JPH05502996A - 組換え型産児調節用ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 組換え型産児調節用ワクチン 数多くの経済発展途上国で人口が急速に増えており、受精能力を調節するための 代替方法に関する一定した必要性が存在している。ヒト妊娠ホルモン、即ち絨毛 膜ゴナドトロピン（ｈＣＧ）に対する抗体の生成を誘発する産児調節用ワクチン を、我々は数年前に提案した。これらの発明は、インド、米国および他のいくつ かの国々で発行された特許の中に記述されている（ＥＰ　２０４５６６、ＪＰ　 ６２２８６９２８、ＣＡ　１２３９３４６、ＵＳ　４７８０３１２、ＣＮ　８６ ０３８５４参照）。ここに我々は、１回もしくは限られた回数の注射を行うこと で、ｈＣＧに対して長期の抗体応答を生じる他の発明を記述する。

ｈＣＧに対する抗体を上昇させることによって受精能力を調節する可能性は、我 々の以前の研究および他の人達の研究から公知であるが、初期に利用されたこれ らのワクチン類は、２種以上のペプチド類から成る接合体、例えば破傷風菌トキ ソイドもしくは他の担体に連結させた１４５個のアミノ酸から成る天然のベータ ｈＣＧペプチドであった。もう１つの様式に関しては、このベータｈＣＧペプチ ドをアルファｏＬＨと会合させた後、担体に連結させたものである（Ｔａ１ｗａ ｒ他、１９８８、米国特許番号４７８０３１２）。これらのワクチン類は、天然 給源から得られる構成蛋白質の精製および製造を必要としている。これらのいく つかのコストは現在のところ非常に高く、これが、経済発展途上国の家族計画プ ログラムでそれらを大規模に使用することに対する制限となっている。更に、こ れらのワクチン類では、初期免疫化のための３回の注射に続く追加抗原投与とし ての４番目の注射が必要とされる。本発明の具体例の主要利点は、１回の初期注 射と多くても１回の追加抗原投与を用いることで、満足できる保持された抗体応 答が得られることである。もう１つの興味のある特徴は、このワクチンが低コス トで製造できることと大規模使用で利用できることである。

ワクシニアウィルスは、分子生物学者のための多様な道具としてよく知られてい る。１９８８年１２月３日付のＮｅｗ　５ｃｉｅｎｔｉｓｔ　（Ａｎｏｎ、３８ 頁）の１つの記事は、ウシに関する牛疫ウィルスのための新規なワクチンを表す もので、そしてこのワクチンは、ワクシニアウィルスを遺伝工学的に処理したも のであると述べられており、ここで、研究書違は、牛疫ウィルスの膜に関する遺 伝情報を指定する２つの遺伝子をワクシニアウィルス中に形質転換した。

１９９０年１月付のＴｉｂｔｅｃｈ記事（２０−２５頁）で、Ｍｉｎｅｒ他は、 分子生物学書違の多様な道具としてのワクシニアウィルスを考察しており、そし て「このワクシニアウィルス系は、哺乳動物細胞中で正確にプロセシングされそ して修飾された有意量の真核蛋白質を生産するための有望な方法である」と述べ ている。

米国特許番号４．６０３．１１２　（発明者：　Ｅ、　Ｐａ０１ｅｔｔｉ他、１ ９８６年７月２９日発行）には、ワクシニアウィルスのゲノムを修飾して、ワク シニアウィルス中には天然に存在していないＤＮＡを含む組換え型ワクシニアウ ィルスを生産させるための方法が開示されている。この参照には、抗原となり得 る蛋白質の遺伝情報を指定する非相同性ＤＮＡに対する参照が含まれてはいるが 、この技術が明らかに、産児調節用ワクチンのための１つのルートとなるか、或 は哺乳動物生殖系とは無関係な蛋白質もしくはペプチド類に対する抗体を上昇さ せ得るワクチンとして倍増する産児調節用ワクチンのための１つのルートとなる 、ことに関するいかなる示唆も与えられていない。

ＰＣＴ出願番号ＵＳ８ｇ１００６１４　（発明者・Ｂ、Ｒ，Ｂｌｏｏｍ他、１９ ８８年２月２９日出願）は、外来ＤＮＡを発現し得る媒体としての組換え型ミコ バクテリアの使用に関するものである。ここでもまた、上記ミコバクテリアは抗 受精能力ワクチン用媒体として使用できる可能性があることが示唆されている。

しかしながら、明らかに、受精能力を調節するためのミコバクテリアの使用に対 するいかなる請求も見られず、そしてまた、４および５頁に断定的欠点を指摘す ることで、この分野におけるワクシニアの利用に対して読者を遠ざけている。

従って、明らかに、必要とされるならば非生殖系に関連した疾患、例えばバクテ リアおよびウィルスによる感染、に対するワクチンとしても作用し得るところの 、安全かつ簡潔であり低コストの有効な産児調節用ワクチンが提供されることに 対する必要性が存在している。上記参照のいくつかは、バイオ技術の道具として のワクシニアの使用を示唆してはいるが、他の参照、特にＢｌｏｏｍ他は、明ら かに、ワクシニアを考慮することを妨げている。この種類の研究に伴う費用の点 で、産児調節用ワクチンにおけるワクシニア使用を目的としたこの領域の研究に 対して明らかな道しるべが存在しているとは言えない。

従って、本発明は、哺乳動物生殖ペプチドホルモンもしくはそれの活性フラグメ ントか、或は哺乳動物生殖系に無関係な蛋白質もしくはペプチドの遺伝情報を指 定する遺伝子もしくは遺伝子フラグメントを伴う読み枠配列中の、哺乳動物生殖 ペプチドホルモンもしくはそれの活性フラグメント、の遺伝情報を指定する第一 配列と、ワタシニアウイルスゲノムの少なくとも一部の遺伝情報を指定する第二 配列と、から成るヌクレオチド配列を提供する。

本発明はまた、（ａ）絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニットか、（ｂ）黄 体形成ホルモンのアルファサブユニットか、或は（Ｃ）哺乳動物生殖系に無関係 な蛋白質もしくはペプチドの遺伝情報を指定する遺伝子もしくは遺伝子フラグメ ントを伴う読み枠配列中の、絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニットか、ま たは黄体形成ホルモンのアルファサブユニットのどれか、の遺伝情報を指定する 第一配列と、ワクシニアウィルスゲノムの少なくとも一部の遺伝情報を指定する 第二配列と、から成るヌクレオチド配列を提供する。

本発明はまた、（ａ）ヒト絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニ、ソトか、（ ｂ）ヒツジ黄体形成ホルモンのアルファサブユニットか、或は（ｃ）Ｂ型肝炎ウ ィルスの表面蛋白質の遺伝情報を指定する遺伝子もしくは遺伝子フラグメントを 伴う読み枠配列中の、ヒト絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニットか、また はヒツジ黄体形成ホルモンのアルファサブユニットのどれか、の遺伝情報を指定 する第一配列と、ワクシニアウィルスゲノムの少なくとも一部の遺伝情報を指定 する第二配列と、から成るヌクレオチド配列を提供する。

上記ヌクレオチド配列を、好適には、ワクシニアウィルスゲノムの非必須部分に 挿入することで、組換え型ワクシニアウィルスを生じさせる。

このワクチンは、ＤＮＡレベルでトランスメンブラン蛋白質もしくはペプチドの 遺伝情報を指定する遺伝子フラグメントと融合させたｈＣＧのベータサブユニッ トの遺伝子から成っていてもよい。好適なトランスメンブランペプチドは４９個 のアミノ酸で構成されている。混合ワクチンは、ワクシニア−ベータｈＣＧ　（ 例えばｖＳＳ２）とワクシニア−アルファヒツジ黄体形成ホルモン（ｏＬＨ）、 例えば（ｖＳＬ５）とから成る物理的混合物で構成されていてもよい。

本発明に従って、ヒト絨毛膜ゴナドトロピンの組換え型ベータサブユニットか、 組換え型アルファヒツジ黄体形成ホルモンか、或はそれらの混合物から成る産児 調節用ワクチンを提供する。

好適な具体例は、トランスメンブランペプチドの遺伝情報を指定する遺伝子と融 合させたｈＣＧのベータサブユニットのための遺伝子をワクシニアウィルスに挿 入したところの、組換え型ウィルス、例えばｖＳＳ２から成る。

更に一層の好適具体例は、ＯＬＨのアルファサブユニットのための遺伝子をワク シニアウィルスに挿入したところの、ｖＳＬ５の如き組換え型ウィルスから成る 。

もう１つの好適な具体例は、篤−ヌクレオチド配列がＢ型肝炎ウィルス表面蛋白 質の中間蛋白質の遺伝情報を指定する遺伝子を伴う読み枠配列中のヒト絨毛膜ゴ ナドトロピンのベータユニットから成る。他の有機体、特に病原体、から得られ る他の蛋白質、或は合成配列もまた、Ｂ型肝炎ウィルス蛋白質の代わりにコード され得る。

次の図で本発明の詳細な説明する。

図１は、つなぎ止めたベータｈＣＧを構築するための方策を示す。

図２は、アルファｏＬＨ遺伝子をワクシニアウィルス中に挿入するための方策を 示す。

図３は、抗原結合容量で表した抗ｈＣＧ応答を示す。この図は、１０ｐｆｕ　（ プラーク形成単位）の用量でｖＳＳ２組換え型ワクチン注射を１回行った４匹の ラットにおける典型的な抗体応答を示している。４週間経った後の測定可能循環 中、抗体を用いた各々の動物の応答。これらのタイターは１００〜９００ｎｇ／ ｍＬの範囲であり、これは明らかに、妊娠に対する保護を示すと考えられる閾値 である２０ｎｇ／ｍＬ以上であった。これらのタイターは１２週間に渡る観察で 維持された。

図４ａ〜４ｈは、ｖＳＳ２組換え型ワクチンを注射した８匹のボンネン）　（ｂ ｏｎｎｅｔ）サルにおけるｈＣＧ抗体発生を示す。

図５は、ＢｈＣＧ−ＨＢｓＡｇを構築するための方策を示す。ＢｈＣＧとＨＢｓ Ａｇとの間にある連結配列と共に、最終的プラスミドｐＳＳ４を示す。

図６は、ｐＳＳ４のサザーンプロットを示す。切断修復で標識したＳ遺伝子をプ ローブとして用い、そして高緊縮で洗浄した。

図７は、ｐＵＣプラスミド中でのＢ型肝炎ウィルスゲノムのサブクローニングを 示す。

図８は、ＢｈＣＧおよびＨＢｓＡｇに関する分析結果を示す。Ｘ軸上に、ｖＳＳ ２と共に、３つの平行して精製したウィルスｖＳＳＪ組換え体（１，２および３ ）、内部対照、並びにＡｂｂｏｔｔの陽性および陰性対照を置く。

図９は、ｖＳＳＪ組換え型ワクチンを注射した７匹のラットにおけるｈＣＧ抗体 の発生を示す。

実施例１　組換え型抗ｈＣＧワクチンの合成および利用ｖＳＳ２の構築方策：水 痘性口内炎ウィルスの糖蛋白質に関する遺伝情報を指定する遺伝子（ＶＳＶｇ） のトランスメンブランおよび細胞質ドメインを、ベータｈＣＧ　ｃＤＮＡの３′ 末端に枠内融合させることによって、つなぎ止めたベータｈＣＧを有するウィル スを構築した（図１）。このＶＳＶｇ遺伝子をＡｌｕ　ＩおよびＸｈｏ　Ｉで消 化させることで、２４９ｂｐの膜アンカー配列を放出させた。このフラグメント をアクリルアミドゲルから溶離させ、クレノー充填した後、Ｓｍａ　Ｉ切断ベク ターｐｓｓ　Ｉに連結させたが、後者は、以前に我々が記述した方法によって製 造した（Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉｔ他、１９８９）　、ベータｈＣＧを参照にし て、該アンカー配列の配向を、適切な制限酵素消化によって検査した。これを、 野生型ウィルスに予め感染させたＣＶ−１細胞を移入するために用い、そして他 に記述されている技術によって、青色プラークに関して可視的スクリーニングを 行うことにより、組換え体を取り出した。

ベータｈＣＧに関する分析：ベータｈＣＧに対して上昇させたマウス単クローン 抗体を用いた競合放射線免疫検定法により、ｖＳＳ２感染細胞のペレット中で、 ベータｈＣＧ発現を検出した。ｈＣＧの細胞局在化を、抗ベータｈＣＧＭｏＡｂ に続いて、ＦＩＴＣに接合させたラビット抗マウスを用いた免疫蛍光法によって 測定した。

免疫原性：１０’ｐｆｕのｖＳＳ２を１回皮内注射することで、ｈｃＧと反応し く図３）そして標的組織上のレセプタに対するｈＣＧの結合を有効に阻害すると ころの、ラット中の抗体形成を引き出させた。これらの抗体は、４週間以内に検 出できた。数カ月に渡って低下することなくこれらのタイターが維持された。

組換え型抗ｈＣＧワクチン（ｖ　Ｓ　Ｓ　２）で免疫化したサル中の抗体タイタ ー： ボンネットサル（Ｍｅｃａｃｃａ　ｒａｄｉａｔａ）を、１０’ｐ　ｆ　ｕの組 換え体ワクチンで皮肉免疫化した。３力月の間隔（０〜９５日）で２回の免疫化 を行った。４力月後（２２６日）、みょうばん上に吸着させた１１００ｕのベー タｈＣＧから成る追加抗原投与注射を筋肉内注射した。放射線免疫検定法により 、抗ｈＣＧ抗体を測定した（ローーーーロ）　（Ｏｎ　Ｓｉｎｇｈ他参照）。対 数計算尺の縦座標上にこれらを表す。該組換え体ワクチンで最初に免疫化した後 、抗体タイターが測定できた。２回の初期注射および１回の追加抗原投与の後、 これらのタイターは非常に高いレベルまで上昇し、その範囲は、ｍＬ当たりのｈ ＣＧ結合容量で３．２００〜１４．０００ｎｇの範囲であった。これらの抗体は 高い親和性を示した（ｋａ＝１０”ＬＭ）。これらの抗体は、競合放射線レセプ タアッセイで測定したとき、標的組織レセプタに対するｈＣＧの結合を阻害する に充分であった（＋−−−−＋）。ｈＣＧの生物効力を中和することに関するこ れらの抗体が有するこの有能性は、ｈＣＧによって支持される出来事、例えば早 期妊娠の確立および維持、を妨害するための、上記ワクチンを用いた免疫化の有 効性を示唆している。

図４は、この現象の一貫性を示すための、８匹のサルに関するデータを示すもの である。これらの実験はまた、げっ菌類ばかりでなく霊長類（そして延長してヒ ト）においても、これらの生成物が免疫原性を示すことを示している。

今日まで、サルとラントの両方における最良の結果は１０”ｐ　ｆ　ｕのとき得 られた。使用範囲は、約１０’〜約１０’ｐ　ｆ　ｕ、好適には１０７〜１０’ ｐ　ｆ　ｕの位である。興味が持たれることには、この場合、投薬量は体重を基 準にして働いていないと見られ、そしてこれは、生ワクチンの使用に関係してい る可能性がある。継代による弱毒化が、可能な副作用を回避するに有益であり得 る。

実施例２：　抗ｏＬＨワクチンの合成および利用ｖＳＬ５の構築・制限酵素Ｂｇ ｌＩＩを用いて、前述したベクター（Ｌａｌｌ他、１９８８）からアル７ｙｏＬ ＨｃＤＮＡを切り出した。このフラグメントをクレノー充填し、８ｍｅ　ｒのＥ ｃｏ　ＲＩリンカ−に連結した後、ワクシニアベクターｐＳＣ４５のユニークな Ｅｃｏ　ＲＩ部位中にクローン化した（図２）。最終的プラスミドｐＳＬ５の特 性を詳細に、多重制限酵素消化およびサザーン雑種形成により、該アルファＯＬ Ｈ遺伝子の正確な配向に対して記述した。次に、このプラスミドをＤＮＡ移入で 用いて、前述した組換え型ウィルスｖＳＬ５を構築した。

アルファｏＬＨに関する分析：組換え型ウィルスｖＳＬ５に感染させた細胞の培 地に関して、サル中で上昇させた抗アルファｏＬＨ抗体を用いた競合放射線免疫 検定法により、アルファｏＬＨの存在を分析した。

標準サブユニットペプチドを用いて、アルファｏＬＨの発現を定量した。

感染３時間でアルファｏＬＨの存在が検出され、２４時間で２８０ｎｇ／ｍＬ／ ３　ｘ　１０’個の細胞であることが見いだされた。

実施例３　ｆｔ合組換え体ワクチンの製造生物活性：該アルファｏＬＨサブユニ ットとベータｈＣＧとを会合させてヘテロニ量体を形成させた。このヘテロニ量 体が有するところの、Ｌｅｙｄｉｇ細胞系中のステロイド生成を刺激する能力は 良く確立されている（Ｔａ１ｗａｒ他、１９８ｇ）　。該組換え型アルフｙｏＬ Ｈ−ベータｈＣＧヘテロ二量体がその生物学的活性を維持することを示す目的で 、ＣＶＩ細胞中でウィルスｖｓｓ１およびｖＳＬ５の共感染を行った後、感染２ ４時間後集めた上澄み液をＬｅｙｄｉｇ細胞バイオアッセイで用いた。このワク シニアが発現したアルファｏＬＨ−ベータｈＣＧヘテロニ量体によって引き出さ れるステロイド生成は、天然のｈＣＧ二量体よりも大きく、このことは、この２ つのペプチド類に関する正確で充分な長さの発現が生じたことを示唆している。

構築物ｖＳＳ２単独が示すのと同様でありそして生物効果的にいくらか良好な免 疫応答が、構築物ｖＳＳ２とｖＳＬ５とから成る混合物を用いることで得られた 。ベータｈＣＧとアルファｏＬＨとから成る異種二量体によって生じる抗体は、 それらが有する免疫学的タイターの関数として、ベータｈＣＧ単独に対して生じ るそれに比較して約２５％良好な生物効果を示す、ことが他の研究から分かる。

実施例４：　同じヌクレオチド配列に関連した他の抗原性も示す組換え型産児調 節用ワクチンの製造 感染させた細胞の膜の上に固定させることができる配列と一緒の、ベータｈＣＧ のための遺伝子は、ｈＣＧに対する抗体を誘発するための１つの有効な様式であ る。Ｂ型肝炎ウィルス感染に対する予防と共に、ｈＣＧ抗体の生産をもたらす他 の様式は、下記の通りである。

Ｂ型肝炎ウィルスの表面蛋白質（これは、この蛋白質のＳ領域並びにプレＳ２領 域の遺伝情報を指定する蛋白質を含む）の遺伝情報を指定する遺伝子を伴う正当 な配列および枠内に、ベータｈＣＧのための遺伝子をクローン化する。この構築 物を製造する様式を以下に例示する。

ワクシニア中へのＢｈＣＧ−ＨＢｓＡ　のクローニング・ＢｈＣＧ終止コドンの 直ぐ上を切断する制限エンドヌクレアーゼＳｍａＩを用いて、ワクシニアベクタ ー中にベータｈＣＧ　ｃＤＮＡを有するベクターｐＳＳＩ（上記および図１を参 照）を消化させた。Ｂ型肝炎つィルス表面蛋白質（ブレＳ＋Ｓ領域）の中間蛋白 質全体の遺伝情報を指定するＨｉｎｄ　ＩＩＩフラグメントを、消化させて、中 間ベクターｐＪＳ５　（以下に記述）から取り出し、クレノー充填した後、該Ｓ 　ｍ　ａ■切断ｐｓｓ１に連結させて、プラスミドｐＳＳ４を得た（図５）。ベ ータｈＣＧに対する、Ｂ型肝炎ウィルス表面蛋白質遺伝子の配向を、種々の制限 酵素消化およびサザーンブロッティング（図６）で立証した。

このプラスミドを用いて、組換え型ワクシニアウィルスを構築し、そして前述し たようにこの組換え体（ｖＳＳ４）を取り上げた。

中間ベクターｐＪＳ５のクローニング。

Ｅｃｏ　ＲＩ消化によってプラスミドｐｃＦ８０からＢ型肝炎ウィルスのゲノム を切り出した。アガロースゲルから、３．　２ｋｂＩ７）Ｅｃ。

ＲＩフラグメントを精製した後、更にＮｃｏＩで消化して、約１．９ｋｂのフラ グメント（ＸおよびＣ蛋白質の遺伝情報を指定する）および約１、．３ｋｂのフ ラグメント（Ｂ型肝炎ウィルスのブレＳ２＋Ｓ蛋白賀に関する遺伝情報を指定す る）を生じさせ、この１．３ｋｂのフラグメントに１０ｍｅｒのＨｉｎｄＩＩＩ リンカ−を連結させた後、プラスミドｐＵｃ１８のＨｉｎｄ　ＩＩＩ部位中にク ローン化することで、プラスミドｐＪＳ５およびｐＪＳ５を生じさせた。この１ ．３ｋｂのＥｃ。

ＲＩ−ＮｃｏＩフラグメントは、平滑断端されており、そしてこれを、プラスミ ドｐＵｃ１９のＳｍａ　Ｉ部位中にクローン化することで、プラスミドｐＪＳ７ およびｐＪｓ８を生じさせた（図７）。

ベータｈＣＧ　ＨＢｓＡｇに関する分析この組換え型ウィルス（ｖ　Ｓ　Ｓ　４ ）は、Ａｂｏｔｔの単クローン抗体を基とした酵素結合抗体免疫吸着アッセイ（ Ｅｌｉｓａ）により測定した表面抗原（ＨＢｓＡｇ）と同様、競合放射線免疫検 定法で検出したとき、両方のベータｈＣＧを発現する（図８）。

ワクンニア中のベータｈＣＧ−ＨＢｓＡｇ構築物の免疫原性・皮肉ルートによっ て上記構築物で免疫化したラットはｈＣＧに対して抗体を発生した（図９）。ｈ ＣＧに対する抗体が明らかに妊娠に対する保護を示していたことから、この型の ワクチンはまた、女性の受精能力を制御するためにも利用可能である。更に、Ｂ 型肝炎ウィルスの表面蛋白質遺伝子がまた該組換え型有機体中にも存在している という事実を考慮すると、このことは、肝炎に対する受容個体に関する免疫予防 的利点を該ワクチンが有していることを意味している。

ここに記述した新規な組換え型生ワクチン類は、充分に許容できるものであり、 今日までに試験した２種の動物種における標準的急性および亜急性毒性試験にお いていかなる副作用も観察されなかった。これらのワクチン類は、通常の薬学的 許容希釈剤と一緒に使用できる。

説明中には詳細には示さなかった参照 Ｓ、　Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ、　５ｒｉｎｉｖａｓａｎ　Ｊ、、Ｌ、　Ｌａ１ ｌ、　ＬＪ、　ＲａｏおよびＧ、Ｐ、　Ｔａ１ｖａｒ著「組換え型ワクソニアウ イルスによる、生物活性を示すヒト絨毛膜ゴナドトロピンおよびそのサブユニッ トの発現Ｊ　、Ｇｅｎｅ、　７７、（１９８９）　８７−９３゜ Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ　ＳＳＢｒｅｃｈｌｉｎｇ　ＫおよびＭｏ５ｓ　Ｂ、著 「ワクンニアウイルス発現ベクター・Ｂ−ガラクトノダーゼの共発現は組換え型 ウィルスのプラーク用可視スクリーニングを与えるＪ　、Ｍｏ１．　Ｃｅ１１． 　Ｂｉｏｌ、、５、（１９８５）３４０３−３４０９゜ Ｊａｉｎ　Ｓ、に、　Ｃｈｉｎ　ｆ、１１およびＴａ１ｖａｒ　Ｇ、　Ｐ、著［ ヒツジ黄体形成ホルモンに関するｃＤＮＡクローンおよびそれらのＢサブユニッ トの単離および特性記述Ｊ　、Ｊ、　Ｂｉｏｓｃｉ、、１２、（１９８７）　３ ４９−３５７゜Ｌａｖａｎｙａ　Ｌａ１ｌ、Ｊ、　５ｒｉｎｉｖａｓａｎ、　Ｌ 、Ｖ、　Ｒａｏ、Ｓ、に、ＪａｉｎＳＧ、Ｐ、　ＴａｌｗａｒおよびＳ、　Ｃｈ ａｋｒａｂａｒｔｉ、著ｒＢ−ｈＣＧと会合して生物活性を示す二量体を生じる ヒツジ黄体形成ホルモンの免疫反応性アルファサブユニットを、組換え型ワクシ ニアウィルスは発現するＪ　、Ｉｎｄｉａｎ　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｔ　Ｂｉｏｐ ｈｙ３．２５、（１９８８）　５１０−５１４゜Ｔａ１ｖａｒ　Ｇ、Ｐ、　Ｏａ 　ＳｉｎｇｈおよびＲａｏ　Ｌ、　Ｖ、著ｒｈＦＳＨおよびｈＴＳＨとの交差反 応無しで、ホルモンに固有な構造に対して反応性を示す抗体を引き出す抗ｈＣＧ ワクチンのための、改良された免疫原Ｊ　Ｊ、Ｒｅｐｒｏ、　ｒｍｍｕ。

１３、（１９８８）　５３−６３゜ Ｏｓ　Ｓｉｎｇｈ、　Ｎ、Ｃ，Ｓｈａｒｍａ、　Ｌ、Ｖ、　Ｒａｏ、　Ａ、　Ａ ｌａＩｌ、　Ａ、　ＧａｕｒおよびＧ、Ｐ、　Ｔａ１ｖａｒ著（１９８９）　ｒ ヒト絨毛膜ゴナドトロピンに対する抗体を含む３種の避妊用ワクチンを用いて免 疫化した女性における抗体応答および抗体特性」Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　 Ｓｔ　ｒｉｌｉｔｙ、　５２巻、Ｎ０９５．７３９−７４４゜投与量　１０８ り ε 〔ハ １０〇 免疫化後の通数 ＦＩＧ、　３ ＦＩＧ、　４ａ ＦＩＧ、４ｂ ＦＩＧ、　４ｆ ＦＩＧ、　４ｈ βｈＣＧ−ＨＢｓＡｇ　（プレＳ２＋Ｓ）を構築するための方員 ＦＩＧ、　５ ＦＩＧ、　６ ｐＳＳ４のサザーンブロ／ト ＰＵＣ中へのＨＢＶゲノム領域のサブクローニング０、Ｄ、値　口 ＦＩＧ、９ ＶＳＳ４　：　１０８ｐｆｕ　／動物 陽性指数　７７７ 補正音の写しく翻訳文）提出書　（特許法第１８４条の７第１項） 平成４年３月２６日

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニットか、（ｂ）黄体形成ホル モンのアルファサブユニットか、或は（ｃ）哺乳動物生殖系に無関係な蛋白質も しくはペプチドの遺伝情報を指定する遺伝子もしくは遺伝子フラグメントを伴う 読み枠配列中の、絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニットか、または黄体形 成ホルモンのアルファサブユニットのどれか、の遺伝情報を指定する第一配列と 、ワクシニアウイルスゲノムの少なくとも一部の遺伝情報を指定する第二配列と 、から成るヌクレオチド配列。
2. ２．（ａ）ヒト絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニットか、（ｂ）ヒツジ黄 体形成ホルモンのアルファサブユニットか、或は（ｃ）Ｂ型肝炎ウイルスの表面 蛋白質の遺伝情報を指定する遺伝子もしくは遺伝子フラグメントを伴う読み枠配 列中の、ヒト絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニットか、またはヒツジ黄体 形成ホルモンのアルファサブユニットのどれか、の遺伝情報を指定する第一配列 と、ワクシニアウイルスゲノムの少なくとも一部の遺伝情報を指定する第二配列 と、から成るヌクレオチド配列。
3. ３．上記第二配列がワクシニアウイルスのトランスメンプランペプチドもしくは 蛋白質の遺伝情報を指定する請求の範囲２記載のヌクレオチド配列。
4. ４．該ワクシニアウイルスゲノムの非必須領域中に挿入した請求の範囲１記載の ヌクレオチド配列から成る組換え型ワクシニアウイルス。
5. ５．該第一配列が、ヒト絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニットの遺伝情報 を指定する遺伝子から成り、そして該第二配列が、ワクシニアウイルスのトラン スメンブランペプチドの遺伝情報を指定する請求の範囲４記載の組換え型ウイル ス。
6. ６．ｖＳＳ２と表示した請求の範囲５記載の組換え型ウイルス。
7. ７．該第一配列が、ヒツジ黄体形成ホルモンのアルファサブユニットの遺伝情報 を指定する遺伝子から成る請求の範囲４記載の組換え型ウイルス。
8. ８．ｖＳＬ５と表示した請求の範囲７記載の組換え型ウイルス。
9. ９．該第一配列が、Ｂ型肝炎ウイルス表面蛋白質の中間蛋白質に関する遺伝情報 を指定する遺伝子を伴う読み枠配列中の、ヒト絨毛膜ゴナドトロピンのベータユ ニットから成る請求の範囲４記載の組換え型ウイルス。
10. １０．ｖＳＳ４と表示した請求の範囲９記載の組換え型ウイルス。
11. １１．請求の範囲４記載の少なくとも１種の組換え型ウイルスから成る産児調節 用ワクチン。
12. １２．請求の範囲４記載の少なくとも２種の異なる組換え型ウイルスから成る産 児調節用ワクチン。
13. １３．上記ワクチンが、哺乳動物生殖系に無関係な少なくとも１種の蛋白質もし くはペプチドに対する抗体を上昇させる能力を有する、請求の範囲４記載の少な くとも１種の組換え型ウイルスから成る産児調節用ワクチン。
14. １４．哺乳動物生殖系に無関係な上記蛋白質もしくはペプチドがＢ型肝炎ウイル スの表面蛋白質もしくはそれらのフラグメントである請求の範囲１３記載の産児 調節用ワクチン。
15. １５．絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニットか、黄体形成ホルモンのアル ファユニットか、或は哺乳動物生殖系に無関係な蛋白質もしくはペプチド、に対 するワクチンを生じさせるための、請求の範囲１記載ヌクレオチド配列の使用。
16. １６．ヒト絨毛膜ゴナドトロピンのベータサブユニットか、ヒツジ黄体形成ホル モンのアルファユニットか、或はＢ型肝炎ウイルスの表面蛋白質、に対するワク チンを生じさせるための、請求の範囲２記載ヌクレオチド配列の使用。
17. １７．哺乳動物の受精能力を制御するための請求の範囲１１記載ワクチンの使用 。
18. １８．上記第一配列を遺伝学的に発現させることで絨毛膜ゴナドトロピンまたは 黄体形成ホルモンを生じさせることから成る、請求の範囲１１記載ワクチンの製 造方法。
19. １９．哺乳動物生殖ペプチドホルモンもしくはそれの活性フラグメントか、或は 哺乳動物生殖系に無関係な蛋白質もしくはペプチドの遺伝情報を指定する遺伝子 もしくは遺伝子フラグメントを伴う読み枠配列中の、哺乳動物生殖ペプチドホル モンもしくはそれの活性フラグメント、の遺伝情報を指定する第一配列と、ワク シニアウイルスゲノムの少なくとも一部の遺伝情報を指定する第二配列と、から 成るヌクレオチド配列。
20. ２０．上記第二配列が、上記第一配列を伴う読み枠配列中に在る請求の範囲１９ 記載のヌクレオチド配列。