JPH0543479A - 肝炎治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を有
するポリペプチドを肝炎に対する治療剤として提供する
ものである。 【構成】 マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を有
するポリペプチドを有効成分とする肝炎治療剤である。 【効果】 マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を有
するポリペプチドが肝炎における肝臓障害の指標となる
各種肝逸脱酵素値の上昇を有効に改善せしめて肝炎を治
療ないし肝臓障害を予防し得ることを示しており、かつ
マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を有するポリペ
プチドが低毒性であることからも、予防の範囲を含むよ
うな肝臓障害治療剤が得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、マクロフアージ・コロ
ニー刺激因子活性を有するポリペプチドを有効成分とす
る肝炎治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】肝臓は、血漿タンパク質の合成・分泌、
糖新生、グリコーゲン代謝による血糖調節、脂質合成、
胆汁合成・分泌、解毒など生体の恒常性維持に欠かせな
い多様な代謝機能を担つている肝実細胞と、それ以外の
肝非実質細胞が７：３の割合で存在している臓器であ
る。

【０００３】肝非実質細胞には、ビタミンＡの貯蔵・輸
送に関与する伊東細胞や、抗原性物質・免疫複合体など
の捕食処理を行うクツパー細胞、同様の捕食機能を持
ち、類洞腔全周を取り囲む内皮細胞などが挙げられる。
これら肝非実質細胞は解剖学的ににも肝実質細胞に近接
した位置にあり、各細胞間においては密接な相互作用が
存在し、病理学的検知からもその相互作用が指摘されて
いる。

【０００４】特に、肝炎発症時にはクツパー細胞や多形
核白血球の、炎症部位への浸潤が観察され、また肝繊維
化の過程では伊東細胞や内皮細胞によるコラーゲン線維
の合成が著しく亢進している。また広範囲に及ぶ外科的
肝切除術では術後、肝非実質細胞障害に起因すると考え
られる肝不全、腎不全、呼吸不全、消化管出血などが併
発しやすい。

【０００５】こうした肝炎に対する治療手段としては、
一般に、特殊組成アミノ酸輸液、抗生物質、アンモニア
代謝改善薬、コルチコステロイド、ドーパミン投与など
による対症療法が主流であり、最近、重症な肝炎に対し
ては肝再生促進を目的としてグルカゴン・インスリン投
与なども行われている他、非特異的網内系賦活因子とし
てポリミキシン・Ｂなどの非吸収性抗生剤や、ＯＫ−４
３２などのグラム陰性菌由来物質の効果が検討されてい
る。

【０００６】一方、マクロフアージ・コロニー刺激性因
子活性を持つポリペプチドとしてはヒト骨髄中で単球・
マクロフアージの前駆細胞であるＣＦＵ−Ｍ（ｃｏｌｏ
ｎｙｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ−ｍａｃｒｏｐｈａｇ
ｅ）から成熟した単球やマクロフアージが産生される時
に必要なポリペプチドとして理解されている（Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，４２，２５３−２８４
（１９８１））。

【０００７】マクロフアージ・コロニー刺激因子は、種
々の生理作用を有することが多数報告されている。例え
ば、造血刺激作用〔Ｂｌｏｏｄ，７１，４１−４５（１
９８８）〕、骨髄移植成功率上昇作用〔臨床科学、２
６，１５６−１６２（１９９０）〕、

【０００８】また成熟したマクロフアージに対しても、
顆粒球・マクロフアージ・コロニー刺激因子を始めとす
る各種サイトカインの合成・分泌、貧食質・脂質代謝な
どの機能を亢進させる活性を持つ。これらのことから、
マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を持つポリペプ
チドは汎性血球減少症や癌化学療法後の血球減少症の改
善剤、血中コレステロール低下剤としての適応が検討さ
れている。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、マクロ
フアージ・コロニー刺激因子活性を有するポリペプチド
が、肝炎治療剤となることを示す報告は全く見当たらな
いものであり、本発明は該活性物質を肝炎に対する治療
剤として提供することにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】肝炎は、発症原因として
Ａ型、Ｂ型などの肝炎ウイルス、アルコール、代謝障
害、その他化学薬剤などに基づく症状が知られており、
また症状の経過から急性、慢性、肝硬変などに分類さ
れ、症状が最も進行した場合が肝硬変と呼ばれている。

【００１１】本発明者らは、組織病理的にヒトのウイル
ス性肝炎に類似するとされるＤ−ガラクトサミン肝炎、
ヒトのアルコール性肝炎のモデルとされるエタノール・
硫酸ヒドラン肝炎、更にヒト肝硬変のモデルとされる四
塩化炭素肝炎を典型的な肝炎モデルとして選択し、マク
ロフアージ・コロニー刺激因子活性を有するポリペプチ
ドを、これら肝炎モデル動物に投与したところ、肝障害
の指標となる血清中肝逸脱酵素値の改善を認めた。

【００１２】本発明は、上記の知見に基づいてなされた
もので、マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を有す
るポリペプチドを有効成分とする肝炎治療剤である。

【００１３】本発明によるマクロフアージ・コロニー刺
激因子活性を有するポリペプチドとしては、ヒト骨髄中
で単球・マクロフアージの前駆細胞であるＣＦＵ−Ｍ
（ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ−ｍａｃｒ
ｏｐｈａｇｅ）から成熟した単球や、マクロフアージが
産生されるときに必要なポリペプチドとして定義される
（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，４２，２５３
−２８４（１９８１）。

【００１４】当該ポリペプチドは、マクロフアージ・コ
ロニー刺激因子活性を有するポリペチドであればいずれ
でもよく、天然由来の抽出、精製によつて得られたポリ
ペチドであつてもよく、

【００１５】またこのような天然由来のポリペプチドを
化学的合成または遺伝子操作の手段を利用して得られた
ポリペプチドでもよく、更に天然由来のポリペプチドを
化学的合成または遺伝子操作の手段を利用して本来のマ
クロフアージ・コロニー刺激因子活性を維持し、かつ構
成ペプチドの一部を変換せしめた誘導体であつてもよ
い。

【００１６】このようなマクロフアージ・コロニー刺激
因子活性を有するポリペプチドとしては、例えば天然由
来のポリペプチドとしてヒト尿より、Ｂｌｏｏｄ，５
８，６３０−６４１（１９８１）、Ｂｌｏｏｄ，５２，
１０１２−１０２０（１９７８）、特開平１−２２８９
９号、特開平２−２３９１号に記載されている方法や、

【００１７】サイトテクノロジー（Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ）５巻、サプリメント２（ｓｕｐｐｌｅｍｅ
ｎｔ−２），９５−１１４（１９９１）、特開平３−４
７０７３号等に記載された細胞大量培養法による方法で
分子量４００００〜６００００のものや、７００００〜
９００００のものの当該ポリペプチドが挙げられる。

【００１８】また、マクロフアージ・コロニー刺激因子
活性を有するポリペプチドのＤＮＡを適当な発現プラス
ミドに組み替えた後、大腸菌や酵母などの微生物、もし
くはヒト、囓歯類など哺乳類由来の細胞に形質転換せし
め、これらの細胞を培養して目的とする当該ポリペプチ
ドを得てもよく、特表昭６２−５０１６０７号、特表平
１−５０１２８３号、特表平１−５０２３９７号などに
記載の遺伝子操作によって得たものでもよい。

【００１９】そして分子量４００００〜６００００の当
該ポリペプチドを取得する方法として、サイトテクノロ
ジー（Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）５巻、サプリメ
ント２（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ−２），９５−１１４
（１９９１）に、記載された方法を用いることができ
る。

【００２０】更に、取得した当該ポリペプチドは適宜公
知の手段によりデキストラン、ポエチレングリコール、
ゼラチンなどの高分子キヤリアと結合させた修飾体（特
開昭６２−２３０７２９号、特開平２−２７５９００号
等）として用いてもよい。

【００２１】このようにして得られ精製されたマクロフ
アージ・コロニー刺激因子活性を有するポリペプチドの
投与量は、体重kg当り１〜１００００μｇであり、好ま
しくは１０〜２０００μｇの投与量であり、１〜２日で
１回ないし数回投与すればよい。

【００２２】本発明における製剤の形態としては、注射
剤、経口剤、直腸吸収剤などが挙げられる。これら製剤
の投与形態は何ら限定されるものではない。これらの製
剤は、通常の製剤形態に適した剤型に調製される。注射
剤は例えば本有効成分を緩衝剤、等張化剤、ｐＨ調製
剤、安定化剤と適量に溶解した注射用蒸留水に溶解し、
除菌フイルターを通して無菌化したものをアンプルに分
注する。

【００２３】あるいはまた、本有効成分を増量剤、安定
化剤とともに注射用蒸留水に溶解し、除菌フイルターを
通して無菌化したものをアンプルに充填し、またはバイ
アル壜中に分注した当該活性ポリペプチドに、グルコー
ス、ショ糖、マンニトール、ソルビトールなどの糖類の
凍結安定化剤を０．５〜１０％濃度となるように添加し
て凍結乾燥し、筋肉注射、皮下注射または静脈注射用の
用事懸濁用の製剤とすることができる。

【００２４】また、直腸吸収剤としては、例えば本有効
成分をペクチン酸ナトリウムやアルギン酸ナトリウムな
どのキレート能を有する吸収促進剤、塩化ナトリウムや
グルコースなどの高張化剤を適宜選択使用して、蒸留水
または油性ビヒクルに溶解または分散して直腸注入座剤
または座剤として調製される。

【００２５】このようにして得られたマクロフアージ・
コロニー刺激因子活性を有するポリペプチドは以下の実
施例に示す通り、肝機能の障害を極めて良好に改善維持
せしめてなる肝炎治療剤として有用なものである。

【００２６】次いで、本発明の実施例を挙げて詳しく説
明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものは
ない。 尚、表中における略語は、次の用語を意味する。 Ｍ−ＣＳＦ；マクロフアージ・コロニー刺激因子 ＧＯＴ；ｇｌｕｔａｍｉｃ ｏｘａｌｏａｃｅｔｉｃ
ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ（グルタミン酸オキザロ酢酸
トランスアミナーゼ） ＧＰＴ；ｇｌｕｔａｍｉｃ ｐｙｒｕｖｉｃ ｔｒａｎ
ｓａｍｉｎａｓｅ（グルタミン酸ピルビン酸トランスア
ミナーゼ） ＡＬＰ；ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ
（アルカリ性ホスフアターゼ） 生食 ；リン酸緩衝生理食塩水

【００２７】実施例 １ 製法および製剤化 マクロフアージ・コロニー刺激因子活性物質として、マ
クロフアージ・コロニー刺激因子活性物質生産性ヒト腎
癌由来細胞ＴＲＣ−２９ＳＦ（ＦＥＲＭ ＢＰ−２３７
５）より、サイトテクノロジー（Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ）５巻、サプリメント２（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎ
ｔ−２），９５〜１１４（１９９１）に記載された方法
により調製され精製された当該活性ポリペプチドを製剤
化するのに用いた。

【００２８】その製剤化としては、当該ポリペプチド
０．２mgを注射用生理食塩水１mlに溶解し、次いで０．
２２μｍのミクロフイルターで無菌化して０．２mg／ml
の濃度の注射用製剤を得、以下の実験に供した。また、
同様にして０．０２mg／mlの濃度の注射用製剤を得た。

【００２９】実施例 ２ ガラクトサミン肝炎 Ｆ３４４／ＤｕＣｒｊ系ラツト２００−２５０ｇに塩酸
Ｄ−ガラクトサミンを２００mg／体重kg、腹腔内に投与
した。投与と同時にマクロフアージ・コロニー刺激因子
活性を有するポリペプチドとして、実施例１に記載した
該活性ポリペプチド（１０⁸ 単位／mg蛋白質）をラツト
当り１００μｇ尾静脈投与した。２４時間後、再度該活
性ポリペプチドを同量、尾静脈投与した。

【００３０】この時点で動物を絶食させ、２４時間後、
下大動脈より採血し血清中の肝逸脱酵素値を測定、また
は肝組織切片を作成し、病理学的観察を行つた。また、
コントロールとして、無処置ラツト群、該活性ポリペプ
チド単独投与ラツト群、塩酸Ｄ−ガラクトサミン並びに
リン酸緩衝生理食塩水投与ラツト群を設けた。実験は各
群共に８匹のラツトを用いた。

【００３１】その結果は表１に示す通りであつた。肝障
害の極期と報告されるガラクトサミン投与後、４８時間
目において、該活性ポリペプチドを静脈投与されたラツ
ト群では著明に血清中肝逸脱酵素値の低下を認めた。

【００３２】マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を
有するポリペプチドのガラクトサミン肝炎抑制効果

【００３３】

【表１】

【００３４】また、組織病理的観察では、ガラクトサミ
ン肝炎ラツトの肝臓には、肝細胞の単細胞壊死とそれに
随伴する炎症性細胞（マクロフアージなど）の湿潤が散
見された（図１、図５）。また小葉周辺性に肝細胞空砲
性が見られ（図３）、肝細胞が腫大していた（図１、図
３、図５）。

【００３５】図１は、ガラクトサミンを投与した（２０
０mg／体重kg・４８時間後）ラツトの肝小葉・中心静脈
周辺を観察したものであり、ＨＥ（ヘマトキシリン・エ
オジン）染色後、実倍率６６０倍で検鏡した写真であ
る。

【００３６】図２は、ガラクトサミン（２００mg／体重
kg・４８時間後）投与し、かつＭ−ＣＳＦ投与（１００
μｇ／ラツト）したラツトの肝小葉・中心静脈周辺を観
察したものであり、ＨＥ染色後、実倍率６６０倍で検鏡
した写真である。

【００３７】図３は、ガラクトサミン投与（２００mg／
体重kg・４８時間後）したラツトの肝小葉・グリソン鞘
周辺を観察したものであり、ＨＥ染色後、実倍率６６０
倍で検鏡した写真である。

【００３８】図４は、ガラクトサミン（２００mg／体重
kg・４８時間後）投与し、かつＭ−ＣＳＦ投与（１００
μｇ／ラツト）したラツトの肝小葉・グリソン鞘周辺を
観察したものであり、ＨＥ染色後、実倍率６６０倍で検
鏡した写真である。

【００３９】図５は、ガラクトサミン投与した（２００
mg／体重kg・４８時間後）ラツトの肝小葉・中心静脈周
辺を観察したものであり、ＨＥ染色後、実倍率１３２０
倍で検鏡した写真である。

【００４０】図６は、ガラクトサミン（２００mg／体重
kg・４８時間後）投与し、かつＭ−ＣＳＦ投与（１００
μｇ／ラツト）したラツトの肝小葉・中心静脈周辺を観
察したものであり、ＨＥ染色後、実倍率１３２０倍で検
鏡した写真である。

【００４１】一方、肝炎にマクロフアージ・コロニー刺
激因子活性物質を投与したラツトでは、肝細胞の腫大も
認められず、類洞内にクツパー細胞の活性化が見られる
ので、その他の変化は殆ど観察されなかつた（図２、図
４、図６）ことから、Ｍ−ＣＳＦが有効に作用したもの
と認められた。

【００４２】実施例 ３ ガラクトサミン肝炎 Ｆ３４４／ＤｕＣｒｊ系ラツト２０−２５０ｇに塩酸Ｄ
−ガラクトサミンを２００mg／体重kg、腹腔内に投与し
た。投与と同時にマクロフアージ・コロニー刺激因子活
性を有するポリペプチドをラツト当り１０μｇ尾静脈投
与した。２４時間後、再度マクロフアージ・コロニー刺
激因子活性を有するポリペプチドを同量、尾静脈投与し
た。

【００４３】この時点で動物を絶食させ、２４時間後、
下大動脈より採血し、血清中の肝逸脱酵素値を測定し
た。また、コントロールとして無処置ラツト群、マクロ
フアージ・コロニー刺激因子活性を有するポリペプチド
単独投与ラツト群、塩酸Ｄ−ガラクトサミン並びリン酸
緩衝生理食塩水投与ラツト群を設けた。実験は各群共に
８匹のラツトを用いた。

【００４４】その結果は、表２に示す通りであり、実施
例２より低量のマクロフアージ・コロニー刺激因子活性
を有するポリペプチド静脈投与ラツト群でも、血清中肝
逸脱酵素値の抑制は変わらず認められた。

【００４５】マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を
有するポリペプチドのガラクトサミン肝炎抑制効果

【００４６】

【表２】

【００４７】実施例 ４ アルコール性肝炎 ＳＤラツト２５０−３００ｇを５０％全卵蛋白含有飼料
を１日間与えた。翌朝９時より４時間絶食後、マクロフ
アージ・コロニー刺激因子活性を有するポリペプチドを
ラツト当り５０μｇ尾静脈投与した。１時間後に２０％
エタノール含有生理食塩水（０．１３％硫酸ヒドラジン
添加）を体重kg当りエタノール７ｇとなるように経口投
与した。

【００４８】２４時間後、下大動脈より採血し血清中の
肝逸脱酵素値を測定した。またコントロールとして無処
置ラツト群、ラツト当りラツト血清アルブミン５０μｇ
投与後エタノール負荷ラツト群を設けた。実験は各群共
に１０匹のラツトを用いた。

【００４９】その結果は表３に示す通りであつた。マク
ロフアージ・コロニー刺激因子活性を有するポリペプチ
ド静脈投与ラツト群において、血清中肝逸脱値の明らか
な抑制が観察された。

【００５０】マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を
有するポリペプチドのアルコール性肝炎抑制効果

【００５１】

【表３】

【００５２】実施例 ５ 四塩化炭素肝炎 Ｗｉｓｔｅｒ１３０−１５０ｇに四塩化炭素（５０％
（ｖ／ｖ）コーン油混和溶液）をラツト当り１ml、皮下
に週２回投与した。マクロフアージ・コロニー刺激因子
活性を有するポリペプチドも四塩化炭素投与と同日に、
同回数、ラツト当り１０μｇ、尾静脈または頸静脈投与
した。

【００５３】初回投与より６週間後、下大動脈より採血
し、血清中の肝逸脱酵素値を測定した。またコントロー
ルとして、コーン油を投与したラツト群、四塩化炭素投
与と同時にリン酸緩衝生理食塩水を静脈投与した群を設
けた。実験は各群共に１０匹のラツトを用いた。

【００５４】その結果は、表４に示す通りであつた。マ
クロフアージ・コロニー刺激因子活性を有するポリペプ
チド静脈投与ラツト群において、血清中肝逸脱酵素値の
抑制が観察された。

【００５５】マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を
有するポリペプチドの四塩化炭素肝炎抑制効果

【００５６】

【表４】

【００５７】

【発明の効果】以上のことから本発明は、マクロフアー
ジ・コロニー刺激因子活性を有するポリペプチドが肝炎
における肝臓障害の指標となる各種肝逸脱酵素値の上昇
を有効に改善せしめて肝炎を治療、ないし肝臓障害を予
防し得ることを示したものであり、かつマクロフアージ
・コロニー刺激因子活性を有するポリペプチドが低毒性
（Ｆ３４４／ＤｕＣｒｊ系ラツトにラツト当り５００μ
ｇの該活性物質を４日間連続投与しても毒性は観察され
なかつた）であることからも、予防の範囲を含む有用な
肝障害治療剤を提供できるものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】ガラクトサミン投与によるラツトの肝臓の病変
を示す写真である。

【図２】ガラクトサミン投与し、かつＭ−ＣＳＦ投与し
た場合の肝組織像を示す写真である。

【図３】ガラクトサミン投与によるラツトの肝臓の病変
を示す写真である。

【図４】ガラクトサミン投与し、かつＭ−ＣＳＦ投与し
た場合の肝組織像を示す写真である。

【図５】ガラクトサミン投与によるラツトの肝臓の病変
を示す写真である。

【図６】ガラクトサミン投与し、かつＭ−ＣＳＦ投与し
た場合の肝組織像を示す写真である。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成３年１１月２１日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００２

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００２】

【従来の技術】肝臓は、血漿タンパク質の合成・分泌、
糖新生、グリコーゲン代謝による血糖調節、脂質合成、
胆汁合成・分泌、解毒など生体の恒常性維持に欠かせな
い多様な代謝機能を担つている肝実質細胞と、それ以外
の肝非実質細胞が７：３の割合で存在している臓器であ
る。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００３

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００３】肝非実質細胞には、ビタミンＡの貯蔵・輸
送に関与する伊東細胞や、抗原性物質・免疫複合体など
の捕食処理を行うクツパー細胞、同様の捕食機能を持
ち、類洞腔全周を取り囲む内皮細胞などが挙げられる。
これら肝非実質細胞は解剖学的にも肝実質細胞に近接し
た位置にあり、各細胞間においては密接な相互作用が存
在し、病理学的見地からもその相互作用が指摘されてい
る。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００４

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００４】特に、肝炎発症時にはクツパー細胞や多形
核白血球の、炎症部位への浸潤が観察され、また肝線維
化の過程では伊東細胞や内皮細胞によるコラーゲン線維
の合成が著しく亢進している。また広範囲に及ぶ外科的
肝切除術では術後、肝非実質細胞障害に起因すると考え
られる肝不全、腎不全、呼吸不全、消化管出血などが併
発しやすい。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００７

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００７】マクロフアージ・コロニー刺激因子は、種
々の生理作用を有することが多数報告されている。例え
ば、造血刺激作用〔Ｂｌｏｏｄ，７１，４１−４５（１
９８８）〕、骨髄移植成功率上昇作用〔臨床科学、２
６，１５６−１６２（１９９０）〕などの骨髄幹細胞に
対する活性、

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００８

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００８】また成熟したマクロファージに対しても、
顆粒球・マクロフアージ・コロニー刺激因子を始めとす
る各種サイトカインの合成・分泌、貪食能・脂質代謝な
どの機能を亢進させる活性を持つ。これらのことから、
マクロフアージ・コロニー刺激因子活性を持つポリペプ
チドは汎性血球減少症や癌化学療法後の血球減少症の改
善剤、血中コレステロール低下剤としての適応が検討さ
れている。

【手続補正６】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１１】本発明者らは、組織病理的にヒトのウイル
ス性肝炎に類似するとされるＤ−ガラクトサミン肝炎、
ヒトのアルコール性肝炎のモデルとされるエタノール・
硫酸ヒドラジン肝炎、更にヒト肝硬変のモデルとされる
四塩化炭素肝炎を典型的な肝炎モデルとして選択し、マ
クロフアージ・コロニー刺激因子活性を有するポリペプ
チドを、これら肝炎モデル動物に投与したところ、肝障
害の指標となる血清中肝逸脱酵素値の改善を認めた。

【手続補正７】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２７

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２７】実施例 １ 製法および製剤化 マクロフアージ・コロニー刺激因子活性物質として、マ
クロフアージ・コロニー刺激因子活性物質生産性ヒト腎
癌由来細胞ＴＲＣ−２９Ｒ（ＦＥＲＭ ＢＰ−２３７
５）より、サイトテクノロジー（Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ）５巻、サプリメント２（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎ
ｔ−２），９５〜１１４（１９９１）に記載された方法
により調製され精製された当該活性ポリペプチドを製剤
化するのに用いた。

【手続補正８】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３６】図２はガラクトサミン（２００mg／体重kg
・４８時間後）投与し、かつＭ−ＣＳＦ投与（１００μ
ｇ／ラツトを２日間連日）したラツトの肝小葉・中心静
脈周辺を観察したものであり、ＨＥ染色後、実倍率６６
０倍で検鏡した写真である。

【手続補正９】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３８

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３８】図４は、ガラクトサミン（２００mg／体重
kg・４８時間後）投与し、かつＭ−ＣＳＦ投与（１００
μｇ／ラツトを２日間連日）したラツトの肝小葉・グリ
ソン鞘周辺を観察したものであり、ＨＥ染色後、実倍率
６６０倍で検鏡した写真である。

【手続補正１０】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００４０】図６は、ガラクトサミン（２００mg／体重
kg・４８時間後）投与し、かつＭ−ＣＳＦ投与（１００
μｇ／ラツトを２日間連日）したラツトの肝小葉・中心
静脈周辺を観察したものであり、ＨＥ染色後、実倍率１
３２０倍で検鏡した写真である。

【手続補正１１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００４１】一方、肝炎にマクロフアージ・コロニー刺
激因子活性物質を投与したラツトでは、肝細胞の腫大も
認められず、類洞内にクツパー細胞の活性化が見られる
のみで、その他の変化は殆ど観察されなかつた（図２、
図４、図６）ことから、Ｍ−ＣＳＦが有効に作用したも
のと認められた。

【手続補正１２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００４６】

【表２】

【手続補正１３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５６

【補正方法】変更

【補正内容】

【００５６】

【表４】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 マクロフアージ・コロニー刺激因子活性
   を有するポリペプチドを有効成分とする肝炎治療剤。