JPH05252936A - 大腸菌及びシュードモナスに於ける正確に処理されたヒト成長ホルモンの分泌 - Google Patents

大腸菌及びシュードモナスに於ける正確に処理されたヒト成長ホルモンの分泌

Info

Publication number
JPH05252936A
JPH05252936A JP4276348A JP27634892A JPH05252936A JP H05252936 A JPH05252936 A JP H05252936A JP 4276348 A JP4276348 A JP 4276348A JP 27634892 A JP27634892 A JP 27634892A JP H05252936 A JPH05252936 A JP H05252936A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
hgh
coli
growth hormone
human growth
hormone
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP4276348A
Other languages
English (en)
Inventor
Gregory L Gray
グレゴリイ・ローレンス・グレイ
Herbert L Heyneker
ヘルベルト・ルイス・ヒンケル
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Genentech Inc
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of JPH05252936A publication Critical patent/JPH05252936A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C12N15/78—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Pseudomonas
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/30—Signal or leader sequence

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明は、シグナルペプチドを有するヒト成
長ホルモン（ｈＧＨ，プレヒト成長ホルモン）の大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉ）及びシュードモナス（Pseudomonas ）
内での産生、並びにシグナル配列をタンパクのｈＧＨ部
分から開裂して成熟ｈＧＨを生成するための細菌宿主に
よる未処理（プレ）タンパクのプロセッシングに係る。 【構成】 ヒト成長ホルモンを含有する組換え原核生物
宿主細胞であって、前記ホルモンのアミノ酸配列が天然
に存在するヒト成長ホルモンのアミノ酸配列から成り、
前記ホルモンはその天然環境で付随する他のタンパクを
含んでおらず、かつ外来のＮ−末端メチオニンを有する
成熟ヒト成長ホルモンも含んでおらず、前記ホルモンは
前記原核生物宿主によって産生されたものであることを
特徴とする組換え原核生物宿主細胞。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は、シグナルペプチドを有するヒト
成長ホルモン（ｈＧＨ，プレヒト成長ホルモン）の大腸
菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及びシュードモナス（Pseudomonas
）内での産生、並びにシグナル配列をタンパクのｈＧ
Ｈ部分から開裂して成熟ｈＧＨを生成するための細菌宿
主による未処理（プレ）タンパクのプロセッシングに係
る。
【０００２】ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）はヒト下垂体
で分泌される。ｈＧＨは成熟形態では１９１個のアミノ
酸からなり、分子量が約２１，５００であり、従ってイ
ンシュリンの３倍以上も大きい。組換ＤＮＡ技術が出現
する前のｈＧＨは限られた入手源、即ちヒトの死体の下
垂体からやっかいな抽出によってしか得られなかった。
ｈＧＨはやけど、創傷の癒合、ジストロフィー，骨の癒
着，胃の散在性出血及び偽関節症の処置に有効であるこ
とが提案されていたにもかかわらず、前記のようにこの
物質は少量でしか得られないためその応用は下垂体機能
低下小人の治療に限られていた。実際、手に入り得るデ
ータから見積ると、組織から得られるｈＧＨは下垂体機
能低下小人患者の約５０％に対処する量でしかない。こ
のようにｈＧＨを他の用途に利用することは不可能であ
る。
【０００３】近年、組換宿主細胞，特にＥ．ｃｏｌｉに
よって下垂体機能低下小人及びｈＧＨが有効な他の症状
の処置に充分な量でｈＧＨを産生し得ることが開示され
た。例えば米国特許第４，３４２，８３２号参照。この
ような技術の進歩は後述の理由でｈＧＨによって改善さ
れる見込みのある病状等に悩む人々にとっては恵みとな
るが、米国特許第４，３４２，８３２号の方法を使用し
て得られるｈＧＨは、天然のｈＧＨには見られないアミ
ノ酸メチオニンがタンパクのＮ−末端に付いたｈＧＨを
少なくとも実質的な量で含有する。この多少異なるｈＧ
Ｈが感受性の個体に対する何らかの重大で望ましくない
副作用を生ずるかどうか証拠はないが、ともかくその構
造は「成熟」ｈＧＨとは異なるものである。ヒトの体内
で産生されるホルモンとは多少異なるホルモン，例えば
牛や他の動物の組織から抽出して得られた種々のインシ
ュリンが多年に亘りヒトの病気の治療に有効に使用され
てきた。それにもかかわらず、組換ＤＮＡ技術の出現に
よって、体内で産生されるインシュリンと正しく同じア
ミノ酸配列を有するインシュリンを得ることが可能にな
った。これによって科学的のみならず医学的にも大きく
進歩した。即ち、ヒトインシュリンの製造方法を利用す
ることによって、動物のインシュリンを摂取した糖尿病
患者に起こる有害な副作用の危険が低下するからであ
る。従って、天然に存在するものとは少しだけ異なる活
性形態のｈＧＨが利用できるにもかかわらず、アミノ酸
含量に於いて下垂体が産生するｈＧＨの１９１個のアミ
ノ酸だけから成るｈＧＨを有利に取得する必要性があ
る。更に、本発明はｍｅｔのないｈＧＨを産業上利用し
得る量で産生する方法を開示する。
【０００４】形質転換した微生物宿主中で異種ｈＧＨを
発現するためのベクターを得るのに組換ＤＮＡ技術を使
用することは今では充分に確立された科学である。この
分野での最初の成功は、グラム陰性菌Ｅ．ｃｏｌｉの菌
株，例えばＥ．ｃｏｌｉＫ−１２株２９４を用いて達成
された。
【０００５】しかしながら、複雑な異種ポリペプチドを
得るために微生物宿主としてＥ．ｃｏｌｉを使用するこ
とには制限がある。比較的小さいポリペプチドは、宿主
によって減成分解されるのを防ぐため、標的ポリペプチ
ドが大きいポリペプチドの１部として産生される融合タ
ンパクとして得なければならない。多くの場合、融合タ
ンパクとして産生された小タンパクは大きい分子から何
らかの方法で開裂して有用な産物を得なければならな
い。
【０００６】大きい異種タンパクは細胞によって減成さ
れることがなく、適切に配置された開始コドンを含む直
接発現用遺伝子が適切なプロモーター遺伝子，例えば良
く知られたｌａｃプロモーターに結合されていれば直接
に産生することができる。ｍＲＮＡのコード配列の翻訳
開始シグナルは、アミノ酸メチオニン（Ｍｅｔ）をコー
ドしているＡＴＧ遺伝子コドンから生成したＡＵＧであ
る。原核生物のあるものは得られるタンパクのＮ−末端
Ｍｅｔを除去しないので、細菌宿主中細菌のプロモータ
ーの制御下で異種ＤＮＡを発現させると時々第一アミノ
酸がメチオニンであるようなタンパクが得られる。例え
ばＥ．ｃｏｌｉでのｈＧＨ産生に関する今日までの結果
が示しているところでは、宿主細胞は細胞内でメチオニ
ンを開裂するという限られた能力しか有していない。
又、細胞外で開裂する便利な方法もない。従って、前記
したように、米国特許第４，３４２，８３２号の方法に
よって微生物内で発現したｈＧＨは、少なくとも実質的
な部分はメチオニン残基が付いている産物であり、この
メチオニンは、ある種の環境では、このタンパク産物を
治療用途に用いた場合異種タンパクとして認識させ得
る。
【０００７】天然に存在する多くのタンパクは通常の環
境では最初付加的なペプチド配列が付いた形で発現され
る。この付加的ペプチド配列により、タンパクはそれが
製造された細胞の細胞膜を通過し得るようになる。この
ようにして開裂されるこの付加的ペプチドは「シグナ
ル」ペプチドと称される。シグナル配列の遺伝子を含有
する異種遺伝子が細菌プロモーターの制御下に配置され
且つ細菌が細胞内でシグナル配列を開裂すると、メチオ
ニンの付いていない成熟タンパクが得られるであろう。
しかし、宿主によって開裂されないと、シグナル配列は
細胞外では容易に開裂できないので成熟タンパクの単離
が複雑になる。
【０００８】「未成熟」タンパク，即ちシグナル配列と
結合した所望のタンパクをＥ．ｃｏｌｉで産生しようと
いう努力が払われたが、Ｅ．ｃｏｌｉの如きグラム陰性
菌はこのタンパクのシグナル配列を有効に開裂処理しな
いことが示唆されている。小さいタンパクであるプレプ
ロインシュリンはＥ．ｃｏｌｉ中で部分的にプロセッシ
ングを受けてシグナルペプチドが除去されることが示さ
れた。しかしながら、線維芽細胞インターフェロン及び
白血球インターフェロンのような大きな分子ではうまく
いった例はない。線維芽細胞インターフェロンの場合
は、生物学的に活性な物質は産生されなかった（Tanigu
chi, T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA , 7
7, 5230〜5233 (1980) ）。白血球インターフェロンの
場合は、生物学的に活性な物質が産生されたが、輸送さ
れず又適格なプロセッシングもされなかった。
【０００９】予期に反し本発明者等は、プレ−ｈＧＨの
遺伝子、即ち成熟タンパクの１９１個のアミノ酸及びそ
のシグナルペプチドの２６個のアミノ酸をコードしてい
る遺伝子がグラム陰性菌中で発現されてプレｈＧＨが得
られ、このプレｈＧＨは次に細胞内でプロセッシングを
受けて成熟タンパクからシグナルペプチドが開裂される
ことを発見した（プレｈＧＨ又はプレタンパクとは、天
然環境下で所望タンパクを分泌させるシグナル配列を含
有する所望のタンパクを意味する）。その結果としてｈ
ＧＨが成熟形態で、天然環境では関連結合している他の
タンパクを含まない状態で得られる。即ち、本発明方法
を使用すると、ヒト由来のタンパクを含まないｈＧＨ
を、天然に存在するタンパクのアミノ酸配列に加えて余
分なメチオニンを含まない形態で産業上有用な量で得る
ことが可能になる。
【００１０】又、本発明は、Ｅ．ｃｏｌｉとＰｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓの両方及び他の原核生物細菌種で使用する
ことができる、未成熟タンパクの遺伝子の発現用複製可
能ベクターをも提供する。更に本発明は、このようなベ
クターで形質転換された原核生物宿主を提供する。
【００１１】従って本発明の目的は、組換ＤＮＡ技術に
よってｈＧＨを得るための改良方法である。
【００１２】他の目的は、天然の形態には見られない付
加的アミノ酸を含有しないｈＧＨを取得することであ
る。
【００１３】これらの目的及びその他の目的の達成は、
以下に記載する好ましい態様から明らかになるであろ
う。
【００１４】本発明の一般的手順は、宿主原核細胞内で
複製可能であり且つ発現を司どるＤＮＡに有効に（発現
するように）連結されている未成熟ｈＧＨの発現をコー
ドしているＤＮＡ配列を含有する発現ベクター又はクロ
ーニングベヒクルの調製である。本明細書中で使用する
「原核生物」という用語は、核を含有せず従ってその染
色体が細胞質から分離されていない細胞を意味する。原
核生物は例えば細菌を包含するが酵母の如き有核微生物
は包含しない。
【００１５】特定的には、プラスミドは、プレｈＧＨを
発現し且つプレｈＧＨからシグナル配列を開裂処理する
という細菌宿主の能力を示すべくＥ．ｃｏｌｉ及びＰｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌株の双方を形質転換するために使
用し得る発現ベクターとして構築した。
【００１６】既に示されているように、Ｅ．ｃｏｌｉ中
で異種ＤＮＡを発現すべく改良された基本的プラスミド
であるＥ．ｃｏｌｉプラスミドｐＢＲ３２２は、広範囲
の宿主でクローン化されると、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
（Ｐｓ．）ａｅｒｕｇｅｎｏｓａ（ａ．）中に安定に維
持でき、同様にＥ．ｃｏｌｉプラスミドであるスルホン
アミド耐性（ＳｕR ），ストレプトマイシン耐性（Ｓｍ
R ）のプラスミドｐＲＳＦ１０１０も同じである。 Woo
d et al., J. Bacteriol., 14, 1448 (1981)及び Saka
gouchi, Current Topics in Microbiology and Immun
ology, 96, 31(1982) 参照。従ってｈＧＨをコードして
おり且つＥ．ｃｏｌｉとＰｓ．双方の菌株を形質転換す
るのに使用し得るプラスミドを得るために、タンパクの
発現用遺伝子を含有するハイブリッドプラスミドをｐＢ
Ｒ３２２及びｐＲＳＦ１０１０から調製した。
【００１７】未成熟ｈＧＨ，即ちシグナル配列の２６個
のアミノ酸に結合したｈＧＨの１９１個のアミノ酸の発
現をコードするプラスミドの構築を図１Ｂに示す。この
構築には、de Boer, H. et al., Promoters ： Structu
re and Function, eds. Rodriguez, R. and Chamberli
n, M. J. (Praeger, New York), 462-481 (1982) に記
載されているｐＢＲ３２２誘導体、即ちｐＨＧＨ２０７
−１を使用する。
【００１８】図１Ｂに示したｐＨＧＨ２０７−１をＥｃ
ｏＲＩで部分消化し、最大断片をポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動で精製した。この断片からＤＮＡポリメラー
ゼＫｌｅｎｏｗ断片を用いて第２鎖を合成（second str
and synthesis ）し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いて結合
して、ｔｒｐプロモーター‐リボゾーム結合部位とｈＧ
Ｈ構造遺伝子との接合部に唯一のＥｃｏＲＩ部位を有す
るプラスミドｐＨＧＨ２０７−１* を形成した。ｐＨＧ
Ｈ２０７−１* をＰｓｔＩで部分的に開裂し、最大断片
をポリアクリルアミドゲル電気泳動で精製した。この断
片からＤＮＡポリメラーゼＫｌｅｎｏｗ断片を用いて第
２鎖合成し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いて結合して、ｈ
ＧＨ構造遺伝子中に唯一のＰｓｔＩ部位を有するプラス
ミドｐＨＧＨ２０７−１* −ＡＰＳを作成した。ｐＨＧ
Ｈ２０７−１* −ＡＰＳをＥｃｏＲＩ及びＰｓｔＩで完
全に消化し、最大断片をポリアクリルアミドゲルを用い
るゲル電気泳動によって精製した。この断片はｔｒｐプ
ロモーターと成熟ｈＧＨ遺伝子の５′端を含有してい
る。
【００１９】図１Ｂに示した第２のプラスミドｐＨＧＨ
ｃＤＮＡを Martial et al., Science , 205, 602-
606 (1979)に記載の如く調製し、ＨｐａIIで処理してｈ
ＧＨのシグナルペプチドＤＮＡ配列と成熟ｈＧＨのアミ
ノ末端部分との大部分をコードしている４６２塩基対
（ｂｐ）断片を切除した。この断片をポリアクリルアミ
ドゲルを用いるゲル電気泳動で精製した。この断片をＰ
ｓｔＩで消化してｈＧＨのシグナルペプチドＤＮＡ配列
と成熟ｈＧＨのアミノ−末端部分との大部分をコードし
ている１９２ｂｐ断片を切除した。この断片をポリアク
リルアミドゲルを用いるゲル電気泳動によって精製し
た。
【００２０】図１Ａに未成熟ｈＧＨのシグナルポリペプ
チドのアミノ酸配列とｍＲＮＡ配列とを示す。この配列
は細菌中での翻訳開始シグナルとなるｆ−Ｍｅｔのコド
ンＡＵＧを有しており、更に５′端近くにＨｐａII部位
を有している。シグナル配列の遺伝子を完全にすると共
にＥｃｏＲＩ及びＨｐａII部位を形成するために、図１
Ｂに示す２個の合成オリゴヌクレオチドをCrea, Proc.
Nat′l . Acad. Sci ., USA , 75, 5765 (1978)
の改良トリエステル法で合成した。２個の合成オリゴヌ
クレオチドの各５μｇの試料をGoeddel et al., Proc.
Nat′l . Acad. Sci. USA, 76, 106 (1979)に記載の如
くＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ及び［γ−32Ｐ］ＡＴ
Ｐ（ＮＥＮ）を用いてリン酸化した。次にこれら反応生
成物を混合し、９０℃で５分間加熱し、次いで２２℃に
冷却することで２個の分子をアニールした。
【００２１】断片ｐＨＧＨ２０７−１及びｐＨＧＨｃＤ
ＮＡ並びに合成オリゴヌクレオチドを、Ｔ４リガーゼを
用いる３断片結合法（three way ligation）によって結
合して図１Ｂに示すプラスミドｐＰｒｅＨＧＨ２０７−
１を得た。このプラスミドｐＰｒｅＨＧＨ２０７−１を
Ｅ．ｃｏｌｉＫ−１２株２９４（Ｅ．ｃｏｌｉ２９４）
中でクローン化した。このＥ．ｃｏｌｉ２９４は１９７
６年１０月２８日にAmerican Type Culture Collection
に寄託されており、ＡＴＣＣ受託番号は３１４４６であ
る。このプラスミドをＴｃR のコロニーから単離した。
ｔｒｐプロモーター並びにｈＧＨシグナルポリペプチド
及びアミノ末端アミノ酸のコドンを含有する領域のヌク
レオチド配列はジデオキシチェインターミネーション法
で確認した。Messing, J., Crea, R., and Seeburg, P.
H., Nucleic Acids Res ., 9,309-321 (1981)参照。
【００２２】ｐＰｒｅＨＧＨ２０７−１及びｐＨＧＨ２
０７−１をＸｂａＩ及びＢａｍＨＩで消化した。ｐＰｒ
ｅＨＧＨ２０７−１の小さい方の断片をゲル電気泳動で
精製した。この断片はプレｈＧＨ遺伝子全体を含有す
る。ｐＨＧＨ２０７−１の大きい方の断片をゲル電気泳
動で精製した。この断片はｔｒｐプロモーターを含んで
いる。これら２個の断片を混合し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ
で処理するとプラスミドｐＰｒｅＨＧＨ２０７−２が得
られた。このプラスミドはｔｒｐプロモーターとプレｈ
ＧＨ遺伝子を含有する。ｐＰｒｅＨＧＨ２０７−２及び
ｐＲＳＦ１０１０をＥｃｏＲＩで処理し、Ｔ４リガーゼ
で結合してプラスミドｐＲＰＨ−２を得た。このプラス
ミドを使用してＥ．ｃｏｌｉ２９４を形質転換した。ｐ
ＲＰＨ−２をＴｃR 及びＳｍR を示すコロニーから得
た。
【００２３】発現ベクターｐＲＰＨ−２を使用してＰ
ｓ．ａ．株ＰＡＯ２００３を形質転換した。Chandler e
t al., Mutat. Res., 23, 15 (1974) 参照。ｐＲＰＨ
−２で形質転換した細胞を、５０μｇ／ｍｌのテトラサ
イクリンを含むＬｕｒｉａブロス（ＬＢ）中３７℃で一
晩対数期まで増殖させた。セルペレットを３０ｍＭ Ｔ
ｒｉｓ， ｐＨ８．０， ２０△ドデシル硫酸ナトリウ
ム（ＳＤＳ）に再懸濁し超音波処理した。細胞抽出物
を、Phaedabas hGH PRIST キット（Pharmacia ）を用い
るラジオイムノアッセイによって分析するため順次希釈
した。実質的レベルのｈＧＨが確認された（４×１０2
ｎｇ／ｍｌ／Ａ550 ）。細胞抽出物をポリアクリルアミ
ドゲル上１２．５％ＳＤＳ中で電気泳動した。抗−ｈＧ
Ｈウサギ抗−血清（Ｋａｂｉ社製）と 125Ｉ−標識Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ Ａを用いる免疫ブロット技術（immunoblot
ting technique）でｈＧＨを可視化した。オートラジオ
グラフィーにより、細胞抽出物が抗−ｈＧＨと反応し真
正下垂体ｈＧＨと同じ電気泳動度を有する１種の主成分
を含有していることが判明した。いくらか泳動度の低い
小さいバンドも検出されたが、これは恐らく未処理のプ
レｈＧＨであろう。
【００２４】細胞抽出物の主要な反応性成分を精製して
免疫親和力クロマトグラフィー（immunoaffinity chrom
atography ）及び高速液体クロマトグラフィーによる均
一成分を得た。アミノ−末端のアミノ酸配列はＥｄｍａ
ｎの減成法（degradotion method）によって決定した。
Edman et al, European J. Biochem ., 1, 80 (1967)
参照。その結果均質であり、配列Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｔｈ
ｒ−Ａｌａで始まることが判明した。これは下垂体ｈＧ
Ｈの配列に完全に相当する。
【００２５】Ｅ．ｃｏｌｉとＰｓ．ｐｕｔｉｄａのｐＲ
ＰＨ−２による形質転換体を用いてプレｈＧＨを発現さ
せ原核生物の開裂によって成熟ｈＧＨを得る実験を同様
に行なったところ、Ｅ．ｃｏｌｉがシグナルペプチドを
有するインターフェロンのプロセッシングをしないとい
う過去の知見に反して、グラム陰性菌のプレｈＧＨを首
尾よくプロセッシングする能力は普遍的な現象であるこ
とが示された。
【００２６】本発明の精神を逸脱することなく好ましい
具体例に種々の改良を加えることができるということ
は、以上の記載から当業者には自明であろう。例えば、
使用する組換宿主がＥ．ｃｏｌｉであればプラスミドｐ
ＲＳＦ１０１０を使用する必要は必ずしもない。即ち、
例えば図１Ａ及び図１ＢのｐＰｒｅＨＧＨ２０７−１又
はｐＰｒｅＨＧＨ２０７−２を使用してＥ．ｃｏｌｉ中
で発現させることもできる。従って、本発明は請求項に
記載した法的範囲にのみ限定されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１Ａは天然ｈＧＨに結合しているシグナルポ
リペプチドのアミノ酸配列及びｍＲＮＡ配列を示す図で
ある。
【図２】図１ＢはｈＧＨ発現プラスミドｐＲＰＨ２の構
築を示す図である。
【図３】図１ＢはｈＧＨ発現プラスミドｐＲＰＨ２の構
築を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 35/74 Ｄ 7431−4Ｃ 37/36 8314−4Ｃ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） 7804−4Ｂ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:38） 7804−4Ｂ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） 7804−4Ｂ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:38） 7804−4Ｂ

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ヒト成長ホルモンを含有する組換え原核
    生物宿主細胞であって、前記ホルモンのアミノ酸配列が
    天然に存在するヒト成長ホルモンのアミノ酸配列から成
    り、前記ホルモンはその天然環境で付随する他のタンパ
    クを含んでおらず、かつ外来のＮ−末端メチオニンを有
    する成熟ヒト成長ホルモンも含んでおらず、前記ホルモ
    ンは前記原核生物宿主によって産生されたものであるこ
    とを特徴とする組換え原核生物宿主細胞。
  2. 【請求項２】 グラム陰性菌であることを特徴とする請
    求項１に記載の宿主細胞。
  3. 【請求項３】 大腸菌（Ｅ．coli）菌株であることを特
    徴とする請求項２に記載の宿主細胞。
  4. 【請求項４】 菌株が大腸菌（Ｅ．coli）Ｋ−12株 294
    であることを特徴とする請求項３に記載の宿主細胞。
  5. 【請求項５】 緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）の
    菌株であることを特徴とする請求項２に記載の宿主細
    胞。
  6. 【請求項６】 菌株ＰＡ 02003であることを特徴とする
    請求項５に記載の宿主細胞。
  7. 【請求項７】 シュードモナス・ピュチダ（Pseudomo
    nas putida）の菌株であることを特徴とする請求項２
    に記載の宿主細胞。
JP4276348A 1983-04-25 1992-10-14 大腸菌及びシュードモナスに於ける正確に処理されたヒト成長ホルモンの分泌 Pending JPH05252936A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/488,232 US4755465A (en) 1983-04-25 1983-04-25 Secretion of correctly processed human growth hormone in E. coli and Pseudomonas
US488232 1983-04-25

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59082770A Division JPS6045595A (ja) 1983-04-25 1984-04-24 大腸菌及びシユ−ドモナスに於ける正確に処理されたヒト成長ホルモンの分泌

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH05252936A true JPH05252936A (ja) 1993-10-05

Family

ID=23938879

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59082770A Pending JPS6045595A (ja) 1983-04-25 1984-04-24 大腸菌及びシユ−ドモナスに於ける正確に処理されたヒト成長ホルモンの分泌
JP4276348A Pending JPH05252936A (ja) 1983-04-25 1992-10-14 大腸菌及びシュードモナスに於ける正確に処理されたヒト成長ホルモンの分泌

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59082770A Pending JPS6045595A (ja) 1983-04-25 1984-04-24 大腸菌及びシユ−ドモナスに於ける正確に処理されたヒト成長ホルモンの分泌

Country Status (9)

Country Link
US (1) US4755465A (ja)
EP (1) EP0127305A1 (ja)
JP (2) JPS6045595A (ja)
CA (1) CA1267099A (ja)
DK (1) DK204684A (ja)
ES (1) ES8602136A1 (ja)
IL (1) IL71622A (ja)
NZ (1) NZ207924A (ja)
ZA (1) ZA843062B (ja)

Families Citing this family (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5618697A (en) * 1982-12-10 1997-04-08 Novo Nordisk A/S Process for preparing a desired protein
DK55685A (da) * 1985-02-07 1986-08-08 Nordisk Gentofte Enzym eller enzymkompleks med proteolytisk aktivitet
US4859600A (en) * 1983-04-25 1989-08-22 Genentech, Inc. Recombinant procaryotic cell containing correctly processed human growth hormone
IL71991A (en) 1983-06-06 1994-05-30 Genentech Inc Preparation of human FGI and FGE in their processed form through recombinant AND tranology in prokaryotes
BG49718A3 (bg) * 1983-07-15 1992-01-15 Bio- Technology General Corp Метод за получаване на полипептид със супероксиддисмутазна активност
WO1986001229A1 (en) * 1984-08-16 1986-02-27 Bio-Technology General Corp. Method of removing n-terminal amino acid residues from eucaryotic polypetide analogs and polypeptides produced thereby
IL76360A0 (en) * 1984-09-26 1986-01-31 Takeda Chemical Industries Ltd Mutual separation of proteins
US6534285B1 (en) 1984-12-24 2003-03-18 Genentech, Inc. Molecularly cloned acquired immunodeficiency syndrome polypeptides and their methods of use
US5853978A (en) * 1985-12-04 1998-12-29 Genentech, Inc. Molecularly cloned acquired immunodeficiency syndrome polypeptides and methods of use
US4861868A (en) 1985-02-22 1989-08-29 Monsanto Company Production of proteins in procaryotes
DK151585D0 (da) * 1985-04-03 1985-04-03 Nordisk Gentofte Dna-sekvens
US4786501A (en) * 1985-07-15 1988-11-22 International Minerals & Chemical Corp. Cylindrical implants for the controlled release of growth hormones
US4870017A (en) * 1985-09-20 1989-09-26 Cetus Corporation Bacterial methionine N-terminal peptidase
US5013662A (en) * 1985-09-20 1991-05-07 Cetus Corporation Bacterial methionine n-terminal peptidase
US4865974A (en) * 1985-09-20 1989-09-12 Cetus Corporation Bacterial methionine N-terminal peptidase
FR2597114B1 (fr) * 1986-04-10 1994-02-25 Sanofi Procede microbiologique pour l'obtention d'une proteine par culture d'une souche bacterienne mutante
FR2599753B1 (fr) * 1986-06-05 1989-12-08 Sanofi Sa Sequence d'adn composite et son application pour la production de l'hormone de croissance
IT1228925B (it) * 1987-08-07 1991-07-10 Eniricerche Spa Procedimento per la preparazione dell'ormone della crescita umano
US5744139A (en) * 1991-06-28 1998-04-28 University Of Tennessee Research Corporation Insulin-like growth factor I (IGF-1) induced improvement of depressed T4/T8 ratios
US5202119A (en) * 1991-06-28 1993-04-13 Genentech, Inc. Method of stimulating immune response
US5317012A (en) * 1991-10-04 1994-05-31 The University Of Tennessee Research Corporation Human growth hormone induced improvement in depressed T4/T8 ratio
JPH06503479A (ja) * 1991-10-16 1994-04-21 オラージェン，　インコーポレイテッド 動物体細胞の粒子−媒介トランスフォーメーション
JPH07118577B2 (ja) * 1992-12-02 1995-12-18 株式会社リコー 電子装置用基板の検査方法
GB9526733D0 (en) 1995-12-30 1996-02-28 Delta Biotechnology Ltd Fusion proteins
MX9605082A (es) 1996-10-24 1998-04-30 Univ Autonoma De Nuevo Leon Levaduras metilotroficas modificadas geneticamente para la produccion y secrecion de hormona de crecimiento humano.
EP2295081B1 (en) * 2001-06-26 2018-10-31 Amgen Inc. Antibodies to OPGL
DK1404829T3 (da) * 2001-07-06 2008-03-25 Lg Life Sciences Ltd Hidtil ukendt aminopeptidase afledt af bacillus licheniformis, gen der koder for aminopeptidasen, ekspressionsvektor indeholdende genet, transformant og fremgangsmåde til fremstilling deraf
AU2002306484A1 (en) 2002-02-13 2003-09-04 Dow Global Technologies Inc. Over-expression of extremozyme genes in pseudomonads and closely related bacteria
DE60332358D1 (de) * 2002-09-09 2010-06-10 Hanall Pharmaceutical Co Ltd Protease-resistente modifizierte interferon alpha polypeptide
US9453251B2 (en) 2002-10-08 2016-09-27 Pfenex Inc. Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens
CA2524623A1 (en) * 2003-05-09 2004-11-18 Pharmexa A/S Immunogenic human tnf alpha analogues with reduced cytotoxicity and methods of their preparation
AU2004261980A1 (en) * 2003-08-01 2005-02-10 Genentech, Inc. Antibody CDR polypeptide sequences with restricted diversity
WO2005052151A1 (en) 2003-11-19 2005-06-09 Dow Global Technologies Inc. Improved protein expression systems
CA2546157C (en) 2003-11-21 2014-07-22 Dow Global Technolgies Inc. Improved expression systems with sec-system secretion
CA2547511A1 (en) * 2003-12-01 2005-07-28 Dow Global Technolgies Inc. Recombinant icosahedral virus like particle production in pseudomonads
EP1709170B1 (en) 2004-01-16 2018-02-21 Pfenex Inc. Expression of mammalian proteins in pseudomonas fluorescens
BRPI0507169A (pt) * 2004-02-02 2007-06-26 Ambrx Inc polipeptìdeos do hormÈnio de crescimento humano modificados e seu usos
US7632924B2 (en) * 2004-06-18 2009-12-15 Ambrx, Inc. Antigen-binding polypeptides and their uses
CN1953992A (zh) * 2004-06-23 2007-04-25 Usv有限公司 源自胎盘和脑垂体同种型的嵌合体人生长激素和获得所述嵌合体的方法
WO2006091231A2 (en) * 2004-07-21 2006-08-31 Ambrx, Inc. Biosynthetic polypeptides utilizing non-naturally encoded amino acids
BRPI0513826A2 (pt) 2004-07-26 2010-06-22 Dow Global Technologies Inc processo para expressão de proteìna melhorada através de engenharia de cepa
US7998930B2 (en) 2004-11-04 2011-08-16 Hanall Biopharma Co., Ltd. Modified growth hormones
EP1836298B1 (en) * 2004-12-22 2012-01-18 Ambrx, Inc. COMPOSITIONS OF AMINOACYL-tRNA SYNTHETASE AND USES THEREOF
CN103520735B (zh) * 2004-12-22 2015-11-25 Ambrx公司 包含非天然编码的氨基酸的人生长激素配方
BRPI0519430A2 (pt) 2004-12-22 2009-02-10 Ambrx Inc hormânio do crescimento humano modificado
EP1836316A4 (en) 2004-12-22 2009-07-22 Ambrx Inc PROCESS FOR EXPRESSION AND CLEANING OF RECOMBINANT HUMAN GROWTH HORMONE
AU2006255122B2 (en) * 2005-06-03 2010-10-21 Ambrx, Inc. Improved human interferon molecules and their uses
AU2005335491B2 (en) * 2005-08-18 2010-11-25 Ambrx, Inc. Compositions of tRNA and uses thereof
ES2577292T3 (es) 2005-11-07 2016-07-14 Genentech, Inc. Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso
CN101400646A (zh) * 2005-11-08 2009-04-01 Ambrx公司 用于修饰非天然氨基酸和非天然氨基酸多肽的促进剂
DK2339014T3 (en) * 2005-11-16 2015-07-20 Ambrx Inc Methods and compositions comprising non-natural amino acids
CA2631327C (en) * 2005-12-02 2015-10-13 Genentech, Inc. Her2 binding polypeptides and uses thereof
EP1973951A2 (en) * 2005-12-02 2008-10-01 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
WO2007070659A2 (en) * 2005-12-14 2007-06-21 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides
CN106008699A (zh) * 2006-09-08 2016-10-12 Ambrx公司 经修饰的人类血浆多肽或Fc骨架和其用途
EP2064333B1 (en) * 2006-09-08 2014-02-26 Ambrx, Inc. Suppressor trna transcription in vertebrate cells
JP5399906B2 (ja) * 2006-09-08 2014-01-29 アンブルックス，インコーポレイテッド 脊椎動物細胞用のハイブリッドサプレッサーｔｒｎａ
EP2468869B1 (en) 2007-01-31 2015-03-18 Pfenex Inc. Bacterial leader sequences for increased expression
CN107501407B (zh) 2007-03-30 2022-03-18 Ambrx公司 经修饰fgf-21多肽和其用途
CN101784655A (zh) * 2007-04-27 2010-07-21 菲尼克斯股份有限公司 可溶性重组二十面体病毒样颗粒的改良生成和体内装配
US9580719B2 (en) 2007-04-27 2017-02-28 Pfenex, Inc. Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins
US9394571B2 (en) 2007-04-27 2016-07-19 Pfenex Inc. Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins
US8114630B2 (en) * 2007-05-02 2012-02-14 Ambrx, Inc. Modified interferon beta polypeptides and their uses
MX2010005317A (es) * 2007-11-20 2010-06-02 Ambrx Inc Polipeptidos de insulina modificados y sus usos.
MX344166B (es) 2008-02-08 2016-12-07 Ambrx Inc Leptina-polipeptidos modificados y sus usos.
US20110020830A1 (en) * 2008-03-31 2011-01-27 Schneider Jane C Design for rapidly cloning one or more polypeptide chains into an expression system
CN102159230A (zh) * 2008-07-23 2011-08-17 Ambrx公司 经修饰的牛g-csf多肽和其用途
AU2009296267B2 (en) * 2008-09-26 2013-10-31 Ambrx, Inc. Non-natural amino acid replication-dependent microorganisms and vaccines
BR122012024318A2 (pt) 2008-09-26 2019-07-30 Ambrx, Inc. Polipeptídeos modificados de eritropoetina animal e seus usos
AU2010247938B2 (en) 2009-05-11 2016-02-18 Pelican Technology Holdings, Inc. Production of recombinant proteins utilizing non-antibiotic selection methods and the incorporation of non-natural amino acids therein
EP2542574B1 (en) * 2010-03-04 2017-08-09 Pfenex Inc. Method for producing soluble recombinant interferon protein without denaturing
KR20130072201A (ko) 2010-03-30 2013-07-01 피페넥스 인크. 재조합 독소 단백질의 고수준 발현
AU2011235210B2 (en) 2010-04-01 2015-07-16 Pfenex Inc. Methods for G-CSF production in a Pseudomonas host cell
EA030886B1 (ru) 2010-08-17 2018-10-31 Амбркс, Инк. Модифицированные полипептиды релаксина, содержащие некодируемую в природе аминокислоту, связанную с полимером, и их применение
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
TWI480288B (zh) 2010-09-23 2015-04-11 Lilly Co Eli 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物
US9169304B2 (en) 2012-05-01 2015-10-27 Pfenex Inc. Process for purifying recombinant Plasmodium falciparum circumsporozoite protein
CN114805532A (zh) 2014-10-24 2022-07-29 百时美施贵宝公司 修饰的fgf-21多肽及其用途
CA2968491C (en) 2014-11-20 2023-09-26 Biological E Limited Codon optimized polynucleotide for high level expression of crm197
CN107532190B (zh) 2014-12-01 2021-07-09 菲尼克斯公司 用于肽生产的融合伴侣
PE20191716A1 (es) 2017-02-08 2019-12-05 Bristol Myers Squibb Co Polipeptidos de relaxina modificada que comprenden un mejorador farmacocinetico y sus usos
CA3077393A1 (en) 2017-10-27 2019-05-02 Pfenex Inc. Bacterial leader sequences for periplasmic protein expression
JP7784804B2 (ja) 2017-10-27 2025-12-12 フェネックス インク． 組み換えｅｒｗｉｎｉａアスパラギナーゼの製造のための方法
EP3701036A4 (en) 2017-10-27 2021-09-01 Pfenex Inc. PROCESS FOR PRODUCING ASPARAGINASE OF E. COLI
AU2021410080A1 (en) 2020-12-23 2023-06-22 Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd. Methods of purifying charge-shielded fusion proteins
WO2022211829A1 (en) 2021-03-30 2022-10-06 Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd. Dosing of recombinant l-asparaginase

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE52036B1 (en) * 1979-05-24 1987-05-27 Univ California Non-passageable viruses
GR68404B (ja) * 1979-06-01 1981-12-29 Univ California
US4342832A (en) * 1979-07-05 1982-08-03 Genentech, Inc. Method of constructing a replicable cloning vehicle having quasi-synthetic genes
US4338397A (en) * 1980-04-11 1982-07-06 President And Fellows Of Harvard College Mature protein synthesis
IE52755B1 (en) * 1980-08-26 1988-02-17 Univ California Bovine pre-growth and growth hormone
FI64813C (fi) * 1980-12-31 1984-01-10 Ilkka Antero Palva Foerfarande foer producering av ett utvalt aeggviteaemne och vid foerfarandet anvaenda rekombinantplasmidvektorer
GR76959B (ja) * 1981-01-02 1984-09-04 Univ New York State Res Found
US4775622A (en) * 1982-03-08 1988-10-04 Genentech, Inc. Expression, processing and secretion of heterologous protein by yeast
IE55244B1 (en) * 1982-05-25 1990-07-18 Lilly Co Eli Cloning vectors for expression of exogenous protein
JPS59135892A (ja) * 1983-01-25 1984-08-04 Kunio Yamane シグナルアミノ酸配列をコードするｄｎａ

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PROC NATL ACAD SCI USA=1980 *

Also Published As

Publication number Publication date
ES531896A0 (es) 1985-12-01
DK204684D0 (da) 1984-04-24
JPS6045595A (ja) 1985-03-12
IL71622A (en) 1990-03-19
AU2721984A (en) 1984-11-01
IL71622A0 (en) 1984-07-31
EP0127305A1 (en) 1984-12-05
ES8602136A1 (es) 1985-12-01
AU586609B2 (en) 1989-07-20
DK204684A (da) 1984-10-26
US4755465A (en) 1988-07-05
CA1267099A (en) 1990-03-27
ZA843062B (en) 1984-11-28
NZ207924A (en) 1988-03-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH05252936A (ja) 大腸菌及びシュードモナスに於ける正確に処理されたヒト成長ホルモンの分泌
US4859600A (en) Recombinant procaryotic cell containing correctly processed human growth hormone
EP0319049B1 (en) Growth hormone analogs, pharmaceutical and veterinary compositions containing said analogs and methods for production thereof
US5330971A (en) Growth hormone fusion proteins, methods of production, and methods of treatment
DE69228705T2 (de) Methode zur rückfaltung von igf-i in eine aktive konformation
IE58317B1 (en) Human insulin-like growth factor (igf) produced from a recombinant host, process, expression vector and recombinant host therefore, and igf-containing pharmaceutical composition
KR940005585B1 (ko) 과립구 대식세포 콜로니 촉진 인자(gm-csf)단백질의 제조방법
IE914347A1 (en) Fusion polypeptides
JP3311346B2 (ja) 改良されたキメラ毒素
EP0434605B1 (en) Novel process for the production of unfused protein in E. coli
US5599792A (en) Bone-stimulating, non-vasoactive parathyroid hormone variants
JP3319605B2 (ja) ストレプトミセスにおける外来タン白質の製造法
DE3887856T2 (de) Methode zur Herstellung von natürlichen, menschlichen Wachstumshormon in reiner Form.
JP2677795B2 (ja) 二つのイオン形式から成るソマトメジンｃの精製および単離方法
EP0138644B1 (en) Novel plasmid vectors
Barthelemy et al. Production and secretion of human interleukin 6 into the periplasm of Escherichia coli: efficient processing of N-terminal variants of hIL6 by the E. coli signal peptidase
US5256546A (en) Bacterial expression of porcine growth hormone
US5637495A (en) Plasmids for production of human growth hormone or polypeptide analog thereof, hosts containing the plasmids, products manufactured thereby, and related methods
US5527691A (en) Expression vectors containing lambdapl promoter and T1 T2 rRNA termination sequence, plasmids containing the vectors, hosts containing the plasmids and related methods
US5198361A (en) Plasmids for production of met-asp-gln bovine growth hormone, hosts containing the plasmids, products manufactured thereby and related methods
US5670371A (en) Bacterial expression of superoxide dismutase
US5112744A (en) Plasmids for the production of human Cu-Zn superoxide dismutase, bacterial hosts containing the plasmids and methods for production and recovery of such superoxide dismutase
JP2594535B2 (ja) 高発現ベクターおよびその利用
JP2682738B2 (ja) 成長ホルモン融合蛋白質
US5759816A (en) Expression vectors containing λPL promoter and T1 T2 rRNA termination sequence plasmids containing the vectors hosts containing the plasmids and related methods