JPH0542625B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0542625B2 JPH0542625B2 JP59148978A JP14897884A JPH0542625B2 JP H0542625 B2 JPH0542625 B2 JP H0542625B2 JP 59148978 A JP59148978 A JP 59148978A JP 14897884 A JP14897884 A JP 14897884A JP H0542625 B2 JPH0542625 B2 JP H0542625B2
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- JP
- Japan
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- dimensional
- staining
- gel
- electrophoresis
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44756—Apparatus specially adapted therefor
- G01N27/44773—Multi-stage electrophoresis, e.g. two-dimensional electrophoresis
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- Health & Medical Sciences (AREA)
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- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
(イ) 産業上の利用分野
この発明は二次元電気泳動装置に関し、詳しく
は被検対象の定量精度を向上できる二次元電気泳
動装置に関する。
は被検対象の定量精度を向上できる二次元電気泳
動装置に関する。
(ロ) 従来技術
従来の二次元電気泳動装置における試料中の被
検対象の重量測定は、二次元目の電気泳動終了後
にその平板ゲル内に分離された被検対象の泳動ス
ポツトを銀染色法、クマレーブルー法などで染色
して、その染色度の濃淡を光学的、例えば吸光法
により計測することによつて得られた光学情報を
コンピユータで量の情報に演算して行なつてい
た。
検対象の重量測定は、二次元目の電気泳動終了後
にその平板ゲル内に分離された被検対象の泳動ス
ポツトを銀染色法、クマレーブルー法などで染色
して、その染色度の濃淡を光学的、例えば吸光法
により計測することによつて得られた光学情報を
コンピユータで量の情報に演算して行なつてい
た。
しかし、この方法では、被検試料のロツト毎
に、被検対象の泳動スポツトの染色濃度が相違し
たり、また、二次元目のゲル、染色試薬、染色時
の温度などが変わると上記の泳動スポツトの重量
が同じでもその染色濃度が異なつたりして、各泳
動スポツトの定量精度が低下していた。
に、被検対象の泳動スポツトの染色濃度が相違し
たり、また、二次元目のゲル、染色試薬、染色時
の温度などが変わると上記の泳動スポツトの重量
が同じでもその染色濃度が異なつたりして、各泳
動スポツトの定量精度が低下していた。
(ハ) 目的
この発明は以上の事情に鑑みなされたもので、
その主要な目的の１つは、二次元目の電気泳動終
了後の平板ゲル内に被検対象と同じで重量既知の
比較試料を添加しておいて、比較試料の染色濃度
と重量との検量線を二次元目のゲル毎に作成し
て、被検試料のロツト毎に染色濃度が相違しても
被検対象の各泳動スポツトを高精度に定量測定で
きるようにすることにある。
その主要な目的の１つは、二次元目の電気泳動終
了後の平板ゲル内に被検対象と同じで重量既知の
比較試料を添加しておいて、比較試料の染色濃度
と重量との検量線を二次元目のゲル毎に作成し
て、被検試料のロツト毎に染色濃度が相違しても
被検対象の各泳動スポツトを高精度に定量測定で
きるようにすることにある。
(ニ) 構成
この発明は、二次元目のゲル、一次元目の電気
泳動終了後の被検試料の被検対象を前記ゲルの二
次元目の方向へ泳動分離する二次元目の泳動分離
手段、前記被検対象と同じでかつ重量既知で異な
る重量の複数の比較試料を二次元目のゲルに二次
元目の泳動分離終了後にその二次元目の分離方向
又は一次元目の分離方向のいずれか一方又は両方
に向けてスポツト状に添加する添加手段、これら
の比較試料及び被検対象を染色しこれら両者の染
色濃度を計測する染色度計測手段、この染色度計
測手段から出力される染色度信号に基づいて各比
較試料の重量と染色濃度との検量線を作成し記憶
する作成記憶手段、及びこの作成記憶手段から出
力される記憶信号に基づいて被検対象の各泳動ス
ポツトの重量を演算する演算手段を備えてなる二
次元電気泳動装置である。
泳動終了後の被検試料の被検対象を前記ゲルの二
次元目の方向へ泳動分離する二次元目の泳動分離
手段、前記被検対象と同じでかつ重量既知で異な
る重量の複数の比較試料を二次元目のゲルに二次
元目の泳動分離終了後にその二次元目の分離方向
又は一次元目の分離方向のいずれか一方又は両方
に向けてスポツト状に添加する添加手段、これら
の比較試料及び被検対象を染色しこれら両者の染
色濃度を計測する染色度計測手段、この染色度計
測手段から出力される染色度信号に基づいて各比
較試料の重量と染色濃度との検量線を作成し記憶
する作成記憶手段、及びこの作成記憶手段から出
力される記憶信号に基づいて被検対象の各泳動ス
ポツトの重量を演算する演算手段を備えてなる二
次元電気泳動装置である。
(ホ) 実施例
以下図に示す実施例に基づいてこの発明を詳述
する。なお、これによつてこの発明が限定される
ものではない。
する。なお、これによつてこの発明が限定される
ものではない。
第１図において二次元電気泳動装置１は、作成
記憶手段２、演算手段３及び添加手段４とから主
として構成される。
記憶手段２、演算手段３及び添加手段４とから主
として構成される。
作成記憶手段２及び演算手段３はマイクロコン
ピユータＣからなり、二次元目の長方板ゲル５の
上方から発光され、そのゲル５内の後述する染色
後の試料６，７を透過した測光８を受光してそれ
らの試料の染色濃度を計測する染色度計測手段９
に電気的に接続されている。この計測手段は発光
部（図示省略）、受光部１０及び測光信号処理部
１１からなるデンシトメータで構成されている。
ピユータＣからなり、二次元目の長方板ゲル５の
上方から発光され、そのゲル５内の後述する染色
後の試料６，７を透過した測光８を受光してそれ
らの試料の染色濃度を計測する染色度計測手段９
に電気的に接続されている。この計測手段は発光
部（図示省略）、受光部１０及び測光信号処理部
１１からなるデンシトメータで構成されている。
作成記憶手段２は前記計測手段９から出力され
る染色度信号に基づいて前記試料６，７のうち重
量既知の比較試料６の重量と染色濃度との検量線
を作成するよう構成されている。一方、演算手段
３は、作成記憶手段２から出力される記憶信号及
び前記染色度信号に基づいて前記試料６，７のう
ち重量未知の被検試料７の重量を演算するよう構
成されている。
る染色度信号に基づいて前記試料６，７のうち重
量既知の比較試料６の重量と染色濃度との検量線
を作成するよう構成されている。一方、演算手段
３は、作成記憶手段２から出力される記憶信号及
び前記染色度信号に基づいて前記試料６，７のう
ち重量未知の被検試料７の重量を演算するよう構
成されている。
添加手段４は、ピベツト、シリンジなどで構成
されている。
されている。
次に上記装置において、被検試料７中の被検対
象、例えば血清中の蛋白質の重量を定量測定する
方法を説明する。
象、例えば血清中の蛋白質の重量を定量測定する
方法を説明する。
まず、第２図に示すように、二次元目の電気泳
動終了後のゲル５内に、被検対象と同じで重量既
知の複数の比較試料６をスポツト状に添加する。
これらの比較試料６はそれらの重量がそれぞれ異
なり、例えば10-10g〜10-6gのものが用いられ、
重い順に二次元目ゲル５の分子量レベル方向（二
次元方向）に向かつて並べられている。そして、
二次元目ゲル５内に分離された被検対象の各泳動
スポツト１２と各比較試料６とを同時に銀染色し
てこれらの両者の染色濃度を計測する。次いで、
比較試料６のみについてその重量が軽い方から重
い方に向かつてその染色濃度が比例して薄くなる
検量線Ａを作成する（第３図参照）。そして、被
検対象の各泳動スポツト１２の染色濃度に対応す
る染色濃度を検量線Ａ上にとり、これに対応する
重量を演算測定する。
動終了後のゲル５内に、被検対象と同じで重量既
知の複数の比較試料６をスポツト状に添加する。
これらの比較試料６はそれらの重量がそれぞれ異
なり、例えば10-10g〜10-6gのものが用いられ、
重い順に二次元目ゲル５の分子量レベル方向（二
次元方向）に向かつて並べられている。そして、
二次元目ゲル５内に分離された被検対象の各泳動
スポツト１２と各比較試料６とを同時に銀染色し
てこれらの両者の染色濃度を計測する。次いで、
比較試料６のみについてその重量が軽い方から重
い方に向かつてその染色濃度が比例して薄くなる
検量線Ａを作成する（第３図参照）。そして、被
検対象の各泳動スポツト１２の染色濃度に対応す
る染色濃度を検量線Ａ上にとり、これに対応する
重量を演算測定する。
また、二次元目のゲル５の荷電量レベル方向
（一次元方向）に前記の比較試料６を第２図のご
とく添加してもよい。この場合、第３図の破線の
ように検量線Ｂを上記と同様に作成して被検対象
の重量を測定する。
（一次元方向）に前記の比較試料６を第２図のご
とく添加してもよい。この場合、第３図の破線の
ように検量線Ｂを上記と同様に作成して被検対象
の重量を測定する。
さらに、比較試料６を添加する位置によつて検
量線の勾配が変わることが考えられる場合は、比
較試料６を第２図のごとく二次元目のゲル５の周
縁近傍ではなく、ゲル５の一次元方向及び二次元
方向における被検対象の各泳動スポツト１２の近
傍にそれぞれ添加して行つてもよい。
量線の勾配が変わることが考えられる場合は、比
較試料６を第２図のごとく二次元目のゲル５の周
縁近傍ではなく、ゲル５の一次元方向及び二次元
方向における被検対象の各泳動スポツト１２の近
傍にそれぞれ添加して行つてもよい。
以上のような比較試料を用いて二次元目のゲル
交換毎に検量線を作成して、被検対象の各泳動ス
ポツトを定量測定することによつて、染色濃度が
被検試料のロツト毎に相違しても、また、二次元
目のゲル、染色時の温度、染色試薬などが変化し
ても、同一条件で染色濃度を計測できるため、被
検対象の各泳動スポツトの定量精度を向上させる
ことができる。
交換毎に検量線を作成して、被検対象の各泳動ス
ポツトを定量測定することによつて、染色濃度が
被検試料のロツト毎に相違しても、また、二次元
目のゲル、染色時の温度、染色試薬などが変化し
ても、同一条件で染色濃度を計測できるため、被
検対象の各泳動スポツトの定量精度を向上させる
ことができる。
(ヘ) 効果
この発明は二次元目の平板ゲルにその一次元方
向又は二次元方向に向けて重量既知の複数の比較
試料を添加し、これらの比較試料の重量と染色濃
度との検量線を作成し、この検量線に基づいて被
検対象の各泳動スポツトの重量を演算したもので
あるから、被検試料ロツト間の染色濃度が相違し
ても被検対象の各泳動スポツトを高精度に定量測
定でき、しかも二次元目のゲル、染色試薬、染色
時の温度などが変わつても同精度で各泳動スポツ
トを定量測定できる。
向又は二次元方向に向けて重量既知の複数の比較
試料を添加し、これらの比較試料の重量と染色濃
度との検量線を作成し、この検量線に基づいて被
検対象の各泳動スポツトの重量を演算したもので
あるから、被検試料ロツト間の染色濃度が相違し
ても被検対象の各泳動スポツトを高精度に定量測
定でき、しかも二次元目のゲル、染色試薬、染色
時の温度などが変わつても同精度で各泳動スポツ
トを定量測定できる。
第１図はこの発明に係る二次元電気泳動装置の
一実施例を示す要部構成説明図、第２図はこの比
較試料添加状態を示す二次元目のゲル斜視図、第
３図はこの検量線グラフである。 １……二次元電気泳動装置、２……作成記憶手
段、３……演算手段、４……添加手段、５……二
次元目のゲル、６……比較試料、７……被検試
料、９……染色度計測手段、１２……被検対象の
泳動スポツト、Ａ，Ｂ……検量線。
一実施例を示す要部構成説明図、第２図はこの比
較試料添加状態を示す二次元目のゲル斜視図、第
３図はこの検量線グラフである。 １……二次元電気泳動装置、２……作成記憶手
段、３……演算手段、４……添加手段、５……二
次元目のゲル、６……比較試料、７……被検試
料、９……染色度計測手段、１２……被検対象の
泳動スポツト、Ａ，Ｂ……検量線。
Claims (1)
- １ 二次元目のゲル、一次元目の電気泳動終了後
の被検試料の被検対象を前記ゲルの二次元目の方
向へ泳動分離する二次元目の泳動分離手段、前記
被検対象と同じでかつ重量既知で異なる重量の複
数の比較試料を二次元目のゲルに二次元目の泳動
分離終了後にその二次元目の分離方向又は一次元
目の分離方向のいずれか一方又は両方に向けてス
ポツト状に添加する添加手段、これらの比較試料
及び被検対象を染色しこれら両者の染色濃度を計
測する染色度計測手段、この染色度計測手段から
出力される染色度信号に基づいて各比較試料の重
量と染色濃度との検量線を作成し記憶する作成記
憶手段、及びこの作成記憶手段から出力される記
憶信号に基づいて被検対象の各泳動スポツトの重
量を演算する演算手段を備えてなる二次元電気泳
動装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59148978A JPS6126848A (ja) | 1984-07-17 | 1984-07-17 | 二次元電気泳動装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59148978A JPS6126848A (ja) | 1984-07-17 | 1984-07-17 | 二次元電気泳動装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6126848A JPS6126848A (ja) | 1986-02-06 |
| JPH0542625B2 true JPH0542625B2 (ja) | 1993-06-29 |
Family
ID=15464939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59148978A Granted JPS6126848A (ja) | 1984-07-17 | 1984-07-17 | 二次元電気泳動装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6126848A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0830595A1 (en) | 1995-06-08 | 1998-03-25 | Visible Genetics Inc. | Microelectrophoresis chip for moving and separating nucleic acids and other charged molecules |
-
1984
- 1984-07-17 JP JP59148978A patent/JPS6126848A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6126848A (ja) | 1986-02-06 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |