JPH05505188A - 合成ポリペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 合成ポリペプチド 本発明は、合成ポリペプチドに関するものである。本発明は特に、ウィルスエン ベロープ蛋白質の特異的部位の三次元構造及び／又は静電気的な表面及び／又は 他の物理数、化学的及び構造上の性質を模した合成ポリペプチドに関する。後天 性免疫不全症候群（Ａ　Ｉ　Ｄ　Ｓ）の原因として知られる、ヒト免疫不全ウィ ルス（ＨＩ　Ｖ）に関するワクチン、免疫学的に活性のある治療薬、診断法及び 他の医学的又は化学的作用物のデザインは特に興味深い。

過去１０年の間に、ＡＩＤＳは、医学的に重要な問題として世界中に出現し、病 気の原因であるＨＩＶによる感染の研究、診断、治療及び／又は予防の為の作用 物質が現在、緊急に必要となっている。ＨＩＶ　Ｉ及びＨＩＶ■ウィルスによっ て産生される蛋白質のアミノ酸配列の（１９８５）；　（Ｖａｉｎ−Ｈｏｂｓｏ ｎ、　Ｓ、ら、Ｃｅ１ｌ　４０．９　（１９８５）参照のこと］、ウィルスエン ベロープ蛋白質の抗原性を模した、合成ポリペプチドを発明することが可能にな ってきた。

本発明の目的は、ＨＩＶウィルスに対する抗体、最も好ましくは中和力の高い抗 体、すなわち受動的又は能動的な免疫化により、ＨＩＶウィルスの感染を妨げる 、及び／又は拡散を制限する抗体の産生を引き出すことのできる合成ポリペプチ ドの開発である。そのような抗体を用いた受動的な免疫化は、個体内及び個体間 のウィルスの拡散を抑制し、ひいては病気の広がりを遅らせる或いは止める、Ａ ＩＤＳ患者の効果的な治療法を構成するであろう。

本発明は、少なくとも１つの系統のヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ）のエンベ ロープ蛋白質の少なくとも１つの抗原的性質を有する、式（Ｉ）： Ｘ−Ｒ，−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ，−Ｒ６−Ｒ＝−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｒ ８−Ｒ９−Ｒ１゜−Ｒ１１−Ｒ１□−Ｃｙｓ−Ｙ　（Ｉ　）（式中、Ｒ１は、４ ｓｐ又はＧｌｕであり、Ｒ２はＧｌｙ、　Ａｌａ　。

Ｐｒｏ　５Ｓｅｒ　、　Ｔｈｒ　、　Ａｓｎ又はＧｌｎから選ばれるアミノ酸残 基であり、Ｒ３はＧｌｙ、＾ｌａ、　Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、　Ｔｈｒ　。

＾ｓｐ、　Ｇｌｕ、　Ａｓｎ、　ＬｙｓＳＨｉｓＳＧｉｎ又はＡｒｇから選ばれ るアミノ酸残基であり、Ｒ４、Ｒ３及びＲ１１は、互いに独立にどのアミノ酸残 基でもよく、Ｒ，及びＲ８は、ｃｒｙ　。

ＡｌａＳＰｒｏ、　Ｓｅｒ、、Ｔｈｒ又はＡｓｎから互いに独立に選ばれるアミ ノ酸残基であり、Ｒ７はＧｌｙＳＡｌａＳＶａｌＳＬｅｕ。

１１ｅＳＳｅｒ、　Ｔｈｒ、　Ａｓｎ、　Ｇ１ｎ５’Ｐｈｅ　、　ＴｙｒＳＴｒ ｐＳＣｙｓ　。

Ｎｅｔ又はＰｒｏから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ９及びＲ＋２はＧｌｙ、 　ＡｌａＳＬｅｕ、　ｌ１ｅＳＶａｌ、Ｍｅｔ、　Ｃｙｓ、　Ｐｈｅ　。

Ｔｙｒ又はＴｒｐから互いに独立に選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ＋。はＬｙ ｓ、口ＩＳ又はＡｒｇから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｘ及びＹは、互いに独 立に欠失しているか又は独立に１つ以上の、例えば３つの付加的アミノ酸残基で ある） のアミノ酸配列から実質的に成る合成ポリペプチドを提供する。

前記の式（Ｉ）によるペプチドトでＸ及びＹを有さないものは、例えば、ＨＩＶ に対する抗体産生において、もちろん有用である。しかしながら、Ｘ又はＹが存 在する場合には、どのような長さでもよいが、２０アミノ酸未満が好ましく、１ ０未満、例えば３乃至６がより好ましい。

式（Ｉ）による配列が、Ｘ及びＹをもつある蛋白質を構成し、その蛋白質の抗原 配列をもつ主要部分が、例えば、球状蛋白質上に露出しているループの部分であ るということが、もちろん高く評価されるであろう。

好ましくは、Ｒ２はＧｉｎ又はＴｈｒから選ばれ、ｉはＳｅｒ　５Ａｓｎ、　Ｇ ｉｎ　、　Ａｒｇ又はＡｌａから選ばれ、Ｒ４はＬｅｕ　、　Ｉｌｅ　。

Ｇｉｎ又はＡｒｇから選ばれ、Ｒ９はＬｅｕ又はＬｙｓであり、Ｒ６はＧｕｙ又 はＡｓｎであり、Ｒ７はＧｌｙ　５ＡｌａＳＬｅｕ、　Ｉｌｅ、　Ｖａｌ　。

ＭｅｔＳＣｙｓ、、Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　Ｔｒｐ又はＳｅｔから選ばれ、Ｒ８は Ｓｅｒ又はＡｌａであり、Ｒ９はＧｕｙ又はＰｈｅであり、ＲＩＯはＡｒｇ又は Ｌｙｓであり、Ｒ１１はＬｅｕＳＨｉｓ、　ｌ１ｅＳＧｉｎから選ばれ、ＲＩ２ はＡｌａ　、　Ｉｌｅ又はＶａｌから選ばれる。１０位と１６位のＣｙｓ残基は 、分子内ジスルフィド結合により、任意に結合している。

本発明によるポリペプチドの１つの好ましい形は、式（）： Ｘ−Ａｓｐ−Ｇｉｎ　−Ｒｓ　−Ｌｅｕ−Ｒｓ　−Ｇｌｙ−Ｒ７−Ｔｒｐ−Ｇｌ ｙ−Ｃｙｓ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｒ＋　＋　−Ｒｌ　２−Ｃｙｓ−Ｙ　（ ＩＩ　）（式中、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｘ及びＹは上記にのように定義 され、Ｒ７はＧｌｙＸＡｌａＳＬｅｕ、　Ｉｌｅ、　Ｖａｌ。

１［ｅｔ、　Ｃｙｓ　、　ＰｂｅＳＴｙｒ又はＴｒｐから選ばれるアミノ酸残基 である） のアミノ酸配列から成る。

式（ＩＩ）による配列においては、Ｒ３はＳｅｒ、　Ａｓｎ５Ｇｉｎ及びＡｒｇ から選ばれ、Ｒ１１はＬｅｕ、　Ｈｉｓ又はＩｌｅから選ばれ、ＲＨ２はＩｌｅ 又はＡｌａであることが好ましい。Ｒ７はＩｌｅ、　Ｐｈｅ　。

Ｍｅｔ　、　Ｖａｌ又はＬｅｕから選ばれるのが有利である。Ｒ１はＳｅｒ又は Ａｓｎであり、Ｒ３はＬｙｓであることがさらに好ましい。

本発明によれば、式（ＩＩ）の好ましい形は、配列：Ｘ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−３ｅ ｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｉ　１ｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−３ｅｒ−Ｇ ｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｙ（式中、Ｘ及びＹは上記のように定 義され、１０位及び１６位のＣｙｓ残基は分子内ジスルフィド結合により任意に 結合している）。

から成る。

式（Ｉ［）のポリペプチドのもう１つの好ましい形は、Ｇｌｎ又はＡｒｇから選 ばれるＲ３を含み、Ｒ３はＬｅｕであり、ＬはＩｌｅ　５Ｐｈｅ及びＭｅｔから 選ばれ、ＲｚはＬｅｕ、　Ｈｉｓ又はＩｌｅから選ばれ、Ｒ１□は、４１　ａで ある。好ましい配列は、式： ％式％ （式中、Ｘ及びＹは上記のように定義され、１０位と１６位のＣｙｓ残基は分子 内ジスルフィド結合によって任意に結合している） を有する。

式（ｎ）によるポリペプチドは、ＨＩＶＩエンベロープ蛋白質の、あるエピトー プ（抗原決定基）部位に似ている。

本発明によるポリペプチドのもう一つの好ましい形は、式（■）： χ−Ｒ，４２−Ｒ，−Ｒ４−Ｒ，−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ− Ａｌａ−Ｐｂｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｙ　（ｍ　）（式中、Ｒ１ はＧｌｕ又はＡｓｐであり、Ｒ２はＴｈｒ又はＧｉｎであり、Ｒ３はＳｅｒ、　 ＡｓｎＳＡｒｇ、　Ｇｉｎ又はＡｌａから選ばれるアミノ酸であり、Ｒ４はＬｅ ｕＳＩｌｅｌＡｒｇ又はＧｉｎから選ばれるアミノ酸であり、Ｒ５はＬｙｓ又は Ｌｅｕであり、Ｘ及びＹは、上記のように定義され、１０位と１６位のＣｙｓ残 基は、分子内ジスルフィド結合により任意に結合している）。

のアミノ酸配列から成る。

式（Ｉ［［）によるポリペプチドの好ましい形態は、式（Ｈａ）のアミノ酸配列 から実質的に成る。

式（ｍ）によるポリペプチドの好ましい形は式（■ａ）のアミノ酸配列から実質 的に成る。

Ｘ−Ｇｌｕ−Ｔｂｒ−Ｒ３−Ｒ４−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ− Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｙ　（ＩＩＩ　ａ ）（式中、Ｒ３はＳｅｒ、　ＡｓｎＳＡｒｇ、　Ｇｌｎ又はＡｌａから選ばれる アミノ酸残基であり、Ｒ４はＬｅｕ、　ｌ１ｅ１．〜ｒｇ又はＧｌｎから選ばれ るアミノ酸残基てあり、ＸとＹは上記のように定義され、１０位と１６位のＣｙ ｓ残基は、分子内ジスルフィド結合により任意に結合している）。Ｒ４が１１ｅ の場合には、Ｒ３はＳｅｔが好ましく、Ｒ３がＡ１　ａの場合にはＲ４はＡｒｇ 又はＧｉｎだか、Ａｒｇの方が好ましい。

式■によるポリペプチドは、ＨＩＶｎのエンベロープ蛋白質のあるエピトープに 似ている。

本発明による好ましいポリペプチド配列は、ＨＩＶエンベロープ蛋白質の１つ以 上の抗原決定基に対する地形学的類似性に基づいて選ばれる。例えば、ある特定 のポリペプチドがもともとその類似物であるべくデザインされている抗原決定基 がＨＪＶエンベロープ蛋白質の１つ以上の部位にも地形学的類似性を示すかもし れない。それはおそらく、祖先遺伝子の複製によるものか、又はそのポリペプチ ドが、１つの不連続の決定基の類似物であるか、又はそのポリペプチドが多価で あるようにデザインされてきた為であろう。不連続なエピトープは、独立して抗 原として重要である、密に向かい合った、つながったエピトープから成ると考え られる。そして多価であるポリペプチドとは、２つ以上の（連続又は不連続の） 決定基類似物を１本のポリペプチド鎖の中にもっており、それゆえにＨＩＶエン ベロープ蛋白質上の２つ以上の決定基を認識するある範囲の抗体の産生を同時に 引きおこす方法を供給する。

本発明によるペプチドは、例えば標準的な９−フルオレニルーチメル力ルボニル （Ｆ４ｏｃ）化学反応（例えばＡｔｈｅｒｔｏｎ、　Ｅ、及び５ｈｅｐｐａｒｄ 、　Ｒ，Ｃ，（１９８５）、Ｊ。

Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｍｍ、　１６５参照）又は標準的なブチ ルオキシカルボネート（Ｔ−Ｂｏｃ）化学反応で合成される。構造の正しさと精 製のレベル（通常８５％を超える）は、綿密にチェックされるべきであり、内部 のジスルフィド結合が存在する場合には、その配置の正しさに、特別な注意がな される。この目的の為、例えば、高速液体クロマトグラフィーを含む種々のクロ マトグラフィーによる分析、及びラーマンの分光学を含む分光写真分析術が使わ れる。

本明細書に出てくる配列は、すべて、以下に定義されるアミノ酸残基に対する３ 文字コードの標準的な１、　Ｕ、　Ｐ、　Ａ、　Ｃ，の略号を用いて示されてい る。ＧＬＹ−グリシン、Ａｌａ−アラニン、Ｖａｌ−バリン、Ｌｅｕ−０イシン 、ｌ１ｅ−イソロイシン、５ｅｒ−セリン、Ｔｈｒ−トレオニン、Ａｓｐ−アス パラギン酸、Ｇｌｕ−グルタミン酸、Ａｓｎ−アスパラギン、Ｇｌｎ−グルタミ ン、Ｌｙｓ−リジン、口１ｓ−ヒスチジン、Ａｒｇ−アルギニン、Ｐｈｅ−フェ ニルアラニン、Ｔｙｒ−チロシン、Ｔｒｐ−トリプトファン、Ｃｙｓ−システィ ン、１ｉｅｔ−メチオニン、Ｐｒｏ−プロリン。

本発明によるポリペプチド或いはそれに対する抗体は、単独に、又は、ウィルス の遺伝物質の複製を妨害することによって異なるレベルで作用する、３′　−ア ジド−３′−デオキシチミジン（ＡＺＴ）［シトプシン（Ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ ）及び／又は、ウィルスの成長にとって必須な酵素の働きをブロックするような ＨＩＶＩロテアーゼ阻害剤と共に投与される。

本発明によるポリペプチドは、ＨＩＶＩ及び／又はＨＩＶ　ＩＩの広い範囲の系 統によって産生されるエンベロープ蛋白質と交叉反応する抗体を作る為に使用さ れる。

本発明者らの分析では、この発明によるポリペプチドの構造上、地形掌上、静電 気的性質は、いくつかの或は多くの系統のＨＩ　Ｖエンベロープ蛋白質と交叉反 応をする抗体の産生を引きおこすと考えられるので、いくつかの−異種のポリペ プチドを１つの大きなポリペプチドに結合させることにより更に利点が生じるこ とを示してきた。

そのようなポリペプチドは、一般式（■）：［Ｌ、−Ｆｌ　、　ｊＬ、−Ｇｌ　 、、−Ｌ、　（ＩＶ　）（式中、Ｆ及びＧは、互いに独立に、式Ｉ乃至ｍａのい ずれか１つのポリペプチドで、Ｌは連結配列で、ａ、　ｂ及びＣは、互いに独立 に０又は１であり、ｍ及びｎは、各々例えば１から１０までの正の数である）を 有する。しはなるべく短く、例えば限りなく　Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ −Ｇｌｙ、　Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ又はＧｌ”／− ５ｅｒ−＾１ａ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａのような構造的に曲げやすい ポリペプチド鎖の部分である。各々の反復が、本発明によるポリペプチドの異な る変形を任意に生じることは明かであろう。式■で定義した多価の決定基類似物 は、偽ホモポリバレントであり、そこでは、本質的には同じ決定基類似物の変形 体が１本のポリペプチド鎖の中に反復している。更に、式Ｉから■ａのうちのい ずれか１つによる決定基類似物の同一変異体の多数のコピーを含むホモポリバレ ントなポリペプチド免疫原もまた有効であると考えられ、本発明の範囲に含まれ ている。

偽ホモポリバレントな免疫原性のあるポリペプチドは、それらが似ているけれど も同じではないという基本的な特異性を有する一連の（中和）抗体の産生を引き おこし、それらの抗体がＨＩ　Ｖのより広い範囲の系統からのエンベロープ蛋白 質と交叉反応し、予防免疫を与える上でより効果的であるという点で、ワクチン として特に価値があることが期待される。本発明によるポリペプチドのうちの１ つと、決定基類似物の他の１つ以上のポリペプチド類似物との１つ以上のコピー （どの順番でもよい）を含むヘテロポリバレントなポリペプチドを組立てること にも利益があるであろう。本発明において供給されたそのようなポリペプチドは 次の一般式（Ｖ）。

Ｌ６−＋ａ−Ｌ）＋ｍ−Ｆ−ｔＬ、−ＧＬ−Ｌｅ　（■）（式中、Ｆは、式Ｉ乃 至Ｈａのいずれか１つによるポリペプチドであり、Ｇは、式■乃至Ｈａのいずれ か１つのポリペプチド、又は他の配列であり、ｍ及びｎは、各々１．　ＴＬＪ至 １０の正の数であり、ｄ及びｅは互いに独立に０又は１である） を有する。“Ｌ”は好ましくは短く、例えば、限りなくＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ −Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、　Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ又はＧ ｌｙ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａのような構造的に曲げ やすい、ポリペプチド鎖の部分である。ペプチドＶの好ましい形に於ては、Ｇは 式■乃至Ｈａ又は配列・Ｘ−Ｇｉｎ−Ｇｌ、ｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌ ｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｙ（式中、Ｇｌｙは各々独立に他のどんなアミノ 酸にも置き換えられ、またＸ及びＹは互いに独立に０又は１つ以上（例えば３つ ）のアミノ酸残基であり、又はＧは、ＨＩＶＩ来の抗原蛋白質に関連した他のポ リペプチド配列であるのうちのいずれか１つである）のうちのいずれか１つであ る。上に定義したポリペプチド配列の抗原として重要ないかなるサブフラグメン ト及び／又は抗原として重要ないかなる変異体も、元のポリペプチドの一般的な 形と機能を保っているものは、本発明の範囲に含まれることが理解されるべきで ある。特に、特定の残基を、珍しい（しかし、天然の、例えばＤ−立体異性体） 或いは合成のアミノ酸類似物による置換を含めて、匹敵する構造及び／又は物理 的性質をもつ残基による置換が含まれる。例えば、以下に定義するように、同一 セットの１つの残基を、別のものに置き換えることは、この発明の範囲に含まれ る。セット１−．４１ａ％Ｖａｌ、Ｌｅｕ、　Ｉｌｅ、　Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　 Ｔｒｐ又はｋ［ｅｔ　；セット２ＳｅｒｓＴｈｒ　、　Ａｓｎ又はＧｉｎ　；セ ット３−Ａｓｐ又はＧｌｕ　；セット４−Ｌｙｓ　、　Ｈｉｓ又はＡｒｇ　；セ ット５−Ａｓｎ又はＡｓｐ　；セット５−Ｇｌｕ又はＧｉｎ　；セット７−Ｇｌ ｙＳＡｌａ％Ｐｒｏ。

Ｓｅｒ又はＴｈｒｏすへてのアミノ酸タイプのＤ−立体異性体、例えばＤ−Ｐｈ ｅ、、Ｄ−Ｔｙｒ及びＤ−Ｔｒｐか置換される。

本発明を好ましい実施態様では、Ｘ及びＹは、もし存在する場合には、Ｔ−細胞 エピトープとして作用する能力を有する蛋白質鎖の１つ以上の部分を独立に含ん でいるで１はＧｌｙ又は電荷を持つアミノ酸（例えばＬｙｓ、　Ｈｉｓ　ｓＡｒ ｇ　、　Ａｓｐ又はＧｌｕ）であり、２は疎水性アミノ酸（例えばｌ１ｅＳＬｅ ｕ、　Ｖａｌ、　Ｍｅｔ、　Ｔｙｒ、　Ｐｈｅ、　ＴｒｐＳＡｌａ）であり、３ は疎水性アミノ酸（上に定義した）又は電荷を持たない極性のあるアミノ酸（例 えばＡｓｎ　、　Ｓｅｒ　５Ｔｈｒ　、　Ｐｒｏ　。

Ｇｉｎ　５Ｇｌｙ）のいずれかであり、４は極性のあるアミノ酸（例えばＬｙｓ 　、　Ａｒｇ　５Ｈｉｓ　、　Ｇｌｕ　、　Ａｓｐ　、　Ａｓｎ　５Ｇｉｎ　％ Ｓｅｒ　、　Ｔｈｒ　、　Ｐｒｏ）である］であるアミノ酸配列の部分は少なく ともいくつかの例に於て、Ｔ細胞エピトープとして作用するようである（Ｒｏｔ ｈｂａｒｄ、　Ｊ、　Ｂ、及びＴａｙｌｏｒ。

１、　Ｒ，（１９８８）　、Ａ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｐａｔｔｅｒｎ　ｉｎ　ｃ ｏｍｍｏｎ　ｔ。

τ−ｃｅｌｌ　ｅｐｉｔｏｐｅｓ　５Ｔｂｅ　Ｅｌ［ＢＯＪｏｕｒｎａｌ　７（ １）：９３−１００）。同様に、１’　−２’　−３’　−４’−５’配列でも 良く、その場合には、１′は先に定義したよう（こ１に相当し、２′は２に、３ ′と４′は３に、５′は４に相当する（同書）。どちらの形も本発明の範囲に含 まれており、１つ以上のＴ細胞エピトープ（好ましくは５つ未満）は、上記のよ うに定義されるか、又は池の構造をもち、ある長さと組成を持つスペーサ一部分 によって分離されており、スペーサーの長さはアミノ酸残基５つ未満が好ましく 、例えばＧｌｙ　、　Ａｌａ　５Ｐｒｏ　５Ａｓｎ　。

Ｔｈｒ　、　Ｓｅｒから選ばれる残基から成るか又は、非α−アミノ酸のような 多機能リンカ−を含んでいる。Ｃ−又はＮ−末端のリンカ−が、完全な蛋白質の 代理となり得るので、キャリヤー蛋白質へ結合させる必要は取り除かれる。さら に、本発明の範囲に含まれることは、式１によるポリペプチドの誘導体であり、 それに於てＸ又はＹは「レトロインパーツＣｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）　（ 逆反転）コなアミノ酸すなわちアミノ酸に相当する機能グループをもつ三機能ア ミンであるか、又はそれを含む。例えば、本。

発明によるｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏなアミノ酸を含む類似物は式：［式中、 Ｒは例えばグリシンの側鎖のような官能基であり、Ａ１及びＡ２は、各々Ｎ−又 はＣ−末端で結合されており、それぞれユニに定義した類似物の１つのコピー（ しかし必ず同じというのではない）であることが望ましい］になる。Ｔ細胞エピ トープは前に論じたように任意に含まれている。

ポリペプチドのｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｇｏな修飾は、】一つ以上のペプチド結 合の反転を含み、そのため元の分子よりも酵素による分解に対してより抵抗性の ある類似物が作り出され、大きな免疫原に対する媒介として、高濃度のエピトー プを含む分岐した免疫原の生産の為の都合のよい手順を提供する。これらの化合 物を生物学的に活性のある短鎖のペプチドのｒｅｔｒｏ−ｉｎｙｅｒｓｏな類似 物の多量の溶液での合成に用いることには、大きな可能性がある。

注意しなければならないのは、ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｇｏなアミノ酸誘導体を 組みこむ類似物は、ＤＮＡ組換えシステムを使って直接できるものではないとい うことである。しかしながら、基本となる類似物はでき、次いで精製し、標準的 なペプチド／有機化学を使って化学的にｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｇｏなアミノ酸 に結合することができる。

ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｇｏなペプチドのポリアミドタイプの樹脂における固相 合成法に関する実用的で便利な新しい方法が最近記載されている［Ｇａｚｅｒｒ ｏ、　Ｈ，、Ｐｉｎｏｒｉ、　１１．　＆Ｖｅｒｄｉｎｉ、　Ａ、Ｓ、（１９９ ０）、Ａ　ｎｅｗ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ　ｆｏｒｔｈｅ　５ｏ ｌｉｄ−ｐｈａｓｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓ。

ｐｅｐｔｉｄｅｏＩｎｎｏｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ　 ｉｎ　５ｏｌｉｄＰｈａｓｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｅｄ、　Ｒｏｇｅｒ　Ｅｐ ｔｏｎ、　５ＰＣＣ（ＩＪＫ）Ｌｔｄ。

Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、　ＬＨ：ｌ。

ポリペプチドは、それ自身の化学的基を介して、又はＣ−又はＮ−末端へ加えら れた付加的なアミノ酸を介して、キャリヤー分子に任意に結合され、そして、そ れらのペプチドの免疫学的機能を最適にする為に、ポリペプチドがポリペプチド 自身から分離されたり又は１つ以上の付加的なアミノ酸によって囲まれたりする 。多数の連結が適しており、例えばＴｙｒ、　Ｃｙｓ及びＬｙｓ残基の側鎖の使 用が含まれる。適したキャリヤーには、例えばツベルクリンの精製蛋白質誘導体 （ＰＰＤ）、破傷風ト干ソイド（変性毒素）、コレラトキシン及びそのＢサブユ ニット、卵アルブミン、ウシ血清アルブミン、大豆トリプシンインヒビター、ム ラミルジペプチド及びそれらの類似物、Ｂｒａｕｎのリポ蛋白質が含まれるが、 しかし他の適当なキャリヤーも熟練者には容易に明かになるであろう。

本発明によるポリペプチドに対するキャリヤーとしてＰＰＤを使用する場合には 、もしポリペプチド−ＰＰＤ結合体の受容者が、例えば、早い時期のＢＣＧワク チンのおかげで、既にツベルクリン感受性になっているならば、より高い力価の 抗体が得られる。ヒトのワクチンの場合には、英国及び他の多くの国に於て人々 は慣例的にＢＣＧの予防接種を受けており、従ってほとんどがＰＰＤ感受性にな っていることは注目に値する。故に、ＰＰＤはそれらの国に於ては好ましいキャ リヤーとしての使用が期待される。

ポリペプチドのキャリヤーへの結合の方式は、結合される物質の性質に依存する 。例えば、キャリヤーにあるリジン残基は、ポリペプチドのＣ−末端又は他のシ スティン残基に、Ｎ−γ−マレイミドブチリルオキシースクシニミドで処理する ことにより結合される（Ｋｉｔａｇａｗａ。

Ｔ、及びＡｃｋａｗａ、　Ｔ、（１９７６）　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　７９． ２３３）　、他の結合反応及び試薬はこの文献に記載されている。

単独の、或いはキャリヤー分子に結合されたポリペプチドは、慣習的なアジュバ ント（水酸化アルミニウム又はフロイントの完全又は不完全アジュバントのよう な）及び／又は他の免疫賦活剤を用いて、または用いずに、いかなる経路からで も投与される（例えば、非経口的に、又は鼻から、経口で、直腸から、腟内から ）。本発明には、皮下への植えこみ或いは、例えばリポソームを含む貯蔵所（Ａ ｌｌｉｓｏｎ、Ａ、Ｃ，及びＧｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ、　Ｇ、（１９７４）Ｎａ ｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）　２５２．２５２）或いは、乳酸とグリコール酸のコ ポリマーから製造された生物に分解されるマイクロカプセル（Ｇｒｅｓｓｅｒ、 　Ｊ、　Ｄ、　ａｎｄ　５ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｊ、　Ｅ。

（１９８４）　Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅ１ｅａｓｅ 　Ｓｙｓｔｅｍｓ　”Ｐ、１２７−１３８．　Ｅｄ、　Ｄ、Ｌ、Ｗｉｓｅ）のよ うな、ゆっくりと放出される形のポリペプチドの形成も含まれている。

本発明によるポリペプチドがいかなる通常の方法でも、すなわち、前述したよう に手動又は自動的にペプチドを合成する技術を用いて直接的に、或いはＲＮＡ及 びＤＮＡ合成によって間接的に、そして分子生物学と遺伝子工学の従来の技術に よって合成されることは理解されるべき事である。これらの技術は、他のポリペ プチド配列に挿入された１つ以上のポリペプチドを含む雑種蛋白質を産生ずる為 に使われる。

本発明のもう１つの面は、従って、本発明による台足ポリペプチドの少なくとも １つをコードし、微生物又番−補乳類の細胞内における複製が可能な、適当な発 現ベクターに好ましくは取り込まれるＤＮＡ分子を供給することである。そのＤ ＮＡもまた、より長い産物のＤＮＡ鍾の一部であり、例えば、そのポリペプチド は遺伝子工学によってその中に挿入された他の蛋白質の一部として発現される。

それらの技術に対する実用的な手引き書の１つがＳａｍｂｒｏｏｋ、　Ｊ、、Ｆ ｒ１ｔｓｈ、　Ｅ、　Ｆ、及びＭａｎｉａｔｉｓ。

Ｔ、による″蓋ｏ１ｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ：　ａ　１ａｂｏｒａｔｏｒ ｙ　ｍａｎｕａｌ　’（２ｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、　１９８９）である。

本発明によるポリペプチドは、単独に或いは適切なキャリヤーと結合して以下の ように利用される。

（ａ）１つ以上の系統のＨＩＶの感染を防ぐ為に使用するペプチドワクチンとし て、 （ｂ）　例えばＨＩＶＩ性患者からの血清の分析におけるリガンドとして、 （Ｃ）　例えば、ポリペプチドに対して引き起こされた抗体の結合レベルの検査 における品質をコントロールする薬剤として、 （ｄ）　適当な動物を免疫することによって、モノクローナル又はポリクローナ ル抗体を生産する為の抗原物質として。これらの抗体の用途は、（１）ＨＩＶウ ィルスの科学的研究用に、（ｉｉ）診断用の薬剤として、例えば組織化学用の薬 剤の一部とし戊　で、（ｉｉｉ）　ＨＩ　Ｖ患者の受動的な免疫化のために。

；Ｉ　Ａ　Ｉ　Ｄ　Ｓの治療として、単独に、又は他の、例えり　ばＡＺＴ及び ／又はＨＩＶプロテアーゼ阻害剤の二　ような薬剤との組み合わせで、（１ｖ） 他の薬剤（倒置　えばＡＺＴ又はＨＩＶプロテアーゼ阻害剤）の標≠　的を細胞 表面にＨＩＶニンヘロープ蛋白質を発現老　しているＨＩＶ惑染細胞にしぼる為 の手段として。

Ｄ　それらの薬剤は、共有結合又は他の方法、例えば、それらの薬剤を含み、抗 原ポリペプチドに対して産生された抗体を組みこんでいるリポソームに於けるよ うな方法で会合している。本発明は更に、１　ポリペプチドに対して産生された 抗体の遺伝子工学によって得られた形成いは特にｖＨ部分のような１　サブコン ポーネントを供給し、文献の中に述べられている技術を用いて、最初はそのポリ ペプチド５　に対して他の動物で作られた抗体の人体に適応させた形を供給する 。

７　（ｅ）　ＨＩ　Ｖウィルスの、ヒト又は動物細胞への結合を−置換すること による、又は生体内でのウィルスの三次元構造の構築を妨げることによるＨＩＶ 感染の治療。同様に、生体外におけるＨＩＶウィルス頁　の科学的研究を助ける 。

ＨＩＶ又はＨＩ　Ｖに対する抗体の、検出及び診断に関す　しては、熟練者は種 々の免疫学的検定技術に気付くであろうが、それらの中でもよく知られているの は、サンドイッチアッセイ、競合及び非競合アッセイ、直接及び間接標識化であ る。

本発明のもう一つの面は、ＨＩＶ又は、本発明による合成ポリペプチドの少なく とも一つを含む、ＨＩＶに対する抗体を検出するためのキットを供給することで ある。

ポリクローナル又はモノクローナル抗体の調整、それら抗体の、人体に適応させ た形は例えばＴｈｏｍｐｓｏｎ、　Ｋ。

麓、ら（１９８６）、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　５８．１５７−１６０参照のこと 、単一ドメイン抗体（例えばＷａｒｄ、　Ｅ、　Ｓ、、　Ｇｕｓｓｏｙ、　Ｄ、 。

Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、　Ａ、　Ｄ、、　Ｊｏｎｅｓ、　Ｐ、　ａｎｄ　１ｉｎｖ ｅｒ、　Ｇ、　（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ　３４１．５４４−５４６参照）は、 血液脳関門を横切る抗体であり、本発明による合成ポリペプチドに得意的に結合 するものは、従来の方法で調整されており、それらの抗体は、本発明の一部をな すものと考えられる。本発明による抗体は、とりわけ哺乳類のＨＩＶ感染の診断 法に使われ、それは、哺乳類の組織又は体液の標本をここに記載した有効な量の 抗体とインキユベーし、上記の標本と上記の抗体との間に、交叉反応がおきるか どうか、もし必要ならどの程度に及び／又はどんな速さで起こるのかを決定する 。

本発明のもう一つの面は、合成ポリペプチドを哺乳類の）（ＩＶ感染の治療又は 予防に使うこと及び／又は哺乳類の免疫系の刺激に使うこと及び／又は細胞の、 ＨＩＶウィルス受容体のブロックに使うことであり、さらに、それらの使用に適 した薬剤の調製に使用することである。一つ或いはそれ以上の調剤学的に認容で きるアジュバント、キャリアー及び／又は賦形剤とともに、活性成分として、少 なくとも一つのポリペプチド又は、ここに記したようなポリペプチド−キャリア ー複合体を含有する薬剤組成物が含まれる。これらの組成物は、経口用、直腸、 算用又は特に非経口的投与（中枢神経内投与を含む）用に、処方される。

本発明はさらに、哺乳類のＨＩＶ感染を治療及び／又は予防する方法、及び／又 は哺乳類の免疫系を刺激す。

法及び／又は細胞のＨＩＶウィルス受容体をブロックする方法を供給し、それは さきに定義したようなポリペプチドのを動量の単独投与、又はＡＺＴ及び／又は ＨｉＶプロテアーゼ阻害剤のようなＡＩＤＳの他の薬剤と組み合わせた投与を含 む。

以下の実施例は本発明を例示することを意図したものであり、どのようにも制限 されない。

実施例１ 配列： Ａｓｐ−Ｇｌｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−１１ｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ− Ｃｙｓ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｃｙｓを有する基本的なペ プチド（ａ）の、Ｃ−末端を延長した形を標準的な、固相Ｆ−ｍｏｃ方法論を用 いて合成され、分子内ジスルフィド結合を二つのシスティンの間に形成した。そ のペプチドを、トリフルオロ酢酸の存在下に樹脂から外し、それに続くペプチド の精製を、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー及び逆相高速液体クロマト グラフィーにより行った。得られたペプチドの純度は、８５％を超えていた。Ｃ −末端には、コンジュゲーションを助けるためにアラニンが含まれていた。その ペプチドを、リン酸緩衝溶液（Ｐ　Ｂ　Ｓ　、　５ｍｇ／ｍｌ）に溶解し、同量 の卵アルブミン（５ｍｇ／ｍｌ）と混合し、グルタルアルデヒドを加えて最終的 な濃度を０．１％（ｆ／Ｖ）とした。コンジュゲート混合物は、フロインドアジ ュバントと乳化する前に３０分間静置した。各々のヒツジ（５匹／グループ）は 、フロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）中の２５０μｇのペプチドで免疫され 、続いて（１４日後）さらに、同量をフロイント不完全アジュバント（Ｆ　Ｉ　 Ａ）で免疫性を試−験（ｃｈａｌｌａｎｇｅ）　した。さらに、３〜４週間ごと にＦＩＡを用いて免疫性試験を行った。免疫性試験の後７〜１０日ごとに血液標 本が採られ、ＨＩＶエンベロープ蛋白質に対する結合性が分析された。

ＨＩＶエンベロープ蛋白質を認識する抗−合成ペプチド抗体の測定は、牛痘ウィ ルスの組換え体（例えば、Ｍａｃｋｅｔ、　Ｍ、及びＳｍ１ｔｈ、　Ｇ、　Ｌ、 　（１９８６）、Ｊ、　ｇｅｎ。

Ｖｉｒｏｌ、　６７、２０６７を一般的な方法論として参照のこと）を使って行 われたが、それは、感染した細胞の表面にＨＩＶエンベロープ蛋白質を発現する ように構築されたウィルスである。この分析法が好ましいのは、抗原の結合がウ ィルス感染した細胞の表面で測定されるからであり、そのため液相の抗原への結 合よりも、もっと正確に表わせるからである（例えば、エンベロープ蛋白質上の ある種の有力なニピトープは、生体内では、膜のリン脂質との相互作用によって マスクされるため）。９６−ウェルのマイクロプレートに単相培養してＣＶＩサ ル腎臓細胞を増殖させ、組換え牛痘ウィルスで感染させた。このウィルス構築物 は、ＨＩＶエンベロープ糖蛋白質をコードする遺伝子を含んでおり、それはプロ セスを受けて感染細胞の表面に発現されることが知られている。ヒツジからの抗 血清は、２回ずつ分析した。種々に希釈した抗血清の一定量５０μ！ずつをウェ ルに添加し、洗浄（２回）の前に４時間インキュベートし、２番目のペルオキシ ダーゼで標識した抗−ヒツジ抗血清を添加した。マイクロプレートリーダーで、 光学濃度を読み取って、陽性のウェルを判定した。抗−ペプチド抗血清は、感染 細胞の表面に発現されているＨＩＶエンベロープ蛋白質と、高い親和性で交叉反 応することがわかった。（表１及びＩＡ参照）これらの結果は、これらの抗−ペ プチド抗体が、研究用手段及び診断薬として、価値があることを確かなものとし ている。

来の血清と、サル腎臓細胞の表面に発現された組換えＨＩＶエンベロープ蛋白質 との間の交叉反応 交叉反応 対照としての、　ＨＩｖエンベロープ サル腎臓腎臓細胞量白質を発現してい るサル腎臓細胞系 免疫したヒラ ジ田来の血清　−十二工 対照血清　− 由来の陽性抗血清の、サル腎臓細胞表面上に発現された組換えＨＩＶエンベロー プ蛋白質と反応したときの代表的な力価 光学濃度の平均値 （血清の希釈） １１５０００に希釈 上記の表は、テストしたヒツジ由来の血清を、相当希釈しても、（対照に比較し て）力価の大きな増加があることを示している。

実施例２ 中和抗体の一つの役割は、感染細胞から非感染細胞へのウィルスの伝達である。

Ｔ細胞からマクロファージへのウィルスの伝達を妨げたり、速度を遅らせること は、極めて重大である。というのは、それによってＡＩＤＳｖＡ者を延命させる ことができ得る。この能力について、抗−ペプチド抗血清を、生体外でのシンシ チウム形成の阻害能で分析した。シンシチウムとは、多核の巨大細胞の事で、Ｈ ＩＶ感染細胞間の「ブリッジ」形成の結果できる。

配列： Ａｓｐ−Ｇｌｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｉ　１ｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ −Ｃｙｓ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−を有する基本的 なペプチド（ａ）の、Ｃ−末端を延長した形で、二つのシスティン残基の間に分 子内ジスルフィド結合を含んでいるものを合成し、精製し、コンシュケートし、 実施例１に記載したようにヒツジのグループを免疫する為に使用した。抗ペプチ ド抗血清を生体外ＨＩＶ中和アッセイに用いた。抗−ペプチド抗体を悪性の系統 のＨＩＶに感染したヒトＴリンパ球及び感染していない、ヒトマクロファージの 生体外培養に導入した。

抗−ペプチド抗血清は、ＨＩＶ　Ｉの悪性系統にさらされたＴ細胞及びマクロフ ァージの混合集団内において、シンシチウム形成を阻害することがわかった。す なわち、それらは、Ｔ細胞からマクロファージへのＨＩＶウイルスの伝達を阻害 したことになる。

表２に示したように、対照の培養においてはマクロファージは感染してしまうの に対して、抗体は、マクロファージのＨＩＶによる感染を防ぐことがわかり、そ れ故、この生体外での分析において、中和作用のあることがわかった。

表２　ＨＩＶ感染したヒトＴリンパ球及び非感染ヒトマクロファージの、生体外 培養における、ＨＩＶ悪性系の中和。ｒ＋＋＋Ｊは高いレベルの感染を示し、「 −」は、感染に対する有効な防御を表している。

ＨＩＶ惑染Ｔリンパ球及び 非感染マクロファージのみ　＋＋＋ ＨＩＶ感染Ｔリンパ球、 非感染マクロファージ 及び抗−ペプチド（ａ）抗体　− 又、ペプチド（ａ）に陽性な抗血清をシンシチウム分析法で評価した。この分析 法は、抗血清が、感染細胞から非感染細胞への生きたウィルスの広がりを防ぐ能 力及び、ウィルス糖蛋白質（ｇ　ｐ　１６０）とＣＤ４分子との間の反応性を介 する細胞間の融合を防ぐ能力を測定するものである。測定は、シンシチウムの検 出及び計数によって行われた。

シンシチウム分析法は、以下のように行なわれた：既知の濃度の活性のウィルス の複製を維持している細胞系であるＨＩＶ生産細胞（ＣＤ＋４）を、３回洗浄し 、テストした抗血清と混合し、特定の希釈度で使用した。

３７℃で３０分間インキュベートした後、それらの細胞を、指標となり、ＨＩＶ 感染及びシンシチウムの誘導に高い感受性のあるＣＤＪ＋細胞と、特定の割合で 混合した。

細胞を毎日観察してシンシチウム形成を調べた。

表３に示したように、ペプチド（ａ）に対する抗体は、シンシチウム形成を阻害 することがわかった。

血清試料　シンシチウムの阻害 抗−ペプチド（ａ）抗血清　＋　（３１５匹）正常ヒツジ血清　一 実施例３ 後天性免疫不全症候群（Ａ　Ｉ　Ｄ　Ｓ）の、無徴候から全徴候に至るまでのい ろいろな段階にある、ＨＩＶ感染した個体からの血清パネルを、それらの患者由 来の血清の、ＥＬ　Ｉ　ＳＡにおける合成ペプチドとの反応性の代表像を作るた めに得た。

ＥＬ　Ｉ　ＳＡ法は、合成ペプチド（ＨＩＶ−１の経膜的な蛋白質ｇ　ｐ１２０ 又はｇｐ４１の部分の類似物）の、ＨＩＶ−１陽性個体の血清中に存在するＨＩ Ｖ−１表面糖類蛋白質に対する抗体との反応の程度を測定するものである。

ＨＩＶ陽性個体１００人の血清を、合成ペプチド（ａ）と反応させた。表４に示 したように、これらの血清のうちの二つ（無徴候の個体由来）が、ＨＩＶ中和抗 体を含みペプチド（ａ）と交叉反応をした。

ＨＩＶ陽性抗血清との交叉反応性 試　料　光学濃度ＯＤペプシド（ａ） 緩衝液　０．０５６ 正常血清　１／１００　０．４７６ １／１０００　０．１４０ ＨＩＶ陽性（１）　Ｌ’１００　＞２．０１／１０００　＞２．０ ＥＩＩＶ陽性（２）　１．／’１００　＞２．０　）＞２．０　）　＜り返し １．３７　） 要　約　書 開示された合成ポリペプチドは、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ）の少なくと も１つの系統のエンベロープ蛋白質の少なくとも１つの抗原性を含む。好ましい 配列は、Ｘ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　ｌｙ−Ｉ　１　 ｅ−Ｔｒｐ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌ ａ−Ｃｙｓ−Ｙ　（式中、Ｘ及びＹは各々独立に欠失しているか又は独立に１つ 以上の付加的なアミノ酸残基であり、１０位と１６位のＣｙｓ残基は分子内ジス ルフィド結合により任意に結合している）である。そのようなポリペプチドはＨ ＩＶ感染の診断、治療及び予防に用いられる。前記ペプチドと特異的に結合する 、抗体及びそれの結合フラグメントも特許請求するものである。

補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法＄１８４条の８）平成４年　９月１４日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　式（Ｉ）： Ｘ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−ＴｒＰ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｒ ８−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｃｙｓ−Ｙ（Ｉ）（式中、Ｒ１はＡｓｐ又 はＧｌｕであり、Ｒ２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ又 はＧｌｎから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ３はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓ ｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｂｉｓ、Ｇｌｎ又はＡｒｇか ら選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ４、Ｒ５及びＲ１１は互いに独立にいずれの アミノ酸残基でもよく、Ｒ６及びＲ８はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈ ｒ又はＡｓｎから互いに独立に選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ７はＧｌｙ、Ａ ｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｈｅ、Ｔ ｒｐ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ又はＰｒｏから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ ｇ及びＲ１２はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐ ｈｅ、Ｔｙｒ又はＴｒｐから互いに独立に選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ１０ は、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ又はＡｒｇから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｘ及びＹは互 いに独立に欠失しているか又は独立に１つ以上の付加的なアミノ酸残基である） で表わされるアミノ酸配列から実質的に成る、少なくとも１つの系統のヒト免疫 不全ウイルス（ＨＩＶ）のエンベロープ蛋白質の、少なくとも１つの抗原性を有 する合成ポリペプチド。 ２　Ｒ２はＧｌｎ又はＴｈｒから選ばれ、Ｒ３は【配列があります】又はＡｌａ から選ばれ、Ｒ４はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ又はＡｒｇから選ばれ、Ｒ５はＬｅ ｕ又はＬｙｓであり、Ｒ６はＧｌｙ又はＡｓｎであり、Ｒ７はＧｌｙ、Ａｌａ、 Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ又はＳｅｒ から選ばれ、Ｒ８はＳｅｒ又はＡｌａであり、ＲｇはＧｌｙ又はＰｂｅであり、 Ｒ１０はＡｒｇ又はＬｙｓであり、Ｒ１１はＬｅｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎか ら選ばれ、Ｒ１２はＡｌａ、Ｉｌｅ又はＶａｌから選ばれる、請求項１に記載の 合成ポリペプチド。 ３　式（ＩＩ）： Ｘ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｒ３−Ｌｅｕ−Ｒ５−Ｇｌｙ−Ｒ７−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃ ｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｃｙｓ−Ｙ（ＩＩ）（式中、 Ｒ３、Ｒ５、Ｒ１１、Ｒ１２は請求項２で定義された通りであり、Ｒ７はＧｌｙ 、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ又はＴｒ ｐから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｘ及びＹは互いに独立に欠失しているか又 は互いに独立に１つ以上の付加的なアミノ酸残基である） で表わされるアミノ酸配列から実質的に成る請求項２に記載の合成ポリペプチド 。 ４　Ｒ３はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ及びＡｒｇから選ばれ、Ｒ１１はＬｅｕ、Ｈ ｉｓ又はＩｌｅから選ばれ、Ｒ１２はＩｌｅ又はＡｌａである、請求項３に記載 の合成ペプチド。 ５　Ｒ７はＩｌｅ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕから選ばれる請求項４に 記載の合成ポリペプチド。 ６　Ｒ３はＳｅｒ又はＡｓｎであり、Ｒ５がＬｙｓである、請求項５に記載の合 成ポリペプチド。 ７　配列： 【配列があります】 （式中、Ｘ及びＹは互いに独立に欠失しているか又は独立に１つ以上の付加的な アミノ酸残基である） から成る、請求項１乃至６のいずれか１請求項に記載の合成ポリペプチド。 ８　Ｒ３はＧｌｎ又はＡｒｇから選ばれ、Ｒ５はＬｅｕであり、Ｒ７はＩｌｅ、 Ｐｈｅ及びＭｅｔから選ばれ、Ｒ１１はＬｅｕ、Ｈｉｓ又はＩｌｅから選ばれ、 Ｒ１２はＡｌａである、請求項３に記載の合成ペプチド。 ９　配列： 【配列があります】 （式中、Ｘ及びＹは互いに独立に欠失しているか又は独立に１つ以上の付加的な アミノ酸残基である） から成る、請求項１乃至６のいずれか１請求項に記載の合成ポリペプチド。 １０　式（ＩＩＩ）： 【配列があります】（ＩＩＩ） （式中、Ｒ１はＧｌｕ又はＡｓｐであり、Ｒ２はＴｈｒ又はであり、Ｒ３はＳｅ ｒ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ又はＡｌａから選ばれるアミノ酸であり、Ｒ４は、 Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ又はＧｌｎから選ばれるアミノ酸であり、Ｒ５はＬｙｓ 又はＬｅｕであり、Ｘ及びＹは互いに独立に欠失しているか又は独立に１つ以上 の付加的なアミノ酸残基である） で表わされるアミノ酸配列から実質的に成る、請求項２に記載の合成ポリペプチ ド。 １１　式（ＩＩＩａ）： 【配列があります】（ＩＩＩａ） （式中、Ｒ３はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ又はＡｌａから選ばれるアミノ 酸残基であり、Ｒ４は、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ又はＧｌｎから選ばれるアミノ 酸残基であり、Ｘ及びＹは互いに独立に欠失しているか又は独立に１つ以上の付 加的なアミノ酸残基である） で表わされるアミノ酸配列から実質的に成る、請求項２又は請求項１０に記載の 合成ポリペプチド。 １２　Ｒ４がＩｌｅであるとき、Ｒ３はＳｅｒであるか又は、Ｒ４がＡｒｇ又は ＣｌｎであるときＲ３はＡｌａである、請求項１１に記載の合成ポリペプチド。 １３　１０番と１６番のＣｙｓ残基が分子内ジスルフィド結合によって結合して いる、請求項１乃至１２のいずれか１請求項に記載の合成ポリペプチド。 １４　一般式（ＩＶ）： ［Ｌａ−Ｆ］ｍ−［Ｌｂ−Ｇ］ｎ−Ｌｃ（ＩＶ）（式中、Ｆ及びＧは互いに独立 に式１乃至ＩＩＩａのいずれかに１つによるポリペプチドであり、Ｌは連結配列 であり、各々の連結配列Ｌは同じか又は異なるものであり、ａ、ｂ及びｃは互い に独立に０又は１であり、ｍ及びｎは各々正の数である） を有する合成ポリペプチド。 １５　一般式（Ｖ）： Ｌｄ−［Ｇ−Ｌ］ｍ−Ｆ−［Ｌ−Ｇ］３−Ｌｅ（Ｖ）（式中、Ｆは式１乃至ＩＩ Ｉａのいずれか１つによるポリペプチドであり、Ｇは式Ｉ乃至ＩＩＩａのいずれ か１つ又は他の配列によるポリペプチドであり、ｍ及びｎは各々正の数であり、 ｄ及びｅは各々独立に０又は１である） を有する合成ポリペプチド。 １６　レトローインバーソ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）アミノ酸を含む、請 求項１乃至１５のいずれか１請求項に記載の合成ポリペプチド。 １７　請求項１乃至１３のいずれか１請求項に記載のポリペプチドの抗原として 重要なサブフラグメント又は変異体を含む合成ポリペプチド。 １８　少なくとも１つのＴ細胞エピトープを付加的に含む、請求項１乃至１７の いずれか１請求項に記載の合成ポリペプチド。 １９　ワクチンキャリヤーに結合した、請求項１乃至１８のいずれか１請求項に 記載の合成ポリペプチド。 ２０　少なくとも１つの系統のＨＩＶに対する免疫を促進するために有効な、請 求項１乃至１９のいずれか１請求項に記載の合成ポリペプチドを少なくとも１つ 含むワクチン。 ２１　請求項１乃至１８のいずれか１請求項に記載の合成ポリペプチドを少なく とも１つ含む、ＨＩＶ又はＨＩＶに対する抗体の検出用キット。 ２２　請求項１乃至１８のいずれか１請求項に記載の合成ポリペプチドを少なく とも１つコードするＤＮＡ分子。 ２３　活性のある成分として１つ以上の調剤学的に認容できるアジュバント、キ ャリヤー及び／又は賦形剤と共に、請求項１乃至１９のいずれか１請求項に記載 のポリペプチドの少なくとも１つを含有する薬剤組成物。 ２４　哺乳類のＨＩＶ感染を治療又は予防処置するための及び／又は哺乳類の免 疫系を刺激するための及び／又は細胞のＨＩＶウイルスに対する受容体をブロッ クするための薬剤の調製における請求項１乃至１９のいずれか１請求項に記載の 合成ポリペプチドの使用。 ２５　請求項１乃至１９のいずれか１請求項に記載のポリペプチドの有効量の投 与を食む、哺乳類のＨＩＶ感染の治療又は予防の方法及び／又は哺乳類の免疫系 を刺激する方法及び／又は細胞のＨＩＶウイルスに対する受容体をブロックする 方法。 ２６　請求項１乃至１９のいずれか１請求項に記載のポリペプチドの少なくとも １つと共に試料をインキュベートすることを含む、ＨＩＶ、ＨＩＶ抗体又はその 抗原結合フラグメントの検出法。 ２７　請求項１乃至１９のいれか１請求項に記載の合成ポリペプチドに特異的に 待合する抗体又はその抗原結合フラグメント。 ２８　ＨＩＶ又は、ＰＢ２７に記載の抗体の少なくとも１つを含むＨＩＶに対す る抗体を検出するための診断用キット。 ２９　１つ以上の調剤学的に認容できるアジュバント又はキャリヤー及び／又は 賦形剤とともに。活性成分として請求項２７に記載の抗体を含む、薬剤組成物。 ３０　ＡＺＴ及び／又はＨＩＶプロテアーゼ阻害剤をさらに含む、請求項２３又 は請求項２９に記載の薬剤組成物。 ３１　哺乳動物の組織又は体液の試料を、有効な量の、請求項２７に記載の抗体 とともにインキュベートし、前記試料と前記抗体の間の交叉反応が起こるか否か 、さらに必要であればどの程度及び／又はどんな速さかを決定することを含む、 哺乳類のＨＩＶ感染を診断ずる方法。 ３２　式（Ｉ）： Ｘ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ５−Ｒ６−Ｒ７−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｒ ８−Ｒ９−Ｒ１０−Ｒ１１−Ｒ１２−Ｃｙｓ−Ｙ（Ｉ）（式中、Ｒ１はＡｓｐ又 はＧｌｕであり、Ｒ２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ又 はＧｌｎから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ３はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓ ｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ又はＡｒｇか ら選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ４Ｒ５及びＲ１１は互いに独立にいずれのア ミノ酸残基でもよく、Ｒ６及びＲ８はＧＩｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ 又はＡｓｎから互いに独立に選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ７はＧｌｙ、Ａｌ ａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｐｈｅ、Ｔｙ ｒ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ又はＰｒｏから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ９ 及びＲ１２はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａ１、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈ ｅ、Ｔｙｒ又はＴｒｐから互いに独立に選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ１０は 、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ又はＡｒｇから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｘ及びＹは、互 いに独立に欠失しているか又は独立に１つ以上の付加的なアミノ酸残基である） で表わされるアミノ酸配列から実質的に成る、少なくとも１つの系統のヒト免疫 不全ウイルス（ＨＩＶ）のエンベロープ蛋白質の、少なくとも１つの抗原性を有 する合成ポリペプチドを製造する方法であって、それ自体公知の、化学的、生物 学的又は組換え技術を用いる残基の結合工程及び、ポリペプチドの単離工程を含 む方法。 ３３　Ｒ２まＧｌｎ又はＴｈｒから選ばれ、Ｒ３はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａ ｒｇ又はＡｌａから選ばれ、Ｒ４はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ又はＡｒｇから選ば れ、Ｒ５はしｅｕ又はＬｙｓであり、Ｒ６はＧｌｙ又はＡｓｎであり、Ｒ７はＧ ｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔ ｒｐ又はＳｅｒから選ばれ、Ｒ８はＳｅｒ又はＡｌａであり、Ｒ９はＧｌｙ又は Ｐｈｅであり、Ｒ１０はＡｒｇ又はＬｙｓであり、Ｒ１１はＬｅｕ、Ｈｉｓ、Ｉ ｌｅ、Ｇｌｎから選ばれ、Ｒ１２はＡｌａ、Ｉｌｅ又はＶａｌから選ばれる、請 求項３２に記載の方法。 ３４　ポリペプチドが、式（ＩＩ）： 【配列があります】（ＩＩ） （式中、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ１１Ｒ１２は請求項３３で定義された通りであり、Ｒ７ はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａ１、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ 又はＴｒｐから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｘ及びＹは互いに独立に欠失して いるか又は独立に１つ以上の付加的なアミノ酸残基である） で表わされるアミノ酸配列から実質的に成る、請求項３２に記載の方法。 ３５　Ｒ３はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ及びＡｒｇから選ばれ、Ｒ１１はＬｅｕ、 Ｈｉｓ又はＩｌｅから選ばれ、Ｒ１２はＩｌｅ又はＡｌａである、請求項３４に 記載の方法。 ３６　Ｒ７はＩｌｅ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ又はＬｅｕから選ばれる、請求項 ３５に記載の方法。 ３７　Ｒ３はＳｅｒ又はＡｓｎであり、Ｒ５がＬｙｓである、請求項３６に記載 の方法。 ３８　ポリペプチドが配列： 【配列があります】 （式中、Ｘ及びＹは互いに独立に欠失しているか又は独立に１つ以上の付加的な アミノ酸残基である） で表わされる配列から成る、請求項３２乃至３７のいずれか１請求項に記載の方 法。 ３９　Ｒ３はＧｌｎ又はＡｒｇから選ばれ、Ｒ５はＬｅｕであり、Ｒ７はＩｌｅ 、Ｐｈｅ及びＭｅｔから選ばれ、Ｒ１１はＬｅｕ、Ｈｉｓ又はＩｌｅから選ばれ 、Ｒ１２はＡｌａである、請求項３４に記載の方法。 ４０　ポリペプチドが配列： 【配列があります】 （式中、Ｘ及びＹは互いに独立に欠失しているか又は独立に１つ以上の付加的な アミノ酸残基である） から成る、請求項３９に記載の方法。 ４１　ポリペプチドが、式（ＩＩＩ）：【配列があります】（ＩＩＩ） （式中、Ｒ１はＧｌｕ又はＡｓｐであり、Ｒ２はＴｈｒ又はＧｌｎであり、Ｒ３ はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ又はＡｌａから選ばれるアミノ酸であり、Ｒ ４は、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ又はＧｌｎから選ばれるアミノ酸であり、Ｒ５は Ｌｙｓ又はＬｅｕであり、Ｘ及びＹは互いに独立に欠失しているか又は独立に１ つ以上の付加的なアミノ酸残基である） で表わされるアミノ酸配列から実質的に成る、請求項３３に記載の方法。 ４２　ポリペプチドが、式（ＩＩＩａ）：【配列があります】（ＩＩＩａ） （式中、Ｒ３はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ又はＡｌａから選ばれるアミノ 酸残基であり、Ｒ４は、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｒｇ又はＧｌｎから選ばれるアミノ 酸残基であり、Ｘ及びＹは互いに独立に欠失しているか又は独立に１つ以上の付 加的なアミノ酸残基である） で表わされるアミノ酸配列から実質的に成る、請求項３３又は請求項４１に記載 の方法。 ４３　Ｒ４がＩｌｅであるとき、Ｒ３はＳｅｒであるか又は、Ｒ４がＡｒｇ又は ＧｌｎであるときＲ３がＡｌａである、請求項４２に記載の方法。 ４４　ポリペプチドの１０番と１６番のＣｙｓ残基が分子内ジスルフィド結合に よって結合している、請求項３２乃至４３のいずれか１請求項に記載の方法。 ４５　一般式（ＩＶ）： ［Ｌａ−Ｆ］ｍ−［Ｌｂ−Ｇ］ｎ−Ｌｅ（ＩＶ）（式中、Ｆ及びＧは互いに独立 に式Ｉ乃至ＩＩＩａのいずれか１つによるポリペプチドであり、Ｌは連結配列で あり、各々の連結配列Ｌは同じか又は異なるものであり、ａ、ｂ及びｃは互いに 独立に０又は１であり、ｍ及びｎは各々正の数である） を有する合成ポリペプチドの製造方法であって、それ自体公知の、化学的、生物 学的又は組換え技術を用いる残基の結合工程及び、ポリペプチドの単離工程を含 む方法。 ４６　一般式（Ｖ）： Ｌｄ−［Ｇ−Ｌ］ｍ−Ｆ−［Ｌ−Ｇ］ｎ−Ｌｅ（Ｖ）（式中、Ｆは式１乃至ＩＩ Ｉａのいずれか１つによるポリペプチドであり、Ｇは式Ｉ乃至ＩＩＩａのいずれ か１つ又は他の配列によるポリペプチドであり、ｍ及びｎは各々正の数であり、 ｄ及びｅは各々独立に０又は１である） を有する合成ポリペプチドの製造方法であって、それ自体公知の、化学的、生物 学的又は組換え技術を用いる残基の結合工程及び、ポリペプチドの単離工程を含 む方法。 ４７　レトロ−インバーソ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）アミノ酸を含む、先 の請求項のいずれか１請求項に記載の方法。 ４８　前記ポリペプチドが、請求項３２乃至４４のいずれか１請求項に記載のポ リペプチドの抗原として重要なサブフラグメント又は変異体を含む、請求項３２ 乃至４４のいずれか１請求項に記載の方法。 ４９　前記ポリペプチドが少なくとも１つのＴ細胞エピトープを付加的に含む、 請求項３２乃至４８のいずれか１請求項に記載の方法。 ５０　前記ポリペプチドをワクチンキャリヤーに結合させることを含む、請求項 ３２乃至４９のいずれか１請求項に記載の方法。 ５１　少なくとも１つの系統のＨＩＶに対する免疫を促進するために有効な、請 求項３２乃至５０のいずれか１請求項で定義される、少なくとも１つの合成ポリ ペプチドを１つ以上の調剤学的に認容されるアジュバント、キャリヤー及び／又 は賦形剤と混合させる、ワクチンを生産する方法。 ５２　請求項３２乃至４９のいずれか１請求項に定義される合成ポリペプチドを 少なくとも１つ含む、ＨＩＶ又はＨＩＶに対する抗体の検出用キット。 ５３　組換えＤＮＡ技術が用いられる請求項３２乃至４９のいずれか１請求項に 記載の方法。 ５４　活性成分としての、請求項３２乃至５０のいずれか１請求項に定義される 、少なくとも１つのポリペプチドを１つ以上の調剤学的に認容できるアジュバン ト、キャリヤー及び／又は賦形剤と会合させることを含む、薬剤組成物の生産方 法。 ５５　哺乳類のＨＩＶ感染を治療又は予防処置するための及び／又は哺乳類の免 疫系を刺激するための及び／又は細胞のＨＩＶウイルスに対する受容体をブロッ クするための薬剤の調製における請求項３２乃至５０のいずれか１請求項に定義 される合成ポリペプチドの使用。 ５６　請求項３２乃至４２のいずれか１請求項に定義される合成ポリペプチドに 特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントの産生方法であって、請求 項３２乃至５１のいずれか１請求項に定義される合成ポリペプチドで哺乳類を免 疫化し、形成された抗体を単離することを含む方法。 ５７　請求項３２乃至４４のいずれか１請求項に定義される合成ポリペプチドに 特異的に結合する、少なくとも１つの抗体又はその抗原結合フラグメントを含有 する、ＨＩＶ用又はＨｌＶに対する抗体用検出キット。 ５８　有効成分としての、請求項３２乃至４４のいずれか１請求項に定義される 合成ポリペプチドに特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントに１つ 以上の調剤学的に認容できるアジュバント、キャリヤー及び／又は賦形剤と会合 させることを含む、薬剤組成物の生産方法。 ５９　ＡＺＴ及び／又はＨＩＶプロテアーゼ阻害剤を合成ポリペプチド又は抗体 又はその抗原結合フラグメントと会合させることをさらに含む、請求項５４又は 請求項５８に記載の方法。 ６０　哺乳動物の組織又は体液の試料を、有効な量の、抗体又は、請求項３２乃 至４４のいずれか１請求項に定義される合成ポリペプチドに特異的に結合する、 その抗原結合フラグメントと共にインキュベートし、前記試料と前記抗体の間の 交叉反応が起こるか否か、さらに必要であればどの程度及び／又はどんな速さか を決定することを含む、哺乳類のＨＩＶ感染を診断する方法。 ６１　試料と、請求項３２乃至５０のいずれか１請求項に定義される、少なくと も１つのポリペプチドと共にインキュベートすることを含む、ＨＩＶ又はＨＩＶ に対する抗体又はその抗原結合フラグメントを検出する方法。