｇ，４７.８
％）が非結晶性白色粉末として得られた。ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：６１７（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(CDCl₃）δ：1.29(9H,s),1.7-2.4(4H,m),2.
64-3.10(4H,m),3.69(2H,t,J=6.6Hz),4.09-4.16(1H,m),
4.40-4.66(3H,m), 4.91-5.05(1H,m),5.58(1H,brs),6.10
(1H,brs),6.57(1H,s),6.95-7.18(5H,m),7.64(1H,t,J=7H
z),7.75-7.91(3H,m),8.11-8.34(3H,m),9.20(1H,d,J=7.8
Hz) 元素分析値：Ｃ₃₃Ｈ₄₀Ｎ₆Ｏ₆・Ｈ₂Ｏとして計算値Ｃ，６２.４５；Ｈ，６.６７；Ｎ，１３.２４実測値Ｃ，６２.２０；Ｈ，６.８０；Ｎ，１３.１９

【００４５】実施例１２１−［（３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−［Ｎ^アルフア−（２
−キノリルカルボニル）−Ｌ−アスパラギニル］アミノ
−４−フェニルブチリル］−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｌ
−プロリンアミド（化合物３：５０ｍｇ，０.０８１ｍ
ｍｏｌ）のベンゼン溶液（２.５ｍｌ）に、氷冷下塩酸
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミド（３１ｍｇ，０.０１６ｍｍｏｌ）、ピリジ
ントリフルオロ酢酸塩（５．９ｍｇ，０.０３ｍｍｏ
ｌ）、ジメチルスルホキシド（０.２ｍｌ）を順次加え
た。室温で２４時間攪拌した後、再度氷冷下に塩酸１−
エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジ
イミド（３１ｍｇ，０.０１６ｍｍｏｌ）、ピリジント
リフルオロ酢酸塩（５．９ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）、
ジメチルスルホキシド（０．２ｍｌ）を順次加えた。室
温で７２時間攪拌した後、反応液に酢酸エチル（２０ｍ
ｌ）を加え、これを水（１０ｍｌ×２）で洗浄した。酢
酸エチル層を乾燥（ＭｇＳＯ_４）した後、溶媒を留去し
た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Kies
elgel 60，２０ｇ：酢酸エチル：ジクロロメタン：メタ
ノール＝５：５：１で溶出）で２回精製すると１−
［（３Ｓ）−３−［Ｎ^アルフア−（２−キノリルカルボニ
ル）−Ｌ−アスパラギニル］アミノ−２−オキソ−４−
フェニルブチリル］−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｌ−プロ
リンアミド（化合物４：２０ｍｇ，４０.２％）が白色
粉末晶として得られた。ＳＩＭＳ(ｍ／ｚ)：６１５（ＭＨ⁺）¹ Ｈ−ＮＭＲ(CDCl₃）δ：1.16(3H,s),1.20-1.37(6H,m),
1.70-2.35(4H,m),2.56-3.78(6H,m),4.38-4.60(1H,m),4.
92-5.1(1H,m), 5.1-5.35(1H,m),5.35-5.55(1H,m),5.80-
6.12(1H,m),6.4-6.57(1H,m),6.95-7.29(5H,m),7.46-7.9
3(4H,m),8.09-8.35(3H,m),9.25-9.48(1H,m) ｍｐ１１５−１１８℃

【００４６】

【配列表】配列番号：１配列の長さ：１２配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸合成ＤＮＡ配列 AATTCTATGC CA 12

【００４７】配列番号：２配列の長さ：１２配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸合成ＤＮＡ配列 GATACGGTCT AG 12

【００４８】配列番号：３配列の長さ：２８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸合成ＤＮＡ配列 CTAGCTAGCT AGAATTCTAG CTAGCTAG 28

【００４９】配列番号：４配列の長さ：１３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Ser Gln Val Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu 1 5 10

【００５０】配列番号：５配列の長さ：７配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｄ 209/42 9283−4Ｃ 217/26 221/02 223/16 ＡＢＺ 401/12 ２０７ 8829−4Ｃ //(Ｃ０７Ｄ 401/12 207:00 215:00）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式【化１】［式中、環Ａは５〜７員環を示し、Ｒ¹，Ｒ²はともに水
素原子を示すか、または結合して縮合環を形成していて
もよく、Ｒ³はエステル化もしくはアミド化されていて
もよいカルボキシル基を示し、Ｒ⁴は水素原子またはア
シル基を示し、Ｘは【化２】で表わされるアスパラギン誘導体およびその塩。
【請求項２】請求項１記載のアスパラギン誘導体を含有
してなるレトロウイルス性疾患治療剤。