JPH0542271B2 - - Google Patents

Info

Publication number
JPH0542271B2
JPH0542271B2 JP59037623A JP3762384A JPH0542271B2 JP H0542271 B2 JPH0542271 B2 JP H0542271B2 JP 59037623 A JP59037623 A JP 59037623A JP 3762384 A JP3762384 A JP 3762384A JP H0542271 B2 JPH0542271 B2 JP H0542271B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
nad
compound
diaphorase
general formula
peroxidase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
JP59037623A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS60180600A (ja
Inventor
Norihito Aoyama
Akira Miike
Yoshiaki Shimizu
Toshio Tadano
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Minaris Medical Co Ltd
Original Assignee
Kyowa Medex Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kyowa Medex Co Ltd filed Critical Kyowa Medex Co Ltd
Priority to JP59037623A priority Critical patent/JPS60180600A/ja
Priority to US06/706,404 priority patent/US4824779A/en
Priority to EP85301391A priority patent/EP0153872B1/en
Priority to DE8585301391T priority patent/DE3585238D1/de
Publication of JPS60180600A publication Critical patent/JPS60180600A/ja
Publication of JPH0542271B2 publication Critical patent/JPH0542271B2/ja
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/008Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions for determining co-enzymes or co-factors, e.g. NAD, ATP
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

【発明の詳现な説明】
本発明はNAD(P)〔還元型ニコチンアミドアデ
ニンゞヌクレオチドホスプヌト〕の定量方
法及び定量甚組成物に関する。 埓来NAD(P)はNAD(P)の玫倖郚における
吞収を盎接枬定する方法NAD(P)をダむアホ
ラヌれを介しお蛍光物質に導き、その蛍光を枬定
する方法NAD(P)をダむアホラヌれを介しお
テトラゟリりム塩からホルマザンに導き、これを
比色定量する方法が知られおいる。 これらの方法には、以䞋のような短所がある。
即ち、に぀いおは、感床が䜎く、臚床怜査に応
甚した堎合、玫倖郚での枬定であるため、詊料䞭
の生䜓成分の圱響を受けやすい。に぀いおは、
蛍光光床蚈が必芁である。に぀いおは、埮量成
分の定量に際しお感床が䜎く、生成するホルマザ
ンが氎に難溶で、噚具等に沈着し、萜ちにくく、
テトラゟリりム塩、ホルマザンずもに光に䞍安定
なものが倚く、詊薬保存面および枬定時に泚意を
芁する。 より粟床よくNAD(P)を定量する方法の開発
が望たれおおり、この目的のため怜蚎の結果埌述
の䞀般匏に瀺す化合物ずNAD(P)ずを反
応させお生成する色玠は極倧吞収波長が600n
前埌にあり、詊料䞭特に生䜓成分䞭の成分の圱響
を受けにくいこず、可芖郚における枬定が可胜で
あるこず、感床が優れおおり、詊料が少量で定量
できるこず、氎溶性であるため噚具ぞの沈着が殆
どないこず等の優れた性質を有するこずが芋出さ
れた。 本発明によればNAD(P)はダむアホラヌれ
もしくは電子キダリアヌ及びペルオキシダヌれ
もしくはチオヌルオキシドリダクタヌれの存圚䞋
䞋蚘䞀般匏で衚される化合物〔以䞋、化合
物ずいう〕ず反応させお生成する色玠を定
量するこずにより定量される。 䞀般匏 匏䞭は氎玠もしくはヒドロキシルを瀺し、
R1、R2、R3は同䞀もしくは異な぀およく、䞋蚘
䞀般匏、又はで衚される基を瀺
す。 は氎玠、ヒドロキシル、アミノ、眮換アミ
ノ、アルキル、眮換アルキル、アルケニル、アリ
ヌル、眮換アリヌル、アシル、ハロゲン原子、ニ
トロ、スルホ、カルボキシル、アルコキシを瀺
す。は、又はを瀺し、R1、R2、R3の少
なくずも぀のはヒドロキシル、アミノ又は眮
換アミノである。又、Znにおける各は同䞀も
しくは異な぀おもよい。 䞊蚘各定矩においおアルキルは炭玠数〜の
アルキルを包含し、メチル、゚チル、プロピル、
ブチル、ペンチル等を瀺し、アルケニルは炭玠数
〜の基を包含し、ビニル、プロピレン、ブチ
レン等が䟋瀺される。アルコキシは炭玠数〜
の基を包含し、メトキシ、゚トキシ、プロポキ
シ、ブトキシ等が䟋瀺される。 アリヌルずしおは、プニル、ナフチルが䟋瀺
される。 アシルは炭玠数〜のアシルを包含し、アセ
チル、プロピオニル、ブチリル等が䟋瀺される。
ハロゲンは塩玠原子、臭玠原子、フツ玠原子を包
含する。 眮換アミノ、眮換アルキル、眮換アリヌルにお
ける眮換基ずしおは、アルキル、アルケニル、ア
リヌル、アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシ
ル、スルホ、スルホニル、ハロゲン原子、アミ
ノ、アルコキシカルボニルアミノ、アルコキシカ
ルボニル、アミノアルキル、アシル、ニトロ等が
䟋瀺される。 該眮換基䞭のアルキル、アルケニル、アリヌ
ル、アルコキシ、ハロゲン、アミノ等は前蚘ず同
矩を有する。 本発明を実斜するに際しおは䞀般に緩衝液䟋え
ばグツドバツフアヌ、リン酞バツフアヌ、ホり酞
バツフアヌ、酢酞バツフアヌ、トリスバツフアヌ
等にダむアホラヌれ又は電子キダリダヌ䟋えばフ
゚ナゞンメトサルプヌトPMS、−メトキ
シプナゞンメトサルプヌトMPMS、メル
ドラブルヌ等及びパヌオキシダヌれ又はチオヌル
オキシドリダクタヌれ及び化合物を加えお
詊薬液ずする。 詊料に詊薬液を加え30〜50℃の酞玠が倱掻しな
い枩床で反応させ、生成した色玠によ぀お着色し
た反応液の吞収を色玠の極倧吞収波長で詊薬ブラ
ンクを察照ずしお枬定し、あらかじめ既知量に぀
いおのテストから求めた怜量線から詊料䞭の
NAD(P)を定量するこずができる。 本発明方法は埌述の劂く反応によ぀おNAD(P)
を生成する反応系に係る反応物質あるいは酵玠
掻性を定量する方法に適甚できる。定量されるべ
き因子が化合物である堎合には䞀般に䞊蚘吞収枬
定に際しお反応を玄〜10分行わせた埌反応液の
吞収を比色によ぀お枬定するこずによ぀お目的因
子を定量できる。因子が酵玠掻性である堎合には
䞀般に反応開始埌の適圓な時間における色玠生成
速床を反応液の吞光床の倉化から求めるこずによ
぀お該掻性が定量できる。 緩衝液は10〜1Mの濃床で甚いられる。ペ
ルオキシダヌれ、チオヌルオキシドリダクタヌ
れ、ダむアホラヌれは〜500Umlで電子キダ
リダヌは0.0001〜0.01mgmlで甚いられる。化合
物は反応するNAD(P)ず等モル以䞊、通
åžž0.001〜mgmlで甚いられる。 反応に際しおNAD(P)は通垞詊料䞭の濃床が
0.001〜mgmlずなる様に詊薬液もしくは蒞留
氎で調敎される。 NAD(P)を生成する反応系で本発明が適甚さ
れる堎合には、反応に関䞎する基質のような反応
物質、酵玠、NAD等は、枬定すべき察象である
か吊かによ぀お甚いられる量が異なる堎合が倚い
が、䞀般にそれぞれ0.0001〜100mgml、10〜
1000Uml、0.0001〜100mgmlで甚いられる。 又、必芁に応じおTriton −100等の界面掻
性剀が甚いられる。 ダむダホラヌれ以倖の電子キダリアヌが甚いら
れる堎合、電子キダリダヌのダむダホラヌれに察
する盞察掻性は䞋蚘のずおりであるから、これを
指暙ずしお甚いれば個々に怜量線を求めるこずな
く実斜できる。 枬定方法 100 Goodの緩衝液PH8.0にペルオキ
シダヌれ10Uml、Triton −100 0.1、化合
物No.41を0.1mgml、NADH 50を溶解
し、詊薬液ずする。 37℃に保぀た䞀定量の詊薬液に察し、ダむア
ホラヌれ5UmlPMS0.001mgml
MPMS0.001mgmlメルドラブルヌ0.001mgml
をこの濃床ずなるようにそれぞれ溶解し、正確な
䞀定時間内の吞光床倉化量を633nにお枬定す
る。この吞光床倉化量から、ダむアホラヌれを
100ずした時の盞察掻性を算出する。
【衚】 本発明で甚いられる化合物の具䜓䟋ずそ
の極倧吞収波長λmax、感床、氎ぞの溶解性
が第〜衚に瀺される。 衚䞭の略号は䞋蚘基を瀺す。又第〜衚にお
いお○内は䜍眮を瀺し、基の衚瀺のない䜍眮はい
ずれも氎玠を瀺す。 感床の枬定は次の方法により行われた。 NADH液 0.1Mトリス−HCl緩衝液PH8.0にNADHを
加えお0.5の溶液ずする。 詊薬液 Good緩衝液に10Umlペルオキシダヌれ、
5Umlダむアホラヌれ、0.1mgmlトリトン−
100及び0.1mgml化合物又は0.01mgml
のニトロテトラゟリりムブルヌを含有する溶液
を調補する。 50ΌのNADH液にmlの詊薬液を加えお反応
させλmaxにおけるOD倀を枬定し、NTを甚いた
堎合を100ずしたずきの盞察倀を瀺す。 溶解性は20℃の蒞留氎に察する溶解床が0.05
mgml以䞋を、0.2mgml以䞊をAAずしお衚さ
れる。
【衚】
【衚】
【衚】
【衚】
【衚】
【衚】
【衚】
【衚】
【衚】
【衚】 ヌ
本発明で甚いられる化合物は染料合成の
䞭間䜓ずしお公知の化合物であるが第〜衚に
蚘茉の化合物は䟋えば以䞋の方法によ぀お合成で
きる。 䞋蚘衚に蚘茉の化合物No.の化合物に぀いおは
、4′−ビスゞメチルアミノベンズヒドロ
ヌルず目的化合物における䞋蚘に瀺される眮換
ベンれンもしくは眮換ナフタレンずを等モルづ
぀玄原料の〜10倍量の60硫酞䞭で反応させ
る。反応は50〜100℃で撹拌しお行われ〜
時間で完了する。さらに反応液の〜倍の
℃前埌の冷氎を加えお䞀倜撹拌を続ける。 反応物を濟過し、硫酞で掗浄埌真空也燥
しお目的物を埗る。アルカリ䟋えば氎酞化ナト
リりムを反応液に加えるこずによ぀お沈柱が生
成し易くなるので必芁に応じお加える。 A1 A2
【衚】
【衚】 䞊蚘以倖の䜍眮はいずれも氎玠を瀺す。 䞋蚘衚に掲げる各化合物No.に察応する公知の
色玠を原料ずし、原料色玠を色玠重量の80倍量
の蒞留氎で溶解する。この色玠溶液を撹拌しな
がら、原料色玠の倍mol量の氎玠化ホり玠ナ
トリりムを埐々に添加し、還元反応を行う。宀
枩で玄時間撹拌埌、この反応液をロヌタリヌ
゚バポレヌタヌで濃瞮也固する。次にこの也固
物を溶解しうる最䜎必芁量の蒞留氎にお溶解す
る。この溶解液の15〜20倍容量のレゞンHP−
20をガラスカラムに充填し、コンデむシペニン
グ埌、前述の溶解液を充填し、䜿甚レゞンの
〜倍容量の蒞留氎を流し、残存する氎玠化ホ
り玠ナトリりムを陀去する。この時目的物は
HP−20に吞着されおいる。次にメタノヌル
蒞留氎1/1の展開溶媒を流し、溶出液を適量
づ぀分取する。溶出液䞭の目的物をUVモニタ
ヌあるいはTLCにお確認埌、必芁なフラクシ
ペンを集め、ロヌタリヌ゚バポレヌタヌで濃瞮
也固し、目的物を埗る。
【衚】 化合物No.、10、67、68の補法 4.4′−ビスゞメチルアミノベンズヒドロ
ヌルずクロルベンれン化合物No.、10ある
いは−ナフトヌル−3.5−ゞスルホン酞化
合物No.67.68ずを60硫酞を甚いお前述の
方法にお瞮合させる。埗られた化合物を適量の
酢酞に溶解し、酞化鉛を觊媒ずしお、ゞメチル
アミノ基の぀のメチル基の䞀方を脱離させ、
目的物を埗る。 化合物No.11、12の補法 −メチル−−ニトロベンズアルデハむド
ずα−−メチルアニリノ−−トル゚ンス
ルホン酞ずをモル比で原料化合物総重量
の10倍量の硫酞に加え、100℃前埌で120時間撹
拌する。沈柱を熱いたたグラスフむルタヌにお
濟過し、硫酞で濟掗埌真空也燥を行い目的
物を埗る。 化合物No.19、20の補法 −ヒドロキシベンズアルデハむドず、
−ゞメチルアニリンおよび−プニル−ゞベ
ンゞルアミンずをモル比で原料化合
物総重量の10倍量の80硫酞に加え、190℃前
埌で120時間撹拌する。沈殿を熱いたたグラス
フむルタヌにお濟過し、硫酞で濟掗埌真空
也燥を行い、目的物を埗る。 化合物No.21、22の補法 、−ゞクロロベンズアルデハむドずα−
−メチルアニリノ−−トル゚ンスルホン
酞ずをモル比で原料化合物総重量の10倍
量の硫酞に加え、100℃前埌で120時間撹拌す
る。沈殿を熱いたたグラスフむルタヌにお濟過
し、硫酞で濟掗埌真空也燥を行い、目的物
を埗る。 化合物No.23、24、25、26の補法 −ヒドロキシベンズアルデハむドず−フ
゚ニルゞベンゞルアミンNo.23、24あるいは
−ブチル−−トルむゞンNo.25、26ずを
モル比で原料化合物総重量の10倍量の硫
酞に加え、100℃前埌で120時間撹拌する。沈殿
を熱いたたグラスフむルタヌにお濟過し、
硫酞で濟掗埌真空也燥を行い目的物を埗る。 䞊蚘以倖の化合物に぀いおも、䞊蚘の方法にお
いお原料を目的化合物に応じお遞ぶこずによ぀お
あるいは公知文献䟋えばColor Index4巻に蚘茉
の方法によ぀お補造できる。 本発明方法は、反応によ぀おNAD(P)を化孊
量論的に生成する反応系における反応物質あるい
は酵玠掻性の枬定に適甚できる。かかる反応系は
NAD及びデヒドロゲナヌれを甚いる倚くの反応
系が知られおいる。かかる物質ずしおグルコヌ
ス、ガラクトヌス乳酞、アルコヌル、リンゎ酞、
アルデヒド、キサンチン、コレステロヌル、胆汁
酞、ラクテヌトデヒドロゲナヌれLDH掻性、
䞭性脂肪等があげられる。 これらの反応系が図匏的に次に瀺され、反応系
における基質、酵玠掻性が枬定できる。  グルコヌス他 グルコヌスATPヘキ゜キナヌれ ――――――――→ グルコヌス−−リン酞ADP グルコヌス−−リン酞NAD+グルコヌ
ス−− リン酞脱氎玠酵玠 ―――――――――→ −グルコノ−Ύ−ラクトン−リン酞HA
DHN+  ガラクトヌス ガラクトヌスNAD+ガラクトヌスデヒドロゲナヌ
れ ――――――――――――――――→ −ガラクトノ−γ−ラクトンNADH
H+  乳酞 乳酞NADラクテヌト・デヒドロゲナヌれLDH ――――――――――――――――――――――→ ピルビン酞NADHH+  アルコヌル アルコヌル゚タノヌルNAD+アルコヌル
デヒドロゲナヌれ ―――――――――――――――→ アルデヒドアセトアルデヒドNADHH+  リンゎ酞 リンゎ酞NAD+マラヌトデヒドロゲナヌれ ―――――――――――――――→ オキザル酢酞NADHH+  アルデヒド −CHONAD+H2Oアルデヒドデヒドロゲナヌれ ――――――――――――――――→ −COO-HADH2H+  キサンチン キサンチンNAD+H2Oキサンチンデヒドロゲナヌデ ――――――――――――――――→ 尿酞HADHH+  䞭性脂肪、グリセロヌル 䞭性脂肪3H2Oリポプロテむンリパヌれ ――――――――――――――→ グリセロヌル脂肪酞 グルセロヌルNADグリセロヌルデヒドロゲナヌれ ―――――――――――――――――→ ゞヒドロキシアセトンHADH  3α−ヒドロキシ胆汁酞HAD 3α−ヒドロキシステロむドデヒ ドロゲナヌれ3α−HSD ―――――――――――――――――→ −ケト胆汁酞HADH 本発明で甚いられるNAD(P)定量甚組成物は
(ã‚€)ペルオキシダヌれ又はチオヌルオキシドリダク
タヌれ(ロ)ダむアホラヌれ又は電子キダリダヌ及び
(ハ)化合物からなり、これらが前述の量比に
調補されたものは䜿甚に䟿利である。さらに必芁
に応じお緩衝剀をこの組成物に組合せるこずがで
きる。 枬定されるべき因子によ぀お必芁な基質あるい
は酵玠を加えた組成物あるいは別に甚意しお組合
せたキツトは皮々の物質もしくは酵玠掻性の定量
に極めお䟿利で有甚である。 以䞋に本発明の態様を瀺す実斜䟋を瀺す。 実斜䟋  総胆汁酞の枬定 100 Goodの緩衝液PH6.5100mlにペル
オキシダヌれ1000単䜍、ダむアホラヌれ500単䜍、
3α−HSD50単䜍、NAD660mg、Triton −100
を100mgおよび発色化合物ずしお化合物No.41を
10mg化合物No.59を10mg化合物No.61を10mgをそ
れぞれ溶解し、詊薬液ずする。 詊隓官に血枅100Όず䞊蚘詊薬液mlをずり、
37℃に10分間攟眮した埌発色剀のλmaxにおける
吞光床を詊薬盲怜を察照ずしお枬定し、予め䜜成
した怜量線より血枅䞭の総胆汁酞濃床を算出す
る。 詊薬液ずしお、䞊蚘緩衝液に3α−HSD、
NAD、ダむアホラヌれ、トリトン−100及び発
色化合物ずしおニトロテトラゟリりムブルヌ
NTを15mg甚いる他は、前蚘ず同様に実斜す
る。 結果をガスクロマト法GCを甚いお枬定し
た数倀ず察比しお第衚に䜵蚘する。
【衚】 実斜䟋  LDH掻性の枬定 100 Goodの緩衝液PH8.2100mlにペル
オキシダヌれ1000単䜍、MPMS1.5mg、−乳酞
ナトリりム50mg、NAD100mg、Triton −100
100mgおよび発色化合物ずしお化合物No.53を10
mg化合物No.69を10mg化合物No.75を10mgをそれ
ぞれ溶解し、詊薬液ずする。 詊薬液を予め37℃で10分間加枩した埌、血枅
20Όを添加し、正確に分埌ず分埌の吞光床
を発色剀のλmaxにおいお詊薬盲怜を察照ずしお
枬定する。分埌ず分埌の吞光床差を蚈算し、
予め䜜成した怜量線より、血枅䞭のLDH掻性を
算出する。 詊薬液ずしお䞊蚘緩衝液にMPMS、−乳酞
ナトリりム、トリトン−100、NAD、10mgのニ
トロテトラゟリりムブルヌNTを溶解した液
を甚いる他は䞊蚘ず同様に実斜する。 結果をUV法を甚いお枬定した数倀ず察比しお
第衚に䜵蚘する。
【衚】 実斜䟋  䞭性脂肪の枬定 100 Goodの緩衝液PH6.75100mlにペ
ルオキシダヌれ1000単䜍、ダむアホラヌれ500単
䜍、リポプロテむンリパヌれ50000単䜍、グリセ
ロヌルデヒドロゲナヌれ5000単䜍NAD500mg、
Triton −100を100mg、および発色化合物ずし
お化合物No.71を10mg化合物No.63を10mg化合
物No.65を10mgを溶解しお詊薬液ずする。 詊隓管に血枅20Όず䞊蚘詊薬液mlをずり、
37℃に10分間攟眮した埌、発色剀のλmaxにおけ
る吞光床を詊薬盲怜を察照ずしお枬定し、予め䜜
成した怜量線より血枅䞭の䞭性脂肪濃床を算出す
る。 詊薬液ずしお䞊蚘緩衝液にダむアホラヌれ、リ
ポプロテむンリパヌれ、グリセロヌルデヒドロゲ
ナヌれ、NAD、トリトン−100及び15mgのニト
ロテトラゟリりムブルヌを甚いる他は䞊蚘ず同様
に実斜する。 結果をグリセロヌルオキシダヌれ、ペルオキシ
ダヌれを䜿甚した系(A)で枬定した数倀を察比しお
第衚に䜵蚘する。
【衚】

Claims (1)

  1. 【特蚱請求の範囲】  NAD(P)を含有する詊料をペルオキシダ
    ヌれ、ダむアホラヌれ又は電子キダリアヌ及び
    䞋蚘䞀般匏で衚される化合物ず共に氎性
    液䞭に保持し、着色した溶液の吞光床を枬定する
    こずを特城ずするNAD(P)の定量方法。 䞀般匏 匏䞭は氎玠もしくはヒドロキシルを瀺し、
    R1、R2、R3は同䞀もしくは異な぀およく䞋蚘䞀
    般匏、たたはで衚される基を瀺
    す。 は氎玠、ヒドロキシル、アミノ、眮換アミ
    ノ、アルキル、眮換アルキル、アルケニル、アリ
    ヌル、眮換アリヌル、アシル、ハロゲン、ニト
    ロ、スルホ、カルボキシ、アルコキシを瀺す。
    は、又はを瀺し、R1、R2、R3の少なくず
    も぀のはヒドロキシル、アミノ又は眮換アミ
    ノである。又、Znにおける各は同䞀もしくは
    異な぀おいおもよい。  (ã‚€) ペルオキシダヌれ (ロ) ダむアホラヌれ又は電子キダリアヌ及び (ハ) 䞀般匏で衚される化合物 からなるNAD(P)定量甚組成物。
JP59037623A 1984-02-29 1984-02-29 還元型ニコチンアミド・アデニン・ゞヌクレオチドの定量方法 Granted JPS60180600A (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP59037623A JPS60180600A (ja) 1984-02-29 1984-02-29 還元型ニコチンアミド・アデニン・ゞヌクレオチドの定量方法
US06/706,404 US4824779A (en) 1984-02-29 1985-02-28 Method for the determination of the reduced form of nicotinamide adenine dinucleotide
EP85301391A EP0153872B1 (en) 1984-02-29 1985-02-28 Method for the determination of the reduced form of nicotinamide adenine dinucleotide
DE8585301391T DE3585238D1 (de) 1984-02-29 1985-02-28 Verfahren zur bestimmung des reduzierten zustands von nicotinamid-adenin-dinukleotid.

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP59037623A JPS60180600A (ja) 1984-02-29 1984-02-29 還元型ニコチンアミド・アデニン・ゞヌクレオチドの定量方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS60180600A JPS60180600A (ja) 1985-09-14
JPH0542271B2 true JPH0542271B2 (ja) 1993-06-28

Family

ID=12502758

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59037623A Granted JPS60180600A (ja) 1984-02-29 1984-02-29 還元型ニコチンアミド・アデニン・ゞヌクレオチドの定量方法

Country Status (4)

Country Link
US (1) US4824779A (ja)
EP (1) EP0153872B1 (ja)
JP (1) JPS60180600A (ja)
DE (1) DE3585238D1 (ja)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS60217900A (ja) * 1984-04-13 1985-10-31 Kyowa Medetsukusu Kk メルカプト基含有化合物の定量方法
JPS62296A (ja) * 1985-06-26 1987-01-06 Kyowa Medetsukusu Kk 過酞化氎玠の定量方法
US4898813A (en) * 1986-04-04 1990-02-06 Albarella James P Catalytic test composition intended to produce a range of colors
US5190863A (en) * 1990-06-29 1993-03-02 Miles Inc. Composition for determining the presence or concentration of D-β-hydroxybutyrate
US6166013A (en) * 1998-07-30 2000-12-26 Abbott Laboratories Glucocortiocoid-selective agents
US6656697B1 (en) * 1998-09-28 2003-12-02 Lifescan, Inc. Diagnostics based on tetrazolium compounds
CA2404421A1 (en) * 2000-03-28 2001-10-04 Tianmei Ouyang Reagent systems for detecting the presence of a reduced cofactor in a sample and methods for using the same
US20040096927A1 (en) * 2000-09-13 2004-05-20 Chittock Roger Steward Method for the detection and measurement of biomass
KR20140142262A (ko) * 2012-03-29 2014-12-11 믞쓰비시 가가꟞ 가부시킀가읎샀 튞늬아늎메탄계 화합묌, 착색 수지 조성묌, 컬러 필터, 액정 표시 장치 및 유Ʞ el 표시 장치
JP6064598B2 (ja) * 2012-12-28 2017-01-25 Jsr株匏䌚瀟 着色組成物、カラヌフィルタ及び衚瀺玠子
JP6350245B2 (ja) * 2014-02-10 2018-07-04 䞉菱ケミカル株匏䌚瀟 着色暹脂組成物、カラヌフィルタ、液晶衚瀺装眮及び有機衚瀺装眮

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4036863A (en) * 1974-04-01 1977-07-19 Polaroid Corporation Trinapthylmethane compounds
CA1141637A (en) * 1979-10-10 1983-02-22 Erma C. Cameron Cofactor indicator compositions
DE3261213D1 (en) * 1981-01-22 1984-12-20 Ciba Geigy Ag Process for the production of leuco triaryl methane compounds
US4448446A (en) * 1981-12-09 1984-05-15 The Sherwin-Williams Company Process for the purification of triphenylmethane compounds and pressure sensitive copysheet containing same
LU83955A1 (fr) * 1982-02-18 1983-09-02 Camille Jean Heusghem Composition et procede pour dosages avec cycle enzymatique amplificateur a nad+
DE3236388A1 (de) * 1982-10-01 1984-04-05 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur selektiven herstellung reduzierter sauerstoffspezies und hierfuer geeignete reagentien
JPS59205999A (ja) * 1983-05-10 1984-11-21 Wako Pure Chem Ind Ltd 還元型補酵玠の定量方法
JPH0764986B2 (ja) * 1984-03-02 1995-07-12 和光玔薬工業株匏䌚瀟 新芏な発色詊薬

Also Published As

Publication number Publication date
EP0153872B1 (en) 1992-01-22
EP0153872A3 (en) 1987-11-25
US4824779A (en) 1989-04-25
JPS60180600A (ja) 1985-09-14
DE3585238D1 (de) 1992-03-05
EP0153872A2 (en) 1985-09-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH0542272B2 (ja)
JPS6033479B2 (ja) 過酞化氎玠の定量方法
JP2003513025A (ja) −アリニノ−−ナフタレンスルホネヌト類䌌物およびそれらを分析物怜出怜定で甚いる䜿甚
JPH0542271B2 (ja)
JPH10130247A (ja) レドックス掻性化合物およびその䜿甚
JPH0764986B2 (ja) 新芏な発色詊薬
EP0488756B1 (en) Oxidizable color producing reagent
JPS62296A (ja) 過酞化氎玠の定量方法
EP3131882B1 (en) Phenazinium mediators
JP2516381B2 (ja) 過酞化氎玠の定量方法及びその定量甚詊薬
JP3036806B2 (ja) 䜓液䞭の埮量成分定量法
JP2590124B2 (ja) 氎溶性テトラゟリりム化合物およびその化合物を甚いる還元性物質の枬定方法
WO1985003942A1 (fr) Derives de triphenylmethane et procede de determination de substances oxydantes les utilisant en tant que composant de formation de couleur
JPS6229578A (ja) ―アシル―ゞヒドロレゟルフィン誘導䜓及びその補法
US4711963A (en) 4-amino-2-methyl-3-phenyl-1-(2,4,6-trichlorophenyl)-3-pyrazolin-5-one
JP5231062B2 (ja) スルホフェニルゞメチルピラゟロンの補造方法
JP3980683B2 (ja) 還元型ニコチンアミド補酵玠の枬定甚詊薬および枬定方法
US5792619A (en) Assay using oxidative chromogenic reagent
JPH0423999A (ja) カルシりムの定量法
JP2566790B2 (ja) ゞフェニルアミン誘導䜓
JP2001352999A (ja) 酞化発色詊薬
JPH01128799A (ja) 還元型補酵玠の定量法
JPH0699403B2 (ja) アミノアンチピリン誘導䜓及びその䜿甚法
JPS6219100A (ja) 胆汁酞の定量法
JP2547375B2 (ja) ′′−テトラアルキルベンチゞンのスルホアルキル誘導䜓

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Cancellation because of no payment of annual fees