JPH05317095A - 歯周疾患検査剤および検査キット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 検体中のアミノペプチターゼ様酵素活性を測
定することにより、歯周疾患の罹患や進行を診断あるい
は予測する検査剤。この検査剤は、式：Ｘ−Ｔ−Ａｒｇ
(ＮＯ₂)−Ｙ（Ｙは色源体酸化反応のエンハンサーの残
基）で表されるニトロアルギニンの誘導体を含み、検体
と反応してエンハンサーを遊離し、酸素の存在下に酸化
酵素による色源体の酸化反応を促進する。 【効果】 歯周疾患原因菌であるバクテロイデス・フォ
ーサイサスを迅速かつ簡便に検出し、歯周疾患の活動度
が正確に検知できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は歯周疾患検査剤、さらに
詳しくは、検体中のある種の歯周疾患原因菌を特異的
に、かつ、簡便、迅速、高感度に検出し、歯周疾患の罹
患や進行を診断あるいは予測することのできる検査剤に
関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、歯周疾患に関する細菌学的研究が
進み、トレポネマ・デンティコーラ（Treponema dentic
ola：Ｔｄ）等のスピロヘータやバクテロイデス・ジン
ジバリス（Bacteroides gingivalis：Ｂｇ）等の嫌気性
のグラム陰性桿菌が主要な歯周疾患の原因菌であること
が判明している。更に、疾患の活動度と密接に関係する
菌種として近年バクテロイデス・フォーサイサス（Bact
eroides forsythus：Ｂｆ）が歯周疾患の原因菌として
注目されている。このような見地から口腔内におけるこ
れらの原因菌の存在を検知し、歯周疾患の罹患や進行を
診断あるいは予測し、歯周疾患の治療、予防に臨床的に
応用する試みがなされている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の原因菌を細菌学的方法により検知するには、暗視野顕
微鏡の使用、嫌気性菌の取扱という高度な技術、特殊な
設備等を必要とする。これらの技術は操作が煩雑で、培
養や結果の判断にも長い時間や熟練を要するという欠点
があり、臨床的に使用するには困難な点が多い。また、
免疫学的な面から、これらの原因菌に対する液性免疫で
ある血中の抗体価を測定したり、細胞性免疫であるリン
パ球幼若化反応を測定し、原因菌の存在を検知する試み
もなされている。しかしながら、これらの方法も検体試
料の調製が煩雑であり実用化は困難である。

【０００４】本発明者らは臨床的に実用化可能な歯周疾
患原因菌の検知方法について研究を重ねた。その結果、
口腔内スピロヘータが非常に特異的なアミノペプチター
ゼ様酵素活性を有し、また、バクテロイデス・ジンジバ
リス、バクテロイデス・インターミーディアス等の黒色
色素産生バクテロイデスも同様な活性を有しており、あ
る種の基質を用いることにより、この酵素活性を特異的
に検出できることを見い出した（特願昭６１−１７９７
１６号、特願昭６１−２３３８４８号および特願昭６２
−１１３１２２号)。

【０００５】他方、本発明者らは発色反応によるペプチ
ダーゼ様酵素の測定において、ある種の化合物が発色反
応を促進し、この化合物が歯周疾患原因菌の検知に適用
できることを知った（特開平２−４９９号）。

【０００６】本発明は口腔内プラーク中に存在する種々
の歯周疾患原因菌のうちバクテロイデス・フォーサイサ
スが産生するペプチダーゼを迅速かつ簡便に検出でき、
しかも歯周疾患の活動度が正確に検知し得る検査剤を得
ることを目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、臨床的に
実用化できる歯周疾患原因菌の検知を可能とすべく更に
研究を重ねた。その結果、口腔内プラーク中に存在する
種々の菌のうちバクテロイデス・フォーサイサスが産生
するペプチダーゼをある種の基質を用いることにより特
異的にかつ簡便、迅速に検出でき、しかも歯周疾患の活
動度が正確に反映されることを見出し本発明を完成し
た。

【０００８】これまで歯周疾患原因菌の検出キットとし
て、バクテロイデス・ジンジバリス、トレポネマ・デン
ティコーラを酵素法を用いて検出する方法や、ＤＮＡプ
ローブ法により数種の菌株を検出する方法が報告されて
いる。しかし、これまでバクテロイデス・フォーサイサ
スを特異的に検出する方法は報告されていない。

【０００９】本発明は、検体中のアミノペプチターゼ様
酵素活性を測定することによりバクテロイデス・フォー
サイサスを特異的に検出し、歯周疾患の罹患や進行を診
断あるいは予測するための検査剤であって、下式： Ｘ−Ｔ−Ａｒｇ（ＮＯ₂）−Ｙ ［化１］ ［式中、Ａｒｇ（ＮＯ₂）はニトロアルギニン残基、Ｘ
は水素またはアミノ基保護基、ＴはそのＣ末端がニトロ
アルギン残基のＮ末端と結合する０〜２個のアミノ酸残
基、Ｙはアルギニン残基のＣ末端に結合し、酸素の存在
下に酸化酵素によって色源体の酸化反応の反応速度を増
加させる化合物（以下、エンハンサーという）の残基を
意味する］で示される化合物を前記酵素の基質として含
む歯周疾患検査剤およびこれを含む検査キットを提供す
るものである。

【００１０】本発明の組成物を用いる検査は次の２つの
反応系より成り立っている。第１の反応は検体中のペプ
チダーゼ様酵素と、［化１］の基質とを反応させエンハ
ンサーを遊離させる。第２の反応は、遊離したエンハン
サーのもと、酸化酵素の存在下において色源体を酸化し
色素を生成させる。第１の反応において、エンハンサー
の生成は検体中のペプチダーゼ様酵素活性に比例し、第
２の反応において、エンハンサーの量と色素の生成速度
とが比例する。すなわち、酸化酵素の作用によって色源
体が酸化され、時間に比例して色素が生成し、エンハン
サーが存在すると色素の生成速度が増幅される。また、
一定時間後の色素の生成量はエンハンサーの量に比例す
る。従って、第１および第２の反応を組み合わせ、生成
する色素を定量することによってエンハンサーの量を定
量し、検体中のペプチダーゼ活性を測定することができ
る。

【００１１】本発明の検査剤を用いれば、唾液、歯垢、
歯肉溝浸出液などの検体を、好ましくは中性条件下（ｐ
Ｈ６.０〜８.５）、担体に含有された［化１］で示され
る基質と反応させ、ついで酸化酵素による色源体の酸化
反応に関与させる。この反応により簡便かつ迅速に特異
活性を有する歯周疾患原因菌を検出同定することがで
き、歯周疾患の罹患や進行を診断、予測することがで
き、治療の効果を診断することも可能となる。

【００１２】本発明の検査剤において基質として用いら
れる［化１］の化合物は、公知のペプチド合成法によっ
て容易に製造できる。［化１］中のＸ基で示されるアミ
ノ基保護基はペプチド合成に用いられる公知のアミノ基
保護基のいずれであってもよい。例えば、ホルミル基、
アセチル基、スクシニル基、ｔ−ブトキシカルボニル
基、ベンゾイル基、カルボベンゾキシ基、ｐ−トルエン
スルホニル基などが挙げられるがこれら保護基は必須で
はない。

【００１３】［化１］中のＹで示されているエンハンサ
ー残基は、酸化酵素が色源体を酸化する速度を増加させ
る化合物の残基であればよい。かかるエンハンサーの具
体例としては下式［化２］で示される。

【００１４】

【化２】

【００１５】［式中、Ｒ₁〜Ｒ₄は、同一もしくは異なっ
て、水素、ハロゲン、アルキル、スルホンまたはヒドロ
キシを示し、Ｒ₅はヒドロキシ、アミノまた置換アミノ
（該置換基はアルキル、スルホアルキルまたはヒドロキ
シアルキル）を意味する］で示されるアニリン誘導体が
挙げられる。

【００１６】［化２］の化合物の具体例としては、３,
５−ジブロモ−４−ヒドロキシアニリン（ＤＢＨＡ）、
３,５−ジクロロ−４−ヒドロキシアニリン（ＤＣＨ
Ａ）、ｐ−Ｎ,Ｎ−ジスルホプロピルアミノアニリン
（ＳＰＡ）、３,５−ジヨード−４−ヒドロキシアニリ
ン（ＤＩＨＡ）、３,３−ジアミノスチルベン−４,４−
ジスルホン酸（ＤＳＤＡ）、ｐ−フェニレンジアミン
（ＰＰＤ）、４−アミノアニリン−３−スルホン酸（Ｄ
ＡＳ）、２−メチル−３,５−ジブロモ−４−ヒドロキ
シアニリン（ＭＤＢＨＡ）、２,６−ジメチル−３,５−
ジクロロ−４−ヒドロキシアニリン（ＤＭＤＣＨＡ）、
４−Ｎ,Ｎ−ジスルホプロピルアミノ−３,５−ジブロモ
アニリン（ＳＤＢＡ）、４−（Ｎ−エチル−Ｎ−ヒドロ
キシエチルアミノ）−３,５−ジブロモアニリン（ＥＨ
ＤＢＡ）、４−Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ−３,４−ヒドロ
キシアニリン（ＤＥＤＨＡ）などが挙げられ、特にＤＢ
ＨＡが好ましい。

【００１７】［化１］の化合物における各アミノ酸残基
の立体配置は、ペプチダーゼ様酵素の基質となりうる限
り、特に限定するものではない。

【００１８】本発明で用いられる酸化酵素としては、酵
素の存在下、色源体を酸化して色素を生成させる酵素が
いずれも使用でき、例えばビリルビンオキシダーゼ（Ｂ
ＬＯＤ、ＥＣ１、３、３、５）、モノフェール・オキシ
ゲナーゼ（ＭＰＯ、ＥＣ１、１４、１８、１）、アスコ
ルビン酸オキシダーゼ（ＡＯＤ、ＥＣ１、１０、３、
３）カテコールオキシダーゼ（ＥＣ１、１０、３、
１）、ラッカーゼ（ＥＣ１、１０、３、２）Ｏ−アミノ
フェノールオキシダーゼ（ＥＣ１、１０、３、４）、３
−ヒドロキシアンスラニレイトオキシダーゼ（ＥＣ１、
１０、３、５）、フェノール−２−モノオキシゲナーゼ
（ＥＣ１、１４、１３、７）などが挙げられる。

【００１９】色源体としては、酸化されて発色するもの
は何れも使用でき、感度を向上させるには、分子吸光係
数の高いものが好ましい。しかし、エンハンサーの非存
在下の反応において発色（試薬盲検に相当）が少なく、
一方、エンハンサーの存在により著しく強い発色を示す
化合物が好ましい。このような色源体としては、例え
ば、例えば下式［化３］〜［化１６］に示す化合物など
が挙げられる。

【００２０】

【化３】

【００２１】

【化４】

【００２２】

【化５】

【００２３】

【化６】

【００２４】

【化７】

【００２５】

【化８】

【００２６】

【化９】

【００２７】

【化１０】

【００２８】

【化１１】

【００２９】

【化１２】

【００３０】

【化１３】

【００３１】

【化１４】

【００３２】

【化１５】

【００３３】

【化１６】

【００３４】Ｔ基はそのＣ末端がニトロアルギニン残基
のＮ末端と結合する０〜２個のアミノ酸残基であればい
ずれでもよく、グリシン、リジン、アルギニン、フェニ
ルアラニンまたはこれらの保護誘導体残基であることが
好ましい。特にＴ基はＧｌｙ−Ｇｌｙであるのが好まし
い。該保護誘導体には、セリンのＯＨ基、システインの
ＳＨ基、アスパラギン酸やグルタミン酸のβ−あるいは
γ−ＣＯＯＨ基が保護基、例えば、ベンジル基などで保
護されたものが包含される。

【００３５】本発明の検査剤は、［化１］の化合物が検
体由来のペプチダーゼ様酵素の基質として反応し、これ
から遊離したエンハンサーが酸化酵素による色源体の酸
化縮合反応を増強する反応を行うものであればいずれで
もよい。基本的には［化１］の化合物を含む水溶液と酸
化酵素および色源体が共存する水溶液との組み合わせ、
あるいは［化１］の化合物、酸化酵素および色源体が共
存する水溶液でよい。好ましくは、測定時、ｐＨ５〜９
となるよう緩衝剤を含有させる。用いる緩衝剤は通常用
いられるものであればいずれでもよく、例えば、グッド
バッファー、トリス塩酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、ホウ酸
緩衝剤、酢酸緩衝剤、ベロナール緩衝剤、ＨＥＰＥＳ緩
衝剤などを用いることができる。該水溶液は、［化１］
の化合物、色源体、酸化酵素および所望により緩衝剤を
蒸留水に溶解するような公知の方法で製造することがで
き、要すれば、さらに界面活性剤、防腐剤、抗生物質な
どの他の添加物を適宜添加することができる。

【００３６】反応に際し、試薬は［化１］の化合物１０
ｎＭ〜１０ｍＭ、色源体１μＭ〜１００ｍＭ、酸化酵素
０.００１〜１０００Ｕ／ｍＬ、緩衝剤１ｍＭ〜１Ｍの
範囲で使用することが好ましい。

【００３７】前記の水溶液は、これらの濃度の［化１］
の化合物、色源体、酸化酵素、所望により緩衝剤を含有
し、そのまま直接、検査に供することのできる形態とし
てもよく、あるいは、使用時、適宜蒸留水で所望の濃度
に希釈する濃度液の形態とすることもできる。また、本
発明の検査剤は、これらの水溶液の形態のものを公知の
方法により乾燥粉末化、顆粒化した固形の形態、粉末成
分を混合した粉末、その顆粒化物などの固形の形態、あ
るいは液状の形態のものをろ紙、ペーパーディスク、シ
ート、フィルム、スティック、スポンジ、高分子物質な
どの担体に含浸させた形態であってよい。さらに、本発
明の検査剤は、［化１］の化合物を含有する試薬と、酸
化酵素、色源体、緩衝剤などの他の試薬とを組合せたキ
ットとしてもよい。

【００３８】本発明の検査剤を用いて検査を行うには、
まず、検体を採取する。検体の採取は公知の方法で行っ
てよく、例えば、歯肉溝浸出液や唾液は濾紙、キャピラ
リー、ペーパーポイントなどで採取でき、歯垢は綿棒、
キュレット、スケラーなどで採取できる。

【００３９】ついで、［化１］の化合物濃度を１０ｎＭ
〜１０ｍＭに調整した該化合物を含有する本発明の検査
薬と検体を、例えば、試験管、マイクロタイタープレー
ト、セル、パイアル瓶、プラスチック・キュベットなど
の中で接触させ、好ましくは、ｐＨ６.０〜８.５で水解
反応を行わせる。この反応は、通常、２５〜４５℃で行
なわれ、反応時間は検体や反応温度により異なるが、３
７℃にて１分間〜７２時間程度の反応を行う。

【００４０】反応終了後、発色の有無、強弱を肉眼ある
いは分光光度計や蛍光光度計で判定し、これにより検体
中のアミノペプチダーゼ様酵素活性の有無、強弱を判断
し、歯周疾患の罹患や進行を診断あるいは予測、あるい
は治療の効果を判定する。

【００４１】

【実施例】つぎに、実験および実施例を挙げて、本発明
をさらに詳しく説明する。

【００４２】［製造例１：Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
（ＮＯ₂）−ＤＢＨＡの合成］ 常法で得たＮ−ベンゾキシカルボニル−グリシル−グリ
シン ５.１８ｇ（１９.５ｍＭ）を無水ジメチルホルム
アミド（ＤＭＦ）１０４ｍＬに溶解した。冷却下（−１
５℃）、これにＮ−メチルモルホリン２.１４ｍＬとイ
ソブチルクロロホルメート２.６５ｍＬを加えた。つい
で、トリフルオロ酢酸Ｌ−ニトロアルギニル３,５−ジ
ブロモ−４−ヒドロキシアニリン １１.９ｇの無水ＤＭ
Ｆ８３ｍＬ溶液にトリエチルアミン２.８５ｍＬを加え
た溶液を、冷却下（−１５℃）に滴下した。滴下終了
後、室温で２時間反応させた。反応終了後、減圧濃縮
し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホル
ム：メタノール＝５：１）で精製し、Ｎ−ベンゾキシカ
ルボニル−グリシル−グリシル−Ｌ−ニトロアルギニル
−３,５−ジブロモ−４−ヒドロキシアニリン １１.６
ｇ（収率８３％）を得た。

【００４３】［製造例２：Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ₂）−
ＤＢＨＡの合成］ Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ₂）−ＯＨ（５.７０ｇ、１５.６
８ｍｍｏｌ）（国産化学(株)製）を無水テトラヒドロフ
ラン（ＴＨＦ）（２０倍量：１１４.０ｍＬ）に懸濁さ
せ、−１５℃撹拌下、Ｎ−メチルモリホリン（１.７３
ｍＬ）とイソブチルクロロホルメート（２.１４ｍＬ）
を加えて３時間撹拌した。

【００４４】これに１.０５倍モルのジブチルヒドロキ
シアニリン（ＤＢＨＡ）４.４０ｇ（国産化学(株)製)を
７倍量のＴＨＦ３０.８ｍＬに溶解したものを加え、室
温に昇温して１６時間反応させた。反応終了後、水１５
０ｍＬを加え、酢酸エチル７５０ｍＬで分液抽出した。
有機相を減圧濃縮し、濃縮残渣をシリカゲルクロマトグ
ラフィー（Kieselgel６０、４４６.０ｇ、Chloroform：
Ethyl acetete＝１：７）にて精製し、Ｂｏｃ−Ａｒｇ
（ＮＯ₂）−ＤＢＨＡ（８.０６ｇ、収率９０.４％）の
淡茶色結晶を得た。

【００４５】［製造例３：Ａｒｇ（ＮＯ₂）−ＤＢＨＡ
の合成］ 製造例２で得たＢｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ₂）−ＤＢＨＡを
２０倍量のギ酸（８８％）に溶解し、室温にて１７時間
反応させた。反応系を減圧濃縮し、トルエンにて共沸し
た。メタノール−クロロホルムから再沈殿を行ない、Ａ
ｒｇ（ＮＯ₂）−ＤＢＨＡの白色粉末を得た。

【００４６】［実施例１］ＡＳＯＤ 3000Ｕをバイアル
瓶（胴径３０ｍｍ、長さ６０ｍｍ）内で凍結乾燥させ、
これを試薬Ａ１（３０検体用）とした。製造例１にて調
製したＮ−カルボベンゾキシ−グリシル−グリシル−ア
ルギニル（ＮＯ₂）−ＤＢＨＡ ３０μＭおよび色源体と
して［化８］の化合物（ＭＣＤＰ）１５０μＭを混合
し、バイアル瓶（胴径１８ｍｍ、長さ３３ｍｍ）内で凍
結乾燥させ、これを試薬Ａ２（１検体用）とした。１ｍ
ｇ／ｍＬディスパノールを含む０.１Ｍ ＰＩＰＥＳ緩
衝液（ｐＨ７.０）３０ｍＬをペットボトル（７５ｍＬ
容量）に入れ、これを試薬Ｂ（３０検体用）とした。こ
れらを組み合わせて、本発明の歯周疾患検査用組成物キ
ットとした。

【００４７】このキットを用い、予め調整しておいたト
レポネーマ・デンティコーラ（Ｔｄ）、バクテロイデス
・ジンジバリス（Ｂｇ）、バクテロイデス・フォーサイ
サス（Ｂｆ）の洗浄菌体を添加した。つぎにこれを撹拌
後、３７℃で１５分間反応し、波長６６６ｎｍの吸光度
を測定した。結果を表１に示す。なお、表１中の数値
は、基質としてＮ−カルボベンゾキシ−グリシル−グリ
シル−アルギニル−ＤＢＨＡを用い同様の方法により測
定した値を１００とした換算値である。

【００４８】［実施例２］製造例２にて調製したｔ−ブ
トキシカルボニル−ニトロアルギニル−ＤＢＨＡを用い
た以外は前記実施例１と同様にして検査用キットを調整
した。これを用いて実施例１と同様にして検体との反応
を調べた。

【００４９】［実施例３］製造例３にて調製したニトロ
アルギニル−ＤＢＨＡを用いた以外は前記実施例１と同
様にして検査用キットを調整した。これを用いて実施例
１と同様に検体との反応を調べた。

【００５０】 表 １ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 実施例 Ｂｇ Ｂｆ Ｔｄ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ １ ５ ２３ ２ ２ ７ ２７ ２ ３ ７ １１７ ４ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

【００５１】

【発明の効果】本発明の検査剤は、Ｂｆに対して相対的
に高い活性が認められるが、Ｂｇ、Ｔｄでは活性が低
い。その結果、口腔内プラーク中に存在する種々の菌の
うちバクテロイデス・フォーサイサス（Ｂｆ）を特異的
にかつ簡便、迅速に検出でき、しかも歯周疾患の活動度
が正確に反映される。本発明の検査剤によれば、歯周疾
患原因菌の検知が臨床的に可能である。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成４年２月２１日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００９

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００９】本発明は、検体中のアミノペプチターゼ様
酵素活性を測定することによりバクテロイデス・フォー
サイサスを特異的に検出し、歯周疾患の罹患や進行を診
断あるいは予測するための検査剤であって、下式： Ｘ−Ｔ−Ａｒｇ（ＮＯ_２）−Ｙ ［化１］ ［式中、Ａｒｇ （ＮＯ_２）はニトロアルギニン残基、
Ｘは水素またはアミノ基保護基、ＴはそのＣ端末がニト
ロアルギニン残基のＮ末端と結合する０〜２個のアミノ
酸残基、Ｙはアルギニン残基のＣ末端に結合し、酵素の
存在下に酸化酵素によって色源体の酸化反応の反応速度
を増加させる化合物（以下、エンハンサーという）の残
基を意味する］で示される化合物を前記酵素の基質とし
て含む歯周疾患検査剤およびこれを含む検査キットを提
出するものである。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１９

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１９】色源体としては、酸化されて発色するもの
は何れも使用でき、感度を向上させるには、分子吸光係
数の高いものが好ましい。しかし、エンハンサーの非存
在下の反応において発色（試薬盲検に相当）が少なく、
一方、エンハンサーの存在により著しく強い発色を示す
化合物が好ましい。このような色源体としては、例え
ば、下式［化３］〜［化１６］に示す化合物などが挙げ
られる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 武村 あかね 大阪府茨木市小柳町13番17号 ヘラルダー 90 502号 (72)発明者 長谷川 健二 大阪府高槻市玉川２−11−203 (72)発明者 中村 正一 大阪府高槻市宮が谷町586−121 (72)発明者 竜田 邦明 東京都杉並区松の木２−26−７

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 検体中のアミノペプチターゼ様酵素活性
   を測定することにより、歯周疾患の罹患や進行を診断あ
   るいは予測するための検査剤であって、下式： Ｘ−Ｔ−Ａｒｇ（ＮＯ₂）−Ｙ ［化１］ ［式中、Ａｒｇ（ＮＯ₂）はニトロアルギニン残基、Ｘ
   は水素またはアミノ基保護基、ＴはそのＣ末端がニトロ
   アルギニン残基のＮ末端と結合する０〜２個のアミノ酸
   残基、Ｙはアルギニン残基のＣ末端に結合し、酸素の存
   在下に酸化酵素によって色源体の酸化反応の反応速度を
   増加させる化合物の残基を意味する］で示される化合物
   を前記酵素の基質として含む歯周疾患検査剤。
2. 【請求項２】 Ｙが３,５−ジブロモ−４−ヒドロキシ
   アニリン（ＤＢＨＡ）である前記請求項１記載の歯周疾
   患検査剤。
3. 【請求項３】 Ｔ基中のＣ末端アミノ酸残基が１または
   ２個のグリシン残基である前記請求項１記載の歯周疾患
   検査剤。
4. 【請求項４】 基質がニトロアルギニル−３,５−ジブ
   ロモ−４−ヒドロキシアニリン、ｔ−ブトキシカルボニ
   ル−ニトロアルギニル−３,５−ジブロモ−４−ヒドロ
   キシアニリンまたはＮ−カルボベンゾキシ−グリシル−
   グリシル−ニトロアルギニル−３,５−ジブロモ−４−
   ヒドロキシアニリンである前記請求項１記載の歯周疾患
   検査剤。
5. 【請求項５】 前記請求項１記載の検査剤、色源体およ
   び酸化酵素を含む歯周疾患検査用キット。