JPH05246898A - 光学異性体用分離剤 - Google Patents
光学異性体用分離剤Info
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- JPH05246898A JPH05246898A JP4045676A JP4567692A JPH05246898A JP H05246898 A JPH05246898 A JP H05246898A JP 4045676 A JP4045676 A JP 4045676A JP 4567692 A JP4567692 A JP 4567692A JP H05246898 A JPH05246898 A JP H05246898A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 安価でかつ有機溶媒による変性に対して安定
な光学異性体用分離剤を提供すること。 【構成】 分子構造の一部を修飾したアビジンが担体に
結合されている固定相からなることを特徴とする光学異
性体用分離剤。
な光学異性体用分離剤を提供すること。 【構成】 分子構造の一部を修飾したアビジンが担体に
結合されている固定相からなることを特徴とする光学異
性体用分離剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は光学異性体用分離剤に関
し、詳しくは担体に固定化された分子構造の一部を修飾
したアビジンを使用した光学異性体用分離剤に関する。
し、詳しくは担体に固定化された分子構造の一部を修飾
したアビジンを使用した光学異性体用分離剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】不斉炭素原子を含むキラルな化学物質に
ついて、その光学異性体を分離することが特に医薬品の
分野において強く要求されている。すなわち一つのラセ
ミ体を構成する複数の光学異性体の中の一つのものが特
別に顕著な医薬上の有用性、例えば顕著な薬理作用、顕
著な生体内利用性を示し、あるいは反対に顕著な毒性を
示すことが一般事実として明らかになり、従って医薬品
としてはラセミ体として投与されるよりも、分離された
光学異性体として投与される方がより合理的であり、治
療効果を高める結果となるからである。光学異性体の分
離については従来から幾多の実験室的方法が報告されて
きたが、工業的規模において実施できるものは少なく、
これは非常に困難な技術課題であると考えられてきた。
しかしカラムクロマトグラフィーの進歩により、とりわ
け液体クロマトグラフィーにより光学異性体を分離する
方法が一般に知られるようになった。これらの方法につ
いては、例えば下記文献１）〜９）に示されている。
ついて、その光学異性体を分離することが特に医薬品の
分野において強く要求されている。すなわち一つのラセ
ミ体を構成する複数の光学異性体の中の一つのものが特
別に顕著な医薬上の有用性、例えば顕著な薬理作用、顕
著な生体内利用性を示し、あるいは反対に顕著な毒性を
示すことが一般事実として明らかになり、従って医薬品
としてはラセミ体として投与されるよりも、分離された
光学異性体として投与される方がより合理的であり、治
療効果を高める結果となるからである。光学異性体の分
離については従来から幾多の実験室的方法が報告されて
きたが、工業的規模において実施できるものは少なく、
これは非常に困難な技術課題であると考えられてきた。
しかしカラムクロマトグラフィーの進歩により、とりわ
け液体クロマトグラフィーにより光学異性体を分離する
方法が一般に知られるようになった。これらの方法につ
いては、例えば下記文献１）〜９）に示されている。
【０００３】１） ディー・ダブル・アームストロング
ら：ジャーナル・オブ・クロマトグラフィック・サイエ
ンス、２２巻（１９８４）４１１−４１５頁(D. W. Arm
stronget al: Journal of Chromatographic Science, V
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クロマトグラフィー，３２５（１９８５）３７９頁−３
８４頁（Joergen Hermansson:Journal of Chromatograp
hy, ３２５（１９８５）３７９−３８４） ３） アイ・ダブル・ワイナーら：ジャーナル・オブ・
クロマトグラフィー，２８４（１９８４）１１７頁−１
２４頁（I. W. Wainer et al:Journal of Chromatograp
hy, ２８４（１９８４）１１７−１２４） ４） エス・アレンマルクら：ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー，２６４（１９８３）６３頁−６８頁
（S.Allenmark et al:Journal of Chromatography,２６
４（１９８３）６３−６８） ５） エス・アレンマルクら：ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー，２３７（１９８２）４７３頁−４７７
頁（S.Allenmark et al:Journal of Chromatography,２
３７（１９８２）４７３−４７７） ６） 米国特許第４，５３９，３９９号明細書 ７） 特開昭６０−４１６１９号公報 ８） 三輪敏紳ら：ケミカル・アンド・ファーマシュー
ティカル・ブリテン，３５巻（１９８７）６８２頁−６
８６頁（T.Miwa et al:Chemical and Pharmaceutical B
ulletin,Vol ３５（１９８７）６８２−６８６） ９） 特開昭６４−３１２９号公報
ら：ジャーナル・オブ・クロマトグラフィック・サイエ
ンス、２２巻（１９８４）４１１−４１５頁(D. W. Arm
stronget al: Journal of Chromatographic Science, V
ol. 22 (1984) 411-415) ２） イエルゲン・ヘルマンソン：ジャーナル・オブ・
クロマトグラフィー，３２５（１９８５）３７９頁−３
８４頁（Joergen Hermansson:Journal of Chromatograp
hy, ３２５（１９８５）３７９−３８４） ３） アイ・ダブル・ワイナーら：ジャーナル・オブ・
クロマトグラフィー，２８４（１９８４）１１７頁−１
２４頁（I. W. Wainer et al:Journal of Chromatograp
hy, ２８４（１９８４）１１７−１２４） ４） エス・アレンマルクら：ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー，２６４（１９８３）６３頁−６８頁
（S.Allenmark et al:Journal of Chromatography,２６
４（１９８３）６３−６８） ５） エス・アレンマルクら：ジャーナル・オブ・クロ
マトグラフィー，２３７（１９８２）４７３頁−４７７
頁（S.Allenmark et al:Journal of Chromatography,２
３７（１９８２）４７３−４７７） ６） 米国特許第４，５３９，３９９号明細書 ７） 特開昭６０−４１６１９号公報 ８） 三輪敏紳ら：ケミカル・アンド・ファーマシュー
ティカル・ブリテン，３５巻（１９８７）６８２頁−６
８６頁（T.Miwa et al:Chemical and Pharmaceutical B
ulletin,Vol ３５（１９８７）６８２−６８６） ９） 特開昭６４−３１２９号公報
【０００４】上記文献のうち、１）はキラルなシクロデ
キストリンを使用する分離方法を開示し、６）は該シク
ロデキストリンをシリカゲルに結合せしめた固定相を使
用して分離する方法を開示している。２）はキラルなα
1-酸性糖蛋白を使用する技術を開示しており、３）は
（Ｒ）−Ｎ−（３，５−ジニトロベンゾイル）フェニル
グリシンを使用する技術を開示している。４）および
５）は牛血清アルブミンをそれぞれシリカおよびアガロ
ースに結合せしめた固定相を使用して分離する方法を開
示している。７）はオロソムコイド、その官能類似体等
を使用して分離する方法を開示している。８）はオボム
コイドを担体に結合せしめた固定相を使用して分離する
方法を開示している。９）はアビジンを担体に結合せし
めた固定相を使用して分離する方法を開示している。し
かしながら１）〜７）の技術における使用資材は一般に
高価である。またこれらの技術における分離方法は主と
して多量の有機溶媒を使用する液体クロマトグラフィー
によって行われるので、使用資材は有機溶媒による変性
に対して安定でなければならないが、例えばアルブミ
ン、オロソムコイドはこの条件を十分に満足することが
できない。８）は比較的安価な資材を使用し、有機溶剤
による変性に対しても安定であるが、オボムコイドの等
電点が３．９〜４．３と酸性の領域にあるため、塩基性
の物質の分離には優れているが、酸性の物質の分離には
十分に満足する結果を与えることができない。また、
９）はカラムの寿命が短いという問題がある。
キストリンを使用する分離方法を開示し、６）は該シク
ロデキストリンをシリカゲルに結合せしめた固定相を使
用して分離する方法を開示している。２）はキラルなα
1-酸性糖蛋白を使用する技術を開示しており、３）は
（Ｒ）−Ｎ−（３，５−ジニトロベンゾイル）フェニル
グリシンを使用する技術を開示している。４）および
５）は牛血清アルブミンをそれぞれシリカおよびアガロ
ースに結合せしめた固定相を使用して分離する方法を開
示している。７）はオロソムコイド、その官能類似体等
を使用して分離する方法を開示している。８）はオボム
コイドを担体に結合せしめた固定相を使用して分離する
方法を開示している。９）はアビジンを担体に結合せし
めた固定相を使用して分離する方法を開示している。し
かしながら１）〜７）の技術における使用資材は一般に
高価である。またこれらの技術における分離方法は主と
して多量の有機溶媒を使用する液体クロマトグラフィー
によって行われるので、使用資材は有機溶媒による変性
に対して安定でなければならないが、例えばアルブミ
ン、オロソムコイドはこの条件を十分に満足することが
できない。８）は比較的安価な資材を使用し、有機溶剤
による変性に対しても安定であるが、オボムコイドの等
電点が３．９〜４．３と酸性の領域にあるため、塩基性
の物質の分離には優れているが、酸性の物質の分離には
十分に満足する結果を与えることができない。また、
９）はカラムの寿命が短いという問題がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】したがって本発明の目
的は、光学異性体の分離に有用な分離剤であって、安価
で、有機溶媒による変性に対して安定であり、かつカラ
ム寿命の長い、光学異性体用分離剤を提供することであ
る。また本発明の他の目的は、塩基性に等電点をもつ資
材を利用して、酸性の光学異性体の分離に有用な光学異
性体用分離剤を提供することである。
的は、光学異性体の分離に有用な分離剤であって、安価
で、有機溶媒による変性に対して安定であり、かつカラ
ム寿命の長い、光学異性体用分離剤を提供することであ
る。また本発明の他の目的は、塩基性に等電点をもつ資
材を利用して、酸性の光学異性体の分離に有用な光学異
性体用分離剤を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者は上記目的を達
成するために種々の検討を行った。その結果、卵白より
簡単に入手することができるアビジンの分子構造の一部
を修飾して使用することにより上記目的を達成すること
ができることを見い出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は分子構造の一部を修飾したアビジン
が担体に結合されている固定相からなることを特徴とす
る光学異性体用分離剤である。
成するために種々の検討を行った。その結果、卵白より
簡単に入手することができるアビジンの分子構造の一部
を修飾して使用することにより上記目的を達成すること
ができることを見い出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は分子構造の一部を修飾したアビジン
が担体に結合されている固定相からなることを特徴とす
る光学異性体用分離剤である。
【０００７】以下、本発明を詳細に説明する。アビジン
は卵白中に存在し、分子量が約５３０００、等電点が
９．５の蛋白質である。卵白からアビジンを精製する方
法としては、硫酸アンモニウムによる沈殿、ベントナイ
トへの吸着とイオン交換セルロースによる方法等があ
る。例えば、卵白を硫酸アンモニウム分画によりアビジ
ン以外の大部分の蛋白質を除き、その後弱酸性樹脂の吸
着溶離クロマトグラフィーを行うとか、あるいは分子ふ
るいによるゲルクロマトグラフィーを行うとか、さらに
は疎水性クロマトグラフィーを行うことにより容易にア
ビジンが得られる。また、卵白よりリゾチームあるいは
コンアルブミンを採取した後の残液からこれらの副産物
として容易に分画することもできる。従って本発明に用
いられるアビジンとして、このようにして安価に製造し
たアビジンを使用することが好ましいが、本発明に使用
するアビジンの入手方法がこの方法に限定されるわけで
はない。
は卵白中に存在し、分子量が約５３０００、等電点が
９．５の蛋白質である。卵白からアビジンを精製する方
法としては、硫酸アンモニウムによる沈殿、ベントナイ
トへの吸着とイオン交換セルロースによる方法等があ
る。例えば、卵白を硫酸アンモニウム分画によりアビジ
ン以外の大部分の蛋白質を除き、その後弱酸性樹脂の吸
着溶離クロマトグラフィーを行うとか、あるいは分子ふ
るいによるゲルクロマトグラフィーを行うとか、さらに
は疎水性クロマトグラフィーを行うことにより容易にア
ビジンが得られる。また、卵白よりリゾチームあるいは
コンアルブミンを採取した後の残液からこれらの副産物
として容易に分画することもできる。従って本発明に用
いられるアビジンとして、このようにして安価に製造し
たアビジンを使用することが好ましいが、本発明に使用
するアビジンの入手方法がこの方法に限定されるわけで
はない。
【０００８】本発明に用いられる担体は、分子構造の一
部が修飾されたアビジンと結合し、固定相を形成し得る
ものであればよい。本発明の分離剤を用いた光学異性体
の分離は、主として液体クロマトグラフィーによって行
われるもので、担体としては例えばシリカゲル、ガラ
ス、セルロース、カーボンまたは合成ポリマー（例え
ば、ポリビニルアルコール）等を挙げることができる。
分子の一部が修飾されたアビジン（以下リガンドと呼
ぶ）が結合されている担体からなる固定相は、固定相を
形成するために通常行われている方法に従って形成する
ことができる。例えば、アビジンを担体に結合するに
は、例えばアミノプロピルシリカゲルを担体とし、Ｎ，
Ｎ−ジサクシニミジルカーボネートを架橋剤としてアビ
ジンを結合する方法、シリカゲルを担体とし、３−グリ
シドキシプロピルトリメトキシシランを架橋剤としてア
ビジンを結合する方法、セルロースを担体とし、ブロム
シアンで活性化してからこれにアビジンを結合する方
法、陽イオン交換合成ポリマーにアビジンを結合する方
法等が挙げられる。
部が修飾されたアビジンと結合し、固定相を形成し得る
ものであればよい。本発明の分離剤を用いた光学異性体
の分離は、主として液体クロマトグラフィーによって行
われるもので、担体としては例えばシリカゲル、ガラ
ス、セルロース、カーボンまたは合成ポリマー（例え
ば、ポリビニルアルコール）等を挙げることができる。
分子の一部が修飾されたアビジン（以下リガンドと呼
ぶ）が結合されている担体からなる固定相は、固定相を
形成するために通常行われている方法に従って形成する
ことができる。例えば、アビジンを担体に結合するに
は、例えばアミノプロピルシリカゲルを担体とし、Ｎ，
Ｎ−ジサクシニミジルカーボネートを架橋剤としてアビ
ジンを結合する方法、シリカゲルを担体とし、３−グリ
シドキシプロピルトリメトキシシランを架橋剤としてア
ビジンを結合する方法、セルロースを担体とし、ブロム
シアンで活性化してからこれにアビジンを結合する方
法、陽イオン交換合成ポリマーにアビジンを結合する方
法等が挙げられる。
【０００９】また、分子の一部を修飾したアビジンが担
体に結合した固定相を得る方法には、あらかじめ分子の
一部を修飾しておいたアビジンを共有結合やイオン結合
などによって担体に結合する方法と、アビジンを結合さ
せておいた固定相に先に述べた方法による修飾を施して
目的とする固定相を得る方法がある。例えばアミノプロ
ピルシリカゲルやアミノ基が結合した合成ポリマーを担
体とし、グルタルアルデヒドやＮ，Ｎ−ジサクシニミジ
ルカーボネートを架橋剤としてリガンドを結合したり、
あるいはシリカゲルやガラス若しくはカーボンを担体と
して３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを架
橋剤としてリガンドを結合したり、あるいはセルロース
を担体とし、ブロムシアンで活性化してからこれらにリ
ガンドを結合したり、陰イオン交換合成ポリマーにリガ
ンドを結合したりする方法により製造できる。
体に結合した固定相を得る方法には、あらかじめ分子の
一部を修飾しておいたアビジンを共有結合やイオン結合
などによって担体に結合する方法と、アビジンを結合さ
せておいた固定相に先に述べた方法による修飾を施して
目的とする固定相を得る方法がある。例えばアミノプロ
ピルシリカゲルやアミノ基が結合した合成ポリマーを担
体とし、グルタルアルデヒドやＮ，Ｎ−ジサクシニミジ
ルカーボネートを架橋剤としてリガンドを結合したり、
あるいはシリカゲルやガラス若しくはカーボンを担体と
して３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを架
橋剤としてリガンドを結合したり、あるいはセルロース
を担体とし、ブロムシアンで活性化してからこれらにリ
ガンドを結合したり、陰イオン交換合成ポリマーにリガ
ンドを結合したりする方法により製造できる。
【００１０】一般に蛋白質分子を修飾する方法には、化
学的方法、酵素的方法、物理的方法等が挙げられる。即
ち、蛋白質分子中のアミノ基、イミダゾール基又はカル
ボキシル基にアルデヒド類、酸無水物又はアルコール類
を反応させると、それぞれ、シッフ塩基、Ｎ−置換イミ
ダゾール基又はエステルが生成して化学的修飾がなされ
る。又、酵素の持つ多彩な作用を用いれば、官能基の修
飾、分子の酸化や還元、分子の一部を除去するなどの反
応が緩和な条件で行い得る。例えば、アビジンの一部を
グルタル化したアビジンは次のようにして得ることがで
きる。アビジンおよびグルタルアルデヒドをpH6.８のり
ん酸塩緩衝液に入れ、３０℃で１５時間攪拌後、生成し
たグルタル化アビジン（非還元型）、あるいはさらに水
素化ほう素ナトリウムを用いてpH6.８のりん酸塩緩衝液
中で、４℃で１２時間攪拌し還元後、生成したグルタル
化アビジン（還元型）を得ることができる。グルタル化
アビジンの精製方法は、特に限定されず、一般に用いら
れる方法によることができる。例えば、セファデックス
Ｇ２５カラムクロマトグラフィーを使用して、上記反応
液より未反応のグルタルアルデヒドおよび水素化ホウ素
ナトリウムを除去することができる。また、アビジンの
一部をジオール化したアビジンを得るには、例えば、ア
ビジンおよび２，３−エポキシプロパノールをpH8.０の
りん酸塩緩衝液中に加え、室温で２４時間攪拌後、精製
すればよい。
学的方法、酵素的方法、物理的方法等が挙げられる。即
ち、蛋白質分子中のアミノ基、イミダゾール基又はカル
ボキシル基にアルデヒド類、酸無水物又はアルコール類
を反応させると、それぞれ、シッフ塩基、Ｎ−置換イミ
ダゾール基又はエステルが生成して化学的修飾がなされ
る。又、酵素の持つ多彩な作用を用いれば、官能基の修
飾、分子の酸化や還元、分子の一部を除去するなどの反
応が緩和な条件で行い得る。例えば、アビジンの一部を
グルタル化したアビジンは次のようにして得ることがで
きる。アビジンおよびグルタルアルデヒドをpH6.８のり
ん酸塩緩衝液に入れ、３０℃で１５時間攪拌後、生成し
たグルタル化アビジン（非還元型）、あるいはさらに水
素化ほう素ナトリウムを用いてpH6.８のりん酸塩緩衝液
中で、４℃で１２時間攪拌し還元後、生成したグルタル
化アビジン（還元型）を得ることができる。グルタル化
アビジンの精製方法は、特に限定されず、一般に用いら
れる方法によることができる。例えば、セファデックス
Ｇ２５カラムクロマトグラフィーを使用して、上記反応
液より未反応のグルタルアルデヒドおよび水素化ホウ素
ナトリウムを除去することができる。また、アビジンの
一部をジオール化したアビジンを得るには、例えば、ア
ビジンおよび２，３−エポキシプロパノールをpH8.０の
りん酸塩緩衝液中に加え、室温で２４時間攪拌後、精製
すればよい。
【００１１】また、アビジンの一部をアシル化したアビ
ジンを得るには、例えば、アビジンおよび対応する酸無
水物をpH8.５のほう酸塩緩衝液にいれ、２５℃で３０〜
６０分攪拌後、精製すればよい。グルタル化したアビジ
ンをアミノプロピルシリカゲルに結合するには、具体的
には次のようにすればよい。グルタル化したアビジンを
pH6.８の炭酸水素ナトリウム緩衝液に溶解する。別にア
ミノプロピルシリカゲルおよびＮ，Ｎ−ジサクシニミジ
ルカーボネートをpH6.８の炭酸水素ナトリウム緩衝液に
溶解懸濁させ、一晩攪拌後、分取水洗して活性化アミノ
プロピルシリカゲル懸濁液を得る。先に用意したグルタ
ル化アビジンの溶液を活性化アミノプロピルシリカゲル
懸濁液に加え、攪拌後水洗してシリカゲルにグルタル化
アビジンが架橋剤を介して結合した光学異性体分離剤を
得ることができる。
ジンを得るには、例えば、アビジンおよび対応する酸無
水物をpH8.５のほう酸塩緩衝液にいれ、２５℃で３０〜
６０分攪拌後、精製すればよい。グルタル化したアビジ
ンをアミノプロピルシリカゲルに結合するには、具体的
には次のようにすればよい。グルタル化したアビジンを
pH6.８の炭酸水素ナトリウム緩衝液に溶解する。別にア
ミノプロピルシリカゲルおよびＮ，Ｎ−ジサクシニミジ
ルカーボネートをpH6.８の炭酸水素ナトリウム緩衝液に
溶解懸濁させ、一晩攪拌後、分取水洗して活性化アミノ
プロピルシリカゲル懸濁液を得る。先に用意したグルタ
ル化アビジンの溶液を活性化アミノプロピルシリカゲル
懸濁液に加え、攪拌後水洗してシリカゲルにグルタル化
アビジンが架橋剤を介して結合した光学異性体分離剤を
得ることができる。
【００１２】また、アビジンを結合させておいた固定相
上のアビジンに化学修飾を行うには次のようにすればよ
い。例えば、親水性合成ポリマーにペンタエチルヘキサ
ミン等のポリアミンを導入した担体とＮ，Ｎ−ジサクシ
ニミジルカーボネートをpH6.８炭酸水素ナトリウム緩衝
液に溶解、懸濁させ一晩攪拌し、分取水洗して活性化合
成ポリマーの懸濁液を得る。別に、アビジンをpH6.８炭
酸水素ナトリウム緩衝液に溶解した溶液を用意し、前記
懸濁液に加えることにより、アビジンが結合したポリマ
ー充填剤を得る。この充填剤およびグルタルアルデヒド
をpH6.８のりん酸緩衝液に入れ、３０℃で１５時間攪拌
後、生成したグルタル化アビジン（非還元型）、あるい
はさらに水素化ほう素ナトリウムを用いてpH6.８のりん
酸塩緩衝液中で、４℃で１２時間攪拌し、還元後、生成
したグルタル化アビジン（還元型）がアミド結合および
架橋剤を介して合成ポリマーに結合した光学異性体分離
剤を得ることができる。
上のアビジンに化学修飾を行うには次のようにすればよ
い。例えば、親水性合成ポリマーにペンタエチルヘキサ
ミン等のポリアミンを導入した担体とＮ，Ｎ−ジサクシ
ニミジルカーボネートをpH6.８炭酸水素ナトリウム緩衝
液に溶解、懸濁させ一晩攪拌し、分取水洗して活性化合
成ポリマーの懸濁液を得る。別に、アビジンをpH6.８炭
酸水素ナトリウム緩衝液に溶解した溶液を用意し、前記
懸濁液に加えることにより、アビジンが結合したポリマ
ー充填剤を得る。この充填剤およびグルタルアルデヒド
をpH6.８のりん酸緩衝液に入れ、３０℃で１５時間攪拌
後、生成したグルタル化アビジン（非還元型）、あるい
はさらに水素化ほう素ナトリウムを用いてpH6.８のりん
酸塩緩衝液中で、４℃で１２時間攪拌し、還元後、生成
したグルタル化アビジン（還元型）がアミド結合および
架橋剤を介して合成ポリマーに結合した光学異性体分離
剤を得ることができる。
【００１３】このようにアビジンを化学修飾することに
より、光学異性体分離カラムとしてのカラムライフ（サ
ンプル注入回数）を大幅に伸ばすことができる。担体１
００重量部に対する修飾アビジンの結合割合は、８〜１
１重量部、好ましくは９〜１０重量部、一般に約１０重
量部が適当である。本発明の分離剤は前記したごとく、
担体に固定化されたアビジンの分子構造の一部を修飾し
た固定相、若しくは分子構造の一部を修飾したアビジン
を担体に結合した固定相からなることを特徴とする。従
って本発明の分離剤には当該固定相が必須の構成成分と
して含まれるが、同時に分離剤中の他の成分、例えばシ
リカゲル、ガラス、セルロース、カーボンやポリマー
等、修飾アビジンが結合していない担体が任意に選択さ
れて加えられることは自由であり、分離の向上のために
適宜行うことができる。
より、光学異性体分離カラムとしてのカラムライフ（サ
ンプル注入回数）を大幅に伸ばすことができる。担体１
００重量部に対する修飾アビジンの結合割合は、８〜１
１重量部、好ましくは９〜１０重量部、一般に約１０重
量部が適当である。本発明の分離剤は前記したごとく、
担体に固定化されたアビジンの分子構造の一部を修飾し
た固定相、若しくは分子構造の一部を修飾したアビジン
を担体に結合した固定相からなることを特徴とする。従
って本発明の分離剤には当該固定相が必須の構成成分と
して含まれるが、同時に分離剤中の他の成分、例えばシ
リカゲル、ガラス、セルロース、カーボンやポリマー
等、修飾アビジンが結合していない担体が任意に選択さ
れて加えられることは自由であり、分離の向上のために
適宜行うことができる。
【００１４】本発明の分離剤を用いて分離することがで
きる光学異性体とは、分子内に不斉炭素原子を有するキ
ラル化合物を言い、多くの医薬品にその例を見ることが
できる。例えばイブプロフェン、ケトプロフェン、フル
ルビプロフェン、フェノプロフェン、ピンドロール、オ
クスプレノール等を挙げることができる。これらの化合
物においては互いに鏡像関係にある複数の光学異性体が
存在し、一体となってラセミ体を形成している。本発明
の分離剤はこれらラセミ体を対象として、これらを構成
する光学異性体を分離するのに特に有効である。本発明
の分離剤は主として液体クロマトグラフィーにおいて使
用される。従ってその使用方法は液体クロマトグラフィ
ーにおける通常の操作によって行えばよく、例えば本発
明の分離剤をカラムに充填し、光学異性体に係るセラミ
体をチャージし、次にりん酸緩衝液、エタノール水溶
液、イソプロパノール等の移動相を流通せしめ、保持時
間の差によって、所望の光学異性体を分離すればよい。
きる光学異性体とは、分子内に不斉炭素原子を有するキ
ラル化合物を言い、多くの医薬品にその例を見ることが
できる。例えばイブプロフェン、ケトプロフェン、フル
ルビプロフェン、フェノプロフェン、ピンドロール、オ
クスプレノール等を挙げることができる。これらの化合
物においては互いに鏡像関係にある複数の光学異性体が
存在し、一体となってラセミ体を形成している。本発明
の分離剤はこれらラセミ体を対象として、これらを構成
する光学異性体を分離するのに特に有効である。本発明
の分離剤は主として液体クロマトグラフィーにおいて使
用される。従ってその使用方法は液体クロマトグラフィ
ーにおける通常の操作によって行えばよく、例えば本発
明の分離剤をカラムに充填し、光学異性体に係るセラミ
体をチャージし、次にりん酸緩衝液、エタノール水溶
液、イソプロパノール等の移動相を流通せしめ、保持時
間の差によって、所望の光学異性体を分離すればよい。
【００１５】
【実施例】以下に記載する実施例によって本発明を更に
具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定さ
れるものではない。 比較例１（アビジン結合シリカゲル担体） アミノプロピルシリカゲル（信和化工（株）製：ＵＬＴ
ＲＯＮ ＮＨ2 、アミノプロピル基含量：８重量％）３
ｇおよびＮ，Ｎ−ジサクシニミジルカーボネート２ｇを
0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH6.８）１００mlに
入れ、一夜攪拌し、ガラスフィルター上にとり、水洗し
て活性化アミノプロピルシリカゲルの懸濁液を調製し
た。別にアビジン２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝
液（pH6.８）３０mlに溶解した溶液を用意し、それを前
記懸濁液に加え、３０℃で１５時間攪拌後、ガラスフィ
ルター上にとり、水洗し、本発明の分離剤を得た。得ら
れた分離剤をスチールカラムに充填し、光学異性体分離
用カラムとした。
具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定さ
れるものではない。 比較例１（アビジン結合シリカゲル担体） アミノプロピルシリカゲル（信和化工（株）製：ＵＬＴ
ＲＯＮ ＮＨ2 、アミノプロピル基含量：８重量％）３
ｇおよびＮ，Ｎ−ジサクシニミジルカーボネート２ｇを
0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH6.８）１００mlに
入れ、一夜攪拌し、ガラスフィルター上にとり、水洗し
て活性化アミノプロピルシリカゲルの懸濁液を調製し
た。別にアビジン２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝
液（pH6.８）３０mlに溶解した溶液を用意し、それを前
記懸濁液に加え、３０℃で１５時間攪拌後、ガラスフィ
ルター上にとり、水洗し、本発明の分離剤を得た。得ら
れた分離剤をスチールカラムに充填し、光学異性体分離
用カラムとした。
【００１６】実施例１（グルタル化アビジン結合ポリマ
ー担体） グルタルアルデヒド0.１ｇおよびアビジン２ｇを0.６Ｍ
りん酸塩緩衝液（pH6.８）に入れ、３０℃で１５時間攪
拌し、グルタル化アビジンを合成した。セファデックス
Ｇ２５カラムクロマトグラフィーにより未反応のグルタ
ルアルデヒドを除きグルタル化アビジン（非還元型）を
単離した。グルタル化アビジン（非還元型）の一部を、
水素化ほう素ナトリウムを用いてpH6.８のりん酸緩衝液
中で、４℃で１２時間攪拌し還元し、グルタル化アビジ
ン（還元型）を得た。次に親水性ポリマー（ポリビニル
アルコール共重合体）ゲルにポリアミン（ペンタエチル
ヘキサミン）を導入したカラム充填剤〔アサヒパックＮ
Ｈ２Ｐ−５０（旭化成製）〕２ｇおよびＮ，Ｎ−ジサク
シニミジルカーボネート２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウ
ム緩衝液（pH6.８）１００mlに入れ一夜攪拌し、ガラス
フィルター上にとり、水洗して活性化合成ポリマーゲル
の懸濁液を調製した。別に非還元型あるいは還元型グル
タル化アビジン２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液
（pH6.８）３０mlに溶解した溶液を用意し、それを前記
懸濁液に加え、３０℃で１５時間攪拌後、ガラスフィル
ター上にとり、水洗し、本発明の分離剤を得た。得られ
た分離剤をスチールカラムに充填し、光学異性体分離用
カラムとした。
ー担体） グルタルアルデヒド0.１ｇおよびアビジン２ｇを0.６Ｍ
りん酸塩緩衝液（pH6.８）に入れ、３０℃で１５時間攪
拌し、グルタル化アビジンを合成した。セファデックス
Ｇ２５カラムクロマトグラフィーにより未反応のグルタ
ルアルデヒドを除きグルタル化アビジン（非還元型）を
単離した。グルタル化アビジン（非還元型）の一部を、
水素化ほう素ナトリウムを用いてpH6.８のりん酸緩衝液
中で、４℃で１２時間攪拌し還元し、グルタル化アビジ
ン（還元型）を得た。次に親水性ポリマー（ポリビニル
アルコール共重合体）ゲルにポリアミン（ペンタエチル
ヘキサミン）を導入したカラム充填剤〔アサヒパックＮ
Ｈ２Ｐ−５０（旭化成製）〕２ｇおよびＮ，Ｎ−ジサク
シニミジルカーボネート２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウ
ム緩衝液（pH6.８）１００mlに入れ一夜攪拌し、ガラス
フィルター上にとり、水洗して活性化合成ポリマーゲル
の懸濁液を調製した。別に非還元型あるいは還元型グル
タル化アビジン２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液
（pH6.８）３０mlに溶解した溶液を用意し、それを前記
懸濁液に加え、３０℃で１５時間攪拌後、ガラスフィル
ター上にとり、水洗し、本発明の分離剤を得た。得られ
た分離剤をスチールカラムに充填し、光学異性体分離用
カラムとした。
【００１７】実施例２（グルタル化アビジン結合ガラス
担体） アミノプロピル化ガラス（信和化工（株）製 アミノプ
ロピル基含量：６重量％）３ｇおよびＮ，Ｎ−ジサクシ
ニミジルカーボネート２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム
緩衝液（pH6.８）１００mlに入れ、一夜攪拌し、ガラス
フィルター上にとり、水洗して活性化アミノプロピル化
ガラスの懸濁液を調製した。別にアビジン２ｇを0.１Ｍ
炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH6.８）３０mlに溶解した
溶液を用意し、それを前記懸濁液に加え、アビジン結合
ガラス充填剤を得た。この充填剤２ｇおよびグルタルア
ルデヒド0.１ｇを0.０６Ｍりん酸塩緩衝液（pH6.８）３
０mlに入れ、３０℃で１５時間攪拌し本発明の分離剤
（非還元型）を得た。さらに0.２ｇの水素化ほう素ナト
リウムを加え４℃で１２時間攪拌、還元し本発明の分離
剤（還元型）を得た。得られた分離剤をスチールカラム
に充填し、光学異性体分離用カラムとした。
担体） アミノプロピル化ガラス（信和化工（株）製 アミノプ
ロピル基含量：６重量％）３ｇおよびＮ，Ｎ−ジサクシ
ニミジルカーボネート２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム
緩衝液（pH6.８）１００mlに入れ、一夜攪拌し、ガラス
フィルター上にとり、水洗して活性化アミノプロピル化
ガラスの懸濁液を調製した。別にアビジン２ｇを0.１Ｍ
炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH6.８）３０mlに溶解した
溶液を用意し、それを前記懸濁液に加え、アビジン結合
ガラス充填剤を得た。この充填剤２ｇおよびグルタルア
ルデヒド0.１ｇを0.０６Ｍりん酸塩緩衝液（pH6.８）３
０mlに入れ、３０℃で１５時間攪拌し本発明の分離剤
（非還元型）を得た。さらに0.２ｇの水素化ほう素ナト
リウムを加え４℃で１２時間攪拌、還元し本発明の分離
剤（還元型）を得た。得られた分離剤をスチールカラム
に充填し、光学異性体分離用カラムとした。
【００１８】実施例３（グルタル化アビジン結合シリカ
ゲル担体） 比較例１と同様にアミノプロピルシリカゲルを用いてア
ビジン結合シリカゲル充填剤を得た。この充填剤２ｇお
よびグルタルアルデヒド0.１ｇを0.０６Ｍりん酸塩緩衝
液（pH6.８）３０mlに入れ、３０℃で１５時間攪拌し、
本発明の分離剤（非還元型）を得た。さらに０．２ｇの
水素化ほう素ナトリウムを加え、４℃で１２時間攪拌し
て還元し、本発明の分離剤（還元型）を得た。得られた
分離剤をスチールカラムに充填し、光学異性体分離用カ
ラムとした。 実施例４（グルタル化アビジン結合シリカゲル担体） アミノプロピルシリカゲル３ｇおよびグルタルアルデヒ
ド0.１ｇを0.０６Ｍりん酸塩緩衝液（pH6.８）１００ml
に入れ、３０℃で１５時間攪拌後、ガラスフィルター上
にとり水洗した。このグルタル化シリカゲルにアビジン
２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム（pH6.８）３０mlに溶
解し反応させるとともに、アビジンのグルタル化も行わ
せしめ、本発明の分離剤を得た。得られた分離剤をスチ
ールカラムに充填し、光学異性体分離用カラムとした。 実施例５（ジオール化アビジン結合シリカゲル担体） 比較例１と同様にアミノプロピルシリカゲルを用いてア
ビジン結合シリカゲル充填剤を得た。この充填剤を五酸
化りんデシケーター中にて乾燥した後、0.０６Ｍりん酸
塩緩衝液（pH8.０）に懸濁し、２，３−エポキシプロパ
ノール0.５mlを加えて室温にて２４時間攪拌してジオー
ル化し、本発明の分離剤を得た。得られた分離剤をスチ
ールカラムに充填し、光学異性体分離用カラムとした。 実施例６（ジオール化アビジン結合シリカゲル担体） アビジン２ｇを0.０６Ｍりん酸塩緩衝液に懸濁し、２，
３−エポキシプロパノール0.５mlを加えて室温にて２４
時間攪拌してジオール化アビジンを得た。次に、アミノ
プロピルシリカゲル３ｇおよびＮ，Ｎ−ジサクシニミジ
ルカーボネート２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液
（pH6.８）１００mlに入れ、一夜攪拌し、ガラスフィル
ター上にとり、水洗して活性化アミノプロピルシリカゲ
ルの懸濁液を調製した。別にジオール化アビジン２ｇを
0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH6.８）３０mlに溶
解した溶液を用意し、それを前記懸濁液に加え、３０℃
で１５時間攪拌後、ガラスフィルター上にとり、水洗
し、本発明の分離剤を得た。得られた分離剤をスチール
カラムに充填し、光学異性体分離用カラムとした。
ゲル担体） 比較例１と同様にアミノプロピルシリカゲルを用いてア
ビジン結合シリカゲル充填剤を得た。この充填剤２ｇお
よびグルタルアルデヒド0.１ｇを0.０６Ｍりん酸塩緩衝
液（pH6.８）３０mlに入れ、３０℃で１５時間攪拌し、
本発明の分離剤（非還元型）を得た。さらに０．２ｇの
水素化ほう素ナトリウムを加え、４℃で１２時間攪拌し
て還元し、本発明の分離剤（還元型）を得た。得られた
分離剤をスチールカラムに充填し、光学異性体分離用カ
ラムとした。 実施例４（グルタル化アビジン結合シリカゲル担体） アミノプロピルシリカゲル３ｇおよびグルタルアルデヒ
ド0.１ｇを0.０６Ｍりん酸塩緩衝液（pH6.８）１００ml
に入れ、３０℃で１５時間攪拌後、ガラスフィルター上
にとり水洗した。このグルタル化シリカゲルにアビジン
２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム（pH6.８）３０mlに溶
解し反応させるとともに、アビジンのグルタル化も行わ
せしめ、本発明の分離剤を得た。得られた分離剤をスチ
ールカラムに充填し、光学異性体分離用カラムとした。 実施例５（ジオール化アビジン結合シリカゲル担体） 比較例１と同様にアミノプロピルシリカゲルを用いてア
ビジン結合シリカゲル充填剤を得た。この充填剤を五酸
化りんデシケーター中にて乾燥した後、0.０６Ｍりん酸
塩緩衝液（pH8.０）に懸濁し、２，３−エポキシプロパ
ノール0.５mlを加えて室温にて２４時間攪拌してジオー
ル化し、本発明の分離剤を得た。得られた分離剤をスチ
ールカラムに充填し、光学異性体分離用カラムとした。 実施例６（ジオール化アビジン結合シリカゲル担体） アビジン２ｇを0.０６Ｍりん酸塩緩衝液に懸濁し、２，
３−エポキシプロパノール0.５mlを加えて室温にて２４
時間攪拌してジオール化アビジンを得た。次に、アミノ
プロピルシリカゲル３ｇおよびＮ，Ｎ−ジサクシニミジ
ルカーボネート２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液
（pH6.８）１００mlに入れ、一夜攪拌し、ガラスフィル
ター上にとり、水洗して活性化アミノプロピルシリカゲ
ルの懸濁液を調製した。別にジオール化アビジン２ｇを
0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH6.８）３０mlに溶
解した溶液を用意し、それを前記懸濁液に加え、３０℃
で１５時間攪拌後、ガラスフィルター上にとり、水洗
し、本発明の分離剤を得た。得られた分離剤をスチール
カラムに充填し、光学異性体分離用カラムとした。
【００１９】実施例７（アセチル化アビジン結合シリカ
ゲル担体） 比較例１と同様にアミノプロピルシリカゲルを用いてア
ビジン結合シリカゲル充填剤を得た。この充填剤1.８ｇ
および１mlのジオキサンに0.２２５mlの無水酢酸を溶解
した溶液を0.１Ｍほう酸塩緩衝液（pH8.５）５０mlに入
れ、２５℃で３０分攪拌してアセチル化した後、ガラス
フィルター上にとり、水洗して本発明の分離剤を得た。
得られた分離剤をスチールカラムに充填し、光学異性体
分離用カラムとした。 実施例８（アセチル化アビジン結合シリカゲル担体） アビジン２ｇを、１mlのジオキサンに0.２２５mlの無水
酢酸を溶解した溶液とともに0.１Ｍのほう酸塩緩衝液
（pH8.５）に入れ、アセチル化アビジンを得た。次に、
アミノプロピルシリカゲル３ｇおよびＮ，Ｎ−ジサクシ
ニミジルカーボネート２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム
緩衝液（pH6.８）１００mlに入れ、一夜攪拌し、ガラス
フィルター上にとり、水洗して活性化アミノプロピルシ
リカゲルの懸濁液を調製した。別にアセチル化アビジン
２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH6.８）３０
mlに溶解した溶液を用意し、それを前記懸濁液に加え、
本発明の分離剤を得た。得られた分離剤をスチールカラ
ムに充填し、光学異性体分離用カラムとした。
ゲル担体） 比較例１と同様にアミノプロピルシリカゲルを用いてア
ビジン結合シリカゲル充填剤を得た。この充填剤1.８ｇ
および１mlのジオキサンに0.２２５mlの無水酢酸を溶解
した溶液を0.１Ｍほう酸塩緩衝液（pH8.５）５０mlに入
れ、２５℃で３０分攪拌してアセチル化した後、ガラス
フィルター上にとり、水洗して本発明の分離剤を得た。
得られた分離剤をスチールカラムに充填し、光学異性体
分離用カラムとした。 実施例８（アセチル化アビジン結合シリカゲル担体） アビジン２ｇを、１mlのジオキサンに0.２２５mlの無水
酢酸を溶解した溶液とともに0.１Ｍのほう酸塩緩衝液
（pH8.５）に入れ、アセチル化アビジンを得た。次に、
アミノプロピルシリカゲル３ｇおよびＮ，Ｎ−ジサクシ
ニミジルカーボネート２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム
緩衝液（pH6.８）１００mlに入れ、一夜攪拌し、ガラス
フィルター上にとり、水洗して活性化アミノプロピルシ
リカゲルの懸濁液を調製した。別にアセチル化アビジン
２ｇを0.１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH6.８）３０
mlに溶解した溶液を用意し、それを前記懸濁液に加え、
本発明の分離剤を得た。得られた分離剤をスチールカラ
ムに充填し、光学異性体分離用カラムとした。
【００２０】以下の実験例によって本発明の効果を示
す。 実験例１ 実施例２で調製した（非還元型）光学異性体分離用カラ
ム（グルタル化アビジン結合ガラス担体）を用いてフェ
ノプロフェンのエナンチオマーにおける分離を試みた。
なお、移動相は２０ｍＭりん酸塩緩衝液（KH2PO4 /K2HP
O4)(pH6.5 ）／アセトニトリル＝１００／３（Ｖ／Ｖ）
を使用し、流速を1.0 ml／min とした。結果を図１に示
す。図１より本発明分離剤によって各光学異性体が分離
されたことが判明した。
す。 実験例１ 実施例２で調製した（非還元型）光学異性体分離用カラ
ム（グルタル化アビジン結合ガラス担体）を用いてフェ
ノプロフェンのエナンチオマーにおける分離を試みた。
なお、移動相は２０ｍＭりん酸塩緩衝液（KH2PO4 /K2HP
O4)(pH6.5 ）／アセトニトリル＝１００／３（Ｖ／Ｖ）
を使用し、流速を1.0 ml／min とした。結果を図１に示
す。図１より本発明分離剤によって各光学異性体が分離
されたことが判明した。
【００２１】実験例２ 実施例２で調製した（非還元型）光学異性体分離用カラ
ムを用いて実験例１と同様にしてケトプロフェンのラセ
ミ体における分離を試みた。なお、移動相は２０ｍＭり
ん酸塩緩衝液（KH2PO4 /K2HPO4)(pH6.5 ）／エタノール
＝１００／６（Ｖ／Ｖ）を使用し、流速を1.0 ml／min
とした。結果を図２に示す。図２より本発明分離剤によ
って各光学異性体が分離されたことが判明した。 実験例３ 比較例１及び実施例４で調製した光学異性体分離用カラ
ムを用いて実験例２と同様にしてケトプロフェンのラセ
ミ体における分離を繰り返し試みた。比較例１で調製し
たアビジン結合シリカゲル担体カラムで分析した場合、
４０回の注入でカラムの劣化が始まり、分離が充分に行
われなくなったのに対して、実施例４で調製したグルタ
ル化アビジン結合シリカゲル担体カラムで分析した場合
には、３００回の注入でもカラムの劣化が起こらなかっ
た。
ムを用いて実験例１と同様にしてケトプロフェンのラセ
ミ体における分離を試みた。なお、移動相は２０ｍＭり
ん酸塩緩衝液（KH2PO4 /K2HPO4)(pH6.5 ）／エタノール
＝１００／６（Ｖ／Ｖ）を使用し、流速を1.0 ml／min
とした。結果を図２に示す。図２より本発明分離剤によ
って各光学異性体が分離されたことが判明した。 実験例３ 比較例１及び実施例４で調製した光学異性体分離用カラ
ムを用いて実験例２と同様にしてケトプロフェンのラセ
ミ体における分離を繰り返し試みた。比較例１で調製し
たアビジン結合シリカゲル担体カラムで分析した場合、
４０回の注入でカラムの劣化が始まり、分離が充分に行
われなくなったのに対して、実施例４で調製したグルタ
ル化アビジン結合シリカゲル担体カラムで分析した場合
には、３００回の注入でもカラムの劣化が起こらなかっ
た。
【００２２】
【発明の効果】本発明の光学異性体用分離剤は、光学異
性体を効率よく分離することができ、また安価であり、
かつ有機溶媒による変性に対して安定である。また、酸
性の光学異性体を効率よく分離することができる。
性体を効率よく分離することができ、また安価であり、
かつ有機溶媒による変性に対して安定である。また、酸
性の光学異性体を効率よく分離することができる。
【図１】実施例２で調製した（非還元型）光学異性体分
離用カラムを用いてフェノプロフェンのエナンチオマー
における分離を試みた結果を示す図面である。
離用カラムを用いてフェノプロフェンのエナンチオマー
における分離を試みた結果を示す図面である。
【図２】実施例２で調製した（非還元型）光学異性体分
離用カラムを用いてケトプロフェンのラセミ体における
分離を試みた結果を示す図面である。
離用カラムを用いてケトプロフェンのラセミ体における
分離を試みた結果を示す図面である。
Claims (3)
- 【請求項１】 分子構造の一部を修飾したアビジンが担
体に結合されている固定相からなることを特徴とする光
学異性体用分離剤。 - 【請求項２】 アビジン分子構造の一部の修飾が、グル
タル化若しくはその還元化、ジオール化、またはアシル
化である請求項１記載の光学異性体用分離剤。 - 【請求項３】 担体がシリカゲル、ガラス、セルロー
ス、カーボンまたは合成ポリマーである請求項１または
２記載の光学異性体用分離剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4045676A JPH05246898A (ja) | 1992-03-03 | 1992-03-03 | 光学異性体用分離剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4045676A JPH05246898A (ja) | 1992-03-03 | 1992-03-03 | 光学異性体用分離剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05246898A true JPH05246898A (ja) | 1993-09-24 |
Family
ID=12725997
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4045676A Pending JPH05246898A (ja) | 1992-03-03 | 1992-03-03 | 光学異性体用分離剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05246898A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2726278A1 (fr) * | 1994-11-01 | 1996-05-03 | Shinwa Kako Kk | Ovoglycoproteine et agents pour la separation chromatographique comprenant celle-ci |
| JP2007526234A (ja) * | 2003-08-21 | 2007-09-13 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | ラセミ化されたアミノ酸を含むポリペプチドの分離 |
-
1992
- 1992-03-03 JP JP4045676A patent/JPH05246898A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2726278A1 (fr) * | 1994-11-01 | 1996-05-03 | Shinwa Kako Kk | Ovoglycoproteine et agents pour la separation chromatographique comprenant celle-ci |
| JP2007526234A (ja) * | 2003-08-21 | 2007-09-13 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | ラセミ化されたアミノ酸を含むポリペプチドの分離 |
| JP2012102104A (ja) * | 2003-08-21 | 2012-05-31 | Novo Nordisk As | ラセミ化されたアミノ酸を含むポリペプチドの分離 |
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