JPH05281235A - クレアチニン測定用試験具およびその調製方法 - Google Patents
クレアチニン測定用試験具およびその調製方法Info
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- JPH05281235A JPH05281235A JP4351144A JP35114492A JPH05281235A JP H05281235 A JPH05281235 A JP H05281235A JP 4351144 A JP4351144 A JP 4351144A JP 35114492 A JP35114492 A JP 35114492A JP H05281235 A JPH05281235 A JP H05281235A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 染料前駆物質、塩基および調節剤であるポリ
マーを含有する水性液中のクレアチニン測定系。 【効果】 調節剤の含有によって、クレアチニン測定に
用いられるキャリアーマトリックスに対するアルカリの
悪影響を調節し、より高感度で一貫性のあるクレアチニ
ンの測定を可能にする。
マーを含有する水性液中のクレアチニン測定系。 【効果】 調節剤の含有によって、クレアチニン測定に
用いられるキャリアーマトリックスに対するアルカリの
悪影響を調節し、より高感度で一貫性のあるクレアチニ
ンの測定を可能にする。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、水性液中のクレアチニ
ンの検出系に関する。
ンの検出系に関する。
【０００２】
【従来の技術】クレアチニンは、クレアチンがホスホク
レアチンになり、筋収縮のエネルギー源として用いられ
る場合の最終代謝産物である。産生されたクレアチニン
は腎臓の糸球体で濾過され、次いで再吸収されることな
く尿中に排泄される。体液中のクレアチニンの測定は、
筋疾患、又は腎炎及び腎不全のような種々の腎臓病を診
断するのに有用である。
レアチンになり、筋収縮のエネルギー源として用いられ
る場合の最終代謝産物である。産生されたクレアチニン
は腎臓の糸球体で濾過され、次いで再吸収されることな
く尿中に排泄される。体液中のクレアチニンの測定は、
筋疾患、又は腎炎及び腎不全のような種々の腎臓病を診
断するのに有用である。
【０００３】ジャフ(Jaffe) 法として公知の尿中クレア
チニンの測定のための最初の実践的試験は、アルカリ溶
液中でのピクリン酸とクレアチニンの結合による赤黄褐
色ピクリン酸クレアチニンの生成に関する。より最近の
クレアチニン測定方法は、Benedict and Behre J. Bio
l. Chem.,113:515(1936) により報告されているが、こ
れはアルカリ媒体中での３，５−ジニトロ安息香酸とク
レアチニンの反応に関する。
チニンの測定のための最初の実践的試験は、アルカリ溶
液中でのピクリン酸とクレアチニンの結合による赤黄褐
色ピクリン酸クレアチニンの生成に関する。より最近の
クレアチニン測定方法は、Benedict and Behre J. Bio
l. Chem.,113:515(1936) により報告されているが、こ
れはアルカリ媒体中での３，５−ジニトロ安息香酸とク
レアチニンの反応に関する。
【０００４】これらの反応は各々、系が適性に作用し得
るようにクレアチニンを脱プロトン化するために、高p
H、即ち１２〜１３のpHを要する。これらの試薬系にお
いて好適な高pHを維持するために、アルカリ及びアルカ
リ土類金属の水酸化物のような強塩基性物質を一般に用
いる。しかしながら、これは、濾紙又は多孔質フィルム
のような吸収性キャリアーを試薬系のキャリアーとして
用いる場合には、アルカリを投入するとキャリアーが脆
くなりがちで、キャリアーマトリックス全体にアルカリ
を一様に分布させるのが困難であるために、いくつかの
問題を有する。さらに、溶液の形態で試薬をキャリアー
に適用し、それから溶媒を蒸発させて乾燥残渣を残す場
合、乾燥したアルカリは、クレアチニン濃度を検査中の
尿のような液体と接触しても容易に溶解しない。
るようにクレアチニンを脱プロトン化するために、高p
H、即ち１２〜１３のpHを要する。これらの試薬系にお
いて好適な高pHを維持するために、アルカリ及びアルカ
リ土類金属の水酸化物のような強塩基性物質を一般に用
いる。しかしながら、これは、濾紙又は多孔質フィルム
のような吸収性キャリアーを試薬系のキャリアーとして
用いる場合には、アルカリを投入するとキャリアーが脆
くなりがちで、キャリアーマトリックス全体にアルカリ
を一様に分布させるのが困難であるために、いくつかの
問題を有する。さらに、溶液の形態で試薬をキャリアー
に適用し、それから溶媒を蒸発させて乾燥残渣を残す場
合、乾燥したアルカリは、クレアチニン濃度を検査中の
尿のような液体と接触しても容易に溶解しない。
【０００５】日本国特許出願第６２−２８７２６１号に
は、アルカリ及びアルカリ可溶性カルボン酸誘導体ポリ
マーの水性溶液にキャリアーを浸漬し、その後、アルカ
リ条件下でクレアチニンと反応して発色する染料前駆物
質を有機溶剤から適用することを包含する、吸収性キャ
リアーへのアルカリ性成分の適用を促進する方法が開示
されている。
は、アルカリ及びアルカリ可溶性カルボン酸誘導体ポリ
マーの水性溶液にキャリアーを浸漬し、その後、アルカ
リ条件下でクレアチニンと反応して発色する染料前駆物
質を有機溶剤から適用することを包含する、吸収性キャ
リアーへのアルカリ性成分の適用を促進する方法が開示
されている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、アルカリ条件
下でクレアチニンと反応して検出可能な応答を提供する
物質をその中に分散した吸収性キャリアー、塩基、及び
塩基と近接する調節剤を包含する乾燥試薬系であって、
調節剤が： （ａ）約４００より大きい分子量を有するポリエチレン
グリコール、ポリプロピレングリコール又はそれらのコ
ポリマー；あるいは （ｂ）式：
下でクレアチニンと反応して検出可能な応答を提供する
物質をその中に分散した吸収性キャリアー、塩基、及び
塩基と近接する調節剤を包含する乾燥試薬系であって、
調節剤が： （ａ）約４００より大きい分子量を有するポリエチレン
グリコール、ポリプロピレングリコール又はそれらのコ
ポリマー；あるいは （ｂ）式：
【０００７】
【化２】
【０００８】（式中、Ｒは１〜４個の炭素原子を有する
直鎖又は分枝鎖アルキルであり、ｎは少なくとも９の数
であり、θは対陰イオンを示す）を特徴とするジもしく
はモノアリル、ジもしくはトリアルキルアンモニウムの
第四級塩重合体、あるいはそれらのコポリマーである乾
燥試薬系に関する。
直鎖又は分枝鎖アルキルであり、ｎは少なくとも９の数
であり、θは対陰イオンを示す）を特徴とするジもしく
はモノアリル、ジもしくはトリアルキルアンモニウムの
第四級塩重合体、あるいはそれらのコポリマーである乾
燥試薬系に関する。
【０００９】本発明は、水性液中、特に尿中のクレアチ
ニンの半定量的検出に用いられる吸収性キャリアーに及
ぼすアルカリの悪影響を調節する手段を提供する。好適
なキャリアー物質は当業界で公知であり、その例として
は、吸収性紙、織布及び不織布ガラス繊維フィルター、
並びに高分子膜及びフィルムが挙げられる。
ニンの半定量的検出に用いられる吸収性キャリアーに及
ぼすアルカリの悪影響を調節する手段を提供する。好適
なキャリアー物質は当業界で公知であり、その例として
は、吸収性紙、織布及び不織布ガラス繊維フィルター、
並びに高分子膜及びフィルムが挙げられる。
【００１０】一般的に試験ストリップの形態に切断され
る吸収性キャリアーを、アルカリ条件下でクレアチニン
と反応して検出可能な応答、例えば有色反応産物の生成
を提供する物質で含浸する。好適な物質としては、ピク
リン酸、３，５−ジニトロ安息香酸、３，４−ジニトロ
安息香酸、２，４−ジニトロベンゼンスルホン酸、３，
５−ジニトロベンジルアルコール、３，５−ジニトロベ
ンゾニトリル、３，５−ジニトロベンズアミド、及び
Ｎ，Ｎ−ジエチル−（３，５−ジニトロベンズ）アミド
が挙げられる。
る吸収性キャリアーを、アルカリ条件下でクレアチニン
と反応して検出可能な応答、例えば有色反応産物の生成
を提供する物質で含浸する。好適な物質としては、ピク
リン酸、３，５−ジニトロ安息香酸、３，４−ジニトロ
安息香酸、２，４−ジニトロベンゼンスルホン酸、３，
５−ジニトロベンジルアルコール、３，５−ジニトロベ
ンゾニトリル、３，５−ジニトロベンズアミド、及び
Ｎ，Ｎ−ジエチル−（３，５−ジニトロベンズ）アミド
が挙げられる。
【００１１】さらに、試験ストリップ中には、塩基及び
そのための調節剤が含有される。使用する個々の塩基は
重要ではないが、クレアチニンがクレアチニン反応性染
料前駆物質と容易に反応して検出可能な応答を提供する
ためには、それは強塩基であって、試験系の反応域で約
１２〜１３の範囲にpHを上げるのに十分な濃度で存在し
なければならない。このような塩基としては、アルカリ
及びアルカリ土類金属の水酸化物、例えばナトリウム、
カリウム、リチウム、カルシウム、及びマグネシウムの
水酸化物が挙げられる。
そのための調節剤が含有される。使用する個々の塩基は
重要ではないが、クレアチニンがクレアチニン反応性染
料前駆物質と容易に反応して検出可能な応答を提供する
ためには、それは強塩基であって、試験系の反応域で約
１２〜１３の範囲にpHを上げるのに十分な濃度で存在し
なければならない。このような塩基としては、アルカリ
及びアルカリ土類金属の水酸化物、例えばナトリウム、
カリウム、リチウム、カルシウム、及びマグネシウムの
水酸化物が挙げられる。
【００１２】この濃度のアルカリ物質が吸収性キャリア
ー物質に深刻な有害作用を及ぼし得ることは明らかであ
る。しかしながら、ある種の高分子物質を本試薬系に添
加すると塩基の作用が調節され、それにより検出可能な
応答を生じるのにより感受性で、より一貫した方法でこ
の応答を提供する試薬ストリップが提供されることが見
出された。
ー物質に深刻な有害作用を及ぼし得ることは明らかであ
る。しかしながら、ある種の高分子物質を本試薬系に添
加すると塩基の作用が調節され、それにより検出可能な
応答を生じるのにより感受性で、より一貫した方法でこ
の応答を提供する試薬ストリップが提供されることが見
出された。
【００１３】本発明のクレアチニン測定試験系は、そこ
に含有される染料前駆物質の発色度を反射率の測定値と
して読み取り、これを予め作製した検量線と比較するこ
とによりクレアチニンの測定を達成する。試験系中の発
色度を、予め作製したカラーチャートと肉眼で比較する
ことにより半定量的測定を実施することもできる。
に含有される染料前駆物質の発色度を反射率の測定値と
して読み取り、これを予め作製した検量線と比較するこ
とによりクレアチニンの測定を達成する。試験系中の発
色度を、予め作製したカラーチャートと肉眼で比較する
ことにより半定量的測定を実施することもできる。
【００１４】本発明がいかに作用するかの機序について
のいかなる特定の理論にも束縛されることは望まない
が、高分子調節剤は水酸化物陰イオンを錯化すると考え
られる。この錯体形成は、水酸化物とキャリアーとの会
合を防止し、それによりキャリアーの分解を防止する。
これは、水酸化物がセルロースに対して非常に有害であ
るため、キャリアーが紙から得られる場合には特に重要
である。水酸化物陰イオンは、本発明の調節ポリマーに
よって錯化される場合、それが錯生成ポリマーと会合し
て、ポリマー／水酸化物錯体が吸収性キャリアーの繊維
上に一様に沈着するため、キャリアー上をより一様に被
覆すると推測される。本発明に有用なポリマーは水溶性
であるため、ポリマーと会合する水酸化物イオンは、水
酸化物がキャリアーの繊維中に埋め込まれないために、
再水和時により容易に溶解する。
のいかなる特定の理論にも束縛されることは望まない
が、高分子調節剤は水酸化物陰イオンを錯化すると考え
られる。この錯体形成は、水酸化物とキャリアーとの会
合を防止し、それによりキャリアーの分解を防止する。
これは、水酸化物がセルロースに対して非常に有害であ
るため、キャリアーが紙から得られる場合には特に重要
である。水酸化物陰イオンは、本発明の調節ポリマーに
よって錯化される場合、それが錯生成ポリマーと会合し
て、ポリマー／水酸化物錯体が吸収性キャリアーの繊維
上に一様に沈着するため、キャリアー上をより一様に被
覆すると推測される。本発明に有用なポリマーは水溶性
であるため、ポリマーと会合する水酸化物イオンは、水
酸化物がキャリアーの繊維中に埋め込まれないために、
再水和時により容易に溶解する。
【００１５】好適な調節剤としては、約４００より大き
い分子量を有するポリエチレングリコール及びポリプロ
ピレングリコールが挙げられる。より低分子量のポリグ
リコールは、水酸化物陰イオン及びその金属陽イオンと
非常に弱い会合を示すため、適していない。金属水酸化
物を脱溶媒するのに十分強い会合のためには、少なくと
も９個の酸素が必要である。分子量の上限は重要ではな
いが、実際的見地から、分子量の上限は約７５０，００
０である。約４００より多く、約１０，０００までの範
囲の分子量が好ましい。
い分子量を有するポリエチレングリコール及びポリプロ
ピレングリコールが挙げられる。より低分子量のポリグ
リコールは、水酸化物陰イオン及びその金属陽イオンと
非常に弱い会合を示すため、適していない。金属水酸化
物を脱溶媒するのに十分強い会合のためには、少なくと
も９個の酸素が必要である。分子量の上限は重要ではな
いが、実際的見地から、分子量の上限は約７５０，００
０である。約４００より多く、約１０，０００までの範
囲の分子量が好ましい。
【００１６】ポリグリコールは、本発明の情況において
機能するためには、それらが末端ヒドロキシル基を含有
する必要がないため、キャップすることができる。典型
的末端キャップとしては、ジステアレートに対するメチ
ルのようなアルキル基、又は専門化学メーカーから入手
可能な４−ノニルベンゼンのようなアリール基が挙げら
れる。
機能するためには、それらが末端ヒドロキシル基を含有
する必要がないため、キャップすることができる。典型
的末端キャップとしては、ジステアレートに対するメチ
ルのようなアルキル基、又は専門化学メーカーから入手
可能な４−ノニルベンゼンのようなアリール基が挙げら
れる。
【００１７】ある種の第四級アンモニウム塩重合体が、
キャリアー物質に及ぼすアルカリの膨張作用を調整する
のに役立つということも発見された。これらのポリマー
は、アリル基で塞がれていない窒素の原子価結合が１〜
４個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキルで塞が
れるアリル又はジアリル第四アンモニウム塩を重合する
ことにより調製する。これらの塩及びそれらの重合によ
り得られるポリマーは、一般に、対陰イオンとしてハロ
ゲン化物、例えば塩化物又は臭化物を有するが、しかし
酢酸塩のようなその他の対陰イオンで示されることもあ
る。
キャリアー物質に及ぼすアルカリの膨張作用を調整する
のに役立つということも発見された。これらのポリマー
は、アリル基で塞がれていない窒素の原子価結合が１〜
４個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキルで塞が
れるアリル又はジアリル第四アンモニウム塩を重合する
ことにより調製する。これらの塩及びそれらの重合によ
り得られるポリマーは、一般に、対陰イオンとしてハロ
ゲン化物、例えば塩化物又は臭化物を有するが、しかし
酢酸塩のようなその他の対陰イオンで示されることもあ
る。
【００１８】ポリ（塩化ジアリルジメチルアンモニウ
ム）は好ましい種であって、Polysciences,Inc. から入
手できる。これらのポリマーに関する重合度、即ち上記
の式中のｎの値は、一般に９〜約１，０００、好ましく
は９〜３００である。ポリグリコールを用いる場合と同
様に、これらのポリマーは、アルカリの有害作用の有効
な調節のためにアルカリの完全な錯化を達成するのに十
分に高分子量でなければならない。
ム）は好ましい種であって、Polysciences,Inc. から入
手できる。これらのポリマーに関する重合度、即ち上記
の式中のｎの値は、一般に９〜約１，０００、好ましく
は９〜３００である。ポリグリコールを用いる場合と同
様に、これらのポリマーは、アルカリの有害作用の有効
な調節のためにアルカリの完全な錯化を達成するのに十
分に高分子量でなければならない。
【００１９】本物質のストリップを適用すべき成分の溶
液中に浸漬することにより、３つの必須成分を吸収性キ
ャリアーに適用し得る。噴霧被覆のような別の適用手段
を用いてもよい。試薬組成物を別々の工程で適用するこ
とは不可欠ではないが、しかしながら、染料前駆物質が
水溶性でないため、それは通常、別々の水性溶液から適
用される調節剤及びアルカリによる別々の処理でキャリ
アーに適用される。ポリマー及びアルカリは単一浸漬溶
液から適用し得るが、アルカリ適用中にキャリアーを保
護するためには、ポリマーを先ず適用するのが好まし
い。
液中に浸漬することにより、３つの必須成分を吸収性キ
ャリアーに適用し得る。噴霧被覆のような別の適用手段
を用いてもよい。試薬組成物を別々の工程で適用するこ
とは不可欠ではないが、しかしながら、染料前駆物質が
水溶性でないため、それは通常、別々の水性溶液から適
用される調節剤及びアルカリによる別々の処理でキャリ
アーに適用される。ポリマー及びアルカリは単一浸漬溶
液から適用し得るが、アルカリ適用中にキャリアーを保
護するためには、ポリマーを先ず適用するのが好まし
い。
【００２０】一般的浸漬溶液は０．１〜１５重量／容量
％の高分子調節剤を含有するが、一方、塩基のための浸
漬溶液は０．５〜２．５モル(M）に及ぶ。１０〜１５０
ミリモル（mM）の浸漬溶液が染料前駆物質には適してい
る。浸漬溶液用の溶剤は、溶質に依って水性又は有機溶
剤であって良い。
％の高分子調節剤を含有するが、一方、塩基のための浸
漬溶液は０．５〜２．５モル(M）に及ぶ。１０〜１５０
ミリモル（mM）の浸漬溶液が染料前駆物質には適してい
る。浸漬溶液用の溶剤は、溶質に依って水性又は有機溶
剤であって良い。
【００２１】
【実施例】本発明の実施方法を、以下の実施例によりさ
らに説明する。
らに説明する。
【００２２】実施例Ｉ キャリアーとしてWhatman 3MM 濾紙を用いて、それらを
３つの別々の溶液に浸漬し、各浸漬後、６０℃、７０
℃、及び８０℃の温度の別々の温度域で各々５分間乾燥
して、試験ストリップを調製した。各々の場合、最初の
浸漬液は高分子アルカリ調節剤を含有した。錯生成剤を
含有しない対照ストリップを、同様の方法で調製した。
各成分を、示した濃度のその溶液から適用した。
３つの別々の溶液に浸漬し、各浸漬後、６０℃、７０
℃、及び８０℃の温度の別々の温度域で各々５分間乾燥
して、試験ストリップを調製した。各々の場合、最初の
浸漬液は高分子アルカリ調節剤を含有した。錯生成剤を
含有しない対照ストリップを、同様の方法で調製した。
各成分を、示した濃度のその溶液から適用した。
【００２３】 成分 濃度 浸漬液１: 水に溶解したポリ（塩化ジアリルジメチル 0.5 w/w% アンモニウム)(PDDAC) 浸漬液２: エタノール／水(80:20) に溶解した水酸化 1.75 M カリウム 浸漬液３: アセトニトリルに溶解した３，５−ジニト 61.0 mM ロ安息香酸
【００２４】別の実験において、同様の方法で、以下の
溶液から試験ストリップを調製した： 成分 濃度 浸漬液１: ポリエチレングリコール−１０００ 6.0 w/w% (PEG-1000) 浸漬液２: エタノール／水(80:20）に溶解した水酸化 0.5 M カリウム 浸漬液３: アセトニトリルに溶解した３，５−ジニト 61.0 mM ロ安息香酸
溶液から試験ストリップを調製した： 成分 濃度 浸漬液１: ポリエチレングリコール−１０００ 6.0 w/w% (PEG-1000) 浸漬液２: エタノール／水(80:20）に溶解した水酸化 0.5 M カリウム 浸漬液３: アセトニトリルに溶解した３，５−ジニト 61.0 mM ロ安息香酸
【００２５】４つの処方物（錯生成剤を含有する場合と
しない場合）から作製したストリップを、CLINITEK (商
標）２００分光光度計を用いて試験し、ストリップをク
レアチニンを含有する水に浸漬２５秒後に５３０ nm で
のＫ／Ｓ値を測定した。Ｋ／Ｓ値は、反射率データを発
色団濃度に比例する関数（Ｋ／Ｓ）に変換するための以
下の等式：
しない場合）から作製したストリップを、CLINITEK (商
標）２００分光光度計を用いて試験し、ストリップをク
レアチニンを含有する水に浸漬２５秒後に５３０ nm で
のＫ／Ｓ値を測定した。Ｋ／Ｓ値は、反射率データを発
色団濃度に比例する関数（Ｋ／Ｓ）に変換するための以
下の等式：
【００２６】Ｋ／Ｓ＝（１−Ｒ）2 ／２Ｒ
【００２７】から確定した。Ｋ／Ｓ値は、Kortum がRe
flectance Sectroscopy,Springerverlag,New York,NY,
(1969) の１１１ページに記載しているように、吸収量
（Ｋ）対散乱係数（Ｓ）の比である。
flectance Sectroscopy,Springerverlag,New York,NY,
(1969) の１１１ページに記載しているように、吸収量
（Ｋ）対散乱係数（Ｓ）の比である。
【００２８】ケース１では、PDDAC を含有するストリッ
プと、この錯生成剤を含有しない対照とを、４００mg/d
L の濃度のクレアチニン溶液を用いて試験し、一方、ケ
ース２は、PEG-1000を含有する場合としない場合とで、
３００mg/dL の濃度のクレアチニン溶液を用いて実施し
た。５つの別々の試験についてのＫ／Ｓ値の変動係数
（ＣＶ）％は、ストリップ変動性を示す。
プと、この錯生成剤を含有しない対照とを、４００mg/d
L の濃度のクレアチニン溶液を用いて試験し、一方、ケ
ース２は、PEG-1000を含有する場合としない場合とで、
３００mg/dL の濃度のクレアチニン溶液を用いて実施し
た。５つの別々の試験についてのＫ／Ｓ値の変動係数
（ＣＶ）％は、ストリップ変動性を示す。
【００２９】 表１ 処方物 530 nmでのＫ／Ｓ ％ＣＶ ケース１(PDDACを含有しない） 6.3 12.1 ケース１(PDDAC含有) 9.9 6.0 ケース２(PEG-1000 を含有しない） 1.31 30.4 ケース２(PEG-1000 含有) 1.97 21.8
【００３０】表１のデータから、調節剤を含有する処方
物に関してはＫ／Ｓ値が高く、％ＣＶ値が低いために、
調節剤（PDDAC 又はPEG-1000）を含有する処方物は、本
剤を含有せずに処方したストリップより大きな反応性と
低い変動性を有することが確定される。
物に関してはＫ／Ｓ値が高く、％ＣＶ値が低いために、
調節剤（PDDAC 又はPEG-1000）を含有する処方物は、本
剤を含有せずに処方したストリップより大きな反応性と
低い変動性を有することが確定される。
【００３１】実施例 II 実施例Ｉの実験を反復したが、但し、分子量４００及び
１，０００のポリエチレングリコール、並びに分子量
２，０００のポリプロピレングリコールを調節剤として
用いて、これらのポリマーの水性溶液（６％ w/w）中に
試験ストリップを浸漬し、次いでそれらを０．５ M水酸
化カリウム溶液に浸漬した。各ケースにおいて、３，５
−ジニトロ安息香酸を、その２８mMエタノール溶液にス
トリップを浸漬することにより適用した。この実験結果
を表２に要約する。
１，０００のポリエチレングリコール、並びに分子量
２，０００のポリプロピレングリコールを調節剤として
用いて、これらのポリマーの水性溶液（６％ w/w）中に
試験ストリップを浸漬し、次いでそれらを０．５ M水酸
化カリウム溶液に浸漬した。各ケースにおいて、３，５
−ジニトロ安息香酸を、その２８mMエタノール溶液にス
トリップを浸漬することにより適用した。この実験結果
を表２に要約する。
【００３２】 表２ ポリマー Ｋ／Ｓ ％ＣＶ 対照（ポリマーなし） 1.24 34.1 PEG 1000 1.89 18.5 PEG 400 1.16 31.2 PPG 2000 1.94 14.2
【００３３】表２から、低分子PEG 400 は、Ｋ／Ｓ値及
び％ＣＶが対照と比較して事実上変わらなかったため、
試験ストリップにほとんど影響を及ぼさなかったことが
確定される。その結果として、本発明に用いるには、通
常、４００より大きい分子量を有するグリコールが選択
される。逆に、PEG 1000及び PPG 2000 で処理した試験
ストリップは、Ｋ／Ｓ値で示されるようなより大きな吸
収と、変動係数の減少で示されるような有意に少ない変
動を示した。
び％ＣＶが対照と比較して事実上変わらなかったため、
試験ストリップにほとんど影響を及ぼさなかったことが
確定される。その結果として、本発明に用いるには、通
常、４００より大きい分子量を有するグリコールが選択
される。逆に、PEG 1000及び PPG 2000 で処理した試験
ストリップは、Ｋ／Ｓ値で示されるようなより大きな吸
収と、変動係数の減少で示されるような有意に少ない変
動を示した。
フロントページの続き (72)発明者 マイケル・ジェー・プジア アメリカ合衆国、インデイアナ州、46530、 グレンジャー、フォックス・ホロー・コー ト 52116 (72)発明者 マイケル・サルヴァティ アメリカ合衆国、ミネソタ州、55104、セ ント・ポール、テンプル・コート 2071
Claims (15)
- 【請求項１】 アルカリ性条件下でクレアチニンと反応
して検出可能な応答を提供する染料前駆物質、再水和時
にアルカリ条件を生じるのに十分な強さ及び濃度の塩
基、及び（ａ）約４００より大きい分子量を有するポリ
エチレングリコール、ポリプロピレングリコールもしく
はそれらのコポリマー；又は（ｂ）式： 【化１】 （式中、Ｒは１〜４個の炭素原子を有する直鎖又は分枝
鎖アルキルであり、ｎは少なくとも９の数であり、θは
対陰イオンを示す）を特徴とするジもしくはモノアリ
ル、ジもしくはトリアルキルアンモニウムの第四級塩重
合体；あるいはそのコポリマーである調節剤を含有する
試験組成物を包含する吸収性キャリアーを含む乾燥試薬
試験具。 - 【請求項２】 吸収性キャリアーが、紙、織布又は不織
布、ガラス繊維、あるいは高分子膜又はフィルムを含
む、請求項１記載の試験具。 - 【請求項３】 吸収性キャリアーが紙である、請求項２
記載の試験具。 - 【請求項４】 染料前駆物質が、３，５−ジニトロ安息
香酸、ピクリン酸、３，４−ジニトロ安息香酸、２，４
−ジニトロベンゼンスルホン酸、３，５−ジニトロベン
ジルアルコール、３，５−ジニトロベンズアミド、及び
Ｎ，Ｎ−ジエチル（３，５−ジニトロベンズ）アミドよ
り成る群から選択される、請求項１記載の試験具。 - 【請求項５】 染料前駆物質が３，５−ジニトロ安息香
酸である、請求項１記載の試験具。 - 【請求項６】 調節剤が、約４００〜約１０，０００の
分子量を有するポリエチレングリコールである、請求項
１記載の試験具。 - 【請求項７】 調節剤が、９〜約１，０００の重合度を
有するポリ（塩化ジアリルジメチルアンモニウム）であ
る、請求項１記載の試験具。 - 【請求項８】 塩基がアルカリ又はアルカリ土類金属の
水酸化物である、請求項１記載の試験具。 - 【請求項９】 塩基が水酸化カリウムである、請求項８
記載の試験具。 - 【請求項１０】 アルカリ条件下でクレアチニンと反応
して比色応答を提供する染料前駆物質として、３，５−
ジニトロ安息香酸を、乾燥試薬系の再水和時に約１２〜
１３のレベルに系のpHを維持するのに十分な濃度のアル
カリ又はアルカリ土類金属の水酸化物とともに分散した
吸収性マトリックスとして、紙を包含する乾燥試薬試験
具において、水酸化物のための調節剤として約４００よ
り大きい分子量を有するポリエチレングリコール、ポリ
プロピレングリコール、又はそれらのコポリマーが存在
し、該調節剤が紙マトリックス全体に実質的に均一に分
散されたことを特徴とする試験具。 - 【請求項１１】 アルカリ条件下でクレアチニンと反応
して比色応答を提供する染料前駆物質として、３，５−
ジニトロ安息香酸を、乾燥試薬系の再水和時に約１２〜
１３のレベルに系のpHを維持するのに十分な濃度のアル
カリ又はアルカリ土類金属の水酸化物とともに分散した
吸収性マトリックスとして、紙を包含する乾燥試薬試験
具において、水酸化物のための調節剤として少なくとも
９の重合度を有するポリ（塩化ジアリルジメチルアンモ
ニウム）が存在し、該調節剤が紙マトリックス全体に実
質的に均一に分散されたことを特徴とする試験具。 - 【請求項１２】 請求項１記載の乾燥試薬試験具に水性
液を接触させ、その反射率により染料前駆物質の発色度
を測定し、その発色度を、予め作成した検量線と比較す
るか又は予め作成したカラーチャートと肉眼により比較
することを包含する、水性液中のクレアチニン濃度の検
出方法。 - 【請求項１３】 以下の工程を含む、クレアチニン検出
のための乾燥試薬試験具の調製方法： ａ）試薬キャリアーマトリックスとして使用するのに適
した吸収性物質のストリップを用意し； ｂ）該ストリップを、アルカリ条件下でクレアチニンと
反応して検出可能な応答を提供する染料前駆物質の溶液
と接触させ、処理部分を乾燥して残存する溶剤を除去
し、試薬キャリアーマトリックス中に分散された残存染
料前駆物質を残し； ｃ）該ストリップを、約４００より大きい分子量を有す
るポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコー
ル、又はそれらのコポリマー、あるいは請求項１に記載
された式を有するジもしくはモノアリル、ジもしくはト
リアルキルアンモニウムの第四級塩重合体である調節剤
の溶液と接触させ、処理部分を乾燥して残存する溶剤を
除去し、試薬キャリアーマトリックス中に分散された残
存高分子物質を残し；そして ｄ）該ストリップを強塩基の溶液と接触させ、処理スト
リップを乾燥して、その再水和時に１２〜１３のレベル
に試薬キャリアーマトリックス内のpHを維持するのに十
分な量で残存塩基を残す。 - 【請求項１４】 試薬キャリアーマトリックスのストリ
ップを調節剤の溶液と接触させて、それを塩基性溶液と
接触させる前に乾燥する、請求項１３記載の方法。 - 【請求項１５】 高分子調節剤の溶液が０．１〜１５重
量／容量％のそれを含有し、塩基の溶液が０．５〜２．
５モルであり、染料前駆物質の溶液が１０〜１５０ミリ
モルの濃度を有する、請求項１４記載の方法。
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