JPH05506016A

JPH05506016A - 触媒的抗体の阻害剤

Info

Publication number: JPH05506016A
Application number: JP91506071A
Authority: JP
Inventors: ポール，サドハー; ポウェル，マイクル，ジェイ．; マッセイ，リチャード，ジェイ．
Original assignee: イゲン，インコーポレーテッド
Priority date: 1990-02-28
Filing date: 1991-02-26
Publication date: 1993-09-02
Also published as: DE69133166D1; IL97333A; IL97333A0; EP0517817A4; US5194585A; AU657678B2; ATE228847T1; WO1991012812A1; EP0517817B1; EP0517817A1; DE69133166T2; ZA911292B; AU7466091A; CA2037199A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】＋７．当該ガンマグロブリンに結合する当該分子は、ＶＩＰ−セファローズのアフィニティークロマトグラフィーによって当該ガンマグロブリンから分離される、請求項１４に説明される阻害剤。

１８、基質の化学反応への抗体の触媒作用を阻害するが、当該抗体を引き出すことにはそれ自身用いられなかった阻害剤を調製する方法、当該方法は、次のステップから成る：（ａ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する：または（ｂ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの、１つまたはそれ以上の類似体を合成する；または（Ｃ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体を合成する；そして（ｄ）当該抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するため、ステップ（ａ）−（Ｃ）で合成されたフラグメントまたは類似体をスクリーニングする。

１９、基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を製造する次のステップから成る方法。

（ａ、　）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する：（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する：（Ｃ）当該ガンマグロブリンフラクションから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する；そして（ｄ）当該自己抗体を阻害する能力がある分子を同定するために、当該分子をスクリーニングする。

２０、当該分子は、限外濾過あるいは透析によって当該ガンマグロブリンフラクションから分離される低分子量分子である、請求項１９に説明される方法２１、当該分子は、クロマトグラフィーまたは非特異的蛋白質支持体または当該自己抗体にとって特異的な蛋白質支持体をもつアフィニティークロマトグラフィーによって、当該ガンマグロブリンフラクションから分離される、請求項１９に説明される方法２２、基質に含まれる結合の切断または形成の速度を強化する自己抗体の作用を阻害する阻害剤を製造する次のステップから成る方法：（ａ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体または１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する：そして（ｂ）当該自己抗体を阻害する類似体またはフラグメントを同定するために、当該類似体またはフラグメントをスクリーニングする。

２３、基質の化学反応への第一抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を製造する、次のステップから成る方法：（ｂ）結合する能力があり、それによって当該第１抗体を阻害する第２抗体を同定するために当該多数をスクリーニングする、当該第２抗体は、当該第１抗体へ抗イデイオタイプである。

２４、指紋多数を次の方法によって発生させる、請求項２３に説明される方法：（ａ）当該第１抗体により動物を免疫化し、それによって当該動物に抗体−産生リンパ球を発生させる：（ｂ）当該抗体−産生リンパ球を当該動物から取り出す；そして（Ｃ）当該抗体−産生リンパ球を骨髄腫細胞に融合し、それによって多数のハイブリドーマ細胞を産生し、それぞれがモノクローナル抗体を産生ずる。

２５、基質の化学反応への抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造される：（ａ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する：または（ｂ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの１つまたはそれ以上の類似体を合成する：または（Ｃ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体を合成する：そして（ｄ）もしも当該阻害剤が当該触媒性抗体を引き出すことに用いられなかった場合には、当該抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するために、ステップ（ａ）−（Ｃ）で合成された当該フラグメントまたは類似体をスクリーニングする。

２６、基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害１　する阻害剤、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造される：（ａ）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する：（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；（Ｃ）当該ガンマグロブリンフラクションから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する：そして（ｄ）当該自己抗体を阻害する能力がある分子を同定するために当該分子をスクリーニングする。

２７、当該基質はペプチドであり、当該化学反応は、当該ペプチドの結合の切断である、請求項２６に説明される方法２８、当該自己抗体は、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体であり、当該ペプチドはＶＩＰであり、当該結合はＧｉｎ”Ｍｅｔ１７結合である、請求項２７に説明される方法２９、基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造された：（ａ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体または、１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する；そして（ｂ）当該自己抗体を阻害する類似体またはフラグメントを同定するために、当該類似体またはフラグメントをスクリーニングする。

３０、当該基質はペプチドであり、当該化学反応は、当該ペプチド内の結合の切断である、請求項２９に説明される阻害剤。

３１、当該自己抗体は抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体であり、当該ペプチドはＶＩＰであり、当該結合は、Ｇｉｎ”−Ｍｅｔ”結合である、請求項３ｏに説明される阻害剤。

３２、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体を阻害する当該フラグメントはＶＩＰ　（２２ −２８３である、請求項３１に説明される阻害剤３３、基質の化学反応への第１抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、当該阻害剤は、当該第１抗体へ抗イデイオタイプである第２抗体から成り、当該第２抗体は次のステップから成る工程によって製造された：（ａ）当該第１抗体へ多数の抗体を発生させる；そして（ｂ）結合する能力があり、それによって当該第１抗体を阻害する当該第２抗体を同定するために当該多数をスクリーニングする。

３４、当該多数を次の方法で発生させる、請求項２３に説明される阻害剤：（ａ）当該第１抗体で動物を免疫化し、それによって当該動物に抗体−産生リンパ球を発生させる；（ｂ）当該抗体−産生リンパ球を当該動物から取り出す：そして（Ｃ）当該抗体−産生リンパ球を骨髄腫細胞と融合し、それによって多数のハイブリドーマ細胞を産生し、それ１　ぞれがモノクローナル抗体を産生ずる。

３５、当該阻害作用が生ずるにふされしい條件下で、有効量の阻害剤を当該抗体と接触させることから成る、基質の化学反応への抗体の触媒作用を阻害する方法、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造された：（ａ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する：または（ｂ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの１つまたはそれ以上の類似体を合成する二または（Ｃ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体を合成する；そして（ｄ）もしも当該阻害剤が当該触媒性抗体を引き出すのに用いられなかった場合には、当該抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するために、ステップ（ａ）−（Ｃ）で合成されたフラグメントまたは類似体をスクリーニングする。

３６、当該阻害が起こるにふされしい條件下で、当該自己抗体を阻害剤の有効量と接触させることから成る、基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害する方法、当該阻害剤は、次のステップから成る工程によって製造された：（ａ）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する：（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する：（Ｃ）当該ガンマグロブリンフラクションから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する：そして（ｄ）当該自己抗体を阻害する能力がある分子を同定するために、当該分子をスクリーニングする。

３７、当該阻害が起こるにふされしい條件下で、当該自己抗体を有効量の阻害剤と接触させることから成る、基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害する方法、当該自己抗体は次のステップから成る工程によって製造された：（ａ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体または、１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する；そして＜ｂ＞当該自己抗体を阻害する類似体またはフラグメントを同定するために当該類似体またはフラグメントをスクリーニングする。

３８、当該阻害が起こるにふされしい條件下で、当該第一抗体を有効量の第２抗体と接触させることから成る、基質の化学反応への第１抗体の触媒作用を阻害する方法、当該第２抗体は当該第１抗体へ抗イデイオタイプであり、当該第２抗体は次のステップから成る工程によって製造された：（ａ）当該ＩＩＩ抗体へ多数の抗体を発生させる；そして（ｂ）結合する能力があり、それによって当該第一抗体を阻害する当該第２抗体を同定するために当該多数をスクリーニングする。

３９、当該動物内の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、触媒される当該反応の結果としての当該自己免疫病の病態生理学の原因をつくっている、動物における自己免疫病を処置する方法、当該方法は、当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を、当該動物または当該動物の体液へ投与するステップから成る。

４０、当該動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、当該触媒反応の結果である自己免疫病の病態生理学の原因をつくっている動物における自己免疫病を処置する方法、当該方法は次のステップから成る：（ａ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの合成：または（ｂ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの１つまたはそれ以上の類似体の合成：または（Ｃ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体の合成：または（ｄ）当該自己抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するために、ステップ（ａ）−（Ｃ）において合成された当該フラグメントまたは類似体のスクリーニング；そして（ｅ）当該自己免疫病で苦しむ動物または当該動物の体液への当該阻害剤の投与：４１、当該動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、当該触媒反応の結果である自己免疫病の病態生理学の原因になっている、動物における自己免疫病を処置する方法、当該方法は次のステップから成る：（ａ）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する：（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する：（Ｃ）当該ガンマグロブリンから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する；（ｄ）結合する能力があり、それによって、当該基質の当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する分子を同定するために、当該分子をスクリーニングする；（ｅ）ステップ（ｄ）で確認された化合物を、当該自己免疫病に苦しむ動物または当該動物の体液へ投与する。

４２、当該動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、当該触媒反応の結果である自己免疫病の病態生理学の原因をつくっている動物における自己免疫病を処置する方法、当該方法は、当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を、当該動物または当該動物の体液へ投与するステップから成り、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造された：（ａ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する：または（ｂ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの１つまたはそれ以上の類似体を合成する二または（Ｃ）当該基質の■つまたはそれ以上の類似体を合成する：そして（ｄ）当該自己抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するためにステップ（ａ）−（Ｃ）で合成されたフラグメントまたは類似体をスクリーニングする。

４３、当該動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、当該触媒反応の結果である自己免疫病の病態生理学の原因をつくっている動物における自己免疫病を処置する方法、当該方法は、当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を、当該自己免疫病に苦しむ動物または当該動物の体液へ投与するステップから成り、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造される：（ａ）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する：（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；（Ｃ）当該ガンマグロブリンフラクションから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する；そして（ｄ）結合する能力があり、それによって、当該基質の当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する分子を同定するために、当該分子をスクリーニングする。

４４、当該自己免疫病は、喘息、気管支炎、糖尿病および不能症から成る群から選ばれる請求項３８に記載する方法。

４５、当該基質は、ペプチド、蛋白質、ホルモン、神経伝達物質および神経体液性因子から成る群から選ばれる、請求項３８に記載の方法。

４６、当該自己免疫病は喘息であり、当該基質はＶＩＰでありそして当該ＶＩＰの類似体はペプチド同族体である、請求項４１に記載の方法。

４７、当該動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、当該触媒反応の結果である自己免疫病の病態生理学の原因をつくっている動物における自己免疫病を処置する薬剤組成、当該組成は（ａ）当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、そして（ｂ）薬剤１　的に適した担体から成る。

４８、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の阻害剤および適当な薬剤担体から成る喘息を処理する薬剤組成。

浄書（内容に変更なし）明　細　書触媒的抗体の阻害剤発明の分野本発明は、一般的には、触媒性抗体を阻害することができる物質、またさらに特徴的には、自然に発生する触媒性自動抗体を阻害することができる物質に関するものである。

本発明に関する技術的立場をより十分に説明するために、括弧内の数字によって、その利用についてかなり多くの文献を示しである。これらすべての引用文献は、明細書の終り、クレームの直前に記載し、これら文献の内容は、関係した部分に組み入れて表現されている。

発明の背景抗体の結合する配位子また酵素が結合する基質に含まれる力の性質は、類似している。すなわち、水素結合、静電的相互作用および疎水効果である。酵素−基質結合から得られるエネルギーは、基質内に電気的ひずみをおこし、遷移状態の形成を促進するように作用するだろう。

酵素は、基底状懸よりももっと強く、酵素の触媒作用で遷移状態に結合し、反応の自由活性エネルギーを低下させるという理論について強い証拠がある（１）。

これは、酵素的触媒作用の遷移状態理論として知られてきた。酵素的触媒作用を促進する他の因子は近接および配向効果である−酵素の活性部位内に反応物が正しい方向に配置されてあれば、生産的な反応物の相互作用以前の多くのランダムな衝突の必要性を減少させられるだろう。原理的に、抗体は同様の方法で化学反応を触媒することができた。

抗体による配位子の化学的変換の最初の報告は、１９８０年（２）であったと思われるが、しかし、この報告書に述べられているウサギの多クローン性抗血清によるステロイドエステル加水分解は、触媒的というよりはむしろ化学量論的であった。その後、抗体は、アシル転移（３）、ペリサイクリック（４）および還元反応（５）を含めて、触媒的にまたは化学反応を促進することか明らかにされてきた。これらの抗体は、酵素のように、基底状態よりも配位子の遷移状態によく結合する能力から、触媒的性質を持っていると一般に信じられている。

知られている触媒性抗体は、上記のように選択された抗原決定基による免疫化で発生したもの、および自然に発生（６）したものを含んでいる。これらの自然発生抗体は、標的抗原に対する特別な免疫感作で誘導される抗原によって誘出される抗体とは対照的に、動物自身の細胞組織（自己抗原）への動物の免疫システムによって生産される、いわゆる“自己抗体“であり、例えばペプチド結合の切断のような化学反応の速度を強めることが知られている。

酵素活性をもつ抗体は、配位子の特異的な効率の良い触媒的な化学変換を可能にする。多くの生物学的媒介物は、病原性生物、ホルモン、神経伝達物質また腫瘍特異性抗原を含むペプチドあるいは蛋白質である。その免疫系は自然発生の酵素の範囲外の触媒的な化学反応を含めて広範な特異的な技術分野に利用することが可能な筈である。触媒的な酵素の力と抗体特異性を組み合わせれば、疾病に含まれる鍵ウィルスコート蛋白質、腫瘍特異性蛋白質あるいは内因性蛋白質を特異的に加水分解する能力を備えた触媒性抗体のような強力な治療剤を生成する潜在力をもつことができる。医療および産業の分野へのこれらの触媒性抗体の利用性は、もしも、これらの抗体の活性を阻害する特異的選択的な方法もまた利用できるとすれば、大いにその価値が高まるだろう。

例えば、このような阻害性は、自己免疫病の処置に利用できる筈である。ある自己免疫病は、ホルモンや細胞表面抗原に対抗した自己抗体に関係していることはよく知られている。これらの疾病の例と関係する自己抗体は次の通りである：疾病　自己抗体糖尿病　イソスリン、イソスリン受容体重症筋無力症　アセチルコリン重症病　甲状腺刺戟ホルモン受容体滲透性紅斑性狼癒　小核ＲＮＡ、ＤＮＡ、細胞核蛋白質悪性貧血　キャッスル内因子、胃壁細胞抗体非特異的抗免疫処置法により自己免疫病を処理することは一般に知られている。これらの既知の処置法には、ステロイド、アルキル化剤、放射線、血漿搬出法および牌臓の外科的摘出が含まれる。これらの処置法はそれぞれ、患者の免疫系不全のような技術的によく知られた多くの不都合を引きおこす。触媒性自己抗体は、多分に非触媒性抗体よりも害を引き起こすと思われるので、現在、自己免疫病は、核酸、鍵調節ペプチドおよび蛋白質（例えば、イソスリン、グルカゴン、プロラクチン、血管作用性腸管ペプチド（ＶＩＰ）、Ｐ物質、凝血因子）また、これらの剤の細胞表面受容体に対抗する触媒性自己抗体によって引き起こされると信じられている。

例えば、喘息は、血管作用性腸管ペプチド（Ｖ　Ｉ　Ｐ）の不全によって生ずると信じられている。ＶＩＰは、腸管から、しかし現在は、中枢および末梢神経系へ広く分布する神経ペプチドであると認められているが、そこから分離された２８アミノ酸ペプチドである。ＶＩＰはそれ自体の作用として神経伝達物質である証拠がある。加えて、ＶＩＰは古典伝達物質によって神経伝達を調節することができ、また血圧、気管支状態、神経内分泌活性および外分泌物の調節に関わってきた。ＶＩＰは、ヒトに対する主要な神経気管支拡張剤であり、気道でのＶＩＰの減少による影響は収縮が支配的であるように見え、喘息における気道の機能亢進の基礎になっているようである。

ＶＩＰは、構造的には、ペプチド、他の重要な、ペプチドヒスチジンイソロイシン（ＰＨ１）、生長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）およびセクレチンのような物質に関係した科に属する。ペプチドそれ自体のように、ＶＩＰ、ＧＲＦ、ＰＨＩおよびセクレチンのための受容体が関係している証拠がある。ＶＩＰの受容体は、肺、脈管平滑筋、脳、皮膚、腸その他の組織中に見出される。ＶＩＰのアミノ酸配列は次の通りである：Ｈ３ＤＡＶＦＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＹＬＮＳ　ＩＬＮ−ＮＨ。

ＶＩＰ結合抗体は、ヒトの血行（７−９）中に存在することが発見されてきた。

ＤＥＡＥ−セルローズ、ゲル濾過カラムおよび固定化蛋白質−Ｇによるクロマトグラフィーと同様に、抗−ヒト免疫グロブリンＧによる免疫沈降は、血漿ＶＩＰ結合活性が、大部分、免疫グロプリ喘息患者の血液の１８％に、また習慣的な筋肉運動の経歴を持たない健康な被験者のわずか２％に対して、そのような経歴をもつ健康な被験者の３０％に存在している。

抗体は、ＶＩＰ　（すなわちＧＲＦ、ＰＨ１そしてセクレチン）に関係したペプチドとのそれらの乏しい反応によって判断すると、ＶＩＰに対して高い特異性がある。喘息患者（平均に結合＝０．１３Ｎｍ−’）および健康体（平均に結合＝７．７Ｎｍ−’）からの抗体のＶＩＰ結合親和力の明瞭な相違が観測されたー喘息患者から得た抗体は６０倍も大きな結合親和力を示している。喘息患者からの免疫グロブリンＧ　肺膜中の循環アデニル酸のｖｔＰ−感応性合成と伺４１−１肺受容体によるＶＩＰの結合Ｊｔ−減少する。かくシー近体は、受容体を結合し、あるいは受容体−結合エビ１−ブを、活性の立体配座に維持するエピトープ■ 二対［Ｉ　Ｓことができる。

これらの抗体は、ブタＥ　Ｉ２’Ｉ−ＶＩＰへの結合を測定する二とにＪうて検ｍさ？する。ヒトとブタのＶＩＰは、構造的に同じである（１ｏ　０そこで、喘息患者にみられるブタのＶＩＰ−反応性を体は、自己抗体である。血＠Ｖ　Ｉ　Ｐ−抗体に対する箇乏病の陽性は、ＶＩＰに汚染されたイソスリンによって一直されてきたことが観察され、抗体の生成はＶＩＰ汚２物（１１）に関係している二とが示唆された。

これらの自己抗体の生成（誘導する抗原性刺戟は、確信をもって＊ｇすることは１きない。刺戟の候補には、ＶＩＰへの配列ＨＰＬｔば、ヒトの免疫不全ウィルス（１２）に見出されるベブ千ドーＴ、エピトープ】に似たウィルス決定目子への壜露そしてヒトのＶＩＰ　（１３，１４）と寥＝構造豹に興なることつ１知られている鳥、魚そしてカメのＶＩＰの食餌摂取が１まれる。血漿ＶＩＰ免疫反応性（１５、！６）の増加セ、もたらす筋肉運動はまた、（゛！Ｐ自己自己生体生成−る強力な刺戟になることかできたつ実１ＩＩ１１；、ｊｌ息と＊！Ｉ運動は、ＶＩＰＧ：ｍ対抗する自己抗体の発生の増加にａｔかあるように見える。

ＶＩＰ−自己抗体生成へ＃（抗原刺戟の型には関係なく、これらの抗体は重要な生物学的変化を生ずるだろう。

喘息患者の自己抗体について観察されたＫａ値の範囲は、肺その他の組織（１７，１８）中に存在するＶＩＰ受容体について報告されたものと似ており、これらの抗体は、ＶＩＰ受容体結合を無効にする。喘息患者に発見されたＶＩＰ−自己抗体は、気道内のＶＩＰの効果を無効にすることが可能である。

これらのＶＩＰ−自己抗体は、アミノ酸残基１６および１７、すなわちグルタミン（Ｇｌｎ”）およびメチオニン（Ｍｅｔ１７）の間のＶＩＰの加水分解を触媒することが発見された。これらは、１９８９年４月２５日にファイルされたＵ、Ｓ、出願シリーズＮ１３４３．０８１に記載され、文献としてここに引用開示されている。

かくして、触媒性自己抗体の特異的阻害剤、たとえば、ＶＩＰを触媒的に切断する自己抗体の阻害剤、は、触媒性自己抗体自己免疫病、特に、喘息および類似の呼吸病の処置に、重要な医療上の進歩をもたらすだろう。さらに一般的には、触媒性抗体の阻害剤は、これらの抗体がどう使われるかどうかに関係なく、その触媒活性を合わせ調節する方法技術を、提供するだろう。

発明の目的発明の一般的な目的は、触媒性抗体の阻害剤を提供することにある。

発明の他の目的は、触媒性自己抗体の阻害剤を提供することにある。

発明の他の目的Ｌｔ、基質の６学反応に関する触媒性抗体または触ＩＩＩ性自己抗体の触−作用を阻害する方法を提供することにある。

さら１＝発明の目的は、動物の自己免疫病の処置方法をｌｌ供する二とにあり、ここで１−５動物における基質の化学反応を触媒する自己抗体か、コ己抗体の阻害剤を動物（二投与することにまり、触媒さまた反応の結果としての自己免役病の１１！生１字につい＝、その原因になっている。

発明の他の目的は、触媒性抗・ＶＩＰ自己抗体の阻害剤である血管作ＷａＳ管ベブチｌ’（ＶＩＰ）同族体を、響１や気管支炎に苦しむ動物に６与することにより、これらの病気に対する処置方法を蓬供することにある。

さらｆ二本発明の舅の目的は、自然に発生する触媒性自己抗体から分離することかできる自然発生阻害剤を提供することにある。

本発明のこれらのまた他のｇ豹　特徴および利点は、このＷｋｘ二続く記述から容易ｆ：明らう１にされるだろう、そして新しい特徴は、付録のクレー′４の中で特に指摘されるだろう。

発明の要約発明は、触媒性抗体の期害剤と、阻害剤を作り、利用する方法について広く向けられてする。従って、一つのｊｉ面として５本発ｑ４は、基質の化キ反応に対する抗体の触媒作用を阻害する阻害剤４：Ｉ＃向しており、その阻害剤は、ａ）基質のフラグメント、ｂ）基質のフラグメントの類似体Ｃ）もしも阻害剤が触媒性抗体を引き出すのに用いられなかった場合は、基質の類似体、から成っている。

他の面からみれば、本発明は、基質の化学反応に関する自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を指向している。

さらに別の側面からみれば、本発明は、基質の化学反応に関する最初の抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を指向しており、その阻害剤は、最初の抗体に抗イデイオ型である第２の抗体から成っている。

発明の別の面では、ＶＩＰ　（２２−２８３から成るＶＩＰにおけるＧｆｎ”− Ｍｅｔ”ペプチド結合の切断に関する抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の触媒作用を阻害する能力のある阻害剤を指向している。

本発明はまた、触媒性抗体の阻害剤を製造する方法に関係している。ここで一つの実施例として、本発明は、基質の化学反応に関する抗体の触媒作用を阻害するが、しかしそれ自身、抗体を引き出す抗原の能力をもたない阻害剤を製造する方法を指向している。本性は、１個またはそれ以上の基質のフラグメントを合成する；あるいは、基質の１個またはそれ以上のフラグメントの１個またはそれ以上の類似体を合成する；あるいは、基質の１個またはそれ以上の類似体を合成する工程、そして工程（ａ）−（Ｃ）で合成されたフラグメントまたは類似体をスクリーニングし、抗体を阻害するフラグメントまだは類似体を同定する工程から成る。

他の実施例において、本発明は、基質の化学反応に関し自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を製造する方法である。本性は、自己抗体を持つ動物から血清を集める：血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；ガンマグロブリンフラクションからガンマグロブリンと結合する分子を分離する：そして、分子をスクリーニングして自己抗体を阻害する能力のある分子を同定する工程から成る。

さらに別の実施例では、本発明は、基質に含まれる結合の切断または生成する自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を製造する方法である。本性は、基質の１個またはそれ以上の類似体、または１個またはそれ以上のフラグメントを合成する、そして類似体またはフラグメントをスクリーニングして自己抗体を阻害する類似体またはフラグメントを同定する工程から成る。

発明の他の実施例は、基質の化学反応に対する最初の抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を製造する方法を指向している。本性は、最初の抗体に続いて多数の抗体を発生させるそして発生した多数の抗体をスクリーニングし、結合することによって最初の抗体を阻害する、最初の抗体に抗イデイオ型である第２の抗体を同定する工程から成る。

本発明はまた、上記の方法により製造された阻害剤に関係している。従って、ある実施例においては、本発明は、基質の化学反応に対する抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を指向し、その阻害剤は、基質の１個またはそれ以上のフラグメントを合成する：あるいは基質の１個またはそれ以上の類似体または、１個またはそれ以上のフラグメントを合成する；あるいは当該基質の１個またはそれ以上の類似体を合成するステップ、またステップ（ａ）−（Ｃ）で合成されたフラグメントまたは類似体をスクリーニングして、もしも当該阻害剤が、当該触媒性抗体を引き出す抗原能力が無ければ、当該抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定する工程によって製造されてきた。

他の実施例において、本発明は、基質の化学反応に対し自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を指向しており、その阻害剤は、自己抗体を持つ動物から血清を集める：血清からガンマグロブリンフラクションを分離する二ガンマグロブリンに結合する分子をガンマグロブリンフラクションから分離する：そして分子をスクリーニングして、自己抗体を阻害する能力をもった分子を同定するステップから成る工程によって製造されてきた。

他の局面で、本発明は、ＶＩＰのＧＩＺ　ｎ”−Ｍｅ　ｔ　１７ペプチド結合を切断する抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を指向しており、その阻害剤は、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体をもつ動物から血清を集める；血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；ガンマグロブリンフラクションからガンマグロブリンに結合する分子を分離する；そして分子をスクリーニングして、結合能力があることによって、ＶＩＰ内のＧＩＺｎ”−Ｍ　ｅ　ｔ　”ペプチド結合の切断率についての抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の触媒作用を阻害する分子を固定、するステップから成る工程によって製造されてきた。

本発明の他の実施例では、基質の化学反応を触媒する自己抗体の作用を阻害する阻害剤を指向しており、その阻害剤は、基質の１個またはそれ以上の類似体あるいは１個またはそれ以上のフラグメントを合成する、そして類似体またはフラグメントをスクリーニングして、自己抗体を阻害する類似体またはフラグメントを同定するステップから成る工程によって製造されてきた。

本発明はまた、基質の化学反応を触媒する最初の抗体の作用を阻害する阻害剤を指向しており、その阻害剤は、最初の抗体に抗イデイオ型である第２の抗体から成り、この第２抗体は、最初の抗体へ複数の抗体を発生させる、そしてこれら複数の抗体をスクリーニングして、結合能力があることによって最初の抗体を阻害する第２の抗体を同定するステップから成る工程によって製造されてきた。

本発明はまた、抗体および／または自己抗体の、基質の化学反応に対する触媒作用を阻害する阻害剤を使用する方法に関係している。そこで、本発明は、基質の化学反応を触媒する抗体の作用を阻害する方法を指向しており、その方法は、阻害が生ずるような適当な條件下で、有効量の阻害剤と抗体を接触させることから成り、その阻害剤は、次のステップから成る工程によって製造されてきた：（ａ）基質の１個またはそれ以上のフラグメントを合成する；または（ｂ）基質の１個またはそれ以上の類似体または１個またはそれ以上のフラグメントを合成する；または（Ｃ）当該基質の１個またはそれ以上の類似体を合成する：そして（ｄ）阻害剤が触媒性抗体を引き出す抗原能力をもたない場合、抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するため、ステップ（ａ）−（Ｃ）で合成されたフラグメントまたは類似体をスクリーニングする。

別の実施例では、本発明は、基質の化学反応を触媒する自己抗体の作用を阻害する方法を指向しており、その方法は、阻害が生ずるような適当な條件下で、有効量の阻害剤を自己抗体に接触させることから成り、その阻害剤は、次のステップから成る工程で製造されてきた＝（ａ）自己抗体をもつ動物から血清を集める；（ｂ）血清からガンマグロブリンアラクシ３ンを分離する；（Ｃ）ガンマグロブリンに結合する分子を、ガンマグロブリンフラクションから分離する；そして（ｄ）自己抗体を阻害する能力のある分子を固定するため分子をスクリーニングする。

本発明の他の実施例では、基質の化学反応を触媒する自己抗体の作用を阻害する方法を指向しており、その方法は、阻害が生ずるような適当な條件下で、阻害剤の有効量と自己抗体を接触させることから成り、その自己抗体は次の手段から成る工程で製造された。

（ａ）基質の１個またはそれ以上の類似体あるいは１個またはそれ以上のフラグメントを合成する；そして（ｂ）自己抗体を阻害する類似体またはフラグメントを同定するために類似体またはフラグメントをスクリーニングする。

さらに別の実施例で、本発明は、基質の化学反応を触媒する最初の抗体を阻害する方法を指向しており、その方法は、阻害が生ずる適当な條件下で、第２の抗体の有効量を最初の抗体と接触させることから成り、その第２の抗体は、次のステップから成る工程によって製造された：（ａ）最初の抗体に複数の抗体を発生させる；そして（ｂ）結合能力があり、それによって最初の抗体を阻害する第２の抗体を同定するために当該複数をスクリーニングする。

本発明はまた、自己免疫病を処置するため自己抗体の阻害剤を用いる方法に関係する。そこで、ある実施例において、本発明は、動物の自己免疫病を処置する方法へ指向しており、そこでは、動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体が、触媒された反応の結果としての自己免疫病の病態生理学について、その原因になっている。その方法は、化学反応を触媒する自己抗体を阻害する阻害剤を動物または動物の体液に投与するステップから成る。

他の実施例で、本発明は、動物の自己免疫病を処置する方法へ指向しており、そこでは、動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体か、触媒による反応の結果である自己免疫病の病態生理学に対して、その原因を作っている。その方法は、基質の１個またはそれ以上のフラグメントを合成する７あるいは、基質の１個またはそれ以上のフラグメントの１個またはそれ以上の類縁物質を合成する：あるいは、当該基質の１個またはそれ以上の類似体を合成する：あるいは、当該自己抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するため、ステップ（ａ）−（Ｃ）で合成された当該フラグメントまたは類似体をスクリーニングする；そして、当該自己免疫病に苦しむ動物または動物の体液に当該阻害剤を投与するステップから成る。

発明の他の実施例では、動物の自己免疫病を処置する方法へ指向しており、そこで、動物の基質の化学反応に触媒作用を及ぼす自己抗体が、触媒作用による反応の結果である自己免疫病の病態生理学に関して貢献し、あるいは責任がある。その方法は、当該自己抗体をもつ動物から血清を集める：当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する二ガンマグロブリンに結合する分子をガンマグロブリンフラクションから分離する：結合能力があり、それによって、基質の化学反応に触媒作用のある自己抗体を阻害する分子を同定するために分子をスクリーニングする：そして（ｄ）の手段で同定した分子を、当該自己免疫病に苦しむ動物あるいは当該動物の体５　液へ投与するステップから成る。

さらに他の実施例で、本発明は、動物の自己免疫病に処置する方法へ指向しており、ここで動物の基質の化学反応に触媒作用のある自己抗体が、触媒作用による反応の結果である自己免疫病の病態生理学に関して、その原因になっている。その方法は、化学反応に触媒作用のある自己抗体を阻害する阻害剤を動物または動物の体液へ投与することから成り、その阻害剤は、基質の１個またはそれ以上のフラグメントを合成する；あるいは基質の１個またはそれ以上のフラグメントの１個またはそれ以上の類似体を合成する；あるいは基質の１個またはそれ以上の類似体を合成する：そして、当該自己抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するためにステップ（ａ）−（Ｃ）により合成された当該フラグメントまたは類似体をスクリーニングするステップから成る工程によって製造された。

発明の他の実施例は、動物の自己免疫病を処置する方法へ指向しており、ここでは、動物の基質の化学反応に触媒作用のある自己抗体が、触媒作用による反応の結果である自己免疫病の病態生理学について、その原因になっている。その方法は、化学反応に触媒作用のある自己抗体を阻害する阻害剤を自己免疫病で苦しむ動物または動物の体液へ投与するステップから成り、その阻害剤は、当該自己抗体を持つ動物から血清を集める：当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；ガンマグロブリンに結合する分子をガンマグロブリンフラクションから分離する：そして、結合する能力によって、基質の化学反応に触媒作用のある当該自己抗体を阻害する分子を同定するために分子をスクリーニングするステップから成る工程によって製造された。

発明の他の局面は、動物の自己免疫病の処置における薬剤組成へ指向しており、ここで、動物の基質の化学反応に触媒作用のある自己抗体は、触媒反応の結果として自己免疫病の病態生理学について、その原因になっている。組成は、化学反応に触媒作用のある自己抗体を阻害し、薬剤学的には適当な担体である阻害剤から成る。

さらに別の面で、本発明は、喘息を処置する薬剤組成へ指向しており、それは、ＶＩＰのＧｉｎ”−ＭｅｔＩ７ペプチド結合の切断に触媒作用のある抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体を阻害する阻害剤から成り、当該阻害剤は、抗−ｖｒｐ触媒性自己抗体をもつ動物から血清を集める：血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；ガンマグロブリンに結合する分子をガンマグロブリンフラクションから分離する：そして、結合能力を備えることによって、ＶＩＰ内のＧｌ　ｎ　” −Ｍｅ　ｔ　”ペプチド結合の切断の割合に触媒効果のある自己抗体を阻害し、また薬剤学的に適当な担体である分子を同定するためにスクリーニングするステップから成る工程によって製造された。

発明の他の側面は、ＶＩＰ　（２２−２８）から成り、薬剤学的に適当な担体である、喘息処置のための薬剤組成へ指向している。

図面の簡単な記述本発明は、付随した図に関して、以下の詳細な記述を読めば、それからさらに明確に十分に理解されるだろう。

図１は、逆相ＨＰＬＣによるモノ（１２Ｊ、　Ｔｙｒｌｏ）−ｖｒｐ及びジ（ｌｆｆ１５［、’ｌ’ｙｒｌ、Ｔｙｒ”）−ＶＩＰの分離を示す。

図２は、４２．５μｇの抗−ＶＩＰ抗体フラクション（ム）テ処理した％／　（ ”’Ｌ　Ｔｙｒ”）−ＶＩＰ（７）沈澱の減少を、同じ濃度の非免疫抗体フラクション（・）と比較して示しである；図３は、ＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）によるモノ（”’Ｌ　Ｔｙｒ”）−Ｖ　■ ｐ加水分解を示す：ＶＩＰの濃度増加による飽和；図４は、ＩｇＧにより結合するＶＩＰのスキャッチャードプロット（Ａ）およびヒルプロット（Ｂ）を示す：図５は、無処理のＩｇＧまたは煮沸したＩｇＧで１０分間処理したモノ（”Ｉ、　Ｔｙ　ｒ　”）　−Ｖ　Ｉ　Ｐの逆相ＨＰＬＣを示す；図６．７および８は、抗−ＶＩＰ抗体フラクションによる処理で生成したＶＩＰフラグメントの逆相ＨＰＬＣ精製を示す：図７および８は、エドマン分解法により決定したＶＩＰフラグメントのアミノ酸配列を示す；図９は、図８で精製されたＶＩＰフラグメント（２）の、部分圧イオン高速原子衝撃−マススベクトル（ｍ／ｚ１２００−１５００）を示す：図１Ｏは、（ｉ）限外濾過を受けない（・）および（ｉｉ）限外濾過を受けた（０）場合の：分解ＶＩＰ対ＩｇＧ濃度％のプロットである。

ＩＩＩは、１０個の合成ＶＩＰ同族体（フラグメント）を示す。ここで＜−−− ＞は、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体により切断された結合（開裂の容易な結合）を意味する：図１２は、自己抗体フラクション（１００μｇの精製ＩｇＧ）による、飽和可能な（Ｔｙｒ”−”Ｉ）−ＶＩＰ結合を示す：ｖｒｐによる競合的阻害（０）　、Ｖ　ＩＰ（１５−２８）（■）、ＶＩＰ（２２−２８）（・）、およびＶＩＰ　（１８−２４）（Ａ）：図１３　ハ、自己抗体（５０Ｊｇ　ＩｇＧ）ｉ、：よルＶＩＰ（１−２８）の触媒性加水分解を示す：１００μＭＶＩＰ　（２２−２８）ｉ：よる阻害、増加するＶＩＰ濃度と混合した（Ｔｙｒ”−目り　−Ｖ　Ｉ　Ｐ　（３２９Ｍ）か、ＶＩＰ　（２２−２８）の存在しない場合（・）および存在する場合（ム）でＩｇＧにより処理された：図１４は、ＩｇＧによるＶＩＰ結合のスキャツチャードブロットである。

図１５は、ＶＩＰ−セファローズカラムによるヒトＩｇＧのアフィニティークロマトグラフを示し、矢印は低ｐＨ緩衝液への転位を示し、挿入図は、抗体濃度を溶出Ｌ　タ酸ＩＩ　ＩＪｊ　（７）　！Ｉｔ　数としてｃ７）（Ｔｙｒ’°−” ５１）ＶＩＰの加水分解を示す：図１６は、抗−軽鎖抗体（ル−ン）、抗−重鎖抗体（２レーン）、および銀（３レーン）で染色された親和−分割ＶＩＰ自己抗体の、減少する５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動を示す；図１７は、非分割ＩｇＧで処理した（　’ｌ’ｙｒ１０　１１１）ＶＩＰ（上段パネル）、親和−分割ＶＩＰ抗体（中段パネル）および検定稀釈剤（下段パネル）の逆相ＨＰＬＣを示し、矢印は、合成（”り（ＶＩＰ　（１−１６〕）および非加水分解（Ｔｙｒ”−”’Ｉ）Ｖ　ＩＰを示す：そして図１８は、親和−分割ＶＩＰ抗体（上段パネル）および非分割１ｇＧ（下段パネル）によるＶＩＰの加水分解のラインライ−バーパークのプロットを示す。

発明の詳細な説明本発明は、化学反応への触媒性抗体の触媒作用を阻害する能力を示す阻害剤へ広く指向している。ここで云う“触媒性抗体”は、化学反応の速度を変える能力を備えた物質であり、その他のすべての條件（例えば、温度、反応物／基質の濃度、等）は同じであり、化学反応の内部には入らず、そのため反応には消費されない。それはまた、反応物／基質の複数モル対触媒性抗体のモルを変換する能力を示し；そして機械論的立場から云えば反応物／基質を結合し、反応物／基質の生成物への加速的な変換をもたらし、次に生成物を放出する；そして平衝の位置を移動することなく化学反応の速度を変化させる。

前記の定義は、理想的な触媒の特性であるけれども、実際には、最上の触媒でさへ、反応系内の汚染により、あるいは反応工程中の化学的、あるいは物理的破壊の結果として、破壊されあるいは活性を失うようになる。技術上よく知られた理由で、触媒の真の操作は、反応系の組成あるいは反応環境により不明瞭になるかも知れない。

触媒活性を表わすために、技術的にはある作業上の定義を採用してきた。これらの表示は、（１）Ｋ触媒、または“代謝回転”および〔２〕Ｋ触媒／に無触媒“ 速度増強因子“である。代謝回転は、単位時間当り触媒性抗体のモル当り生成物に変換しうる反応物／基質のモル数を示す。例えば、もし分子が１分間当り基質の１０”の代謝回転を示し、分子が室温でまたその最適ｐＨで、２４時間その触媒活性を維持するならば、各触媒の分子は、そこで、触媒の作動を示す、合計１．４Ｘ１０’の変換を行うことになるだろう。この全変換は、化学量論的反応における全変換とは区別され、どれ程反応が長（行われたとしても決して１．０を超えることはない。速度増強因子は、すべての他の反応條件が同じであるとして、触媒の存在下の反応速度の、触媒が存在しない場合の反応速度に対する比を表わす無次元数である。

発明に従って、抗体は、精製したイムノグロブリン（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）または、例えばＦａｂ、Ｆ　（ａｂ　”）！　、ＦＶなとのようなイムノグロブリンの抗体フラグメントから構成することができる。触媒性抗体には２種類の主要な範噴がある。

１＊Ｉの範嗜には合理的にデザインされた触媒性抗体、すなわち、標的抗原または基質に対する特異的な免疫感作から誘導された抗原により引き出された抗体か含まれる。

このような触媒性抗体、それらの製造方法または使用については、１９８９年１２月１９日発行のＵ、Ｓ、特許４．８８８，２８１Ｓ　１９８８年１２月２０日発行のＵ。

Ｓ、特許４，７９２，４４６、および１９８７年６月１９日受付けのＵ、Ｓ、出願連続番号０８４．２３９に記載され、それらの内容はすべて、文献としてここに取り入れられている。触媒性抗体のもう一方の範嗜には、前記の範嗜の触媒性抗体とは対照的に、動物自身の免疫系により、動物自身の細胞構成要素（自己抗原）として生成される自然発生の抗体が含まれる。これらの“自己抗体”は、１９８９年４月２５日受付けのＵ、Ｓ、出願、連続番号３４３，０８１、に記載され、文献としてここに引用されている。

発明にもとづく阻害剤は、基質の化学反応への触媒性抗体の触媒作用を妨害する。阻害剤は触媒性抗体と結合し、それによって、触媒性抗体の基質との結合と基質への触媒反応を妨害する。

がすくなくとも１つの生成物に変換する反応に適用される。このような化学反応には、例えば、酸化、還元、付加、濃縮、除去、置換、開裂および転位のように触媒性酵素のないことが知られている化学反応と同様に、例えば、酸化還元酵素、転移酵素、加水分解酵素、脱離酵素、異性化酵素および連結酵素のような酵素により触媒で発生する化学反応が含まれる。発明の一つの実施例では、化学反応はペプチド結合の切断である。ここで用いられるペプチド結合は、２つの隣接したアミノ酸残基を連結するアミド結合に適用され、一般に、ペプチド結合が箱の中に示される次の式で表わされる二アミノ酸は、アミノ基、カルボキシル基、水素原子および″側ｉ′　（上式のＲ＋およびＲ２）として関係する特有基を結合する炭素原子から成る。ここで用いられるアミノ酸には、蛋白質の構成分子から成る２０の自然発生のアミノ酸が含まれる。隣接アミノ酸のどれかがプロリンであれば、それぞれの側鎖のＲ１またはＲ２が隣接した窒素原子に結合して、特許の５員プロリン環を形成することは、熟練技術者には理解される。

専門用語“基質”は、化学反応における反応物質と同ゝ意語であり、ペプチド、蛋白質、燐脂質、炭水化物（例、１・えば、グリコゲン、グルコーズなど）および薬剤（乱用物質および外因性薬剤を含む）を含むが、それらに限定されない多くの分子および生体分子でありうる。一つの実施例で、基質は、ペプチド結合あるいは切断される結合を含み、例えば、ペプチドホルモン（例えば、インスリン、成長ホルモン、セクレチンなど）、ペプチド神経伝達物質、神経調節物質および神経液因子（例えば、ＶＩＰ、エンドルフィン、エンケファリン、ブラジキニン、Ｐ物質など）、腫瘍蛋白質（例えば、腫瘍遺伝子産生物、癌胎児性抗原など）細菌性蛋白質およびウィルス性蛋白質（例えばヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）ｇｐｌ　２０、インフルエンザグリコプロティンなど）を含むがこれらに限定されない調節蛋白質あるいは構造蛋白質のような、如何なる蛋白質様分子であることもできる。他の実施例で、基質は、自己抗原、すなわち、体がそれ自身の遺伝暗号を用いて作る如何なる抗原であることもできる。かくして、自己抗原は、外部抗原（例えば、細菌、ウィルス抗原）から区別される。ここで用いられる“ 動物″という用語は、免疫系を持つすべての有機体に適用され、哺乳動物と非喘乳動物を含む。

発明のある実施例にもとづけば、抗原内での特異的な免疫感作により誘出された触媒性抗体の場合、もしも阻害剤が、触媒性抗体を引き出す能力がない抗原であった場合には、阻害剤は、基質のフラグメント、基質のフラグメントの類似体のあるいは、基質の類似体から構成することができる。“基質のフラグメント”という用語は、基質のある部分を表わす分子に適用される。例えば、もしも、基質がペプチドであれば、阻害剤は、ペプチドのフラグメント、例えば、ペプチド基質の１つまたはそれ以上の部分のアミノ酸残基に等しいアミノ酸残基をもつ１つまたはそれ以上のペプチド同族体であることができる。°類似体“という用語は、最も広い意味で用いられ、異性体、同族体あるいは、類似体に対応した抗体が、基質との免疫反応に加わるかも知れないが、類似体の反応に必ずしも触媒的に作用はしないような、化学構造の点からは基質に十分に類似しているどのような分子にも用いられる。例えば、基質の類似体は、構造的には基質に似ているが、基質内で、例えば触媒作用を受ける反応の遷移状態の類似体の要素あるいは置換された要素のように、周期律表の同じ原子価および基の１つまたはそれ以上の要素で、基質とは異なる分子であることができる。

発明にもとづく基質の類似体はまた、基質の光学的対立物であることができる。

例えば、もしも基質がＤ−アミノ酸であれば、発明にもとづく阻害剤は、Ｌ−光学的対立物であってもよい。基質が自己抗原である自己抗体の場合には、自己抗体の阻害剤は、自己抗原の類似体、化学反応を発生させたりさせなかったりする自己抗原の工ピトーブを含む小さなペプチド、エピトープを含む小さなペプチドの類似体あるいは、エピトープの類似体を含む小さなペプチドであることができる。上記の阻害剤は、各種の化学物質および技術的には既知の免疫生合成的方法論により合成することができる（１９）。

発明の他の実施例は、阻害されるべき抗体に抗イデイオタイプである抗体から成る阻害剤を示している。″抗イディオタイプ”である抗体は、第２抗体の可変領域において第２抗体に結合する抗体に適用される。このような阻害剤は、触媒性抗体へ複数の抗体を発生させ、これらをスクリーニングして、結合能力があり、それによって触媒性抗体を阻害する抗イデイオタイプの抗体を同定することによって製造することができる。複数の抗体の発生法と、結合および阻害のスクリーニング分析は、技術的によく知られている。望ましい実施例の中で、動物を、触媒性抗体で免疫化し、動物体内に抗体−産生リンパ球を発生させ、それらを動物から取り、骨髄腫細胞に融合して、多数のハイブリドーマ細胞を産生させ、順次モノクローナル抗体を生産する。モノクローナル抗体は、次に、技術的に良く知られた方法で、標的触媒性抗体の結合と阻害のためにスクリーニングにかけることができる（６）。

抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の加水分解的活性は、しっかりした結合と比較的小さな阻害剤であるために隠れてｉ　いる。この潜在性は、ＩｇＧを固定化蛋白質Ｇ（６）で精製後直液加水分解活性について試験した際、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体をもつ個体から分離した血清のＩｇＧフラクションにはＶＩＰ加水分解活性が無いかあるいはわずかしかないという発見に基いていた。しかしながら、ＩｇＧが次のどれかで処理された場合は、ＶＩＰ加水分解活性か認められた：　（ａ）広範囲な透析；　（ｂ）２サイクルの限外濾過：　（Ｃ）蛋白質Ｇ−セファローズに結合の際、中性１）ＨにおけるＩｇＧの長時間洗浄：または（ｄ）ＶＩＰ− セファローズカラムによるアフィニティークロマトグラフィー。

抗原（または阻害剤）の抗体への結合は、次のような平衡反応である：抗体＋抗原（阻害剤）Ｋ非結合抗体：抗原（阻害剤）（ａ）−（ｄ）の処理は、非結合の阻害剤を除去し、平衡を左に（Ｋ非結合）進め、一層阻害剤が除去されやすくなり、その結果、加水分解的に活性の抗体が残される。

こうして、さらに他の実施例では、発明は触媒性自己抗体の自然発生阻害剤へ向けられる。阻害剤は、標的の触媒性自己抗体をもつ動物から血清を集め、血清がらガンマグロブリンフラクションを分離し、ガンマグロブリンフラクションから、ガンマグロブリンに結合している分子を分離し、そのようにして分離した分子をスクリーニングして、標的自己抗体の触媒活性を阻害する能力をもつ分子を同定することによって製造される。これらの分子は、金属イオン、抗体、抗体フラグメントなどを含み、重量が１．０００から１５，０００ダルトンの範囲の典型的な低分子重量の分子である。

ある実施例で、分子は、限外濾過法または透析によってガンマグロブリンフラクションから分離される。ここで用いる“限外濾過”の用語は、小さな分子から蛋白質を分離する工程を云い、圧力または遠心力を用いて液体培養液および１（１００から１００００ダルトンの範囲の平均力ットオ）分子量の細孔をもつ半透膜を通して小さな溶解分子を濾過する。こうして、例えば、平均遮断分子量１０，０００ダルトンノ細孔の膜で、１５０，０００ダルトンの分子量のイムノグロブリンを限外濾過すれば、イムノグロブリンは膜に残るけれども、１０，０００ダルトン以下の小さな分子量をもった分子は膜を通過して限外濾液に入るだろう。

従って、強力な阻害剤は限外濾液中に見出されるだろう。そこで限外濾液を部分的に精製し、次にそのフラクションは、結合と阻害活性についてスクリーニングされる。阻害活性を示すフラクションは、純粋な阻害剤を生産するため、さらに分離処理が進められる。いったん分離されれば、純粋な阻害剤は、化学構造を同定するため、アミノ酸分析、ペプチド配列および／または他の盟の化学分析のため処理される。

ここで用いる用語“透析”は、小さな溶質分子と水を通し蛋白質分子を残す半透膜を利用して、溶液中の低分子重量の溶質から球状蛋白質を分離する方法のことである。１２，０００からｉｓ、ｏｏｏダルトンの分子量カットオフ範囲の透析膜は、使用に便利である。透析物中の強力な阻害剤は、次に、阻害活性のためにスクリーニングされ、限外濾過に関連して先に述べたのと同様の方法で精製される。

他の実施例で、ガンマグロブリンに結合する分子は、非特異性蛋白質固定物質へのＩｇＧ固定化後の洗浄により、あるいは、阻害剤をめる特殊な抗体に特異性のある蛋白質固定相によるアフィニティークロマトグラフィーによって分離される。非特異性蛋白質固定物質の例は、蛋白質Ｇ−セファローズである。蛋白質Ｇ− セファローズは、すべての抗体のＦｃ領域と結合するだろう。そこで、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の場合、蛋白質Ｇ−セファローズは、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体のＦｃ領域と同様に、試料中のすべての抗体のＦｃ１ｉ城と結合するだろう。

試料中のＩｇＧが、いったん固定されれば、推定上の阻害剤を移すために緩衝液で洗浄する。推定上の阻害剤は次に、阻害活性のためにスクリーニングされ、前記と同じような方法で精製される。カラムは次に遊離した活性１ｇＧを放出するために酸性溶液で洗浄する。

アフィニティークロマトグラフィーは、阻害剤が、抗体の可変領域（すなわち抗原結合領域）にのみ結合するであろう理由によってめられる特殊な抗体にのみ特異的な蛋白質固定相を使用する。アフィニティークロマトグラフィーは、抗体− 阻害剤結合平衡を、阻害剤の解離の方向に進める。これは抗体の結合部位について、阻害剤と特異性蛋白質問に競合があるためである。そこで、アフィニティークロマトグラフィーは、活性部位−指向の阻害剤の分離に備え、そしてそれ故に推定の阻害剤を分離するための洗浄は、前述の非特異性蛋白質固定物質のようには必要としない。推定の阻害剤は次に阻害剤活性のためスクリーニングされ、前述と同じ様な方法で精製される。カラムは次に、遊離の活性１ｇＧを放出するために酸性溶液で洗浄する。抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の場合は、ＶＩＰ−セファローズカラムが使用上便利である。

発明の阻害剤は、そこで、基質の化学反応速度への触媒性抗体の触媒作用を阻害するのに用いることができる。

触媒性抗体は、阻害を起こすにふされしい條件下で、阻害剤の有効量と接触させる。阻害に適当な條件は、阻害剤を標的触媒性抗体へ結合させるような條件である。典型的には、これらの條件は、生理学的條件、すなわち、ｉｎ　ｖｉｖｏ　（例えば血液中）で見出される條件である。

すでに述べたように、ある種の自己免疫病は、ホルモンおよび細胞表面抗原に対して向けられる自己抗体に関係している。自己免疫病において、基質の反応に触媒として作用した結果として、自己抗体は病気の病態生理学に寄与し、あるいは責任があり、自己免疫病の処理方法は、発明に従って、その自己抗体の阻害剤の使用にもとづいた所に存在する。そこで、発明の他の実施例は、動物内の基質の化学反応に触媒的に作用する自己抗体が、その触媒反応の結果として、自己免疫病の病態生理学に寄与または責任がある動物における自己免疫病の処置方法に向けられている。その方法は、自己免疫病に苦しむ動物またはこのような動物の体液に、発明に従って、化学反応に触媒的に作用する自己抗体を阻害する阻害剤をして、経口または注射（静脈注射または筋肉注射）で直接動物に投与される。他の好ましい実施例では、阻害剤は、生体外的に動物に投与される。すなわち、動物の体液、例えば血液、は、発明に従って、動物の体から、阻害剤が注入されるマトリックスを通過する。自己免疫病の病態生理学に関係する自己抗体は、阻害剤と自己抗体間の結合の結果として体液から除かれ、体液はそれから動物の体に戻される。発明に従って処置することかできる自己免疫病には、喘息、気管支炎、糖尿病および不能症が含まれる。

ある好ましい実施例の説明発明のある好ましい実施例は、ＶＩＰのグルタミンとメチオニンの間（“Ｇ　ｌ　ｎ　”−Ｍｅ　ｔ　”″）のペプチド結合を触媒的に切断する自己抗体（“抗 −ＶＩＰ触媒性自己抗体”）の阻害剤へ指向している。ある実施例で、阻害剤は、自らは触媒切断を受けることなく抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体に結合するＶＩＰのペプチド同族体の家族である。

か（して、ＶＩＰの線型副配列に相当する１０個の合成ペプチド同族体（ＶＩＰのフラグメント）（図１１）が、（ＴｙｒｌＯ−１ｔＪ）ＶＩＰ結合自己抗体とのそれらの反応性のためにスクリーニングされた。ヒト被験者の血漿から精製したＩｇＧは、抗体の源であった。結合スクリーンは、次のものを用いて行われた：　（１）加水分解の推定阻害剤を移すため透析をしなかったＩｇＧ；（２）４ °Ｃの温度二または（３）緩衝液（７，５ｍＭ燐酸ナトリウム、ｐＨ７，４，０，６４％塩化ナトリウム、０．５％ウシ血清アルブミン、２５ｍＭ　ＥＤＴＡ、０゜００５％バシトラシン、ｏ、ｏｏｓ％硫酸プロタミン、０．０７３％アジドナトリウムおよび０．０２５％トウィーンー２０）、すなわち、（ＴｙｒＩｌｌｏ”’Ｉ）ＶＩＰ加水分解を起さない実験條件。５００μＭのＮ−末端フラグメントＶＩＰ　（１−１６３は（Ｔ　ｙ　ｒ　”＝１ｊＩ　）　ＶＩＰの結合阻害に失敗した。

対照的に、Ｃ−末端フラグメントＶＩＰ　（１５−２８〕は、全長ペプチド、ＶＩＰ　（１−２８）（ＫｐＯ。

３ｎＭ）のそれに近い力（Ｋ、１．２５ｎＭ）で結合を阻害した（図１２）。それぞれ５００μＭの濃度で、初めに試験した７個の短いペプチドの中で、ＶＩＰ（２２−２８〕およびＶＩＰ　（１８−２４）だけが（Ｔｙ　ｒ　Ｉ　０−１２ＳＩ）−ＶＩ　Ｐ結合を阻害した。ＶＩＰ　Ｃ２２−２８〕のに１は２４２μＭであった。ＶＩＰ　（２２−２８〕は、ＶＩＰ　（１８−２４３より約８倍大きな力を示した。それ故、後者のペプチドの反応性は、分割配列ＶＩＰ　（２２− ２４）によると信じられる。ペプチドのための見かけ上の結合エネルギーは、Ｋｃａｌ／ｍｏｌｅで、ＶＩＰ　（１−２８３，１２，１、ＶＩＰ　（１５−２８）、１１．３；およびＶＩＰ　（２２−２８）、４．６であった。残基２２−２８の結合エネルギーは、全長ペプチドのそれのわずか３８％であるが、無視できない。

ＶＩＰ　（２２−２８）は他の同族体に比較して、自己抗体と最も強く結合しているので、自己抗体により触媒の効果を測定することによって、触媒性阻害活性についてスクリーンされた。ＶＩＰ　（２２−２８）の存在する場合としない場合について、ＶＩＰ濃度の増加に伴う加水分解を比較した。ＶＩＰ加水分解の速度の逆数対ＶＩＰ濃度の逆数のプロット（図１３）は、直線であり、ミカエリス・メンテン速度論と一致している。ＶＩＰ（２２、−２８３の無い場合のＶＩＰ切断に関するＫｍおよびに触媒値は、それぞれ、１１５±１４ｎＭおよび６．５ ±０．３分−１であツタ。ＩｏｌｚＭ　ＶＩＰ　（２２−２８〕の存在する場合は、見かけのＫｍは増加しく１５９±４ｎＭ）またはに触媒は変化がなく　（６，９±０．２１　分−１）、これはＶＩＰ加水分解の競合的阻害を示唆している。これらのデータから計算したＶＴＰ　（２２−２８）のに１は２６０μＭであった。ＩｇＧで処理されたＶＴＰ　（２２−２８）は、自らは切断されなかった。

ＶＩＰの結合と加水分解は、ＩｇＧ中に存在する同じ自己抗体によって仲介されることが推定された。その理由は：　（ｉ）ＶＩＰ結合のスキャッチャード分析は、ＩｇＧかＶＩＰ結合抗体の軍−クラスを含むことを示唆した（６）：　（ｉｉ）固体支持体に連結したＶＩＰへの結合によりＩｇＧから精製された特異性抗体は、同じペプチド結合（ＧＩ！ｎ”−Ｍｅ　ｔ＋７）において、出発ＩｇＧのように、（Ｔｙ　ｒ　”　−”’Ｉ）　Ｖ　Ｉ　Ｐを加水分解することか発見された：そして（伍）副配列ＶＩＰ　［２２−２８〕はＩｇＧにより全長ＶＩＰの結合を阻害するのみならず、その加水分解も阻害した。触媒性自己抗体とＶＩＰ　（２２−２８３の反応性は、配列特異的であるように見える。その理由は：　（１）（Ｔｙｒ”−１２’Ｉ）ＶＩＰ結合の阻害とＶＩＰ　（２２−２８）による加水分解は事実、競合していた：　（ｉｉ）無関係な蛋白質（ＢＳＡ）の過剰（＞３００倍、重量て）な存在にも拘らず、阻害が観察された：そして、（ｉｉ）４００μＭ　ＶＩＰ　（１−７〕、非結合フラグメント、はＶＩＰ加水分解を阻害しなかった。この仮定は、ＶＩＰ−セファローズによりＩｇＧをアフィニティークロマトグラフにかけることにより確認された。

ＶＴＰ　Ｃ２２−２８３は、切断されやすいペプチド結合ＣＧｉｎ目−Ｍｅｔ＋７）を含まないが、しかし、それは触媒性自己抗体と結合し、抗体−触媒性ＶＩＰ加水分解を阻害する。かくして、化学反応の位置から離れたアミノ酸残基は、基質の認識と抗体による結合において重要であると信じられる。抗体結合ポケットは、比較的大きく、抗原の１６アミノ酸位多く接触できるように見えた（２０）。ＶＩＰ　（２２−２８）は、触媒性自己抗体と有意なエネルギー（４，６Ｋｃａｌ／ｍｏｌ）で結合しているが、コノエネルギーは、ＶＩＰ　（１５−２８）のそれのわずか４１％である。これらのデータは、ＶＩＰ　（１５−２８）は触媒性抗体により認識されたエピトープであり、ＶＩＰ　Ｃ２２−２８）はすべての抗体結合相互作用ではなく、ある部分に寄与する°副エピトープ′であることを示唆している。この結論は、蛋白質抗原の小さなフラグメントは通常、粗蛋白質に対応した抗体への低い親和結合を示すという以前の発見と一致している（２１）。触媒性自己抗体への結合におけるＶＩＰの残基１５−２１の正確な貢献度は確かではない。残基１５−２１，１１−１７および１３−２０からなる直線状ＶＩＰフラグメントは、結合分析では触媒性自己抗体と有意な相互作用はなかったが、切断されやすい結合（Ｇ　ｌ　ｎ　”−Ｍｅ　ｔ　１７）における残基はある方法で抗体活性位置の触媒基（Ｓ）と接触しなければならない。ＶＩＰ（１５−２１）の１個またはそれ以上の残基は、自己抗体により認識される配座決定因子に不可欠であろう。

一方、これらの残基は、ＶＩＰ　（２２−２８）の結合エネルギーの増加に、比較的非特異的に寄与しているかも知れない。というのは、無関係なアミノ酸またはオクタノイル基による小さなペプチドのＮ−末端の延長は、それらの抗体結合親和性を増加することが知られているからである（２２）。

通常のペプチダーゼは、切断されやすい結合のすぐ近くまたはその中で、アミノ酸の壓により、最初に書き取った特性で広範囲の蛋白質を加水分解する（２３）。レニン（２４）のようなかなり特異的なペプチダーゼの場合は、切断部位のそれぞれの側に位置した３または４個のアミノ酸残基が酵素結合に影響することができる。これらの場合においても、切断されやすい結合の全（無い基質副配列の結合は見られなかったと信じられる。遠いペプチド配列の認識は、通常のペプチダーゼに比較して、この触媒性抗体の並はずれた基質特異性を反映したものと解釈されるだろう。酵素の場合には、切断され易い結合における残基以外の残基における相互作用からの結合エネルギーか、触媒速度の増加に利用されている証拠がある（２５）。ＶＩＰの残基２２−２８における結合は、抗体による触媒作用を促進すると思われる。

発明の他の好ましい実施例で、阻害剤は、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体に結合し、それによって触媒活性を阻害する自然発生の化合物である。前に述べたように、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体をもつ固体から分離した血清のＩｇＧフラクションには、固定化蛋白質Ｇによる精製後直接試験した時は、はとんどＶＩＰ加水分解活性は見られなかった（６）。しかしながら、ＩｇＧを限外濾過で処理した後では、ＶＩＰ加水分解活性が観察された。しっかり結合した自然発生の阻害剤の除去が、自己抗体へのＶＩＰ−加水分解活性を与えることが、現在見出された。

そこで、発明に従って、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の自然発生阻害剤は、自己抗体をもつ動物から血清を集め、既知の方法で、血清からガンマグロブリンフラクションを分離し、ガンマグロブリンフラクションから低分子重量の分子を分離するために、ガンマグロブリンフラクションを限外濾過によって処理し、次に限外濾過液中の低分子量分子の結合および阻害活性をみるためスクリーニングを行うことによって製造される。阻害活性の存在を試験する限外濾過液のフラクションは、さらに精製され、阻害剤の化学構造が既知の方法で同定される。

特殊な喘息および気管支炎における気道不全は、ＶＩＰ自己抗体に関係があり、その中のあるものは触媒活性をもつことか観察された（９）。ＶＩＰのように自己抗原に対して向けられた触媒性抗体に潜在的に起因する病気は、ただ単に自己抗原に結合する抗体のそれよりも重い。そこで、高い親和性をもつペプチド同族体と今述べたような自然発生阻害剤は、特別な喘息の場合に、気道不全の処置に用いることができる。

発明は、実例の方法で与えられる次の例に関して、より十分に説明されまた理解されるだろう。

例　１％／　（”Ｊ−ＴＹＲ”）−ＶＩＰ（７）製造精製したブタＶＩＰ　（Ｂａｃｈｅｍ）をクロラミン−Ｔ法（２６）により、　＋ｔｓヨウ素で標識化した。得られたモノ（””Ｉ−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰを、セパツク０１８カートリツジで精製した後、三弗化酢酸中のアセトニトリルの勾配法で逆相ＨＰＬＣで処理した。放射活性の２つの主要なピークが得られ（図１）、放射線免疫検定法で、ウサギ抗 −ＶＩＰ抗血清と反応する化合物に相当した。配列決定のための十分なペプチドを得る目的で、ＶＩＰは、比放射能を下げるために１１７■で稀釈した１ｔｓ１によってヨウ素化され、前述のようにｍ製した。

オンラインのフェニルチオヒダントインアミノ酸検出によるアプライドバイオシステムのシクエネーターで、保持時間２５．３分のピークの分析では、サイクル１０に主に放射活性を示し、ＨＰＩ、Ｃ特性では、モノヨードチロシン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍから購入）のそれに類似し、この物質は、モノ（”’Ｉ−Ｔｙｒ ”）−ＶＩＰであることが示された。放射活性の第２のピーク（保持時間２７．８分）は、同様の方法により、ジ（”’Ｉ−Ｔｙ　ｒ　ｌ　０１Ｔｙｒ”）−ＶＩＰとして同定された。ジ（＋１５７　７’ｙｒ１０、Ｔｙｒ”）−ＶＩＰおよびモノ（”’Ｔ−ＴｙｒＩｏ）−ＶＩＰは、放射線免疫検定法では、はぼ同じような挙動を示した。固有のＶＩＰｌＮａ”’Ｉ　（ＣＴ−ＶＩＰ）のないクロラミン−Ｔで酸化されたＶＩＰおよびモノ（”Ｊ、ＴｙｒＩｏ）−ＶＩＰはよく分離され、　１２’Ｉ−ＶＩＰは、非標識ペプチドから遊離していると結論された。

例　２ヒト対象におけるＶＩＰ自己抗体の説明喘息患者および高運動群（Ｈｘ）と低運動群（Ｌ　ｘ）に分けられた健康被験者から得た血漿試料中の抗体を測定した（８）。喘息は、患者の経歴と代表的な臨床尺度に基づいて診断された。健康なＨｘ被験者は、習慣的な筋肉運動の経歴をもち、健康なＬｘ被験者はその経歴が無かった。ヒトの血液試料は、ペプチド加水分解阻害剤（アプロチニン、フェニルメチルスルホニルフルオライド、ペプスタチン、エチレンジアミン四酢酸）の混合で集められた（９）。血液からのイムノグロブリンＧ（ＩｇＧ）フラクションは、ＤＥＡＥ−セルローズ（ワットマン＞オヨｒｕｉｉ白質Ｇ−セファローズ（ファルマシア）の逐次クロマトグラフィーで分離された。ＩｇＧ　（４■／イ）はアミコン型８ＭＣ機器を用い、平均カットオフ分子量１０，０００ダルトンのＹＭ−１０膜で、２７■／−に限外濾過され、０．８■／ｒｎｌに稀釈もどした後第２サイクルの限外濾過処理を行った。この方法で作られた最終のＩｇＧＩＩ度は約２０■／−であった。電気泳動解析およびペルオキシダーゼに複合した抗 −ヒトＩｇＧによるニトロセルローズプロットの染色からは、この製造法で、非イムノグロブリン物質の存在を見出せなかった。ＶＩＰ−抗体の存在は、血漿試料または精製ＩｇＧにおけるモノ（”Ｊ−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰの飽和可能な結合（過剰な非標識ＶＩＰにより阻害された結合）を、測定することによって決定された。ＶＩＰのモノヨウ素化された形は、抗体による固有のＶＩＰの相互作用を再生すると思われたために用いられた。結合およびフリーのＶＩＰは、ポリエチレングリコールまたはヒトＩｇＧに対する特殊なヒツジ抗体による沈澱法で分離した（９）。何人かの喘息患者および健康被験者からの血漿試料は、飽和可能な　”’Ｉ−ＶＩＰ結合活性（全１２１　Ｔ−ＶＩＰの６７．５％まで）を示すために観察された。ＶＩＰ−抗体は喘息患者（Ｎ＝　７４　）の１８％、健康Ｈｘ被験者（Ｎ＝５１）の３０％、健康Ｌｘ被験者（Ｎ＝４４）の２％であった。抗体正の喘者およびＨｘ被験者における平均”’Ｉ−ＶＩＰ結合値（括弧内のＳＥＭによる％Ｂ／Ｔ）は２３．　４　（５，３）および２０．４　（３゜２）であった。Ｌｘ群におけるただ１人の抗体陽性被験者は、％Ｂ／Ｔ値１２，１％を示した。

例　３抗−ＶＩＰ自己抗体によるＶＩＰの加水分解ペプチドＶＩＰの、抗体仲介の加水分解と自然加水分解を比較するために、モノ（”’Ｔ−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰを、（ｉ）免疫および（ｉｉン非免ｆｊｉ１ｇＧで、時間を伸ばして培養した。非免疫ヒト対象およびＶＩＰ抗体存在対象からのＩｇＧは、ＤＥＡＥセルローズのクロマトグラフィー続いて限外濾過によって、例２に説明したよ０．０２５％トウィーンー２０および０９１％ウシ血清アルブミン、ｐＨ８，０’）を、モノ（１２５Ｉ、Ｔｙ　ｒ　１６’）−ＶＩＰ　（およそ３０ｐ）と共に、３８℃で、時間を増加して培養した。ウシ血清アルブミンとトウィーンー２０は、モノ（”’ Ｉ、ＴｙｒＩＯ）−ＶＩ　Ｐの、ガラスおよびプラスチック表面での吸収ロスを防ぐために、これらの培養液に加えられた。三塩化酢酸（ＴＣＡ）（２７）による沈澱は、モノ（”’Ｉ、ＴｙｒＩ６）−ＶＩＰ分解（６）の初めの基準のように用いられた。従って、１−のＴＣＡ　（最終濃度１０％Ｖ　／　Ｖ　）か反応混合液に加えられ、次に３０００ｘｇで遠心分離された。上澄みは吸引され、放射活性はベレットで測定（ベックマン嬰５５００スペクトロメーター）された。

このＴＣＡ濃度で、固有のモノ（１″”Ｌ　Ｔｙｒ”）−ＶＩＰの９０％以上が沈澱した（すなわち、ＴＣＡ−不溶解ペレット中に存在することが見出された）。ＶＩＰ加水分解の値は、ＴＣＡ−沈澱可能フラクション中の１分当りの計測値（ＣＰＭ）として観測された放射活性から次のように計算された・（ＣＰＭ定量緩衝液−ＣＰＭ抗体）　Ｘ１００／ＣＰＭ定量緩衝液非免疫ＩｇＧにより培養したモノ（ｌｆｆ１ＳｉＳＴｙｒＩ＠）−Ｖ［Ｐの８％加水分解に比較して、免疫ＩｇＧの処理によりペプチドの７３％か加水分解された。モノ（１２５７、Ｔｙ　ｒ　Ｉｏ）　−Ｖ　Ｉ　ＰヲｊｌＤ水分解ｔルＴ　ｇ　ＧＯ’）能力は、５０％飽和硫酸アンモニウムまたは１００ＫＤａ膜フイルターの限外濾過に伴う沈澱により失われることはなかった。モノ（１２５■、Ｔｙｒ’°）− ＶＩＰによる培養前の、ウサギ抗−ヒトＩｇＧによるＩｇＧの処理、または＋００°Ｃ（１０分）の処理は、保持時間１０分のピークの放射活性量の減少によって示されるように、ＩｇＧの加水分解活性を破壊した。

免疫１ｇＧによるモノ（”’Ｌ　Ｔｙｒ”）−ＶＩＰの増加時間帯での処理は、図２に示すように、１０％ＴＣＡ（容管の開始時放射活性は１５．ｏ４０ｃＰＭであった）により沈澱した放射活性量を著るしく減少させた。

非免疫１ｇＧと共に培養したモノ（”’Ｉ、Ｔｙｒ”）−ＶＩＰのわずか８％に比較して、免疫１ｇＧと共に６時間培養後では、開始時のモノ（１５Ｉ、Ｔｙｒｌｏ）−ＶＩＰの７３％がＴＣＡによってもはや沈澱しなかった。

モノ（１２Ｊ−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰの分解はｐＨ依存性であり、最適ｐＨは８．０−８．５であった。

速度論的データは、微量のモノ（１２８Ｉ、Ｔｙｒｌｏ）−ＶＩＰの固定した濃度に非標識ＶＩＰの濃度を増加させて混合しＩｇＧと共に３８°Ｃで２時間の培養によって得られた。加水分解は、ＶＩＰの濃度の増加によって飽和になり、１／速度対　ｌ／基質濃度のプロットは、図３に示すように直線であり、反応はミカエリス−メンテン速度論に一致したことを示している（データはＥＮＺＦＩＴＴＥＲ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）を用いてミカエリス−メンテンの式に適合した）。

図１における直線プロットの傾斜から決定した３７．９ｎＭの反応のためのＫｍは、比較的安定した抗体−ＶＩＰ結合を示した。ＶＩＰ加水分解へ導かなかった條件下で、抗体によるＶＩＰ結合のスキャッチャードプロットは、図４Ａに示すように直線であった。ヒルプロットの傾斜は、図４Ｂに示すように１に近かった（１．０２）。これらのデータは、Ｋｄｏ、４ｎＭおよび濃度７３．４ｆｍｏｌ／■ＩｇＧ（抗体２価と想定）の単一抗体クラスを示した。加水分解のためのに触媒およびに触媒／Ｋｍ値は、加水分解の速度論の基礎として計算し、結合データから得られた抗体濃度は０．２６秒１および６．９ｘｌ　Ｏ＠Ｍ−’秒−１であった。これらの値は、抗体が触媒的にＶＩＰを加水分解するように作用することを示した。０，２６秒−１の代謝回転（すなわち、ＶＩＰの約１６分子が１分間当り抗体１分子によって加水分解される）が計算された。この計算は、ＶＩＰに結合する能力のある抗体の全数を基礎にした。しかしながら、実際には、ＶＩＰに結合する能力のあるすべての抗体か必ずしもＶＩＰを触媒的に加水分解する能力があるとは限らない。従って、実際の代謝回転数は多分計算値よりは大きい。

抗−ＶＩＰ自己抗体の触媒作用によるＶＩＰの加水分解から得られたペプチドフラグメントの同定免疫１ｇＧにより処理されたモノ（１１５１７ｙｒ１Ｇ）−ＶＩＰの逆相ＨＰＬＣは、固有のモノ（＋２Ｊ、　Ｔｙｒ”）−ＶＩＰ　（保持時間（ＲＴ）：２５分）の量の減少と、固有のモノ（”Ｊ−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰおよび１２Ｊ　（ＲＴ：　６．５−７．０分）から良く分離された放射活性の初期溶出ピーク（ＲＴ：　１０．０分）の出現を明らかにした（１ｍ５）、モノ（Ｔｙ　ｒ　”、”り−ｖｒｐとの培養前のＩｇＧの熱処理は、保持時間１０分のピークの放射活性量の減少をもたらした。モノ（１２’　Ｉ　ｓ　Ｔ　ｙ　ｒ　’ °）−ＶＩＰをＩｇＧ（７）代りに緩衝液中で培養すると、多量の放射活性が固有のペプチドの形で回収され、保持時間１０分のピーク量はわずか１３゜９％であった。ＶＩＰのフラグメントを精製するため、非標識ＶＩＰ（５０Ｉｇ）が５２５μｇ免疫ＩｇＧまたは非免疫１ｇＧにより、反応混合物からウシ血清アルブミンを除去したこと以外は前と同様に処理した。反応混合液は、エクストラクトクリーンＣ１８カートリッジ（アルチック）で抽出され、次に、ツバパック−ＣＩ８カラム（ウォーターズ）の逆相ＨＰＬＣにかけ、四弗化酢酸中のアセトニトリルの勾配で溶出させた。溶出液の吸光度は２１４μＭでモニターされた。免疫１ｇＧによるＶＩＰの処理後認められた２つのＡ２□ｔｎｍの吸収ピーク（図６の標識］および２）は、非免疫１ｇＧまたは定量緩衝液により処理されたペプチド製造ではみられなかった。これらのピークは、溶出（図７および８）にシャロウワー勾配を用い、第２回目の逆相ＨＰＬＣて精製された。

逆相ＨＰＬＣで精製されたペプチドフラクションを乾燥し、アブライドバイオシステムズバルスド液相シクエ＊−９−（型４７７Ａ）を用い、オンラインのフェニルチオヒダントイン−アミノ酸検出法で配列決定された。

この方法は図７および８で、それぞれ１および２として識別されたＡ２１４の主要な吸収ピークが、ＶＩＰ　（１−１６〕およびＶＩ　Ｐ　（１７−２８）　テあることを明確に立証した。図８のペプチド２および固有のＶＩＰ　（１−２８〕の高速原子衝撃（ｆ、ａ、ｂ、）−マススペクトロメトリーが、陽イオンモードで、ｖ。解析ＺＡＢ−２３Ｅスペクトロメーターで（加速カニ８ＫＶ）（Ｍ− スキャン）、５％酢酸およびチオグリセロル／グリセロル。

またはｍ−ニトロベンジルアルコールマトリックスを用いて行われた。質量補正は、ヨウ化セシウムまたは、ヨウ化セシウム／グリセロルで行われた。Ｆ、ａ、ｂ、−マススペクトロメトリック解析（図９）は、ペプチド２の分子質量が１３９３ダルトンで、ＶｒＰ　（１７−２８３の分子イオンに相当することを示唆した。１４１５ダルトンの質量をもつもう１つのピークは、多分ＶＩＰ［７−２８３のナトリウム付加物を表すと信じられる。

ＶＩＰ　（１−２８）の分析は、ペプチドの分子イオンによく相当する３３２５ダルトンにおけるシグナルを示した。自己抗体によるＶＩＰの加水分解で生じた精製フラグメントのアミノ酸配列は、切断され易い結合がＧ１１ｎ”−Ｍｅ　ｔ　”　（６）であることを示した。

例　５阻害剤の除去により抗−ＶＩＰ−自己抗体における触媒ＩｇＧは、（ｉ）セファローズ複合蛋白質Ｇまたは（ｉｉ）ＤＥＡＥ−セルローズのクロマトグラフィーで製造された。ＩｇＧ（４ｇ／ｍｌ）は、アミコン型８ＭＣ装置を用い、平均カットオフ分子量１０．０００ダルトンのＹＭ−１０膜で、２７■／−に限外濾過され、０．８■／−に稀釈後第２サイクルの限外濾過処理がなされた。

この方法で作られたＩｇＧの最終濃度は２０■／−であった。限外濾過なしに上記のように精製したＩｇＧと限外濾過を含めて上記のように精製したＩｇＧをそれぞれ、放射線免疫検定緩衝液中のモノ（＋２″Ｉ−Ｔｙｒ”）−ＶＩＰと共に４°Ｃて２時間、非標識ＶＩＰ１１度を増加させて培養し、例４に記載のように、ＴＣＡ可溶放射活性を測定した。図１０は、限外濾過処理をしなかったＩｇＧおよびモノ（１２’Ｉ、Ｔｙｒ”）−ＶＩＰの処理結果は、用量依存性を示すか、定量緩衝液によって得られた値以上のＴＣＡ−可溶放射活性量の増加から判断して、ペプチドの分解量か低いことを示している。限外濾過処理されたＩｇＧは、限外濾過処理をしなかったＩｇＧよりも、より多くＶＩＰを分解した。

Ｂ、透析Ａに記載のようにクロマトグラフィーで精製したＩｇＧ　（２ｍｇ／ｍｌ）を、１２０００−１５０００ダルトンのカットオフ透析膜を用い、４日間、緩衝液（５０ｍＭトリス−塩酸、１００■グリシン、ｐＨ８，０，０，０２５％トウィーンー２０含存）１０００容て、毎日緩衝液交換（合計３回交換）透析を行った。

限外濾過処理と同じように、透析処理したＩｇＧは、透析処理をしなかったＩｇＧよりも、より多くＶＩＰを分解した。

Ｃ１蛋白質−Ｇに固定化後の洗浄ＩｇＧ　（０，５ｄの緩衝液（５０ｍＭトリス−塩酸、１００ｍＭグリシン、ｐＨ８，０，０，０２５％トウィーンー２０含有）中に１■）をＡに記載のようにクロマトグラフィーで作り、これを蛋白質Ｇ上に固定化するため、蛋白質Ｇ−セファローズカラム（固定容積３．３ｒｄ＞に適用した。固定化したＩｇＧを次に１３５ｍ＆’の中性ｐＨ緩衝液（５０ｍＭトリス−塩酸、ｐＨ７，３）で洗浄後、低ｐＨ緩衝液（１００ｍＭグリシン−塩酸、ｐＨ２，７）で溶出した。酸性溶出液を直ちに中性として、ＩｇＧを分離した。限外濾過と同様に、中性緩衝液で洗浄処理したＩｇＧは、その処理をしなかったＩｇＧよりも、より多（ＶＩＰを分解した。

Ｄ、ＶＩＰ−セファローズのアフィニティークロマトグラフィーＶＩＰの加水分解の自己抗体を含むＩｇＧフラクションは、ＶＩＰとのかなり強い結合を示す。この性質は、ＶＩＰ−セファローズカラムで、特異的な触媒性ＶＩＰ加水分解自己抗体を精製することに利用された。ＩｇＧは、ヒト被験者の血漿から、硫酸アンモニウム沈澱とＤＥＡＥ−セルローズクロマトグラフィー（９）によって精製された。ＩｇＧは検出出来る非免疫グロブリン物質（６）は混在していなかった。親和性クロマトグラフィーマトリックスを作るため、約２０μ ｇ（Ｔｙｒ’°−”Ｉ）−ＶＩＰを混合した合成Ｖ［’　（１−２８）（１０■ ）を、０．１Ｍ重炭酸ソーダ、ｐＨ７，０，５Ｍ塩化ナトリウム中のＣＮＢｒ〜セファローズ５ｇ（５ｇ：ファルマシア）に４°Ｃ１２時間の反応で共有結合させ、ゲル上の未反応群をカップリング緩衝液中の０．　２Ｍグリシンで消滅させた（８）。（Ｔｙｒ１６−１２６１）−ＶＩＰの結合に基づき、連結効果は９０％以上であった。

約９０■にＩｇＧを４．５−のＶＩＰ−セファローズゲルおよび０．５Ｍトリス −塩酸、ｐＨ８，０，４°Ｃて２時間振とうした。混合液をカラムに流し、溶出液Ａ□。

（！ｆＢ１１Ｎ：０．０５ＡＵＦＳ）がベースラインに戻るまで、緩衝液でゲルを洗浄し、結合したＩｇＧを０．１Ｍグリシン−塩酸、ｐＨ２，７て溶出し、１Ｍ）リス−塩酸、ｐＨ９，０で直ちに中性化した。抗体濃度は、銀染色、非還元５ＤＳ−ゲルのスキャン（Ａｓ−）により、標準品としてＩｇＧ標準品を用いて、推定した（ギルフォードレスポンス【］スペクトロフォトメーター）。標品ＩｇＧ濃度増加（２−２０膜ｇ／レーン）は、Ａ３，２値の直線的増加を示した。

限外濾過と同様に、親和性クロマトグラフィー処理のＩｇＧは、親和性クロマトグラフィー処理をしないＩｇＧよりも、より多くＶＩＰを分解した。

ＶＩＰの合成ペプチド同族体は、阻害剤の活性のスクリーニング用に製造された。ＶＩＰの７−ｍｅｒ、１６−ｍｅｒおよび１４−ｍｅｒの線型副配列に相当する１０個の合成ペプチド（図１１）が既知の方法（２９）を用いる固相合成で、ケインスピルのフロリダ蛋白質構造管理施設の大学で合成され、それらの構造はアミノ酸組成分析で確認された。Ｃ−１８カラムの逆相ＨＰＬＣは、それぞれの調製品における単−Ａ２１４吸収ペプチドを明らかにした。これらの調製品のそれぞれのペプチド含量は〉８０％であった。全長ＶＩＰ　（１−２８）は、Ｂａｃｈｅｍから得た。

例　７ＶＩＰ−触媒性自己抗体の阻害のためのＶＩＰ同族体のスクリーニングＡ、結合活性のためのスクリーニング１０個の合成ペプチドについて（’ｌ’　ｙｒｌ＠−１１ｓ　ｌ　）−ＶＩＰを結合する能力に関してスクリーニングを行った。

ペプチドは、自己抗体ＩｇＧフラクションとまたＶＩＰの加水分解が起らない緩衝液、すなわち７．５ｍＭ燐酸ナトリウム、ｐＨ７，４，０，６４％塩化ナトリウム、０．５％ウシ血清アルブミン、２５ｍＭ　ＥＤＴＡ、０゜００５％バシトラシン、ｏ、ｏｏｓ％硫酸プロタミン、０．０７３％アジドナトリウムおよび０．０２５％トウィーンー２０、中の（Ｔｙｒｌｏ−”’Ｉ）−ＶＩＰと共に培養を行った。

ヒト被験者の血漿から精製したＩｇＧが自己抗体の源であった。血液の遠心分離によって作られた血漿を、５０％飽和硫酸アンモニウムで沈澱させ、沈澱物を５０ｍＭトリス−塩酸、ｐＨ８，０中で再構成し、この緩衝液を透析し、ＤＥＡＥ −セルローズのクロマトグラフィーでＩｇＧを精製した（９）。ＩｇＧは、分子量１５０ＫＤで、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で単一の銀−染色の蛋白質バンドを示し、イムノプロット法で（６）抗−ヒトＩｇＧ複合過酸化酵素と反応した。

Ｉ　ｇＧ−Ｖ　Ｉ　Ｐ結合のスキャッチャード分析では、ＩｇＧがシングル型のＶＩＰ結合抗体（６）を含むことか示唆された。この結論は、このＩｇＧ製造法で精製したＶＩＰ特異性抗体がモノ−（Ｔｙｒ”−目り−ＶＩＰの加水分解能をもつという観察によって支持された。

触媒性抗体のアフィニティー精製は、例５に説明したように、ＣＮＢｒ−セファローズへのＶＩＰ共存結合をもつクロマトグラフィーによって行われた。結合抗体は酸（２，７）で溶出させ、中性ｐＨにした。この物質の還元５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動では５８ＫＤと２５ＫＤの質量をもつ２種類の銀染色蛋白質バンドが現れ、イムノプロット法では抗−ヒトＨａ（ＩｇＧ）および抗− ヒトＬＭ抗体にそれぞれ染色性を示した。

等電点電気泳動分析とファストゲル（ｐＨ勾配３から１０；ファルマシア）上の染色から、ｐＩ６．８−８．４の一連の細密配置のバンドが現れ、限定された抗体群を示している。出発ＩｇＧとして（１）同じペプチド結合ＣＧｉ　ｎ　”− Ｍｅ　ｔ　”）における親和分割自己抗体加水分解物（Ｔｙｒ””Ｊ）ＶＩＰ　（Ｋｍｉｏ、１２μＭ）は、逆相ＨＰＬＣ分析で、標品（Ｔ　ｙｒ１６−Ｉｔｓ　■）ＶＩＰ　（１−１６）と反応生成物（Ｔｙｒｌ−１！！　■）ＶＩＰ　（１−１６’）の共溶比によって判定された。

結合分析は、４℃、２０分（６）で行われた。緩衝液および免疫ＩｇＧとの培養後、１０％三塩化酢酸で沈澱した（ＴｙｒｌＧ−Ｉｔｓ　ｌ　）　Ｖ　Ｉｐの量は、同じようであった（利用された全放射活性量の、それぞれ、８５．６％および８２．６％）。これは、これらの條件下では、（Ｔｙｒｌｌ−１！″Ｉ）−ＶＩＰがＩｇＧ１：よッテ切断されなかったことを示している。

（Ｔｙ　ｒ　””Ｉ）　−Ｖ　Ｉ　Ｐよりも濃度が＞１０’倍も大きいＮ−末端フラグメントＶＩＰ　（１−１６３は、自己抗体による放射活性配位子の置換結合には失敗した。

逆に、Ｃ−末４７ラグメン）ＶＩＰ　（１５−２８）Ｉｔ、全長ペプチド、Ｖ　Ｉ　Ｐ　（１−２８）　（Ｋｐ　０．　３　ｎＭ）のそれに近い効力（Ｋ、１．２５ｎＭ）で結合を阻害した（図１２−データは、１μＭ　ＶＩＰの存在下で観察された非特異的な結合について補正された２連の平均値であり、これらの実験から集められた）。競合ペプチドか無い場合にＩｔ側された飽和できる結合は、４０５３から６０１２ＣＰＭの範囲であり、非特異的な結合は約６００ＣＰＭであった。ＶＩＰ　（１５−２８）おヨヒｖ■Ｐ（２２−２８）に対する見かけ上のＫｐまたはに１はＥＢＤＡおよび配位子プログラム（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）を用いて得られた。（ｉ）結合反応は平衡に達した、そして、（ｉｉ）（Ｔｙｒ”− ”’Ｉ）−ＶＩＰと非標識ＶＩＰのＫｐは同じであったということが推定された。結合の自由エネルギー、ΔＦ、は、：　Ｆ　＝　ＲＴ　ｆ　ｎ　Ｋ　Ａ、ここでＲは標準温度および圧力での気体定数、Ｔは反応温度（２７７°Ｋ）そしてＫＡは見かけの会合定数〔ｌ／に、またはｌ／に、）である。Ｋ１は等式に、８Ｄ ″′二に、（１＋　（１）／に＋）　、ここで（Ｉ）は阻害剤の濃度である。

初めにそれぞれ５００μＭの濃度で試験を行った残りの７つの短いペプチドの中、ＶＩＰ　（２２−２８）およびＶＩＰ　Ｃ１８−２４）だけが、自己抗体の（Ｔｙｒｌｏ−目’Ｉ）−ＶＩＰとの結合を阻害した。ＶＩＰ［：ｊ２−２８〕のに１は２４２．１μＭであった。ＶＩＰ［２２−２８ズは、ＶＩＰ　（１８−２４）よりも約８倍太きな結合力を示し、後者のペプチドの反応性は、分割配列ＶＩＰ　［２２−２４）によるのかも知れない。これらのペプチドのおよその結合エネルギー値はＫｃａｌ／ｍ。

１ｅで、ＶＩＰ　（１−２８）　、１２．１　、ＶＩＰ　（１５−２８）、１１．３；およびＶＩＰ　（２２−２８）、４゜６であった。残基２２−２８の結合エネルギーは、全長ペプチドのそれのわずか３８％であるけれとも実質的でＶＴＰ　Ｃ２２−２８）は自己抗体との顕著な結合を示したので、自己抗体の触媒活性を阻害する能力を測定した。ＶＩＰ　（２２−２８）（７）存在、非存在下でＶＩＰの濃度増加に伴う加水分解を比較した。（Ｔｙ　ｒ　’°−１！５１）− ＶＩＰ、３２９Ｍ、をＶｒＰの増加濃度に混じ、ＶＩＰ　（２２−２８）（１００μＭ）の存在、非存在下で、自己抗体により３８°Ｃで３時間処理した。ＶＩＰ加水分解の速度の逆数対ＶＩＰの濃度の逆数のプロットは直線で、ミカエリス −メンテン速度論との一致を示した。

（１Ｍ１３：１．Ｑ定値は２連平均で、Ｅｎｚｆｉｔｔｅｒ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）プログラムの方法により、ミカエリス−メンテンの式に適合した）。ＶＩＰ　（２２−２８〕が無い場合のＶＩＰ切断に関するＫｍおよびに触媒値は、それぞれ、１１５±１４ｎＭおよび６．５±０゜３分−１であった。２００μＭ　ＶＩＰ　（２２−２８）の存在下では、見かけのＫｍは増加しく１５８．６±４゜４ｎＭ）、またに触媒は変化が無＜　（６，９±０．２分−’）、ＶＩＰ加水分解の競合的な阻害を示唆している。

等式に、”’　＝に、（ｉ　＋　ＣＩ〕／に＋　）、ここで〔Ｉ〕は阻害剤の濃度、から計算されたＶＩＰ　（２２−２８〕についてのに１は２６０℃Ｍであった。阻害は、過剰なウシ血清アルブミンの存在（重量で＞３００倍）時に観測された。さラニ、４００℃Ｍ　ＶＩＰ　（１−７）、非結合フラグメント、はＶＩＰ加水分解を阻害しなかった。

６ｕｇ　ＶＩＰ　［２２−２８）　は、ＶＩＰ　［：ｌ−２８〕加水分解に用いられたのと同じ培養條件で、検定稀釈剤またはＩｇＱで処理され、反応混合液をＣ−１８セパツクカートリツジで抽出し、０．１％三弗化酢酸中のアセトニトリルの勾配（４５分間に８−６４％）を用いて逆相ＨＰＬＣ（６）で分析した。稀釈液およびＩｇＧ中で培養後回収されたＶＩＰ　［２２−２８）（保持時間＝３９．１分）の量は、著しい相違は無く、ＡＨン大プチド吸収ピーク面積から判断して、ＶＩＰ　（２２−２８〕の切断は起らなかった。

ＶＩＰ　（２２−２８）は、切断され易い結合ＣＧｉｎ”−Ｍｅｔ１７）を含まないが、上のデータによって示されるように、自己抗体と結合し、自己抗体の触媒によるＶＩＰの加水分解を阻害した。

ＶＩＰへ指向する触媒性抗体の自然発生阻害剤の精製と同定例５の結果は、４つの誘導方法、すなわち限外濾過、透析、蛋白質−Ｇ上の固定後の洗浄およびＶＩＰ−セファローズ上のアフィニティークロマトグラフィーは、強力な結合阻害剤を除き、それによって自己抗体にＶＩＰ加水分解活性を与えるという結論を引き出した。阻害剤の分離、精製、同定のために、限外濾過、透析、蛋白質−Ｇカラムの中性緩衝液洗浄あるいは、阻害剤を含むアフィニティークロマトグラフィーの緩衝液洗浄によって３−に濃縮され、セパツクＣ−１８カートリツジで抽出された。保持された物質は、０．１％三弗化酢酸中のアセトニトリルで溶出し、真空乾燥後、Ｃ−８またはＣ−１８カラムの逆相ＨＰＬＣに通した。

カラムフラクションの分画試料は、結合活性については例７Ａに説明したように、また阻害活性については例７Ｂに説明した通り、（Ｔｙｒ”　−””Ｉ）−ＶＩ　Ｐおよび触媒１ｇＧと混合し、３８℃で３時間、培養し、１０％三塩化酢酸で沈澱させて、スクリーンされる。対照管では、カラムフラクションの代わりに、検定稀釈液中で、ＶＩＰの加水分解が測定される。阻害活性を示すフラクシヨンはプールし、純粋な阻害剤を生成させるために、さらに次の分離工程に進められる。これらの分離工程には、イオン交換クロマトグラフィーおよびクロマトフオーカシング（３０）が含まれる。純粋な阻害剤は、アミノ酸分析器で処理され、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社のシークエネーターでペプチドの配列決定がされる。いったん、阻害剤の素性がわかれば、標準固相ペプチド合成法（２９）によって大量合成される。合成阻害剤は、それから特に触媒性自己抗体を阻害することに用い、触媒性自己抗体（抗−ＶＩＰ−自己抗体）に起因する自己免疫病（喘息）の発病の緩和をもたらしてイー（分別）による精製１ｇＧの特性と触媒活性Ａ、ＶＩＰ加水分解濃度を増加さｅたＶｒＰと（７’ｙｒｌ＠　Ｉ［Ｊ）−ＶＩＰ（約３０９Ｍ）の混合物は、例５Ｄのように、ＶＩＰ−セファローズのアフィニティークロマトグラフィーで精製したＩｇＧまたは抗体と共に、０．０２５％Ｔｗｅｅｎ−２０および０．１％ＢＳＡを含む、２０１Ｚｆ０．０５Ｍトリス−塩酸、０．１Ｍグリシン、ｐＨ８中で、３８℃で３時間処理された。加水分解の検定されるＩｇＧおよび抗体は、予め５００容の緩衝液で、毎日緩衝液を交換して４日間透析を行った。ＶＩＰの加水分解は、ＴＣＡに溶かした放射活性の測定で計算され、検定稀釈剤（６）中で培養後ｌｌｌＮ１！ｌされた放射活性で補正された。抗体による触媒作用は、ＶＩＰ　（２２−２８）の有無の條件下で測定された。データは、ＥＮＺＦ　ＩＴ−ＴＥＲプログラム（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）の方法により、ミカエリス−メンテンの式に適合した。抗体処理反応混合液の逆相ＨＰＬＣはＣＩ８カラムを用いた（６）。

Ｂ、（Ｔｙ　ｒ　”−””Ｉ）　Ｖ　Ｉ　Ｐ結合ＤＥＡＥ−セルローズクロマトグラフィーによって調製されたＩｇＧは、濃度を増加させる非標識ＶＩＰの有無の條件下で、飽和できる（Ｔｙｒ”−”’Ｉ）−ＶＩＰ結合（９）について定量が行われた。ＶＩＰの見かけのに、は、ＥＢＤＡおよびＬＩＧＡＮＤプログラム（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）を用いて測定され（ｉ）結合は平衡に達した、（ｉｉ）（Ｔｙｒ”−”１）−ＶＩＰおよび非標識ＶＩＰのに、は同じであると推定された。

Ｃ，ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）および等電点電気泳動（ＩＥＦ）２０ｍＭＭ２−メルカプトエタノールおよび２．５％５ＤＳ（１００℃、５分）で処理された抗体標本の電気泳動は、Ｐｈａｓｔ　５ＤＳ−勾配ゲル（８−２５％）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上でなされた。ゲルは銀（３１）で染色された。免疫染色のため、蛋白質はニトロセルローズ（ＢＡＢ５　：５Ｃｈｌｅ　１ｃｈｅｒおよび５ｃｈｕｅ　１１）へ拡散煮染法によって移され、膜は、遮断緩衝液（０，０２Ｍトリス−塩酸、ｐＨ７，４，０゜５Ｍ塩化ナトリウム、３％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）により、次にウサギ抗−ヒトＨＭ（ＩｇＧ）（１：　１０００）または抗−ヒトＬ鎖（１：２，５００）（Ａｃｃｕｒａｔｅ）により、６０分、処理され、緩衝液で洗浄後、ヤギ抗−ウサギＩｇＧ　（１：　１０００；Ａｃｃｕｒａｔｅ）複合過酸化酵素で処理し、再び洗浄、そして最後に０．５■アミノベンジジン／ｍ／（Ｓｉｇｍａ）および０．０３％過酸化水素で、１０−３０分培養した。等電点電気泳動は、ＰｈａｒｍａｌｙｔｅＳにより作られた３−１０のｐＨ勾配を用いたＰｈａｓｔ　ＩＥＦゲル上で行われた。

Ｄ、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の特性（Ｔｙｒ”−”’Ｉ）−ＶＩＰへのＶＩＰ結合は、測定できるようなＶＩＰ加水分解活性を示さなかったＩｇＧ（すなわち、限外濾過、透析、蛋白質−ＧクロマトグラフィーまたはＶＩＰ−セファローズのアフィニティークロマトグラフィーで処理されなかったＩｇＧ）を用い、検定稀釈液中または免疫ＩｇＧ（８７，９％および９１゜０％）と培養後１０％ＴＣＡ中に沈澱した放射活性量による判断で測定された。ＩｇＧによるＶＩＰ結合のスキャッチャードブロフトは、ＫｄＯ，３ｎＭの単一結合組成（ｒ＝０．９９）およびＶＩＰ抗体濃度１８４　ｆｍ。

ｌ／■ＩｇＧを明らかにした（図１４＝図１４に示す値は、それぞれ３回繰返しの平均である）。アフィニティー精製抗体の濃度増加による（Ｔｙｒ　Ｉ　ｏ　Ｉ　２　’　ｌ　）　Ｖ　ＩＰ加水分解の著るしい増加か観測され、ＴＣＡに溶解した放射活性の量により判定された（図１５）。還元條件下の５ＤＳ−ＰＡＧＥは、アフィニティー分割物質は６１ＫＤ　Ｈ鎖および２６ＫＤ　Ｌ鎖から成ることを示し、銀染色とイムノプロット法での抗−Ｈおよび抗−Ｌ鎖抗体による反応性（図１６）で判定した。アフィニティー分画標本のＩＥＦプロフィル（ｐＨ範囲３．０−１０゜５）では、非分画ＩｇＧ　（ｐＨ７，１−９，５で無数のバンドが映像化された）に比較して、抗体種の制限範囲（ｐＨ６，９−８，４に、約１２のバンドが近接して映像化された）を明らかにした。

Ｅ、ＶＩＰ抗体による加水分解特性と触媒作用ここで用いたＩｇＧ標本ハ、ＶＩＰ（３２）中（７）Ｇｆｎ　”−Ｍ　ｅ　ｔ　′７結合を加水分解した。そこで、ＣＴｙｒｌｏ　”’Ｉ）ＶＩＰが基質として用いられる時、ある放射活性フラグメント、（Ｔｙ　ｒ　”　−”’Ｉ）　Ｖ　Ｉ　Ｐ　（１−１６）が発生する。それらの加水分解特性を比較するため、１００μｇの非分画ＩｇＧおよび０．３μｇのアフィニティー精製抗体が、２１　ｏりｇの（Ｔｙｒ”−”’Ｉ）ＶＩＰと共に培養し、反応生成物は逆相ＨＰＬＣ（図１７）で特性を明らかにした。

２つの盟の抗体標本ニヨル処理テハ、合成Ｉｔ’Ｉ−ＶＩＰ　［１−１６）（８，２分）のそれと同じ保持時間をもつ単一の放射活性ペプチドを発生した。この放射活性ペプチドは、非加水分解の（Ｔｙｒ’°−”Ｊ）ＶＩＰ　（保持時間２１゜５分）から良く分解された。これらのデータは、アフィニティー分画の抗体とＩｇＧにより発生したペプチドは、（Ｔｙｒｌｏ−”’Ｉ）ＶＩＰ　Ｃｌ−１６）　であることを示唆し、それ故に、非分画ＩｇＧのように、アフィニティー精製抗体はＧｌｎ”−Ｍｅｔ１７結合を切断すると結論された。抗体が触媒であるという直接の証拠は、ＶＩＰ加水分解の飽和速度論から得られた。アフィニティー分画抗体標本は、濃度を増加させたＶＩＰと固定した濃度（３０ｐＭ）の（Ｔｙｒ”−”’Ｔ）ＶＩＰと共に培養し、ＴＣＡに溶解した放射活性を測定した。速度の逆数に対する、アフィニティー分画抗体（６６ｎｇ）および非分画抗体（３００μｇ）についてのＶＩＰ濃度の逆数のプロットは、本質的には直線であり、ミカエリス−メンテン速度論に適合（図１８）することを示唆している。アフィニティー分画抗体のＫｍ値は１１０±３ｎＭ、これに対し、非分画ＩｇＧのそれは１１２±６ｎＭであった。全蛋白質量を基に計算した抗体の代謝回転数（Ｋ触媒）は、０．１１±０．０１分−１であった。アフィニティー分画抗体標本と非分画ＩｇＧの特異活性（Ｖ、、。

／　ｎ　ｇ全蛋白質）の比較では、２０７６倍の精製率を示した。

Ｆ、速度論検討アフィニティー精製標本によって表された飽和速度論の検討は、ＶＩＰ−抗体が触媒である直接の証拠が与えられた。通常のペプチダーゼ（３３）および通常のミクロモルからミリモルの範囲（３４）でのＫｍ値を表す抗ハプテン触媒性抗体に比較して、抗体はＶＩＰとかなり強く結合（Ｋｍ　１１０　ｎＭ）するように見えた。ＶＩＰ抗体の明らかに高い親和性基質結合の性質は、多分きびしい基質特異性を与えると思われるので、望ましい特性である。ペプチド結合の加水分解は、エネルギー的には化学反応を必要とするということが知られているのてＶＩＰ抗体の計算値、代謝回転数（Ｋ触媒０．１１分−１）および速度効率（Ｋ触媒／Ｋｍ　１．ＩｘｌＯ＠Ｍ−’分−１）は、印象的である。アフィニティー分画ＶＩＰ抗体のＩＥＦ像は、抗体の制限範囲を明らかにしたけれども、標本は均質なものではない可能性が残されている。

そこで、アフィニティー分画抗体標本で測定されたに触媒（０，１１分り）は最小値である。非分画ＩｇＧ（スキャッチャードプロットのＸ−切片から推定された■触媒／抗体量）中に存在するＶＩＰ抗体の理論的なに触媒値は６．５分−１であった。これに対して、推定した遷移に触媒およびに触媒／　Ｋ　ｍ値は、それぞれ、０．０８分−１および１．４ＸＩＯ”Ｍ−貫分−１である（３５）。金属補助因子の助力を伴った抗体のＧｊ７ｙ−Ｐｈｅ結合切断の能力は、Ｋ触媒０．０４分−１で真の触媒であると云われているがその飽和速度論は説明されていない（３６）。

本発明の他の実施例は、この明細または、ここに開示された発明の実施の考察から熟練技術者には明らかにされるだろう。

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１９　：　１−３９　（１９８８）　。

２２　、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ、　Ｅ、　、　Ｓｈｉｍｉｚｕ、　Ｍ、　、　Ｙｏｕｎｇ、　Ｊ、　Ｄ、　、Ｌｅｕｎｇ、　Ｃ。

Ｙ、、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７　：１２６１　（１９６８）　：ε。

Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ、Ｍ、Ｓｈｉｍｉｚｕ、Ｊ、Ｄ、Ｙｏｕｎｇ、Ｃ，Ｙ、Ｌｅｕｎｇ、１ｂｉｄ　７：１２５３　（１９６８）　。

２３　、８ａｒｒｅｔｔ、Ａｊ、、プロティナーゼ阻害剤（Ｅｄｓ、　Ａ。

Ｊ、ＢａｒｒｅｔｔおよびＧ、５ａｌｖｅｓｅｎ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、３−２２（１９８６）　。

２４　、　Ｒｉｃｈ、Ｄ、Ｈ，、プロティナーゼ阻害剤（Ｅｄｓ、　Ａ、　Ｊ。

ＢａｒｒｅｔｔおよびＧ、５ａｌｖｅｓｅｎ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、　１７９−２１７（１９８６）。

２５　、Ｐａｕｌ　Ｓ、ｅｔ、ａｌ、、Ｊ、Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ、２３　：　１　３３（＋９８９）。

２８　、　Ｐａｕｌ、Ｓ、、Ｗｏｏｄ、に、、５ａｉｄ、Ｓ、１．逆相ＨＰＬＣによる（　＋２Ｊ）−血管作用性腸管ペプチドの精製。

Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　５：１０８５−１０８７（１９８４）。

２７、　Ｔｕｒｎｅｒ、Ｊ、Ｔ、、Ｂｙｌｕｎｄ、Ｄ、Ｂ、ラット下顎骨下腺におけるＶＩＰ受容体の特徴　：Ｈ標本における放射性配位子結合分析Ｊ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｉｌ：ｘｐ、Ｔｈｅｒａｐ、２４２　二８７３−８８１　（１９８７）。

２８、アフィニティークロマトグラフィー、原理と方Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ、１２−１８−、ｃ　１　９８６　）　。

２９．　（Ｓｔｅｗａｒｔ、Ｊ、Ｍ、およびＴｕｕｎｇ、　Ｊ、　Ｄ、、、固相ペプチ３０、ＦＰＬＣ”イオン交換およびクロマトフオーカシング、Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ　１−１７１　（１９Ｐｈａｒｍａｃｉａ　（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ　１９８７　）。

３２、　Ｂａｌｄｗｉｎ、Ｅ、および５ｃｈｕｌｔｚ、　Ｐ、　Ｇ、　、　Ｈ位指向性突然変異誘発による触媒性抗体の発生　５ｃｉｅｎｃｅ　２４４　：１１５２　（１９８９）。

３３　、　Ｄｉｘｏｎ、Ｍ、、Ｗｅｂｂ、Ｅ、Ｃ，ｅｔａｌ、、酵素、３ｄＥｄ。

Ｌｏｎｇｍａｎ、（Ｌｏｎｄｏｎ　１９７９　）　；　Ｆｉｓｈｅｒ、Ｇ、アシル基転位−アスパルティック　ブロティナーゼ、酵素機構：Ｍ。

［、ＰａｇｅおよびＡ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、ｅｄｓ、、Ｒｏｙａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ　ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、　２　３　０　（Ｌｏｎｄｏｎ　１　９　８　７）　。

３４　、　Ｊａｎｄａ、に、Ｄ、ｅｔａｌ、、５ｕｐｒａ　ｒｅｆ、３　：　５ｃｈｕｌｔｚ、Ｐ。

Ｇ、触媒性抗体。Ａｃｃ、Ｃｈｅｍ、Ｒｅｓ、２２　：　２８７　（１９８９）　；　Ｂｌｏｃｋｂｕｒｎ、　Ｇ、　Ｍ、　、　Ｋａｎｇ、　Ａ、　Ｓ、　ｅｔａｌ、触媒性抗体Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、２６２　：　３８１　（１９８９）。

３５　、　Ｊａｎｄａ、に、Ｄ、ｅｔａｌ、、５ｕｐｒａ　ｒｅｂ、３　。

３６、［ｖｅｒｓｅｎ、　Ｂ、　Ｌ、およびＬｅｒｎｅｒ　Ｒ，Ａ、、５ｃｉｅｎｃｅ　２４３：１１８４　（１９８９）。

邊イー５ＯＬＶＥＮτＢ１％、８七伊 −ネ千１ＳＯＬＶＥＮＴ　Ｂ、％上り、５ＯＬＶＥＮＴ　Ｂ、％ ○ ＝＝＝ ψ　ｌ／ｌ　のへ″７２チドＰＥＰＴＩＤＥ、　−１ｏｇ　ＭＦＩＧ、Ｉ３法名　叶１ｉ１．疫ＲＥＴＥＮＴＩＯＮ　ＴＩＭＥ、　ｍａｎＦＩＧ、　１５ｂｋｐｍ　−６１ＦＩＧ、　１６浄書（内容に変更なし）要　約　書合成および自然発生の両方の触媒性抗体の特異的、選択的な阻害剤、それらの使用と組成が発表されている。

特に、神経伝達物質の血管作用性腸管ペプチド（ＶＩＰ）内におけるアミノ酸残基ｌＧおよび１７間のペプチド結合への抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体による加水分解を妨害する阻害剤について発表されている。

補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法１！１１８４条）８）平成４年８月２ａ日国

Claims

【特許請求の範囲】１．基質の化学反応への抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、当該阻害剤は（ａ）基質のフラグメント、（ｂ）基質のフラグメントの類似体、あるいは（ｃ）当該阻害剤が当該触媒性抗体を引き出すことに用いられなかった場合は基質の類似体。２．基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤。３．基質の化学反応への第１抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、当該阻害剤は、当該第１抗体への抗イディオタイプである第２抗体から成る。４．当該化学反応は、当該基質における結合の切断または形成である、請求項１に説明される阻害剤５．当該結合はペプチド結合である、請求項４に説明される阻害剤６．当該基質は、ペプチド、蛋白質、ホルモン、神経伝達物質および神経体液性因子から成る群から選ばれる、請求項１に説明される阻害剤７．当該基質は、当該自己抗体をもつ動物の自己抗原である、請求項２に説明される阻害剤８．当該基質は、ペプチド、蛋白質、ホルモン、神経伝達物質および神経体液性因子から成る群から選ばれる、請求項２に説明される阻害剤。９．当該基質はペプチドである、請求項８に説明される阻害剤１０．当該基質はＶＩＰである、請求項９に説明される阻害剤１１．当該基質の当該フラグメントは、同族体ペプチドである、請求項９に説明される阻害剤。１２．ＶＩＰのＧｌｎ１６−Ｍｅｔ１７ペプチド結合の切断への、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の触媒作用を阻害する能力のある阻害剤、当該阻害剤はＶＩＰ〔２２−２８〕から成る。１３．ＶＩＰのＧｌｎ１６−Ｍｅｔ１７ペプチド結合の切断への、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤。当該阻害剤は、次のステップから成る工程によって製造されてきた：（ａ）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する；（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；（ｃ）当該ガンマグロブリンフラクションから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する；そして（ｄ）結合する能力があり、それによって、当該切断への当該自己抗体の触媒作用を阻害する分子を同定するため、当該分子をスクリーニングする。１４．当該ガンマグロブリンに結合する当該分子は、限外濾過によって当該ガンマグロブリンから分離される、請求項１４に説明される阻害剤。１５．当該ガンマグロブリンに結合する当該分子は、透析によって当該ガンマグロブリンから分離される、請求項１４に説明される阻害剤。１６．当該ガンマグロブリンに結合する当該分子は、蛋白質Ｇ−セファローズのクロマトグラフィーによって当該ガンマグロブリンから分離される、請求項１４に説明される阻害剤。１７．当該ガンマグロブリンに結合する当該分子は、ＶＩＰ−セファローズのアフィニティークロマトグラフィーによって当該ガンマグロブリンから分離される、請求項１４に説明される阻害剤。１８．基質の化学反応への抗体の触媒作用を阻害するが、当該抗体を引き出すことにはそれ自身用いられなかった阻害剤を調製する方法、当該方法は、次のステップから成る；（ａ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する；または（ｂ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの、１つまたはそれ以上の類似体を合成する；または（ｃ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体を合成する；そして（ｄ）当該抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するため、ステップ（ａ）−（ｃ）で合成されたフラグメントまたは類似体をスクリーニングする。１９．基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を製造する次のステップから成る方法。（ａ）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する；（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；（ｃ）当該ガンマグロブリンフラクションから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する；そして（ｄ）当該自己抗体を阻害する能力がある分子を同定するために、当該分子をスクリーニングする。２０．当該分子は、限外濾過あるいは透析によって当該ガンマグロブリンフラクションから分離される低分子量分子である、請求項１９に説明される方法２１．当該分子は、クロマトグラフィーまたは非特異的蛋白質支持体または当該自己抗体にとって特異的な蛋白質支持体をもつアフィニティークロマトグラフィーによって、当該ガンマグロブリンフラクションから分離される、請求項１９に説明される方法２２．基質に含まれる結合の切断または形成の速度を強化する自己抗体の作用を阻害する阻害剤を製造する次のステップから成る方法；（ａ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体または１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する；そして（ｂ）当該自己抗体を阻害する類似体またはフラグメントを同定するために、当該類似体またはフラグメントをスクリーニングする。２３．基質の化学反応への第一抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を製造する、次のステップから成る方法；（ａ）当該第１抗体へ多数の抗体を発生させる；そして（ｂ）結合する能力があり、それによって当該第１抗体を阻害する第２抗体を同定するために当該多数をスクリーニングする、当該第２抗体は、当該第１抗体へ抗イディオタイプである。２４．当該多数を次の方法によって発生させる、請求項２３に説明される方法；（ａ）当該第１抗体により動物を免疫化し、それによって当該動物に抗体−産生リンパ球を発生させる；（ｂ）当該抗体−産生リンパ球を当該動物から取り出す；そして（ｃ）当該抗体−産生リンパ球を骨髄腫細胞に融合し、それによって多数のハイブリドーマ細胞を産生し、それぞれがモノクローナル抗体を産生する。２５．基質の化学反応への抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造される；（ａ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する；または（ｂ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの１つまたはそれ以上の類似体を合成する；または（ｃ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体を合成する；そして（ｄ）もしも当該阻害剤が当該触媒性抗体を引き出すことに用いられなかった場合には、当該抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するために、ステップ（ａ）−（ｃ）で合成された当該フラグメントまたは類似体をスクリーニングする。２６．基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造される；（ａ）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する；（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；（ｃ）当該ガンマグロブリンフラクションから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する；そして（ｄ）当該自己抗体を阻害する能力がある分子を同定するために当該分子をスクリーニングする。２７．当該基質はペプチドであり、当該化学反応は、当該ペプチドの結合の切断である、請求項２６に説明される方法２８．当該自己抗体は、抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体であり、当該ペプチドはＶＩＰであり、当該結合はＧｌｎ１６−Ｍｅｔ１７結合である、請求項２７に説明される方法２９．基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造された；（ａ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体または、１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する；そして（ｂ）当該自己抗体を阻害する類似体またはフラグメントを同定するために、当該類似体またはフラグメントをスクリーニングする。３０．当該基質はペプチドであり、当該化学反応は、当該ペプチド内の結合の切断である、請求項２９に説明される阻害剤。３１．当該自己抗体は抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体であり、当該ペプチドはＶＩＰであり、当該結合は、Ｇｌｎ１６−Ｍｅｔ１７結合である、請求項３０に説明される阻害剤。３２．抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体を阻害する当該フラグメントはＶＩＰ〔２２− ２８〕である、請求項３１に説明される阻害剤３３．基質の化学反応への第１抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、当該阻害剤は、当該第１抗体へ抗イディオタイプである第２抗体から成り、当該第２抗体は次のステップから成る工程によって製造された；（ａ）当該第１抗体へ多数の抗体を発生させる；そして（ｂ）結合する能力があり、それによって当該第１抗体を阻害する当該第２抗体を同定するために当該多数をスクリーニングする。３４．当該多数を次の方法で発生させる、請求項２３に説明される阻害剤；（ａ）当該第１抗体で動物を免疫化し、それによって当該動物に抗体−産生リンパ球を発生させる；（ｂ）当該抗体−産生リンパ球を当該動物から取り出す；そして（ｃ）当該抗体−産生リンパ球を骨髄腫細胞と融合し、それによって多数のハイプリドーマ細胞を産生し、それぞれがモノクローナル抗体を産生する。３５．当該阻害作用が生ずるにふさわしい條件下で、有効量の阻害剤を当該抗体と接触させることから成る、基質の化学反応への抗体の触媒作用を阻害する方法、当該阻害剤は次のステップから成る工程にようて製造された；（ａ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する；または（ｂ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの１つまたはそれ以上の類似体を合成する；または（ｃ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体を合成する；そして（ｄ）もしも当該阻害剤が当該触媒性抗体を引き出すのに用いられなかった場合には、当該抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するために、ステップ（ａ）−（ｃ）で合成されたフラグメントまたは類似体をスクリーニングする。３６．当該阻害が起こるにふさわしい條件下で、当該自己抗体を阻害剤の有効量と接触させることから成る、基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害する方法、当該阻害剤は、次のステップから成る工程によって製造された；（ａ）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する；（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；（ｃ）当該ガンマグロブリンフラクションから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する；そして（ｄ）当該自己抗体を阻害する能力がある分子を同定するために、当該分子をスクリーニングする。３７．当該阻害が起こるにふさわしい條件下で、当該自己抗体を有効量の阻害剤と接触させることから成る、基質の化学反応への自己抗体の触媒作用を阻害する方法、当該自己抗体は次のステップから成る工程によって製造された；（ａ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体または、１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する；そして（ｂ）当該自己抗体を阻害する類似体またはフラグメントを同定するために当該類似体またはフラグメントをスクリーニングする。３８．当該阻害が起こるにふさわしい條件下で、当該第一抗体を有効量の第２抗体と接触させることから成る、基質の化学反応への第１抗体の触媒作用を阻害する方法、当該第２抗体は当該第１抗体へ抗イディオタイプであり、当該第２抗体は次のステップから成る工程によって製造された；（ａ）当該第１抗体へ多数の抗体を発生させる；そして（ｂ）結合する能力があり、それによって当該第一抗体を阻害する当該第２抗体を同定するために当該多数をスクリーニングする。３９．当該動物内の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、触媒される当該反応の結果としての当該自己免疫病の病態生理学の原因をつくっている、動物における自己免疫病を処置する方法、当該方法は、当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を、当該動物または当該動物の体液へ投与するステップから成る。４０．当該動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、当該触媒反応の結果である自己免疫病の病態生理学の原因をつくっている動物における自己免疫病を処置する方法、当該方法は次のステップから成る；（ａ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの合成；または（ｂ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの１つまたはそれ以上の類似体の合成；または（ｃ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体の合成；または（ｄ）当該自己抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するために、ステップ（ａ）−（ｃ）において合成された当該フラグメントまたは類似体のスクリーニング；そして（ｅ）当該自己免疫病で苦しむ動物または当該動物の体液への当該阻害剤の投与；４１．当該動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、当該触媒反応の結果である自己免疫病の病態生理学の原因になっている、動物における自己免疫病を処置する方法、当該方法は次のステップから成る；（ａ）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する；（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；（ｃ）当該ガンマグロブリンから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する；（ｄ）結合する能力があり、それによって、当該基質の当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する分子を同定するために、当該分子をスクリーニングする；（ｅ）ステップ（ｄ）で確認された化合物を、当該自己免疫病に苦しむ動物または当該動物の体液へ投与する。４２．当該動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、当該触媒反応の結果である自己免疫病の病態生理学の原因をつくっている動物における自己免疫病を処置する方法、当該方法は、当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を、当該動物または当該動物の体液へ投与するステップから成り、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造された；（ａ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントを合成する；または（ｂ）基質の１つまたはそれ以上のフラグメントの１つまたはそれ以上の類似体を合成する；または（ｃ）当該基質の１つまたはそれ以上の類似体を合成する；そして（ｄ）当該自己抗体を阻害するフラグメントまたは類似体を同定するためにステップ（ａ）−（ｃ）で合成されたフラグメントまたは類似体をスクリーニングする。４３．当該動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、当該触媒反応の結果である自己免疫病の病態生理学の原因をつくっている動物における自己免疫病を処置する方法、当該方法は、当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤を、当該自己免疫病に苦しむ動物または当該動物の体液へ投与するステップから成り、当該阻害剤は次のステップから成る工程によって製造される；（ａ）当該自己抗体をもつ動物から血清を採集する；（ｂ）当該血清からガンマグロブリンフラクションを分離する；（ｃ）当該ガンマグロブリンフラクションから、当該ガンマグロブリンに結合する分子を分離する；そして（ｄ）結合する能力があり、それによって、当該基質の当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する分子を同定するために、当該分子をスクリーニングする。４４．当該自己免疫病は、喘息、気管支炎、糖尿病および不能症から成る群から選ばれる請求項３８に記載する方法。４５．当該基質は、ペプチド、蛋白質、ホルモン、神経伝達物質および神経体液性因子から成る群から選ばれる、請求項３８に記載の方法。４６．当該自己免疫病は喘息であり、当該基質はＶＩＰでありそして当該ＶＩＰの類似体はペプチド同族体である、請求項４１に記載の方法。４７．当該動物の基質の化学反応を触媒する自己抗体は、当該触媒反応の結果である自己免疫病の病態生理学の原因をつくっている動物における自己免疫病を処置する薬剤組成、当該組成は（ａ）当該化学反応への当該自己抗体の触媒作用を阻害する阻害剤、そして（ｂ）薬剤的に適した担体から成る。４８．抗−ＶＩＰ触媒性自己抗体の阻害剤および適当な薬剤担体から成る喘息を処理する薬剤組成。