JPH0534024B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、生体免疫機能に起因する各種疾患と
密接な関係をもつと考えられている自己抗体およ
び／または免疫複合体が特異的に吸着除去された
血液または血漿を製造する方法に関する。 周知の如く、血液中に発現する自己抗体およ
び／または免疫複合体は、癌、免疫増殖性症候
群、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス
等の自己免疫疾患、あるいはアレルギー、臓器移
植時の拒絶反応等の生体免疫機能に関係した疾患
および現象の原因あるいは進行と密接な関係をも
つていると考えられている。 そこで、血液、血漿等の体液成分から、上記自
己抗体および／または免疫複合体を特異的に吸着
除去することによつて、上記の如き疾患の進行を
防止し、症状を軽減せしめ、さらには治癒を早め
ることが期待されていた。 従来、このような目的に供し得る吸着材として
は、プロテインＡを不溶性担体に固定させた吸着
材、アクリル酸エステル系多孔性樹脂（例えば
XAD−７、ロームアンドハース社製）あるいは
カルボキシメチルセルロース等の陽イオン交換体
が提案されている。 しかしながら、プロテインＡを不溶性担体に固
定された吸着材は、自己抗体および／または免疫
複合体に対し特異的吸着機能を有するものの、黄
色ブドウ球菌由来の生理活性タンパク質であるた
め、原料確保が困難で製品コストがかかるという
不利点があり、また、活性が不安定なため、固定
化時の取り扱い、固定化後の保存等による失活を
起こし易い欠点があり、さらに、体液に接触せし
めて使用する際に、プロテインＡ溶出による弊害
が生じる危険があり、加えて、失活を抑えつつ滅
菌することが困難であるという難点があつた。 また、アクリル酸エステル系多孔性樹脂および
カルボキシメチルセルロースは、吸着能が小さ
く、その上、吸着特異性が低いという欠点があ
り、さらに体液中のアルブミンをも吸着するの
で、浸透圧の異常をきたし、安全な治療器として
利用することは不可能であつた。 本発明の目的は、上記の如き従来技術に基づく
自己抗体および／または免疫複合体の吸着材の問
題点に鑑み、一般的に普及可能であり、自己抗体
および／または免疫複合体を高活性かつ特異的に
吸着し、安定な活性を保持し、安全性があり、滅
菌操作も簡易に行うことができ、体液浄化あるい
は再生用に適した吸着材を利用して、自己抗体お
よび／または免疫複合体が選択的に除去された血
液または血漿を製造する方法を提供せんとするも
のである。 本発明者らは、上記目的に沿つて鋭意研究した
結果、各種の化合物を不溶性担体に結合し、自己
抗体および免疫複合体に対する結合活性を評価し
たところ、実に驚くべきことには、不溶性担体が
結合した疎水性アミノ酸またはその誘導体が、ア
ルブミンをほとんど吸着せず、極めて高活性かつ
特異的に自己抗体、免疫複合体を吸着することを
見出し、本発明を完成するに至つた。 すなわち、本発明は、25℃における対生理食塩
水溶解度が100ｍmol／dl以下である疎水性アミ
ノ酸またはその誘導体および／または該疎水性ア
ミノ酸またはその誘導体を含むオリゴマーが水不
溶性担体１mlあたり0.1〜30mg結合されてなる吸
着材に、自己抗体および／または免疫複合体が共
存する血液または血漿を流すことを特徴とする自
己抗体および／または免疫複合体が選択的に除去
された血液または血漿を製造する方法に係る。 本発明で対象とする吸着物質は、自己抗体およ
び／または免疫複合体であるが、より詳細に説明
すると、リウマチ因子、抗核抗体、抗DNA抗体、
抗リンパ球抗体、抗赤血球抗体、抗血小板抗体、
アセチルコリンレセプター抗体、血清脱髄抗体、
抗サイログロブリン抗体、抗マイクロゾーム抗
体、抗大腸抗体等の自己抗体、自己抗体の還元生
成物、化学修飾生成物等のイムノグロブリン誘導
体、自己抗体間または自己抗体と他の物質、特に
抗原および抗原様物質との複合体等である。これ
らの中でも特に本発明の対象とする吸着物質とし
て好ましいものは、自己免疫疾患の原因および進
行と深い関わりをもつ自己抗体および免疫複合体
である。 本発明に用いる疎水性アミノ酸またはその誘導
体とは、対生理食塩水溶解度100ミリモル／dl以
下（25℃）、より好ましくは30ミリモル／dl以下
の化合物をいう。対生理食塩水溶解度が100ミリ
モル／dlより大きい化合物は、親水性が高くなり
すぎ、自己抗体および／または免疫複合体に対す
る親和力が低下する結果、吸着能が極端に低下す
る。また、より親水的なアルブミンに対する親和
力が生じて、アルブミンをも非特異的に吸着する
ようになり好ましくない。 疎水性アミノ酸およびその誘導体とは、
Tanford.Nozaki（J.Am.Chem.Soc.、184 4240
（1962）、J.Biol.Chem.246 2211（1971））〔タンフ
オード、ノザキ（ジヤーナル・オブ・アメリカ
ン・ケミカル・ソサエテイ、184、4240（1962）、
ジヤーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
イ246、2211（1971）〕により定義された疎水性尺
度でみて、1500cal／mol以上のアミノ酸および
その誘導体で、対生理食塩水溶解度100ミリモ
ル／dl以下の化合物を意味する。例えば、リジ
ン、バリン、ロイシン、チロシン、フエニルアラ
ニン、イソロイシン、トリプトフアンおよびその
誘導体等である。これらの疎水性アミノ酸および
その誘導体の中では、トリプトフアンおよびその
誘導体が特に良好な結果を与える。また、アミノ
酸はｌ、ｄの立体配座を特に限定することなく使
用することができる。 疎水性アミノ酸またはその誘導体のうち、不溶
性担体に結合した状態で非解難性、両イオン性、
カチオン性の化合物が、自己抗体および／または
免疫複合体をより選択的に吸着するので、アニオ
ン性の化合物よりは好ましい。アニオン性の化合
物は、アルブミン分子が自己抗体および免疫複合
体より電気的に陰性であることより当然予想され
る結果に反して、アルブミンに親和性であり、自
己抗体および／または免疫複合体の吸着量が低下
した。例えば、フエニルアラニンメチルエステ
ル、フエニルアラニン、チロシンは、その疎水性
に大きな相違がないが、そのアミノ基で不溶性担
体に共有結合し、自己抗体吸着能を評価した時、
フエニルアラニンメチルエステル＞フエニルアラ
ニンチロシンの序列になり、フエニルアラニ
ン、チロシンは、吸着能が低下することにその実
例をみることができる。また、非芳香族化合物も
同様の結果を示した。特にアニオン性基として、
スルフオン酸基を有し、より親水性した化合物
は、自己抗体および／または免疫複合体よりアル
ブミンに親和的であり、アルブミン吸着材として
作用した。これは化合物の電荷とアルブミン、分
子内のミクロな環境の電荷との相互作用によるも
のと推定される。 以上の実験結果よりみて、本発明の作用メカニ
ズムは、不溶性担体に結合した疎水性化合物と自
己抗体および／または免疫複合体の疎水性相互作
用力（Van der Waals力）に基づくものと考え
られる。また、遠達力としての電荷間相互作用力
（クーロン力）が二次的に作用しているものと推
定される。 本発明の疎水性アミノ酸またはその誘導体を含
むオリゴマーは、分子量1000以下のオリゴマーで
ある。これによりプロテインＡ（分子量42000）の
ような天然高分子に比較して固定化時の取り扱
い、固定化後の保存も容易に行えるものである。
また、当該物質が不溶性担体から溶出した場合に
も、分子量１万以下のオリゴマーは、生体に対す
る抗原性が無視できるほど小さく安全であり、滅
菌操作も容易に行えるものである。該オリゴマー
は、疎水性化合物モノマー単独または他の化合物
との共重合により得られる。疎水性アミノ酸また
はその誘導体モノマーとしては、例えば、トリプ
トフアン等を用いることができる。 本発明で用いられる不溶性担体は、親水性担
体、疎水性担体いずれも使用できるが、疎水性担
体を用いる場合には、時に担体へのアルブミンの
非特異的吸着が生じるため、親水性担体の方が好
ましい結果を与える。 不溶性担体の形状は、粒子状、繊維状、中空糸
状、膜状等いずれの公知の形状も用いうるが、疎
水性化合物の保持量、吸着材としての取り扱い性
よりみて、粒子状、繊維状のものが好ましい。 粒子状担体としては、平均粒径150μないし
2500μの範囲にあることが好ましい、平均粒径は
JIS−Ｚ−8801に規定されるフルイを用いて流水
中で分級した後、各級の上限粒径と下限粒径の中
間値を各級の粒径とし、その重量平均として平均
粒径を算出する。また、粒子形状は球形が好まし
いが、特に限定されるものではない。平均粒径が
2500μ以上では、自己抗体および／または免疫複
合体の吸着量及び吸着速度が低下するし、150μ
以下では、凝固系の活性化、血球粘着をおこしや
すい。使いうる粒子状担体としては、アガロース
系、デキストラン系、セルロース系、ポリアクリ
ルアミド系、ガラス系、活性炭系の担体である
が、ゲル構造を有する親水性担体が良好な結果を
与える。また、通常固定化酵素、アフイニテイク
ロマトグラフイに用いられる公知の担体は、特別
な限定なく使用することができる。 粒子状担体としては、多孔性粒子、特に多孔性
重合体を用いることもできる。本発明で用いられ
る多孔性重合体粒子は、その表面に疎水性化合物
を固定化しうるものであり、平均孔系300Åない
し9000Å、より好ましくは1000Åないし6000Åの
範囲にあるものである。重合体組成は、ポリアミ
ド系、ポリエステル系、ポリウレタン系、ビニル
化合物の重合体等、多孔性構造をとりうる公知の
重合体を用いることができるが、特に親水性モノ
マーにより親水化したビニル化合物系多孔性重合
体粒子が好ましい結果を与える。 該多孔性構造は、平均粒径300Åないし9000Å
範囲にあるのが好ましいが、平均孔径が小さすぎ
る場合には、吸着される自己抗体および／または
免疫複合体の量が少なく、大きすぎる場合には、
重合体粒子の強度が低下し、かつ表面積が減少す
るため実用的ではない。 平均孔径の測定は水銀圧入式ポロシメーターに
よつた。この方法は、多孔性物質に水銀を圧入し
てゆき、浸入した水銀量から気孔量を、圧入に要
する圧力から孔径を求める方法であり、40Å以上
の孔を測定することができる。本発明の孔とは、
孔径が40Å以上の表面からの連通孔と定義する。
平均孔径は、孔径をｒ、ポロシメーターで測定し
た累積気孔量をＶとしたとき、dV／ｄ log ｒ
の値が最大となるときのｒの値とする。 繊維状担体を用いる場合には、その繊維形が
0.02デニールないし10デニール、より好ましくは
0.1デニールないし５デニールの範囲にあるもの
が良い。繊維径が大きすぎる場合には、自己抗体
および／または免疫複合体の吸着量および吸着速
度が低下するし、小さすぎる場合には、凝固系の
活性化、血球粘着、目づまりをおこしやすい。用
いうる繊維状担体としては、再生セルロース系繊
維、ナイロン、アクリル、ポリエテル等公知の繊
維を一般に用いることができる。 疎水性アミノ酸またはその誘導体を不溶性担体
の表面に固定する方法は、共有結合、イオン結
合、物理吸着、包埋あるいは重合体表面への沈澱
不溶化等あらゆる公知の方法を用いることができ
るが、疎水性アミノ酸またはその誘導体の溶出性
から考えると、共有結合により、固定、不溶化し
て用いることが好ましい。そのため通常固定化酵
素、アフイニテイクロマトグラフイで用いられる
公知の不溶性担体の活性化方法および疎水性化合
物との結合方法を用いることができる。また、必
要に大じて不溶性担体と疎水性アミノ酸またはそ
の誘導体の間に任意の長さの分子（スペーサー）
を導入して使用することもできる。例えば、アガ
ロースのヒドロキシル基とヘキサメチレンジイソ
シアナートの片側のイソシアナート基を反応、結
合させ、残つたイソシアナート基と疎水性アミノ
酸またはその誘導体のアミノ基、ヒドロキシル
基、スルフヒドリル基、カルボキシル基等を反
応、結合させるごとく実施することができる。ス
ペーサー長さとしては、スペーサーのないものか
ら、その中に含まれる原子数で20までが特に好ま
しい結果を与える。 本発明で不溶性担体に結合している疎水性アミ
ノ酸またはその誘導体の量は、不溶性担体１ml当
たり0.1mgないし30mgの範囲である。より好まし
くは0.5mgないし15mgの範囲である。保持量が0.1
mg／mlを下まわると自己抗体および／または免疫
複合体の吸着量が極度に低下するし、30mg／mlを
上まわると吸着特異性が低下し好ましくない。 本発明に使用する自己抗体および／または免疫
複合体の吸着装置は、上述の如き自己抗体およ
び／または免疫複合体の吸着材を、体液の導出入
口を備えた容器内に充填保持させてなるものであ
る。 第１図において、１は本発明に使用する自己抗
体および／または免疫複合体の吸着装置の１例を
示すものであり、円筒２の一端開口部に、内側に
フイルター３を張つたパツキング４を介して体液
導入口５を有するキヤツプ６をネジ嵌合し、円筒
２の他端開口部に内側にフイルター３′を張つた
パツキング４′を介して体液導出口７を有するキ
ヤツプ８をネジ嵌合して容器を形成し、フイルタ
ー３および３′の間〓に吸着材を充填保持させて
吸着材層９を形成してなるものである。 吸着材層９には、本発明の該吸着材を単独で充
填してもよく、他の吸着材と混合もしくは積層し
てもよい。他の吸着材としては、例えばDNA等
の他の悪性物質（抗原）の吸着材や、幅広い吸着
能を有する活性炭等を用いることができる。これ
により吸着材の相乗効果によるより広範な臨床効
果が期待できる。吸着材層９の容積は、体外循環
に用いる場合、50〜400ml程度が適当である。 本発明の装置を体外循環で用いる場合には、大
略次の二通りの方法がある。一つには、体内から
取り出した血液を遠心分離機もしくは膜型血漿分
離器を使用して、血漿成分の血球成分とに分離し
た後、血漿成分を該装置に通過させ、浄化した
後、血球成分と合わせて体内にもどす方法であ
り、他の一つは体内から取り出した血液を直接該
装置に通過させ、浄化する方法である。 また、血液もしくは血漿の通過速度について
は、該吸着材の吸着能率が非常に高いため、吸着
材の粒度を粗くすることができ、また充填度を低
くできるので、吸着材層の形状の如何にかかわり
なく、高い通過速度を与えることができる。その
ため多量の体液処理をすることができる。 体液の通液方法としては、臨床上の必要に応
じ、あるいは設備の装置状況に応じて、連続的に
通液してもよいし、また断続的に通液使用しても
よい。 本発明の方法は、以上述べてきたように、体液
中の自己抗体および／または免疫複合体を高率か
つ特異的に吸着除去し、非常にコンパクトである
と共に簡便かつ安全である。また、滅菌操作も容
易かつ確実に実施できるというメリツトも併せも
つている。 本発明は、自己血漿等の体液を浄化、再生する
一般的な用法に適用可能であり、生体免疫機能に
関係した疾患の安全で確実な治療、特に慢性関節
リウマチ、全身性エリテマトーデス等の自己免疫
疾患の治療に有効である。 また、本発明の吸着材は、装置に充填して治療
器として用いられるにとどまらず、イムノグロブ
リン、自己抗体、イムノグロブリン誘導体、イム
ノグロブリン複合体の分離、精製用吸着材および
これらの測定用基材としても極めて有効に利用で
きる。 以下、実施例により、本発明の実施の態様をよ
り詳細に説明する。 参考例 １ CNBr活性化セフアローズ4B（スウエーデン、
フアルマシア社製、平均粒径260μ）に、通常の
方法によつて各種の芳香族環および疎水性アミノ
酸またはその誘導体を含む疎水性化合物を結合せ
しめ、過剰の活性基をエタノールアミンでブロツ
キングした。保持量は、残余疎水性化合物の１級
アミノ基を４−フエニルスピロ〔フラン−２
（3H），1′−フタラン〕−３，3′−ジオン（“フルラ
ム ”ロシユ社製）と反応結合させ、475〜490n
ｍの蛍光（励起波390nｍ）で測定し、別に未活
性化セフアローズ4Bで実験した物理吸着量をさ
し引いて算出した。 エタノールアミンブロツキング後の吸着材を、
PH４−0.1M酢酸バツフアー、PH8.5−0.1Mホウ酸
バツフアーでくり返し洗浄後、生理食塩水で洗
浄、水切りして実験に供した。 吸着実験は、ヒト血漿１容と吸着材１容を混合
し、37℃、３時間インキユベートした。吸着後の
グロブリン、アルブミン量をＡ／Ｇテストキツト
〔Ａ／GBテスト ワコー、和光純薬工業(株)製〕
にて測定した。また、未活性化セフアローズを用
いて吸着実験を行い、コントロールとした。結果
を表−１に示した。表−１より少なくとも１つの
芳香族環を含む疎水性化合物が、特異的かつ高率
にグロブリンを吸着することが明らかである。

【表】 さらに吸着実験後の吸着材（トリプタミン／セ
フアローズ4B）１mlを用いて、吸着したグロブ
リンのイムノグロブリンクラス別定量を行つた。
吸着材を氷冷したPBSで５回洗浄、脱水後、50
mlを氷冷した0.1Mグリシン塩酸緩衝液（PH2.5）
で吸着したグロブリンを溶離した。溶離液をシン
グルラジアルイムノデイフユージヨン（SRID）
にてグロブリンクラス別定量を行つた。SRIDは
(株)医学生物学研究所製のプレートを用いた。検出
されたグロブリンクラス別の量は、イムノグロブ
リンＧが６mg、イムノグロブリンＭが0.6mg、イ
ムノグロブリンＡが1.4mgであつた。これにより
本発明の吸着材が、イムノグロブリンをそのクラ
スに係わりなく高活性に吸着することが判る。 参考例 ２ 疎水性化合物として、シクロヘキシルアミンお
よびイソロイシンメチルエステルを用いたこと以
外は、参考例１と同様にして吸着実験を行つたと
ころ、シクロヘキシルアミンでグロブリン吸着率
12％、アルブミン吸着率３％、イソロイシンメチ
ルエステルにてグロブリン吸着率25％、アルブミ
ン吸着率６％といつた良好な結果が得られた。 参考例 ３ 疎水性化合物の代わりに親水性化合物を用い
て、参考例１と同様の実験を行つた。結果を表−
２に示した。これより親水性化合物が、グロブリ
ンの吸着能、吸着特異性において著しく劣ること
は明らかである。

【表】 実施例 １ 疎水性化合物としてトリプトフアン、トリプト
フアンメチルエステル、トリプタミン、ｌ−フエ
ニルアラニンメチルエステルを、ヒト血漿の代わ
りにヒト慢性関節リウマチ患者血漿を用いる以外
は、参考例１と同様を実験を行つた。慢性関節リ
ウマチの悪性物質であるリウマチ因子（自己抗
体）、免疫複合体の吸着除去能を測定した。リウ
マチ因子の測定は、ラテツクス凝集テスト、受身
感作血球凝集テストにて行つた。 ラテツクス凝集テストは、ポリスチレンラテツ
クス粒子にヒト−γ−グロブリンを吸着させたも
のに、リウマチ因子を含む患者血漿を作用させる
と、ラテツクス粒子が凝集する性質を検出法とし
て測定するものであり、通常血漿の希釈系列を作
成して、ラテツクス粒子が凝集しなくなる血漿希
釈倍率でリウマチ因子濃度を評価するものであ
る。リウマチ因子を高濃度に含む血漿は、陰性に
なる希釈倍率が高くなり、低濃度の血漿は逆に低
くなる。 受身感作血球凝集テストは、ヒツジ赤血球にウ
サギ−γ−グロブリンを吸着させたものであり、
他はラテツクス凝集テストと同じである。一般
に、受身感作血球凝集テストの法がラテツクス凝
集テストよりリウマチ因子特異性が高いとされて
いる。 グリシン食塩緩衝液で希釈系列を作成して、ラ
テツクス凝集テストにてリウマチ因子の陰性にな
る希釈倍率を求めた。ラテツクス凝集テストは、
日本凍結乾燥研究所のキツトを用いて行つた。同
様に受身感作血球凝集テスト〔RAHAテスト、
富士臓器製薬(株)製〕にて評価した。 また、免疫複合体の測定は、ポリエチレングリ
コール、補体溶血法によつた。この方法はポリエ
チレングリコールで沈降分取した免疫複合体を、
ヒト健康人血清中の補体と反応させ、残余の補体
量を抗体を結合した赤血球の溶血量で測定するこ
とにより、免疫複合体量を評価するものである。
この方法の操作方法、条件は以下の通りである。 (1) 検体0.3mlを分離管に注ぐ。0.2M EDTA50μ
を加え撹拌する。ほう酸バツフア−（PBS）
50μを加え撹拌する。12.5％PEG（ポリエチレン
グリコール）（Mw7500）を0.1ml加え撹拌し、
４℃90min静置する。 (2) ４℃、1700ｇ10min遠心し、得られた沈澱を
2.5％PEG1.0mlで洗う。1700ｇ15min遠心し、
上清を排出する。 (3) 37℃のGVB⁺⁺（２価陽イオンを含むゼラチン
ベロナールバツフアー）30μを加え、沈澱を
溶解する。補体源としてプール健康人血清10μ
加える。37℃、30min、免疫複合体と補体と
を反応させる。 (4) 1.5×10⁸／mlEA（抗体感作赤血球）1.0mlを加
え、37℃60min浸とうさせて、残存補体による
溶血反応を促進させる。 (5) 反応後、４℃の生食水6.5mlを加えて遠心し、
上清の吸光度（OD₄₁₄）を測定する。 (6) 対照（健康人血清）に対する溶血の阻止率を
算出し、単位をPEG−c.c.％とする。 〔阻止率＝対照−検体吸光度／対照吸光度×100〕 〔除去率＝未処理−処理血漿阻止率／未処理血漿阻止
率×100〕 なお、EAは日本凍結乾燥研究所製の補体価測
定用感作赤血球（KW）を用いた。また、グロブ
リンは参考例１で用いた方法によつて測定した。 未活性化セフアローズを参考例１と同様にコン
トロールとして用い、結果はコントロールを０と
した場合の除去率で表−３に示した。 表−３より、疎水性アミノ酸およびその誘導体
であるトリプトフアン、トリプトフアンメチルエ
ステル、トリプタミン、ｌ−フエニルアラニンメ
チルエステルがグロブリン、リウマチ因子、免疫
複合体を特異的かつ高率に吸着除去することが明
らかである。

【表】 上表より、疎水性アミノ酸およびその誘導体
が、グロブリンを特異的かつ高率に吸着するこ
と、さらに、より高率かつ特異的にリウマチ因
子、免疫複合体を吸着することは明らかである。 比較例 １ プロテインＡ−セフアローズCL−4B（スウエ
ーデン、フアルマシア社製）を用いて、実施例１
と同様の実験を行つた。グロブリンの定量は、高
速液体クロマトグラフ（カラム3000SW2本東洋
曹達製）を用いて行つた。また、保存安定性を評
価するため、プロテインＡ−セフアローズCL−
4Bを生理食塩液に懸濁し、100℃、60分処理した
ものを用いて、同様の実験を行つた。コントロー
ルをセフアローズCL−4Bとした。結果を表−４
に示した。

【表】 上表より明らかなように、プロテインＡ−セフ
アローズは、疎水性アミノ酸およびその誘導体に
比し、除去率が低く、熱処理した時、特異性が低
下して好ましいものではない。 実施例 ２ リウマチ患者血漿の代わりに、全身製エリテマ
トーデス患者血漿を用いる以外は、実施例１と同
様に実施した。結果を表−５に示した。

【表】 上表より、疎水性アミノ酸およびその誘導体
が、全身性エリテマトーデス患者血漿中の免疫複
合体および抗DNA抗体を、より高率かつ特異的
に吸着することは明らかである。 なお、抗DNA抗体の測定は、ホルマリン固定
ニワトリ血球にDNAを感作したものに、抗DNA
抗体を含む患者血漿を作用させると、ニワトリ血
球が凝集する性質を検出法として測定するもので
ある。他はラテツクス凝集テストと同様にして抗
DNA抗体量を測定する。測定はDNAテストキツ
ト（富士臓器製薬(株)）を用いて行つた。 実施例 ３ ｄ、ｌトリプトフアン、ｄ、ｌフエニルアラニ
ンとｄ、ｌリジンの１：１オリゴペプチドをＮ−
カルボン酸無水物法にて、ｎ−ヘキシルアミンを
開始剤に用いて合成した。リジンのε−アミノ基
は予めカルボベンゾキシ基で保護し、オリゴペプ
チド合成後常法により除去した。生成したオリゴ
ペプチドの重合度（数平均）は末端アミノ基を参
考例１と同様に蛍光分析により求めた。各オリゴ
マーを活性化CH−セフアローズ4Bに常法により
結合し、グリシンバツフアーでブロツキング後洗
浄し、実施例１と同様の実験を行つた。また、コ
ントロールをエタノールアミンでブロツクした
CH−Sepharose4Bとした。結果を表−６に示し
た。

【表】 上表より、疎水性アミノ酸を含むオリゴペプチ
ドが、グロブリン、さらにはリウマチ因子、免疫
複合体を特異的に吸着除去することは明らかであ
る。 参考例 ４ ビニル化合物系多孔性重合体として、ヒドロキ
シルエチルメタアクリレート−エチレングリコー
ルジメタアクリレート−グレシジルメタアクリレ
ートよりなる三元共重合体の平均粒径、平均孔径
が種々異なる重合体を用いて実験を行つた。重合
体中のエポキシ密度は1mol％である。疎水性ア
ミノ酸の誘導体として、ｌ−トリプトフアンメチ
ルエステルを用い、常法により固定した。未反応
エポキシドはエタノールアミンを用いてブロツク
した。保持量は4.3mg／mlレジンであつた。コン
トロールとしてエポキシドを全量エタノールアミ
ンでブロツクしたものを用いた。参考例１と同様
に十分に洗浄したものを実験に供した。該吸着材
５mlを第１図の如き容器内に収納し、グロブリン
の除去装置を作成した。 第２図に示す実験系を用いてグロブリンの吸着
実験を行つた。 すなわち、容器１０とヒト健康人血液１１を25
ml入れ、ポンプ１２により毎分１mlの流速で汲み
出し、イムノグロブリンの除去装置１に送り、ド
リツプチヤンバー１５およびサンプリング口１３
を経て、容器１０に返送されるようにチユーブ１
４を配設した。なお、血液中にはヘパリン２５０
Ｕを添加した。 上記装置により、血液を、１時間循環させた
後、血液をサンプリングし、血漿中ののグロブリ
ン量を測定した。結果を表−７に示した。 いずれの場合も、循環の前後で白血球、血小板
の減少は少なかつた。

【表】 参考例 ５ 0.5デニールのベンベルグ長繊維（旭化成工業
製）を用いて、常法によりCNBr活性化し、ｌ−
トリプトフアンメチルエステルを固定した。ブロ
ツキング、洗浄は参考例１によつた。保持量は
9.8mg／ｇベンベルグであつた。該吸着材を用い
て、実施例１と同様の実験を行つた。第１図の容
器には、該吸着材を１ｇ（ベンベルグ乾燥重量）
収納した。（充填密度0.2ｇ／ml）。別にコントロ
ールとして未処理ベンベルグを用いて比較した。
結果を表−８に示した。また、循環の前後で白血
球、血小板の減少は比較的少なかつた。

【表】 実施例 ４ CNBr活性化セフアローズ4B（スウエーデン、
フアルマシア社製）に、通常の方法により、疎水
性アミノ酸であるｌ−トリプトフアン、ｌ−フエ
ニルアラニンを固定し吸着材とした。ブロツキン
グ、洗浄は参考例１と同様に行い、保持量の測定
も同様に行つた。保持量は、ｌ−トリプトフアン
が2.3mg／mlセフアローズ（湿潤カラム容量）、ｌ
−フエニルアラニンが、2.0mg／mlセフアローズ
であつた。 吸着実験は、重症筋無力症患者血漿１容に対し
水切りした吸着材１容を混合し、37℃、３時間、
振とうしながら、インキユベートした。吸着後の
血漿中、孔アセチルコリンレセプター抗体（自己
抗体）をリンドストロム（Lindstrom）の２抗体
法にて測定した。また、未活性化セフアローズ
4Bを用いて吸着実験を行い、コントロールとし
た。 結果は、コントロールを０とした場合の除去率
で表−９に示した。表−９より、セフアローズ
4Bにｌ−トリプトフアン、ｌ−フエニルアラニ
ンを固定化した吸着材が、重症筋無力症の自己抗
体である抗アセチルコリンレセプター抗体を選択
的、かつ高率に吸着することが明らかである。

【表】 実施例５〜９および比較例２〜４ 疎水性化合物としてチロシン（実施例５）、ト
リプトフアン（実施例６）、フエニルアラニン
（実施例７）、ヒスチジン（実施例８）、バリン
（実施例９）を用い、また、親水性化合物として
DL−トレオニン（比較例２）、ヒドロキシプロリ
ン（比較例３）、プロリン（比較例４）を用いて、
実施例２と同様を実験を行つた。 結果を表−10に示した。この結果より、25℃に
おける対生理食塩水溶解度が100ミリモル／dl以
下の疎水性アミノ酸を結合した吸着材が、グロブ
リン、リウマチ因子、免疫複合体を選択的、か
つ、高率に吸着除去することがわかる。

【表】 【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のグロブリン系化合物の吸着装
置の１例を示す断面図、第２図は実施例における
モデル実験説明図である。 １……自己抗体および／または免疫複合体の除
去装置、２……円筒、３，３′……フイルター、
４，４′……パツキング、５……体液導入口、６
……キヤツプ、７……体液導出口、８……キヤツ
プ、９……吸着材、１０……容器、１１……血
液、１２……ポンプ、１３……サンプリング口、
１４……チユーブ、１５……ドリツプチヤンバ
ー。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 25℃における対生理食塩水溶解度が100ｍ
   mol／dl以下である疎水性アミノ酸またはその誘
   導体および／または該疎水性アミノ酸またはその
   誘導体を含むオリゴマーが水不溶性担体１mlあた
   り0.1〜30mg結合されてなる吸着材に、自己抗体
   および／または免疫複合体が共存する血液または
   血漿を流すことを特徴とする自己抗体および／ま
   たは免疫複合体が選択的に除去された血液または
   血漿を製造する方法。