JPH05238943A

JPH05238943A - キサンチンオキシダーゼ阻害剤

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Publication number: JPH05238943A
Application number: JP4075910A
Authority: JP
Inventors: Yoshihide Hagiwara; 義秀萩原; Hideaki Hagiwara; 秀昭萩原
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1992-02-28
Filing date: 1992-02-28
Publication date: 1993-09-17
Anticipated expiration: 2015-01-24
Also published as: JP3001713B2

Abstract

(57)【要約】【構成】緑色植物、殊に麦類植物の緑葉成分に由来す
るキサンチンオキシダーゼ阻害剤。【効果】本阻害剤は毒性が極めて少なく医薬において
有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は緑色植物の緑葉成分中に
含まれるキサンチンオキシダーゼ阻害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術及び課題】キサンチンオキシダーゼは生体
内における核酸代謝系で重要な酵素であるが、しかし、
その作用の結果として、疾病の原因ともなる生成物であ
る活性酸素、尿酸を生成する。例えば、血栓形成による
虚血部位においてはヒポキサンチンが蓄積し、キサンチ
ンデヒドロゲナーゼがキサンチンオキシダーゼに変換さ
れる。この虚血部位において血栓の消失が起こるとき、
血管に血液が流入して、ヒポキサンチン、キサンチンオ
キシダーゼ及び酸素の共存状態となり、Ｏ₂ ^-及び・ＯＨ
といった活性酸素を生成し、各種の疾病の原因ともな
る。更に、キサンチンより生成する尿酸は痛風の原因と
もなる。痛風の治療法の一つとして高尿酸血症の治療を
行う場合、尿酸排泄剤と尿酸産生抑制剤を用いることが
あり、その際尿酸産生抑制剤としてアロピリノールが用
いられる。アロピリノールはキサンチンオキシダーゼ阻
害剤であり、副作用として胃腸障害、発診、白血球減
少、血小板減少、肝障害等が生じ、動物実験においては
催奇形成も報告されている。

【０００３】本発明者らは、従来より緑色植物、例えば
イネ科植物、殊に麦類植物の緑葉中に存在する生理活性
物質について研究を行ってきたが、今回、該緑葉中にキ
サンチンオキシダーゼ活性を阻害する物質が存在するこ
とを見い出し、該物質に富む成分の抽出及び該物質の単
離、精製にも成功し本発明を完成するに至った。

【０００４】

【発明の開示】かくして、本発明によれば、緑色植物の
緑葉成分に由来するキサンチンオキシダーゼ阻害剤が提
供される。

【０００５】以下、本発明のキサンチンオキシダーゼ阻
害剤についてさらに詳細に説明する。なお、本明細書に
おける含水アルコールの含水率％はｖ／ｖ％によるもの
である。

【０００６】原料となる緑色植物としては、イネ科植
物、殊に麦類植物が好適であるが、それ以外に、クロー
バー、アルファルファ、ケール、ホウレン草、レタス、
パセリ、セロリ、キャベツ、白菜、水菜、ピーマン、ニ
ンジン緑葉、大根緑葉、ササ、アシタバなどの牧草類、
野菜類、山野草類植物；さらに、スピルリナ、クロレ
ラ、ワカメ、青ノリなどの淡水産もしくは海水産緑色藻
類、等もまた使用することができる。

【０００７】本発明において好適に使用される麦類植物
としては、大麦が最も適しているが、その他に、小麦、
裸麦、エン麦、ハト麦、トウモロコシ、キビ、イタリア
ンダイグラスなどもまた使用することができる。

【０００８】本発明では、これら緑色植物、好ましくは
イネ科植物、殊に麦類植物の中でも成熟期前に収穫した
若い植物の新鮮な茎及び／又は葉の部分（本明細書では
これらを総称して「緑葉」という）が特に適している。

【０００９】緑色植物、例えば麦類植物の緑葉はまず、
ミキサー、ジューサー等の機械的破砕手段によって搾汁
し、必要に応じて、篩別、濾過等の手段によって粗固形
分を除去することにより搾汁液（以下、これを「青汁」
という）を調製する。

【００１０】このようにして調製される青汁はそれをさ
らに凍結乾燥、噴霧乾燥等の適当な乾燥手段で乾燥する
ことにより青汁粉末とすることができる。

【００１１】上記の如くして得られる青汁又は青汁粉末
は以下に述べる如き抽出処理に付すことにより本発明に
キサンチンオキシダーゼ阻害剤を得ることができる。

【００１２】まず、上記の如くして得られる青汁又は青
汁粉末は充分量の水又はｎ−ヘキサンで抽出処理する。
この抽出処理は通常室温で行なうことができ、場合によ
っては２回又はそれ以上繰り返し行なってもよく、それ
によって水可溶性成分又はｎ−ヘキサンに実質的に不溶
性の成分を分離回収する。回収された抽出成分はこの段
階で前記と同様にして乾燥し固形化することができる。

【００１３】かくして得られる水可溶性成分又はｎ−ヘ
キサン不溶性成分を次いで含水率が０〜８０％、好まし
くは１０〜７０％、さらに好ましくは１５〜５０％の含
水エタノール、例えば含水率２０％の含水エタノールで
抽出処理を行ない、該含水エタノールに可溶性の成分を
分離回収する。

【００１４】この含水エタノールによる抽出処理は、前
記の如くして調製される青汁もしくはそれから水不溶性
成分を完全に除去した緑葉の水溶性成分又はそれらを凍
結乾燥、噴霧乾燥等の適当な乾燥手段で乾燥して得られ
る粉末に対して直接行なうこともできる。

【００１５】このようにして回収された含水エタノール
可溶性成分は、キサンチンオキシダーゼ阻害活性を有し
ており、そのままで或いは濃縮又は溶媒を留去した後
に、キサンチンオキシダーゼ阻害剤として使用すること
ができる。

【００１６】さらに、本発明によれば所望に応じて、上
記含水エタノール可溶成分を適当な吸着剤、例えばＳｔ
ｙｒｅｎｅ−ＤＶＢ樹脂吸着剤（例えば、ローム・アン
ド・ハース社製、アンバーライト^R吸着剤ＸＡＤ−２）
等で処理し且つ含水率０〜８０％、好ましくは２０〜７
０％、さらに好ましくは３０〜６０％の含水メタノール
で溶離処理を行なうことによって、該含水メタノールに
可溶性の成分を回収することができる。これによってさ
らにキサンチンオキシダーゼ阻害活性に優れた画分を取
得することができる。

【００１７】このようにして回収される含水メタノール
可溶性成分は、そのまま或いは濃縮又は溶媒を除去した
後に、そのキサンチンオキシダーゼ阻害剤を有効成分と
して薬剤に配合することもできる。

【００１８】さらにまた、このようにして緑色植物、例
えば、大麦の緑葉から回収される含水メタノール可溶性
成分は、例えば、含水率が３０〜７０％、好ましくは４
０〜６０％の含水メタノールを用いて再結晶精製するこ
とにより、キサンチンオキシダーゼ阻害剤の本体を微黄
色結晶として取得することができる。このようにして単
離されたキサンチンオキシダーゼ阻害剤の本体は、ＮＭ
Ｒ、質量分析等の分析の結果、下記式

【００１９】

【化２】

【００２０】で示される構造を有する２′−Ｏ−グルコ
シル−イソビテキシンであることが同定された（後記参
考例１参照）。このようにして単離されたキサンチンオ
キシダーゼ阻害剤は、本阻害剤を有効成分とする薬剤に
調製することができる。

【００２１】上記構造式又はこれに類する構造を有する
キサンチンオキシダーゼ阻害剤が、麦類植物をはじめと
する緑色植物の緑葉中に含まれており、それが本発明に
おけるキサンチンオキシダーゼ阻害剤の有効成分をなし
ている。

【００２２】緑色植物、殊に麦類植物から抽出される本
発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤は、毒性が極めて
少なく、医薬として例えば尿酸産生抑制剤として使用す
ることが期待される。

【００２３】

【実施例】以下、参考例及び実施例により本発明をさら
に具体的に説明する。

【００２４】参考例１（活性成分の分画と調製）成熟期前の大麦の青汁の凍結乾燥粉末２０ｇにｎ−ヘキ
サン５００ｍｌを加え常温で約５分間よく撹拌した後、
不溶成分を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）に
より分離し、さらに分離した不溶成分にｎ−ヘキサン５
００ｍｌを加え、同様の操作を繰り返しｎ−ヘキサン不
溶成分を得た。

【００２５】この不溶成分に、含水率２０％のエタノー
ル５００ｍｌを加え常温で約５分間よく撹拌した後、不
溶分を濾別する。濾別した不溶分を再度含水率２０％の
エタノール５００ｍｌで同様に処理し、得られる濾液を
合わせて、減圧下に溶媒を留去する。これによって含水
率２０％エタノール抽出物１３．０ｇを得た。

【００２６】この含水率２０％エタノール抽出物をアン
バーライトＸＡＤ−２カラムに吸着させた後、蒸留水、
含水率がそれぞれ８０、６０、４０、２０及び０ｖ／ｖ
％の含水メタノール、ならびにアセトンで順次離溶さ
せ、溶出液を得た。

【００２７】各溶出液は減圧蒸留にて溶媒を留去し、そ
の結果、水抽出物４．７７ｇ、２０％メタノール抽出物
１８０ｍｇ、４０％メタノール抽出物１３１ｍｇ、６０
％メタノール抽出物１９９ｍｇ、８０％メタノール抽出
物３２ｍｇ、１００％メタノール抽出物１６５ｍｇ、ア
セトン抽出物０．８７ｍｇを得た（ここで、メタノール
の％は含水メタノール中のメタノール濃度ｖ／ｖ％であ
る）。

【００２８】上記の如くして得られた６０％メタノール
抽出物を、さらに６０％メタノールを用いて再結晶し、
１８０ｍｇの微黄色の結晶を得た。この結晶の構造決定
を質量分析及びＮＭＲにより行った。

【００２９】質量分析はＦＡＢ−ＭＳ：ＶＧＺＡＢ−
２Ｆ、（ＸｅｎｏｎＧｕｎ）（ＪｏｎＴｅｃｈ）型
質量分析装置を用いて行い、図１に示す結果が得られ
た。この質量スペクトルからｍ／ｚ＝５９５に［Ｍ＋Ｈ
⁺］のピークがみられ、分子量は５９４であることが決
定され、元素分析の結果と併せて考慮するとき、本物質
の分子式はＣ₂₇Ｈ₃₀Ｏ₁₅であると判断される。

【００３０】本物質の紫外線吸収スペクトルをＨ₂Ｏ及
びメタノール中で測定したところ、それぞれ図２及び図
３に示すようになりフラボノイドグルコシドの吸収を示
した。

【００３１】赤外線吸収スペクトルをＪＡＳＣＯＦＴ
／ＩＲ−７０００ＳによりＫＢｒ法を適用して測定した
結果を図４に示す。３４２２ｃｍ^-1にＯＨ基の存在を示
している。

【００３２】本物質は常法により塩酸−メタノールで加
水分解するときグルコースを１分子遊離して、イソビテ
キシンを生成した。

【００３３】さらに、本物質の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル
（５００ＭＨｚ）を、本物質２５ｍｇを用いてＧＥＯ
ＭＥＧＡ３００型核磁気共鳴スペクトル吸収測定装置
によりテトラメチルシラン［ＴＭＳ，（ＣＨ₃)₄Ｓｉ］
を内部標準として用いて測定し、図５に示す結果を得
た。図５においては、化学シフトをδで表示した。本物
質はＭｅＯＨ−ｄ₄中で２７炭素原子に対するシグナル
を与え、イソビテキシンの¹³Ｃ−ＮＭＲの標準値［Ｒａ
ｍａｒａｔｈｎａｍ，Ｎ.，Ｏｓａｗａ，Ｔ.，Ｎａｍｉ
ｋｉ，Ｍ．ａｎｄＫａｗａｓａｋｉｓｈｉ，Ｓ．：
Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ.，３７、３１６
−３１９（１９８９）］を基礎として次の構造式である
と同定した。

【００３４】

【化３】

【００３５】本物質は、この構造式により、２′−Ｏ−
グルコシル−イソビテキシンと命名する。

【００３６】参考例２（活性成分の分画と調製）成熟期前の小麦の青汁の凍結乾燥粉末２０ｇを参考例１
と同様に処理して６０％メタノール抽出物１１８ｍｇを
得た。さらに該抽出物を６０％メタノールにより再結晶
を繰り返して１０６ｍｇの白色の結晶を得た。本物質は
参考例１に示したと同じ構造の物質であった。

【００３７】参考例３（活性成分の分画と調製）成熟期前のコンフリーの青汁の凍結乾燥粉末２０ｇを参
考例１と同様に処理して６０％メタノール抽出物４０ｍ
ｇを得た。さらに該抽出物を６０％メタノールにより再
結晶を繰り返して３７ｍｇの白色の結晶を得た。本物質
は参考例１に示したと同じ構造の物質であった。

【００３８】実施例１１ｍｌの石英セルに下記の組成リン酸カリウム緩衝液３７.５ｍＭＥＤＴＡ・２Ｎａ０.１ｍＭキサンチン０.１ｍＭキサンチンオキシダーゼ阻害剤０.１ｍＭの反応液０.９８ｍｌを注加し、３０℃に加温した後、
キサンチンオキシダーゼ溶液２０μｌを加え、直ちに２
９５ｎｍの吸光度を測定した。

【００３９】なお、キサンチンオキシダーゼ阻害剤とし
て、前記参考例１で得られる含水率２０％エタノール抽
出物をそれに含まれる２′−Ｏ−グルコシルイソビテキ
シンの量に換算して０.１ｍＭとなる量で使用した。

【００４０】一方、対照（ブランク）として、上記キサ
ンチンオキシダーゼ阻害剤の代りに、該阻害剤（含水率
２０％エタノール抽出物）と同容量のリン酸カリウム緩
衝液を用い、上記と同様の操作を繰り返して２９５ｎｍ
の吸光度を測定した。

【００４１】両者の吸光度の測定結果（吸光度の経時的
変化をプロットしたグラフの勾配の比較）から、上記含
水率２０％エタノール抽出物の阻害率は９７％であっ
た。

【００４２】実施例２実施例１において含水率２０％エタノール抽出物の代り
に単離した２′−Ｏ−グルコシルイソビテキシン０.１
ｍＭを用いる以外、実施例１と同様にしてキサンチンオ
キシダーゼ阻害効果を測定したところ、その阻害率は９
５％であった。

【００４３】実施例３大麦若葉の緑葉を洗浄した後、搾汁して得られた青汁を
噴霧乾燥、凍結乾燥等の乾燥方法により粉末化した青汁
粉末３ｋｇをヘキサン６０リットルにて２回抽出を繰り
返し、得られるヘキサン不溶部分に水３０リットルを加
えて抽出し、水可溶性成分を噴霧乾燥し、１.４ｋｇの
噴霧乾燥物を得た。次いで、本乾燥粉末に含水率２０％
の含水エタノール３０リットルを加えて、含水率２０％
の含水エタノール可溶性成分９００ｇを得、エタノール
を留去した。さらに、これに含水率４０％の含水メタノ
ールを３０リットル加えて、含水率４０％の含水メタノ
ール可溶性成分を抽出後、メタノールを留去して含水率
４０％の含水メタノール可溶性成分７２０ｇを得た。

【００４４】この含水率４０％の含水メタノール可溶性
成分をキサンチンオキシダーゼ阻害剤として、２′−Ｏ
−グルコシルイソビテキシン換算で０.１ｍＭの量で用
い、実施例１と同様にして阻害率を測定した結果、阻害
率は９８％であった。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は参考例１で得られた２′−Ｏ−グルコシ
ル−イソビテキシンのＦＡＢ−ＭＳ法による測定チャー
トを示す。

【図２】図２は２′−Ｏ−グルコシル−イソビテキシン
のＨ₂Ｏ系における紫外部吸収スペクトルである。

【図３】図３は２′−Ｏ−グルコシル−イソビテキシン
のメタノール系における紫外部吸収スペクトルである。

【図４】図４は２′−Ｏ−グルコシル−イソビテキシン
の赤外線吸収スペクトルである。

【図５】図５は２′−Ｏ−グルコシル−イソビテキシン
の¹³Ｃ−ＮＭＲの測定結果を示す図である。

【図６】図５は２′−Ｏ−グルコシル−イソビテキシン
の¹³Ｃ−ＮＭＲの測定結果を示す図である。

【図７】図５は２′−Ｏ−グルコシル−イソビテキシン
の¹³Ｃ−ＮＭＲの測定結果を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】緑色植物の緑葉成分であって、ｎ−ヘキ
サンに実質的に不溶性で且つ含水率が０〜８０％の含水
エタノールに可溶性である成分よりなるキサンチンオキ
シダーゼ阻害剤。
【請求項２】緑色植物の緑葉の水可溶性成分であっ
て、含水率が０〜８０％の含水エタノールに可溶性であ
る成分よりなるキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
【請求項３】含水エタノールが含水率１５〜５０％の
エタノールである請求項１または２記載のキサンチンオ
キシダーゼ阻害剤。
【請求項４】緑色植物が麦類植物である請求項１〜３
のいずれかに記載されたキサンチンオキシダーゼ阻害
剤。
【請求項５】緑色植物の緑葉成分であって、ｎ−ヘキ
サンに実質的に不溶性で且つ含水率が０〜８０％の含水
エタノールに可溶性であり、さらに含水率が０〜８０％
の含水メタノールに可溶性である成分よりなるキサンチ
ンオキシダーゼ阻害剤。
【請求項６】含水エタノールが含水率１５〜５０％の
エタノールである請求項５記載のキサンチンオキシダー
ゼ阻害剤。
【請求項７】含水メタノールが含水率１０〜７０％の
含水メタノールである請求項５または６記載のキサンチ
ンオキシダーゼ阻害剤。
【請求項８】緑色植物が麦類植物である請求項５〜７
のいずれかに記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
【請求項９】下記式【化１】で示される２′−Ｏ−グルコシル−イソビテキシンを有
効成分として含有することを特徴とするキサンチンオキ
シダーゼ阻害剤。