JPH054063B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

（発明の対象 策産業上の利用分野） 本発明は、フラクトオリゴ糖とβ−1.3−1.6グ
ルカンを主成分とする飲食物の製造方法に係り、
更に詳しくは、オウレオバシデイウム属
（Aureobacidium、sp）FERM−P.No.4257、
ATCC.No.20524、IFO、No.7757菌を、庶糖を使用
して液体培養してフラクトオリゴ糖とβ−1.3−
1.6グルカンを含む培養液を得、この培養液を加
熱殺菌後、そのまま又は物理的に固型物を除去し
て健康維持飲料（腸内ビイフイズス菌の増殖、便
秘防止、免疫増強）、整腸剤、家畜の整腸剤等に
利用出来る飲食物の製造方法に関する。 （従来の技術） 本発明は、オウレオバシデイウム属
（Aureobacidium、sp）FERM−P.No.4257、
ATCC.No.20524（以下本菌と称する）によるβ−
1.3−1.6−グルカンの生産研究に於て、庶糖を炭
素源として液体培養すると、培地中の庶糖が培養
初期から三糖、四糖になる事を液体クロマトで検
出した事に始まる。 此の糖を分離し、物理的、化学的分析（メチル
化、GC−MS、NMR分析）の結果、庶糖のフラ
クトースにフラクトースがβ−1.2結合（イヌリ
ン型結合）で１〜２ケ結合したオリゴ糖、更に詳
しくは１ケース（１−Kestose）、ニイストース
（nystose）である事が明確になつた。 更には、本菌は庶糖を炭素源として倍地で液体
培養すると、主として菌体内又は菌対外に果糖転
移酸素であるフラクトシルトランスフエラーゼ
（Fructosyl−Transfcrase）を産生する事を見出
した。 本菌が、果糖転移酸素を菌体内に含有し、庶糖
をフラクトオリゴ糖（Fructo−orgo）に変える
事は、新規多糖であるβ−1.3−1.6−グルカンの
生産研究に於て全く予期しないことであつた。然
も庶糖濃度が0.5％と非常に低い濃度で庶糖をフ
ラクトオリゴ糖に変えていることは驚くべき事で
ある。 又、本菌は庶糖をまずフラクトオリゴ糖に変
え、このフラクトオリゴ糖を除々に分解して利用
する事を見出した。即ち庶糖は本菌により培養初
期にフラクトオリゴ糖になり、培養経過時間とと
もに７糖〜８糖になるが96〜120時間で分解され
てフラクトースとグルコースになり、この単糖が
本菌に利用されて、菌体外にβ−1.3−1.6−グル
カンを生産する。β−1.3−1.6−グルカンは庶糖
濃度が高くなるにつれてその生産量が減少し、培
地中の庶糖濃度が30％になるとプルランのみを産
出する。 本発明者は上述の知見により、フラクトオリゴ
糖とβ−1.3−1.6グルカンの両成分を同時に含有
する培養液を本菌で製造する方法を確立した。 尚本菌による新規多糖、即ちβ−1.3−1.6グル
カンの産生、構造に関しては本発明者が日本特許
出願番号56−035001号（特開昭57−149301号）に
詳細に記述している。又本菌によつて庶糖からフ
ラクトオリゴ糖を製造する方法及び果糖転移酵素
に関しては、日本国特許出願番号58−134661号及
び、58−148583号に詳細に記述している。 （発明の構成） 本発明は、オウレオバシデイウム属
（Aureobacidium、sp）を、庶糖5.00〜10.00重量
％米糠0.01〜0.30重量％ビタミンC0.10〜0.20重量
％ビタミンE0.01〜0.10重量％からなる液体培地
で72時間以下通気撹拌培養し、培養液中にフラク
トオリゴ糖とβ−1.3−1.6グルカンを同時に生成
させる工程、 上記工程で得られた培養液を殺菌した後、濾過
または遠心分離する工程、 を含む、 フラクトオリゴ糖とβ−1.3−1.6グルカンを主
成分とする飲食物の製造方法、である。即ち、菌
の培養過程で生産活性を有する２成分であるフラ
クトオリゴ糖とβ−1.3−1.6グルカンを同時に培
養培地中に産生させ、その培養液を直接又は精製
して、健康維持飲料（腸内ビイフイズス菌の増
殖、便泌秘防止、免疫増強）整腸剤、に利用出来
るようにしたものである。 フラクトオリゴ糖は、人間のビイフイズス因子
として特に優れている事が証明されている。β−
1.3−1.6グルカンについては、具体的には坦子菌
等から得られたβ−1.3−1.6グルカン、特に非還
元性末端がβ−1.6結合で分岐したグルカンが、
免疫増強において優れている事が証明されてい
る。 本発明は、微生物を培養してフラクトオリゴ糖
とβ−1.3−1.6−グルカンを含有する培養液の製
造方法であり、見方を換えれば培養液中にフラク
トオリゴ糖とβ−1.3−1.6グルカン（リンゴ酸と
リン酸を結合した新規多糖）を同時に生成せる方
法である。 此の二成分を含有する培養液は人の健康に有用
な飲料になる事は、フラクトオリゴ糖がビイフイ
ズス因子である事、β−1.3−1.6グルカンが免疫
増強作用を有する事からも推測する事が出来る。 オーレオバシデイウム属（Aureobacidium、
sp）は、通常黒酵母といわれ、プルラ（グルコー
スがα−1.4結合した、マルト・トリオースがα
−1.6結合した高分子多糖）生産菌として良く知
られており、本発明で用いられるオーレオバシデ
イウム属は、微工研菌寄第4257菌（FERM−Ｐ、
No.4247菌）、ATCC.No.20524菌として既に登録さ
れている。 本発明者は本菌を使用して、新規多糖であるβ
−1.3−1.6グルカンのみを産生する製法を確立
し、その詳細は日本国特許出願番号56−035001号
（特開昭57−149301号）及び米国特許出願番号、
No.353968に明記されている。 具体的には、炭素源として庶糖を使用し、米
糠、ビタミンＣ、ビタミンＥを含有する液体培地
組成で、此の培地を通気撹拌培養して培地中にβ
−1.3−1.6−グルカンのみを産生させる。この培
養液は多糖特有の粘稠な液体である。 培地組成は、庶糖0.50〜1.00％（Ｗ／Ｖ）、米
糠0.20％（Ｗ／Ｖ）、ビタミンＣ（アスコルビン
酸）0.20％（Ｗ／Ｖ）又はビタミンＥ（トコフア
ロール）0.01〜0.10％（Ｗ／Ｖ）が最適濃度であ
る。第１図にβ−1.3−1.6グルカン産生条件での
液体培養経過とその代謝を示す。培養液中に生産
されるβ−1.3−1.6グルカンは、培養時間48時間
までに急上昇するが、その後はゆるやかになる。
ビタミンＣ無添加の場合は、β−1.3−1.6グルカ
ンの産生量は、添加の場合に比較して１／５以下
となる。 培養液の色価は、24時間を過ぎると急上昇する
が48時間を過ぎると黄褐色となる。ビタミンＣ無
添加の場合は培養液は黒褐色となる。即ち細胞表
面に黒色色素が蓄積されてくる。 β−1.3−1.6グルカンの産生濃度は最終的に
0.50％〜0.60％の低濃度であるが、その溶液の粘
度は非常に高く、粘着性が全くなく、卵白の様に
なめらかである。 β−1.3−1.6グルカンの水溶液粘度（相対粘
度）C.P／20℃を第２図に示す。 培養培地に炭素源として利用した庶糖は、本菌
が産生するフラクトシルトランスフエラーゼで培
養初期からフラクトオリゴ糖（１−Kestose、
mystose）とグルコース（Glucose）になるが、
培養経過とともにグルコースとフラクトース
（Fructose）が増加してくる。この事は庶糖から
のフラクトオリゴ糖産生が、培養経過とともに最
大となるが、次第に減少していく事を明示してい
る。 β−1.3−1.6−グルカンの産生培養で培地の庶
糖が、低濃度に於て培養初期からフラクトオリゴ
糖、即ち１−ケストースとグルコースになる事を
見出すことにより、本発明者は本菌を使用して、
庶糖からフラクトオリゴ糖を製造する事を確立す
る事が出来た。詳細は日本国特許出願No.58−
134661に明記してある。 本発明におけるβ−1.3−1.6グルカンの培養条
件である庶糖1.00重量％、ビタミンＣ（アスコル
ビン酸）0.20重量％、米糠0.20重量％で液体培養
し、β−1.3−1.6グルカンの培養液産生量が一応
安定する培養時間48時間に於ける培養培地中の糖
組成を、液体クロマトで分析した結果を表１に示
す。

【表】 又液体クロマト分析を第３図に示す。この液体
培養液中のフラクトオリゴ糖濃度は、0.12％で非
常に低濃度である。 本発明者は、培養液中のβ−1.3−1.6グルカン
濃度を最大に保つて、尚、フラクトオリゴ糖濃度
を高くする方法を見出した。 即ち、培養培地中の庶糖濃度を増加させても、
β−1.3−1.6グルカンの産生量が変らない庶糖濃
度を見出した。この庶糖濃度は5.00重量％〜
10.00重量％である。 β−1.3−1.6−グルカンの産生培地である庶
糖、米糠、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミ
ンＥのうち、庶糖濃度のみを変動させる。 具体的には庶糖濃度を増加して液体培養をする
と、培養経過とともにいづれの場合も、庶糖はフ
ラクトオリゴ糖とグルコースに変わる。然し、β
−1.3−1.6グルカンの産生量は0.50重量％〜5.00
重量％が最大で、庶糖濃度が増加するにつれてプ
ルランが産生されてくる。庶糖濃度が30重量％に
なるとβ−1.3−1.6グルカンは全く産出されず、
プルランのみが産生される。 本発明者は、本菌がβ−1.3−1.6グルカンを液
体培養で産生する培養培地組成を見出し、その製
造法を確立した。この事は日本国特許出願No.56−
035001、米国特許出願No.353968に明記してある。 本発明では、培地中の庶糖濃度がオーレオバシ
デイウム属によるβ−1.3−1.6グルカンの産生を
抑制する事を知見し、この知見に基づいて、β−
1.3−1.6グルカンとフラクトオリゴ糖を主成分と
する培養液の製造方法を確立するに至つた。 表２にβ−1.3−1.6グルカンの産生培地、即
ち、米糠0.20重量％、ビタミンＣ（アスコルビン
酸）0.20重量％庶糖1.00重量％の庶糖濃度のみを
増加させた培地組成で（5.00％ 1.00％ 20.00％
30.00％）96時間液体培養した培養液中のβ−
1.3−1.6グルカン、プルラン、フラクトオリゴ糖
含有量を示す。

【表】 （試験例） 培養は、100mlの三角フラスコにβ−1.3−1.6
グルカン産生培地を各々50mlずつ入れ、各々庶糖
濃度を0.50％ 5.00％ 10.00％ 20.00％ 30.00
％に調整後、PH5.2温度25℃で96時間振湯培養し、
その培養液を10000r.p.mで10分間遠心処理し、上
澄液について試験した。 粘度はオストワルド粘度計で相対粘度として表
わし、β−1.3−1.6グルカンは、上澄液に等量の
エチルアルコールを加えアルコール濃度を50％
（Ｖ／Ｖ）にし、不溶物質を遠心除去後、減圧乾
燥し、重量を測定した。この重量物を(A)とする。
この(A)を再度蒸留水（100ml）に溶解し、プルラ
ン分解酵素（林原生物化学研究所）であるプルラ
ナーゼ（pullulanase）を作用させ、更に50％エ
タノール濃度で不溶になる物質を分離し、減圧乾
燥したものを重量測定し、この重量物を(B)とす
る。そして(A)−(B)＝プルランとして表示し、(B)を
β−1.3−1.6グルカンとして表示した。 β−1.3−1.6グルカンに関しては赤外分析でβ
結合を確認し、更にβ−1.3−1.6グルカナーゼで
ゲンチオビオース、グルコースを確認した。 β−1.3−1.6グルカンとプルランを除去した固
形物中のフラクトオリゴ糖は、液体クロマト分析
し（島津製作所の101型HL.P、Ｃ）、重量（％）
で表示した。 培地中の庶糖濃度が30.00％以上になるとプル
ランのみを倍地中に産生し、β−1.3−1.6グルカ
ンは全く産生されない。然し、培地中の庶糖は培
養経過時間とともにフラクトオリゴ糖になり、庶
糖濃度が30.00％の時、96時間でフラクトオリゴ
糖の産生量は最大となるが、目的とするβ−1.3
−1.6グルカンを含む粘稠な培養液は産生出来な
い。 培地中の庶糖濃度を5.00％〜10.00％とするこ
とにより目的とするβ−1.3−1.6グルカンとフラ
フトオリゴ糖を含有する粘稠な培養液を産生する
ことが出来る。フラクトオリゴ糖の産生量を最大
にする培養時間は30〜48時間である。 表３にβ−1.3−1.6グルカン産生培地に於て培
地中の庶糖濃度が５％の液体培養経過時間に於け
る培地中のβ−1.3−1.6グルカンと、フラクトオ
リゴ糖の産生量を示す。

【表】 表４にβ−1.3−1.6グルカン培養液の製造方法
のフローチヤートを示す。

【表】 ↓

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ オウレオバシデイウム属（Aureobacidium、
   sp）を、庶糖5.00〜10.00重量％米糠0.01〜0.30重
   量％ビタミンC0.10〜0.20重量％ビタミンE0.01〜
   0.10重量％からなる液体培地で72時間以下通気撹
   拌培養し、培養液中にフラクトオリゴ糖とβ−
   1.3−1.6グルカンを同時に生成させる工程、 上記工程で得られた培養液を殺菌した後、濾過
   または遠心分離する工程、 を含む、 フラクトオリゴ糖とβ−1.3−1.6グルカンを主
   成分とする飲食物の製造方法。