JPH05249104A - 尿中の細胞保存方法 - Google Patents
尿中の細胞保存方法Info
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- JPH05249104A JPH05249104A JP4815692A JP4815692A JPH05249104A JP H05249104 A JPH05249104 A JP H05249104A JP 4815692 A JP4815692 A JP 4815692A JP 4815692 A JP4815692 A JP 4815692A JP H05249104 A JPH05249104 A JP H05249104A
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 尿中に生体から剥離或いは漏出した細胞の数
および性質が変化しないように採取した尿試料を保存し
て正確な検査結果を得ることを目的とする。 【構成】 採取した試料尿に各種酸を加えて該試料尿の
ｐＨを 4.5〜 6.5に調整し，抗菌性薬剤とフッ素化合物
を添加して保存する。酸としてクエン酸，抗菌性薬剤と
してＥＤＴＡ，フッ素化合物としてＮａＦ（フッ化ナト
リウム）が良く，特にＮａＦは尿１mlあたり１mg以上を
添加する。その場合に予め顆粒状の混合薬剤を投入した
試料採取管を用いて試料を採取すると便利である。
および性質が変化しないように採取した尿試料を保存し
て正確な検査結果を得ることを目的とする。 【構成】 採取した試料尿に各種酸を加えて該試料尿の
ｐＨを 4.5〜 6.5に調整し，抗菌性薬剤とフッ素化合物
を添加して保存する。酸としてクエン酸，抗菌性薬剤と
してＥＤＴＡ，フッ素化合物としてＮａＦ（フッ化ナト
リウム）が良く，特にＮａＦは尿１mlあたり１mg以上を
添加する。その場合に予め顆粒状の混合薬剤を投入した
試料採取管を用いて試料を採取すると便利である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は尿中に剥離或いは漏出
した細胞を計測，診断する際に採尿後の尿中細胞の量，
質の変化を防止して正確な計測値，診断を得るための試
料の保存方法に関するものである。
した細胞を計測，診断する際に採尿後の尿中細胞の量，
質の変化を防止して正確な計測値，診断を得るための試
料の保存方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】尿中の細胞は腎臓，尿路系の疾患を診断
する上で非常に重要な臨床検査対象である。この細胞検
査は尿中の細胞を計測し或いは顕微鏡で観察して悪性か
否かを判定するものである。ところが採取した試料尿を
そのまま室温で放置すると尿中の細胞は低栄養状態に至
り，栄養を補給するために自己消化（自己融解）を起こ
し，或いは尿に含まれる微生物によって破壊され，細胞
数の減少と変性が生ずることは良く知られている。
する上で非常に重要な臨床検査対象である。この細胞検
査は尿中の細胞を計測し或いは顕微鏡で観察して悪性か
否かを判定するものである。ところが採取した試料尿を
そのまま室温で放置すると尿中の細胞は低栄養状態に至
り，栄養を補給するために自己消化（自己融解）を起こ
し，或いは尿に含まれる微生物によって破壊され，細胞
数の減少と変性が生ずることは良く知られている。
【０００３】尿中の細胞が変性すると顕微鏡観察による
悪性か否かの診断，すなわち細胞診の際の判定が困難と
なる。この判定のしやすさの程度を下記のような基準で
５段階の判定度数として示すことが行われている。 １．変性が強く細胞診として判定できない ２．変性やや強く判定しにくい ３．変性はあるが判定可能 ４．変性少なく判定可能 ５．変性無く判定可能 本発明者らの実験によると尿試料を室温で長時間保存す
ると，顕微鏡の視野での細胞数が顕著に減少しており，
また細胞診の判定度数が３以下に低下する。そして判定
度数が３以下の場合は細胞の殆どが変性しており，細胞
中の食作用空砲がかなり広がっているのが認められた。
悪性か否かの診断，すなわち細胞診の際の判定が困難と
なる。この判定のしやすさの程度を下記のような基準で
５段階の判定度数として示すことが行われている。 １．変性が強く細胞診として判定できない ２．変性やや強く判定しにくい ３．変性はあるが判定可能 ４．変性少なく判定可能 ５．変性無く判定可能 本発明者らの実験によると尿試料を室温で長時間保存す
ると，顕微鏡の視野での細胞数が顕著に減少しており，
また細胞診の判定度数が３以下に低下する。そして判定
度数が３以下の場合は細胞の殆どが変性しており，細胞
中の食作用空砲がかなり広がっているのが認められた。
【０００４】また尿試料を採取する場合に適時に採取し
て各尿試料を用いる逐次尿法と一日の尿を蓄積して用い
る蓄尿法があるが，従来から前記の細胞数の減少および
変性を阻止する方法として以下の方法が提案されてい
た。
て各尿試料を用いる逐次尿法と一日の尿を蓄積して用い
る蓄尿法があるが，従来から前記の細胞数の減少および
変性を阻止する方法として以下の方法が提案されてい
た。
【０００５】逐次尿においては， (1)採尿直後に遠心分離し，残渣に固定液としてホルム
アルデヒドまたはグルタードアルデヒド等を加える。 (2)保存剤としてクエン酸ーＥＤＴＡを加える（特願平
２ー９０６３８号の方法）。 (3)採尿直後に低温室に入れて低温に保持する。
アルデヒドまたはグルタードアルデヒド等を加える。 (2)保存剤としてクエン酸ーＥＤＴＡを加える（特願平
２ー９０６３８号の方法）。 (3)採尿直後に低温室に入れて低温に保持する。
【０００６】蓄尿においては，下記(1)〜(4)のように防
腐剤を加えたり或いは(5)のように低温に保持したす
る。すなわち (1)トルエンまたはキシロールを２〜３ml／l を加え，
時々震盪混和する (2)中性ホルマリンを５〜10ml／l 加える (3)クロルヘキシジンの５％溶液を５ml／l 加える (4)市販のほう酸またはパラホルムアルデヒド錠剤を加
える (5)低温室に入れて低温に保持する
腐剤を加えたり或いは(5)のように低温に保持したす
る。すなわち (1)トルエンまたはキシロールを２〜３ml／l を加え，
時々震盪混和する (2)中性ホルマリンを５〜10ml／l 加える (3)クロルヘキシジンの５％溶液を５ml／l 加える (4)市販のほう酸またはパラホルムアルデヒド錠剤を加
える (5)低温室に入れて低温に保持する
【０００７】しかし逐次尿，蓄尿に対する，いずれの方
法も採尿直後の作業が厄介じてあり，また低温に保持す
る方法は輸送，保存が厄介であるとの理由で実際には用
いられていない。
法も採尿直後の作業が厄介じてあり，また低温に保持す
る方法は輸送，保存が厄介であるとの理由で実際には用
いられていない。
【０００８】逐次尿に対する(1)の方法，蓄尿に対する
(1)〜(4)の方法では人体に対し非常に危険性の高い強毒
性物質を用いねばならない。また逐次尿の(1)の方法で
は細胞数の計測には耐えるが，診断する時に判定しにく
いという欠点がある。また逐次尿の(2)の方法ではグラ
ム陽性細菌，真核微生物に対する効力が弱い欠点があ
る。蓄尿の場合の(1)〜(4)の方法では防腐作用として尿
中の細菌の繁殖を抑制するだけであって細胞の自己消化
を抑制することはできない。
(1)〜(4)の方法では人体に対し非常に危険性の高い強毒
性物質を用いねばならない。また逐次尿の(1)の方法で
は細胞数の計測には耐えるが，診断する時に判定しにく
いという欠点がある。また逐次尿の(2)の方法ではグラ
ム陽性細菌，真核微生物に対する効力が弱い欠点があ
る。蓄尿の場合の(1)〜(4)の方法では防腐作用として尿
中の細菌の繁殖を抑制するだけであって細胞の自己消化
を抑制することはできない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】尿中の生体細胞が破
壊，変性する原因は次ぎの２つである。即ち１つには尿
に常在または病的に存在する細菌が繁殖して細胞に直接
付着またはその毒素により生体細胞を破壊すること，２
つには生体から剥離または漏出した細胞は代謝作用を継
続して行っており，低栄養時に細胞内の食作用空泡で自
己を消化して代謝に必要な栄養補給を行い，やがて自己
融解することである。現状では，この両方の作用を阻止
し，且つ厄介な手間を掛けず，安全である保存方法がな
いという課題があった。
壊，変性する原因は次ぎの２つである。即ち１つには尿
に常在または病的に存在する細菌が繁殖して細胞に直接
付着またはその毒素により生体細胞を破壊すること，２
つには生体から剥離または漏出した細胞は代謝作用を継
続して行っており，低栄養時に細胞内の食作用空泡で自
己を消化して代謝に必要な栄養補給を行い，やがて自己
融解することである。現状では，この両方の作用を阻止
し，且つ厄介な手間を掛けず，安全である保存方法がな
いという課題があった。
【００１０】
【課題を解決するための手段】このような実情に鑑み本
発明者らは従来の尿中の細胞保存方法の欠点を解消すべ
く鋭意研究の結果，本発明者らの発明した特願平２ー９
０６３８号に示された，尿試料に緩衝剤，例えばクエン
酸を添加して尿を低ｐＨに保持し，さらに抗菌性薬剤，
例えばＥＤＴＡを主成分とした薬剤を加えて尿中細胞を
保存する方法に加えて，さらにフッ素化合物，例えばＮ
ａＦ（フッ化ナトリウム）を或る濃度以上になるように
併用すると尿中のグラム陽性菌，真菌の増殖を抑制し，
尿細胞の変性と減少を防止することができることを発見
して本発明をなしたものである。
発明者らは従来の尿中の細胞保存方法の欠点を解消すべ
く鋭意研究の結果，本発明者らの発明した特願平２ー９
０６３８号に示された，尿試料に緩衝剤，例えばクエン
酸を添加して尿を低ｐＨに保持し，さらに抗菌性薬剤，
例えばＥＤＴＡを主成分とした薬剤を加えて尿中細胞を
保存する方法に加えて，さらにフッ素化合物，例えばＮ
ａＦ（フッ化ナトリウム）を或る濃度以上になるように
併用すると尿中のグラム陽性菌，真菌の増殖を抑制し，
尿細胞の変性と減少を防止することができることを発見
して本発明をなしたものである。
【００１１】すなわち本発明は尿中の細胞を計測及び診
断する際に，採取した試料尿を各種酸を用いてｐＨを
4.5〜 6.5に調整して細胞自身の代謝および微生物の代
謝，増殖を抑制し，さらに抗菌性薬剤であるＥＤＴＡお
よびフッ素化合物を等量換算でＮａＦ（フッ化ナトリウ
ム）を尿１mlあたり１mg添加した場合と同等以上の濃度
になるようにを添加して微生物の増殖抑制効果を高める
ことにより細胞の保存効果を高めた尿中の細胞保存方法
である。
断する際に，採取した試料尿を各種酸を用いてｐＨを
4.5〜 6.5に調整して細胞自身の代謝および微生物の代
謝，増殖を抑制し，さらに抗菌性薬剤であるＥＤＴＡお
よびフッ素化合物を等量換算でＮａＦ（フッ化ナトリウ
ム）を尿１mlあたり１mg添加した場合と同等以上の濃度
になるようにを添加して微生物の増殖抑制効果を高める
ことにより細胞の保存効果を高めた尿中の細胞保存方法
である。
【００１２】従来からフッ素化合物は微生物の増殖抑制
剤および抗菌剤として知られているが，尿をｐＨを低下
（酸性化）させた条件下では，等量換算で, 例えばＮａ
Ｆで尿１mlあたり１mgの濃度, 以上の濃度になるように
フッ素化合物の濃度を設定すると初めてフッ素化合物が
細菌をはじめとする微生物の増殖抑制作用が有効に発揮
されるのである。
剤および抗菌剤として知られているが，尿をｐＨを低下
（酸性化）させた条件下では，等量換算で, 例えばＮａ
Ｆで尿１mlあたり１mgの濃度, 以上の濃度になるように
フッ素化合物の濃度を設定すると初めてフッ素化合物が
細菌をはじめとする微生物の増殖抑制作用が有効に発揮
されるのである。
【００１３】尿のｐＨは通常 4.5〜10.0と広い範囲であ
るが，本発明では酸を緩衝剤として加えてｐＨを 4.5〜
6.5になるように調整する。酸は無機酸，有機酸いずれ
でも良い。特にクエン酸は粉末状として予め採取管に投
入しておくことができて便利である。また抗菌性薬剤と
してＥＤＴＡ・２Naを併用すると尿中の細胞の保存効果
が向上するが，ＥＤＴＡ・２Naは 0.4〜 4.0mg／ml（尿
当たり）の量で実効を有するものである。
るが，本発明では酸を緩衝剤として加えてｐＨを 4.5〜
6.5になるように調整する。酸は無機酸，有機酸いずれ
でも良い。特にクエン酸は粉末状として予め採取管に投
入しておくことができて便利である。また抗菌性薬剤と
してＥＤＴＡ・２Naを併用すると尿中の細胞の保存効果
が向上するが，ＥＤＴＡ・２Naは 0.4〜 4.0mg／ml（尿
当たり）の量で実効を有するものである。
【００１４】本発明を実施するにはクエン酸，ＥＤＴＡ
・２Na，とＮａＦを，例えば顆粒状製剤，凍結乾燥製剤
とし，それを混合した薬剤を尿採取試験管に予め規定量
だけ投入しておき，これに尿を該試験管に規定量採取
し，そのまま保存して細胞の計測及び診断を行えばよ
い。
・２Na，とＮａＦを，例えば顆粒状製剤，凍結乾燥製剤
とし，それを混合した薬剤を尿採取試験管に予め規定量
だけ投入しておき，これに尿を該試験管に規定量採取
し，そのまま保存して細胞の計測及び診断を行えばよ
い。
【００１５】
１．試料採取管に尿を採取して，クエン酸４mg／ml（尿
当たり），ＥＤＴＡ・２Naを３mg／ml（尿当たり），及
びＮａＦを１mg／ml（尿当たり）を添加して混合した。
用いた尿のｐＨは 6.6であり，添加後はｐＨは 5.0とな
った。この尿試料を２５℃に保持して１２時間毎の細胞
数を測定し，また細胞を顕微鏡で観察して診断して前述
の５段階判定度数を用いて評価したところ，２４時間後
まで変化が起こらなかった。４８時間後には細胞数は４
％しか低下せず，判定度数は４までの低下であった。
当たり），ＥＤＴＡ・２Naを３mg／ml（尿当たり），及
びＮａＦを１mg／ml（尿当たり）を添加して混合した。
用いた尿のｐＨは 6.6であり，添加後はｐＨは 5.0とな
った。この尿試料を２５℃に保持して１２時間毎の細胞
数を測定し，また細胞を顕微鏡で観察して診断して前述
の５段階判定度数を用いて評価したところ，２４時間後
まで変化が起こらなかった。４８時間後には細胞数は４
％しか低下せず，判定度数は４までの低下であった。
【００１６】
【発明の効果】以上に詳しく説明したように本発明は尿
中の細胞を計測，診断する際に，採取尿試料に緩衝剤と
して酸，特にクエン酸を添加して尿のｐＨを 4.5〜 6.5
に調整するとともにＥＤＴＡ・２ＮａおよびＮａＦを添
加して細菌をはじめとする微生物の増殖を抑制して尿中
の細胞を保存する方法であり，試料尿採取後の計測，診
断までに数十時間保存しても正確な計測値と診断が得ら
れるものであり，尿の血液細胞数，腎尿路系細胞数の計
測検査，および細胞診断検査特に大量の試料を検査する
場合に非常に大きな効果を有する方法である。
中の細胞を計測，診断する際に，採取尿試料に緩衝剤と
して酸，特にクエン酸を添加して尿のｐＨを 4.5〜 6.5
に調整するとともにＥＤＴＡ・２ＮａおよびＮａＦを添
加して細菌をはじめとする微生物の増殖を抑制して尿中
の細胞を保存する方法であり，試料尿採取後の計測，診
断までに数十時間保存しても正確な計測値と診断が得ら
れるものであり，尿の血液細胞数，腎尿路系細胞数の計
測検査，および細胞診断検査特に大量の試料を検査する
場合に非常に大きな効果を有する方法である。
Claims (5)
- 【請求項１】 尿中の細胞を計測或いは診断する際に，
採取した試料尿に各種酸を加えて該試料尿のｐＨを 4.5
〜 6.5に調整し，抗菌性薬剤とフッ素化合物を添加する
ことを特徴とする尿中の細胞保存方法 - 【請求項２】 酸としてクエン酸を用いることを特徴と
する請求項１記載の尿中の細胞保存方法 - 【請求項３】 抗菌性薬剤としてＥＤＴＡ・２Naを 0.4
〜4.0 mg／ml（尿あたり）混合することを特徴とする請
求項１もしくは２記載の尿中の細胞保存方法 - 【請求項４】 フッ素化合物としてＮａＦ（フッ化ナト
リウム）を１mg／１ml（尿当たり）以上，もしくは弗酸
塩を等量換算で同等の濃度になるように添加することを
特徴とする請求項１〜３記載の尿中の細胞保存方法 - 【請求項５】 尿試料採取管に顆粒状のクエン酸，ＥＤ
ＴＡ・２Ｎａ，ＮａＦを適量に混合した薬剤を投入して
おき，得られた尿試料を保存することを特徴とする請求
項１〜４記載の尿中の細胞保存方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
| JPS58184548A (ja) * | 1982-04-21 | 1983-10-28 | Nitsushiyoo:Kk | 血糖値測定用添加剤 |
| JPH01287463A (ja) * | 1988-05-14 | 1989-11-20 | Kyoto Ikagaku Kenkyusho:Kk | 血液中のインシュリン成分の安定方法 |
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1992
- 1992-03-05 JP JP4048156A patent/JP2603576B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| US7645425B2 (en) | 2002-05-13 | 2010-01-12 | Becton, Dickinson And Company | Protease inhibitor sample collection system |
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