JPH05262664A - 血液凝固第ｖｉｉｉ因子の吸着材 - Google Patents

血液凝固第ｖｉｉｉ因子の吸着材

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JPH05262664A
JPH05262664A JP4302211A JP30221192A JPH05262664A JP H05262664 A JPH05262664 A JP H05262664A JP 4302211 A JP4302211 A JP 4302211A JP 30221192 A JP30221192 A JP 30221192A JP H05262664 A JPH05262664 A JP H05262664A
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factor viii
vinyl monomer
plasma
group
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Hisafumi Ito
尚史 伊藤
Shigeru Igarashi
滋 五十嵐
Toru Suzuki
亨 鈴木
Sukekazu Tomono
丞計 伴野
Sadami Sekiguchi
定美 関口
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 第ＶＩＩＩ因子を含む種々の血漿蛋白質を含
有する溶液から第ＶＩＩＩ因子を直接、特異的且つ効率
的に吸着することのでき、しかも吸着された第ＶＩＩＩ
因子の脱着・回収が容易にできる吸着材を提供する。 【構成】 ポリカチオンを有する分子が水不溶性担体に
結合・固定化されてなる複合体よりなり、ポリカチオン
を有する分子の分子量が少くとも１５，０００であり、
該複合体１ミリリットルあたりの正電荷密度が１〜２０
０μｅｑであることを特徴とする。 【効果】 本発明の吸着材は第ＶＩＩＩ因子に対して極
めて特異的な吸着挙動を示し、第ＶＩＩＩ因子を含む種
々の血漿蛋白質を含有する溶液から第ＶＩＩＩ因子を高
い選択率と高い収率で吸着、回収することができる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、血液凝固第ＶＩＩＩ因
子（以後、屡々、単に“第ＶＩＩＩ因子”と称す）の吸
着材に関する。更に詳しくは、第ＶＩＩＩ因子を含む種
々の血漿蛋白質を含有する溶液から第ＶＩＩＩ因子を効
率的に吸着、回収するのに適した、ポリカチオンを有す
る分子が水不溶性担体に結合・固定化された複合体より
なる吸着材に関する。
【０００２】
【従来の技術】血液凝固は、多種類の因子が複雑に関与
する現象であり、これらの因子の質的或いは量的な欠損
は出血性疾患として観察される。先天的な出血性疾患の
例として血友病Ａを挙げることができる。血友病Ａは、
第ＶＩＩＩ因子と呼ばれる蛋白質の欠損によるもので、
血友病Ａ患者が健常者と変わらない生活を営むために
は、不足している第ＶＩＩＩ因子を補充する必要があ
る。
【０００３】第ＶＩＩＩ因子を補充するために、第ＶＩ
ＩＩ因子濃縮製剤と呼ばれる血漿分画製剤が広く用いら
れている。第ＶＩＩＩ因子濃縮製剤は通常、クリオプレ
シピテートと呼ばれる血漿からの沈澱物を原料とし、フ
ィブリノゲンやフィブロネクチン等の夾雑蛋白質を除去
することにより調製されている［Ｓ．Ｊ．Ｓｌｉｃｈｔ
ｅｒ ｅｔ ａｌ．：Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，Ｖｏ
ｌ．１６，ｐｐ．６１６−６２６（１９７６）］。
【０００４】
【発明が解決しよとする課題】クリオプレシピテート
は、新鮮凍結血漿を低温下で融解することにより生じる
沈澱を遠心分離して得ることができる。しかし、血漿に
含まれる第ＶＩＩＩ因子を１００％とすると、クリオプ
レシピテートでの第ＶＩＩＩ因子の回収率は４０〜５０
％と低値である。さらに、クリオプレシピテート中には
夾雑蛋白質が多く含まれているため、それらの夾雑蛋白
質を除去する必要があり、一般にジエチルアミノエチル
基のような低分子リガンドを水不溶性担体に固定化した
吸着材［Ｃ．Ｍｉｃｈａｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．：Ｖｏ
ｘ Ｓａｎｇ，Ｖｏｌ．５５，ｐｐ．２０２−２１０
（１９８８）］が使われることが多いが、この吸着材
は、血液凝固第ＩＸ因子（以後、屡々、単に“第ＩＸ因
子”と称す）が第ＶＩＩＩ因子と共存する場合には、第
ＩＸ因子の方をより多く吸着するため、第ＶＩＩＩ因子
濃縮製剤を調製するまでには更に複雑な精製工程が必要
となり、最終的な製剤における第ＶＩＩＩ因子の回収率
は約２０％にまで低下するという問題点がある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】以上のような問題点を解
決するため、血漿から直接、或いは、クリオプレシピテ
ート分取後の上清から効率よく第ＶＩＩＩ因子を吸着、
回収することのできる吸着材の開発が望まれていた。
【０００６】第ＶＩＩＩ因子は分子量約３０万の蛋白質
であり、そのアミノ酸配列解析から、酸性アミノ酸に富
む領域の存在することが知られている［Ｇ．Ａ．Ｖｅｈ
ａｒｅｔ ａｌ．：Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３１２，ｐ
ｐ．３３７−３４２（１９８４）］。さらに、血液中で
は分子量１００万〜２，０００万のマルチマー構造を有
するフォンヴィルブランド因子との複合体として存在す
ることが知られている（Ｚ．Ｍ．Ｒｕｇｇｅｒｉ ｅｔ
ａｌ．：Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．５７，ｐｐ．１１４０
−１１４３（１９８１））。
【０００７】本発明者らは、鋭意研究の結果、このよう
な巨大な分子量を有する蛋白質を効率良く吸着するため
には、陰イオン交換基を多数個有し且つ十分な長さを有
していて、該複合体と複数点で相互作用することにより
強固に吸着することが可能な物質を有する吸着材が好適
であることを知見した。更にこのような吸着材を開発す
べく鋭意検討の結果、ポリカチオンを有する分子が水不
溶性担体に結合・固定化してなる複合体よりなる吸着材
が第ＶＩＩＩ因子に対して極めて特異的な吸着挙動を示
し、第ＶＩＩＩ因子を含む種々の血漿蛋白質を含有する
溶液から第ＶＩＩＩ因子を高い選択率と高い収率で吸
着、回収することができることを知見した。本発明は、
これらの知見に基づいて完成したものである。
【０００８】したがって、本発明の１つの且つ主たる目
的は、第ＶＩＩＩ因子を含む種々の血漿蛋白質を含有す
る溶液から第ＶＩＩＩ因子を直接、特異的且つ効率的に
吸着することのでき、しかも吸着された第ＶＩＩＩ因子
の脱着・回収が容易にできる吸着材を提供することであ
る。
【０００９】本発明の上記及び他の諸目的、諸特徴、諸
利益は、次に述べる本発明の詳細な説明及び添付の請求
範囲の記載から明らかになろう。
【００１０】本発明によれば、ポリカチオンを有する分
子が水不溶性担体に結合・固定化されてなる複合体より
なり、ポリカチオンを有する分子の分子量が少くとも１
５，０００であり、該複合体１ミリリットルあたりの正
電荷密度が１μｅｑ〜２００μｅｑであることを特徴と
する血液凝固第ＶＩＩＩ因子の吸着材が提供される。
【００１１】本発明の吸着材に固定化されたポリカチオ
ンを有する分子は、１分子の分子量が少くとも１５，０
００であり、分子中に陰イオン交換基を多数個持つもの
をいう。陰イオン交換基としては、一級アミノ基、二級
アミノ基、三級アミノ基、四級アンモニウム塩基等をあ
げることができる。これらの陰イオン交換基の１種類が
単独でポリカチオンを有する分子の中に存在してもよ
く、また、２種類以上が存在してもかまわない。
【００１２】このような分子の例として、側鎖に陰イオ
ン交換基を有する塩基性ビニル単量体の単独重合体、ま
たは、該塩基性ビニル単量体と、それと共重合し得るビ
ニル単量体との共重合体を挙げることができる。また、
該塩基性ビニル単量体のかわりに、重合後に陰イオン交
換基をつけることのできる側鎖を有するビニル単量体を
用いることもできる。さらに、リジンやアルギニン等の
塩基性アミノ酸を含むポリペプチドを挙げることができ
る。
【００１３】側鎖に陰イオン交換基を有する塩基性ビニ
ル単量体としては、一級アミノ基、二級アミノ基、三級
アミノ基、四級アンモニウム塩基を有するビニル単量体
が含まれる。このようなビニル単量体の例としては、そ
れぞれアミノ基を有するアクリル酸誘導体、メタアクリ
ル酸誘導体、アクリル酸アミド誘導体およびメタアクリ
ル酸アミド誘導体、更には側鎖にピリジル基、イミダゾ
リル基等の含窒素芳香環基を有するビニル化合物、およ
びアミノ基で置換されたスチレン誘導体等が用いられ
る。具体的な例として、ジメチルアミノエチルアクリレ
ート、ジエチルアミノエチルアクリレート、ジメチルア
ミノプロピルアクリレート、３−ジメチルアミノ−２−
ヒドロキシプロピルアクリレート、３−ジエチルアミノ
−２−ヒドロキシプロピルアクリレート、Ｎ−ジメチル
アミノエチルアクリル酸アミド、Ｎ−ジエチルアミノエ
チルアクリル酸アミド、ジメチルアミノエチルメタアク
リレート、ジエチルアミノエチルメタアクリレート、ジ
エチルアミノプロピルメタアクリレート、３−ジメチル
アミノ−２−ヒドロキシプロピルメタアクリレート、３
−ジエチルアミノ−２−ヒドロキシプロピルメタアクリ
レート、Ｎ−ジメチルアミノエチルメタアクリル酸アミ
ド、Ｎ−ジエチルアミノエチルメタアクリル酸アミド、
および次式：
【００１４】
【化１】
【００１５】（但し、Ｒは−ＣＨ3または−Ｃ2Ｈ5 、Ｘ
は（ＣＨ2）n 、ｎは１〜３の整数である）で示される
スチレン誘導体を挙げることができる。また、例えば、
【００１６】
【化２】
【００１７】のような、重合後にアミノ化のできる側鎖
を有するビニル単量体を用いることもできる。
【００１８】上述の塩基性ビニル単量体と共重合し得る
ビニル単量体の例としては、Ｎ−ビニルピロリドン、ア
クリル酸エステル、メタアクリル酸エステル、Ｎ−アル
キルアクリル酸アミド、Ｎ−アルキルメタアクリル酸ア
ミド等を挙げることができる。このようなビニル単量体
で好ましい具体的な例としては、ヒドロキシエチルアク
リレート、ヒドロキシプロピルアクリレート、ヒドロキ
シエチルメタアクリレート、およびヒドロキシプロピル
メタアクリレートを挙げることができる。
【００１９】上に挙げた、ポリカチオンを有する分子の
例のうち、塩基性ビニル単量体として、アミノ基を有す
るアクリル酸誘導体、メタアクリル酸誘導体、アクリル
酸アミド誘導体またはメタアクリル酸アミド誘導体を用
い、塩基性ビニル単量体と共重合し得るビニル単量体と
して、アクリル酸エステル、メタアクリル酸エステル、
Ｎ−アルキルアクリル酸アミドまたはＮ−アルキルメタ
アクリル酸アミドを用いて得られる共重合体が好まし
い。
【００２０】本発明のポリカチオンを有する分子の分子
量は、少くとも１５，０００である。分子量がこれより
小さいときには、第ＶＩＩＩ因子が極めて巨大な蛋白質
であるために、該分子と第ＶＩＩＩ因子との十分な相互
作用が期待しにくい。また、本発明の吸着材は、それを
構成するポリカチオンを有する分子および水不溶性担体
よるなる複合体１ミリリットルあたりの正電荷密度が１
μｅｑ〜２００μｅｑである。該複合体１ミリリットル
あたりの正電荷密度が１μｅｑ未満の場合には、第ＶＩ
ＩＩ因子が十分に吸着されず、また、２００μｅｑを越
える場合には、第ＶＩＩＩ因子の吸着が強くなり溶出が
困難になることや他の蛋白質の吸着も多くなる等の問題
が生じてくる。なお、本発明の吸着材を構成する複合体
の正電荷密度は、以下に示す方法により求めたものをい
う。水で膨潤させた吸着材１ミリリットルをプラスチッ
ク製カラムに入れ１規定塩酸、水、１規定水酸化ナトリ
ウム水溶液の順で洗った後、カラムからの落下液のｐＨ
が６．５程度になるまで水で洗う。その後、５０ミリリ
ットルの試験管に吸着材を移して０．０１規定塩酸２０
ミリリットルを入れて２４時間ゆるやかに振とうする。
上清５ミリリットルを、２０ミリリットルの三角フラス
コに移し、フェノールフタレイン水溶液を指示薬として
入れ、０．０１規定水酸化ナトリウム水溶液で、ビュレ
ットを用いて滴定を行うことにより測定し、正電荷密度
を求める。
【００２１】本発明で用いられる水不溶性担体は、親水
性担体、疎水性担体いずれも使用できるが、疎水性担体
では第ＶＩＩＩ因子以外の蛋白質の該担体への非特異的
吸着が生じるため、親水性担体の方が好ましい結果を与
える。
【００２２】又、水不溶性担体はポリカチオンを有する
分子を化学結合により固定化するのに利用できる官能基
を有するものであれば特に限定されない。化学結合は共
有結合によるものが好ましい。該官能基を水不溶性担体
自体が持たない場合でも、適当な化学的修飾によりポリ
カチオンを有する分子の固定化に利用し得る官能基を生
じさせることができるものは、本発明に使用することが
できる。
【００２３】水不溶性担体の形状は、粒子状、繊維状、
中空糸状、膜状等いずれの公知の形状も用い得るが、吸
着材としての取扱い等の点から、粒子状、繊維状のもの
が好ましい。
【００２４】このような水不溶性担体のうち粒子状担体
としては、アガロース系、デキストラン系、セルロース
系等の天然高分子系担体、ポリアクリルアミド系、ポリ
アミド系、ポリエステル系、ポリウレタン系、ビニル化
合物の重合体等の合成高分子系担体を挙げることができ
る。多孔性構造を有する担体を用いると、担体の表面積
が増大するため、固定化されたポリカチオンを有する分
子と、第ＶＩＩＩ因子との接触が容易になり、吸着され
る第ＶＩＩＩ因子の量が増すという良好な結果を与え
る。特に、親水性モノマー単位により親水化されたビニ
ル化合物の重合体が、多孔性構造の担体を作りやすく、
また、物理的強度の大きい担体が得やすいため、第ＶＩ
ＩＩ因子の精製工程に組入れる時に、好ましい結果を与
える。なかでも、ビニルアルコール単位を有する架橋共
重合体が蛋白質の担体への非特異的吸着が少なくなり、
好ましい結果を与えることが多い。また、繊維状担体と
しては、セルロース系、ポリエステル系等公知の繊維を
用いることができる。繊維状担体を用いる場合には、そ
の繊維径が０．０２デニールないし１０デニールの範囲
にあるものが良い。
【００２５】多孔性構造を有する粒子状担体は、排除限
界分子量が１，０００ないし１００，０００，０００の
範囲であり、平均粒子径が５ないし１，０００μｍであ
るものが好ましい。
【００２６】ポリカチオンを有する分子の水不溶性担体
への結合・固定化には、化学結合、特に共有結合による
方法を用いるのがよい。そのためには、通常、固定化酵
素やアフィニティクロマトグラフィーで用いられる公知
の水不溶性担体の活性化方法およびポリカチオンを有す
る分子の固定化方法を用いることができる［笠井献一
ら：「アフィニティークロマトグラフィー」(株）東京
化学同人発行（１９９１）］。また、必要に応じて水不
溶性担体とポリカチオンを有する分子との間に任意の長
さの分子（スペーサー）を導入して使用することもでき
る。
【００２７】水不溶性担体を活性化して生じる活性基
は、ポリカチオンを有する分子のアミノ基、カルボキシ
ル基、水酸基、チオール基等の活性水素を有する求核反
応基と反応し得る基であり、具体的には、エポキシ基、
トレシル基（ｔｒｅｓｙｌ ｇｒｏｕｐ）（−Ｏ−ＳＯ
2 −ＣＨ2 −ＣＦ3）、イミダゾリルカルバメート基、
イミドカーボネート基、カーボネート基、ホルミル基、
ブロモアセチル基、ハロゲン化トリアジン基などを挙げ
ることができる。
【００２８】本発明の吸着材は、第ＶＩＩＩ因子を含む
種々の血漿蛋白質を含有する溶液と接触させることによ
り、該溶液中の第ＶＩＩＩ因子を吸着する。この時の第
ＶＩＩＩ因子を含む種々の血漿蛋白質を含有する溶液と
しては、血漿、あるいは血漿からの生成物を挙げること
ができる。血漿からの生成物としては、前述のクリオプ
レシピテート、血漿からクリオプレシピテートを分離除
去した後の上清、イオン交換樹脂等による適当な処理を
施して夾雑成分の一部または全部を除去した血漿などを
挙げることができる。
【００２９】本発明の吸着材は種々の条件下で、血漿中
の第ＶＩＩＩ因子を吸着することが可能であるが、通常
は、常温、常圧での吸着を行うのが、第ＶＩＩＩ因子の
安定性の点から好ましい。温度は、第ＶＩＩＩ因子の安
定な範囲でおこなわれるが、通常、０〜５０℃で行う。
吸着時間も特に限定はされないが、通常は、１０分〜２
時間の範囲で行うが、温度、吸着の方法により、適当な
時間を選択することができる。
【００３０】吸着の方法については、回分式またはカラ
ム式のどちらでも実施し得るが、多量の血漿を処理する
場合には回分式の方が短時間で処理できるため好ましい
ことが多い。
【００３１】使用する吸着材の量については、吸着材／
血漿の比の値が低いほど、コストの点から有利である
が、本発明の吸着材では、吸着材／血漿の容量比の値が
１／２０〜１／１００の範囲で用いることができる。
【００３２】
【実施例】以下の実施例において、本発明をさらに詳細
に説明するが、本発明は実施例に何ら限定されるもので
はない。
【００３３】実施例１ 水不溶性担体として、ビニルアルコール単位を有する架
橋共重合体を下に示すようにして合成した。酢酸ビニル
１００ｇ、トリアリルイソシアヌレート６４．３ｇ、酢
酸エチル１００ｇ、ヘプタン１００ｇ、ポリ酢酸ビニル
（重合度５００）７．５ｇおよび２，２’−アゾビスイ
ソブチロニトリル３．８ｇよりなる均一混合液と、ポリ
ビニルアルコール１重量％、リン酸２水素ナトリウム２
水和物０．０５重量％およびリン酸水素２ナトリウム１
２水和物１．５重量％を溶解した水４００ミリリットル
とを混合し、十分撹拌したのち、６５℃で１８時間、さ
らに７５℃で５時間加熱撹拌して、懸濁重合を行い、粒
状架橋共重合体を得た。この架橋共重合体を洗浄後、水
酸化ナトリウム４６．５ｇを含むメタノール２リットル
と共に４０℃で１８時間撹拌して、架橋共重合体のケン
化反応を行い、ビニルアルコール単位を有する架橋共重
合体よりなる水不溶性担体を得た。この水不溶性担体の
平均粒子径は、１００μｍ、排除限界分子量は、２，０
００，０００であった。
【００３４】次に、ポリカチオンを有する分子として、
次に示すような共重合体を合成した。 ２−ヒドロキシ
エチルメタアクリレート０．８モルとジエチルアミノエ
チルメタアクリレート０．２モルを含むエタノール溶液
１リットルに、重合開始剤として２，２’−アゾビスイ
ソブチロニトリル０．００５モルを加えて、６０℃で８
時間、ラジカル共重合反応を行った。このようにして得
たポリカチオンを有する分子の分子量を、ジメチルホル
ムアミドを溶離液としたゲル浸透クロマトグラフィー
（カラム：ショウデックスＡＤ-８０Ｍ／Ｓ，昭和電工
（株）製）により求めたところ、１８万（ポリエチレン
グリコール換算）であった。
【００３５】上記で得た水不溶性担体としての架橋共重
合体（アセトンで膨潤したもの）３ミリリットルをアセ
トン２．１ミリリットル中に懸濁して、この懸濁液に、
トレシルクロライド４５マイクロリットル、ピリジン１
３５マイクロリットルを加えて、室温で１０分間振とう
して、活性基としてトレシル基を有する活性化担体を得
た。
【００３６】上記の、２−ヒドロキシエチルメタアクリ
レートとジエチルアミノエチルメタアクリレートの共重
合体３００ｍｇを５０％ジメチルホルムアミド水溶液６
ミリリットルに溶解した溶液に、上記の活性化担体３ミ
リリットルを加え、水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを８
に調整した後、室温で２４時間振とうして、上記のポリ
カチオンを有する分子が上記水不溶性担体に結合・固定
化されてなる複合体である吸着材を得た。水酸化ナトリ
ウム水溶液による滴定から求めた該吸着材１ミリリット
ルあたりの正電荷密度は、４０μｅｑであった。
【００３７】このようにして得られた吸着材０．２ミリ
リットルと健常者血漿４ミリリットルをプラスチック製
試験管に入れ、室温で１時間緩やかに回転しながら撹拌
して吸着実験を行った。血液凝固第ＶＩＩＩ因子活性測
定用の市販キット（テストチームＦＶＩＩＩ、第一化学
薬品（株）製）を用いて、吸着実験前後の血漿中の血液
凝固第ＶＩＩＩ因子活性を測定したところ、吸着実験後
の血漿中の第ＶＩＩＩ因子活性は、吸着実験前の７％で
あった。
【００３８】この第ＶＩＩＩ因子活性測定の結果が、第
ＶＩＩＩ因子の失活によるものではなく、本発明の吸着
材に第ＶＩＩＩ因子が吸着された結果であることを確認
するために、血液凝固第ＶＩＩＩ因子抗原測定用の市販
キット（アセラクロムＦＶＩＩＩＲ：Ａｇ、ベーリンガ
ーマンハイム山之内（株）製）を用いて、上記の吸着実
験前後の血漿中の血液凝固第ＶＩＩＩ因子抗原量を測定
したところ、吸着実験後の第ＶＩＩＩ因子抗原量は吸着
実験前の１０％であった。
【００３９】吸着実験後の第ＶＩＩＩ因子活性及び第Ｖ
ＩＩＩ因子抗原量の減少が対応することから、血漿中の
第ＶＩＩＩ因子は、本発明の吸着材に吸着されたことが
確認された。なお、この活性と抗原量との対応は、以後
の実施例においても同等であった。
【００４０】次に、第ＶＩＩＩ因子を取得するために本
発明の吸着材を用いる時の有用性を確認するために、上
記の吸着実験後の吸着材からの第ＶＩＩＩ因子の溶出実
験を行なった。
【００４１】吸着実験後の吸着材をプラスチック製カラ
ムに移し、１０ｍＭクエン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ
７．４）２ミリリットルで３回洗浄した。その後で、２
０ｍＭリン酸ナトリウム、１％リジン、１Ｍ塩化ナトリ
ウム、２０％エチレングリコール、１％トリトンＸ１０
０を含む水溶液（ｐＨ６．０）２ミリリットルを２回用
いて、第ＶＩＩＩ因子を溶出させた。溶出液中に含まれ
る第ＶＩＩＩ因子活性を測定したところ、吸着実験に用
いた血漿中の６９％の第ＶＩＩＩ因子が回収されてい
た。
【００４２】以上のように、高い回収率で第ＶＩＩＩ因
子が回収されることが確認された。なお、以後の実施例
においても、同様に高い回収率が得られた。
【００４３】実施例２ 実施例１で得た水不溶性担体１０ミリリットルを１２ミ
リリットルのジメチルスルフォキシド中に懸濁させ、こ
の懸濁液に、８ミリリットルのエピクロロヒドリンと１
ミリリットルの５０％水酸化ナトリウム水溶液を加え、
３０℃で５時間振とうして、活性基としてエポキシ基を
有する活性化担体を得た。
【００４４】実施例１で合成したポリカチオンを有する
分子１３５ｍｇを５０％ジメチルホルムアミド水溶液１
３．５ミリリットルに溶解した溶液に、上記のようにし
て得た活性化担体９ミリリットルを加え、水酸化ナトリ
ウム水溶液でｐＨを１２に調整した後、４５℃で２０時
間振とうして、２−ヒドロキシエチルメタアクリレート
とジエチルアミノエチルメタアクリレートとの共重合体
を固定化した吸着材を得た。水酸化ナトリウム水溶液に
よる滴定から求めた該吸着材１ミリリットルあたりの正
電荷密度は、１１０μｅｑであった。
【００４５】実施例１と同様に、健常者血漿を用いて吸
着実験を行ったところ、吸着実験後の血漿中の第ＶＩＩ
Ｉ因子活性は吸着実験前の１６％であった。
【００４６】実施例３ 水不溶性担体としてアガロース系担体であるセファロー
ス（ファルマシア社、スウェーデン）を用いた。実施例
１で合成した２−ヒドロキシエチルメタアクリレートと
ジエチルアミノエチルメタアクリレートの共重合体６０
ｍｇを５０％ジメチルホルムアミド水溶液６ミリリット
ルに溶解した溶液に、トレシル基を活性基として有する
活性化担体として、市販のトレシル活性化セファロース
４Ｂ（ファルマシア社、スウェーデン）３ミリリットル
を加えて、水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを８に調整し
た後、室温で２４時間振とうして、吸着材を得た。水酸
化ナトリウム水溶液による滴定から求めた該吸着材１ミ
リリットルあたりの正電荷密度は１２μｅｑであった。
【００４７】実施例１と同様に、健常者血漿を用いて吸
着実験を行ったところ、吸着実験後の血漿中の第ＶＩＩ
Ｉ因子活性は吸着実験前の１０％であった。
【００４８】実施例４ 水不溶性担体として親水性ビニルポリマー系担体である
トヨパール（東ソー（株）製）を用いた。トレシル基を
活性基として有する活性化担体として、市販のＡＦ−ト
レシルトヨパール６５０（東ソー（株）製）３ミリリッ
トルを、実施例１で合成した２−ヒドロキシエチルメタ
アクリレートとジエチルアミノエチルメタアクリレート
との共重合体３００ｍｇを５０％ジメチルホルムアミド
水溶液６ミリリットルに溶解した溶液に加えて、水酸化
ナトリウム水溶液でｐＨを８に調整した後、室温で２０
時間振とうして、吸着材を得た。水酸化ナトリウム水溶
液による滴定から求めた該吸着材１ミリリットルあたり
の正電荷密度は２０μｅｑであった。 実施例１と同様
に、健常者血漿を用いて吸着実験を行ったところ、吸着
実験後の血漿中の第ＶＩＩＩ因子活性は、吸着実験前の
２８％であった。
【００４９】実施例５ 水不溶性担体として実施例１で合成したビニルアルコー
ル単位を有する架橋共重合体を用い、実施例１と同様に
して、エピクロロヒドリンを用いてエポキシ基を活性基
として有する活性化担体を得た。ポリカチオンを有する
分子として、ポリーＬーリジン（分子量２万、ＩＣＮイ
ムノバイオロジカル社、アメリカ）を１００ｍｇ／ミリ
リットルの濃度になるように０．２Ｍリン酸ナトリウム
水溶液（ｐＨ１０）に溶解した溶液６ミリリットルに、
上記の活性化担体３ミリリットルを加え、４５℃で２０
時間振とうして、吸着材を得た。水酸化ナトリウム水溶
液による滴定から求めた該吸着材１ミリリットルあたり
の正電荷密度は９２μｅｑであった。
【００５０】実施例１と同様に、健常者血漿を用いて吸
着実験を行ったところ、吸着実験後の血漿中の第ＶＩＩ
Ｉ因子活性は吸着実験前の２８％であった。
【００５１】実施例６ 実施例１で用いた吸着材を用いて健常者血漿３ミリリッ
トルに対して、吸着材の量を０．１ｇから０．６ｇまで
変えて、第ＶＩＩＩ因子と第ＩＸ因子の吸着挙動を調べ
た。
【００５２】第ＶＩＩＩ因子と第ＩＸ因子の吸着率は、
それぞれ下に記すようになった。 吸着材０．１ｇの時 １３％、１６％（第ＶＩＩＩ因
子、第ＩＸ因子の順。以下同じ） 吸着材０．２ｇの時 ３２％、２９％ 吸着材０．３ｇの時 ６８％、４５％ 吸着材０．４ｇの時 ９０％、５２％ 吸着材０．５ｇの時 ９２％、６０％ 吸着材０．６ｇの時 ９５％、６５％ なお、第ＶＩＩＩ因子と第ＩＸ因子の吸着率は吸着実験
後の血漿中に残存するそれぞれの活性を測定することに
より求めた。第ＶＩＩＩ因子の活性測定は、実施例１と
同様の方法により行った。また、第ＩＸ因子の活性は、
Ｈａｒｄｉｓｔｙ一段法［Ｒ．Ｍ．Ｈａｒｄｉｓｔｙ
ｅｔ ａｌ．：Ｔｈｒｏｍｂｏｓ．Ｄｉａｔｈｅｓ．Ｈ
ａｅｍｏｒｒｈ．，Ｖｏｌ．７，ｐｐ．２１５（１９６
２）］により測定した。
【００５３】比較例１ 市販のＤＥＡＥ−セファローズ（ファルマシア社、スウ
ェーデン）を用いて実施例６と同様にして第ＶＩＩＩ因
子と第ＩＸ因子の吸着挙動を調べたところ、第ＶＩＩＩ
因子と第ＩＸ因子の吸着率は、それぞれ下に記すように
なった。 吸着材０．１ｇの時 ３％、６３％（第ＶＩＩＩ因子、
第ＩＸ因子の順。以下同じ） 吸着材０．２ｇの時 ９％、８９％ 吸着材０．３ｇの時 ２９％、９０％ 吸着材０．４ｇの時 ５９％、９０％ 吸着材０．５ｇの時 ８２％、９０％ 吸着材０．６ｇの時 ９５％、９０％
【００５４】なお、第ＶＩＩＩ因子と第ＩＸ因子の吸着
率は、実施例６と同様に、吸着実験後の血漿中に残存す
るそれぞれの活性を測定することにより求めた。
【００５５】実施例７ 実施例１で合成したビニルアルコール単位を有する架橋
共重合体を、実施例２と同様にしてエポキシ活性化して
得られた活性化担体を用いた。
【００５６】ポリカチオンを有する分子として、実施例
１で合成した共重合体１５０ｍｇを７５％ジメチルスル
フォキシド水溶液６ミリリットルに溶解した溶液に、上
記の活性化担体３ミリリットルを加え、水酸化ナトリウ
ム水溶液でｐＨを８に調整した後、室温で２４時間振と
うして、吸着材を得た。水酸化ナトリウム水溶液による
滴定から求めた該吸着材１ミリリットルあたりの正電荷
密度は、４３μｅｑであった。
【００５７】実施例１と同様に、健常者血漿を用いて吸
着実験を行ったところ、吸着実験後の血漿中の第ＶＩＩ
Ｉ因子活性は吸着実験前の２６％であった。また、実施
例１と同様の溶出液を用いて第ＶＩＩＩ因子を溶出さ
せ、溶出液中に含まれる第ＶＩＩＩ因子活性を測定した
ところ、吸着実験に用いた血漿中の７３％の第ＶＩＩＩ
因子が回収されていた。
【００５８】実施例８ 実施例１での溶出液中のフォンヴィルブランド因子のマ
ルチマー構造を調べるために、２％アガロースゲルを用
いたＳＤＳ電気泳動を行ったところ、吸着実験前の血漿
中のものと同程度の高分子領域までマルチマーの存在が
認められた。
【００５９】
【発明の効果】本発明の血液凝固第ＶＩＩＩ因子の吸着
材は、ポリカチオンを有する分子を有しているため、低
分子化合物をリガンドとして用いた従来の吸着材と比べ
ると、第ＶＩＩＩ因子との相互作用がより特異的にな
り、クリオプレシピテートを経由する従来の方法による
ことなく、血漿をそのまま用いても第ＶＩＩＩ因子を高
率に吸着することができる。このように、本発明の血液
凝固第ＶＩＩＩ因子の吸着材は、血液凝固第ＶＩＩＩ因
子製剤の製造における寄与が著しく大きい。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 伴野 丞計 東京都渋谷区広尾４丁目１番31号 日本赤 十字社 血漿分画センター開発研究部内 (72)発明者 関口 定美 東京都渋谷区広尾４丁目１番31号 日本赤 十字社 血漿分画センター開発研究部内

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ポリカチオンを有する分子が水不溶性担
    体に結合・固定化されてなる複合体よりなり、ポリカチ
    オンを有する分子の分子量が少くとも１５，０００であ
    り、該複合体１ミリリットルあたりの正電荷密度が１μ
    ｅｑ〜２００μｅｑであることを特徴とする血液凝固第
    ＶＩＩＩ因子の吸着材。
  2. 【請求項２】 ポリカチオンを有する分子が、側鎖に陰
    イオン交換基を有する塩基性ビニル単量体の単独重合体
    または該塩基性ビニル単量体とそれと共重合し得るビニ
    ル単量体との共重合体であることを特徴とする請求項１
    に記載の吸着材。
  3. 【請求項３】 塩基性ビニル単量体が、それぞれアミノ
    基を有するアクリル酸誘導体、メタアクリル酸誘導体、
    アクリル酸アミド誘導体およびメタアクリル酸アミド誘
    導体から選ばれることを特徴とする請求項２に記載の吸
    着材。
  4. 【請求項４】 塩基性ビニル単量体と共重合し得るビニ
    ル単量体が、Ｎ−ビニルピロリドン、アクリル酸エステ
    ル、メタアクリル酸エステル、Ｎ−アルキルアクリル酸
    アミドおよびＮ−アルキルメタアクリル酸アミドから選
    ばれることを特徴とする請求項２に記載の吸着材。
  5. 【請求項５】 水不溶性担体が、多孔性構造を有する天
    然高分子または合成高分子よりなる粒子状担体であるこ
    とを特徴とする請求項１に記載の吸着材。
  6. 【請求項６】 水不溶性担体が、多孔性構造を有する粒
    子状担体であり、排除限界分子量が１，０００〜１０
    ０，０００，０００であり、平均粒子径が５〜１，００
    ０μｍであることを特徴とする請求項１に記載の吸着
    材。
  7. 【請求項７】 粒子状担体が、ビニルアルコール単位を
    有する架橋共重合体よりなることを特徴とする請求項５
    または６に記載の吸着材。
JP4302211A 1991-11-12 1992-11-12 血液凝固第ｖｉｉｉ因子の吸着材 Pending JPH05262664A (ja)

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JP3-322353 1991-11-12
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002090361A (ja) * 2000-09-21 2002-03-27 Internatl Reagents Corp 凝固因子欠乏血漿およびその製造方法
WO2006025352A1 (ja) * 2004-08-30 2006-03-09 Toray Industries, Inc. 分画装置

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5322178A (en) * 1976-08-04 1978-03-01 Kuraray Co Ltd Blood purifying adsorbent
ES471858A1 (es) * 1977-07-25 1979-02-01 Monsanto Co Un metodo para separar el factor especifico de coagulacion de la sangre de una mezcla con otras proteinas de la sangre en un medio fluido
NL8701915A (nl) * 1987-08-14 1989-03-01 Waander Riethorst Adsorbensmateriaal en toepassing daarvan voor het isoleren van stollingsfaktoren.
JPH0236199A (ja) * 1988-07-22 1990-02-06 Asahi Medical Co Ltd 血液凝固因子の精製方法および精製用吸着材

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002090361A (ja) * 2000-09-21 2002-03-27 Internatl Reagents Corp 凝固因子欠乏血漿およびその製造方法
WO2006025352A1 (ja) * 2004-08-30 2006-03-09 Toray Industries, Inc. 分画装置
JPWO2006025352A1 (ja) * 2004-08-30 2008-05-08 東レ株式会社 分画装置

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