JPH0528208B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は消炎剤に関し、更に詳しくは、オキア
ミの水性抽出物を有効成分とする消炎剤に関す
る。

〔従来の技術〕

動物、植物、微生物由来のプロテアーゼは、広
く臨床的に内科、外科、眼科、産婦人科、泌尿器
科、歯科口腔外科の領域で、単純な正常反応性炎
症、血栓性静脈炎、慢性気道炎、副鼻腔炎、膿
胸、血胸、乳汁うつ滞、乳腺炎などに用いられて
いる。現在臨床的に用いられているプロテアーゼ
としては、トリプシン、α−キモトリプシン、パ
ンクレアチン、パパイン、プロメライン、プロナ
ーゼ、プロクターゼ、セラペプターゼ（セラチオ
ペプチダーゼ）、セアプローゼＳ（セミアルカリプ
ロテアーゼ）、モンサントエンザイム等が挙げら
れる。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、これらのプロテアーゼは、経口
投与した場合に、期待した程の効果が得られない
ことがあること、過敏症、悪心、胃部不快感、発
疹、発赤などの副作用を生ずることがあること、
更には一定量経口投与した場合にも個人によつて
効果発現の程度に差があるなどの問題点を有する
ため、経口投与した場合に副作用がなく、かつ強
力な抗炎症作用を有する新規な消炎剤、就中消炎
酵素剤の開発が熱望されていた。

〔問題点を解決するための手段〕

斯様な実情に鑑み、本発明者等は、経口投与が
可能で、原料面でも制約のない消炎酵素剤の開発
研究を鋭意進めてきたが、オキアミ水性抽出物か
ら分離精製されたプロテアーゼに抗炎症作用があ
ることを見い出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、オキアミ水性抽出物から分
離精製されたプロテアーゼを有効成分とする消炎
剤を提供するものである。

オキアミは、全世界の海洋に分布し、特に南極
周辺に多く、生息量は数億トン〜20億トンといわ
れており、現在の全世界漁獲量に匹適する5000〜
7000万トン／年の漁獲も可能と考えられているも
ので、原料供給の面でも安定供給が可能である。

本発明で使用するオキアミとしては、スパーバ
（superba）、クリスタロロフイアス
（crystallorophias）、フリジタ（frigida）、トリ
アカンサ（triacantha）、ベランテイニ
（vellantini）、ロージロストリス（lougirostris）、
ルーセンス（lucens）、シミリス（similis）、スピ
ニフエラ（spinifera）、レクルバ（recurva）等
のオイフアウシア（Euphausia）属；マカルーラ
（macurura）、ビシナ（vicina）、グレガリア
（gregaria）等のシサノエシサ（Thysanoessa）
属等のいずれでも使用可能であつて、特別な種類
に限定されない。

オキアミの水性抽出物は、オキアミ若しくはそ
の粉砕物を水と混合することにより得られる。

本オキアミのお水性抽出物は、プロテアーゼ活
性に富み、オキアミ水性抽出物より通常の酵素分
離・精製法で分離したプロテアーゼは更に強い抗
炎症能を示した。

オキアミの水性抽出物からのプロテアーゼ（以
下、オキアミプロテアーゼということがある）の
分離・精製方法は、特に制限されず、公知の方法
で実施される。例えば、オキアミの磨砕物を水と
混合し、放置後、その上澄部を採取し、その上澄
部に硫酸アンモニウム（硫安）等の塩を加え塩析
する方法；アルコール、アセトン等の有機溶媒を
加え沈澱させる方法；限外ロ過（例えば、アミコ
ン社製、ダイアコロ−メンブレンYC）を用い濃
縮後、凍結乾燥する方法等により単離し、ジエチ
ルアミノエチル（DEAE）−セルローズ又は
DEAE−セフアデツクスを用いるイオン交換クロ
マトグラフイー及びセフアデツクスＧ−50の様な
ゲルクロマトグラフイーを夫々単独若しくは併用
して分別精製される。塩析で単離した場合は、
過若しくは遠心分離後、脱塩、凍結乾燥して粉末
化可能である。脱塩の方法としては、透析、セフ
アデツクスＧ−25等を使用するゲルロ過方法が例
示される。

本発明の消炎剤の投与方法は特に限定されない
が、経口投与の場合極めてすぐれた抗炎症能を示
す。

オキアミプロテアーゼの投与量は、経口投与の
場合10〜500mg／日が好ましいが、症状の程度に
よつて更に投与量を増やすことも可能である。

なお、オキアミプロテアーゼの毒性は、ラツト
に対するLD₅₀が腹腔内投与で５ｇ／Kg以上であ
り、経口投与で25ｇ／Kg以上であつた。

〔発明の効果〕

叙上の如く本発明の消炎剤は、経口投与にて優
れた抗炎症作用を示し、低毒性で副作用もなく極
めて優れた消炎酵素剤である。

〔実施例〕

以下に実施例をあげて本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれら実施例に制約されるもので
はない。なお、実施例１におけるプロテアーゼ活
性は次の方法により測定した。

〈プロテアーゼ活性の測定〉 ミルクカゼイン１ｇを0.1Mリン酸緩衝液（PH
7.6）100mlに懸濁させ、15分間煮沸して完全に溶
解したものを基質溶液とした。同緩衝液４mlに基
質溶液１mlを加え、試料を0.1ml添加し、30℃60
分間反応させた。12％トリクロル酢酸を１ml加え
て反応を停止後、室温で30分以上放置した。10
℃、14000×ｇ、20分間遠心し、上澄液の280nm
の吸収を測定した。活性単位は10分間に280nmに
おける吸光度を１だけ増加させる活性を１単位と
した。

実施例 １ 凍結されたオキアミ〔オイフアウシア・スパー
バ（Enphausia superba）〕を細かく砕き、この
粉砕物400ｇを0.1Mリン酸緩衝液（PH7.0）1.5
中に加え、ホモジナイザーを用いて０℃で２分間
磨砕した。次いでホモジネートを、０℃、6800×
ｇで30分間遠心し上澄液を得た。

上澄液に硫酸アンモニウムを添加して65％飽和
とし、０℃、１時間放置後、遠心して塩析沈澱画
分を採取した。次いで該画分を0.1Mリン酸緩衝
液PH7.5に分散し、４℃においてセロフアンチユ
ーブを使用して蒸留水に対し透析脱塩した後、凍
結乾燥してプロテアーゼ7.1ｇを得た。このもの
のプロテアーゼ活性は335U／ｇであつた。

かくして得られたオキアミプロテアーゼの生理
学的性質は次の通りである。

至適PH オキアミプロテアーゼのPH−活性曲線を、ミル
クカゼインを基質に用いて求めた。結果を第１図
に示す。なお、PH緩衝液はPHに応じて100mMの
酢酸（PH4.0〜6.0）、リン酸（PH6.5〜8.0）、トリ
ス−塩酸（PH7.5〜9.5）の各緩衝液を用いた。オ
キアミプロテアーゼはPH6.0〜9.0にかけてのかな
り広い領域で強い活性を示し、PH特異性は広い
が、至適PHはPH８付近と考えられる。

至適温度 PH7.6でミルクカゼインを基質として各温度
（0°〜60℃）で60分間反応させて、オキアミプロ
テアーゼ活性に及ぼす温度の影響を調べた。結果
を第２図に示す。至適温度は40℃付近であつた。

PH安定性 オキアミプロテアーゼをPH３〜PH10、30℃でプ
レインキユベーシヨンを行い、そのPH安定性を調
べた。結果を第３図に示す。オキアミプロテアー
ゼは弱酸性〜弱アルカリ性では安定であるが、酸
性側、アルカリ側ではやや不安定であつた。

温度安定性 オキアミプロテアーゼを0.1Mリン酸緩衝液
（PH7.6）中で30分間所定の温度に放置したのち、
ミルクカゼインを基質として活性を測定し、温度
安定性を調べた。結果を第４図に示す。オキアミ
プロテアーゼは60℃以上ではかなり失活が認めら
れた。

実施例 ２ オキアミプロテアーゼの抗炎症作用； ウイスター系雄性ラツト（体重約150ｇ）（１群
10匹）に20mg／Kgの酵素を0.5mlの生理食塩水に
溶解し経口投与した。30分後に、ラツトの足蹠に
カラゲニン１％生理食塩水溶液を0.1ml注入し１
時間ごとに足容積を測定した。なお、対照として
生理食塩水0.5ml及びトリプシン20mg／Kgを0.5ml
の生理食塩水に溶解したものを用いた。結果を第
５図に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１で得られたオキアミプロテア
ーゼ活性のPH依存性を示す図面、第２図は同温度
依存性を示す図面、第３図は同PH安定性を示す図
面、第４図は同温度安定性を示す図面、第５図は
ラツトにカラゲニンを経口投与した後の浮腫率の
経時変化を示す図面である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ オキアミ水性抽出物から分離精製されたプロ
   テアーゼを有効成分とする消炎剤。