JPH05502014A - プリン ヌクレオシド類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 プリン　ヌクレオシド類 〔発明の背景〕 この発明はある種の２’−Ｆ、２−ハロ置換プリンヌクレオシド類に関する。

ある種のアラビノフラノシルヌクレオシド類は公知の抗ウィルス（アラＡ）およ び抗癌（アラＣ）活性を持つ。水酸基以外の２′−置換基をもつアラビノフラノ シルヌクレオシドもまた、有用な生物学的効果を示す。これらのヌクレオシド類 の全ては有効であるために活性化（リン酸エステル化）を要し、一般にこれは対 応するリボフラノシルヌクレオシド類とは異なる酵素によって行なわれる。

ワタナベ等米国特許出願番号４，７５１，２２１号は下記の式、［式中、Ｘおよ びＹは同一またはことなるものであり、水素、○Ｒ３（ケトまたはエノール）、 ＳＲ３、ＮＲ３Ｒ’　、ＮＨア／ルまたは塩素または臭素などのハロゲンである 。

Ｒ３およびＲ４は同一または異なるものであり、水素、メチル、エチル、プロピ ル等の１から７個の炭素原子をもつ低級アルキルおよびベンジル、ベンズヒドリ ル、ｐ−メトモンベノンルなどのアラルキル、またはフェニル、ｐ−タロロフェ ニル、トルイル、ｐ−メトキンフェニル、ナフチルなどのアリールである。

ＮＨアノルはアルカノイルまたはアロイルアミドであることができ、 Ｒ１およびＲ２は同一または異なる水素またはホルミル、アセチル、プロピオニ ル、イソプロピオニル、ブチリル、イソブチリル、第３級ブチリル、バレリル、 ピバロイル、カプロイル、カプリル、ラウリル、ミリスチル、バルミチル、ステ アリル、アラキンル、スチリシル、パルミトレイル、オレイル、リルニル、アラ キトニルなどの１から２０個の炭素原子をもつアルカノイル基でありうるアシル 基である。］ て示されるヌクレオシド類を開示している。

モンゴメリ等、“ツヤ−ナル・オブ・メディシナル・ケミストリー、１９８６年 、第２９巻、１１号、２３８９−２３９２ページは下記の式、 Ｐ ［式中、Ｒ１およびＲ２は同一÷あり、ＣＩまたはＮＨ２であり得、Ｒ３はベン ゾイルまたは水素であり得、Ｒ４はアセチルまたは水素であり得る。コ　“ で示されるヌクレオシド類を開示している。

〔発明の要約〕

２−ハロ置換基をプリン環に組み込むことは、具体的にはアデノシン・デアミナ ーゼに対して基質となる化合物の能力を低下させることによって、アデニン・ヌ クレオシド類の代謝を大きく変えるということ、アラビノ配置においてＣ−２′ にフッ素を置換することがこれらの誘導体に加リン酸分解開裂に対する高い耐性 をもたせるということ、同一分子内でのこれら２つの部分の組合せが抗癌活性を 与えること、はこれまでに発見されている。

従って、この発明では、式■、 口式中、ＺはＦ、ＣＩ、またはＢｒ、およびＲは水素またはアシルである。］で 示されるヌクレオシド類を提供する。Ｒがアシルであるとき、この誘導体は母体 薬物の体内寿命を遷延するプロドラ・７グとして働く。

この発明の化合物は、例えば慢性リンパ種白血病等の癌の治療に有用である。

〔発明の詳述〕

下記の論述において、下記の式１について言及する。例は、これらの化合物中の 多様な置換基が下記の式１で定義されているｌａ−１ｇで示される化合物の記述 も含む。

ａ）　’Ｘ＝Ｙ＝Ｂｒ；　Ｒ１＝Ａｃ；　Ｒ２＝ＢＺｂ）　Ｘ＝ＮＨ２：　Ｙ＝ Ｂ　ｒ　；　ＲＩ＝Ｒ２＝Ｈｃ）　Ｘ＝Ｙ＝ＣＩ；　Ｒ，＝Ａｃ＋　Ｒ２＝Ｂｚ ｄ）　Ｘ＝ＮＨ２：　Ｙ＝ＣＩ　；　ＲＩ＝Ｒ２＝Ｈｅ）　Ｘ＝Ｙ＝ＮＨ２：　 Ｒ＋＝Ａｃ　；　Ｒ２＝Ｂｚｆ）　Ｘ−”ＮＨ２：　Ｙ＝Ｆ　：　Ｒ＋＝ＡＣ； 　Ｒ２＝Ｂ　Ｚｇ）　Ｘ　＝ＮＨ２；　Ｙ＝Ｆ　；　Ｒ＋＝Ｒ２＝Ｈこれらの置 換基の定義において、”Ｂｚ”はベンゾイルを意味し、”Ａｃ”はアセチルを意 味する。

下記の例は、式１の化合物の製造を説明している。

実施例１ ２．６−ンブロモー９−　（３−０−アセチル−５−０−ベンツルー２−デオキ シ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−９Ｈ−プリン（１ａ） ４００ｍＬの乾燥ジクロロエタン中の３−アセチル−５−ベンゾイル−２−チオ キシ−２−フルオローアラビノフラノシルブロミド（３３，２ミリモル）溶液を 、１０分間４Ａモレキユラーンーブと撹拌した後２．６−シプロモプリン（９， ３ｇ、３３．５ｍｍｏ　１）を加えた。混合物を高架撹拌器で強く撹拌して、予 め加熱した１００℃の油液槽に入れた。加熱を、全てのブロモ糖を消費するまで 、３２時間続けた。（検出のために４−（４−ニトロペンシル）ピリジン　スプ レーを使って、ＴＬＣ２：１　シクロヘキサン−酢酸エチルを行う）２１ｇ合物 を室温まで冷却した後、セライトを通して濾過した。固形物をジクロロエタンで 洗浄し、結合した濾過物を乾固するまで真空で蒸発した。残留物（１６，５ｇ） は、２：１のシクロヘキサン−酢酸エチルを溶離溶媒として使った１５０ｇのシ リカゲル（２３０−４００メツシユ）フラッシュクロマトグラフィーによって分 離した３種のヌクレオシド類の混合物であった。純粋な留分を合わせることによ って、目的の化合物を、クロマトグラフィーでは均質であるが、結晶化しないガ ラス３．６４ｇ　（１９，７％）として得た。不純な留分について成された第２ のカラムで、総収量３１．６％に対して２．２１ｇ（１１，９％）のより純粋な 生成物を得た。ＭＳ５５７　（Ｍ＋１）”。元素分析：　Ｃ＋ｅＨ＋５Ｂｒ２Ｆ Ｎ４０５　・０．２Ｃ６ＨＩ２に対する計算値：　Ｃ，４２，１９；　Ｈ，３， ０５；Ｎ、９．７４゜実験値：　Ｃ，４２，１１；　Ｈ２Ｓ、１０：　Ｎ、９． ３５゜ 実施例２ ２−ブロモ−９−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル ）−９Ｈ−プリン−６−アミン（１ｂ）４００ｍＬのｌａ　（５，８４ｇ、１０ ．５ミリモル）のエタノール性アンモニア（０℃で飽和された）溶液をガラスで 内張すされたステンレス・スチールのボンベ中に封入し、室温に３日間！いた。

溶液を乾固するまで蒸発し、エタノールでアンモニアを除去するまで蒸発した。

目的の物質および５゛−ベンゾイル化合物を含む残留物を４４０ｍＬのアセトニ トリルおよび１２０ｍＬの水の中に溶解した。水酸化リチウム−水和物（８８１ ｍｇ、２１ミリモル）を加え、溶液を室温で１６時間撹拌した。薄層クロマトグ ラフィー（５，ＩＣＨＣＩ　３　Ｍ　ｅ　ＯＨ）が反応完結を示した。冷却した 溶液を慎重に氷酢酸で中和し、乾固するまで蒸発した。白色固体残留物を水から 再結晶させた。生成物を真空で乾燥し室温で１００℃で２時間乾燥した。２．１ ５ｇ　（５９，２％）。Ｍｐ２０９−２１０℃、ＴＬＣ５：Ｉ　ＣＨＣｌ３　Ｍ ｅＯＨＲ７０，４７：ＨＰＬＣ９９゜８％　９　、＋　１　；ＨｚＯＭｅＣＮ； 　ＭＳ、３４８　（Ｍ＋１）′″　。

ＵＶ　λｍａｘ　ｐＨ１２６４（１４，３）、ｐＨ７２６４（１４，９）　、ｐ Ｈ１３２６４（１５，２）。元素分析：　Ｃ，ｏＨ，、ＢｒＦＮ５０３に対する 　計算値：　Ｃ，３４，５０：Ｈ，３，１８；　Ｎ、２０．１２；　実験値：　 Ｃ，３４，３６；Ｈ，３，２８：　Ｎ、１９．９３゜ 実施例３ ２−クロロ−９−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル ）−９Ｈ−プリン−６−アミン　（ｌｄ）。

モンゴメリーら、”ジャーナル・オブ・メディ／ナル・ケミストリー”、１９８ ６年、２９巻、第１１号、２３８９−２３９２頁、によって記載された方法に従 って製造された、無水アンモニア（１００ｍＬ）で飽和された（１００’Ｃ）エ タノール中の１０の溶液（５，１ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）をガラス張りのステン レス・スチールのボンベ中に入れ、室温に３日間室いた。ＴＬＣ（２：　１　シ クロヘキサン−酢酸エチルおよび５：Ｉ　ＣＨＣｌ３　ＭｅＯＨ）は出発物質が 無いことを示した。しかしながら、２つの主な生成物が存在した。即ち、目的化 合物およびそれの５′−ベンゾイル類似物である。溶液を乾燥するまで蒸発し、 アセトニトリルで共蒸発した。残留物をアセトニトリル（１００ｍＬ）中に溶解 し、水（６’０ｒｎＬ）で希釈し水酸化リチウム−水和物（９１５ｍｇ、２１． ８ｍｍｏ　ｌ）を加えた。溶液を室温で３時間撹拌したが、そのときＴＬＣ（５ １ＣＨＣｌ３　ＭｅＯＨ）は反応完結を示した。溶液を冷却し、酢酸で中和し、 乾固するまで蒸発した。水からの３回の再結晶で純粋な化合物を得た。１４．　 ｇ’　（４，２’、’３％）。　Ｍｐ’　２２５−２２６℃；ＴＬＣ５：　Ｉ　 ＣＨＣｌ５　ＭｅＯＨ，Ｒ７０，４０；ＨＰＬＣ９９％　４：Ｉ　Ｒ２０−Ｍｅ ＣＮ：　Ｍｓ、ｚ／ｅ３０４　（Ｍ　’−，１）−；　ｐＨ１でＵＶ　λｍａｘ 　２６３　（１５，５）；　ｐＨ７で２６３　（１６，２）；　ｐＨ１３で２６ ３　（１６４）。　元素分析：　Ｃ＋ｏＨ＋＋ＣＩＦＮ５０３　・Ｒ２０に対す る計算値　Ｃ，３７，３４；　Ｈ，４，０７：　Ｎ、２１．７７゜　実験値：　 Ｃ，３７，６２：　Ｈ，３，９８；　Ｎ、２１．８８゜実施例４ ２−フルオロ−９−（３−０−アセチル−５−０−ベンゾイル−２−フルオロ− β−Ｄ−アラビノフラノシル）−９Ｈ−プリン−６−アミン（１ｆ）　。

モンゴメリーら、“ンヤーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー”、１９８ ６年、２９巻、１１号、２３８９−２３９２ベーンに記載された方法に従って生 成されたジアミノ化合物１ｅ、（７０Ｑｍｇ、１．６３ｍｒｎｏ　＋）を−２５ ℃で３：２のＨＦ−ピリジン（１５ｍＬ）に溶解し、第３級ブチルニトリル（２ ７１μ１．２゜２８ｍｍｏｌ）で処理した。二２′０℃で１時間後に、反応が不 完全であることがＴ　Ｌ’Ｃによって示された。さらに第３級ブチルニトリル（ ７０μ’１．．０．’５９ｍｍｏ　ｌ）を加え、反応を一２０°Ｃてさらに２時 間続けた。冷反応溶液を氷を含む飽和ＮａＨＣ’０３水（１ｍＬ）ｌ’滴下して 加えた。発泡混合物を２０分間強く撹拌し、つぎにＣＨＣＪ　ｓ　（３００ｍＬ ）で希釈した。層を分離し、水性層をより多くのＣＨＣＩ　３（２Ｘ　１７５ｍ Ｌ）で抽出した。有機抽出物を合わせて水（３’　Ｘ　１７５ｍＬ）で洗浄し、 乾燥しくＭ　ｇ　Ｓ　Ｏ４）、乾固するまで蒸発した。ＣＨＣｌ３中の残留物を ＣＨＣｌ３を溶離剤としてシリカゲル（２３０−４００メツシユ）を含むフラッ シュカラムにかけた。両分を結合して本質的に純粋な１ｆ、５００ｍｇ（７０％ ）を得た。Ｅｔ’ＯＨからの小サンプルの結晶化によって、純粋な（１ｆ）を得 た。Ｍｐ　２０８−２０９°（：；　ＴＬＣ９５５ＣＨＣｌ３　ＭｅＯＨ，Ｒ， Ｑ、４５；　ＨＰＬＣ９９％、１：ＩＨ２０−ＭｅＣＮ；　ＭＳ、ｚ／ｅ　４３ ４　（Ｍ＋　１）”。

元素分析　Ｃ＋ｅＨ＋１Ｆ２ＮｓＯ５に対する計算値：　Ｃ，５２，６６；　Ｈ ，３，９５；　Ｎ、１６．１６．　実験値・　Ｃ，５２，４８；Ｈ，８，９２： 　Ｎ、１５．９８゜ 実施例５ ２〜フルオロ−９−（２−デオキ／−２−フルオローβ−Ｄ−アラビノフラノノ ル）、−９−Ｈ−プリン−６−アミン（１ｇ）１　：　ＩＭｅＣＮ　Ｒ２０（４ ０ｍＬ）中の１ｆの懸濁液（４３０ｍｇ、０．９９ｍｍｏ　１）を固形水酸化リ チウム−水和物（１２５ｍｇ、２．９７ｍｍｏｌ）で−挙に処置した。室温で２ ０分間撹拌した後、反応物は透明な溶液になった。３−ｈ　ＴＬＣ部分は脱保護 が完結したことを示した。氷酢酸（５７μｌ）を加え、溶液を白色の固体が沈澱 するまで蒸発した。冷却した後、固体を集め、冷水で洗浄し、真空内で室温で乾 燥し、粗１ｇ、２５２ｍｇを得た。この固体を４０ｍＬの水に溶解し、水平衡Ｓ Ｍ４　バイオ・ビーズカラム（１，５Ｘ　３２ｃｍ）に適用した。水での最初の 溶離の後、生成物を階段勾配、水中の５％−−−２０％のＥｔＯＨて溶離した。

結合し、蒸発したカラム留分からの残留物を２５ｍＬの沸騰水から次処理後結晶 化し、真空中で５６℃で１６時間乾燥し、純粋な１ｇ、１７８ｍｇ　（５９％） を得た。　Ｍｐ　２０７−２０９°Ｃ；　ＴＬＣ５：Ｉ　ＣＨＣｌ３　ＭｅＯＨ ，Ｒ７０，５０；　ＨＰＬＣ９９％、９１　Ｒ２０−ＭｅＣＮ；　ＭＳ、ｚ／ｅ 　２８８　（Ｍ＋１）”；ＵＶ　λ　ｍａｘ　ｐＨ１２６１（１４，０）、２６ ８　（ｓｈ）　、ｐＨ７２６０（１５，１）　、２６８　（ｓｈ）、ｐＨ１３２ ６１（１４，９）　、２６８　（ｓｈ）　。元素分析、　Ｃ＋ｏＨ＋＋Ｆ２Ｎ５ ０３・Ｒ２０に対する計算値　Ｃ，３９，３５；　Ｈ。

４．２９：　Ｎ、２２．９４ｏ実験値：Ｃ，３９，５１：Ｈ，４゜２１：　Ｎ、 ２２　９４゜ 迅速なりリアランスが問題であれば、実施例２．３および５の化合物の５゛−０ −アシル　誘導体を製造するのが望ましい。このような５°−〇−アノル誘導体 は、生活組織における半減期の増加をもとに活性を増加させたプロドラッグてあ り、標的部位に、より活性度の高い薬を運ぶことを可能にする。５−アノル化の 一般的な実験方法は下記の通りである。

実施例６ １０ｍＬの１１ピリジンーＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド中の乾燥２−ハロー９ −（２−デオキシ−２〜フルオローβ−Ｄ−フラビノフラノシル）アデニン（１ ミリモル）溶液を０℃に冷却し、適当な塩化アシル（１，２５ｍｍｏ　］）を滴 下して処理した。０℃で６時間後溶液を氷水（１００ｍＬ）に注入し、１５分間 撹拌し、１晩冷凍した。　捕集された白色固形沈澱物を冷水で洗浄し、真空下に 室温で乾燥し、粗５′−アンル化ヌクレオシドを得た。沈澱が形成されなければ 、反応混合物をＣＨＣｌ３　（４Ｘ　２５ｍＬ）で抽出した。抽出物を合わせて 乾燥しくＭｇ　Ｓ　０４）　、蒸発して粗５゜−アノル化ヌクレオシドをガラス 状物として得た。必要なら、粗生成物を、９１のＣＨＣｌ３　ＭｅＯＨを溶離剤 としてフラッノユカラムまたは薄層上のシリカケルクロマトグラフィーにより精 製した。純粋な５′−アンル化ヌクレオシドを、アセトニトリル、ジエチルエー テル、またはトルエン−アセトニトリルなどの適当な再結晶化溶媒からの結晶固 体として得た。

実施例７ 細胞毒性の比較 表１は、細胞毒性試験の結果を示している。　Ｌ１２１０細胞、ＣＣＲＦ−ＣＥ Ｍ細胞、およびに５６２細胞に対する、ＩＣ５ｏは、非処置対照に比較して細胞 増殖を５０％減らすのに要する濃度である。細胞は懸濁培養中で増殖し、存在す る細胞数を２４．４８および７２時間で測定した。表１に示されている値はＬ　 １２１０細胞ノ４８時間の値およびＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞およびに５６２細胞の ７２時間の値である。

Ｈ，Ｅｐ、−２細胞に対するｒｃ５ｏは、対照と比較してコロニー形成を５０％ 減らすのに要する濃度である。１０ｍＬの培地中１００の細胞を処方瓶に入れ、 １０日間のインキュベーションの後、培地を静かに傾斜して除き、コロニーを染 色し、数えた。

表１ ２−ハロ〜９−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル） アデニンの細胞毒性実施例８ 抗癌活性の要約 ＣＤ２ＦＩマウスの腹腔内（ｉｐ）にＩＣ）’　ｐ３８８の白血球細胞を植えた 。腫瘍植え付けの日を０日として示した。化合物を、毒性から非毒性まで、い（ つかの投与水準で腹腔内に投与した。腫瘍を持つ対照マウスは処置しなかった。

マウスをその生存期間中観察した。抗癌活性を、生存の中間値の増加の百分率（ ％ＩＬＳ）および実効対数細胞死をもとに評価した。実効対数細胞死の計算を、 連続１−−−１０希釈からの移植物からなる内部腫瘍力価から測定された腫瘍倍 加時間から行なった。長期生存者は、ＴＬＳおよび腫瘍細胞死のパーセンテージ から除外した。処！の最後における腫瘍細胞死を評価するために、処置群と対照 群との間の生存時間の相違を、各処！の間に起り得る腫瘍細胞集団の再生長を明 らかにするために調整した。結果を表２に示す。

表２ 実施例９ この実施例は、２−フルオロ−９−β−Ｄ−アラビノフラノシルアデニンなどの 、即ち酵素プリンヌクレオシドホスホリラーゼによってそれほど迅速に分解され ない、前述の抗癌化合物に対するこの発明の化合物の優位性を示している。プリ ンヌクレオシドホスホリラーゼを、シグマ・ケミカル・カンパニーから入手した 大腸菌Ｂ（凍結乾燥細胞）から部分的に精製した。酵素反応混合物は、ヌクレオ シド基質（０，５ｍＭ）、リン酸塩緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ８，０）および最終 容積１．ＯｍＬ中の酵素から成るものであった。３０．６０．１２０．１８０お よび２４０分のインキュベーションの後反応を終え、存在するヌクレオシドと塩 基の量を逆相カラムのＨＰＬＣによって測定した。結果を表３に示している。

表３ ヌクレオシド°の加リン酸分解 ２−フルオロ−９−β−Ｄ−アラビノフラノシルアデニン　９９２−クロロ−２ ゛−デオキシアデノシン　〉９９２−フルオロ−２°−デオキシアデノシン　〉 ９９国際調査報告 ＰＣＴ／ｌｌｓ９０１０２９２７

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｚはＦ、Ｃｌ、またはＢｒ、およびＲが水素またはアシルである。］ で示されるヌクレオシド。
2. （２）Ｒが水素である請求項１で定義されるヌクレオシド。
3. （３）ＺがＣｌである請求項２で定義されるヌクレオシド。
4. （４）ＺがＦである請求項２で定義されるヌクレオシド。
5. （５）ＺがＢｒである請求項２で定義されるヌクレオシド。