JPH05500105A - 改良された安定な凝固対照 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 改良された安定な凝固対照 ［発明の背景］ 本発明は一般的に血液凝固に関し、より詳細には改良された血液凝固対照であっ て凝固試験に使用される種々の試薬に優れた安定性及び感度を示すものである。

安定で信頼性のある血液凝固対照の必要性は、よく実証されている。今日、様々 な血栓−塞栓症状の治療及び管理のために、連続的で増大した経口抗凝固剤の使 用が、今までになくこれらの開発への原動力になっている。すでに知られている ように、抗凝固剤の過剰投与は、通常クマリン誘導体であるが、消化性潰瘍から の出血を含み、その他の胃腸合併症と同様に重要な合併症を引き起こし得る。

一方、凝固レベルを極めて低（管理することは、処方された治療の効率を弱める 又は無（す。

これゆえに、凝固レベルの監視が信頼のおけるものであること、並びに例えばこ の分野において文献の多くの骨子で、抗凝固活性を監視する目的で、安定で信頼 性のある対照およびに試薬を製造するような証明的試みがなされたことはきわめ て重要である。

例えばＢａｂｓｏｎは米国特許第３．９４７．３７８号で第■、■、■及び第Ｘ 因子を欠く対照血漿の製造工程を開示し、これは環境温度で２０から２２重量％ の硫酸バリウムで血漿を処理し、次に吸着した血漿から吸着剤を除くことを含む 。Ｂａｂｓｏｎの特許は、このような吸着血漿と正常血漿とを混合して製造され た異常対照血漿が再構成の後に、より安定であり活性化部分トロンボプラスチン 時間（ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐａｒｔｉａＬ　ｔｈｒｏｍｂｏｐＬａｓｔｉｎ　 ｔｉｍｅ：ＡＰＴＴ）操作において、最高８時間以上保存しても、より均一な結 果を与えることを開示する。

Ｓ、　Ｚｕｃｋｅｒ、　Ｍ、　１１．　ＣａｔｈｅｙおよびＢ、　Ｗｅｓｔは、 　Ａｍｅｒ、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｐａｔｈ、　、　Ｊｕｎ■@１９７０．　ｖ ｏｌ、　５３ ｐｐ、　９２４−９２７の「凝固のための品質管理試料の調製Ｊ（Ｐｒｅｐａｒ ａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｃａｎｔｒｏｌ　Ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ　ｆ ｏｒ　Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）の中で、凝固試験における品質管理用として使 用するための凍結乾燥試料の調製法について報告している。Ｚｕｃｋｅｒらは、 血漿試料をＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ”−２−エタンスルホン酸 （ＩＩＥＰＥＳ）での緩衝化を報告し、これは２５℃で８時間のプロトロンビン 時間（ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｔｉｍｅ）、ｐＥＩ及び酵素安定性を提供する ことを報告した。Ｍ、　Ｂｒｏｚｏｖｉｃ、　Ｄ、　Ｊ、　Ｉｌｌｏｗａｒｔｈ 、　Ｌ、　Ｐ、　ｖａｎ　Ｈａｌｅｍ　uｉ ｓｓｅｒ及びＥ、　Ａ、　ＬｏｅｌｉｎｇｅｒはＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ１１ ｎｉｃａｌ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、　１９７３Ｖｏ１．２６D　ｐ　８５７−９ ６ ３の「経口抗凝固剤投与患者由来の凍結乾燥血漿調製物の安定性」の中で経口抗 凝固剤投与患者由来の凍結乾燥血漿調製物の適性ついて、経口抗凝固治療の対照 として使用されるトロンボプラスチンの較正において基準物質として提供するこ とを報告した。著者は数種の血漿プールからの血漿を研究し、各々の患者から４ ．５ｍｌの血液を、４４．６２ｇのＨＥＰＥＳバッファー、３８．　ＯＯｇのク エン酸三ナトリウム（Ｌのおよび０゜５ｍｌのアプロチニンＴＲＡＳＹＬＯＬ（ １０００ｕ／ｍｌ）を混合し、次に蒸留水で１０１００Ｏにした溶液の０．５ｍ ｌ中に回収して開発した。個々の試料を遠心し、引き続きプール試料とし、この 後血漿１リツトル当たり１ｍｌの１０％のアジ化ナトリウムを加えた。血漿調製 物の試料を、次に凍結または凍結乾燥した。経口抗凝固剤投与患者からの凍結乾 燥血漿は、完全な再構成の直後か、または再構成後４時間から６時間以内に使用 のために４℃で保存した場合はトロンボプラスチンの較正に使用できた。著者は また、それらの血漿試料は、一般的に、再構成し、４℃、２２℃および３７℃で 保存した後の不安定性のレベル及びタイプは、多様に示されることを報告した。

この不安定性は、より低い二種類の温度で約２４時間後およびより高い３７℃で 約４から６時間後にもたらされると一般的に報告された。

米国特許第４．００７．００８号でＢｅｃｋｅｒらは、動物血清または血漿中の 酵素活性の減少方法を開示し、それはそれらのｐＨレベルを塩基を加えることに よって正常血清のｐＨにまで上げて、その後血清又は血漿を酸性媒体で中和して 反応を停止又は酵素活性を減少させる工程を含む。その他の一般的背景は、米国 特許第３．７９９．８８５号に見いだされ、Ｄｅｎｎｉｓらは、ＨＥＰＥＳバッ ファーで緩衝化された塩化カルシウム試験試薬を開示し、これは特にヘパリン治 療の監視の使用に適用される：米国特許第４．３０１．、０２８号でＢａｒｔｌ らは、ヘパリン活性測定用の対照試薬を報告するＨＳｏｒｅｎｓｏｎらの米国特 許第４．１１６．３３６号は、血中ガス測定装置の品質管理及び／または較正用 の合成基準液体を含有する包装物に関する：Ｐ、　Ｓ、　Ｒｏｂｅｒｔ、　Ｅ、 　Ｎ、　Ｈｕｇｈｅｓ及びｐ、　Ｂ、　ｌ”ｌｅｍｉｎｇ、は、Ｔｈｒｏｍｂｏ ｓ、　Ｈａｅｍｏｓｔａｓ、　（Ｓｔｕｔｔｇ）　１９７６、　Ｖｏｌ、　３５ ．　ｐ、　２０２の「凝固試験、第Ｖ及び■因子y びトロンビン及びトロンボキナーゼによるエステルの加水分解へのＩｒＥＰＥＳ バッファーの影響」中で、５０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファーの存在下でより迅速 な凝固を報告する。

従来技術の他の観点は、対照血漿はその大部分が、特に市販されている物は、最 も多（はヒト霊長類血漿より成る、そうでなければ、ヒト霊長類血漿を含む。こ れらの血漿は現在、不安定なヒト由来の因子、特に第Ｖ及び■因子を含有すると いう欠点を有し、またそれらは活性なＡＩＤＳ又は肝炎ウィルスが宿ることもあ り、対照の調製者及び使用者に重大な危険を与える。

多くの文献の字づらから、また凝固対照用血漿に関する他の研究において、未だ １一段階プロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（Ａ ＰＴＴ）、および第Ｖ及び■因子活性値に関し、採用した凝固試験試薬の多様性 に対し優れた感度を示すことと同様に高い安定性を示す凝固対照の必要性が存在 する。改良された特定の対照も、これを調製および使用する者のＡＩＤＳおよび 肝炎に対する感染の危険性を除去している。出願人の発明はさまざまな観点から これらの問題を取り扱う。

［発明の概要］ したがって、出願人の本発明のひとつの好適な態様は、安定な凝固対照血漿に関 し、血液血漿、及び有効量の（ａ）生理的ｐＨを維持するためのバッファー（ｂ ）プロテアーゼ阻害剤（Ｃ）適当な安定化炭水化物から成るものである。好まし い観点において、この対照は、実質的に非−霊長類血漿で構成される全血漿成分 を有する。

出願人の本発明のもう一つの好ましい態様は、第Ｖ及び■因子の高い安定化され た基準を有する凝固対照血漿に関する。この対照は、血漿及び少なくとも２重量 ％の適当な炭水化物からなる。この態様の血漿は、直接動物源から生理的ｐｌ＋ を維持するためのバッファー、プロテアーゼ阻害剤及びクエン酸を含有する溶液 に回収された血液から得られる。対照中の炭水化物は、血液から赤血球を除去し た後加えられる。

出願人の本発明のもう一つの好ましい態様は、安定な凝固対照血漿の製造方法に 関する。この方法は、直接動物から血漿を得る血液をバッファー、プロテアーゼ 阻害剤及びクエン酸を含有する溶液に回収し集め、赤血球を除去し、そして炭水 化物を加える連続工程を含む。

さらに本発明の好ましい態様は、安定な凝固対照を製造する方法に関し、その方 法は血液血漿の提供、および該血液血漿に少なくとも一つの精製した安定化凝固 因子の添加を含む。

［好ましい態様の開示〕 ここで出願人の本発明のひとつの好適な態様（′！、安定な凝固対照血漿（二関 し、この態様の適当な血漿の型に関し、霊長類およびｌトー霊長類血漿力（使用 され得る。

の約１：６：３で構成された全血漿成分を有する。第２は、ＰＴ及びＡＰＴＴ値 が異常範囲であり、アルミニウムハイドロオキサイドゲルに吸着したブタ血漿、 及びウシ血漿がそれぞれ約３５＝１からなる全血漿成分を有する。第３血漿もＰ Ｔ及びＡＰＴＴ時間が異常範囲を示し、アルミニウムハイドロオキサイドゲルに 吸着したブタ血漿から構成される全血漿成分を有する。

これら初めの３つのより好適な血漿は、付随するウィルスが霊長類−血漿には存 在しないので、これらを調製および／または使用する人によるＨＩＶまたは肝炎 ウィルス感染の危険は有意に減少する利点を提供する。付加的な利点はこれらの 血漿が提供する高くて安定な凝固因子に関連した。これに関し、非−霊長類血漿 構成物が、少なくとも対照の全血漿成分の実質的部分である限り同様の利点を得 ることができ、このような血漿も対照としてその血漿成分が本質的に非−霊長類 血漿から成るで、本発明の好適な観点であると思われる。

第４のより好適な対照は、正常ヒト、ウシ、及びウサギ血漿がおのおの約２：２ ：１で構成される血漿成分を有する。

バッファーに関しては現在まで、ＨＥＰＥＳバッファーが好ましいが、他の多く のバ・ソファ−１例えばＴＲｌ５が知られ適当である。好適なＨＥＰＥＳバッフ ァーは、ＨＥＰＥＳヘミナトリウムであり、これは対照中に少なくとも約０．０ ８Ｍ、好ましくは０．０５％以上で存在する。

プロテアーゼ阻害剤及び炭水化物の種類と量に関しては、現在まで阻害剤及び炭 水化物の量が対照中に少なくともそれぞれ０．５１１／ｍｌおよび２重量％で存 在するのが好ましかった。好適なプロテアーゼ阻害剤は、アプロチニンであるが 、その他のプロテアーゼ阻害剤、例えば大豆トリプシンインヒビターなどが当業 者に知られ、好適である。好ましい炭水化物は現在まで糖であり、特にシュクロ ースであるが、その他の当業者に既知である物も使用できる。加えて現在までの ところシュクロースが対照に約５重量％存在することが好ましい。

この好適な態様の対照血漿の他の成分に関しては、対照血漿がチメロザールを好 ましくは少なくとも０，０２重量％及び／またはアジ化ナトリウムを好ましくは 少なくとも０．Ｃ８量％含有した。

対照血漿のバッチを調製するために、約１部（体積で）の出願人の好ましい緩衝 化及び保存用溶液（以下の実施例１に記載されている）と約９部の血漿を混合す る。現在までより好ましいのは、約１部の出願人の好ましい緩衝化保存溶液と約 ９部の混合又は未混合非−霊長類動物血漿を混合するものであった。

さらに詳細には好適な態様の対照血漿を、それらの安定性の詳細と同様に、以下 の実施例１−６、および表１−３に見いだすことができる。集合的に、この態様 の対照血漿は、一般的に安定であると証明され、これはＡＰＴＴ及びＰＴ分析が 少なくとも室温で３日間、又は３７℃で８時間、約１０％以上変化しないことを 意味する。

加えて、特に以下の実施例６で詳述するが、この好適態様の凝固対照は、凝固時 間試験で使用された試薬の多様性に対して感度の増大を示した。実施例６は、こ の態様にしたがって調製された凝固対照試料が、ＰＴ試験において市販の血漿、 ＣｌＴＲ０Ｌ　ｌ及び新鮮なヒト正常血漿のトロンボプラスチン試薬希釈物に対 する感度に関し試験された実験を詳述する。報告された結果が示すように、本出 願人の発明に従って調製された対照は、トロンボプラスチンの種々の希釈物に対 して、ここに優れた感度を示した。

以上のように、本発明のその他の好適な態様には、第Ｖおよび第■因子の高い、 安定化された基準を有する凝固対照血漿を含む。この対照は、直接動物源から生 理的ｐＨを維持するためのバッファー、プロテアーゼ阻害剤及びクエン酸を含有 する溶液に回収された血液から得られた血漿から成り、そこへ赤血球の除去後に 少なくとも約２重量％の適当な安定化炭水化物を加えた。

しかし、現在までにその他のものも使用でき、血液が回収されるバッファーはＨ ＥＰＥＳヘミ−ナトリウムが好適であり、及び好適なプロテアーゼインヒビター は、アプロチニンであった。またｆｆＥＰＥＳヘミ−ナトリウム及びアプロチニ ンの量は回収溶液中にそれぞれ、少なくとも約０２５Ｍ及び５Ｕ／ｍｌで存在す ることが好ましかった。クエン酸は当業者に既知の量で回収溶液中に存在できる 。しかしながら現在まで、クエン酸ナトリウム量が約３重量％であることが好適 であった。これらの好適な１（ＥＰＥＳヘミ−ナトリウム、アプロチニン及びク エン酸が使用されるとき、約９部（体積で）の血液が、約１部の回収溶液中に好 適に回収される。

炭水化物は、固体状または液体で加えることができる。再度、好適な炭水化物は シュクロースであり、遠心又はその他の適当な方法で赤血球を除去した後、加え られた。

加えて、ツユクロースを対照中に約５重量％の基準で加えることがより好適であ った。所望により、付加的な生理的ｐＥＩバッファー（固体又は液体として）を も加えて、所望する最終的な対照の基準に影響を与えることができる。好ましく は、最終的な対照は、チメロザール（好ましくは少なくとも０．０２重量％）お よびアシ化ナトリウム（好ましくは少なくとも０．０８重量％）も含有した。チ メロザールおよび／またはアジ化ナトリウムは、固体又は液体として回収溶液の 初期に又は後に与えられる。

出願人は、この態様にしたがって調製した好適な血漿は、第Ｖ因子および第■因 子の含量が大変高いことを発見した。加えて出願人は、このように調製した第Ｖ 因子および第■因子含量は、室温（少なくとも約３日間）および約３７℃（少な くとも８時間）の両方で高度に安定であった。

本発明のこの態様用に適する血漿は、霊長類および非−霊長類−血漿を含み、好 適な血漿は、ウシ、ブタ、ウサギ、ウマおよびヒト血漿である。この対照血漿の 調製法のさらなる詳細は、実施例７−１１に見いだすことができる。

本発明のもう一つの好ましい態様は、安定な凝固対照血漿の製造方法に関する。

上述のようにこの方法は、（ａ）対照に使用する血漿を含む血液を生理的ｐＨを 維持するバッファー、プロテアーゼ阻害剤及びクエン酸を含有する溶液に直接動 物から回収し、（ｂ）赤血球を該血液から除去し、そして（ｃ）少なくとも約２ 重量％の適当な安定化炭水化物を加える連続段階を含む。この好適な工程のさら なる詳細は直前で論議した態様に類似し、および実施例７−１１でさらに見いだ すことができる。

さらにその他の本発明の好適な態様は、安定な凝固対照の製造方法に関し、この 方法は、血液血漿の提供、該血漿に少なくとも一つの安定な精製された凝固因子 を血漿中の添加因子の基準を増加させるめに加えること、を含む。さらに、以下 の実施例１２で詳述するように、種々の動物血漿から精製された特定の因子が当 業者に知られている。これらの精製因子は、次に血漿中の添加因子基準をあげる ため、およびＰＴおよび／またはＡＰＴＴ値を調節するために血漿に添加される 。好適な態様はまた、ウマまたはヒトの血漿に、ウシ又はブタ由来の安定な精製 筒Ｖまたは第■因子を添加することを含む。加えて精製ウマ第■因子は、特に安 定であると証明され、他の血漿に安定な第■因子源として加えることができる。

集合的に、安定な精製因子が添加された血漿は、因子を添加しない同様な血漿よ り優れた安定性を示した。

それらの技術に関する出願人の好適な態様の特徴及び利点ならびに改良点を記述 および理解する目的で、全特別な実施例の参照がなされるであろう。これらの実 施例は単にそれぞれ、および同じ実施例の付加的な態様及び改良点は出願人と同 様に当業者の観点の中にあると理解されるべきである。

以下の実施例に報告される第Ｖおよび第■因子活性値は、正常ヒト血漿の希釈物 から調整した標準曲線に対して通常方法で計算された。ＰＴは、１一段階プロト ロンビン時間を意味し、ＡＰＴＴは、活性化部分トロンボプラスチン時間を意味 する。報告されたＰＴおよびＡＰＴＴ試験は、従来方法で行われた。

［実施例１］ 好適な保存溶液の調製 出願人の好適な保存溶液１００ｍ１は、５００Ｕのアプロチニン、約１２．５ｍ ｇのＥＥＥＰＥＳヘミ−ナトリウム、Ｏ，Ｉｇのチメロザール、０．５ｇのＮａ Ｎ３及び２５ｇのシュクロースと混合され、次に蒸留水を１００ｍ１になるよう に加えた。この調製物は、１００ｍ１の保存溶液となり、（ａ）０．５Ｍ　ＨＥ ＰＥＳヘミ−ナトリウム：（ｂ）０．１％チメロザール： （ｃ）２５％：シュクロース； （ｄ）０．５％アジ化ナトリウム；および（ｅ）５００Ｕアプロチニン、 から成る。

［実施例２コ 非−霊長類基本正常領域対照（基準１）非−霊長類基本対照のパイロットロフト （今後Ｐ１と呼ぶ）は調製され、ＰＴ及びＡＰＴＴ値が正常範囲を示した。特に 、５４Ｉ１１１のビーフ血漿、９ｍｌのブタ血漿および２７Ｌｏｌのウサギ血漿 が、実施例１の１０ｍ１の好適な保存溶液と混合された。ＰＴ及びＡＰＴＴの初 期値はそれぞれ１１．０および２４．０秒であった。このロットは１ｍ１部分の 個々のバイアルに分割され、通常手法で凍結乾燥された。一つのＰ１対照血漿は 、翌日蒸留水で再構成され、その後のＰＴ値は１１０秒、ＡＰＴＴ値は２４１秒 を示した。同様に再構成されたＰ１バイアルは、毎日のＰＴ及びＡＰｎの試験に よれば室温（約２５℃）で５日間まで変化しないことが認められた。この結果は 以下の表１に与えられ、優れた安定性を示す。

表１ 日　２　３　４　５ ＰＴ　１１，２　１０，８　１１，７　１１．２ＡＰＴＴ　２５．７　２６，２ 　２７．１　２８３第Ｖおよび第■因子に関して、等しく驚くべき安定性が円試 料において示された。再構成の直後にＰ１試料は、正常ヒト血漿プールで見いだ される量のそれぞれ約１０００％および１００％の第Ｖおよび第■因子値を表し た。再構成後の試料は、室温で５日間変化しないことが認められ、それらは約１ １００％の第Ｖ因子値、約９０％の第■因子値を示した。

［実施例３］ 非−霊長類基本異常領域対照（基準２）対照血漿の第２パイロツトロツト（今後 Ｐ２と呼ぶ）は、ＰＴ及びＡＰｎ値が正常範囲を示すように調製された。１７５ ｍ１の吸着ブタ血漿、５ｍ１のビーフ血漿および２０１１１１の出願人の好適保 存溶液を混合し、上記の実施例１のように調製された。このロフトは異常な凝固 時間を有するように調製され、ＰＴおよびＡＰＴＴの初期値はそれぞれ、２１． １および４０，８であった。Ｐ２０ットは、上記実施例２に記載いされた同じ方 法で分割され凍結乾燥された。蒸留水で再構成した後、Ｐ２０ットを含有するバ イアルは２０．１秒のＰＴ値及び４１．４秒のＡＰＴＴ値を作った。

実施例２の再構成安定性試験に類似して、幾つかの再構成Ｐ２バイアルについて 、毎日のＰＴ及びＡＰＴＴの試験によれば室温（約２５℃）で５日間まで変化し ないことが認められた。以下の第２表に示す結果は、ここでも優れた安定性を示 す。

表２ 日　２　３　４　５ ＰＴ　２０．６　２２，０　２１．６　２２．７ＡＰＴＴ　４３．８　４６．１ 　４４．１．　４４．４［実施例４］ 非−霊長類基本異常領域対照（基準３）対照血漿の第３パイロツトロツト（Ｐ３ ）は、９０ｍ１の吸着（アルミニウムハイドロキシゲルに）ブタ血漿と１０ｍ１ の出願人の好適保存溶液とを混合し、上記の実施例１のように調製された。第３ 物質に関してはＰＴおよびＡＰＴＴの初期値はそれぞれ、４１．３および６９． ９が観察された。Ｐ３物質は次に、上記実施例２及び３の第２及び３物質のよう に分割され凍結乾燥された。再構成し、室温で約１日保存した後、第３物質のバ イアルを分析した。この再構成Ｐ３血漿に関し、２丁およびＡＰＴＴの値はそれ ぞれ、３８．１および６４．１であり、良い安定性を示した。

［実施例５］ ヒトブ非−霊長類正常領域対照 ３６ｍ１の正常ヒト血漿、３６ｍ１のウシ血漿が、１８ｍ１のウサギ血漿及び実 施例１の保存溶液１０ｍ１と混合され第４０ツト（Ｐ４）対照物質が形成された 。正常領域の初期ＰＴ及びＡＰＴＴ値は、それぞれ１１．４及び２５，７であっ た。この第４血漿もよい安定性を示した。再構成試料も室温で７日間変化が認め られず、１１．５のＰＴ値および２９．７のＡＰＴＴ値を記録した。

［実施例６コ 試薬の多様性に対する感度 この実施例では、出願人の好適な対照血漿の感度が、新鮮、正常血漿および米国 のダーデ（Ｄａｄｅ）で販売されている市販のＣｌＴＲ０Ｌ　Ｉへの多様な凝固 時間試薬に関し比較された。この測定にはＰＴ試験が採用された。研究を行うた めに、１００．８０．６０．４０．２０および１０％のトロンボプラスチンから なる試薬が、トロンボプラスチンを０．１５４Ｍの塩化ナトリウムを含有する０ 、　０２５％ＨＥＰＥＳバッファーｐＨ７，ソフ５で希釈して調製された。

これらの試薬希釈物は、次に３つの試験血漿用の阿値を評価するために使用され た。結果を以下の表３に示す。見るとわかるように、出願人の円対照血漿物質は 、トロンボプラスチン希釈物に対して優れた感度をもたらし、４値において有意 により大きな変化を示した。このようにこの感度の増大は、欠陥試薬の検出を新 鮮血漿より容易とする。　表３ ％　ＰＴ／新鮮　ＰＴ／　ＰＴ／ トロンボプラスチン　正常血漿　ＣｌＴＲ０Ｌ　Ｉ　Ｐｉ血漿１００　１１、５ 　１１．４　１１．３８０　１１．６　１１．８　１２．１ ６０　１２、４　１２．７　１３．３ ４０　１３、５　１３．７　１４．９ ２０　１５、９　１６．４　１８．３ １０　１８、８　１９．５　２２．６ ［実施例７〕 好適な回収溶液 １００ｍ１の出願人の好適な回収溶液は、５００Ｕのアプロチニン、約６．２５ ｇのＨＥＰＥＳヘミ−ナトリウム及び２．９４ｇのクエン酸ナトリウムを混合し 、蒸留水を１０ｈｌになるように加えて調製する。この調製物は１０ｈｌの回収 溶液となり、（ａ）　０．２５）ｌ　ＨＥＰＥＳヘミ−ナトリウム（ｂ）　２． ９４ｇクエン酸ナトリウム（Ｃ’）　５００Ｕのアプロチニン を含有した。

好ましくは、約９容量部の血液が約１容量部のこの好適な回収溶液１容量部中に 回収される。

［実施例８−１１］ 回収溶液への直接回収 凝固因子、特に第Ｖ及び第■因子の高く安定な基準を有する対照血漿を得るため に、使用する血漿が動物源から出願人の好適な実施例７の回収溶液へ直接回収さ れた血液から得た血漿であることを除き、実施例２−６を繰り返し、赤血球の除 去後、シュクロース、さらにＥＩＥＰＥＳへミーナトリウム及ならびにメロザー ルおよびアジ化ナトリウムを実施例２−６のそれぞれと同じ基準を達成するよう に加える。初期の第Ｖ及び第■因子活性値が試験され、それは単純な従来のクエ ン酸抗凝固溶液１こ回収された血漿と比較して特に高いことが分かる。加えて、 凍結乾燥および再構成後に得られる高第Ｖ及び第■因子値に立証されるように、 第Ｖ及び第■因子値（ま緩衝化および保存溶液で安定化され、並びに再構成され た後は対照血漿試料＋１．３７℃で８時間、及び室温で約３日間変化しないこと が認められた。ＰＴ及びＡＰＴＴ値１ヨ、再構成された対照血漿がこれらの温度 ／時間条件に供された後も、試験におＬｌで同様法こ、安定である。

［実施例１２コ 安定な精製因子の添加 プールされた正常ヒト血漿はアッセイされ、それぞれ３４秒及び１３秒であるＡ ＰＴＴ及びＰＴ値を示した。さまざまな実験において、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツ ジまたはウサギの精製された第Ｖ及び第■因子が、正常ヒト血漿約１．ｍｌ試料 に加えられ、各々の例でＡＰＴＴを２６秒に修正した。同様にブタ、ウシ、ウマ 、ヒツジまたはウサギの精製された第■因子は、正常ヒト血漿約１ｍｌ試料に加 えられ、各々の例でＰＴを１１秒に修正した。加えて、各々の例で凍結乾燥製品 は凍結乾燥正常ヒト血漿より良い安定性を示した。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．血液血漿；ならびに有効量の； 生理的ｐＨを維持するためのバッファー：ブロテアーゼ阻害剤：および 適当な安定化炭水化物 からなる安定な凝固対照血漿。 ２．上記ブロテアーゼ阻害剤がアブロチニンである、請求項１記載の対照血漿。 ３．上記バッファーがＨＥＰＥＳバッファーである請求項２記載の対照血漿。 ４．上記炭水化物がシュクロースである請求項３記載の対照血漿。 ５．アジ化ナトリウムから付加的に成る請求項４記載の対照血漿。 ６．チメロザールから付加的に成る請求項４記載の対照血漿。 ７．上記ＨＥＰＥＳバッファーがＨＥＰＥＳヘミーナトリウムであり、および上 記ＨＥＰＥＳバッファー、アブロチニン、シュクロース、チメロザールおよびア ジ化ナトリウムがそれぞれ少なくとも約０．０８Ｍ，０．５Ｕ／ｍｌ，２重量％ ０．０２重量％，及び０．０８重量％で存在する請求項６記載の対照血漿。 ８．上記血液血漿がブタ、ウサギ、ウシ、ヒト、ウマ、ヒツジまたはヤギ血漿か ら成る群から選択される血漿から成る請求項１、４、または７記載の対照血漿。 ９．上記血漿がウマ血漿から成る請求項８記載の対照血漿。 １０．上記血漿がウサギ血漿から成る請求項８記載の対照血漿。 １１．上記血漿がヒト血漿からなる請求項８記載の対照血漿。 １２．上記血漿がブタ、ウシ、ウサギ、ウマまたはヒツジ精製因子の少なくとも ひとつの精製された因子から付加的に成る成る請求項１１記載の対照血漿。 １３．上記血漿がウシ血漿から成る請求項８記載の対照血漿。 １４．上記血漿がヒト血漿から付加的に成る請求項１３記載の対照血漿。 １５．上記血漿がウサギ血漿から付加的に成る請求項１３記載の対照血漿。 １６．上記血漿がヒト血漿から付加的に成る請求項１５記載の対照血漿。 １７．上記対照の全血液血漿成分が少なくとも実質的に上記ウサギ、ウシ、及び ヒト血漿で構成される請求項１６記載の対照血漿。 １８．上記対照の全血液血漿成分が上記ウサギ、ウシ、及びヒト血漿からなる請 求項１７記載の対照血漿。 １９．上記ウサギ、ウシ、及びヒト血漿がそれぞれ容量比約１：２：２で存在す る請求項１８記載の対照血漿。 ２０．上記血漿がブタ血漿からなる請求項８記載の対照血漿。 ２１．上記血漿がブタ血漿がアルミニウムハイドロキシゲルに吸着し、並びに上 記対照の全血液血漿成分が少なくとも実質的に上記ブタ血漿から構成される請求 項２０記載の対照血漿。 ２２．上記対照の全血液血漿成分が上記ブタ血漿からなる請求項２１記載の対照 血漿。 ２３．上記血漿がウシ血漿から付加的に成る請求項２０記載の対照血漿。 ２４．上記対照の全血液血漿成分が少なくとも実質的に上記ブタ及びウシ血漿か ら構成される請求項２３記載の対照血漿。 ２５．上記対照の全血液血漿成分が上記ブタ及びウシ血漿からなる請求項２４記 載の対照血漿。 ２６．上記血漿がブタ血漿がアルミニウムハイドロキシゲルに吸着し、並びに上 記ブタ及びウシ血漿がそれぞれ約３５：１の容量比で存在する請求項２５記載の 対照血漿。 ２７．上記血漿がウサギ血漿から付加的に成る請求項２０記載の対照血漿。 ２８．上記血漿がウシ血漿から付加的になる請求項２７記載の対照血漿。 ２９．上記対照の全血液血漿成分が少なくとも実質的に上記ブタ、ウシ及びウサ ギ血漿から構成される請求項２８記載の対照血漿。 ３０．上記対照の全血液血漿成分が上記ブタ、ウシ及びウサギ血漿からなる請求 項２９記載の対照血漿。 ３１．上記ブタ、ウシ、及びウサギ血漿がそれぞれ容量比約１：６：３で存在す る請求項３０記載の対照血漿。 ３２．高い、安定化された基準の第Ｖおよび第ＶＩＩＩ因子を有する凝固対照血 漿であって、 血液血漿：および 少なくとも約２重量％の適当な炭水化物；から成り、 ここで該血漿は、直接動物源から生理的ｐＨを維持するためのバッファー、ブロ テアーゼ阻害剤及びクエン酸を含有する溶液に回収された血液から得られ；そし てここで炭水化物は該血液から赤血球を除去した後に加えられる凝固対照血漿。 ３３．上記ブロテアーゼ阻害剤がアブロチニンである、請求項３２記載の対照血 漿。 ３４．上記バッファーがＨＥＰＥＳバッファーである請求項３３記載の対照血漿 。 ３５．上記溶液がＨＥＰＥＳヘミーナトリウム、アブロチニンおよびクエン酸ナ トリウムをれぞれ少なくとも約０．２５Ｍ，５Ｕ／ｍｌ，３重量％含有する請求 項３４記載の対照血漿。 ３６．ＨＥＰＥＳヘミーナトリウムバッファー；およびアブロチニン； から付加的に成り、 ここで該ＨＥＰＥＳヘミーナトリウムバッファー、アブロチニンがれぞれ少なく とも約０．０８Ｍ，および０．５Ｕ／ｍｌで該対照中に存在する請求項３５記載 の対照血漿。 ３７．上記炭水化物がシュクロースである請求項３６記載の対照血漿。 ３８．アジ化ナトリウムから付加的に成る請求項３７記載の対照血漿。 ３９．チメロザールから付加的に成る請求項３８記載の対照血漿。 ４０．上記対照の全血漿成分が実質的に非−霊長類血漿から構成される請求項３ ９記載の対照血漿。 ４１．上記非−霊長類血漿がブタ血漿から成る請求項４０記載の対照血漿。 ４２．上記非−霊長類血漿がウシ血漿から成る請求項４０記載の対照血漿。 ４３．上記非−霊長類血漿がウサギ血漿から成る請求項４０記載の対照血漿。 ４４．上記非−霊長類血漿がウマ血漿から成る請求項４０記載の対照血漿。 ４５．上記非−霊長類血漿がウシ血漿から付加的に成る請求項４１記載の対照血 漿。 ４６．上記非−霊長類血漿がウサギ血漿から付加的に成る請求項４５記載の対照 血漿。 ４７．上記非−霊長類血漿がウサギ血漿から付加的に成る請求項４２記載の対照 血漿。 ４８．上記ブタ血漿がアルミニウムヒドロゲルに吸着される請求項４１または４ ２記載の対照血漿。 ４９．上記ブタ血漿がアルミニウムハイドロキシゲルに吸着し、並びに上記ブタ 及びウシ血漿がそれぞれ約３５：１の容量比で存在する請求項４５記載の対照血 漿。 ５０．上記ブタ、ウシ、及びウサギ血漿がそれぞれ容量比約１：６：３で存在す る請求項４６記載の対照血漿。 ５１．安定な凝固対照血漿の製造方法であって、対照に使用する血漿を含む血液 を生理的ｐＨを維持する効果のあるバッファー、有効量のブロテアーゼ阻害剤を 含有する溶液に直接動物源から回収し；赤血球を該血液から除去し；そして 少なくとも約２重量％の適当な安定化炭水化物を加える連続工程から成る方法。 ５２．上記回収工程において、上記バッファーがＨＥＰＥＳバッファーから成り 、上記阻害剤がアブロチニンから成り、およびクエン酸が付加的に含有される請 求項５１記載の方法。 ５３．上記回収工程において、上記溶液がそれぞれ少なくとも約０．２５Ｍ、５ Ｕ／ｍｌ、及び３重量％のＨＥＰＥＳヘミーナトリウム、アブロチニンおよびク エン酸ナトリウムから成る請求項５２記載の方法。 ５４．上記添加工程において、上記炭水化物がシュクロースである請求項５２ま たは５３に記載の方法。 ５５．上記方法が 上記対照中に少なくとも０．０８重量％のアジ化ナトリウム量となるようにアジ 化ナトリウムを添加する工程から付加的に成る請求項５４記載の方法。 ５６．上記方法が 上記対照中に少なくとも０．０２重量％のチメロザール量となるようにチメロザ ールを添加する工程から付加的に成る請求項５５記載の方法。 ５７．上記回収工程において、上記血液が非−霊長類血液であり、および約９容 量部の該血液を約１容量部の上記溶液に回収する請求項５１記載の方法。 ５８．安定な凝固対照の製造方法であって、血液血漿を提供し；そして 該対照に少なくともひとつの安定な精製凝固因子を加える工程から成る方法。 ５９．上記血液血漿がヒト血漿であり、上記因子が非−霊長類動物から得た第Ｉ Ｉ、Ｖ、ＶＩＩＩまたはＸ因子である請求項５８記載の方法。 ６０．上記因子がウシまたはブタから得た第Ｖ、またはＶＩＩＩ因子である請求 項５８記載の方法。 ６１．上記血漿がヒト血漿である請求項６０記載の方法。 ６２．上記血漿がウマ血漿である請求項６０記載の方法。 ６３．上記因子が第Ｖ因子である請求項６０記載の方法。 ６４．上記因子がウマから得た第ＩＩ因子である請求項５８記載の方法。 ６５．上記因子が、生理的ｐＨを維持するに効果的なバッファー、ブロテアーゼ 阻害剤及びクエン酸を含有する溶液に動物から直接回収した血液から得られる請 求項５８記載の方法。