JPH05501117A - １，３―オキサチオランヌクレオシド類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １．３−オキサチオランヌクレオノド類似体本発明はヌクレオノド類似体および その薬物としての用途に関する。さらに詳しくは本発明は１．３−オキサチオラ ンヌクレオシド類似体、その薬学的製剤およびウィルス感染症の治療への用途に 関する。

式（１）の化合物 は、ＢＣＨ−１８９あるいはＮＧＦＢ−２１として知られているが、抗ウィルス 活性、特にＡＩＤＳの病原因子であるヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ−３）に対 する抗ウィルス活性を有することが記載されている（５ｔｈ　Ａｎｔｉ−Ａｉｄ ｓ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ。

Ｍｏｎｔｒｅａｌ、Ｃａｎａｄａ　５ｔｈ−９ｔｈ　Ｊｕｎｅ　１９８９：　Ａ ｂｓｔｒａｃｔｓ　Ｔ、Ｃ，０，１ａｎｄ　Ｍ、Ｃ，Ｐ、６３；欧州特許公開公 報Ｎｏ、　０３８２５６２）。

式（ｒ）の化合物は式（Ｉ−１）と（１−２）（７）ｌ）の対掌体のラセミ混合 物であり、ラ−ｃ　ミＱ合物として記載され、テストされている。

現在、ＨＩＶにより引き起こされる症状の治療に適用されている唯一の薬剤は３ −−アジド−３−一デオ牛シチミジン（ＡＺＴ、シトプシン（ｚｉｄｏｖｕｄｉ ｎｅ）、ＢＷ　５０９Ｕ）である。

しかし、この化合物は重大な副作用を示す傾向にあり、適用され得ないか、もし くは適用されたとしても多数の患者で投薬中止せざるを得ない。従って、ＨＩＶ に盲動であるが顕著に改良された治療指数を有する化合物を提供する継続的な要 求がある。

驚くべきことに、我々は式（Ｉ）の化合物の対掌体がＨＩＶに対して同等の効果 を有するが、対掌体の一方（（−）一対掌体）が他の対掌体よりもかなり細胞毒 性が低いことを発見した。従って、本発明の第一の側面として式（Ｉ）の化合物 の（−）対掌体（即ち左旋性の対掌体）と、その薬学的に許容できる誘導体が提 供される。

（−）対掌体は（−）−二二−４−アミン−１＝（２−ヒトＣキシメチル−１， ３−オキサチオラン−５−イル）−（ＬＨ）−ピリミジン−２−オン（以下、化 合物（Ａ）と略す）という化学名を有する。この化合物は（２Ｒ，ンス）−４− アミ／−１−（２−ヒドロキシメチル−１，３−オキサチオラン−５−イル）− （ＩＨ）−ピリミジンー２−オンという名前を有し、式（Ｉ　−１）の絶対配置 を有する。

好ましくは、化合物Ａは対応する（＋）一対掌体を実質的に含まないで提供され 、換言すると（＋）一対掌体が約５％Ｗ／Ｗ以上存在せず、好ましくは約２％以 上存在せず、特に好ましくは約１％Ｗ／Ｗより少ししか存在しない。

”薬学的に許容できる誘導体”とは化合物（Ａ）の薬学的に許容できるあらゆる 塩、エステルもしくはこのようなエステルの塩、または患者に投与する際に化合 物（Ａ）あるいはその抗ウイルス活性代謝物もしくは残基を（直接または間接的 に）提供できる任意の化合物を意味する。

当業者は、化合物（Ａ）が塩基部分とオキサチオラン環のヒトＣキシメチル基の 両方の官能基で修飾されて薬学的に許容できる誘導体が提供されることを認識す ることができる。

このようなすべての官能基での修飾は本発明の範囲に包含される。しかしながら 、その中でも特に興味深いのは、オキサチオラン環の２−ヒドロキシメチル基の 修飾により得られる薬学的に許容される誘導体である。

化合物（Ａ）の好ましいエステルは２−ヒトＣキシメチル含する。エステルの非 カルボニル部位Ｒは水素、直鎖または分枝鎖のアルキル（例えば、メチル、エチ ル、ｎ−プロピル、ｔ−ブチル、ｎ−ブチル）、アルフキ／アルキル（例えばメ トキシメチル）、アラルキル（例えばベンジル）、アリルオ牛シアルキル（例え ば、フェノ牛ジメチル）、アワル（例えば、ハロゲン、Ｃ１−４のアルキルある いはＣ１−４のアルコキシで置換されていてもよいフェニル）、アルキルスルホ ニルまたはアラルキルスルホニル等のスルホン酸エステル（例えば、メタンスル ホニル）、アミノ酸エステル（例えばＬ−バリルまたはＬ−インロイシル）およ びモノ−、ジーまたはトリリン酸エステルからなる群から選ばれる。

上述のエステルに関して、特に限定しない限り、どのようなアルキル基も１から １６の炭素原子を含むのが好ましく、特に、１から４の炭素原子が好ましい。こ のようなエステルに存在するどのようなアリル基もフェニル基を好ましく包含す る。

特に、エステルは、Ｃｌ−１６のアルキルエステル、未置換のベンジルエステル または少なくとも１個のハロゲン（臭素、塩素、フッ素またはヨウ素ＬＣＩ−６ のアルキル、Ｃ１−６のアルコキシ、ニトロ、またはトリフルオロメチル基で置 換されたベンジルエステルであり得ル。

化合物（Ａ）の薬学的に許容できる塩には薬学的に許容できる無機もしくは有機 の酸または塩基に由来するものが包含される。適当な酸としては、塩酸、臭化水 素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、 乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエ ン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホ ン酸およびベンゼンスルホン酸が包含される。他の酸、例えば、ンユウ酸などの ように、それ自身薬学的に許容できないとしても、本発明の化合物およびその薬 学的に許容できる酸の付加塩を得るための中間体として有用であり得る。

適当な塩基に由来する塩としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）、アル カリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウムおよびＮＲ４°（ＲはＣ １−４アルキル）塩が包含される。

本発明に従う化合物には、以降、化合物（Ａ）およびその薬学的に許容できる誘 導体が包含される。

本発明の化合物はそれ自身が抗ウィルス活性を有するかおよび／またはそのよう な化合物に代謝され得る。特にこれらの化合物はレトロウィルスの複製の阻害に 有効であり、このレトロウィルスは、特にＡＩＤＳの原因となるヒト免疫不全ウ ィルス（ＨＩＶ−３）などのヒトレトロウィルスを包含する。

従って、本発明の化合物（Ａ）あるいはその薬学的に許容できる誘導体の、特に 抗ウィルス剤、例えばレトロウィルス感染症の治療に用いられる有効な治療剤と しての使用という別の面が提供される。

さらに、あるいは別の面でウィルス感染症、特に例えばヒトを含む哺乳動物のＨ ＩＶなどのレトロウィルスによる感染症の治療方法が提供され、この治療方法は 、化合物（Ａ）あるいはその薬学的に許容できる誘導体を投与することを包含す る。

さらにまた、化合物（Ａ）あるいはその薬学的に許容できる誘導体の、ウィルス 感染症治療用の薬剤の製造への使用という別の面が提供される。

また、本発明の化合物は、たとえばエイズ関連症候群（ＡＲＣ）、進行性全身性 リンパ節症（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄＩｙｍｐｈａｄ ｅｎｏｐａｔｈｙ）　（ＰＧＬ）などのエイズ関連症状、エイズ関連神経症状（ 例えば痴呆または神経性不全対マヒ（ｔｒｏｐｉｃａｌｐａｒａｐａｒｅｓｉｓ ）　）、抗ＨＩＶ抗体陽性あるいはＨＩＶ陽性状態、カポジ肉腫、血小板減少性 紫斑病および例えば二ニーモジステイス　カリニ等による日和見感染症の治療に も有用である。

本発明の化合物はまた、抗ＨＩＶ抗体または）（ＩＶ抗原陽性者が臨床上の病気 まで進行するのを防止することおよびＨＴＶにさらされた後の感染の予防に有用 である。

化合物（Ａ）およびその薬学的に許容できる誘導体は、盃ルス汚染の防止にもま た有用であり得る。

、当業者には、ここでの治療に関する記述は既に感染した場合または症候がある 場合の治療と同様予防にまで拡張できることは理解できる。

さらに、本発明の化合物を治療に用いる。のに必要とされる量は、選択した特定 の化合物だけでなく、投与経路、治療する病気の状態、年齢、患者の状態により 変化することおよび最終的には担当の医者または獣医の裁量に委ねられることも また理解される。しかし、一般的には適当な投与量は一日に約０，１から約７５ ０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．５から６０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲、最も好ま しくは１から２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。

所望の投与量は、−回投与で投与するのが好都合であるが、適当な間隔をあけた 分割投与、たとえば、−日に２回、３回、４回あるいはそれ以上の分割投与で投 与され得る。　本化合物は好都合には単位投与量形態、例えば、活性成分を１０ から１５００ｍｇ、好ましくは２０から１０００ｍｇ、最も好ましくは５０から ７００ｍｇ含む単位投与量形態で投薬できる。

理想的には、活性化合物の血漿中での最高濃度が約１から７５μＭ１　好ましく は約２から５０μＭ、最も好ましくは約３から約３０μＭを達成するように投与 し得る。これは、例えば、活性成分の生理食塩水中でもよい０．１から５％溶液 の静脈注射、または約１から１００ｍｇの活性成分を含有する丸薬として経口投 与することにより達成され得る。望ましい血中レベルは約０．０１から約５．０ ｍｇ／　ｋｇ／時間で供給される連続的な点滴によりあるいは活性成分を約０４ から１５ｍｇ／ｋｇ含む間欠的点滴により達成され得る。

治療に用いるために、本発明の化合物は化学原料のままで投与され得るが、薬学 的製剤として活性成分を提供する方が好ましい。

従って、本発明はさらに、化合物（Ａ）またはその薬、学的に許容できる誘導体 と１つまたはそれ以上の薬学的に許容できるキャリアーと、随意に他の治療およ び／または予防剤を同時に包含してもよい薬学的製剤を提供する。キャリアーは 他の製剤の活性成分と適合し、その患者に有毒ではない意味で゛許容できる″　 ものでなければならない。

薬学的製剤は経口、直腸、鼻、局所（口、舌下を含む）、腟あるいは非経口（筋 肉内、皮下および静脈を含む）投与あるいは吸入もしくは吹き付けによる投与に 適した形態を包含する。製剤は、それが適切な場合には、個別の投与単位として 提供され得、製剤分野の当業者にはよく知られた任意の方法で調製され得る。す べての方法は、活性化合物を液体のキャリアーあるいは微細に粉砕された固体の キャリアーまたはその両者と組み合わせるようにする段階、および必要であれば この生成物を所望の形状に成形する段階を包含する。

経口投与に適した薬学的製剤は、好都合には、活性成分の所定量を含有するカプ セル、カセットあるいは錠剤などの個別の単位で提供され得、それぞれは活性成 分を粉末もしくは顆粒、溶液、懸濁液もしくは乳化物などの形態で含有する。

活性成分はまた、丸薬、なめ薬あるいはペーストとしても提供され得る。経口投 与用の錠剤やカプセルは結合剤、充填剤、滑沢剤、分散剤あるいはｆｉ潤剤など の通常用いられる賦形剤を含み得る。錠剤は当業者によく知られた方法によって コートされ得る。経口液体製剤は、例えば、水性のもしくは油状の懸濁液、溶液 、乳化液、シロップあるいはエリキシル剤の形態を取り得、または使用前に水も しくは他の適当なビヒクルで調製するための乾燥品としても提供され得る。この ような液体製剤は懸濁剤、乳化剤、非水性ビヒクル（食用油を包含し得る）もし くは防腐剤などの通常用いられる添加剤を含み得る。

本発明による化合物は非経口投与（例えば単回注射、あるいは連続的な点滴など の注射）用に製剤され得、アンプル、予め充填した注射器、小量の点滴等の単位 量投与形態もしくは防腐剤の添加された多投与量コンテナ（ｃｏｎｔａｉｎｅｒ ）としても提供され得る。組成物は、油性のまたは水性のビヒクル中で懸濁液、 溶液、乳化液の形態をとり得、製剤用剤例えば懸濁剤、安定剤および／または分 散剤を包含し得る。あるいは、活性成分は、殺菌された固体から無菌的に単離ま たは溶液から凍結乾燥して得られる粉末形態で存在し得、使用前に例えば殺菌さ れた、発熱物質を含有しない（ｐｙｒｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ）水などの適当なビヒ クルで調製して使用される。

上皮に対する局部投与のために、本発明の化合物は軟膏、クリームあるいはロー ションまたは経皮用貼付剤として製剤され得る。軟膏とクリームは、例えば、水 性または油性のベースと適当な粘調剤および／またはゲル化剤を添加して製剤さ れ得る。ローションは水性および油性のベースから製剤され得、一般的にまた１ またはそれ以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、粘調剤あるいは着色剤を含 有し得る。

口内局部投与に適した製剤は、通常ショ糖とアカシアまたはトララガントゴムか らなる香料ベース中に活性成分を包含する甘味入り錠剤、ゼラチン、グリセリン あるいはショ糖及びアカシア等の不活硅なベース中に活性成分を包含する口中剤 および適当な溶剤キャリアー中に活性成分を包含する口中洗浄剤を包含する。

キャリアーが固体である直腸投与に適した薬学的製剤は、最も好ましくは単位投 与量の座薬として提供される。適当なキャリアーとしてはココアバターおよび当 業者に通常使用される物質が包含される。座薬は好ましくは活性化合物と軟化ま たは融解したキャリアーとを混合後冷却し、型で成形して調製され得る。

膣投与に適した製剤は、活性成分の他に当業者に適当と考えられるキャリアーを 有するペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、軟膏（ｐａｓｔｅ）、泡ある いはスプレーが提供され得る。

鼻腔内投与に対しては、本発明の化合物は液体スプレーあるいは分散粉または滴 下剤（ｄｒｏｐ）として使用され得る。

滴下剤は１またはそれ以上の分散剤、溶解剤あるいは懸濁剤を包含する水性ある いは非水性のベースで製剤され得る。

液体スプレーは加圧缶から好都合にスプレーできる。

吸入による投与においては、本発明の化合物は、吹き付は器、噴霧器、加圧缶あ るいはエアロゾルスプレーに使用可能な他の便利な手段から、好適にスプレーさ れる。加圧缶は適当な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフ ルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素あるいは他の適当な ガスを含有し得る。加圧エアロゾルの場合には、投与量は計量表示された量を噴 霧するパルプで決定され得る。

あるいは吸入または吹き付けによる投与に対して、本発明の化合物は乾燥粉末組 成物、例えば、化合物と乳糖あるいは澱粉などの適当な粉末ベースとの混合粉の 形態を取り得る。

粉末組成物は、たとえばカプセル、カートリッジ、または例えばゼラチン、発泡 パックなどの単位投与量形態で提供され得、それらから吸入器あるいは吹き付は 器の補助により、粉末が投与される。

所望の場合には、活性成分を継続的に放出するのに適するようにした上述の製剤 を使用し得る。

本発明の薬学的組成物は他の治療剤例えば他の抗感染剤と組み合わせても使用し 得る。特に本発明の化合物は公知の抗ウィルス剤とともに使用し得る。

従って、本発明は別の面として、化合物（Ａ）あるいはその生理学的に許容でき る誘導体と他の治療活性薬剤特に抗ウィルス剤を含有する配合を提供する。

上記配合は、好都合には薬学的製剤の形で使用に供され得る。そしてこの薬学的 製剤は上記定義した配合とともに薬学的に許容し得るキャリアーを包含し、従っ て本発明の別の面を包含する。

このような配合に使用し得る適当な治療剤として、非環式ヌクレオチド、例えば アングロビル、ガンシクロビル、イン　。

ターフエロン、例えばα、β、またはγ−インターフェロン、腎臓排泄阻害剤（ ｒｅｎａｌ　ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒ）例えばプロペ不シド、 ヌクレオシド輸送阻害剤、例えばジビリダモール、２−．３−−ジデオキシヌク レオシド、例えばＡＺＴ、２−．３−−ジデオキシシチジン、２−．３”−ジデ オキシアデノシン、２′、３−−ジデオキシイノシン、２−．３−−ジデオキシ チミジン、２−１３−−ジデオキシ−２−，３”−ジデヒドロチミジンおよび２ −．３−−ジデオキシ−２−，３”−ジデヒドロシチジン、免疫調節剤、例えば インターロイキンｎ　（ＩＬ２）　、顆粒球マクロファージコロニー活性化因子 （ＧＭ−ＣＳＦ）、エリスロポエチン、アンプリゲン（ａｍｐ　１　ｉｇｅｎ　 ）、チモモデュリン（ｔｈｙｍｏｍｏｄｕｌｉｎ）、チモベンチン（ｔｈｙｍｏ ｐｅｎｔｉｎ）、フォスカーネット（ｆｏｓｃａｒｎｅｔ）、リバビリン（ｒｉ ｂａｖｉｒｉｎ）、およびＨＩＶのＣＤ４レセプターへの結合阻害剤、例えば可 溶化ＣＤ４、ＣＤ４断片、ＣＤ４ハイブリッド分子、グリコジル化阻害剤、例え ば２−デオキシ−〇−グルコース、カスタノスペルミン（ｃａｓｔａｎｏｓｐｅ ｒｍｉｎｅ）およびｌ−デオキシノジリマイシン（ｄｅｏｘｙｎｏｊ　１ｒｉＩ ｌｙｃｉｎ）が含まれる。

上記配合剤の個々の成分は連続的に、あるいは同時に別々または一体とした薬学 的製剤として投与され得る。

化合物（Ａ）あるいはその薬学的に許容できる誘導体を同一のウィルスに対して 活性を有する別の治療剤とともに使用する場合、それぞれの化合物の投与量は、 その化合物が単独で使用された場合と同一か異なり得る。適当な投与量は当業者 には容易に理解されるであろう。

化合物（Ａ）およびその薬学的に許容できる誘導体は類似構造を育する化合物の 合成の分野において知られているあらゆる方法、例えば欧州特許公開公報Ｎｏ、 　０３８２５６２に記載の方法で製造し得る。

本発明の以下に記載されたある種の方法で、化合物（Ａ）の所望の立体配置が、 光学的に純粋な出発物質から始めるか、合成の適当な段階でラセミ化合物から分 割することにより得られ得ることは、当業者には理解できる。すべての工程にお いて、光学的に純粋な所望の生産物はそれぞれの反応の最終生産物を光学分割す ることにより得られ得る。

このようなプロセス（Ａ）の一つにおいて、式（■）の１．３−オキサチオラン は、 式中、アノメリックな基りが置換可能な基であり、適当な塩基と反応する。適当 な基りは、−０Ｒ（ここで、Ｒはアルキル基、例えばメチルなどの０１−６アル キル基あるいはアシル基、例えばアセチルなどのＣ１−６アシル基）を、または ハロゲン例えばヨウ素、臭素あるいは塩素を包含する。

式■の化合物は好適にはシトシンあるいはその適当なビシミジン塩基前駆体くへ 牛サメチルジシラザンなどのシリル化剤で予めシリル化しておく）と、塩化メチ レンなどの適当な溶媒中で、たとえば四塩化チタン、四塩化スズなどのスズ（Ｔ Ｖ）化合物、またはトリメチルシリルトリフレート（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌ ｙｌｔｒ４ｆｌａｔｅ）などのルイス酸と反応させ得る。

式（■）の１．３−オキサチオランは、例えば、式（■）のアルデヒドと式（Ｖ Ｉ）のメルカプトアセタールとをトルエン等の適当な溶媒中で酸触媒たとえば塩 化亜鉛などのルイス酸の存在下、調製され得る。

ＨＳ　ＣＨ２ＣＨ（ＯＣ２Ｈｓ）　２　（ＶＴ）Ｃ６Ｈ５ＣＯ２ＣＨ２ＣＨＯ（ ■） 式（Ｖｌ）のメルカプトアセタールは当業者に公知の方法、例えば、Ｇ、Ｈｅ５ ｓｅ　ａｎｄ　１．Ｊｏｒｄｅｒ、Ｃｈｅｍ、’　Ｂｅｒ　８５．　９２４−９ ３２　（１９５２）により調製され得る。

式（■）のアルデヒドは当業者に公知の方法、例えば、Ｅ。

Ｇ、Ｈａｌｌｏｑｕｉｓｔ　ａｎｄ　Ｈ，Ｈｉｂｂｅｒｔ、Ｃａｎ、Ｊ、Ｒｅ５ ｅａｒｃｈ　Ｂｑ、１２９−１３６　＜１９３３）により調製され得る。好適に は、粗アルデヒド（■）は結晶性亜硫酸水素塩付加物に変換し、引続き遊離のア ルデヒドに再変換されて精製され得る。

第二のプロセス（Ｂ）において、化合物（Ａ）は式（ＩＸ）の化合物の塩基交換 反応により得られる。

ここに、Ｂはシトシンに変換可能な塩基である。このような変換反応は間車な化 学的変換（例えばウラシル塩基のシトシンへの変換）あるいはデオキシリボース 転移酵素（ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｓｙｌ　ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）による酵素的 変換により達成され得る。

塩基交換反応におけるこのような方法および条件はヌクレオシド化学の分野にお ける当業者にはよく知られている。

第三のプロセス（Ｃ）において、式（ＸＩ）の化合物は、ヌクレオシド化学分野 の当業者によく知られた方法によリアノメリ、りなＮ）１２基をシトノン塩基に 変換することにより化合物（Ａ）に変換され得る。

上記した多数の反応は、ヌクレオシド合成の面において広範囲に報告されている ものである。例えばＮｕｃｌｅｏｓｉｄｅ　Ａｎａｌｏ　ｓ　−Ｃｈｅｍｉｓｔ ｒ　Ｂｉｏｌｏ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ａ　１ｉｃａｔｉｏｎｓ　Ｒ。

Ｔ、Ｗａｌｋｅｒ　らｇ、Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ、ｆｌｅｗ　Ｙｏｒｋ（１ ９７９）の１６５（９２頁、Ｔ、　Ｕｅｄａ　ｉｎ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ 　Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ　ａｎｄ　ＮｕｃＩｅｏｔｉｄｅｓ。

Ｖｏｌ　ｌ、　Ｌ　Ｂ　Ｔｏｗｎｓｅｎｄ編、　Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ、Ｎ ｅｗ　Ｙｏｒｋ　（１９８８）の１６５−１９２Ｍなどの記載は、本明細書中に 文献として包含される。

上記反応は、官能基を保護された出発物質を使用することを要求し、あるいは好 都合にこれを適用し得る。従って、脱保護が中間または最終段階で所望の化合物 を生じるために要求され得る。官能基の保護あるいは脱保護は一般的な方法で達 成され得る。このように、例えば、アミノ基はアラルキル（例えばベンジル）、 アシル、アシル（例えば２．４−ジニトロフェニル）あるいはシリルから選ばれ る基で保護され得る。

その後の保護基の除去は、所望すれば、通常の条件下で加水分解あるいは水素化 分解のどちらかの適当な方法で達成される。ヒドロキシル基は一般的な任意のヒ ドロキシル保護基例えばＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａ ｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ’　Ｅｄ、　Ｊ、　Ｐ。

Ｗ、　ＭｃＯｍｉｅ　（Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ、　１９７３）あるいは°Ｐ ｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒ。

ｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　’　ｂｙ　Ｔｈｅｏｄｏ ｒａ　Ｗ、　Ｇｒｅｅｎｅ　（Ｊｏｈｎ＊１ｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ、　１９ ８１）に記載されている保護基で保護され得る。適当なヒドロキシル保護基の例 としてはアルキル（例えばメチル、ｔ−ブチルあるいはメトキシメチル）、アラ ルキル（例えばベンジル、ジフェニルメチルあるいはトリフェニルメチル）、テ トラヒドロピラニル基等の複素環基、アシル基（例えばアセチルまたはベンゾイ ル）およびトリアルキルシリル（例えばｔ−ブチルジメチルシリル）などのシリ ル基から選ばれる基が包含される。ヒドロキシル保護基は一般的な方法で除去さ れ得る。例えばアルキル、シリル、アシルおよび複素環基はソルボリンス、例え ば酸性または塩基性条件下での加水分解で除去され得る。トリフェニルメチル基 等のアラルキル基は同様にソルボリシス、例えば酸性条件下での加水分解で除去 され得る。ベンジル基等のアラルキル基は例えばＢＦ３／エテレート（ｅｔｈｅ ｒａｔｅ）と無水酢酸で処理することにより開裂され得、生成した酢酸基は合成 の適当な段階で除去され得る。シリル基はまた好適には、例えばテトラ−ｎ−ブ チルアンモニウムフルオライド等のフン素イオン源を用いて除去され得る。

上記プロセス中、化合物（Ａ）は一般的に’ｙ７とトランス異性体の混合物とし て得られるが、Ｚ五異性体が目的の化合グラフィーあるいは分別結晶法により直 接あるいはその適当な誘導体として分離され得る。例えば酢酸エステル（例えば 無水酢酸で調製）は、分離後、もとの化合物に（例えばメタノール性アンモニア で脱アセチル化して）転換され得る。

本発明の化合物の薬学的に許容できる塩は、米国特許Ｎｏ、　４、３８３．１１ ４に記載された方法で調製し得る。その記載は本明細書に参考として取り込まれ る。例えば、化合物（Ａ）の酸付加塩を調製したい場合には、上記いずれの手順 による生成物も、生じた遊離の塩基を一般的な方法を用いて適当な酸で処理する ことにより、塩に変換され得る。薬学的に許容できる酸付加塩は、遊離の塩基を 適当な酸と反応させることにより調製され得、反応は適当な溶媒例えばエステル （例えば酢酸エチル）あるいはアルコール（例えばメタノール、エタノールまた はイソプロパツール）の存在下でもよい。無機の塩基塩はもとの化合物をアルコ 牛シト（例えばナトリウムメト牛シト）などの適当な塩基と反応させることによ り調製され得、反応はアルコール（例えばメタノール）などの溶媒の存在下でも よい。薬学的に許容できる塩はまた、一般的な方法で、他の薬学的に許容できる 塩を包含する、化合物（Ａ）の別の塩からも調製され得る。

化合物（Ａ）は、薬学的に許容できるリン酸エステルまたは他のエステルに変換 され得、この変換には場合により、例えば三塩化リンなどのリン酸化剤、または 酸ハライドあるいは酸無水物などのエステル化剤を用いる反応により行われ得る 。化合物（Ａ）のエステルまたは塩は例えば加水分解によりもとの化合物に変換 され得る。

最終生成物、中間体または出発物質の光学分割は当業者に公知の方法で達成され 得る。例えば、Ｅ、　Ｌ、　Ｅｌｉｅｌによる’Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒ ｙ　ｏｆ　Ｃａｒｂｏｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ’　（ＭｃＧｒａｗ　Ｈ４１ｌ。

１９６２）　および　Ｓ、　Ｈ，Ｗｉｌｅｎによる°Ｔａｂｌｅｓ　ｏｆ　Ｒｅ ｓｏｌｖｉｎｇＡｇｅｎｔｓ’を薔照。

化合物（Ａ）は例えばキラルＨＰＬＣを用いて得られ、アンル化β−サイクロデ キストリンあるいはセルローストリアセテートなどの適切な固定相、例えばエタ ノールなどのアルコール、あるいはトリエチルアンモニウムアセテートなどの水 性溶媒が使用される。別の方法では、化合物は、例えばシチジンデアミナーゼな どの適当な酵素に仲介される立体選択的異化作用または５−ヌクレオチダーゼを 用いる適当な誘導体の選択的酵素分解で光学分割され得る。光学分割を酵素で行 う場合には、酵素は溶液状態で用いられるか、より好適には固定化された形で用 いられる。酵素は、当業者に公知の方法、例えばユーバジソトＣ等の樹脂上に吸 着させる方法で固定化され得る。

本発明は以下の実施例で更に説明されるが、実施例は本発明を限定するものでは ない。

すべての温度は摂氏で表している。

虫！」り一 ５−メトキシ−１，３−オキサチオラン−２−メタノール　ベンゾエート メルカプトアセトアルデヒド、ジメチルアセタール（３４，２ｇ）およびベンゾ イルオキシ　アセトアルヒト（４８，３ｇ）のトルエフ　（１３００ｍｌ）溶液 を攪拌しながら、塩化亜鉛（１，６ｇ）の熱メタノール溶液（１５ｍｌ）を添加 し、次に５０分間窒素下に加熱還流した。冷却した混合物を濃縮し、トルエフで 希釈し、珪藻土で、１！過した。集め７：ｌＩ＠液とトルエフを重炭酸ナトリウ ム飽和水溶液（２回）とブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯａ）　ｔ。

た後、油状までエバポレートしてシリカゲル（２ｋｇ、メルク９３８５）のカラ ムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルムで溶出して、油状の厩肥生成物（４ ５，１ｇ）をアノマーの混合物（約１：１）として得７：。

ＪＩＨ印ｆ（４’５Ｏ−ａ６１　：、ｌ−２，３Ｔ４Ｈ１，３，４２１ＳＨ１゜ ４．４−４．５　Ｃ４Ｆｌ＋、　５．４Ｌ（Ｚ３ｉ＋、　３−４６　ｆ本１．５ ．５４　ｆ１３１１．５．５コｆｌＨ＋、　７．４５　（４g７゜ 微細に粉にしたウラシル（９，６２ｇ）　、ヘキサメチルジシラザン（Ｓｏｕｌ ）および硫酸アンモニウム（３０ｍｇ）を窒素下、清澄な液になるまで加熱還流 した。冷却後無色の油状までエバポレートし、窒素雰囲気下、アセトニトリル（ ｌｏａＩｌｌ）　ニ溶解した。溶解液を、５−メトキシ−１，３−才キサチオラ ン−２−メタノールヘンシェード（中Ｍ体１　）　、（１９，４３ｇンのアセト ニトリル（６００ｍ１）溶液の水冷攪拌液に添加し、トリフルオロメタンスルフ オン酸トリメチルシリル（１４，７ｍｔ）を加えた。アイスバスを除き、窒素雰 囲気下４５５分加熱リフラックスた。冷却後エバボレートして残虐を１ｋｇのノ リカゲル（メルク９３８５）のカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム ／メタノール　９：　１で溶出して、ｆＷ！！した。適切な画分を冷却し、エバ ボレートして粗残渣を得た。これを最小量の熱メタノール（約１２００ｍ１）か ら段階的に結晶化し、厩肥化合物（６，３２ｇ）の自互結晶を得た。

ＩＨ船＋　ｄ’Ｄと０１６　ＬＬ、３６　（話、ｂｓｌ、　７．５０−ａ、ｏｏ 　ｊ６ｄ、副、　６．２ＯＬ藷、こ）、５．４６（＝：！、二ｌ、４，６２　（ ２も　叫、３．４８　（ｚＨ，二）、　３．２５　（Ｌ乙　二）。

曳１生主 十　−シス　−４−アミノ−１−２−ベンゾイルオキシメチル−１，３−オキサ チオラン−５−イル　−　ＩＨ−ピリミジンシトシン（２０，７０５ｇ）と硫酸 アンモニア（数ｍｇ）のへ牛サメチルジシラザン（１１０ｍｌ）　ｓＩ４濁液を 攪拌し、２Ｉ／２時間、穿索雰囲気下還流温度で加熱した。エバボレートして溶 媒を除去し、固体残渣は乾燥アセトニトリル（３５０１１１）に溶解した。

この溶液をフレキシブルニードルテクニック（ｆｌｅｘｆｂｌｅ　ｎａｅｄｌｅ 　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）で、窒素雰囲気下に、攪拌、水冷しな５−メトキシ− １，３−オキサチオラン−２−メタノール　ベンゾエート（中間体１　）　（４ ３，５７ｇ）のアセトニトリル（６５０ｍｌ）溶液に移した。トリフルオロメタ ンスルフオン酸トリメチルシリル（３３ｍｌ）を加え、室温まで温め（１１／２ 時間）た後、−晩加熱還流した。残虐の混合物は濃縮し、重炭酸ナトＩＪウム飽 和水溶液（５００ｍ１）で希釈した後、酢酸エチル（５００ｍ１．３回）で抽出 した。集めた抽出物は水（２５０ＩＩｌｌ、２回）とブライン（２５０ｍ１）で 洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した後、泡末までエバボレートしてシリカゲル カラムクロマトグラフィー（６（ｌｏｇ、メルク７７３４）にかけ、酢酸エチル −メタノール混合液で溶出し、アノマーの混合物（約１：１．３１．５９ｇ）を 得た。混合物は水（４５ｍｌ）とエタノール（９，ＯＬＩ＋１）で固形として結 晶化しく１０゜２３ｇ）、エタノール（１２０ｍ１）と水（３０Ｉｌｌｌ）で再 結晶して厩肥生成物を白色固形物として得た（　９．２５ｇ）。

；χコ４ｘ　＋Ｍ＝ＯＨ１２２り、４：ｒｗ　（Ｂ−６１０１；　Ｚ１２．４ｍ ｍ　（Ｅ　２９３）ｌｌＪＬ口 ；　１ＨＮＭＲ＋ＤＭ５０　ｄ６１５３．１４　＋１）＋１．３．５０　＋ＩＨ Ｉ、　４．０７　（２！’、１．５．５２　ＣＩＨＩ。

５．６６　（１εｌ、　ｇ、ｚｓ　ＨＨＩ、　７．２２　＋２Ｍ＋、　７．５６ 　＋２Ｆ、ｌ、　７．７２　（２Ｈ）、　ａ、Ｌｏ　＋２ＦP゜ Ｌ皮工ｌと アセトニトリル（１２０ｍｌ）に１．　２．４−トリアゾール（１１，６５ｇ） を懸濁した攪拌、水冷液に塩化ホスホリル（７，０ｖｌ）　’Ｅ：滴下しながら 加え、次に内部の温度を１５°Ｃ以下に保ちながら、トリエチルアミン（２２， ７ｍ１）を滴下した。１Ｏ分後、アセトニトリル（３３０ｍｌ）中の（±）−シ ス−１−（２−ベンゾイルオキシメチル−１，３−オキサチオラン−５−イル） −（ＬＨ）−ピリミジン−２−４−ジオン（中間体２）　（６，２７ｇ）を徐々 に加えた。室温で、−晩攪拌を継続した。混合液をアイスバスで冷却し、トリエ チルアミン（３０ｍｌ）を徐々に加えた後、水を（２１ｍｌ）加えた。得られた 溶液をエバボレートし、残渣を重炭酸ナトリウム飽和水溶液（４００ｍ１）とク ロロホルム（３ｘ２００ｍｌ）に分配した。集めたクロロホルム抽出液を乾燥し 、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、エバボレートして粗残渣（９７ｇ）を得 た。残渣は１．４−ジオキサン（２４０ｍｌ）に溶解し濃アンモニア水（比重０ ．８８０．５０ｍ１＞を添加した。１１／２時間後、溶液をエバボレートし、残 渣をメタノールに溶解した。固体の沈澱が生じ、これは濾別した。母液はシリカ ゲル（メルク９３８５．６００ｇ）クロマトグラフィーで精製した。好適な画分 をプールし、エバボレートして厩肥化合物の淡黄褐色の固形物（２、１８ｇ）を 得、これは方法（ａ）で得られたものと同一であった。

（以下余白） 実ａｅ−二 （シス）−４−アミノ−１−（２−ペンゾイルオニンメチル−１，３−オキサチ オラン−５−イル）−（ＬＨ）−ピリミジン−２−オン（中間体３）　（８，１ ９ｇ）と７７バーライトＩＲＡ−４００（ＯＨ）樹脂（８，２４ｇ）　（７）　 メ９　／　−ル’９濁液（２５０ｍｌ）を攪拌し、１１７４時間、加熱、還流し 二。固形物を濾過で除き、メタノールで洗浄した。濾液を集め、エバボレートし 、残渣を酢酸エチル（８０＋ａｌ）で粉にして、生じπ古色結晶を濾過して集め 、厩肥化合物（５，０９ｇ）を得た。

：１１（ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６１３．０４　（’−Ｈ）、３．４０　（１！’ 、１．３．７３　＋２Ｆ、ｌ、　５．ＬＢ（ＬＨＩ、５．２９　＋ＩＨＩ、５． ７３　＋１８１．６．２１　＋ＬＨ＋、７．１９　ｃ２Ｈ１，７，８１（ＩＦ、 Ｉ。

（Ａ）　実施例１のラセミ生成物（２５ｍｇ）を以下の条件下、分離層ＨＰＬＣ に供した。

カラム：　メルク社製ハイパーセルローストリアセテート（Ｈｉｂａｒ　ｃｅｌ ｌｕｒｏｓｅ　ｔｒｊａｅｅｔａｔｅ）Ｚ５０ｘｌＯａｍ、　ＬＯｕ 溶出液：　エタノール 流量　：　３ｍｌ／分 検出　：　紫外線、２７０ｎコ 温度　：　室温 好適な画分をプールしてエバボレートし、　（２Ｒ１シス）−４−アミノ−１− （２−ヒドロキシメチル−１，３−オキサチオランー５−イル）−（ＬＨ）−ピ リミジン−２−オニ／　（６，８ｍｇ、ｅ、ｅ、約１００％）と（２Ｓ１　シス ）−４−アミノ−１−（２−ヒドロキシメチル−１，３−オキサチオラン−５− イル）−ぐＩＨ）−ピリミジン−２−オン（３，６ｒＩ１ｇＳｅ、　ａ、約９０ ％）が得られた。

（Ｂ）　実施例１のラセミ生成物（２５＋ｏｇ）を以下の条件下、分離用ＨＰＬ Ｃに供した。

カラム：　アステノク　シクロボンド　Ｉ　アセチル（ＡＳＴＥＣｃｙｃｌｏｂ ｏｎｄ　Ｉ　ａｃｅｔｙｌ）溶出液：０．２％トリエチルアンモニウム酢酸塩ぐ 氷酢酸を０．２％トリエチルアミン水溶液に添加し、Ｉ）Ｈを最終的に７．２に することにより得られる） 流量　：　２ｍｌ／分 検出　：　紫外線、３００ｎｍ 温度　：　室温 好適な両分をプールしてエバボレートし、粗（２Ｒ１シス）−４−アミノ−１− （２−ヒドロキシメチル−１，３−オキサチオシノー５−イル）（ｉＨ）−ピリ ミジン−２−オン（２５ｍｇ）と粗（２８１／ス）−４−アミノ−１−（２−ヒ ドロキシメチル−１，３−オキサチオラン−５−イル）−（ＩＨ）−ピリミジン −２−オン（１７ｍｇ）を得た。これらの画分はさらに以下の条件で別々に分離 用ＨＰＬＣに供した。

カラム：　アステノク　／クロポンド　Ｉ　アセチル溶出液：　ＩＦ＋ｍＭ酢酸 アンモニウム、ｐＦ１６．８　；流量　；０５に１７分 検出　：　紫外線、３００ｎｍ 温度　：５″ 好適な画分をプールしてエバボレートし、　く２Ｒ１シス）−４−アミノ−１− （２−ヒドロキシメチル−１，３〜オ牛サチオラン−５−イル）−（ＩＨ）−ピ ッミジン−２−オン（５，０ｍｇ、ｅ。

ｅ、約９１％）と（２Ｓ１　シス）−４−アミノ−１−（２−ヒドロキシメチル −１，３−オキサチオラン−５−イル）−（ＩＨ）−ビＩＪミジンー２−オン（ ７，６ｔｎｇ、　ａ、　ａ、約９６ｘ）を得た。

メＬ歿Ｕ刊−３：　−）−シス−４−アミノ−１−（２−ヒドロ手シメチニ　、 リン　エステル、アンモニウム塩（±＞−＜／ス）−４−アミノ−１〜（２〜ヒ ドロ本ツメチル−１，３−オキサチオラン−５−イル）−（ＬＨ）−ピリミジン −２−オン（、１，ＯＯｇ）　（実施例１）の乾燥リン酸トワメチル懸濁液（２ ０ｍｌ）を冷却（Ｏｏ）、攪拌して塩化ホスホリル（２，４４ｍ１）で処理し、 混合液を０°、３５５分攪拌した後、氷水（６０ｇ）に注ぎ急冷した。冷混合物 にＮ−水酸化ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨを２，５に調整し、活性炭カラ ム（ｔｏｇ、ダルコ）ニ適用して水で溶出後、エタノール−アンモニア水で溶出 した。粗−リン酸ニスチルを含むフラクションを稟め、濃縮した。生じπ溶液は ２５ｇのＤ　Ｅ　Ａ　Ｅセファデックス　Ａ−２５（炭酸イオン型）に適用した 。溶出は水（１２０ｍ１）からＯ，ＬＭ　炭酸水素アンモニウム（２４０ｍ１） 　ｔでの１！１度勾配でおこない、次に０．２．０．３及び４Ｍの炭酸アンモニ ウム（それぞれ１２０．２４ｏ、４ｏｏｍｌ）で行った。

好適な画分を集め濃縮した。残渣の溶液は水（４０ｍｌ）で希釈し、凍結乾燥し て厩肥の白色固形物（１，３７ｇ）を得た。

ｉχｍａｘ　＋ｐＨ６１ｔＬ４Ｎｉ’ｂ、　２７Ｌ、０ｎｒｎ、　（Ｅ１ｔ１ｃ ｚ１９０＋；　”ＨＮＭＲ（０２０１６３，２３＋ＩＨＩ、　３．５５　＋１８ １．４．０−４．２（２Ｍ＋、　５．４３（ＬＷ＋、　６．０７　＋ＬＨ＋。

５′−ヌクレオチターゼ（ガラガラヘビ属アトロ、シス（ｃｒｏｔａｌｕｓ　ａ ｔｒｏｘ）毒由来ン　ＥＥＣ３，王　３．５コ　（１７ユニプト／ｍｇで６０＋ ＋＋ｇ）を、　（＝）−ンスー４−アミン−（２−ヒドロキシメチル−１，３− オキサチオラン−５−イル）−（ＬＨ）−ピリミジン−２−オン、６°−二水ｉ リン酸エステル、アンモニウム塩（１，３５ｇ）　ヲ緩衝液　［３０ｍ１、グリ シン（５２６ｍｇ）と塩化マグ♀シウム（１９０ｍｇ）を水（ｌｏｏｍｌ）に溶 解してＭ製］に溶解した溶液に加え、混合液を３７°、２５時間インキュベート した。更に酵素（２０ｇｇ）を加え、さらに３．５時間イン子ニベートした。生 じた溶液はＤＥＡＥセファデックス　計２５（炭酸イオン型）カラムに供した。

溶出は水（１６０ｍ１）の後、０．１．０．２．０．３及び０．４Ｍの炭酸水素 アンモニウム（それぞれ２００ｍ１）で行った。最初の溶出成分を含有する好適 な画分を集めエバボレートし、残渣はシリカゲル（６０ｇ、　メルク７７３４） のカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム−メタノール混液で溶出した 。メタノール−酢酸エチルカラの好適な画分をエバボレートして（２Ｒ，シス） ＝４−アミノ−１−（２−ヒドロキシメチル〜１．３−オキサチオラン−５−イ ル）−（ＩＨ）−ピリミジン−２オンの白色固形物（０，３０ｇ）を得た。

第二の溶出成分を含むセファデフシスカラムからの好適な画分を集めエバボレー トした。残渣を水（３０Ｉ＋１１）に溶解し、アルカリホスファターゼ（大腸ｍ 　（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｔ）由来）［ＥＣ３，１，３，１］　（４ １６１ニフト／１で１．５ｍ１）で処理し、３７°で１時間インキュベートした 。溶媒はエバボレートして除き、残渣はシリカゲル（６０ｇ、メルク？７３４） のカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム−メタノール混液で溶出した 。メタノール−酢酸エチルからの好適な画分をエバボレートして（２Ｓ、シス） −４−アミノ−１−（２−ヒドロキシメチル−１，３−オキサチオラン−５−イ ル）−（ＬＨ）−ピリミジン−２−オンの白色固形物（Ｇ、　３２ｇ）を得た。

、　［α１Ｄ２１−Ａ３２０（ｃ、１．ＯＢ、　ＭｃＯＨ）、”ＨＮＭ：’Ｌ　 ＋ＤＭＳＯ１６３，０４ｆＬＨ＋、３．４０　＋ＩＨ１，１７コ　ｆ２Ｈ１，５ ，Ｌａ　（−ａ＋。

５．２９　ｆＬＨ）ｔ：、７コ　（１！（＋、６．２Ｌ　（ＬＨＩ、７．１９　 ＋２４（＋、７．８１　（ＬＦ！＋。

Ｋ良匠土 −−シス−４−アミノ−１−２−ヒドロキシメチル−１３−オキサチオラン−５ −イル　−　ＩＨ−ピリミジン−２−オン（１）３本のＳｈｌの栄養培地（ｎｕ ｔｒｉｅｎｔ　ｂｒｏｔｈ）　（オキソイド社）フラスコに、栄養寒天プレート から、大腸１ｍ　（ＡＴＣＣ２３８４８）を−白金耳集めて接種した。フラスコ は２５０回転／分、３７°Ｃで一晩振盪した後、それぞれのフラスコは７Ｌの培 養槽における、４ＬのＣＤＤ培地（グルタミン酸、３ｇ／　Ｌ　；　ＭｇＳＯ４ ，０，２ｇ／Ｌ；に２Ｓ０４．２．５ｇ／Ｌ　；　ＮａＣ１，２，３ｇ／　Ｌ　 ；　Ｎａ２！（ＰＯ４２Ｈ２０，１、１ｇ／　Ｌ　；　ＮａＨ２ＰＯａ２Ｈ２０ ，０，６ｇ／Ｌ；　ンチジン、１．２ｇ／　Ｌ）の接種に用いられた。培養は７ ５０回転／分、３７°Ｃ１４Ｌ／分の通気量で培養した。２４時間培養後、遠心 分離（５０００ｇ、３０分）で集菌し、７２ｇの湿菌体が得られた。細胞ペレッ トは３０Ｏｎ＋１の２０＋ｏＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）に再懸濁し、超 音波で破砕（４５秒で４回）した。細胞残渣は遠心分離（３０，０００ｇ、３０ 分）で除き、上澄中の蛋白は硫酸アンモニウムを７５％飽和まで加えて沈澱させ た。沈澱は遠心分離（３０，０００ｇ、　３０分）で集め、ベレットは（７５％ 飽和の）硫酸アンモニウムを含むＦｉＥＰＥＳ緩衝液（１００ｍＭ、　ｐＨ７， ０）に２５ｍ１に再溶解した。酵素溶液は１２．０００回転、３０分の遠心分離 で調製し、上澄は捨て、ペレットはトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７，Ｏ；　１００ｍ Ｍ）に溶解してもとの容量にした。

（１１）実施例１の生成物（１１５ｍｇ）を水（１００ｍ１）に溶解、攪拌し、 酵素液（０，５ａ＋１）を加えた。混合物は塩酸（２５＋＊Ｍ）を継続的に添加 してｐＨを一定に保持した。変換はキラルＨＰＬＣでモニターすることにより、 基質の（＋）エナンチオマーが優先的に脱アミン化されることが示された。２２ 時間後基質の（＋）エナンチオマー（ＲＴ　１２．５分）が完全に消滅した後、 溶液に濃水酸化ナトリウムを添加してｐＨを１０．５に調整した。

上記生じた溶液は予めｐＨ１１で平衡化したＱＡＥセファデックスカラム（Ａ２ ５；ファルマシア社；　３０ｘ１．６ｃｍ）で溶出した。

カラムは水（２００ｍ１）で、次に塩酸（０，１Ｍ）で洗浄した。画分（４０ｍ ｌ）をとり、逆相ＨＰＬＣで分析した。反応しなかった基質の（−）エナンチオ マーを含む画分５−１３は、これらを併せて塩酸でｐＨを７．５に調整した。脱 アミノ化された生産物を含む画分４７は、希水酸化ナトリウムでｐＨを７．５に 調整した。キラルＨＰＬＣによる分析は、この物質は大部分の成分である一方の エナンチオマー（ＲＴ　１０．２分）と少量の成分であるもう一方のエナンチオ マー（ＲＴ　８．５分）からなる混合物であることを示した（　ｅ、　ｅ、約９ ０％）。

（ｉｉｉ）上記第（ｉｆ）段階を大スケールで繰り返した。実施例１の化合物（ ３６３ｍｇ）を２５０１１１１の水に溶解し、第一段階で調製した酵素溶液（０ ，５ｍ１）とともにインキュベートした。１８時間および４７時間経過後さらに ０．５ｉｉの酵素液を添加した。反応液は７０時間攪拌した後、さらに６４時間 放置した。キラルｈｐｌＣによる分析では基質の（＋）エナンチオマーは完全に 脱アミノ化されていることが示され、生じた溶液はＮａＯＨでｐＨを１０，５に 調整した。

溶液は（ｆ）段階と同じＱＡＥカラムに負荷し、同様にして溶出した。残りの基 質と脱アミノ化した生成物とを含む画分２−６を集めた。残りの基質（（−）エ ナンチオマー）を含有する画分７−１３を集め、ｐｎを７．５に調整した。脱ア ミノ化した生成物を含有する画分２５−２６は集めて中和した。

上記画分２−６は同じＱＡＥカラムで再溶出した。この第二のカラムの画分３− １１は反応しなかった基質（（＝）エナンチオマー）を有していた。画分７０は 脱アミノ化された生成物を含んでいた。

（１■）第（ｉｉ）段階から第（１ｉｉ）段階の光学分割された基質の両分を集 め、ｐＨを７．５に調整した。この溶液は水で詰めたＸＡＤ−１６（４０ｘ２． ４ｃｍ）カラムを通して溶出した。カラムは水で洗浄した後、アセトン：水（１ ：４　ｖ／ｖ）で溶出した。

ＢＣＨ１８９の（−）エナンチオマーを含有する画分を集め、凍結乾燥して白色 粉末を得た（１９０ｍｇ）。

上記に使用したＨＰＬＣ方法は以下の通りである。

１、逆相分析用ＨＰＬＣ カラム　：キャピタル　カートリッジ スフエリソーブ　０ＤＳ−２（５ＭＭ）１５０ｘ４．６ｍｍ 溶出液　ニリン酸二水素アンモニウム（ＳｈｌＭ）　＋５％ＭｅＣＮ 流量　：　１．５ｉｉ／分 ６検出　：紫外線、２７０ｎｍ 保持時間　：ＢＣＨ１８９５，５分 ：脱アミノ化　ＢＣＨ−１，８９８，１分２、キラル分析用ＨＰＬＣ カラム　：ンクロボンド　■　アセチル２５０ｘ４．６ｍｍ 溶出Ｈ：０．２％トリエチルアンモニウム酢酸塩（ｐＨ７，２） 流量　：　１．０ｍ１７分 検出　：紫外線、２７０ｎｍ 保持時間　：ＢＣＨ１８９１１，０および１２．５分脱アミノ化　ＢＣＨ−１８ ９ ８，５および１０．２分 （生化学的変換は１２．５分のピークの減少と１０．２分の生成物の蓄積を観察 することによりモニターした。）Ｌ立匠一旦 −−シス−４−アミ／−１−２−ヒドロキシエチル−１１３−オキサチオランー ５−イル　−（ＩＨ−ピリミジン−２−オン栄養寒天培地で良好に生育した大腸 菌Ｂ細胞（ＡＴＣＣ３２８４ｇ）を−白金耳集めて、それぞれ２５０ｒａｌの栄 養培地を含有する２本のフローレンスフラスコに接種した。培養は３７″で１８ 時間、振盪（２５０回転／分、５ｃｍ幅）して行った。この培養物は、次に７Ｏ Ｌの培養槽で、４０Ｌのシチジンを含むＣＤＤ培地に接種するために使用した。

培養条件は以下の通りであった：通気量４０Ｌ／分、攪拌速度７５０回転／分、 温度３７°Ｃ０培養槽には３枚のラッシュトン攪拌翼が取り付けられていた。培 養は１８時間行い、シャープレス連続遠心機で集菌した。細胞ペレット（湿菌体 ｔｓｏｇ）は細胞破壊に先だって一２０″Ｃで凍結した。

ＣＤＤ培地 ｇ／Ｌ Ｌ−グルタミン酸　３ Ｍｇ５Ｏａ　０．２ Ｎａ２１’１ＰＯ４１，Ｉ Ｎａ［１２ＰＯａ　ｏ、　６ 蒸留水で作成し、ｆ２１’ｃ、　３０分殺菌した。シチジン（１，２ｇ／Ｌ）は フィルター殺菌して、接種前に添加した。

凍結した細胞ペレット（１５０ｇ）を解凍し、１＋ｅＭエチレンジアミン四酢酸 （ナトリウム塩）と１ｍＭジチオスレイトールを含ム７５０ｍ１の１００ｍＭ　 Ｈｅ　ｐ　ｅ　ｓ　（Ｎ−［２−ヒドロキシエチルコピペラジン−Ｎ’〜［２− エタンスルホン酸］）緩衝液（ｐＨ７，５）　（破砕用緩衝液）に懸濁した。細 胞はマントン−ゴーリンホモジナイザーを７５００ｐｓｉで通過させて破壊した 。これを、ホモジナイザーを１回通すたびに懸濁液を約５℃に冷却しながら３回 繰り返し行った。ホモジネートは遠心分離（１４００ｇ、６０分）で清澄にした 。シチジンデアミナーゼ活性は、１ｍＭの塩酸を含む５０ｍＭ）！Ｊス（ヒドロ キシメチル）メチルアミン（ｐｉ（１５）で予め平衡化したＱ−セファロースカ ラム（４９０ｍｇべｙドボリューム〉に吸着される。集めた活性画分（２１０ｍ ｌ）は予め３．２Ｍ硫酸７：／（−ニウムを含む同一緩衝液で平衡化したフェニ ル−セファロースカラム（４９０ｍｌベッドボリューム）にかけた。結合した酵 素はＭ酸アンモニウムの減少濃度勾配で溶出した。シチジンデアミナーゼ活性を 有する画分をプールしく６９５ｍ］）、部分的に精製された酵素は８０％硫酸ア ンモニウムで沈澱させた。

ａ６分Ｍ　（１４００ｇ、　Ｉ）ｏ分）の後、ペレットはこの上澄５４ｍ１に再 懸濁して４°Ｃで保存した。

この溶液を６．２ｍｌとり遠心分離（１８０００ｇ、９０分）し、ベレットは２ ４ｍ１の０．５Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，５）に溶解した。

懸濁液は一晩ＩＭ’Ｊン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，５）に透析した。

この濃縮水（２０ｍｌ）は等量の蒸留水で希釈した。３５ｍ１のこの溶液に乾燥 二−バジソトＣピーズ（１ｇ）を加工、１５０〜３００時間（溶液中の残余のシ チジンデアミナーゼ活性を測定して決定される）、室温で放置した。固定化酵素 は１ｍＭ　ＥＤＴＡ、　１＋ｏＭＤＴＴ、０．５Ｍ　ＮａＣ１およびｓｏｏｐｐ ｍ　ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルエステルを含有する１００ｍＭ）　’Ｊス／ 塩酸緩衝液（ｐＨ７，０）　（保存用緩衝液）で洗浄した。固定化酵素（湿重量 ２．７ｇ）はこの緩衝液中で生化学的変換に必要となるまで４°Ｃで保存した。

実施例１の生成物（３ｇ）をＩＬフラスコで磁石で攪拌しながら５００ａ＋１の 蒸留水に溶解した。生化学的変換はｐＨ−スタット中、３２°Ｃで行った。ｐＨ は１Ｍ酢酸の添加により７０の一定値に保った。１ｇの湿重量の固定化酵素ビー ズを反応開始前に蒸留水で洗浄した。変換はキラルＩ（ＰＬＣでモニターし、基 質の（＋）エナンチオマーが優先的に脱アミ／化されたことが示された。反応の 終り（７２時間後）に、酵素ビーズは濾過除去し、濾液は所望の（−）−エナン チオマーの単離に用いた。

反応混合液のｐＨをアンモニア水（ＩＭ）で１Ｏ１５に調整し、この溶液をデュ オライトＡ１１３スーパーレジン、ＯＨサイクル（５０ｍｌ　；　０．４ヘツド ボリユ一ム／時）に適用した。ウリジン類似体は樹脂に吸着し、（−）−エナン チオマーは直ちに通過した。

樹脂上に残った（−）−エナンチオマーは０．０４％アンモニア溶液（２ベッド ボリューム；流速０．８ペツドボリユ一ム／時）で洗浄し、取り除いた。

使用した溶液と洗浄液（６００ｍｌ）は濃硫酸でｐＥＩ７．０に調整し、ＸＡＤ １６樹脂に適用した（　５ｈ＋ｌ　；流速　１，４ベツドボリユ一ム／時）。カ ラムは蒸留水で洗浄（２，５ベッドボリューム；流速　２ベツドボリユ一ム／時 ）　Ｌ、（−）−エナンチオマーはアセトン：水　１：３（流速１．５ベツドボ リユ一ム／時）で溶出した。

（−）−エナンチオマーを含有する画分（４ベツドボリユーム）をプツチ（Ｂｕ ｃｈｉ）エバポレーターで少体積まで濃縮し、Ｎｏ、　３ガラス焼結物で濾過し た。Ｉｓ液は凍結乾燥し実施例４で得られたものと同一の連記化合物を１．２ｇ 得た。

（以下余白） 失農」Ｌ−［− 錠剤製剤 Ａ、プロピトン（ｐｒｏｖｉｄｏｎｅ）の水溶液で成分を湿式造粒し、乾燥、ふ るいにかけ、ステアリン酸マグネシウムを添加、圧縮して、以下の製剤を調製し た。

Ｂ、以下の製剤は直接圧縮法により調製されたものである。

：　ラクトースは直接圧縮タイプである。

Ｃ，（放出調節製剤）、プロピトンの水溶液で（下記）成分を湿式造粒法により 調製し、乾燥、ふるいにかけた後、ステアリン酸マグネ／ウムを添加し、圧縮し て、製剤を調製した。

及嵐乳−１ 丸工ｉ土翌亙 カプセル製剤は下記の成分を混合して二つに分かれるノ１−ドゼラチンカプセル に封入することにより調製した。

（以下余白） 尖Ｕ 注射用製剤 活性成分　０．２００ｇ 水酸化ナトリウム溶液、０．ＩＭでｐＨ約１１とする。

滅菌水で１０ｍ１とする。

活性成分は少量の水（温められ得る）に懸濁し、ｐＨを約１１に水酸化ナトリウ ムで調整する。このバッチは容量を合わせ、殺菌グレードのメンブランフィルタ −を用いて殺菌した１０ｍ１のガラスバイアルに濾過し、滅菌封入でシールし更 にその上にシールした。

犬１ヱ［−１ 硬化脂の１１５を蒸気ジャケットパンで最高４５℃で溶解した。

活性成分は２００μｍのふるいにかけて通し、溶解したベースに加え、高ぜん断 攪拌機を使用し、滑らかな分散液ができるまで混合した。この混合液を４５℃に 保ったまま、残りの硬化脂を加え均一な混合物になるまで攪拌した。！！！％濁 液の全部を２５０μｍのステンレススチール製の網目を通し、連続的に攪拌しな がら４０℃まで冷却した。３８℃から４０℃で、２．０２ｇの混合物を好適な２ ｍｌのプラスチックの型に詰めた。座薬は室温まで放置冷却した。

夾羞１Ｌ−Ｌ１ 先勝１」υ乱国 区ユヱ」ヨリ１庄 実施例２の化合物の抗ウィルス活性は以下のセルラインのＨＩ　Ｖ−１の３株と ＨＩＶ−２の１株について決定した。

ＪＭ細胞、ＨＩ　Ｖ−１株ＧＢ８で感染したリンパ芽球性白血病の患者由来の半 成熟（ｓｅｍｉ−ｍａｔｕｒｅ）　Ｔ−セルラインＭＴ−４細胞、ＨＩ　Ｖ−１ 株ＲＦで感染したヒトＴ−細胞白血病セルライン ＣＥＭ細胞、ＨＩ　Ｖ−１株ＲＦおよびＵ４５５、またはＨＩＶ−２株　ＲＯＤ で感染したヒトＴ−リンパ芽球セルラインＣ８１６６、ＪＭおよびＣＥＭ細胞の 抗ウィルス活性はシンシチウム形成（ｓｙｎｃｙｔｉｕｍ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ）　（Ｔｏｃｈｉｋｕｒａ　ａｔ　ａｌＶｉｒｏｌｏｇｙ、　１６４．５４２− ５４６）の阻害で、ＭＴ−４細胞はホルマザン変換（ｆｏｒｍａｚａｎ　ｃｏｎ ｖｅｒｓｉｏｎ）　（Ｂａｂａ　ｅｔ　ａｌ；　（１９８７）Ｂｉｏｃｈｅｍ　 Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ、、１４２．１２８−１３４；　Ｍａｓ ｓｔｎａｎ　（１９８３）　Ｊ、１ｍｍｕｎ　Ｍｅｔｈ；　６５．５５−５７） の阻害で測定した。抗ウィルス活性はまたエナンチオマーの存在あるいは不存在 下、ＨＩＶ　ｐ２４抗原合成量を分析して調べた。

結果を表１及び２に示した： （以下余白） 炙−上 Ｂ　細胞毒性 実施例２の化合物、ラセミｆｉ合物（ＢＣＨ−１８９；実施伊１１）および２つ のエナンチオマーの５０１５０ｆＵ合物の細胞毒性を５つのＣＤ４セルライン； 　Ｈ９，、ＪＭ、ＣＥＭ、Ｃ８１６６およびＵ９３７で決定した。

テスト化合物は９６ウエルマイクロタイタープレートに１００μｇ／ｍｌから０ ．３μｇ／ｍｌ（最終濃度ンに連続希釈し、３．６ｘｌＯ’細胞を薬剤なしのコ ントロールを含むプレートの各ウェルに接種した。３７°Ｃ１５日培養したのち 、細胞懸濁液のサンプルを取出し、トゾパンブルーで染色されない細胞を血球計 数器でカウントして、生存細胞数をめた。

結果を表３に示す。

要約書 （−）−４−アミノ−１−（２−ヒドロキシメチル−１，３−オキサチオランー ５−イル）−（ＩＨ）−ピリミジン−２−オン、その薬学的に許容できる誘導体 、その薬学的製剤、その製造方法及びその抗ウィルス剤としての使用が記載され ている。

国際調査報告 国際調査報告

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. １．（一）−シス−４−アミノ−１−（２−ヒドロキシメチル−１、３−オキサ チオラン−５−イル）−（１Ｈ）−ビリミジン−２−オンあるいはその薬学的に 許容し得る誘導体。
2. ２．対応する（＋）−エナンチオマーを実質的に含有しない請求項１記載の化合 物。
3. ３．約５％ｗ／ｗを越えない量の（＋）−エナンチオマーが存在する請求項１ま たは２記載の化合物。
4. ４．約２％ｗ／ｗを越えない量の（＋）−エナンチオマーが存在する請求項１か ら３のいずれかの項記載の化合物。
5. ５．約１％ｗ／ｗより少ない量の（＋）−エナンチオマーが存在する請求項１か ら４のいずれかの項記載の化合物。
6. ６．実質的に純粋な請求項１記載の化合物。
7. ７．請求項１から６のいずれかの項記載の化合物とその薬学的に許容し得るキャ リアーを含有する薬学的組成物。
8. ８．治療に用いられる請求項１から６のいずれかの項記載の化合物。
9. ９．ウイルス感染治療用薬剤の製造のための請求項１から６のいずれかの項記載 の化合物の使用。
10. １０．請求項１から６のいずれかの項記載の化合物の有効量を投与することを包 含するウイルス感染したまたは感染しやすい、ヒトを包含する、哺乳動物を治療 する方法。
11. １１．（一）−エナンチオマーを（＋）−エナンチオマーをも含有する混合物か ら分離することを包含する、請求項１から６のいずれかの項記載の化合物の調製 方法。
12. １２．前記化合物の混合物がラセミ混合物である請求項１１記載の方法。
13. １３．前記分離をキラル（ｃｈｉｒａｌ）ＨＰＬＣで行う請求項１１または請求 項１２記載の方法。
14. １４．前記ＨＰＬＣの固定相としてアセチル化β−サイクロデキストリンあるい はセルローストリアセテートを用いる請求項１３記載の方法。
15. １５．前記分離を酵素を仲介するエナンチオマー選択的代謝で行う請求項１１ま たは請求項１２記載の方法。
16. １６．前記酵素を不溶化した形で使用する請求項１５記載の方法。
17. １７．前記酵素がシチジンデアミナーゼである請求項１５または請求項１６記載 の方法。
18. １８．酵素が５′−ヌクレオチダーゼである請求項１５または請求項１６記載の 方法。