JPH05505829A

JPH05505829A - プロテインキナーゼｃを阻害するための１，４―ビス―（アミノ―ヒドロキシアルキルアミノ）―アントラキノン

Info

Publication number: JPH05505829A
Application number: JP92501843A
Authority: JP
Inventors: ジァン，ジャック・ビー; ジョンソン，メアリー・ジョージ
Original assignee: スフィンクス・ファーマス―ティカルズ・コーポレーション
Priority date: 1990-11-02
Filing date: 1991-10-30
Publication date: 1993-08-26
Also published as: NO922601L; HU9202207D0; AU9086291A; KR920703512A; BR9106117A; US5141957A; AU641581B2; FI923031L; CA2072884A1; FI923031A0; WO1992007558A1; NO922601D0; FI923031A7; EP0509088A1; HUT64296A; EP0509088A4

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】プロティンキナーゼＣを阻害するための１．４−ビス−（アミノ−ヒドロキシアルキルアミノ）−アントラキノン［技術分野］本発明は、炎症性疾患及び心血管疾患の治療、並びに化学療法剤の分野に間する。更に特定すれば、本発明は酵素プロティンキナーゼＣを阻害する、新規１．４ −ビス−（アミノ−しドロキシルアルキルアミノ）−アントラキノン類に間する。

［関連出願に関する言及］本出願は、”プロティンキナーゼＣを阻害するための１．４−ビス−（アミノヒドロキシルアルキルアミノ）−アントラキノン”の表題の下に、Ｊａｃｋ　Ｂ。

Ｂｉａｎｇ及びＭａｒｙ　Ｇｅｏｒｇｅ　Ｊｏｈｎｓｏｎの名前で１９９０年１１月５日に出願した米国出願５ｅｒｉａｌ　ｎｏ、０７／６０９，４１６の一部継続出願であり、また該米国出願は、１９９０年１１月２日に出願した米国出願５ｅｒｉａｌ　ｎｏ、０７７’６０８．２４８の一部継続出願である。両出願はここにその全てを開示されたごとく、本出願に参照として包含される。

［従来技術］プロティンキナーゼＣ（ＰＫＣ）は、細胞の成長制御、調節、及び分化に重要な役割を果たす、カルシウム刺激性でリン脂質依存性のセリン／トレオニン特異的プロティンキナーゼの属である。プロティンキナーゼＣはまた、いくつかのクラスの腫瘍プロモーターと同時に内在性の細胞性ジアシルグリセロールに対する主要な高親和性リセプターであるので、腫瘍発生の過程にも基本的に関与する。

これらの腫瘍プロモーターはまたプロティンキナーゼＣ触媒牛用を刺激する。ＣａｓＬａｇｎａ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８２）　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２５７：７８４７は、腫瘍促進性ホルボールエステルによるプロティンキナーゼＣの直接活性化を報告している。プロティンキナーゼＣの作用メカニズムは、１９８９年３月２８日にＢｅ１ｌほかにｆ寸与された米国特許第４，８１６．４５０　（その開示はここにその全てを開示されたごとく、本出願に包含される）に記載されている。プロティンキナーゼＣは中性脂質であるジアシルグリ七ロール（ＤＡＧ）によって活性化され、活性化されると、基質タンパク質上のセリン又はトレオニンへとＭｇＡＴＰのγ−リン酸基３転移する。

プロティンキナーゼＣの活性化は、ガン性腫瘍、炎症、及び再潅流損傷（ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　１ｎｊｕｒｙ）を含む幾つかのヒトの疾患過程において暗示されてきたので、プロティンキナーゼＣの阻害はこれらの症状を治療するうえで大きな治療価値を有するはずである６プロテインキナーゼＣ阻害剤はｉｎ　ｖｉｔｒｏ及びｉｎ　ｖｉｖｏの両方でシスプラチンの抗腫瘍活性と高めると報告されている（Ｃｒｕｎｉｃｋｅ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８９）＾ｄｖ、Ｅｎｚｙｍｅ　Ｒｅｇｕｌ、　２８：２０１；及びドイツ公開公報ＤＥ　３８２７９７４）、更に、プロティンキナーゼＣは細胞成長におけるその中心的役割の故に、治療デザインの標的となる可能性があることが示唆されている（Ｔｒｉｔｔｏｎ、　Ｔ、Ｒ，ａｎｄ　ｌ（ｉｃｋｍａｎ、Ｊ＾、ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ２：９５− １０２（２９９０））。

プロティンキナーゼＣ阻害剤は、血小板の凝集と、血小板活性因子（ＰＡＦ）のような好中球活性剤の放出とを阻害することが示された（Ｓｃｈａｃｈｔｅｌｅ　ｅｔ　ａｔ。

（１９８８）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙ、Ｒｅｓ、Ｃｏ＋ｗｕｎ、１５１：５４２；　Ｈａｎｎｕｎ　ｅｔ　ａｌ、（１９８７）　ＪAＢｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６２二１３６２０；　Ｙａｍａｄａ　ｅｔ　ａｌ、（１９８８）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、３７＋１１６１）。　vロティンキナーゼＣ阻害剤はまた、好中球活性化と走化性移動を阻害することが示され　（Ｍｃｌｎｔｙｒｅ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８７）　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６２：１５７３０；　Ｌａ＋＊ｂｒｅｔｈ　ｅｔ　ａ戟A（１９８８）Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６３：３８１８；　Ｐｉｔｔｅｔ　ｅｔ　ａｌ、（１９８７）　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６２：１００７２G　及びＧａｕｄｒｙ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８８）　Ｉ鵠ｕｎｏｌｏｇｙ　６３ニア１５）、また好中球の脱顆粒反応と、タンパク質分解酵素及び反応性酸素中間体の放出とを阻害することが示された（ｗｉＩｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、（１９８６＞　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ＋＊、２６１：１２６２６；　Ｆｕｊｉｔａ　ｅＬ　ａｔ、、（１９８６）　aｉｏｃｈｅｍ。

Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　３５：４５５５；　Ｂｅｒｋｏ＊　ｅｔ　ａｌ、　（１９８７）　Ｊ、Ｌｅｕｋｏｅ、、Ｂｉｏｌ　、　４１：４４P；　５ａｌａｚｅｒｅｔ　ａｌ、（１９８７）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍ＋ｓｕｎ、１４８ニア４７：　Ｋｒａｗｅｒ　ｅｔ　ａｔ、i１９８９）Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｓ、２６２：５８７６；　及び　Ｄｅｗａｌｄ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９＞　Ｂｉｏｃｈｅ曽、Ｊ、２６４：８７９）B かくして、プロティンキナーゼＣの阻害剤は、心筋の再潅流損傷と関連する病因の最も重要なメカニズムの３つ全て分阻害でき、従って決定的な治療上の利点を有する。更に、角ｆヒ細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）、及び好中球における酸化的バースト（ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｂｕｒｓｔ）に対するプロティンキナーゼＣ阻害剤の阻害効果は抗炎症効果につながるであろう。

ガンの治療を含む、置換アントラキノンの各種の用途が報告されている。Ｍ。

ｒｉｙａｍａほかに１９７６年６月１日に付与された米国特許第３，９６０，７５１は、多色性染料として用い得る置換アシトラキノン含開示する。Ａｄａｍに１９８６年７月１日に付与された米国特許第４．５９８，１５５は染料として用い得るテトラゾール置換アントラキノンを開示する。

５ｔａｃｈｅほかに１９８８年８月９日に付与された米国特許第４．７６２゜６４８は、β−り七ブター阻害作用を有する医薬の製造における中間体として、またポリマー製造における架橋剤として用い得る一官能基性及び二官能基性アントラキノン−（オキシ−２，３−オキシドプロパン）を開示する。この化合物はまた細胞増殖抑制活性も示す。

幾つかの特許が新生物の治療に置換アントラキノンを使用することを開示する。

Ｋｒａｐｃｈｏほかに１９９０年１月１６日に付与された米国特許第４，８９４゜４５１は、新生物の治療に用い得る非対称性１．４−ビス−（アリーアルキルアミノ）−アントラセン−９，１０−ジオンを開示する。Ｚｅｅ−Ｃｈｅｎｇほかに１９８２年１月１２日に付与された米国特許第４．３１０．６６６は、新生物の治療に用い得る１、４−ビス−（置換アミノアルキルアミノ）−アントラキノンを開示する。Ｍｕｒｄｏｃｋほかに１９８５年７月２日にｆ寸与された米ｒＢ特許第一１．５２６．９８９は、キレート剤として、また腫瘍の成長の阻害剤として用い得る、対称性１．４−ビス−（置換アミノ）−５，８−ジヒドロキシアントラキノンを開示する。Ｍｕｒｄｏｃｋほかに１９８０年４月Ｓ日に付与された米国特許第４，１９７．２４９はまた、キレート剤として２また腫瘍の成長の阻害剤として用い得る、対称性１．４−ビス−（置換アミノ）−５，８−ジヒドロキシアントラキノンを開示する。Ｍｕｒｄｏｃｋほかに１９８５年９月１０日に１寸与された米国特許第４．５４０，７８８は、キレート剤として、また白血病の退行誘導剤及び／又は哺乳動物における腫瘍成長の阻害剤として用い得る、１．４−ビス−［（アミノアルキル）アミン］−９，１０−アントラセンジオン、及びそのロイコ塩を開示する。１９９０年５月７日にｆ寸与された日本特許第１９８１９は、単独で又はその他の抗腫瘍剤との組み合わせにおける抗腫瘍剤として用い得る、アントラキノン環構造の５及び６位に置換基を有する、置換アシトラキノンを開示する。

ドイツ公開公報ＤＥ　３８２７９７４　Ａｌは、ガンの治療に用い得る、脂質、脂質顕似体、細胞静止剤又はホスホリパーゼ阻害剤との組み会わせにおけるプロティンキナーゼＣ阻害剤からなる治療剤を開示する。しかしながら、この公報に開示されたプロティンキナーゼＣ阻害剤には置換アントラキノンが１つも含まれていない。

置換アシトラキノンはガンの治療剤として報告されたことがあるが、ミドキサントロン（Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｒｉｅ）のような置換アントラキノンは、主として免疫抑制活性や医薬耐性のような副作用と伴うことが知られている。従って、これらの欠点の一部又は全てを回避する新規ガン治療がめられている。

更に、炎症及び特に心臓の損傷に関係する再潅流損傷はよくある症状であるが、これらの症状に対する旺盛な研究と適切な治療が必要であるにもかかわらず、決定的な治療が全く存在しない。

［発明の開示］本発明は、以下の化学式Ｉを有する新規な１換アントラキノンき提供する。

［式中、Ｒ，及びＲ２は独立にＨ、アルキル、アリール、又はアリールアルキルであり：ｍ及びｎは独立に１．２、又は３であり；ＸはＨ，ＯＨ，ＮＲ３Ｒ，、Ｃ１，Ｂｒ、１、Ｆ、アルキル、アリールアルコキシ、アロキシ（ａｒｏｘｙ）　、Ｃ００Ｒｓ、又はＣ０ＮＲａＲ，であり、そしてＲ１、Ｒ４、Ｒ３、Ｒ６、及びＲアは独立にＨ５低級アルキル、又はアリールであるコ。

本発明の新規化合物はプロティンキナーゼＣの阻害に有用であり、また更にプロティンキナーゼＣの阻害と関連する、或いはこれによって影響される症状、特にガン性腫瘍、炎症性疾患、心筋性再潅流損傷、及び再潅流損傷に関連する心臓機能障害の治療に有用である。プロティンキナーゼＣの阻害は、細胞成長の阻害に繋がり、これによって抗腫瘍効果をもたらすことができる。更に、プロティンキナーゼＣの阻害はまた、好中球における酸化的バースト、血小板凝集、及び角化細胞の増殖の阻害に繋がり、これによって抗炎症効果が達成される。血小板凝集、好中球活性化、及び好中球放出に対する本発明の化合物の阻害活性は、再潅流損傷、特に心筋性再潅流損傷の治療にこれが有用であることを示している。

本発明の化き物は、その他の化学療法剤を用いる治療に耐性である腫瘍の治療に特に有用であることが期待される。驚くべきことに、本発明の化合物は、アドリアマイシンやミドキサントロンに耐性な細胞においてもプロティンキナーゼＣを阻害することができ、それ故これらの化学療法剤と交差耐性でない。

本発明の化合物はｃＡＭＰ依存性のプロティンキナーゼＣには影響を及ぼさないようであり、従ってｃＡＭＰによるプロティンキナーゼＣの刺激と関連する代謝経路には何ら影響を及ぼさない。

本発明は付属の請求の範囲によってより特定して定義され、以下に記載する好ましい態様において詳述される。

［図面の簡単な説明コ図４は、本発明の化き物の合成に用いる反応式■の合成経路を示す。

図２は、本発明の化き物の合成に用いる反応式■の合成経路を示す。

［発明の詳細な説明］本発明は、以下の化学式Ｉを有する新規な置換アントラキノンと提供する。

式中、Ｒ１及びＲ２は好ましくは独立にＨ、アルキル、アリール、又はアリールアルキルであり：より好ましくはＨ、低級アルキル（即ち、ＣＩ　Ｃｓアルキル）、又はアリーノげルキルであり，最も好ましくはＨ及びアリールアルキルである。ｍ及びｎは好ましくは独立に１−３の整数であり；より好ましくは１又は２であり，最も好ましくは１である。Ｘは好ましくはＨ．ＯＨ．ＮＲ．Ｒ．、Ｃ１．Ｂｒ、■、Ｆ．Ｃ．−Ｃ．、アルキル、アリールアルコキシ、アロキシ、ＣＯＯＲ５、又番よｃ。

ＮＲ．Ｒ７であり；ここでＲ，、Ｒ，、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ，は独立にＨ、低級アルキル（即ち、Ｃ，−Ｃ６アルキル）、又はアリールである．Ｘはより好ましくはＨ、ＯＨ−Ｃ１．Ｂｒ、■、Ｆ、又はアルコキシであり．最も好ましくはＸはＨ又はＯＨである。

ここでは、アルキル置換基は直頭、分枝鎖、及び環状基を含み、好ましくは直鎖種である。飽和種が好ましいが、いくつかの置換基においては不飽和部分も有用である。アルカリール置換基は好ましくはそれぞれ有用と信じられるオ／Ｌト、メタ、及びバラ置換を有する置換ベンゼン基である，複数の置換基も同様に有用である．アラールキル置換基は好ましくはベンジル、フエニルエチノし、フェニルプロピルなどを含むベンゼン置換アルカンである。

本発明の化き物はプロティンキナーゼＣの阻害と関連する、或いはこれによって影響される症状、特にガン性腫瘍、炎症性疾患、再潅流損傷、及び再潅流損傷に関連する心臓機能障害の治療に有用である．従って、本発明の他の面は、プロティンキナーゼＣと、阻害的量の本発明の置換アントラキノン化合物とを接触させることからなる、プロティンキナーゼＣの阻害法及び医薬組成物を提供する。

本発明の医薬組成物は、本発明の置換アントラキノン化合物と、医薬的に受容し得る担体又は希釈剤とからなる。

本発明はまた、好中球と、プロティンキナーゼＣ阻害的濃度の本発明の置換アントラキノン化合物とを接触させることからなる、或いは好中球と、酸ｆヒ的ノ＜ −ストを阻害するのに有効な量の本発明の化き物とを接触させることからなる、好中球における酸化的バーストを阻害する方法を提供する。

本発明は更に、炎症に悩む哺乳動物に、プロティンキナーゼＣ阻害的濃度の本発明の置換アントラキノン化合物を投与することからなる、或いは該哺乳動物に炎症と阻害するのに有効な量の本発明の化合物を投与することからなる、炎症治療方法と提供する。

本発明は更に、哺乳動物腫瘍細胞と、プロティンキナーゼＣ阻害的濃度の本発明の置換アントラキノン化合物とを接触させることからなる、或０は腫瘍細胞と、腫瘍細胞の成長を阻害するのに有効な量の本発明の化き物とを接触させること力）らなる、哺乳動物腫瘍細胞の成長を阻害する方法を提供する。

本発明のさらなる態様は、腫瘍を有する哺乳動物に、プロティンキナーゼＣ阻害的濃度の本発明の置換アントラキノン化き物を投与することからなる、或Ｕ）は腫瘍を有する哺乳動物に、腫瘍の成長を阻害するのに有効な量の本発明の化き物を投与することからなる、哺乳動物の腫瘍を治療する方法と提供する。

本発明の他の態様は、哺乳動物角化細胞に、プロティンキナーゼＣ阻害酌量の本発明の化き物を投与することからなる、或いは角化細胞に、角化細胞の増殖を阻害するのに有効な量の本発明の化き物を投与することからなる、哺乳動物角化細胞の増殖を阻害する方法を提供する。

本発明の更に他の態様は、プロティンキナーゼＣを阻害する医薬の製造における本発明の置換アントラキノン化合物の使用を提供する０本発明の化き物は好ましくは、該医薬中で治療的に有効な量で存在する。

驚くべきことに、本発明の化合物はアドリアマイシン（抗生物質由来の化学療法剤である塩酸ドキソルビシン、Ａｄｒｉａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｄｕｂｌ　ｉｎ、０ｈｉｏ）、又はミドキサントロン（合成アントラセンジオン化学療法剤であるノバントロン、Ｌｅｄｅｒｌｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｅａｒｌ　Ｒｉｖｅｒ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）と交差耐性でなく、これらの既知の化学療法剤に耐性な腫瘍細胞の成長を減少するのに有効であり続ける。アドリアマイシン又はミドキサントロンと交差耐性がないということは、本発明の化き物がアドリアマイシン又はミドキサントロン耐性なｍ瘍の治療に特に有用であることを示唆している。

ガンは制擲不能な細胞成長によって部分的に特徴付けられる疾患である。プロティンキナーゼＣは細胞成長の制御に直接関与し、腫瘍形成に関与すると信じられている。プロティンキナーゼＣは、非常に強力な腫瘍プロモーターであるホルボールエステルの、独占的でなくとも主要な、細胞内リセプターである。ホルボールエステル及びその他の腫瘍プロモーターはプロティンキナーゼＣと結きしてこれを活性化する。ジアシルグリセロール（ＤＡＧ＞とホルボールエステルとは同じ部位で相互作用するので、アヘン製剤すセプタ−（ここでは高親和性リセブターの保持が内在性類似体の存在を意味する）との類似から、ＤＡＣは”内在性ホルボールエステル”であることが示唆されてきた。Ｄ　Ａ　ＧはプロティンキナーゼＣのＣａ”２及びリン脂質に対する親和性と増加し、そしてこれらの本質的補因子の細胞レベルでプロティンキナーゼ０分活性化することが示されてきた。

ホルモン、成長因子、及び神経伝達物質を含む細胞外シグナルは、ホスファチジルイノシトール代謝回転を刺激して、ＩＰ、及びＤＡＣの生成をもたらすことが知られている。ウィルス及び細胞由来の４０種の異なるガン遺伝子の構造研究によって、ガン遺伝子は正常な細胞タンパク質の変形したものをコードすることが明らかとなった。いくつがの遺伝子産物は成長因子又はトランスメンブランシグナルに含まれるその他の要素に関連すると思われる。これらのガン遺伝子産物は、決定的な第２のメツ七ンジャーのレベルを変えることによって機能するように思われる。ガン遺伝子、１旦」−４旦ｉｓ、ｅｒｂＢ、ａ旦１．及びに旦で形質転換された細胞は、高いＤＡＧレベルを含んでいることが示され、次いでこれがプロティンキナーゼＣを活性化すると信じられている。確かに二且互形質転換細胞についての研究は、ＤＡＣの上昇にｆ付随するプロティンキナーゼＣの活性化な示した。

ホルボールミリステートアセテ−）（ＰＭＡ）のようなホルボールエステルは、膜機能、マイトジエネシス、分化、及び遺伝子発現に対する影響を含む複雑な影Ｗ３ｍ胞に及ぼす。き成ジアシルグリセロールは、ｉｌ　ｖｉｔｒｏでＰＭＡの多くの影Ｗ？模倣し、プロティンキナーゼＣの阻害剤は細胞に対するＰＭＡ誘導性の影響分阻害することが示された。かくして、プロティンキナーゼＣは、ＤＡＧの細胞内での増加、及びこれに付随するプロティンキナーゼＣの増加を引き起こす、ｒａ互などのある稲のガン遺伝子の活動を仲介するのかも知れない。更に、プロティンキナーゼＣの活性化は、細胞トランスフォーメーションにおいて重要な核のかん原遺伝子である、立二工り旦、　ｃ−ｆ　ｏｓ、　ｃ−ｃ　ｉ　ｓ、　ｃ−ｆｍｓの発現を導く。ＮＩＨ３Ｔ３細胞におけるプロティンキナーゼＣの過発現（Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）は、成長制御の変化、及び腫瘍化増強を引き起こし、またラット繊維芽細胞では軟寒天中での足場非依存性成長をもたらす。これらの実験において、これらの細胞におけるプロティンキナーゼＣの過発現は、移植細胞な受け取った動物中に腫瘍形成をもたらした。

幾つかの研究は、乳及び肺ガン腫のようなある種の腫瘍タイプにおいてはプロティンキナーゼＣの発現が増加していることな示した。ヒト結腸ガン腫においても、遺伝子レベルでの発現増加は観察されなかったが、活性化されたプロティンキナーゼＣが検出されている。酵素に対する基質としてプロティンキナーゼＣによってトポイソメラーゼが直接調節されており、プロティンキナーゼＣ阻害剤はシスプラチンのような化学療法剤の作用を増強することが示されている。

プロティンキナーゼＣの阻害剤として特異的に同定される、新規でより強力な化合物は、動物モデルにおける腫瘍成長を阻害する化学療法剤となりうることか約束されている。

動物実験による研究によると、虚血性関連の心筋性損傷のうちの約５０％又はそれ以上が、閉塞（ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）部位に蓄頂する多形核白血球（好中球）によるも力である。蓄積した好中球による損傷は、活性化した好中球からのタンパク質分解酵素の放出、又は反応性酸素中間体（ＲＯＩ）の放出によるものであるかも知れない。心筋性虚血に関連する”再び流れない（ｎｏ　ｒｅｆｌｏｗ） ”現象の多くは、心筋性毛細血管の栓塞によるものである。毛細血管の栓塞は、血小板の凝集と好中球の凝集の双方によるものである。いずれの細胞タイプも虚血の起きる間に凝集するけれども、それぞれの毛細血管の栓塞に対する相対的な寄与はまだ確立していない。心筋組織への好中球による損傷はカスゲート反応で進行することはよく知られているが、その最初の出来事のうちの１つは、活性化された好中球が損傷した血管内皮に結合することである。しかしながら、この好中球の結きはその活性化によって有意に増強され、これよりもまだ早いかも知れない出来事が、活性化刺激として機能し得る分子（サイトカイン顕、及び走化性因子など）の生成である。これらの分子はおそらく、損傷しかつ凝集した血小板から、損傷した血管内皮から、或いは内皮由来の酸化刑による血漿タンパク質又は脂質の酸化から由来する。

反応性酸素中間体の有害な効果を克服するための戦略は、該分子のためのスカベンジャーの開発に焦点をきわせてきた。スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）はスーパーオキシドの特に有効なスカベンジャーであることが示されてきたが、血液中ての非常に短い半減期という欠点に悩まされてきた。幾つかの会社が、リポソームカプセル化又はポリエチレングリコール複合体のような手法によって長い半減期をもつこの酵素の変更体と作製することによってこの問題に挑んできた。これらの新しい変更体の有効性についての報告が入り交じっている。過酸化水素のスカベンジャーであるカタラーゼ、及び水酸ｔラジカルスカベンジャーも試験され、いろいろな程度で有効であることが見いだされた。しかし、反応性酸素中間体をスカベンジするために考えられたいずれの戦略も、血小板の凝集、走化性分子の放出、好中球の活性化及び血管内皮への付着、又は活性化好中球からのタンパク質分解酵素の放出を防止することはできないであろう。

再潅流損傷のための治療剤としてのプロティンキナーゼＣの利点は、これが１）血小板凝集とＰＡＦのような好中球活性ｆヒ剤の放出をブロックする、２）好中球の活性化、走化性移動、及び活性化されたり又は損傷した内皮への付着とブロックする、そして３）タンパク質分解酵素及び反応性酸素中間体の好中球放出をブロックする、ことが示された点にある。従って、これらの治療剤は再潅流損傷に関連する病因の最も重要な３つのメカニズム全てをブロックすることができ、従って明確な治療利点分有する。

本発明の新規なビス−アミノアントラキノンは、図１に示す反応式Ｉ、又は図２に示す反応式■によって製造される。当分野で公知のその他の合成経路もまた用い得る。ここで用いる場合には、アントラキノン環構造は、メルクインデックス（第１０版＞、Ｍｅｒｃｋ　＆　Ｃｏ、、Ｉｎｃ、Ｒａｔｈｗａｙ、ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ、１９８３．ｐｐｌｏｏ−１０１に表示される慣用的環の番号付けに従う。

反応式Ｉにおいては、ジアミノアントラキノンよとエビハロヒドリンとの反応は、ビス−（３−ハロー２−ヒドロキシプロピルアミノ）−アントラキノン２を生成し、これを室温から選択した溶媒の沸点までの温度で、ジエチルアミンのようなアミンで処理すると、生成物上を生成する。反応式■は、反応式Ｉと同じ出発物質な用いて反応を開始する別法であるが、中間体λを、水酸化ナトリウムなどの塩基を用いてビス−エポキシ化合１ｍ３に変換して、次いでこのビス−エポキシ（ヒき物をアミンと反応させて、本発明の化き物上と生成する。反応式Ｉ及び ■によって製造できる本発明の化合物の例を表１に列挙する。

本発明の化き物の光学活性なエナンチオマーは、市販の光学活性なグリシドール又はエビクロロヒドリンのような光学活性な出発物質を用いて、反応式■及び■ によって製造できる。

本発明の化合物の薬学的に受容し得る塩もまた本発明の方法において有用である０本発明で有用な薬学的に受容し得る塩は、塩酸、臭酸、フマル酸、シュウ酸、リンゴ酸、コハク酸、バモンＷｉ（ｐａｍｏｉｃ　ａｃｉｄ）−［酸及びリン酸の塩を含む。

表よセを上　上　工　上工碌点■ユｌａ　ＨＰｒ　Ｈ１１吸ｉ性ｌｂ　ＨＰｈＣＨ２１（１１８６−８９１ｃ　ＨＰｈＣＨ２７−Ｃｌ　１　２１ｄ　Ｅｔ　Ｅｔ　５−ＨＯ２２１ｅ　ＰｈＣＨ２ＰｈＣＨｚ　ＮＭｅ２　３　３！４　Ｐｈ（ＣＨｚ）ｚ　ＨＮｅｏ　ｉ　３ｂｒ　ＰｈＣＨ２ＰｈＣＨｚ　６，７−；−’ｄ０　１　１１ｈ　ＰｈＣＨｚ　Ｈ５，８；−ｔｌｏ　１　１１ｉ　２−ＰｈＣＨ２１５−Ｃ０ＯＨ２２１Ｈ（３，４−’；−Ｎｅｏ）ＰｈＣＨ２１１１１２５，４−１２９，８１ｋ　Ｈ（３，４，５−トリーＭｅＯ）ＰｈＣＨｚ　Ｈ１１１４７，３−１４８，８（表１で用いる略号・Ｐｒ−プロピル：Ｐｈ−フェニル、Ｅｔ−エチル：Ｐｙｒ−ピリジニル；ＭｅＯ−メトキシ）本発明の化き物は、活性成分と哺乳動物の体内における治療剤の作用部位との接触をもたらすいかなる方法によっても投与でき、経口、静脈内、及び腹腔的投与を含むが、これに限定されるものてはない。本発明の化合物は、単独で、或いは本発明の他の化合物、化学療法化合物のような他の医薬化合物、又は放射線治療のような他の治療と組み合わせて投与できる。化合物は好ましくは選択された投与経路、及び標準的医薬処方に基づいて選択された薬学的に受容し得る担体とともに投与される。

本発明の化き物は、プロティンキナーゼＣの阻害、或いは腫瘍細胞成長の阻害、組織の炎症の阻害、角化細胞増殖の阻害、好中球からの酸化的バーストの阻害、又は血小板凝集の阻害に有効である治療的に有効な量又は濃度で、哺乳動物、好ましくはヒトに投与する。いかなる特定の場合においても投与量は、本発明の特定の化き物の薬力学的特質、及びその投与形態と経路：投与される者の年齢、健康状態、及び体重、症状の性質と程度：現在受けている治療の種顕、治療の頻度、及び所望する効果、などの各種要因に依存する。化き物の１日の投与量は、体重１ｋｇ当たり約５から約４００ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇ当たり約１０から約２００ｍｇ、そしてより好ましくは体重１ｋｇ当たり約１０から約５０ｍｇであり、好ましくは１日２から４回に分けて投与するか、或いは持続的放出形態で投与することが企図される。

本発明の化合物は、カプセル、錠剤、及び粉剤のような固形の単位投与形態、或いはエリキシル、シロップ、及び懸濁液のような液体の羊位投与形態における経口医薬として投与される。

本発明の化き物は、医薬製造の分野での標準法に従って、単位投与量に医薬として使用すべく製剤される。この分野における標準的参考文献であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ。

Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、＾、０ｓｏｌ　、Ｈａｃｋ　Ｐｕｂｌ　ｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ、ＥａｓｔｏｎAＰｅｎｎ５ｙｌｖａｎｉａを参照されたい。

例えば、本発明の化き物は、ゼラチンカブ七ルに挿入するため、或いは錠剤に成型するために、ラクトース、スクロース、マンニトール、スターチ、セルロース誘導体、ステアリン酸マグ木シウム、及びステアリン酸のような粉末担体と混合される。錠剤もカプセルも数時間にわたって医薬を連続的に放出するための徐放剤として製造できる。圧縮された錠剤は、いかなる好ましくない味もマスクし、また空気から錠剤を保Ｊするために砂糖て゛コーティングするか、又はフィルムコーティングでき、或いは胃腸管で選択的に分解されるように腸溶皮される。

経口投与のための液体投与形は、水、パンファー、又は食塩水のような医薬的に受容し得る希釈剤に加えて、患者に受け入れられやすくするために、着色剤や香料を含んでいてもよい。

非経口投与のためには、本発明の化合物は、水、オイル、食塩水、水性デキストロース（グルコース）、及び関連の糖溶液、及びプロピレングリコール又はポリエチレングリコールのようなグリコール顕などの適当な担体又は希釈剤と混きできる。非経口投与のための溶液は、好ましくは本発明のｆヒ合物の水溶性塩を含む。安定化剤、抗酸化剤、及び保存料も加えてよい。適当な抗酸化剤は、重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、クエン酸とその塩、及びＥＤＴＡナトリウムを含む。適当な保存料は、ベンズアルコニウムクロリド、メチル−又はプロピル−パラベン、及びクロルブタノールと含む。

犬距３以下に記載するのは、本発明を例示するための特定の実施例であって、本発明の範囲を限定するためになされるものではない。

実施例１：１．４−ビス−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピｌレアミノ）− ９，１０−アントラセンジオンのき成（合成反応式Ｉ及び■の化き物２）氷酢酸（２００ｍＬ）中の１．４−ジアミノアントラキノン（ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ＞（Ｌｏｇ、４２ｍモル）の溶液に、室温でエビクロロヒドリン（８４，５ｍＬ、１．０８モル）を加えた。溶液を９０℃で３０分間撹拌し、溶媒な減圧で除去した。残渣をフランシュカラム２０マドグラフイー（シリカゲｎ、ＣＨ２Ｃ１２ＭｅＯＨ，′２５　：　１）で精製し、ＣＨ２Ｃｌ２−エーテル−ヘキサン・力）ら再結晶すると、純粋な青色固体の標記化り物である、１．４−ビス−〈３−クロロ− ２−ヒドロキシプロピルアミノ）−９，１０−アントラセンジオン（１２，−１６ｇ、７０％）を与えた。融点＋１６７−１６９℃：’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ、） δ３．２１（幅広、２Ｈ，ＯＲ）　、３．５−３．６（ｍ、６８．ＣｔｌＣＬ）　、３．７５（ｄ、に３Ｈｚ、４Ｈ，ＣＨ，）　、４．１９（幅広、２Ｈ，８８）　、７．０３（ｄ、Ｊ・３．２Ｈｚ、２８．＾ｒ１＋（２，３））、７．６９（P１，２０，八ｒＨ。

（６，７））、８．２７（−，２Ｈ，＾ｒＨ＜５．８））。

元素分析：Ｃ２ｏＨ２ｏ○ｌＮ２ｃ　Ｉ　２　Ｘ　−２５Ｈ２Ｃとして計算値：Ｃ，５６゜１５、Ｈ，４，８３，Ｎ、６．５５　実測値：Ｃ，５６，１８，Ｈ，４，７６；Ｎ、６．２９実施例２：１．４−ビス−（２，３−エポキシプロビルアミノ）−９，１０−アントラセンジオン（合成反応式■の化合物ユ）の合成ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中の１．４−ビス−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピルアミン）−９，１０− アントラセンジオン（８，３ｇ、１９．８ｍモル）の溶液に、６０℃でＮａＯＨ（３，５ｇ）を加えた。得られる青色溶液を室温で４時間撹拌し、溶媒を減圧下に除去した。残渣固形物３次いでフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ／２５　：　１）で精製した。ＣＨ２Ｃｌ２−ヘキサンから再結晶して、標記化き物、１．４−ビス−（２，３−エポキシプロビルアミノ）−９，１０−アントラセンジオン（６，２ｇ、８９．３７％）を得た。融点・１８９−１９０℃：’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１，）　δ２．７４（ｍ、Ｉｆｌ、ＣＬ）、２．８７（＋＊、１１．ＣＨ，）、３．２６（＋＊、ｉｎ、ＣＩ）。

３．５７（ＩＩ、ＩＨ，ＣＨ２）、３．７８（ｍ、１４１．ＣＨ２）、７．３２（ｓ、２Ｈ，＾ｒ（２，３））、７．７１（ｄｄ、Ｊ：３．QＨｚ、５．５ＦＩｚ。

２０、＾ｒ（６，７））　、８．３４（ｄｄ、、Ｉ’３．２Ｈｚ、５．５Ｈｚ、２Ｈ，＾ｒ（５，８＞）、１０．７６（ｓ、２Ｈ，Ｎｔｌ）B 元素分析：ＣｚｏＨ＋ｓＯ＋Ｎｚ　ｘ　、２５Ｈ２０として計算値：Ｃ，６７，６６゜Ｈ，５，２５；Ｎ、７．９３　実測値：Ｃ，６７，７２，Ｈ，５，５５，Ｎ、７゜５４　ＩＲ：３４００．３０７０．２９１０．１６４０．１２２０．９００実施例３：１．４−ビス−（３−プロピルアミノ−２−ヒドロキシプロピルアミノ）−９，１０アントラ七ンジオン塩酸塩〈表１の化な物↓且）の合成室温で４時間撹拌しておいたメタノール（２０ｍＬ）中の１．４−ビス−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピルアミン）−９，１０−アントラセンジオン（１ｇ、２．３６ｍモル）、プロピルアミン（１，３９ｇ、２３．６ｍモル）、及びヨウ化カリウム（０，２６ｇ、１６０ｍモル）溶液に、炭酸カリウム（０，５ｇ。

３．６２ｍモル）を加えて、反応物を室温で更に１６時間撹拌した。溶媒を除去して、青色生成物をジクロロメタンに溶解し、水で３回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。青色生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタンと段階的メタノールグラジェント）によって精製して、標記化合物の遊離塩基を得た０次いでこれのアセトン溶液中に、色の変化が観察されるまで、撹拌しながら塩化水素ガスを通し、標記化合物である１、４−ビス−（３−プロピルアミノ−２−ヒドロキシプロピルアミノ）− ９，１０アントラセンジオン塩酸塩（５８０ｍｇ、４８％）を得た。

’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ　３）δ０．９４（ｔ　、Ｊ４．３Ｈｚ　、６Ｈ、ＣＨ３）　、　１．５７（ＩＩ、　４Ｈ、ＣＨ２）　、２．６４（P１。

４Ｈ，ＣＨ２）　、２．７５（１１，４Ｈ，ＣＨ２）　、３．３３（ｍ、６Ｈ，ＣＩ、およびＣＨ２）、４．０５（ｂ、２８．ＯＨ）　、６D８０（ｓ、２Ｈ１＾ｒ（２，３））、７．５２（ｍ、２Ｈ，＾ｒ（８，７））、７．９４（ｍ、２１Ｔ、＾ｒ（５，８））、１０．６３（ｂ、２■、Ｎ１（）@；実施例４・１．４−ビス−（３−ベンジルアミノ−２−ヒドロキシプロピルアミノ）−９，１０アントラセンジオン塩酸塩（表１の化き物１回）還流下に５時間加熱しておいな、メタノール（４０ｍＬ）及びジクロロメタン（５ｍＬ＞中の、１．４−ビス−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピルアミノ）−９，１０−アントラセンジオン（Ｉｇ、２．３６ｍモル）、ベンジルアミン（２−０２ｇ、１８．８８ｍモル）、及びヨウ化カリウム（０，２５ｇ、１５３ｍモル）溶液に、炭酸カリウム（０，７ｇ、５．０６ｍモル）３加えた。反応物を還流下で更に１６時間加熱した。溶媒を除去して、青色生成物をジクロロメタンに溶解し、水で３回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。

有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。青色の遊離塩基生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタンと段階的メタノールグラジェント）によって精製した。アセトン中の遊離塩基の溶液に塩化水素ガスを通すことによって標記化き物である１、４−ビス−（３−ベンジルアミノ−２−ヒドロキシプロピルアミノ）−９，１０アントラセンジオン塩酸塩（６１０ｍｇ、４２％収率）を得た。融点：　８６−８９°Ｃ：ＩＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　δ２．７６（鍮、２Ｈ，ＣＨ２）、２．９０（積、２Ｈ，ＣＨ，）、３．４３（端、６■、ＣＨ２およびＯＲ）　、３．８５（ｄ　、Ｎ４．３Ｈｚ　、４）１　、ＣＨ，）　、４．０４（ｎ、２Ｈ、Ｃ）Ｉ）　、７．１５（ｓ　、２Ｈ，＾ｒi２，３））　、７．３１（ｓＪＯＨ２八ｒ（べ＞；ｉ））、７．６４（ｍ、２１’ｌ、＾ｒ（６，７））、８．２２（ｍ、２Ｈ１＾ｒ（５，８＞）、１０．８２（ｂA２Ｈ，ＮＨ）：元素分析：　Ｃｘ４ＨｓｔＮ＋ＣＬ　ｘ　ＨＣｌ　として計算値：Ｃ，６７，９３：Ｈ，６゜２０、Ｎ、９．３２　実測値：Ｃ，６８，２１、Ｈ，６，１４；Ｎ、９．０２実施例５．プロティンキナーゼＣ阻害プロティンキナーゼＣ（ＰＫＣ）のアッセイは、プロティンキナーゼＣが機能するのに必要なｉｎ　ｖｉｖｏ状態を複製するようにデザインされる。従って、ｐＨ１塩及び補因子濃度は生理的レベルと同様である。ヒストンＨ１（高リシン型）は容易に入手でき、またプロティンキナーゼＣの優れた基質として牛用するので、これをホスホリル化アクセプタータンパク質としてアッセイに用いる。酵素はラット脳から調製し、銀染色５ＤＳ−ポリアクリルアミドで単一バンドと同定される程度の同質性まで精製する。リン脂質、ＤＡＧ、及びＣａ”によるプロティンキナーゼＣの調節メカニズムについての研究は、脂質補因子の物理的性質によって阻まれてきた。スクリーニングアッセイにおいては、ホスファチジルセリン（ＰＳ）及びＤＡＣを同時音波処理して、基ラメラ及び多重ラメラ小胞分形成させる。阻害剤のアンセイの検出能を最大にするために、アンセイにおける脂質の濃度は最適以下にする。可能性のある阻害剤化合物と、最終阻害剤濃度がそれぞれ４．３．４３及び２１８μＭとなるように、３つの濃度でジメチルスルホキシド中でアッセイに加える。酵素の添加でアッセイを開始し、１０分後に２５％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）と１．０ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）とを加えることによってアッセイを停止する。放射性ヒストン産物を保持し、ガラス繊維フィルター上で洗浄して未反応”Ｐ−ＡＴＰを通過させる。ホスホリル化の量はシンナレーションカウンター中で測定した放射能活性によって決定する。

酵素の存在しないバックグランドの活性、脂質の存在しない活性、及び活性剤脂質の飽和レベルでの最大酵素活性を測定するために、各アッセイには対照を含める。アッセイ成分及び濃度を表３に示す。

ユニ欠工戒芳　髭Ｈｅｐｅｓ　ｐＨ７，５２０ｍＭＭｇＣＩ＝　２０ｍＭＣａＣＩ　２　１００ＨＭＥＧＴＡ　９５ＨＭヒストン　Ｈ１２００Ｈｇ％ｍ　Ｉホスファチジルセリン　４０１ｇ／’ｍｌシフ　シルク’）セｏ−ル１　、８１１ｇｚ’ｍ　ｌプロティンキナーゼＣ０、６Ｈｇ／’ｍ　＋ｒ−”Ｐ−ＡＴＰ　２０μＭプロティンキナーゼＣアンセイの結果は、表５のＰＫＣと記載された欄に示しである。結果はＩＣ５ｏて示し、これは対照におけるプロティンキナーゼＣ活性のレベルと比較して、プロティンキナーゼＣ活性を５０％阻害するのに必要な試験化合物の濃度を表す。本発明の化き物はプロティンキナーゼＣ活性を有効に阻害することができた。表５に示すように、化き物上ユは１９９ＨＭのＩＣ５ｏを有しており、化自物上支は４３μＭのＩＣ５゜を有していた。化合物上ユは４３ＨＭのＩＣ１゜を有しており、一方化合物上には２９μＭのＩＣ５゜を有していた。

去５１ｋ　２９　ｎ、ｅ。

実施例６：ｃＡＭＰ依存性プロティンキナーゼＣ（ＰＫＡ）アッセイプロティンキナーゼＣの阻害剤であることが見いだされた化合物を用いて、ＣＡＭＰ依存性プロティンキナーゼ（ＰＫＡ）に対する阻害活性も試験した。この酵素はプロティンキナーゼＣと同様に、細胞−細胞間のコミニュケーションに重要な役割を果たし、第２のメツセンジャーであるｃＡＭＰによって活性化される。

本発明の化き物の選択性を確認するためには、Ｐ　Ｋ　Ａに対する第２のスクリーニングは有用である。凛準的アッセイ条件は表６に示しである。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ＞中の阻害剤を加える前に、ＰＫＡ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｏｕｒｉ＞の触媒サブユニットをバッファーと混合する。”Ｐ−ＡＴＰを加えることによってア・ンセイを開始し、２５％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）と１．０ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）によって停止するまで、１０分間反応させる。ホスホリル化タンノＱ質をア過によって単離して、ベータシンチレーションカウンター中で放射能活性を測定する。

表旦１二り面ｊ勺　濃度Ｈｅｐｅｓ　ｐＨ７，５２０ｍＭヒストン　Ｈｌ　２００Ｈｇ／ｍｌジチオスレイトール　３２　ｕ　ｇ　／　ｍ　１−ｒロチインキナーゼ　２．６Ｈｇ／ｍ１ｒ−コ”Ｐ−ＡＴＰ　２０ＨＭＰＫＡアッセイの結果は、表５（実施例５）のＰＫＡと記載した欄に示す。表５に示すように、試験した本発明の化合物はＰＫＡに対して何ら影響を及ぼさなかった０本発明の試験化合物は、プロティンキナーゼＣに選択的であり、ｃＡＭＰ依存性プロティンキナーゼには何ら影響を及ぼさない、従って、本発明の化合物はｃＡＭＰによるプロティンキナーゼの刺激と関連する代謝経路には何ら影響を及ぼさない。

実施例７：ヒト腫瘍細胞成長の阻害ヒト胸腫瘍細胞系ＭＣＦ−７、及びＭＣＦ−７８胞のアドリアマイシン耐性系であるＭＣＦ−７／ＡＤＲをナショナルキャンサーインスティチュート、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、Ｍａｒｙｌａｎｄから得た。ＣＥＭａ胞（ＡＴＣＣ＄託番号ＣＣＬ　１１９）は、アメリカン・タイプ　カルチャー・コレクション、Ｒｏｃｋｖｉ　１１ｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄから得た。

ヒト腫瘍細胞をトリプシン処理（０，０５％トリプシン、ＧＩＢＣＯ）して、血球計数器でカウントし、９６ウエルのマイクロタイタープレートに１０，０００細胞、／ウェルの濃度で接種した。−皮細胞を表面に固着させた後、培地を吸引して、新鮮な培地１００ｔ＋１で置き換える。２ｘ最終濃度での用量応答を決定するために、試験物質を希釈し、４重試験において１００１Ｉｌ　、′ウェルで加えて、各ウェル当たり２００μｌの全容量となるようにする。次いでマイクロタイタープレートを３７°Ｃ１５％Ｃ○２で一夜＜１１３−２４時間）インキュベーションし、次に５０μｌの培地中、０．５μＣｉ／ウエルの濃度で３Ｈ−チミジンを加える。

上と同じ条件下でプレートを再び４時間インキュベーションする。次いで上清を吸引して、各ウェルに５０μｍトリズシン（０，０５％、ＧＩＢＣＯ社）を加える。細胞が表面から離れているか確認するために、謬微鏡でチェックし、セルハーベスタ−（ＰＨＤ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ、）でプレートを回収する。ウェルに対応するフィルターベーパーをシンチレーションバイアルに入れて、細胞によって取り込まれた″Ｈ−チミジンの量を測定する。

ＩＣｓ、を決定するために、培地のみの細胞ウェルからなるポジティブコントロールと試験物質の応答と分比較する。ＩＣ１，とは、試験物質にさらされていない増殖細胞への″Ｈ−チミジンの取り込みの５０％と阻害するのに必要な試験ｆヒき物の濃度である。′Ｈ−チミジンの取り込み実験は、細胞代謝を測定する標準試験である。活発に増殖する細胞は″Ｈ−チミジンを取り込むが、一方増殖していない細胞ははるかに遅い速度で″Ｈ−チミジンを取り込むか、或いは全く取り込まない、従って、′Ｈ−チミジンの取り込みを阻害する試験物質は、細胞の成長を遅らせる。

表７に示すように、本発明の化合物はコＨ−チミジンの取り込みを阻害することができ、従って試験した細胞系の増殖を阻害することができた。細胞系ＣＥＭ及びＭＣＦ−７で試験したところ、化き物上旦はそれぞれ５６μＭ及び２，４ＨＭのＩＣ９゜を有していた。しかしながら、ＭＣＦ−７／ＡＤＲで試験したところ、ＩＣ５，は２５μＭよりも大きかった。化き物上互での結果も同様であった。

ＣＥＭ及びＭＣＦ−７細胞で試験したところ、いずれもＩＣｓ’ｕは２．７μＭであったが、細胞系ＭＣＦ−７／ＡＤＲで化合物１互を試験したところ、ＩＣ，。は１７゜０μＭであった。化き物上ま及び１にはＭＣＦ−７細胞で試験したところ、それぞれ１６２０及び８４０のＩＣ，、を有していた。これらの２つの化合物はＣＥＭ又はＭ　ＣＦ　、、、’ＡＤ　ＰＭＡ胞では試験しなかった。

轟ヱＩＣｓ。（１Ｍ）止金惣　ＣＥＭ　ＭＣＦ−７鼠９旦二ヱＺΔ旦旦実施例１０：ヒト角化細胞阻害第２継代にある増殖中の角化細胞（Ｃ１ｏｎｅｔｉｃｓ　Ｉｎｃ、、ＳａｎＤｉｅｇｏ、Ｃａｔ　１ｆｏｒｎｉａから購入したＮＨＥＫ細胞）を角化細胞成長培地（ＫＧＭ：Ｃ１ｏｎｅｔｉｃｓ　Ｉｎｃ、）中で生育する。細胞を０．０２５２５トリプシン（Ｃ１ｏｎｅｔｉｃｓ）でトリプシン処理し、血球計数器（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ＞でカウントして、９６ウエルのマイクロタイタープレート中に２，５００細胞、・′ウェルの濃度でまく。−夜かけて細胞３表面に固着させた陵、培地を吸引して、新しいＫＧＭ１００ｕ＋で置き換える。

試験物質を評価し、実施例７に記載した１Ｈ−チミジンの取り込み法によってＩＣ１ｏと測定した。ＩＣ５，とは、試験物質にさらされていない増殖細胞への３Ｈ−チミジンの取り込みの５０？６を阻害するのに必要な試験化合物の濃度である。

化合物１互は−１，ｏｕＭの工Ｃ５゜を有しており、従って細胞の増殖を遅らせるのに有効であった。化合物上ユ及び１には、ＮＨＥＫ：ａ胞の成長に対してそれぞれ６２及び４．９ｏＭのＩＣ３ｏを有していた。この結果は、本発明の化か物がヒト角化細胞に対して活性であり、角化細胞の高増殖が症状である、乾癩やその池の病状のような局部的炎症症状の治療に有用であることを示唆している。

実施例９．好中球スーパオキシドアニオン（０２−）放出ア・ンセイヒト志願者から集めた全血から好中球を単離した０等張食塩水（ＴｒａｖｅｎｏＩ　Ｌａｂ、、Ｉｎｃ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ１丁１１ｉｎｏｉｓ）及びリンパ球５＋離培地（Ｏｒｇａｎｏｎ　Ｔｅｋｎｉｋａ、Ｄｕｒｈａｍ、ＮｏｒｔｈＣａｒｏ　ｌ　ｉ　ｎａ）以外の全ての試薬はＳｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙから購入した。

好虫球０単厘全血を吸引して、凝集を防ぐためにヘパリンナトリウム（最終濃度１０ユニ／ト、′ｍ　Ｉ　）と混きした。等張食塩水中の等容量力デキストラン（３，０％）を加えて、混合し、赤血球細胞（ＲＢＣ）と結きさせるために３０分間放置した。上清？除去して、リンパ球分離培地を下層におき、遠心機（Ｂｅｃｋｍａｎ　ＧＰＲ，Ｎｏｒｃｒｏｓｓ、Ｇｅｏｒｇｉａ）中、４００ｘｇで４０分間遠心した。

ＲＢＣを分解するために、ベシノトを０．２％及び１．６％　ＮａＣ１中に交互に再懸濁した後、Ｈａｎｋ’ｓ　Ｂａ１ａｎｃｅｄ　５ａｌｔ　５ｏｌｕｔｉ。

ｎ　（ＨＢＳＳ）て洗浄した。洗浄ベレットを１０ｍ１　ＨＢＳＳに再懸濁して、血球計数器でカウントするまで水上に医存した。

ユニ欠工方広好中球細胞の濃度３ＨＢｓｓで２ｘｌＯ’細胞７’ｍ　Ｉに調整した後、０．８ｍｌの細胞を１２ｘ７５ｍｍのポリプロピレン試験官（Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に加える。用量応答性を測定するために試験物質を希釈し、２重試験において、０．１ｍｌ／試験官の容量で、１０ｘ最終濃度で加える。次いで１０％濃度のチトクロームＣ（１５ｍｇ７７ｍ　ｌ　＞を、カタラーゼ（３０００ユニツト、”ｍ　ｌ）単独か、或いは２５　ｎ　ｇ、、／ｍ　ｌのホルボール１２−ミリステーＩ・１３−アセテート（ＰＭＡ）を含むか、のいずれかとともに、０．１ｍｌ／試験官の容量で加えて、３７℃で３０分間インキュベーションした後、試験官と氷上に置くことによって反応を停止する。次いで試験官を９００ｘｇで１０分間遠心し、上清０．５ｍ１ｔ！−除去して、ミクロキュベンＩ・中の水０．５ｍｌに加える。チトクロームＣの５５０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ）をスペクトロホトメーター（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）で測定する。ＰＭＡ−刺激した試験官と、しない試験官の閏の吸光度の差（△○Ｄ）を得て、試験物質の用量応答性をポジティブコントロール（試験物質の代わりにＨＢＳＳを含む）と比較する。ＰＭＡはチトクロームＣと減少させる０２−生産を刺激する。チトクロームＣの減少はその吸光度と増加させ、チトクロームＣのＯＤにおける変化は、ＰＭＡ刺激によって生産された０２−の量に比例する。本発明の化合物による０２ −バーストの阻害は、吸光度の変化における減少によって観察される。阻害はＩＣ５゜ｌＩＭで表され、これはＰＭＡ−刺激された呼吸性噴出、即ち０２−生産の５０％を阻害する。

試験化か物は、ＰＭＡ−刺激された好中球による０２−生産を阻害することができた。化自物上亘は３．９μＭのＩＣ，。と有していた。

図１０　ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ，、ＮＲＩＲ２図２ｏＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＲ４Ｒ２要約１本発明は、プロティンキナーゼＣの阻害に有用であり、かつプロティンキナーゼＣの阻害と関連し、或いはこれによって影響を受ける症状、特にガン性腫瘍、炎症性疾患、再潅流損傷、及び再潅流損傷に関連する心臓の機能不全の治療に有用である、以下の化学式含有する新規置換アントラキノを提供する：Ｒ１及びＲ２は独立にＨ、アルキル、アリール、又はアリールアルキルであり；ｍ及びｎは独立に１．２、又は３であり：ＸはＨｌＯＨ，ＮＲ，Ｒ４、ＣＩ、Ｂｒ、工、Ｆ、アルキル、アリールアルコキシ、７Ｄ−？シ、ＣＯＯＲｓ、又はＣ０ＮＲ。

Ｒ１であり：そしてＲ１、Ｒ１、Ｒ１、Ｒ６、及びＲ７は独立にＨ１低級アルキル、又はアリールである］。

国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．以下の化学式を有する置換アントラキノン：▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ１及びＲ２は独立にＨ、アルキル、アリール、又はアリールアルキルであり；ｍ及びｎは独立に１、２、又は３であり；ＸはＨ、ＯＨ、ＮＲ３Ｒ４、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、アルキル、アリールアルコキシ、アロキシ、ＣＯＯＲ５、又はＣＯＮＲ６Ｒ７であり；そしてＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は独立にＨ、低級アルキル、又はアリールである］。
２．Ｒ１及びＲ２が独立にＨ、低級アルキル、又はアリールアルキルであり；ｍ及びｎが独立に１又は２であり；そしてＸがＨ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、又はアルコキシである、請求の範囲第１項に記載の置換アントラキノン。
３．Ｒ１及びＲ２が独立にＨ又はアリールアルキルであり；ｍ及びｎが１であり；そしてＸがＨ又はＯＨである、請求の範囲第２項に記載の置換アントラキノン。
４．請求の範囲第１項に記載の置換アントラキノンと、薬学的に受容し得る担体又は希釈剤とからなる、プロテインキナーゼＣを阻害するための医薬組成物。
５．請求の範囲第２項に記載の置換アントラキノンと、薬学的に受容し得る担体又は希釈剤とからなる、プロテインキナーゼＣを阻害するための医薬組成物。
６．請求の範囲第３項に記載の置換アントラキノンと、薬学的に受容し得る担体又は希釈剤とからなる、プロテインキナーゼＣを阻害するための医薬組成物。
７．プロテインキナーゼＣを阻害するための医薬の製造における、以下の化学式を有する化合物の使用： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ１及びＲ２は独立にＨ、アルキル、アリール、又はアリールアルキルであり；ｍ及びｎは独立に１、２、又は３であり；ＸはＨ、ＯＨ、ＮＲ３Ｒ４、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、アルキル、アリールアルコキシ、アロキシ、ＣＯＯＲ５、又はＣＯＮＲ６Ｒ７であり；そしてＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は独立にＨ、低級アルキル、又はアリールである］。
８．該化合物が請求の範囲第７項に記載の化学式［式中、Ｒ１及びＲ２が独立にＨ、低級アルキル、又はアリールアルキルであり；ｍ及びｎが独立に１又は２であり；そしてＸがＨ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、又はアルコキシである］を有する、請求の範囲第７項に記載の使用。
９．該化合物が請求の範囲第７項に記載の化学式［式中、Ｒ１びＲ２が独立にＨ又はアリールアルキルであり；ｍ及びｎが１であり；そしてＸがＨ又はＯＨである］を有する、請求の範囲第８項に記載の使用。
１０．該化合物が該医薬中に治療的に有効な量で存在する、請求の範囲第７項に記載の使用。
１１．プロテインキナーゼＣと、阻害的量の以下の化学式を有する置換アントラキノンとを接触させることからなる、プロテインキナーゼＣを阻害する方法：▲ 数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ１及びＲ２は独立にＨ、アルキル、アリール、又はアリールアルキルであり；ｍ及びｎは独立に１、２、又は３であり；ＸはＨ、ＯＨ、ＮＲ３Ｒ４、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、アルキル、アリールアルコキシ、アロキシ、ＣＯＯＲ５、又はＣＯＮＲ６Ｒ７であり；そしてＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は独立にＨ、低級アルキル、又はアリールである］。
１２．Ｒ１及びＲ２が独立にＨ、低級アルキル、又はアリールアルキルであり；ｍ及びｎが独立に１又は２であり；そしてＸがＨ、ＯＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ、又はアルコキシである、請求の範囲第１１項に記載の方法。
１３．Ｒ１及びＲ２が独立にＨ又はアリールアルキルであり；ｍ及びｎがＩであり；そしてＸがＨ又はＯＨである、請求の範囲第１２項に記載の方法。