JPH05344886A - Ｒｎａ、ｄｎａおよび蛋白の同時単離法 - Google Patents

Ｒｎａ、ｄｎａおよび蛋白の同時単離法

Info

Publication number
JPH05344886A
JPH05344886A JP5012461A JP1246193A JPH05344886A JP H05344886 A JPH05344886 A JP H05344886A JP 5012461 A JP5012461 A JP 5012461A JP 1246193 A JP1246193 A JP 1246193A JP H05344886 A JPH05344886 A JP H05344886A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
solvent solution
dna
rna
protein
substantially pure
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP5012461A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2679929B2 (ja
Inventor
Piotr Chomczynski
チョムクジンスキー ピオトル
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Publication of JPH05344886A publication Critical patent/JPH05344886A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2679929B2 publication Critical patent/JP2679929B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明は、生物試料からＲＮＡ、ＤＮＡおよ
び蛋白を同時に単離するための長期保存可能な溶媒溶液
と方法に関する。 【構成】 本発明の溶媒溶液は、フェノール、好ましく
は約０．５−２Ｍの濃度のグアニジニウム化合物（例え
ば、チオシアン酸グアニジニウムや塩酸グアニジニウム
のような酸性グアニジニウム化合物またはその塩）、緩
衝液およびフェノール可溶化剤よりなり、溶媒溶液のｐ
Ｈは約５であり、これは同じ生物試料から実質的に純粋
で分解されていないＲＮＡ、実質的に純粋で分解されて
いないＤＮＡ、および蛋白を単離するのに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の技術分野】本発明は、長期保存可能な溶媒溶液
と、生物試料からＲＮＡ、ＤＮＡおよび蛋白を同時に単
離する方法に関する。
【０００２】
【発明の背景】分子生物学とバイオテクノロジーの分野
で広範囲の研究と開発が急速に進行しているため、実験
および／または商業生産に使用できるリボ核酸（ＲＮ
Ａ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、および蛋白に対す
る需要が増加している。すべての生物試料はＲＮＡ、Ｄ
ＮＡおよび蛋白を含有する；しかし多くの臨床および研
究への応用のためには、組織および細胞培養物からこれ
らの成分を単離し性状解析することが必要である。例え
ば、医学や農業の分野で重要な遺伝子（例えばインスリ
ン遺伝子、成長ホルモン遺伝子、および植物の生産性を
上げるための遺伝子）の分子クローニングには、ＲＮＡ
とＤＮＡの単離が必要である。さらにヒトのゲノムの分
子的欠陥の早期検出および遺伝子発現の研究のために
は、ＲＮＡ、ＤＮＡおよび蛋白の単離と性状解析が必要
である。多くの場合同じ生物試料からＲＮＡ、ＤＮＡお
よび蛋白を単離することが必要であるかまたは好まし
い。しかし組織試料が非常に小さい場合（例えば生検の
場合）、および試料が分割できない場合そして各成分を
異なる単離法で使用することができない場合は、これは
不可能ではないにしても非常に困難である。
【０００３】生物試料からＲＮＡを単離するには多くの
公知の方法がある。例えば本出願人による米国特許第
４，８４３，１５５号（この内容は参考のため本明細書
中に引用されている）は、生物組織試料からＲＮＡを単
離するための有効な生成物と方法を開示している。この
特許の生成物と方法を用いることにより、ＲＮＡは約４
時間で単離することができる。この特許は、ＲＮＡを単
離するための他のいくつかの方法について記載している
が、その各々はそれぞれ欠点を有する。さらにこの特許
およびその中で言及されている他の方法のどれも、同じ
組織試料からＲＮＡ、ＤＮＡおよび蛋白を同時に単離す
る方法については記載していない。
【０００４】ＲＮＡとＤＮＡの同時単離の他の方法が知
られている。例えば米国特許第５，０１０，１８３号は
種々のソース（例えば細胞、細胞溶解液、ウイルス、組
織、血液および他の体液）から、陽イオン性界面活性剤
を用いて核酸と複合体を作らせてＤＮＡとＲＮＡを単離
する方法を開示している。ＲＮＡとＤＮＡの同時単離の
他の方法は以下の文献に記載されている：チャン（Cha,
V.T.-W.）ら：Anl. Biochem. 168, 16-24(1988)；ニコ
ライデス（Nicolaides, N.C.）ら：Biotechniques, 8
(2), 154-156(1990)；およびラハ（Rhaha, S. ）ら：Ge
ne Anal. Techn.(7), 173-177(1990) 。これらの記載さ
れた各方法では、界面活性剤（例えばノニデット（NONI
DET ）Ｐ−４０、ラウリル硫酸ナトリウムおよびラウリ
ルサルコシンナトリウム（Sodium lauryl sarcosine
））、およびＲＮａｓｅインヒビターを補足したフェ
ノールを含む抽出溶液を用いて抽出している。
【０００５】生物試料からのＲＮＡ、ＤＮＡおよび蛋白
の同時単離法は、クームス（Coombs, L.M.）ら、Anal.
Biochem. 188, 338-343(1990) に記載されている。この
方法は本出願人の米国特許第４，８４３，１５５号で言
及されているチルグウィン（Chirgwin）らの方法の変法
である。この方法は要約すると以下のようである：細胞
または組織試料を４Ｍのグアニジニウム中でホモジェジ
イズする。このホモジェネートは塩化セシウム（ＣｓＣ
ｌ）勾配上に重層する。１１０，０００−１５０，００
０ｇで１８時間遠心分離すると、一番上のグアニジニウ
ム層は蛋白を含み、上のＣｓＣｌ層はＤＮＡを含み、Ｒ
ＮＡは遠心分離管の底に集まる。塩化セシウム勾配から
のＲＮＡ、ＤＮＡおよび蛋白画分の精製は、次の１２−
２４時間に行われる。この方法は極めて時間がかかり
（完了するのに２−３日かかる）、同時にはほんのわず
かの数の試料しか処理ができない高価な装置である超遠
心分離機が必要であるため、この方法は有利ではない。
【０００６】従って同じ生物試料からのＲＮＡ、ＤＮＡ
および蛋白の同時単離の効率的で正確な方法に対する確
実なニーズがある。
【０００７】発明の要約 本発明は、同じ生物試料からのＲＮＡ、ＤＮＡおよび蛋
白の同時単離のための長期保存可能な溶媒溶液と方法に
関する。この溶媒溶液と方法は、同じ生物組織から実質
的に純粋で分解されていないＲＮＡ、実質的に純粋で分
解されていないＤＮＡ、および蛋白を抽出するための、
有効で正確な方法を与える。ここで「単離される」とい
う用語は、標準的な精製法を用いて測定した場合他の成
分の混入が検出されない程度に、ある特定の目的成分
（すなわちＲＮＡ、ＤＮＡまたは蛋白）が他の成分から
分離または単離されていることを意味する。さらに「分
解されていない」という用語は、目的の成分が標準的な
精製法を用いて測定した場合、目的の成分が、検出でき
るほどには分解されていないことを意味する。
【０００８】一般に本発明の溶媒溶液は、同じ生物試料
から実質的に純粋で分解されていないＲＮＡ、実質的に
純粋で分解されていないＤＮＡ、および蛋白を抽出する
ためのフェノールおよびグアニジニウム化合物を組合せ
で含む。この有効で驚くべき結果（１−２時間のオーダ
ーで、超遠心分離を必要としない）は迅速、有効かつ正
確であり、これまでは達成されなかった。本出願人の米
国特許第４，８４３，１５５号は、フェノールと２−５
Ｍの濃度範囲のグアニジニウム化合物を含む方法と溶媒
溶液を開示している。この溶媒溶液は実質的に純粋で分
解されていないＲＮＡを約３時間で単離することができ
るが、実質的に純粋で分解されていないＤＮＡや蛋白を
単離することは目的としていないし、また可能でもな
い。
【０００９】本発明において、特に０．５−２Ｍの濃度
範囲のグアニジニウム化合物とともに有効量のフェノー
ルを使用することにより、ＲＮＡやＤＮＡが分解から充
分に保護され、ＲＮＡがより効率的に単離されまたＤＮ
Ａと蛋白成分が単離されることが、予想外に明らかにな
った。本発明のこの新規の溶媒溶液は長期保存可能であ
る。使用可能な保存期間は室温で約２カ月であり、４℃
では約９−１２カ月であって、この間酸化や分解が起き
てフェノールが単離工程において不安定になることはな
い。
【００１０】本発明の溶媒溶液においてグアニジニウム
化合物は酸性グアニジニウム化合物またはその塩であ
り、チオシアン酸グアニジニウムや塩酸グアニジニウム
よりなるが、これらに限定されない。塩酸グアニジニウ
ムはＲＮＡやＤＮＡ成分を分解から保護し、水性の溶媒
溶液中でフェノールを溶液状態に維持するのに役立つ。
このフェノールは水層から蛋白を抽出するのに有用であ
り、ＲＮＡの分解を起こすＲＮａｓｅや他の汚染してい
る酵素の作用を阻害する。
【００１１】本発明の溶媒溶液は、チオシアン酸アンモ
ニウムやチオシアン酸ナトリウムのような追加のチオシ
アン酸成分を含んでいてもよい。この追加のチオシアン
酸成分は生物試料からのＲＮＡの抽出を増強すると考え
られている。さらにこの溶媒溶液は緩衝性成分（例えば
酢酸ナトリウムやクエン酸ナトリウム）を、約４−６の
ｐＨを維持するのに充分な量で含んでいてもよい。さら
に溶媒溶液はフェノールを特に４℃で溶液に維持して、
単一相溶液としての溶媒を維持するための追加の可溶化
剤を含んでいてもよい。適当な可溶化剤１つはグリセロ
ールである。
【００１２】好適な実施態様において、本発明の溶媒溶
液は約４−６の範囲のｐＨを有し、フェノール、グアニ
ジニウム化合物、チオシアン酸化合物およびフェノール
可溶化剤を含む。好適なグアニジニウム化合物はチオシ
アン酸グアニジニウムであり、好適なチオシアン酸化合
物はチオシアン酸アンモニウムであり、好適なフェノー
ル可溶化剤はグリセロールである。
【００１３】本発明の溶媒溶液と方法を用いて、実質的
に純粋で分解されていないＲＮＡの単離は約１時間で達
成される。この単離されたＲＮＡは、ノーザン（Northe
rn）分析、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の単離、
および酵素的測定法（ポリメラーゼチェイン反応（ＰＣ
Ｒ）を含む）に適しており余分な精製工程は必要ではな
い。本発明の溶媒溶液と方法を用いてＤＮＡ成分は約１
−１．５時間で単離される。高収率のＤＮＡが抽出さ
れ、このＤＮＡ（実質的に純粋で分解されていない）は
制限分析やサザン（Southern）分析に適している。さら
に本発明の方法はＲＮＡおよび／または蛋白単離のため
に取られた試料中のＤＮＡ含量の定量を可能にする。こ
れは単離されたＤＮＡの光学密度を読むことにより達成
される。最後に本発明の溶媒溶液と方法を用いることに
より、蛋白は約１時間で単離される。単離された蛋白は
その抗原性を保持し、ウェスタン分析のための充分な純
度を保持していると考えられている。
【００１４】好適な実施態様において、本発明の方法
は、あらかじめ決められた量の溶媒溶液中の生物試料を
ホモジェジイズしてホモジェネートを形成させることよ
りなる。次に水不溶性の有機溶媒（例えばクロロホル
ム）をこのホモジェネートに加え、ホモジェネートを攪
拌して沈澱させて、実質的に純粋で分解されていないＲ
ＮＡを含有する水層、蛋白を含有する有機層、および実
質的に純粋で分解されていないＤＮＡを含有する中間層
よりなる混合物を形成させる。水層に低級アルコールを
加えて水層からＲＮＡを沈澱させ、沈澱したＲＮＡを沈
降法により回収する。有機層の蛋白はここに低級アルコ
ールを加えて沈澱させ、沈降法により回収する。最後に
ＤＮＡは、あらかじめ決められた量の溶媒溶液で中間層
を洗浄し、ＤＮＡを沈降させＤＮＡからフェノールと塩
の汚染物を除去することにより回収される。
【００１５】別の実施態様において、ホモジェジイズと
沈降に引き続いて、有機層と中間層は水で抽出し、塩化
セシウム、クエン酸ナトリウム溶液および低級アルコー
ルを加えて、中間層からＤＮＡを沈澱させる。得られた
混合物は遠心分離し、沈降したＤＮＡを回収する。この
実施態様においては、前記の実施態様で記載したよう
に、水層からＲＮＡを回収し有機層から蛋白を回収す
る。
【００１６】別の実施態様においては、本発明の溶媒溶
液中の生物試料のホモジェジイズに引き続いて、ＤＮＡ
は溶媒溶液に不溶性であるため、実質的に純粋で分解さ
れていないＤＮＡはホモジェネートから沈降される。次
にこの沈降したＤＮＡは、あらかじめ決められた量の溶
媒溶液で洗浄し、ここから汚染しているフェノールおよ
び／または塩を除去する。残存するホモジェネート（こ
れはＲＮＡと蛋白を含む）に水不溶性の有機溶媒（例え
ばクロロホルム）を加え、ホモジェネートを攪拌し沈降
させて、実質的に純粋で分解されていないＲＮＡを含有
する水層、蛋白を含有する有機層よりなる混合物を形成
させる。前記の実施態様のように、低級アルコールを加
えて水層からＲＮＡを沈澱させ、沈降法により回収す
る。同様に低級アルコールを加えて蛋白を有機層から沈
澱させ、沈降法により回収する。
【００１７】図面の簡単な記述 図１Ａはノーザンブロッティングによる総ＲＮＡの分析
結果を示す。図１ＢはサザンブロッティングによるＤＮ
Ａの分析結果を示す。図１Ｃはウェスタンブロッティン
グによる蛋白の分析結果を示す。
【００１８】発明の詳細な記述 好適な実施態様において、長期保存可能な本発明の溶媒
溶液は、溶媒溶液の総量を基準として約０．５−２Ｍの
濃度範囲のチオシアン酸グアニジニウム；溶媒溶液の総
量を基準として約０．１−０．６Ｍの濃度範囲のチオシ
アン酸アンモニウム；溶媒溶液のｐＨを約４−６の範囲
に維持するのに充分な量の緩衝液（好ましくは酢酸ナト
リウム）；溶媒溶液の総量を基準として約３−１０容量
％の量のグリセロール；および溶媒溶液の総量を基準と
して約３０−５０容量％の量のフェノールよりなる。
【００１９】溶媒溶液のさらに好適な実施態様において
は、チオシアン酸グアニジニウムの濃度は好ましくは約
０．８Ｍであり、チオシアン酸アンモニウムの濃度は好
ましくは約０．４Ｍであり、酢酸ナトリウム緩衝液は溶
媒溶液の総量を基準として約０．１Ｍの濃度で存在し、
溶液のｐＨは約５．０である。さらに溶媒溶液は約５容
量％のグリセロールと約３８容量％のフェノールよりな
る。
【００２０】以下の例において本発明の方法のいくつの
実施態様を例示する。
【００２１】例１ 前述した好適な溶媒溶液２ｍｌ中で１００ｍｇの組織試
料をホモジェジイズする。次にホモジェネートに０．４
ｍｌのクロロホルムを加えて攪拌し、１２，０００ｇで
１０分間沈降させる。沈降後、実質的に純粋で分解され
ていないＲＮＡを含有する水層、蛋白を含有する有機
層、および実質的に純粋で分解されていないＤＮＡを含
有する中間層よりなる混合物が形成する。水層を集め、
２ｍｌのイソプロパノールと一緒にして１２，０００ｇ
で１０分間遠心分離する。全ＲＮＡを含有する沈降物を
２ｍｌの７５％エタノールで洗浄し、８０００ｇで６分
間遠心分離し、水に溶解する。前述したようにＲＮＡの
単離は約１時間かかる。
【００２２】ＤＮＡは以下の３つの方法のうちの１つを
用いて単離される。１つの実施態様においては、有機層
と中間層は１ｍｌの水で抽出される。次に４．５Ｍの塩
化セシウム１００μｌ、０．５Ｍのクエン酸ナトリウム
溶液および１ｍｌのエタノールを加えて中間層からＤＮ
Ａを沈澱させる。得られた混合物を遠心分離し、沈降し
たＤＮＡを２ｍｌの７５％エタノールで４回、そして２
ｍｌの水で１回洗浄する。
【００２３】別の実施態様においては、中間層を有機層
から取って新しいチューブに入れ、０．５ｍｌの溶媒溶
液で洗浄する。ＤＮＡに汚染しているフェノールおよび
／または塩を、７５％エタノール、３０％エタノール／
２．８ＭのＮａＢｒ溶液、そして最後に７５％エタノー
ルで連続的に洗浄して除去する。
【００２４】ＤＮＡは溶媒溶液には溶解しないため、別
の実施態様においては、クロロホルムを加える前に最初
のホモジェネートからＤＮＡを沈降させる。沈降したＤ
ＮＡを０．５ｍｌの溶媒溶液で洗浄し、ＤＮＡに汚染し
ているフェノールおよび／または塩を、７５％エタノー
ル、３０％エタノール／２．８ＭのＮａＢｒ溶液、そし
て最後に７５％エタノールで連続的に洗浄して除去す
る。上記方法のＤＮＡの単離は約１−１．５時間で達成
される。
【００２５】蛋白は２倍量のイソプロパノールを加える
ことにより有機層から沈澱する。懸濁物を遠心分離し、
蛋白沈澱物をエタノールで２回洗浄し、０．５％のドデ
シル硫酸ナトリウム溶液に溶解する。蛋白の単離は約１
時間で完了する。
【００２６】例２ 本発明の方法の別の具体的な例では、テフロンガラスの
ホモジェジイザー中で１５２ｍｇのラットの乳腺を、前
記の３ｍｌの好適な溶媒溶液とともにホモジェジイズす
る。ホモジェジイズした後ホモジェネートに０．６ｍｌ
のクロロホルムを加える。混合物を攪拌し、４℃で１
２，０００ｇで１０分間遠心分離する。遠心分離後ホモ
ジェネートは水層、中間層および有機層を形成する。
【００２７】ＲＮＡの単離 水層を新しいチューブに移し、１．５ｍｌのイソプロパ
ノールを加えてＲＮＡを沈澱させ、４℃で８０００ｇで
８分間遠心分離する。全ＲＮＡを含む沈降物を３ｍｌの
７５％エタノールで洗浄し、８０００ｇで５分間遠心分
離し、水に溶解する。全ＲＮＡの収率は０．６２ｍｇで
あり、ジフェニルアミンによる試験（バートン（Burto
n, K.）：Biochem. J., 62:315-322(1956) ）と、フォ
リン（Folin ）試薬（ピーターソン（Peterson, G.
L.）：Methods in Enzymology, 91:95-98(1983) ）で
は、それぞれＤＮＡや蛋白の汚染は検出されない。
【００２８】ＤＮＡの単離 有機層と中間層を１．５ｍｌの水で抽出し、混合物を３
０００ｇで５分間遠心分離する。水層を取り、そこから
４．５Ｍの１５０μｌのＣｓＣｌ、０．５Ｍのクエン酸
ナトリウム溶液、そして１．５ｍｌのエタノールを連続
的に添加してＤＮＡを沈澱させる。混合物を１５秒間攪
拌して、３０００ｇで３分間遠心分離する。有機層を含
有する得られた上清を蛋白分析のためにとっておく。ペ
レットになったＤＮＡを３ｍｌの７５％エタノールとボ
ルテックスさせて４回洗浄し、３０００ｇで３分間遠心
分離する。次にＤＮＡペレットを３ｍｌの１００％エタ
ノールに懸濁し、３０００ｇで３分間遠心分離して水に
溶解する。ＤＮＡの収率は０．４１ｍｇであり、フォリ
ン試薬による試験では蛋白の汚染は検出されない。
【００２９】別の測定法では、単離したＲＮＡとＤＮＡ
の純度を、汚染剤として3 Ｈ ＲＮＡと 32 Ｐ ＤＮＡ
を用いて試験する。ＲＮＡ調製物中には放射性ＤＮＡは
検出されず、ＤＮＡ調製物中には放射性ＲＮＡは検出さ
れない。
【００３０】蛋白の単離 ＤＮＡの単離工程で取っておいた有機層を６ｍｌのイソ
プロパノールと混合する。この混合物を室温に５分間置
き、沈澱した蛋白を１０，０００ｇで１０分間遠心分離
する。蛋白のペレットをボルテックスにより３ｍｌのエ
タノールに懸濁し、次に室温に５分間置き、次に１０，
０００ｇで１０分間遠心分離する。この洗浄／遠心分離
工程を３回繰り返す。最後のエタノールによる洗浄の後
に、蛋白ペレットを短時間（１０分間）空気乾燥し、水
に溶解する。蛋白の収率は６．３ｍｇである。
【００３１】この例で単離されるＲＮＡ、ＤＮＡおよび
蛋白の質は、標準的ノーザン分析、サザン分析およびウ
ェスタン分析により試験される。ノーザン分析、サザン
分析およびウェスタン分析は、アウスベル（Ausbell,
F.M. ）ら（編）の方法（Current Protocols in Molecu
lar Biology, ウィリーインターサイエンス（Wiley Int
erscience）、ニューヨーク(1990)）（これは参考のた
め本明細書中に引用されている）の記載する方法により
行われる。
【００３２】ノーザン分析では、単離された全ＲＮＡの
５μｇを、１％アガロース−ホルムアルデヒドゲル中で
電気泳動し、「ニトラン」（"Nytran"）膜に移し、ニッ
クトランスレーションしたラクトアルブミンｃＤＮＡと
ハイブリダイズさせる。図１Ａに示すようにラクトアル
ブミンｍＲＮＡの分解されていないバンドの存在は、単
離された全ＲＮＡが分解されていないことを示すと考え
られる。
【００３３】サザン分析においては、単離されたＤＮＡ
の５μｇをＥｃｏＲＩ制限酵素で消化し、１％アガロー
スゲルで電気泳動し、「ニトラン」（"Nytran"）膜に移
し、ニックトランスレーションしたラクトアルブミンｃ
ＤＮＡとハイブリダイズさせる。図１Ｂに示すように分
解されていないラクトアルブミン遺伝子のバンドの存在
は、単離されたＤＮＡが分解されていないことを示すと
考えられる。
【００３４】ウェスタン分析においては、単離された５
０μｇの蛋白を１０％のアクリルアミド−ＳＤＳゲルで
電気泳動し、ニトロセルロース膜に電気移動させる。ラ
クトアルブミンの存在は、ウサギ抗−ラットラクトアル
ブミン抗体とペルオキシダーゼ結合抗ウサギＩｇＧを用
いて検出する。図１Ｃに示すように単離物中の特異的蛋
白の存在はラクトアルブミンの検出により例示される。
【００３５】本発明の範囲はここに示した具体例に限定
されるものではなく、特許請求の範囲により限定され
る。
【図面の簡単な説明】
【図１】Ａはノーザンブロッティングによる総ＲＮＡの
分析結果を示す。ＢはサザンブロッティングによるＤＮ
Ａの分析結果を示す。Ｃはウェスタンブロッティングに
よる蛋白の分析結果を示す。

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 生物組織から実質的に純粋で分解されて
    いないＲＮＡ、実質的に純粋で分解されていないＤＮ
    Ａ、および蛋白を抽出するための、有効量のフェノール
    およびグアニジニウム化合物よりなる溶媒溶液。
  2. 【請求項２】 グアニジニウム化合物は、チオシアン酸
    グアニジニウムおよび塩酸グアニジニウムよりなる群か
    ら選択される、請求項１に記載の溶媒溶液。
  3. 【請求項３】 グアニジニウム化合物は、溶媒溶液の総
    量を基準として約０．５−２Ｍの範囲の濃度で存在す
    る、請求項２に記載の溶媒溶液。
  4. 【請求項４】 緩衝液をさらに含む、請求項１に記載の
    溶媒溶液。
  5. 【請求項５】 緩衝液は、溶媒溶液の総量を基準として
    約０．１Ｍの濃度で存在する酢酸ナトリウムであり、溶
    媒溶液のｐＨは約５．０である、請求項４に記載の溶媒
    溶液。
  6. 【請求項６】 フェノール可溶化剤をさらに含む、請求
    項１に記載の溶媒溶液。
  7. 【請求項７】 生物組織から実質的に純粋なＲＮＡ、Ｄ
    ＮＡ、および蛋白を抽出するための溶媒溶液であって、
    下記よりなる溶媒溶液： （ａ） 溶媒溶液の総量を基準として約０．５−２Ｍの
    範囲の濃度で存在するチオシアン酸グアニジニウム； （ｂ） 上記溶媒溶液のｐＨを約４−６の範囲に維持す
    るのに充分な量の緩衝液； （ｃ） 溶媒溶液の総量を基準として約３０−５０容量
    ％の量のフェノール； （ｄ） 溶媒溶液の総量を基準として約３−１０容量％
    の量のフェノール可溶化剤。
  8. 【請求項８】 溶媒溶液の総量を基準として約０．１−
    ０．６Ｍの範囲の濃度のチオシアン酸アンモニウムをさ
    らに含む、請求項７に記載の溶媒溶液。
  9. 【請求項９】 チオシアン酸グアニジニウムの濃度は約
    ０．８Ｍである、請求項７に記載の溶媒溶液。
  10. 【請求項１０】 チオシアン酸アンモニウムの濃度は約
    ０．４Ｍである、請求項９に記載の溶媒溶液。
  11. 【請求項１１】 酢酸ナトリウムは、溶媒溶液の総量を
    基準として約０．１Ｍの濃度で存在し、溶媒溶液のｐＨ
    は約５．０である、請求項１０に記載の溶媒溶液。
  12. 【請求項１２】 以下の工程よりなる、生物組織から実
    質的に純粋なＲＮＡ、ＤＮＡおよび蛋白を単離するため
    の方法： （ａ） 組織試料を請求項１に記載の溶媒溶液中でホモ
    ジェジイズしてホモジェネートを作成し； （ｂ） 上記ホモジェネートに水に不溶性の有機溶媒を
    加え沈降させて、実質的に純粋で分解されていないＲＮ
    Ａを含有する水層、蛋白を含有する有機層および実質的
    に純粋で分解されていないＤＮＡを含有する中間層（in
    terphase）よりなる混合物を形成させ； （ｃ） 水層に低級アルコールを添加して水層からＲＮ
    Ａを沈澱させ、沈澱したＲＮＡを沈降法により回収し； （ｄ） 有機層に低級アルコールを添加して有機層から
    蛋白を沈澱させ、沈澱した蛋白を沈降法により回収し； （ｅ） 中間層をあらかじめ決められた量の溶媒溶液で
    洗浄し、ＤＮＡを沈降させ、ＤＮＡから汚染しているフ
    ェノールと塩を除去することにより中間層からＤＮＡを
    回収する。
  13. 【請求項１３】 以下の工程よりなる、生物組織から実
    質的に純粋なＲＮＡ、ＤＮＡおよび蛋白を単離するため
    の方法： （ａ） 組織試料を請求項１に記載の溶媒溶液中でホモ
    ジェナイズしてホモジェネートを作成し； （ｂ） 上記ホモジェネートに水に不溶性の有機溶媒を
    加え沈降させて、実質的に純粋で分解されていないＲＮ
    Ａを含有する水層、蛋白を含有する有機層および実質的
    に純粋で分解されていないＤＮＡを含有する中間層（in
    terphase）よりなる混合物を形成させ； （ｃ） 水層に低級アルコールを添加して水層からＲＮ
    Ａを沈澱させ、沈澱したＲＮＡを沈降法により回収し； （ｄ） 有機層と中間層を水で抽出し； （ｅ） 有機層に低級アルコールを添加して有機層から
    蛋白を沈澱させ、沈澱した蛋白を沈降法により回収し； （ｆ） 中間層にＣｓＣｌ、クエン酸ナトリウム溶液お
    よび低級アルコールを添加してＤＮＡを中間層から沈澱
    させ、沈降法により沈澱したＤＮＡを回収する。
JP5012461A 1992-01-28 1993-01-28 Ｒｎａ、ｄｎａおよび蛋白の同時単離法 Expired - Lifetime JP2679929B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US826984 1992-01-28
US07/826,984 US5346994A (en) 1992-01-28 1992-01-28 Shelf-stable product and process for isolating RNA, DNA and proteins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH05344886A true JPH05344886A (ja) 1993-12-27
JP2679929B2 JP2679929B2 (ja) 1997-11-19

Family

ID=25248018

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP5012461A Expired - Lifetime JP2679929B2 (ja) 1992-01-28 1993-01-28 Ｒｎａ、ｄｎａおよび蛋白の同時単離法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US5346994A (ja)
EP (1) EP0554034B1 (ja)
JP (1) JP2679929B2 (ja)
AT (1) ATE144777T1 (ja)
DE (1) DE69305662T2 (ja)
ES (1) ES2095565T3 (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008289456A (ja) * 2006-06-16 2008-12-04 Sysmex Corp がん細胞の検出方法及び装置
JP2011152142A (ja) * 2004-04-16 2011-08-11 Piotr Chomczynski 精製ｒｎａの単離試薬及び方法
WO2012023569A1 (ja) 2010-08-18 2012-02-23 東レ株式会社 Ｒｎａ抽出用溶液

Families Citing this family (128)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5637687A (en) * 1993-08-31 1997-06-10 Wiggins; James C. Methods and compositions for isolating nucleic acids
DE69534886T2 (de) * 1994-04-14 2006-10-26 The Rockefeller University Verfahren zur Isolierung von Zellkomponenten
US5693784A (en) * 1994-09-19 1997-12-02 Promega Corporation Methods for creating agglomerates from colloidal particles
US5777099A (en) * 1995-02-24 1998-07-07 Biotecx Laboratories, Inc. RNA separation
DE19520398B4 (de) * 1995-06-08 2009-04-16 Roche Diagnostics Gmbh Magnetisches Pigment
KR100463475B1 (ko) 1995-06-08 2005-06-22 로셰 디아그노스틱스 게엠베하 자기성피그먼트
US5945515A (en) * 1995-07-31 1999-08-31 Chomczynski; Piotr Product and process for isolating DNA, RNA and proteins
US5804684A (en) * 1995-08-24 1998-09-08 The Theobald Smith Research Institute, Inc. Method for isolating nucleic acids
US5973137A (en) * 1996-02-13 1999-10-26 Gentra Systems, Inc. Low pH RNA isolation reagents, method, and kit
US5777098A (en) * 1996-07-23 1998-07-07 University Of North Dakota Medical Education Research Foundation DNA purification procedure
SE9603599D0 (sv) * 1996-10-02 1996-10-02 Pharmacia Biotech Ab A method of separating a two phase system
US6027945A (en) * 1997-01-21 2000-02-22 Promega Corporation Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles
US20050287583A1 (en) * 1997-01-21 2005-12-29 Promega Corporation Methods and kits for isolating biological target materials using silica magnetic particles
WO1998045311A1 (en) * 1997-04-10 1998-10-15 Life Technologies, Inc. Rna isolation reagent and methods
DE19743518A1 (de) * 1997-10-01 1999-04-15 Roche Diagnostics Gmbh Automatisierbare universell anwendbare Probenvorbereitungsmethode
US20050042597A1 (en) * 1997-10-07 2005-02-24 Pham Thuy Diem Viral detection system
CA2313654A1 (en) * 1997-12-10 1999-06-17 Sierra Diagnostics, Inc. Methods and reagents for preservation of dna in bodily fluids
US6194562B1 (en) 1998-04-22 2001-02-27 Promega Corporation Endotoxin reduction in nucleic acid purification
US7078224B1 (en) 1999-05-14 2006-07-18 Promega Corporation Cell concentration and lysate clearance using paramagnetic particles
US6204375B1 (en) 1998-07-31 2001-03-20 Ambion, Inc. Methods and reagents for preserving RNA in cell and tissue samples
DE19836559A1 (de) * 1998-08-12 2000-03-23 Antigen Gmbh Gefäß zur Entnahme von Blut
US6310199B1 (en) 1999-05-14 2001-10-30 Promega Corporation pH dependent ion exchange matrix and method of use in the isolation of nucleic acids
US6270970B1 (en) 1999-05-14 2001-08-07 Promega Corporation Mixed-bed solid phase and its use in the isolation of nucleic acids
US7264932B2 (en) * 1999-09-24 2007-09-04 Applera Corporation Nuclease inhibitor cocktail
US6664379B1 (en) * 1999-09-24 2003-12-16 Ambion, Inc. Nuclease inhibitor cocktail
ATE315826T1 (de) * 1999-11-17 2006-02-15 Roche Diagnostics Gmbh Magnetische glasteilchen, herstellungsverfahren und benutzung
US6248535B1 (en) * 1999-12-20 2001-06-19 University Of Southern California Method for isolation of RNA from formalin-fixed paraffin-embedded tissue specimens
DE10006662A1 (de) * 2000-02-15 2001-08-23 Antigen Produktions Gmbh Gefäß zur Nukleinsäureanalytik
US6602718B1 (en) * 2000-11-08 2003-08-05 Becton, Dickinson And Company Method and device for collecting and stabilizing a biological sample
US20020142328A1 (en) * 2000-12-01 2002-10-03 Danenberg Kathleen D. Method of determining a chemotherapeutic regimen by assaying gene expression in primary tumors
KR100946980B1 (ko) * 2000-12-01 2010-03-17 리스판스 지네틱스, 인크. 표피 성장 인자 수용체 및 ｈｅｒ2-ｎｅｕ 유전자 발현 및 이들 수준과 생존율의 상관성을 측정하는 방법
US7005278B2 (en) * 2001-03-02 2006-02-28 Danenberg Kathleen D Method of determining dihydropyrimidine dehydrogenase gene expression
US6582919B2 (en) 2001-06-11 2003-06-24 Response Genetics, Inc. Method of determining epidermal growth factor receptor and HER2-neu gene expression and correlation of levels thereof with survival rates
US7049059B2 (en) * 2000-12-01 2006-05-23 Response Genetics, Inc. Method of determining a chemotherapeutic regimen based on ERCC1 and TS expression
US6602670B2 (en) * 2000-12-01 2003-08-05 Response Genetics, Inc. Method of determining a chemotherapeutic regimen based on ERCC1 expression
JP2004523229A (ja) * 2001-01-16 2004-08-05 インヴィトロジェン コーポレーション Ｒｎａ単離のための試薬
US6956111B2 (en) * 2001-03-02 2005-10-18 Response Genetics, Inc. Method of determining dihydropyrimidine dehydrogenase gene expression
US20040076954A1 (en) * 2001-03-12 2004-04-22 Irm, Llc Genomics-driven high speed cellular assays, development thereof, and collections of cellular reporters
US7026121B1 (en) 2001-06-08 2006-04-11 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
US6905827B2 (en) 2001-06-08 2005-06-14 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing or monitoring auto immune and chronic inflammatory diseases
US7235358B2 (en) * 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
US6686155B2 (en) * 2001-06-14 2004-02-03 Response Genetics, Inc. Method of determining a chemotherapeutic regimen based on glutathione-S-transferase pi expression
US20050032105A1 (en) * 2001-10-12 2005-02-10 Bair Robert Jackson Compositions and methods for using a solid support to purify DNA
US7893228B2 (en) * 2001-10-12 2011-02-22 Qiagen North American Holdings, Inc. Compositions and methods for using a solid support to purify RNA
US7148343B2 (en) * 2001-10-12 2006-12-12 Gentra Systems, Inc. Compositions and methods for using a solid support to purify RNA
KR20040047971A (ko) * 2001-10-26 2004-06-05 이뮤니베스트 코포레이션 동일 샘플상에서의 광범위 핵산 및 이의 형태학적 특질에대한 다중 매개변수 분석법
WO2003046146A2 (en) 2001-11-28 2003-06-05 Applera Corporation Compositions and methods of selective nucleic acid isolation
US8029803B2 (en) * 2002-06-20 2011-10-04 Paladin Labs, Inc. Chimeric antigens for eliciting an immune response
US8025873B2 (en) * 2002-06-20 2011-09-27 Paladin Labs, Inc. Chimeric antigens for eliciting an immune response
WO2004076640A2 (en) * 2003-02-25 2004-09-10 Ambion, Inc. Small-molecule inhibitors of angiogenin and rnases and in vivo and in vitro methods of using same
US7892745B2 (en) 2003-04-24 2011-02-22 Xdx, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
US7267950B2 (en) * 2003-05-01 2007-09-11 Veridex, Lcc Rapid extraction of RNA from cells and tissues
US7488579B2 (en) * 2003-05-06 2009-02-10 Biochain Institute, Inc. Methods and compositions to extract DNA, RNA and protein simultaneously from biological samples
WO2004108925A1 (en) * 2003-06-04 2004-12-16 Qiagen As Method for sequentially isolating dna and rna from the same nucleic acid-containing sample
US8062845B2 (en) * 2003-07-21 2011-11-22 Creighton University Rapid nucleic acid isolation method and compositions
US20050042660A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-24 Hall Gerald Edward Devices and methods for isolating RNA
US8007805B2 (en) * 2003-08-08 2011-08-30 Paladin Labs, Inc. Chimeric antigens for breaking host tolerance to foreign antigens
EP1664077B1 (en) 2003-09-05 2016-04-13 Trustees of Boston University Method for non-invasive prenatal diagnosis
EP1689884A4 (en) 2003-10-08 2007-04-04 Univ Boston PROCESS FOR THE PRENATAL DIAGNOSIS OF CHROMOSOMAL ABNORMALITIES
EP1694692B1 (en) * 2003-12-16 2010-04-28 QIAGEN North American Holdings, Inc. Formulations and methods for denaturing proteins
US20050164204A1 (en) * 2004-01-27 2005-07-28 Reed Thomas D. Single use lyophilized rnase reagents, and kits and methods for using same
US20050227225A1 (en) * 2004-04-07 2005-10-13 Roche Molecular Systems, Inc. Stabilization of biomolecules in samples
US7531308B2 (en) * 2004-04-23 2009-05-12 Sigma-Aldrich Co. Process for the reduction of endotoxins in a plasmid preparation using a carbohydrate non-ionic detergent with silica chromatography
US20050277121A1 (en) * 2004-06-11 2005-12-15 Ambion, Inc. Crude biological derivatives competent for nucleic acid detection
US20060099605A1 (en) * 2004-11-11 2006-05-11 Hall Gerald E Jr Devices and methods for isolating RNA
WO2006029184A2 (en) 2004-09-08 2006-03-16 Expression Diagnostics, Inc. Genes useful for diagnosing and monitoring inflammation related disorders
CA2586532C (en) 2004-11-05 2014-03-25 Qiagen North American Holdings, Inc. Compositions and methods for purifying nucleic acids from stabilization reagents
DK1817423T3 (en) 2004-11-30 2015-01-26 Merial Ltd Mixing units for chemical light ring of cells
US7727718B2 (en) * 2005-01-04 2010-06-01 Molecular Research Center, Inc. Reagents for storage and preparation of samples for DNA analysis
EP1846579A4 (en) * 2005-01-21 2008-12-24 New York Blood Ct Inc PROCESS FOR EXTRACTION AND IDENTIFICATION OF NUCLEIC ACIDS
US7541144B2 (en) * 2005-01-31 2009-06-02 Agilent Technologies, Inc. RNA labeling method
DE102005015005A1 (de) * 2005-04-01 2006-10-05 Qiagen Gmbh Verfahren zur Behandlung einer Biomoleküle enthaltenden Probe
US20060270843A1 (en) * 2005-05-26 2006-11-30 Hall Gerald E Jr Methods for isolation of nucleic acids
US20060269929A1 (en) * 2005-05-26 2006-11-30 Hall Gerald E Jr Methods and kits for DNA purification on polymeric membranes at low ionic strength
CA2613094A1 (en) * 2005-07-01 2007-01-11 Promega Corporation Network of buoyant particles for biomolecule purification
US7544471B2 (en) * 2005-07-30 2009-06-09 Agilent Technologies, Inc. Preparing RNA from a wax-embedded tissue specimen
US20070054168A1 (en) * 2005-09-06 2007-03-08 Hao Chang Zinc/air cell
JP2009511024A (ja) * 2005-10-13 2009-03-19 ヴィレックス メディカル コーポレイション 免疫応答を誘導するためのＣ型肝炎ウイルスポリペプチドおよびＦｃフラグメントを含むキメラ抗原
WO2007070381A2 (en) 2005-12-09 2007-06-21 Promega Corporation Nucleic acid purification with a binding matrix
EP2677039B8 (en) 2006-05-10 2022-10-05 DxTerity Diagnostics Incorporated Detection of nucleic acid targets using chemically reactive oligonucleotide probes
EP3260556B1 (en) 2006-05-31 2019-07-31 Sequenom, Inc. Methods for the extraction of nucleic acid from a sample
US20070292882A1 (en) * 2006-06-16 2007-12-20 Sysmex Corporation Method and apparatus for detecting cancer cell
US20080003585A1 (en) * 2006-06-29 2008-01-03 Bio-Rad Laboratories, Inc., A Corporation Of The State Of Delaware Purification and amplification of nucleic acids in a microfluidic device
US7687254B2 (en) * 2006-07-11 2010-03-30 Case Western Reserve University Phenol-free method of isolating DNA
JP5244103B2 (ja) 2006-08-09 2013-07-24 ホームステッド クリニカル コーポレイション 器官特異的蛋白質およびその使用方法
WO2008021431A2 (en) 2006-08-14 2008-02-21 Xdx, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring the status of transplant rejection and immune disorders
US8148067B2 (en) 2006-11-09 2012-04-03 Xdx, Inc. Methods for diagnosing and monitoring the status of systemic lupus erythematosus
WO2008150187A1 (fr) * 2007-06-08 2008-12-11 Jury Fedorovich Drygin Utilisation du trichloracétate d'ammonium en tant que produit de dissociation de complexes naturels d'acides nucléiques et procédé d'extraction d'arn
EP2214824A4 (en) * 2007-11-28 2015-08-19 Smart Tube Inc DEVICES, SYSTEMS AND METHODS FOR DETECTING, STIMULATING, STABILIZING AND ANALYZING A BIOLOGICAL SAMPLE
WO2009127350A1 (en) * 2008-04-15 2009-10-22 Universität Bern Method for optimized isolation of rna from fixed tissue
JP5892791B2 (ja) 2008-05-14 2016-03-23 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 適応免疫における免疫調節物質の効果をモニターするための方法およびキット
DE102008029356A1 (de) 2008-06-20 2009-12-24 Siemens Healthcare Diagnostics Gmbh Verfahren zur Aufreinigung von Nukleinsäuren, insbesondere aus fixiertem Gewebe
DE102008061714A1 (de) 2008-12-12 2010-06-17 Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Deerfield Verfahren zur Aufreinigung von Nukleinsäuren, inbesondere aus fixiertem Gewebe
WO2010070657A1 (en) * 2008-12-15 2010-06-24 Council Of Scientific & Industrial Research A composition for the removal of colours and inhibitors from plant tissues to isolate rna
US8846878B1 (en) 2009-01-23 2014-09-30 Cubrc Corporation Method and device for isolating a protein sample
DK2414544T3 (da) * 2009-04-01 2014-06-16 Dxterity Diagnostics Inc Probe-amplifikations-afhængig kemisk ligering
EP2414545B1 (en) 2009-04-03 2017-01-11 Sequenom, Inc. Nucleic acid preparation compositions and methods
CN102459567B (zh) * 2009-06-18 2016-03-09 默克专利股份公司 分离细胞的方法
DE202009018981U1 (de) * 2009-07-01 2015-03-11 Axagarius Gmbh & Co. Kg Verwendung eines Kits für die Isolierung von Biomolekülen aus biologischen Proben sowie Kit dafür
US8039613B2 (en) 2009-08-28 2011-10-18 Promega Corporation Methods of purifying a nucleic acid and formulation and kit for use in performing such methods
US8222397B2 (en) * 2009-08-28 2012-07-17 Promega Corporation Methods of optimal purification of nucleic acids and kit for use in performing such methods
US8697435B2 (en) * 2009-08-31 2014-04-15 Mbio Diagnostics, Inc. Integrated sample preparation and analyte detection
EP2426201A1 (en) 2010-09-06 2012-03-07 Qiagen GmbH Method of isolating purified RNA with reduced DNA contaminations
US9051563B2 (en) 2011-01-14 2015-06-09 Zymo Research Corporation Nucleic acid purification
CN106434871B (zh) 2011-05-17 2020-08-18 德克斯特里蒂诊断公司 用于检测目标核酸的方法与组合物
DK2742152T3 (en) * 2011-08-12 2017-07-31 Qiagen Gmbh PROCEDURE FOR ISOLATING NUCLEIC ACIDS
CA2847847A1 (en) 2011-09-06 2013-03-14 North-West University A method of preparing biological material
CA2862580A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Biomarkers of response to nae inhibitors
CN102505012A (zh) * 2011-12-30 2012-06-20 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 一种用于提取动物病毒rna的裂解液
US9540635B2 (en) 2012-05-09 2017-01-10 Bio-Rad Laboratories, Inc. Buffer for one-step DNA extraction
EP2770056B1 (en) 2012-07-18 2017-05-31 Zymo Research Corporation Nucleic acid purification
JP6486826B2 (ja) 2012-10-01 2019-03-20 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 阻害剤に対する応答を予測するためのバイオマーカーおよび方法、ならびにそれらの使用
TR201904004T4 (tr) 2013-05-24 2019-04-22 Occam Biolabs Inc Bir nükleik asit numunesi toplamak için sistem ve yöntem.
UY36046A (es) 2014-03-26 2015-10-30 Millennium Pharm Inc Formulaciones farmacéuticas, procesos para la preparación y métodos de uso
EP3154696B1 (en) 2014-06-10 2020-04-08 DxTerity Diagnostics Incorporated Devices and methods for collecting and stabilizing biological samples
CA2962956C (en) 2014-10-20 2023-09-05 Gen-Probe Incorporated Red blood cell lysis solution
US10287570B2 (en) 2014-11-21 2019-05-14 Occam Biolabs, Inc. System and method for collecting a sample of nucleic acid
EP3135769A1 (en) 2015-08-26 2017-03-01 Qiagen GmbH Kits and methods for extracting rna
EP3397763B1 (en) * 2015-12-28 2020-10-28 Koninklijke Philips N.V. Nucleic acid purification system using a single wash and elution buffer solution
WO2017167716A1 (en) 2016-03-30 2017-10-05 Life Technologies As Improved methods and compositions for nucleic acid isolation
EP3448998B1 (en) 2016-04-27 2020-06-03 Gen-Probe Incorporated Blood cell lysis reagent
ES2904624T3 (es) 2016-12-15 2022-04-05 Qiagen Gmbh Método para aislar ácido nucleico altamente puro con partículas magnéticas
US20200060258A1 (en) 2017-03-17 2020-02-27 Syngenta Participations Ag Methods and compositions for preserving tissues and nucleic acids
WO2019109016A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Biomarkers and methods for treatment with nae inhibitors
KR102262992B1 (ko) * 2019-04-15 2021-06-09 대구가톨릭대학교산학협력단 리포폴리사카라이드 추출용 용매 및 이를 이용한 리포폴리사카라이드 추출 방법
CN110951724A (zh) * 2019-12-20 2020-04-03 沈阳农业大学 一种Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法
CN112195176B (zh) * 2020-09-30 2023-05-02 天津大潮基因科技有限公司 从生物材料中分离纯化核酸固体的方法
CN117467731A (zh) * 2023-11-07 2024-01-30 合肥贝壳派创新科技有限公司 一种贻贝提取物的制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4843155A (en) * 1987-11-19 1989-06-27 Piotr Chomczynski Product and process for isolating RNA

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5234809A (en) * 1989-03-23 1993-08-10 Akzo N.V. Process for isolating nucleic acid
US5010183A (en) * 1989-07-07 1991-04-23 Macfarlane Donald E Process for purifying DNA and RNA using cationic detergents
US5128247A (en) * 1989-08-14 1992-07-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for isolation of nucleic acids from eukaryotic and prokaryotic sources
US5130423A (en) * 1990-07-13 1992-07-14 Microprobe Corporation Non-corrosive compositions and methods useful for the extraction of nucleic acids
ES2125869T3 (es) * 1990-07-13 1999-03-16 Microprobe Corp Composicion no corrosiva y procedimientos utiles para la extraccion de acidos nucleicos.

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4843155A (en) * 1987-11-19 1989-06-27 Piotr Chomczynski Product and process for isolating RNA

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011152142A (ja) * 2004-04-16 2011-08-11 Piotr Chomczynski 精製ｒｎａの単離試薬及び方法
JP2008289456A (ja) * 2006-06-16 2008-12-04 Sysmex Corp がん細胞の検出方法及び装置
WO2012023569A1 (ja) 2010-08-18 2012-02-23 東レ株式会社 Ｒｎａ抽出用溶液
KR20130098163A (ko) 2010-08-18 2013-09-04 도레이 카부시키가이샤 Ｒｎａ 추출용 용액
JP5906740B2 (ja) * 2010-08-18 2016-04-20 東レ株式会社 Ｒｎａ抽出用溶液

Also Published As

Publication number Publication date
DE69305662T2 (de) 1997-02-27
US5346994A (en) 1994-09-13
DE69305662D1 (de) 1996-12-05
JP2679929B2 (ja) 1997-11-19
ATE144777T1 (de) 1996-11-15
ES2095565T3 (es) 1997-02-16
EP0554034B1 (en) 1996-10-30
EP0554034A1 (en) 1993-08-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2679929B2 (ja) Ｒｎａ、ｄｎａおよび蛋白の同時単離法
US5945515A (en) Product and process for isolating DNA, RNA and proteins
US4908318A (en) Nucleic acid extraction methods
US4843155A (en) Product and process for isolating RNA
US8367817B2 (en) Reagents for isolation of purified RNA
US5972613A (en) Methods of nucleic acid isolation
US6043354A (en) Method for the simultaneous isolation of genomic DNA and high-purity RNA
US5990302A (en) Method for isolating ribonucleic acid
EP0747388B1 (en) Method and kit for purifying nucleic acids
US5672696A (en) Treatment of paraffin embedded tissue for gene analysis
JP2000516091A (ja) アルカリプロテアーゼを用いる核酸の単離方法
US4921952A (en) Nucleic acid isolation process
CA2064068A1 (en) Methods and compositions for isolation of nucleic acids from eukaryotic and prokaryotic sources
CN1321200A (zh) 用于抽血的容器
JP3451667B2 (ja) 核酸抽出及び特定核酸配列の検出方法
JPH05125088A (ja) Ｄｎａの固相抽出精製
JPH11146783A (ja) リボ核酸の抽出方法
JP3082908B2 (ja) リボ核酸の単離方法
HUT70980A (en) Dna isolation method
JP2527510B2 (ja) Ｄｎａの単離方法
Plagens Effect of salt-treatment on manually isolated polytene chromosomes from Chironomus tentans
AU621936B2 (en) Method for the isolation of dna
US5204257A (en) Method of recovering bacteriophage
GB2282138A (en) Method of extracting nucleic acids and detecting specified nucleic acid sequences
US20030157492A1 (en) Method to isolate DNA

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20070801

Year of fee payment: 10

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080801

Year of fee payment: 11

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080801

Year of fee payment: 11

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090801

Year of fee payment: 12

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100801

Year of fee payment: 13

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110801

Year of fee payment: 14

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110801

Year of fee payment: 14

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120801

Year of fee payment: 15

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130801

Year of fee payment: 16

EXPY Cancellation because of completion of term
FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130801

Year of fee payment: 16