JPH0541996A - マイシナミシン類の増産剤および製造方法 - Google Patents
マイシナミシン類の増産剤および製造方法Info
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- JPH0541996A JPH0541996A JP21289091A JP21289091A JPH0541996A JP H0541996 A JPH0541996 A JP H0541996A JP 21289091 A JP21289091 A JP 21289091A JP 21289091 A JP21289091 A JP 21289091A JP H0541996 A JPH0541996 A JP H0541996A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 マイシナミシン類を大量かつ安価に供給す
る。 【構成】 ＭＧ２９９Ａ物質、ＭＧ２９９Ｂ物質および
それらの塩からなる群より選ばれた少なくとも１種以上
のドトリアコライド類を添加し、マイシナミシン類生産
菌を培地にて培養してマイシナミシン類を製造する。
る。 【構成】 ＭＧ２９９Ａ物質、ＭＧ２９９Ｂ物質および
それらの塩からなる群より選ばれた少なくとも１種以上
のドトリアコライド類を添加し、マイシナミシン類生産
菌を培地にて培養してマイシナミシン類を製造する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、マクロライド系抗生物
質マイシナミシン類の増産剤および製造方法に関する。
質マイシナミシン類の増産剤および製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、マイシナミシン類抗生物質として
は、マイシナミシンＩ〜XVIII が知られている〔Ｊ．Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，４，３６４〜３７６（１
９８０）：同３４，３，２７６〜２８１（１９８１）：
同３６，２，１７５〜１７８（１９８３）：特開昭６１
−１８５５７号公報：特開昭６１−２１４８０号公報：
特開昭６３−５３９９号公報：特開昭６３−３１４７９
号公報：特開昭６４−４０４９５号公報：特開平２−１
７１９７号公報および特開平３−１１０９６号公報〕。
は、マイシナミシンＩ〜XVIII が知られている〔Ｊ．Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，４，３６４〜３７６（１
９８０）：同３４，３，２７６〜２８１（１９８１）：
同３６，２，１７５〜１７８（１９８３）：特開昭６１
−１８５５７号公報：特開昭６１−２１４８０号公報：
特開昭６３−５３９９号公報：特開昭６３−３１４７９
号公報：特開昭６４−４０４９５号公報：特開平２−１
７１９７号公報および特開平３−１１０９６号公報〕。
【０００３】これらのマイシナミシンＩ〜XVIII の中で
マイシナミシンＩ、II、IVおよびＶは、特にブドウ球菌
やマイコプラズマに対して極めて優れた抗菌活性を示
し、ヒトおよび動物の感染症治療薬として有用である。
従来、マイシナミシン類はミクロモノスポラ属に属する
微生物を通常の培地にて好気的に培養することにより製
造されていた。
マイシナミシンＩ、II、IVおよびＶは、特にブドウ球菌
やマイコプラズマに対して極めて優れた抗菌活性を示
し、ヒトおよび動物の感染症治療薬として有用である。
従来、マイシナミシン類はミクロモノスポラ属に属する
微生物を通常の培地にて好気的に培養することにより製
造されていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】マイシナミシン類の生
産性は、従来方法では十分ではなく、さらに良好な生産
性を要求されていたもので、マイシナミシン類を大量か
つ安価に供給する方法が求められていた。
産性は、従来方法では十分ではなく、さらに良好な生産
性を要求されていたもので、マイシナミシン類を大量か
つ安価に供給する方法が求められていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、マイシナ
ミシン類抗生物質の増産法を検討していたところ、意外
にも従来βラクタマーゼ、ＤＮａｓｅおよびトポイソメ
ラーゼI 等の酵素阻害剤として知られている化合物ドト
リアコライド類（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３４，
１２，１６２８〜１６３０（１９８１）および特開昭５
７−２００３８０号公報）を、マイシナミシン類生産菌
の培養物中に添加することにより、マイシナミシン類の
生産性が向上することを見出し、本発明を完成するに至
った。
ミシン類抗生物質の増産法を検討していたところ、意外
にも従来βラクタマーゼ、ＤＮａｓｅおよびトポイソメ
ラーゼI 等の酵素阻害剤として知られている化合物ドト
リアコライド類（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３４，
１２，１６２８〜１６３０（１９８１）および特開昭５
７−２００３８０号公報）を、マイシナミシン類生産菌
の培養物中に添加することにより、マイシナミシン類の
生産性が向上することを見出し、本発明を完成するに至
った。
【０００６】すなわち本発明は、ＭＧ２９９Ａ物質、Ｍ
Ｇ２９９Ｂ物質およびそれらの塩からなる群より選ばれ
た少なくとも１種以上のドトリアコライド類を有効成分
とするマイシナミシン類増産剤である。また本発明はマ
イシナミシン類生産菌を培地にて培養するマイシナミシ
ン類の製造方法において、ＭＧ２９９Ａ物質（以下ＭＧ
２９９Ａと称する。）、ＭＧ２９９Ｂ物質（以下ＭＧ２
９９Ｂと称する。）およびそれらの塩からなる群より選
ばれた少なくとも１種以上のドトリアコライド類を添加
することを特徴とするマイシナミシン類の製造方法、す
なわち増産方法として好適な方法を提供するものであ
る。
Ｇ２９９Ｂ物質およびそれらの塩からなる群より選ばれ
た少なくとも１種以上のドトリアコライド類を有効成分
とするマイシナミシン類増産剤である。また本発明はマ
イシナミシン類生産菌を培地にて培養するマイシナミシ
ン類の製造方法において、ＭＧ２９９Ａ物質（以下ＭＧ
２９９Ａと称する。）、ＭＧ２９９Ｂ物質（以下ＭＧ２
９９Ｂと称する。）およびそれらの塩からなる群より選
ばれた少なくとも１種以上のドトリアコライド類を添加
することを特徴とするマイシナミシン類の製造方法、す
なわち増産方法として好適な方法を提供するものであ
る。
【０００７】本発明でマイシナミシン類とは、例えば下
記の式（１）
記の式（１）
【化１】 〔式中、Ａは酸素原子または単結合を、Ｒ1 およびＲ2
およびＲ6 はそれぞれ水素原子またはメチル基を、Ｒ3
は酸素原子または（水素原子と水酸基）を、Ｒ4 は水素
原子または式（２）
およびＲ6 はそれぞれ水素原子またはメチル基を、Ｒ3
は酸素原子または（水素原子と水酸基）を、Ｒ4 は水素
原子または式（２）
【化２】 で表される基を、Ｒ5 は水素原子または水酸基を、─は
単結合または二重結合を、Ｑはメチル基またはヒドロキ
シメチル基または式（３）
単結合または二重結合を、Ｑはメチル基またはヒドロキ
シメチル基または式（３）
【化３】 （ここでｎは０または１を、ＹおよびＺはそれぞれ水素
原子またはメチル基を示す）で表される基を示す〕で表
される基本構造を有するものであれば特に限定されない
が、さらに具体的には下記の表１に示されるマイシナミ
シンＩ〜XVIII が挙げられる。
原子またはメチル基を示す）で表される基を示す〕で表
される基本構造を有するものであれば特に限定されない
が、さらに具体的には下記の表１に示されるマイシナミ
シンＩ〜XVIII が挙げられる。
【０００８】
【表１】
【０００９】マイシナミシン類生産菌としては、上記マ
イシナミシン類を生産し得る微生物なら特に限定されな
いが、ミクロモノスポラ属に属する微生物が好ましく、
さらにはミクロモノスポラ グリゼオルビダが好適であ
り、さらに好ましくはミクロモノスポラ グリゼオルビ
ダ Ａ１１７２５（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｇｒ
ｉｓｅｏｒｕｂｉｄａ Ａ１１７２５，ＦＥＲＭ ＢＰ
−７０５）株が挙げられる。この菌株は、既知のマイシ
ナミシン類を生産する能力を有するものであり、その菌
学的性質についてはＪ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３
３，４，３６４〜３７６（１９８０）、特公昭５１−１
８５５７号公報に記載されている。また、放線菌の一般
性状として菌学上の性質は極めて変化し易く、一定した
ものではなく、自然的にあるいは通常行われる紫外線照
射または変異誘導剤などにより変異することは周知の事
実である。従ってこのような人工変異株は勿論、自然変
異株も含め、マイシナミシン類を生産する能力を有する
菌株は本発明に利用できる。また、遺伝子操作により形
質転換されたマイシナミシン類生産菌も利用可能であ
る。
イシナミシン類を生産し得る微生物なら特に限定されな
いが、ミクロモノスポラ属に属する微生物が好ましく、
さらにはミクロモノスポラ グリゼオルビダが好適であ
り、さらに好ましくはミクロモノスポラ グリゼオルビ
ダ Ａ１１７２５（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｇｒ
ｉｓｅｏｒｕｂｉｄａ Ａ１１７２５，ＦＥＲＭ ＢＰ
−７０５）株が挙げられる。この菌株は、既知のマイシ
ナミシン類を生産する能力を有するものであり、その菌
学的性質についてはＪ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３
３，４，３６４〜３７６（１９８０）、特公昭５１−１
８５５７号公報に記載されている。また、放線菌の一般
性状として菌学上の性質は極めて変化し易く、一定した
ものではなく、自然的にあるいは通常行われる紫外線照
射または変異誘導剤などにより変異することは周知の事
実である。従ってこのような人工変異株は勿論、自然変
異株も含め、マイシナミシン類を生産する能力を有する
菌株は本発明に利用できる。また、遺伝子操作により形
質転換されたマイシナミシン類生産菌も利用可能であ
る。
【００１０】本発明中のドトリアコライド類とは、特開
昭５７−２００３８０号公報記載のＭＧ２９９Ａおよび
ＭＧ２９９Ｂのそれぞれまたは混合物またはそれらの塩
のことを言う。従来、ドトリアコライド類は、主として
ペニシリンまたはセファロスポリン系抗生物質を加水分
解して不活性化するβラクタマーゼの酵素作用を阻害す
る物質として知られている（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ，３４，１２，１６２８〜１６３０（１９８１）およ
び特開昭５７−２００３８０号公報）。またさらに各種
ＤＮＡ分解酵素やトポイソメラーゼＩの酵素活性を阻害
することも知られている（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ，３５，２，２４８〜２５０（１９８２））。
昭５７−２００３８０号公報記載のＭＧ２９９Ａおよび
ＭＧ２９９Ｂのそれぞれまたは混合物またはそれらの塩
のことを言う。従来、ドトリアコライド類は、主として
ペニシリンまたはセファロスポリン系抗生物質を加水分
解して不活性化するβラクタマーゼの酵素作用を阻害す
る物質として知られている（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ，３４，１２，１６２８〜１６３０（１９８１）およ
び特開昭５７−２００３８０号公報）。またさらに各種
ＤＮＡ分解酵素やトポイソメラーゼＩの酵素活性を阻害
することも知られている（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ，３５，２，２４８〜２５０（１９８２））。
【００１１】ドトリアコライド類は、ミクロモノスポラ
エキノスポラ ＭＧ２９９−ｆＦ３５（Ｍｉｃｒｏｍ
ｏｎｏｓｐｏｒａ ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ ＭＧ２９
９−ｆＦ３５）により培養物中に産生されることが知ら
れているが（特開昭５７−２００３８０号公報）、マイ
シナミシン類生産菌のミクロモノスポラ グリゼオルビ
ダ Ａ１１７２５（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｇ
ｒｉｓｅｏｒｕｂｉｄａ Ａ１１７２５，ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−７０５）もドトリアコライド類を産生することを本
発明者は確認しており、本菌株が有利に利用できる。ド
トリアコライド類の物理化学的性質は次の如くである。
すなわち、白色粉末で、シリカゲルの薄層クロマトグラ
フィーで、展開溶媒としてｎ−ブタノール：メタノー
ル：水（４：１：２容）を使用したとき、Ｒｆは０．２
９〜０．３０である。赤外部吸収スペクトルは図１に示
す如くである。ＭＧ２９９Ａについては水溶液中で測定
した紫外部吸収曲線で２１０ｎｍに吸収極大を有する。
エキノスポラ ＭＧ２９９−ｆＦ３５（Ｍｉｃｒｏｍ
ｏｎｏｓｐｏｒａ ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ ＭＧ２９
９−ｆＦ３５）により培養物中に産生されることが知ら
れているが（特開昭５７−２００３８０号公報）、マイ
シナミシン類生産菌のミクロモノスポラ グリゼオルビ
ダ Ａ１１７２５（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｇ
ｒｉｓｅｏｒｕｂｉｄａ Ａ１１７２５，ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−７０５）もドトリアコライド類を産生することを本
発明者は確認しており、本菌株が有利に利用できる。ド
トリアコライド類の物理化学的性質は次の如くである。
すなわち、白色粉末で、シリカゲルの薄層クロマトグラ
フィーで、展開溶媒としてｎ−ブタノール：メタノー
ル：水（４：１：２容）を使用したとき、Ｒｆは０．２
９〜０．３０である。赤外部吸収スペクトルは図１に示
す如くである。ＭＧ２９９Ａについては水溶液中で測定
した紫外部吸収曲線で２１０ｎｍに吸収極大を有する。
【００１２】本発明のドトリアコライド類としては、Ｍ
Ｇ２９９Ａ、ＭＧ２９９Ｂの任意の比率の物であっても
良く、通常はドトリアコライド類を生産する微生物の生
産物のその比率を変えることなく用いるのが好ましく、
通常ＭＧ２９９Ａ：ＭＧ２９９Ｂが約７：３が例示され
る。塩としては、微生物の生育に悪影響を及ばさないも
のなら特に限定されず、例えばナトリウム塩、カリウム
塩、アンモニウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩な
どが挙げられる。
Ｇ２９９Ａ、ＭＧ２９９Ｂの任意の比率の物であっても
良く、通常はドトリアコライド類を生産する微生物の生
産物のその比率を変えることなく用いるのが好ましく、
通常ＭＧ２９９Ａ：ＭＧ２９９Ｂが約７：３が例示され
る。塩としては、微生物の生育に悪影響を及ばさないも
のなら特に限定されず、例えばナトリウム塩、カリウム
塩、アンモニウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩な
どが挙げられる。
【００１３】ドトリアコライド類の添加量は、通常は培
地１ｌ当たり０．１〜２０ｇ、好ましくは１〜１０ｇが
例示される。ドトリアコライド類の添加時期は培地作成
時または種培養液の移植後から培養終了までのすべての
時期に添加可能であるが、培養初期からドトリアコライ
ド類を添加するとマイシナミシン類生産菌の生育に必ず
しも好ましくないので、特に好ましくは培養開始後３〜
６日目である。添加方法は、培地に添加しても、ドトリ
アコライド類に培地を添加してもよく、あるいは微生物
と混合した後添加してもよい。またショット（単回）添
加および連続添加が可能である。ドトリアコライド類を
添加するに当たっては、上記の使用量を勘案して、粉末
状、または例えば１〜２０％の適宜な濃度として水や緩
衝液等または微生物の生育に不利にならない限りは水性
有機溶媒に溶かして溶液状態等適宜の形態で用いればよ
い。
地１ｌ当たり０．１〜２０ｇ、好ましくは１〜１０ｇが
例示される。ドトリアコライド類の添加時期は培地作成
時または種培養液の移植後から培養終了までのすべての
時期に添加可能であるが、培養初期からドトリアコライ
ド類を添加するとマイシナミシン類生産菌の生育に必ず
しも好ましくないので、特に好ましくは培養開始後３〜
６日目である。添加方法は、培地に添加しても、ドトリ
アコライド類に培地を添加してもよく、あるいは微生物
と混合した後添加してもよい。またショット（単回）添
加および連続添加が可能である。ドトリアコライド類を
添加するに当たっては、上記の使用量を勘案して、粉末
状、または例えば１〜２０％の適宜な濃度として水や緩
衝液等または微生物の生育に不利にならない限りは水性
有機溶媒に溶かして溶液状態等適宜の形態で用いればよ
い。
【００１４】本発明方法を実施するには、まずマイシナ
ミシン生産菌を公知の方法と同様に培養すればよく、す
なわち同化性炭素源、同化性窒素源、同化性無機塩類源
を含有する培地中でマイシナミシン類を生産するような
条件、例えば特公昭６１−１８５５７号公報記載の培養
方法を参考として培養すればよい。
ミシン生産菌を公知の方法と同様に培養すればよく、す
なわち同化性炭素源、同化性窒素源、同化性無機塩類源
を含有する培地中でマイシナミシン類を生産するような
条件、例えば特公昭６１−１８５５７号公報記載の培養
方法を参考として培養すればよい。
【００１５】固体培地または液体培地が使用できるが、
大量生産には液体培地が適当である。また培養方法は公
知の培養方法がいずれも使用できるが特に醗酵タンク中
における通気攪拌培養法が大量生産に適する。培地成分
としては、グルコース、澱粉、グリセリン、蔗糖、モラ
ツセ、デキストリン等の炭素源：ペプトン、肉エキス、
大豆粉、カゼイン水解物、綿実粉、コーンスチープリカ
ー、硝酸塩、アンモニア塩等の窒素源：ナトリウム、カ
リウム、マグネシウム、カルシウム、コバルト、マンガ
ン、鉄等の陽イオンを含有する物質、塩素、硫酸、リン
酸、酢酸等の陰イオンを含有する物質等の無機塩類：乾
燥酵母、酵母エキス等の菌の発育因子が挙げられる。
大量生産には液体培地が適当である。また培養方法は公
知の培養方法がいずれも使用できるが特に醗酵タンク中
における通気攪拌培養法が大量生産に適する。培地成分
としては、グルコース、澱粉、グリセリン、蔗糖、モラ
ツセ、デキストリン等の炭素源：ペプトン、肉エキス、
大豆粉、カゼイン水解物、綿実粉、コーンスチープリカ
ー、硝酸塩、アンモニア塩等の窒素源：ナトリウム、カ
リウム、マグネシウム、カルシウム、コバルト、マンガ
ン、鉄等の陽イオンを含有する物質、塩素、硫酸、リン
酸、酢酸等の陰イオンを含有する物質等の無機塩類：乾
燥酵母、酵母エキス等の菌の発育因子が挙げられる。
【００１６】培養温度は通常２０〜３７℃、好ましくは
２６℃〜３２℃の温度が例示される。培養時間はマイシ
ナミシン類の生産性が最大になる時間であればよいが、
通常４〜１０日程度が例示される。次いでこのようにし
て培養して得られた培養物からマイシナミシン類を採取
するには公知の方法で行えばよく、例えば培養物を濾過
し、その濾液に酢酸エチル等の有機溶媒を加えて抽出
し、有機層を濃縮し、各種クロマトグラフィーに付し
て、分離精製する方法が例示される。マイシナミシン類
は目的により混合物としても、また単品に精製してもよ
く、適宜公知の方法により行ない得る。
２６℃〜３２℃の温度が例示される。培養時間はマイシ
ナミシン類の生産性が最大になる時間であればよいが、
通常４〜１０日程度が例示される。次いでこのようにし
て培養して得られた培養物からマイシナミシン類を採取
するには公知の方法で行えばよく、例えば培養物を濾過
し、その濾液に酢酸エチル等の有機溶媒を加えて抽出
し、有機層を濃縮し、各種クロマトグラフィーに付し
て、分離精製する方法が例示される。マイシナミシン類
は目的により混合物としても、また単品に精製してもよ
く、適宜公知の方法により行ない得る。
【００１７】以上のようにドトリアコライド類を添加し
て培養することにより、マイシナミシン類は顕著に増加
する。特にマイシナミシンI 、 II 、 IV 、V において
増加が著しい。本発明によればマイシナミシン類に属す
る各種の化合物を増産せしめることも可能であるし、１
種または数種の化合物のみを選択的に増産せしめること
も可能である。その場合には本出願の実施例を参考に適
宜の培養条件を選択すればよい。
て培養することにより、マイシナミシン類は顕著に増加
する。特にマイシナミシンI 、 II 、 IV 、V において
増加が著しい。本発明によればマイシナミシン類に属す
る各種の化合物を増産せしめることも可能であるし、１
種または数種の化合物のみを選択的に増産せしめること
も可能である。その場合には本出願の実施例を参考に適
宜の培養条件を選択すればよい。
【００１８】
【実施例】以下に実施例および参考例を挙げて本発明を
説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１９】参考例 ＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物の調製 Ａ）培養 培地１ｌ当り、デキストリン２０ｇ、綿実粉２５ｇ、ポ
リペプトン５ｇ、イーストエキス２．５ｇ、硫酸第一鉄
７水和物４０ｍｇ、塩化コバルト６水和物２ｍｇ、炭酸
カルシウム１ｇからなる液体培地のｐＨを、５Ｎ苛性ソ
ーダ水溶液を滴下してｐＨ７．５に調整した。この培地
９００ｍｌを５ｌ容丸底フラスコに分注し、１２０℃で
３０分間蒸気滅菌した。この培地にミクロモノスポラ
グリセオルビダ Ａ１１７２５（ＦＥＲＭ ＢＰ−７０
５）の凍結菌を５ｍｌ植付け、３０℃で５０時間レシプ
ロカルシェーカー上で培養して種培養液とした。一方培
地１ｌ当り、デキストリン９０ｇ、綿実粉２５ｇ、脱脂
小麦胚芽５ｇ、乾燥酵母１ｇ、炭酸カルシウム５ｇ、リ
ン酸２カリウム１．５ｇ、硫酸マグネシウム７水和物４
ｇ、硫酸第一鉄７水和物４０ｍｇ、塩化コバルト６水和
物２ｍｇ、シリコン系消泡剤０．５ｇからなる液体培地
のｐＨを５Ｎ苛性ソーダ水溶液を滴下してｐＨ７．２に
調整した。この培地２０ｌを含む３０ｌ容ジャーファー
メンターを１２０℃で３０分間蒸気滅菌した。このジャ
ーファーメンターに上記９００ｍｌの種培養液を植付
け、３０℃、３００ｒｐｍ、毎分２０ｌの無菌空気供給
の条件下で８日間通気攪拌培養を行い、１７ｌの培養液
を得た。培養液中のＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの
混合物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に
よって定量し、３．６ｍｇ／ｍｌ生成されていた。ＨＰ
ＬＣの測定条件は、次の如くである。 カラム：内径６ｍｍ×３００ｍｍ 充填剤：ＡＱＵＡＳＩＬ ＳＳ−５６２Ｎ（ラボ・コー
テック社製） 溶媒系：アセトニトリル：メタノール：１０％リン酸水
（９：２：１） 流速：１．２ｍｌ／分
リペプトン５ｇ、イーストエキス２．５ｇ、硫酸第一鉄
７水和物４０ｍｇ、塩化コバルト６水和物２ｍｇ、炭酸
カルシウム１ｇからなる液体培地のｐＨを、５Ｎ苛性ソ
ーダ水溶液を滴下してｐＨ７．５に調整した。この培地
９００ｍｌを５ｌ容丸底フラスコに分注し、１２０℃で
３０分間蒸気滅菌した。この培地にミクロモノスポラ
グリセオルビダ Ａ１１７２５（ＦＥＲＭ ＢＰ−７０
５）の凍結菌を５ｍｌ植付け、３０℃で５０時間レシプ
ロカルシェーカー上で培養して種培養液とした。一方培
地１ｌ当り、デキストリン９０ｇ、綿実粉２５ｇ、脱脂
小麦胚芽５ｇ、乾燥酵母１ｇ、炭酸カルシウム５ｇ、リ
ン酸２カリウム１．５ｇ、硫酸マグネシウム７水和物４
ｇ、硫酸第一鉄７水和物４０ｍｇ、塩化コバルト６水和
物２ｍｇ、シリコン系消泡剤０．５ｇからなる液体培地
のｐＨを５Ｎ苛性ソーダ水溶液を滴下してｐＨ７．２に
調整した。この培地２０ｌを含む３０ｌ容ジャーファー
メンターを１２０℃で３０分間蒸気滅菌した。このジャ
ーファーメンターに上記９００ｍｌの種培養液を植付
け、３０℃、３００ｒｐｍ、毎分２０ｌの無菌空気供給
の条件下で８日間通気攪拌培養を行い、１７ｌの培養液
を得た。培養液中のＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの
混合物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に
よって定量し、３．６ｍｇ／ｍｌ生成されていた。ＨＰ
ＬＣの測定条件は、次の如くである。 カラム：内径６ｍｍ×３００ｍｍ 充填剤：ＡＱＵＡＳＩＬ ＳＳ−５６２Ｎ（ラボ・コー
テック社製） 溶媒系：アセトニトリル：メタノール：１０％リン酸水
（９：２：１） 流速：１．２ｍｌ／分
【００２０】Ｂ）精製採取 上記培養物１７ｌを濾過し、菌体およびその他の固形物
を濾別した後、濾液１５ｌを得た。この濾液を５ｌの酢
酸ブチルで抽出し、マイシナミシン類を含有する酢酸ブ
チル層とＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物を含
有する水層に分配された。ＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９
９Ｂの混合物を含有する水層１５ｌを濃硫酸でｐＨ１．
５に調整し、ｎ−ブタノール５ｌを加え抽出し、目的物
を含有するｎ−ブタノール溶液３．５ｌを得た。これに
水２ｌ加え１０％苛性ソーダ水溶液でｐＨ５．５に調整
し、目的物を水層に転溶した。この水層２．３ｌを減圧
下０．５ｌに濃縮し、粗精製溶液を得た。この粗精製液
をダイヤイオンＨＰ−２０（２ｌ）を充填したカラムに
吸着させた。初めに、１％苛性ソーダ水溶液４ｌおよび
３０％メタノール４ｌでカラムを洗浄した後、１００％
メタノール６ｌで目的物を溶出した。溶出液を減圧濃縮
後、１０％苛性ソーダ水溶液でｐＨ７．０に調整し、凍
結乾燥して白色粉末２２ｇを得た。上記の操作で得られ
た目的物の物理化学的性質は次の通りであって、特開昭
５７−２００３８０号公報記載のドトリアコライド類の
物理化学的性状と一致したものである。。なお、薄層ク
ロマトグラフィー（ＴＬＣ）の展開溶媒はｎ−ブタノー
ル：メタノール：水（４：１：２）であり、ＨＰＬＣの
測定条件は上述の如くである。 融点：１５４〜１５５℃（分解） 比旋光度：［α］26 D ＝＋８．２o ＵＶ λmax (Ｈ2Ｏ) ：２１０ｎｍ ＩＲ：図１に示されるスペクトル 元素分析：Ｃ４５．０８％、Ｈ６．８９％、Ｓ１１．３
０％ ＴＬＣ Ｒｆ：０．２９ ＨＰＬＣ Ｒｔ：３．０６分 なお、上記目的物質は、その分解物の核磁気共鳴スペク
トルから計算して約７０％のＭＧ２９９Ａおよび約３０
％のＭＧ２９９Ｂを含有する。
を濾別した後、濾液１５ｌを得た。この濾液を５ｌの酢
酸ブチルで抽出し、マイシナミシン類を含有する酢酸ブ
チル層とＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物を含
有する水層に分配された。ＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９
９Ｂの混合物を含有する水層１５ｌを濃硫酸でｐＨ１．
５に調整し、ｎ−ブタノール５ｌを加え抽出し、目的物
を含有するｎ−ブタノール溶液３．５ｌを得た。これに
水２ｌ加え１０％苛性ソーダ水溶液でｐＨ５．５に調整
し、目的物を水層に転溶した。この水層２．３ｌを減圧
下０．５ｌに濃縮し、粗精製溶液を得た。この粗精製液
をダイヤイオンＨＰ−２０（２ｌ）を充填したカラムに
吸着させた。初めに、１％苛性ソーダ水溶液４ｌおよび
３０％メタノール４ｌでカラムを洗浄した後、１００％
メタノール６ｌで目的物を溶出した。溶出液を減圧濃縮
後、１０％苛性ソーダ水溶液でｐＨ７．０に調整し、凍
結乾燥して白色粉末２２ｇを得た。上記の操作で得られ
た目的物の物理化学的性質は次の通りであって、特開昭
５７−２００３８０号公報記載のドトリアコライド類の
物理化学的性状と一致したものである。。なお、薄層ク
ロマトグラフィー（ＴＬＣ）の展開溶媒はｎ−ブタノー
ル：メタノール：水（４：１：２）であり、ＨＰＬＣの
測定条件は上述の如くである。 融点：１５４〜１５５℃（分解） 比旋光度：［α］26 D ＝＋８．２o ＵＶ λmax (Ｈ2Ｏ) ：２１０ｎｍ ＩＲ：図１に示されるスペクトル 元素分析：Ｃ４５．０８％、Ｈ６．８９％、Ｓ１１．３
０％ ＴＬＣ Ｒｆ：０．２９ ＨＰＬＣ Ｒｔ：３．０６分 なお、上記目的物質は、その分解物の核磁気共鳴スペク
トルから計算して約７０％のＭＧ２９９Ａおよび約３０
％のＭＧ２９９Ｂを含有する。
【００２１】実施例１ 培地１ｌ当たり、デキストリン２０ｇ、綿実粉２５ｇ、
ポリペプトン５ｇ、イーストエキス２．５ｇ、硫酸第一
鉄７水和物４０ｍｇ、塩化コバルト６水和物２ｍｇ、炭
酸カルシウム１ｇからなる液体培地に、５Ｎ苛性ソーダ
水溶液を滴下してｐＨ７．５に調整した。この培地５０
ｍｌを５００ｍｌ容三角フラスコに分注し、１２０℃で
２０分間蒸気滅菌した。この培地にミクロモノスポラ
グリセオルビダ Ａ１１７２５の凍結菌を１ｍｌ植付け
２２０ｒｐｍの回転振盪機上で４２時間培養し、種培養
液とした。培地１ｌ当たり、デキストリン９０ｇ、綿実
粉２５ｇ、脱脂小麦胚芽５ｇ、乾燥酵母１ｇ、炭酸カル
シウム５ｇ、リン酸２カリウム１．５ｇ、硫酸マグネシ
ウム７水和物１ｇ、硫酸第一鉄７水和物４０ｍｇ、塩化
コバルト６水和物２ｍｇからなる液体培地に、５Ｎ苛性
ソーダ水溶液を滴下してｐＨ７．２に調製した。次にこ
の培地１５ｍｌづつを１５０ｍｌ容三角フラスコに分注
し、１２０℃で２０分間蒸気滅菌した。この培地にミク
ロモノスポラ グリセオルビダ Ａ１１７２５の種培養
液を１．５ｍｌ移植し、２２０ｒｐｍの回転振盪機上で
３０℃４日間培養を行なった。そして参考例で調製した
ＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物（ＭＧ２９９
Ａ約７０％、ＭＧ２９９Ｂ約３０％）の水溶液またはＭ
Ｇ２９９Ｂの水溶液を表２に示す濃度になるように添加
し、さらに４日間培養を継続した。ＭＧ２９９Ｂは、参
考例に記載により調製したＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９
９Ｂの混合物から、特公昭５７−２００３８０号公報の
方法に従って合成した。このＭＧ２９９Ｂと、ＭＧ２９
９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物を、それぞれ水に溶か
し１００ｍｇ／ｍｌの濃度にし、５Ｎ苛性ソーダ水溶液
を滴下しｐＨを７．３に調整し１２０℃で２０分間蒸気
滅菌した。培養液中のマイシナミシン各成分は、ＨＰＬ
Ｃによって定量した。ＨＰＬＣの測定条件は次の如くで
ある。 カラム：内径４ｍｍ×１５０ｍｍ 充填剤：ＹＭＣ−ＧＥＬ ＯＤＳ Ｓ−５ ＡＭタイプ
（ＹＭＣ社製） 溶媒系：０．１Ｍリン酸緩衝液：メタノール：アセトニ
トリル（５０：３１：１４） 流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ この結果を表２に示す。
ポリペプトン５ｇ、イーストエキス２．５ｇ、硫酸第一
鉄７水和物４０ｍｇ、塩化コバルト６水和物２ｍｇ、炭
酸カルシウム１ｇからなる液体培地に、５Ｎ苛性ソーダ
水溶液を滴下してｐＨ７．５に調整した。この培地５０
ｍｌを５００ｍｌ容三角フラスコに分注し、１２０℃で
２０分間蒸気滅菌した。この培地にミクロモノスポラ
グリセオルビダ Ａ１１７２５の凍結菌を１ｍｌ植付け
２２０ｒｐｍの回転振盪機上で４２時間培養し、種培養
液とした。培地１ｌ当たり、デキストリン９０ｇ、綿実
粉２５ｇ、脱脂小麦胚芽５ｇ、乾燥酵母１ｇ、炭酸カル
シウム５ｇ、リン酸２カリウム１．５ｇ、硫酸マグネシ
ウム７水和物１ｇ、硫酸第一鉄７水和物４０ｍｇ、塩化
コバルト６水和物２ｍｇからなる液体培地に、５Ｎ苛性
ソーダ水溶液を滴下してｐＨ７．２に調製した。次にこ
の培地１５ｍｌづつを１５０ｍｌ容三角フラスコに分注
し、１２０℃で２０分間蒸気滅菌した。この培地にミク
ロモノスポラ グリセオルビダ Ａ１１７２５の種培養
液を１．５ｍｌ移植し、２２０ｒｐｍの回転振盪機上で
３０℃４日間培養を行なった。そして参考例で調製した
ＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物（ＭＧ２９９
Ａ約７０％、ＭＧ２９９Ｂ約３０％）の水溶液またはＭ
Ｇ２９９Ｂの水溶液を表２に示す濃度になるように添加
し、さらに４日間培養を継続した。ＭＧ２９９Ｂは、参
考例に記載により調製したＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９
９Ｂの混合物から、特公昭５７−２００３８０号公報の
方法に従って合成した。このＭＧ２９９Ｂと、ＭＧ２９
９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物を、それぞれ水に溶か
し１００ｍｇ／ｍｌの濃度にし、５Ｎ苛性ソーダ水溶液
を滴下しｐＨを７．３に調整し１２０℃で２０分間蒸気
滅菌した。培養液中のマイシナミシン各成分は、ＨＰＬ
Ｃによって定量した。ＨＰＬＣの測定条件は次の如くで
ある。 カラム：内径４ｍｍ×１５０ｍｍ 充填剤：ＹＭＣ−ＧＥＬ ＯＤＳ Ｓ−５ ＡＭタイプ
（ＹＭＣ社製） 溶媒系：０．１Ｍリン酸緩衝液：メタノール：アセトニ
トリル（５０：３１：１４） 流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ この結果を表２に示す。
【００２２】
【表２】 表２の結果によれば、ＭＧ２９９Ａおよび／またはＭ
Ｇ２９９Ｂの添加によりマイシナミシン類が顕著に増加
した。
Ｇ２９９Ｂの添加によりマイシナミシン類が顕著に増加
した。
【００２３】実施例２ 培地１ｌ当たり、デキストリン９０ｇ、綿実粉２５ｇ、
脱脂小麦胚芽５ｇ、乾燥酵母１ｇ、炭酸カルシウム５
ｇ、リン酸２カリウム１．５ｇ、硫酸マグネシウム７水
和物１ｇ、硫酸第一鉄７水和物４０ｍｇ、塩化コバルト
６水和物２ｍｇからなる液体培地に、５Ｎ苛性ソーダ水
溶液を滴下してｐＨ７．２に調製した。次にこの培地１
５ｍｌづつを１５０ｍｌ容三角フラスコに分注し、１２
０℃で２０分間蒸気滅菌した。実施例１の種培養液を
１．５ｍｌ移植し、２２０ｒｐｍの回転振盪機上で３０
℃４日間培養を行った。そして参考例にて調製したＭＧ
２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物の水溶液を表３に
示す濃度になるように添加し、さらに４日間培養を継続
した。なおＭＧ２９９４およびＭＧ２９９Ｂの混合水溶
液は、１００ｍｇ／ｍｌの濃度にし、５Ｎ苛性ソーダ水
溶液を滴下しｐＨを７．３に調整し１２０℃で２０分間
蒸気滅菌した。培養液中のマイシナミシン各成分は、実
施例１と同様にＨＰＬＣによって定量した。この結果を
表３に示す。
脱脂小麦胚芽５ｇ、乾燥酵母１ｇ、炭酸カルシウム５
ｇ、リン酸２カリウム１．５ｇ、硫酸マグネシウム７水
和物１ｇ、硫酸第一鉄７水和物４０ｍｇ、塩化コバルト
６水和物２ｍｇからなる液体培地に、５Ｎ苛性ソーダ水
溶液を滴下してｐＨ７．２に調製した。次にこの培地１
５ｍｌづつを１５０ｍｌ容三角フラスコに分注し、１２
０℃で２０分間蒸気滅菌した。実施例１の種培養液を
１．５ｍｌ移植し、２２０ｒｐｍの回転振盪機上で３０
℃４日間培養を行った。そして参考例にて調製したＭＧ
２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物の水溶液を表３に
示す濃度になるように添加し、さらに４日間培養を継続
した。なおＭＧ２９９４およびＭＧ２９９Ｂの混合水溶
液は、１００ｍｇ／ｍｌの濃度にし、５Ｎ苛性ソーダ水
溶液を滴下しｐＨを７．３に調整し１２０℃で２０分間
蒸気滅菌した。培養液中のマイシナミシン各成分は、実
施例１と同様にＨＰＬＣによって定量した。この結果を
表３に示す。
【００２４】
【表３】
【００２５】実施例３ 培地１ｌ当たり、デキストリン９０ｇ、綿実粉２５ｇ、
脱脂小麦胚芽５ｇ、乾燥酵母１ｇ、炭酸カルシウム５
ｇ、リン酸２カリウム１．５ｇ、硫酸マグネシウム７水
和物４ｇ、硫酸第一鉄７水和物４０ｍｇ、塩化コバルト
６水和物２ｍｇからなる液体培地に、５Ｎ苛性ソーダ水
溶液を滴下してｐＨ７．２に調製した。次にこの培地１
５ｍｌづつを１５０ｍｌ容三角フラスコに分注し、１２
０℃で２０分間蒸気滅菌した。この培地に実施例１で得
られたミクロモノスポラ グリセオルビダ Ａ１１７２
５の種培養液１．５ｍｌを移植し、２２０ｒｐｍの回転
振盪機上で３０℃４日間培養を行った。そして参考例に
て調製されたＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物
の水溶液を表４に示す濃度になるよう添加し、さらに４
日間培養を継続した。培養液中のマイシナミシン各成分
は、ＨＰＬＣによって定量した。この結果を表４に示
す。
脱脂小麦胚芽５ｇ、乾燥酵母１ｇ、炭酸カルシウム５
ｇ、リン酸２カリウム１．５ｇ、硫酸マグネシウム７水
和物４ｇ、硫酸第一鉄７水和物４０ｍｇ、塩化コバルト
６水和物２ｍｇからなる液体培地に、５Ｎ苛性ソーダ水
溶液を滴下してｐＨ７．２に調製した。次にこの培地１
５ｍｌづつを１５０ｍｌ容三角フラスコに分注し、１２
０℃で２０分間蒸気滅菌した。この培地に実施例１で得
られたミクロモノスポラ グリセオルビダ Ａ１１７２
５の種培養液１．５ｍｌを移植し、２２０ｒｐｍの回転
振盪機上で３０℃４日間培養を行った。そして参考例に
て調製されたＭＧ２９９ＡおよびＭＧ２９９Ｂの混合物
の水溶液を表４に示す濃度になるよう添加し、さらに４
日間培養を継続した。培養液中のマイシナミシン各成分
は、ＨＰＬＣによって定量した。この結果を表４に示
す。
【００２６】
【表４】
【００２７】なお、上記各実施例の培養液より公知の方
法によってマイシナミシン類を単離精製でき、その収量
は培養液の定量値にほぼ比例した各マイシナミシンが、
取得できた。
法によってマイシナミシン類を単離精製でき、その収量
は培養液の定量値にほぼ比例した各マイシナミシンが、
取得できた。
【００２８】
【発明の効果】本発明のドトリアコライド類を添加して
培養することによりマイシナミシン類、中でも特にマイ
シナミシンI 、II、IV、Vなどの生産性が向上した。
培養することによりマイシナミシン類、中でも特にマイ
シナミシンI 、II、IV、Vなどの生産性が向上した。
【００２９】
【図１】本発明のドトリアコライド類の赤外部吸収スペ
クトルを示す。
クトルを示す。
Claims (4)
- 【請求項１】 ＭＧ２９９Ａ物質、ＭＧ２９９Ｂ物質お
よびそれらの塩からなる群より選ばれた少なくとも１種
以上のドトリアコライド類を有効成分とするマイシナミ
シン類増産剤。 - 【請求項２】 マイシナミシン類生産菌を培地にて培養
するマイシナミシン類の製造方法において、ＭＧ２９９
Ａ物質、ＭＧ２９９Ｂ物質およびそれらの塩からなる群
より選ばれた少なくとも１種以上のドトリアコライド類
を添加することを特徴とするマイシナミシン類の製造方
法。 - 【請求項３】 マイシナミシン類生産菌が、ミクロモノ
スポラ属に属する微生物である請求項２記載の製造方
法。 - 【請求項４】 ドトリアコライド類の添加量が、培地１
ｌ当たり０．１〜２０ｇである請求項２記載の製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21289091A JPH0541996A (ja) | 1991-07-30 | 1991-07-30 | マイシナミシン類の増産剤および製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21289091A JPH0541996A (ja) | 1991-07-30 | 1991-07-30 | マイシナミシン類の増産剤および製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0541996A true JPH0541996A (ja) | 1993-02-23 |
Family
ID=16629963
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21289091A Withdrawn JPH0541996A (ja) | 1991-07-30 | 1991-07-30 | マイシナミシン類の増産剤および製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0541996A (ja) |
-
1991
- 1991-07-30 JP JP21289091A patent/JPH0541996A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 19981008 |