JPH05502584A

JPH05502584A - 酵素含有調製品及び該調製品を含有する洗剤

Info

Publication number: JPH05502584A
Application number: JP3502037A
Authority: JP
Inventors: マルクセン，エリック　キャエル; ニールセン，トルベン　キャエルスガールト; ニールセン，ニールス―ビクトル; マルクセン，エリック　シュミット
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1989-12-21
Filing date: 1990-12-21
Publication date: 1993-05-13
Also published as: EP0506791B1; DK0506791T3; EP0506791A1; ATE94206T1; DE69003253D1; ES2044718T3; DE69003253T2; WO1991009941A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】酵素含有調製品及び該調製品を含有する洗剤本発明は、少なくとも一種の酵素を含有する酵素含有調製品並びに該調製品を含有する洗剤に関する。請求の範囲の記載と共に本明細書に於いて、語句「調製品」は、粒質物又は液体スラリーのいずれかを意味する。スラリーは、無水物又は実質的に無水物であるか又は水性のいずれがであって良い。

これらの酵素含有調製品は、種々の分野、例えば温浸助剤を含む分野に於いて更に洗剤の分野に於いて使用出来るが、それらの主な用途は洗剤の分野に見出すことが出来る。

請求の範囲の記載と共に本明細書に於いて、語句「粒質物」は、最も広い意味に於いて約ｌｏμｍの大きさの桁の寸法を有する小さな粒子から、約ＩＣｌ１１の大きさの桁を有する寸法の錠剤を含むものと理解されるべきである。

酵素含有粒質物は、主に洗剤に対する無塵添加物として産業に於いて広く用いられている。例えば米国特許４，１０６，９９１、米国特許４，６６Ｌ４５２、ドイツ公開公報第２．０６０．０９５号公報及び英国特許Ｌ３６２，３６５が参照出来る。

酵素含有粒質物に関する大きな問題点の一つは酵素含有粒質物を、他の洗剤成分と混合した場合酵素の保存安定性にある。酵素活性の安定性に対する幾つかの方法が提案されているけれども、酵素粒質物含有洗剤に於ける酵素活性の安定性は未だ改善の余地がある。酵素含有粒質物に関する他の問題は、色の点にある。なぜならもしも例えば酸化チタンで被覆されていない場合大抵の酵素含有粒質物は変色するであろう。

酵素含有粒質物シュ関する第三番目の問題は、それらの臭いにある。酵素含有発酵ブロスを相当良好に精製した後でさえ、最終生成物はしばしば不本意に強力な臭いを示す。

無水のもしくは実質的に無水のスラリーは、主に液体洗剤に対する添加剤として産業に於いて広く用いられている。水性スラリーは、澱粉産業及び食品産業に於いて液体洗剤に対する添加剤として使用出来る。もしもスラリーが水性である場合、スラリー中の水の活性度又はイオン強度は、全量のもしくは実質的に全量の結晶性酵素が結晶の形態で維持されるように制御されねばならない。

液体洗剤に関する大きな問題は、これらに添加される酵素の安定性にある。幾つかの安定系がこれらの問題を克服する為の試みに於いて用いられてきている。低ｐＨ調製品の分野に於いてギ酸カルシウム及びホウ酸カルシウム安定化の双方が用いられてきており現在も用いられている。より高いｐｎ範囲において、幾つかの抑制方法も又用いられている。しかし、特に組み立てられた液体に於いて、疎水性カプセル化が用いられている（英国公告特許２．１８６，８８４Ａ参照）。

しかしこれらの安定系は改善の余地がある。液体の酵素含有調製品に関する大きな問題は色にある。大抵の液体の酵素含有調製品は、不純物の為着色しており、通常濁っている、幣褐色を有し更に又色は幾分バッチごとに変化する。このことは以下の内容を意味する。即ち液体洗剤の製造者は、彼が例えば青色の液体洗剤を製造したいと欲する場合該色を保証しなければならないだろうし、更に又この保証は液体酵素含有調製品のハンチごとに変化し得るし、この事は明らかに不利な点である。

流失物に関しても更に又液体洗剤に関しても臭は一つの問題である。

或は又ある調製品はアレルギー誘発不純物を含有し、従ってより純粋の調製品が必須である。

斯くして本発明の目的は、改良された安定性を示し更に無色或は殆ど無色であり更に高純度であり且つ臭の問題がない酵素剤による調製品、並びにこの様な酵素剤による調製品を含有する洗剤を従供することにある。

少なくとも一種の酵素を含有する本発明に係る酵素含有調製品は、少なくとも一種の酵素の少なくとも５０％の酵素活性が酵素結晶として調製品中に存在することを特徴とする。

驚くべきことに以下の内容が見出された。即ち本発明に係る酵素含を調製品は、洗剤中に存在する場合同様の良好な酵素安定性を有するか、又は別の同様ではあるが純度の幾分劣る酵素含有調製品よりもより良い酵素安定性を有する。通常以下の様に推定される。即ち発酵ブロスからのある種の不純物が酵素を安定させ、従って酵素をあまりに精製しすぎることは酵素の安定化に対して不利であろう。

この仮定は正しい。

しかし、もしも純粋な酵素が本発明に係る調製品中に結晶として維持され得る場合、安定性は殆ど等しいが又は純度の劣る調製品の安定性よりもより良いという事が見出された。更に又以下の内容が見出された。酵素の結晶化が後に不純物が導入されることなく行なわれた場合、本発明に係る酵素含有調製品は、改良された色及び臭の性質を有する。

以下の様に理解されるべきである。即ちもしも通常の酵素出発物質、即ち通常比較的多量の不純物を有する無定形粉末の形態の酵素、又は酵素溶液もしくはスラリーの形態の酵素が酵素出発物質（ここに於いて酵素活性の少なくとも５０％が酵素結晶として存在する）により１換されている場合、本発明に係る酵素含有調製品は通常の方法で製造出来る。もしも調製品が粒質物である場合、その様な使用可能な造粒方法の非制限的リストは先に掲げた米国特許４，１０６，９９１、米国特許４，６６１．．４５２、ドイツ公開公報２，０６０，０９５及び英国特許１．３６２，３６５である。

好ましい形態の酵素結晶は、本出願と同日に出願された係属特許出願番号８４７／９０及び８４．８／９０　（出願人の参照番号３４１１．０１０−ＤＫ及び３４１１．０２０）に記載されている。酵素含有調製品に於ける他のタイプの酵素結晶は自体公知である。デンマーク特許８７２／８６、米国特許４．６９９．８８２及びノルドロブ、Ｊ、Ｈ，等（Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ　Ｅｎｚｙｍｅｓ、２ｎｄ　ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９４８）を参照出来る。又、シグマケミカル社（Ｐ、Ｏ，Ｂｏｘ　１４５０８．ＳＬ。

Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ，ＬＩＳＡ）から人手出来る最近のカタログを参照のこと。

本発明に係る調製品に関連した別の利点は、水道水中の塩素と共に、洗浄フロートに於ける洗浄プロセスに於いて見出すことが出来る。この様な洗浄フロートに於いて、酵素は洗浄サイクルの最初に消費されるであろうし、更に結晶酵素が通常用いられる酵素よりも洗浄フロートに於いてよりゆっくり溶解する為に、本発明に係る調製品中の酵素は、塩素の一部が消費される前に、溶解した形では存在しないであろうし、従って酵素は塩素による不活性化から保護されるであろう。

この事は本明細書の後半で示されるであろう。

本発明に係る調製品の好ましい態様に於いて、調製品は酵素に対する安定化剤を含有する。この様な方法で、酵素の安定性の更なる改良が得られる。粒質物ＰＶＰ　（ポリビニルピロリドン）が用いられる場合；微生物の増殖に対するスラリー状の防腐剤の場合、スクロース及びＣａ”が安定化剤として使用出来る。

本発明に係る調製品の好ましい態様によれば、調製品はプロテアーゼ及び少なくとも一種の他の酵素を含有し、この場合実質的に１００％の蛋白分解活性が結晶として存在する。

極く少量の結晶プロテアーゼが本発明に係る調製品中に溶解するであろうし、或は又何物も溶解しないであろう。従って、他の酵素又は本発明に係る調製品中の他の酵素の安定性はこの対応に於いて改善されるであろう。もしもプロテアーゼがサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）であり、更に調製品がリパーゼリポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）を他の酵素として含有する場合、更にもしも調製品がスラリーである場合、調製品（結晶サビナーゼを有する）の対応に於いて、リパーゼは勝れた安定性を示す事が見出された。

プロテアーゼ及び少なくとも一種のプロテアーゼ感受性酵素を含有する本発明に係る調製品の好ましい態様に於いて、実質的に１００％のプロテアーゼ感受性酵素又はプロテアーゼ感受性酵素が結晶として存在する。僅かに少量のプロテアーゼ感受性酵素が本発明に係る調製品中に溶解するであろうし、或は又それらの幾分の量も溶解しないであろう。従って、本発明に係る調製品中のプロテアーゼ感受性酵素の安定性は、この対応に於いて改良されるであろう。もしもプロテアーゼがサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）であり、更に調製品がリパーゼリポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）を他の酵素として含有し、更にもしも調製品が粒質物である場合、調製品（結晶性リパーゼを有する）の対応に於いて、リパーゼは勝れた安定性を示すことが見出された。

本発明に係る調製品の好ましい態様に於いて、９０％以上の結晶が０．　１ａｍ −５００ｕｍ、好ましくはＩｐｍ−１００ｕｍの最大結晶寸法を有する。この様な結晶は、この出願と同日に出願された同時係属特許出願番号８４７／９０及び８４８／９０（出願人の参照番号３４１１．０１０−ＤＫ及び３４１１．０２０ −ＤＫ）に従って調製されるが、それらは他の結晶化方法によっても製造出来る。

本発明に係る調製品の好ましい態様に於いて、酵素はプロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼ、アミダーゼもしくはオキシダーゼ又はこれらの蛋白処理変形体である。これらの酵素は洗剤中添加剤として通常使用される酵素である。

本発明に係る調製品の好ましい態様に於いて、酵素はプロテアーゼであり更にプロテアーゼはズブチリシンタイプのプロテアーゼである。この様な例は、サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）（登録商標）、エスペラーゼ（Ｅｓｐｅｒａｓｅ）　（登録商標）、アルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）　（登録商標）、ズブチリシン（Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）　Ｎ０ＶＯ又はこれらの蛋白処理変形体である。これらの酵素は洗剤中好ましいプロテアーゼである。

本発明に係る調製品の好ましい態様に於いて、酵素はリパーゼであり更にリパーゼはりボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）である。

本発明に係る調製品の好ましい態様に於いて、少なくとも一種の酵素の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも９０％の酵素活性が好ましくは全ての酵素の、酵素結晶として粒質物中に存在する。この様な調製品の安定性は優れたものである。

本発明に係る調製品の好ましい態様に於いて、調製品は粒質物である。この調製品は粒子Ｔｈの形態で洗剤に対する添加剤として充分適合している。

本発明に係る調製品の好ましい態様に於いて、調製品はスラリーである。

スラリーとしての調製品の好ましい態様に於いて、スラリーは無水であるか又は実質的に無水である。

スラリーとしての調製品の好ましい態様に於いて、スラリーは水性である。

本発明に係る調製品の好ましい態様に於いて、調製品は洗剤添加剤として使用される。これは本発明に係る調製品の主な用途である。

又本発明に係る調製品を含有する洗剤を含んでなる。

本発明に係る洗剤の好ましい態様に於いて、洗剤は固体であり更に本発明に係る粒質物を洗剤１ｇ当り０．００１１０■の酵素蛋白質、好ましくは洗剤１ｇ当り０．００５−５■の酵素蛋白質、最も好ましくは洗剤１ｇ当り０．０１−１■の酵素蛋白質を含有する。本発明に係る粒質物の酵素の強度に応じて、これらの濃度は通常洗剤に０．０に１０％Ｗ／Ｗの粒質物を添加することにより得られるであろう。

本発明に係る洗剤の好ましい態様に於いて、洗剤は液体であり更に本発明に係る無水もしくは実質的に無水のスラリーを洗剤１ｇ当り０．００１−１０■の酵素蛋白質、好ましくは洗剤１ｇ当り０．００５−５■の酵素蛋白質、最も好ましくは洗剤１ｇ当り０．０１−１■の酵素蛋白質の量で含有する。この様な液体洗剤は、酵素の満足出来る安定性を示す。

本発明に係る粒質物調製品に関するバインダーの使用は必要であり更に所望によりこの様なバインダーは炭水化物バインダー、例えばデキシトリンもしくはセルローズ誘導体、例えばヒドロキシプロピルセルローズ、メチルセルローズ又はＣＭＣである。

実施例例１２４４ＫＮＰＵ／ｇの活性を有する０、５ｋｇの結晶サビナーゼ（ＳＡＶＩＮＡＳＥ）　（登録商標）、１．５ｋｇのヘントナイトＡＳＢ３５０　（ＥＣＣＩ）、２．２ｋｇの繊維セルロース、ＡＲＢＯＣＥＬ　ＢＣ２００、及び９．１ｋｇの微粉砕硫酸ナトリウムの配合を有する１３．３ｋｇの粉末組成物を、３．０ｋｇの水、０．１５ｋｇのポリビニルピロリド７に３０及び１．３５ｋｇ（７）炭水化物バインダーからなる４、５ｋｇのバインダー溶液と共にルーディゲミキサーＦＭ５０中で造粒する。造粒は、米国特許４，１０６，９９１の実施例１に記載されると同様の方法で行なわれる。

サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）は、米国特許３，７２３，２５０に示されると同様に調製されるアルカリハシラス（ＢａｃｃｉｌＩｕｓ）プロテアーゼである。又、サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）、Ｂ５４５　ｂ−ＣＢ、１９８８　３月、に対する製品シート（Ｎｏｖｏ　Ｎｏｒｄｉｓｋ社から要求により入手出来る）を参照出来る。

ＫＮＰＵ蛋自分解活性単位は、ＡＦＩＯｌ、１０に提示されており、これは要求によりＮｏｖａ　Ｎｏｒｄｉｓｋ社（デンマーク）から入手出来る。

粒質物は流動床中、１％未満に乾燥し、然る後明るい色の粒質物が以下の粒形分布で得られる２１１％　＞　１１８０μｍ１７％　＞　１００１０００ａ％　〉　８５０μｍ４０％　〉　７１０μｍ５６％　〉　６００μｍ７７％　〉　５００μｍ８６％　〉　４２０μｍ９３％　〉　３５５μｍ２、４％　〈　３００ＩＪｍこれは活性７．３ＫＮＰＵ／ｇを有し、さらにハンター力ラーコーディ皐−ト（Ｌ：ａ：ｂ）＝（７９，６：１．３＋１１．３）を有する。

最後に、粒質物を篩分けし粒径３００μｍ〜１０００μｍを有する生産物を得、次いで７％のＰＥＧ４０００および１２％のＴｉＯ□およびカオリンの１対１混合物を用い、米国特許４，１０６，９９１の例２２に記載される方法でコートした。

例２結晶リポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）を含有するりボラーゼ（ＬｉｐｏＪａｓｅ）　（登録商り１００Ｔ粒質物の調Ｍ０以下の成分をルーディゲミキサーＦＭ５０に導入する：２、ＯｋｇのヘントナイトＡＳＢ　３５０３、Ｏｋｇの繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　ＢＣ２００２，１ｋｇの炭水化物バインダー０．６３ｋｇの結晶リポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商１）　（ＥＰ２３８０２３に従って製造されるリボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標））１２．３ｋｇの粉砕ＮａｚＳＯａ混合乾燥成分を、３゜６ｋｇの水を用いてスプレーする。湿った混合物を、米国特許４，１０６．９９１の実施例１の記載と同様に、多数セントのナイフからの圧縮及び造粒影響下にさらす。

造粒が完了したら、粒質物を流動床で乾燥し次いで生成物として規定したその一部（この場合、３００−９００μｍ）を品質試験に対し分離する。規定寸法未満の部分（これは処理されない）及び規定を超える寸法の部分（これは粉砕される）を再循環する。

色を、ハンターラブスケール（ＡＦ７８）に従い測定する：Ｌ＝７０．１、ａ＝ｏ、４、ｂ−１２，０゜上記製品部分を、保存安定試験に対し米国特許４．１０６．９９１の実施例２２に従ってコートする。

例３比較用の対照として無定形リボラーゼ（ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）を含有するリポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）ＬＯＯＴ粒質物の調製。

例２に従い以下の処方により製造する：２．０ｋｇのヘントナイトＡＳＢ　３５０３．０ｋｇの繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　ＢＣ２００２，１ｋｇの炭水化物バインダー０．６３ｋｇの無定形リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）９、　７ｋｇの粉砕Ｎａｚ　ＳＯ４混合乾燥成分を、３．０ｋｇの水を用いてスプレーする。

カラーコーディネイトニＬ＝６８．０．ａ＝０．７、ｂ−１５，０゜例２の調製品（結晶リポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）の色は、例３の調製品（無定形リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標））の色よりもより明るい。

製品部分を保存安定試験に対しコートする。

例２及び例３に従って得られた被覆粒質物の保存安定性を、促進条件を用いて試験する：２％の粒子物を、ヨーロッパ製の重質洗剤に添加し次いで５０℃の密閉容器内に保存する。活性を０日、１日、３日及び７日後に測定し次いでパーセントで計算する。

残留活性（％）１日　３日　７日例２：結晶リポラーゼ（Ｌｊｐｏｌａｓｅ）　（登録商標＞　９９　８５　６９例３：無定形リボラーゼ（Ｌｊｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）　９０　８２　５９例４無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）及び結晶リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）を含有するサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）（登録商標）／リボラーゼ（Ｌｊｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）３．０１５０Ｔ共粒譬物の調製。

例２に従い次の処方を用いて製造する：２．０ｋｇのベントナイトＡＳＢ　３５０３．０ｋｇの繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　ＢＣ２００２，１ｋｇの炭水化物バインダー０．３２ｋｇの結晶リポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）１．８４ｋｇの無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）１０．７ｋｇの粉砕ＮａｚＳＯ４混合乾燥成分を、３．３ｋｇの水を用いてスプレーする。

製品部分を保存安定試験に対しコートする。

例５無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）及び無定形リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）を含有するサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）／リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）３．。

１５０Ｔ共粒質物の調製。

例２に従い以下の処方を用いて製造する：２．０ｋｇのヘントナイトＡＳＢ　３５０２．１ｋｇの炭水化物バインダー１．６ｋｇの無定形リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）１．８４ｋｇの無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）９、　７ｋｇ（７）粉砕Ｎａｚ　ｓｏ４混合乾燥成分を３．３ｋｇの水を用いてスプレーする。

製品部分を保存安定試験に対しコートする。

例６結晶サビナーゼ（Ｓａｖｔｎａｓｅ）　（登録商標）及び無定形リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）を含有するサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）（登録商標）／リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）３．０１５０Ｔ共粒質物の調製。

例２に従い以下の処方を用いて製造する：２．０ｋｇのヘントナイト八ＳＢ　３５０３．０鷺の繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　ＢＣ２００２，１ｋｇの炭水化物バインダー１、　６ｋｇの無定形リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）１．１．０ｋｇの粉砕Ｎａｚ　ＳＯ４混合乾燥成分を、２．９ｋｇの水に懸濁せしめた、０．　７ｋｇの結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）フィルターケイク（デンマーク特許出願８４７／９０に従って製造）を用いてスプレーする。

製品部分を保存安定試験に対しコードする。

例７結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）及び結晶リポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）を含有するサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）（登録商標）／リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）３．０１５０Ｔ共粒譬物の調製。

例２に従い以下の処方を用いて製造する：２．０ｋｇのヘントナイトＡＳＢ　３５０３．０ｋｇの繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　ＢＣ２００２，１ｋｇの炭水化物バインダー０．３２ｋｇの結晶リポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）１２．２ｋｇの粉砕ｐＪ　ａｚ　Ｓ　Ｏａ混合乾燥成分を、３．０ｋｇの水に懸濁せしめた、０．　７ｋｇの結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）フィルターケイク（デンマーク特許出願８４７／９０に従って製造）を用いてスプレーする。

製品部分を保存安定試験に対しコートする。

プロテアーゼ感受性酵素リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）に関して測定した、例４−７に従って得られた被覆粒質物の保存安定性を、促進条件下で試験する２４％の粒質物を、ヨーロッパ製の重質洗剤に添加し次いで５０°Ｃの密閉容器中に保存する。活性を、０日、１日、３日及び７日後に測定し次いでパーセントで計算する。

リボラーゼの残留活性（％）１日　３日　７日他の例に於いて、例４−７に従って得られた粒質物（プロテアーゼ感受性酵素リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）に関して測定）を、他の促進条件下で試験する２４％の粒質物を、ヨーロッパ製の重質洗剤に添加し次いで３７° Ｃ及び７０％の相対湿度で密閉容器中に保存する。活性を０日、３日、７日及び１４日後に測定し次いでパーセントで計算する。

リボラーゼの残留活性（％）３日　７日　１４日上記表から最も良い結果が結晶リパーゼに対して得られる。

例８結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）を含有するサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）４．ＯＴ粒質物の調製。

例２に従い以下の処方を用いて製造する：２．０ｋｇのベントナイトＡＳＢ　３５０３．０ｋｇの繊維セルロース、八ｒｂｏｃｅＩＢＧ　２００２．４ｋｇの炭水化物バインダー１１．７ｋｇの粉砕Ｎａｚ　ＳＯ４混合乾燥成分を、２．２ｋｇの水、０．１１ｋｇのＮａｚ　ｓ。

４及び０．２ｋｇのＰＶＰ　Ｋ２Ｏに懸濁せしめた１、２ｋｇの結晶サビナーゼ（５ａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）フィルターケイク（デンマーク特許出１’ ｌ　８４７／９０に従って製造）を用いてスプレーする。

カラーコープイネイト：Ｌ＝７９．９、ａ＝０．８、ｂ＝７．８゜例９無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）を含有するサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）４．０Ｔ粒質物の調製。

例２に従い以下の処方を用いて製造する：０．８ｋｇのカオリン、５ｐｅｓｉ＋ｈｉｔｅ３．０ｋｇの繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　８Ｃ２００３，０ｋｇの無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）コンセントレイト１１．２ｋｇの粉砕Ｎ　ａ　ｚ　Ｓ　Ｏ４混合乾燥成分を、３．０ｋｇの水に溶解して１．　８ｋｇの炭水化物バインダー、０．２ｋｇのＰＶＰ　Ｋ２Ｏを用いてスプレーする。

カラーコープイネイト：Ｌ＝４８．２、ａ＝６．０．ｂ−１７，７゜明らかに例８の調製品（結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標））の色は例９の調製品（無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）（登録商標））の色よりもより明るく、目的に対し、ＴｉＯ２は例８の調製品に於いて必要でない。

例１０結晶ドゥラザイム（Ｄｕｒａｚｙｍ）　（登録商標）を含有するドゥラザイム　（１）ｕｒａｚｙｍ）　（登録商標）６．０Ｔ粒質物の調製。

例２に従い以下の処方を用いて製造する：０゜７ｋｇのヘントナイトＡＳＢ　３５０１．０ｋｇの繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　ＢＣ２０００，４ｋｇの炭水化物バインダー４、　３ｋｇの粉砕Ｎａｚ　ＳＯ４混合乾燥成分を、１．　５ｋｇの水、０．０７ｋｇのＰＶＰ　Ｋ２Ｏ及び０．４ｋｇの炭水化物バインダーに懸濁せしめた、０゜３５４ｋｇの結晶ドウラザイム（Ｄｕｒａｚｙｍ）　（登録商標）フィルターケイク　（デンマーク特許出願８４７／９０に従って製造）を用いてスプレーする。

カラーコープイネイト：Ｌ＝８２．５、ａ＝１．０、ｂ−無定形ドゥラザイム（Ｄｕｒａｚｙｍ）　（登録商標）を含有するドウラザイム（Ｄｕｒａｚｙｍ）　（登録商標’）６．０Ｔ粒質物の調製。

例２に従い以下の処方を用いて製造する：１．５ｋｇのベントナイトＡＳＢ　３５０３．２５ｋｇの繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　ＢＣ２０００，９ｋｇの炭水化物バインダー７．７ｋｇの粉砕Ｎ　ａ　ｚ　Ｓ　Ｏａ２．０ｋｇの無定形ドゥラザイム（Ｄｕｒａｚｙｍ＞　（登録商標）混合乾燥成分を、２．５ｋｇの水、０．１５ｋｇのＰＶＰ　Ｋ２Ｏ及び０．５ｋｇの炭水化物バインダーを用いてスプレーする。

カラーコープイネイト：Ｌ＝５２．８、ａ＝５．２、ｂ＝１７．４゜明らかに例１０の調製品（結晶ドウラザイム（Ｄｕｒａｚｙｍ）（登録商標））の色は、例１１の調製品（無定形ドゥラザイム（Ｄｕｒａｚｙｍ）　（登録商標））の色よりもより明るく、目的に対し、ＴｉＯ２は例１０の調製品に於いて必要でない。

例Ｉ２結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）を含有するサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）４．０Ｔ粒質物の調製。

骨２に従い以下の処方を用いて製造する：２．０ｋｇのベントナイト八ＳＢ　３５０３．０ｋｇの繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　ＢＣ２００１、２ｋｇの炭水化物バインダーＬＬ、９ｋｇの粉砕Ｎａ　２　Ｓ　Ｏ４０，４６ｋｇの乾燥結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）混合乾燥成分を、０．２ｋｇのＰＶＰ　Ｋ２Ｏ及び１．　２ｋｇの炭水化物バインダーを含有する２、３ｋｇの水を用いてスプレ結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）を含有するサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）４．０Ｔ粒質物の調製。

例２に従い以下の処方を用いて製造する。

２．０ｋｇのヘントナイトＡＳＢ　３５０３．０ｋｇの繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　ＢＣ２００２，４ｋｇの炭水化物バインダー１１．６ｋｇの粉砕Ｎａ、Ｓｏ。

混合乾燥成分を、２．５ｋｇの水中にＯ，１ｋｇのＮａｚＳＯ４及び０．２ｋｇのＰＶＰ　Ｋ２Ｏを懸濁せしめた、１．　５ｋｇの結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）フィルターケイク（デンマーク特許出願８４７／９０に従って製造）を用いてスプレーする。

例１４無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）を含有するサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）６．０Ｔ粒質物の調製。

例２に従い以下の処方を用いて製造する：ｏ、ｓｋｇのカオリン、Ｓｐｅｓｗｈｉｔｅｌ、８ｋｇの繊維セルロース、Ａｒｂｏｃｅｌ　ＢＣ２００２，８ｋｇの無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）１２．６ｋｇの粉砕Ｎａｚ　Ｓ○４混合乾燥成分を、３．６ｋｇの水に溶解して１．８ｋｇの炭水化物バインダー、０．２ｋｇのＰＶＰ　Ｋ２Ｏを用いてスプレーする。

サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）に関して測定される、例１．２ −１４に従って製造された被覆粒質物の保存安定性を促進条件下で試験する：１％の粒質物を、ヨーロッパ製の重質洗剤に添加し次いで５０°Ｃの密閉容器中に保存する。活性を０日、１日、３日及び７日後に測定し次いでパーセントで計算する。

サビナーゼの残留活性（％）１日　３日　７日例１２：乾燥結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）　６０　５８　５２例１３：結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）　６８　５７　４９例１４：無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）　６０　５１　４２明らかに結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）の安定性は無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）・よりもより良い。

例１５この例は塩素含有洗たくフロートに関して更に利点を示す。

秒で現わされる放出速度、即ち酵素の５０％、９０％及び９５％を溶解するのに必要な時間間隔を以下の様に示す。

放出速度（秒）５０％　９０％　９５％例１２：乾燥結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）　５７　８５　９２例１３：結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）　６９　１１６　１２２例１１無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）　４３　６２　５９明らかに結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）は、無定形サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）よりもより速やかに溶解する。

例１６１％量の液体調製品リボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）１００Ｌ、０．２％量の結晶サビ゛ナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）及び０．６２５％量の溶解サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）を、以下の処方に従ってビルダーと共にＮｏＶＯ社の標準液体洗剤に添加した：ベロール１６０　１５％ナンサ　１１６９／Ｐ　３３．３％ココナツ脂肪酸　９％オレイン酸　１％トリエタノールアミン　９％グリセロール　１２％エタノール　１．５％クエン酸三ナトリウム２Ｈ２０８％ＣａＣＩｚ　２Ｈｚ　Ｏ０，１％下記の表は４°Ｃ−３５°Ｃで３日後液体洗剤中溶解リポラーゼ（ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）の残留活性を示す。

３日後の残留活性試　料　４°Ｃ３５°Ｃリボラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）＋結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）　６６％　２３％リポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）＋液体サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）　１６％　０．９％明らかに、リポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）　（登録商標）の安定性は、溶解サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）の存在の場合よりも結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）の存在に於いてよりこの例は水性及び無水サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）スラリーの保存安定性を示す。

水性スラリーベースは、脱イオン水に溶解した５４％（ＮＨ４）２３０４であった。

無水スラリーベースは、３０５ｇの界面活性剤Ｔ９．１４０ｇのＮａ、ＳＯ４及び１５ｇのエーロジル２００でありこれらは充分良好に混合され更にウルトラ− ターラックスミキサーで均質化された。

８．７ｇの結晶サビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）又は１７ｇの無定形サビナーゼ（Ｓａｖｊｎａｓｅ）　（登録商標）を、各々のベースと混合した。スラリーをウルトラ−ターラックスミキサーで均質化した。

スラリーを６０°Ｃで５日間インキュベートし、次いで残留活性を測定した。

貯蔵安定性結　晶　無定形水性　無水　水性　無水ＫＮＰＵ／　ｇ　（χ）　ＫＮＰｔｌ／　ｇ　Ｃχ）　ＫＮＰＵ／　ｇ　（χ）　ＫＮＰＵ／　ｇ　（Ｘ）０日　６３．０（１００）　１５．８（１００）　９．１８（１００）　７．６３（１００）１日　６５．６（１０４）　１７．５（１１１）　７．４５（８１）　７．０５（９２）５日　５７．７（９２）　１４．７（９３）　７．６Ｈ８３）　６．４８（８５）上記の表から明らかな様に、結晶調製品の安定性は無定形調製品の安定性よりも優れている。

要　約　書酵素含有調製品は、少なくとも１種の酵素を含有し、これにより少なくとも１種の酵素の少なくとも５０％の酵素活性が、好ましくは１種以上の酵素に対する安定化剤と共に、酵素結晶として調製品中に存在する。洗剤は、この調製品を含有する。該調製品および該洗剤の双方とも粒質物又はスラリーであってよい。該調製品および該洗剤は、良好な安定性を示し、退色を示さない。

補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８〕平成４年り月／ヲ日

Claims

【特許請求の範囲】

１．少なくとも一種の酵素を含有する酵素含有調製品であって、少なくとも一種の酵素の少なくとも５０％の酵素活性が酵素結晶として該調製品中に存在する、前記酵素含有調製品。
２．調製品が酵素に対する安定化剤を含有する、請求の範囲第１項記載の調製品。
３．プロテアーゼ及び少なくとも一種の他の酵素を含有し、実質的に１００％の蛋白分解活性が結晶として存在する、請求の範囲第１項又は第２項記載の調製品。
４．プロテアーゼ及び少なくとも一種のプロテアーゼ感受性酵素を含有し、実質的に１００％のプロテアーゼ感受性酵素又は複数のプロテアーゼ感受性酵素が結晶として存在する、請求の範囲第１項又は第２項記載の調製品。
５．９０％以上の結晶が、０．０１μｍ−５００μｍ、好ましくは０．１μｍ− １００μｍの最大の結晶寸法を有する、請求の範囲第１項〜第４項のいずれかに記載の調製品。
６．酵素がプロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼ、アミダーゼ又はオキシダーゼ、又はこれらの蛋白質処理変異体である、請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記載の調製品。
７．酵素がプロテアーゼであり、更にプロテアーゼがスブチリンタイプのプロテアーゼである、請求の範囲第６項に記載の調製品。
８．酵素がリパーゼであり更にリパーゼがリポラーゼ（Ｌｉｐｏｌａｓｅ）（登録商標）である、請求の範囲第６項に記載の調製品。
９．少なくとも一種の酵素の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも９０％の酵素活性が、好ましくは全ての酵素の、酵素結晶として調製品中に存在する、請求の範囲第１項〜第８項のいずれかに記載の調製品。
１０．調製品が粒質物である、請求の範囲第１項〜第９項のいずれかに記載の調製品。
１１．調製品がスラリーである、請求の範囲第１項〜第９項のいずれかに記載の調製品。
１２．スラリーが無水もしくは実質的に無水である、請求の範囲第１１項に記載の調製品。
１３．スラリーは水性である、請求の範囲第１１項に記載の調製品。
１４．調製品が洗剤添加剤として用いられる、請求の範囲第１項〜第１３項のいずれかに記載の調製品。
１５．請求範囲第１項〜第１４項のいずれかに記載の調製品を含有する事を特徴とする洗剤。
１６．洗剤は固体であり更に請求の範囲第１０項記載の酵素含有粒質物を１ｇの洗剤当り０．００１−１０ｍｇの酵素蛋白質、好ましくは１ｇの洗剤当り０．００５−５ｍｇの酵素蛋白質、最も好ましくは１ｇの洗剤当り０．０１−１ｍｇの酵素蛋白質の濃度で含有する、請求の範囲第１５項記載の洗剤。
１７．洗剤は液体であり更に請求の範囲第１１項記載の酵素含有スラリーを１ｇの洗剤当り０．１０１−１０ｍｇの酵素蛋白質、好ましくは１ｇの洗剤当り０．００５−５ｍｇの酵素蛋白質、最も好ましくは１ｇの洗剤当り０．０１−１ｍｇの酵素蛋白質の量で含有する、請求の範囲第１５項記載の洗剤。