JPH05509290A - 腫瘍細胞の感作方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 腫瘍細胞の感作方法 〔発明の背景〕 多数の化学療法剤に対する耐性は癌の治療における共通の臨床上の問題である。

そのような薬剤耐性は一次療法（ｐｒｉ謹ａｒｙ　ｔｈｅｒａｐｈｙ）で起こり うるか又は治療の間に獲得されることがある。この問題は、これらの腫瘍がしば しば他の薬物に対してそれらを初期治療に使用しなかった場合でも交差耐性にな るという観察事実により病気を更に悪化させる。実験的にこの現象は多剤耐性（ ＭＤＲ）として知られ、そして多種の機作がＩＩＤＲ表現型に寄与し得ることが 明らかであるにしても、一部分は薬物の細胞内水準の減少を引き起こす薬剤流出 機構（ｄｒｕｇ　ｅｆｆｌｕｘｍｅｃｈａｎｉｓ■）の増加によると思われる。

ＭＤＲの顕著な特徴はＰ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）と呼ばれる膜糖タンパク質 の過剰発現であり、このことは１１０１？細胞から薬物のエネルギー依存性非特 異的移動（ｅｘｏｄｕｓ）の原因であると考えられる。薬剤感受性細胞へのＰ− ｇｌ）をコードする遺伝子のトランスフェクションとこれらの細胞におけるＭＤ Ｒ表現表現上の後の発現から得られる最近の証拠はＭＤＲにおけるＰ−ｇｐの重 要性を確証するものである。

広範囲の物質が１ｌＤＲ腫瘍細胞中で薬剤活性を変えることが示された。これら はカルシウムチャンネル遮断剤例えばベラパミル、ステロイド及びステロイドア ンタゴニスト（プロゲステロン及びタモキシフェン）、カルモジュリンアンタゴ ニスト（トリフルオペラジン）、免疫抑制剤（サイクロスポリンＡ）、及び強心 剤（キニジン及びアミオダロン）を含む。しかしながら、これらの物質は２つの 大きな問題を持ち、すなわち（１）ＭＩＩＩ？腫瘍の化学感作のための適当な血 液水準はかなりの毒性を伴わずに達成し得ないこと、そして（２）これらの物質 の大部分は抗癌剤に対するＭＤＩ？腫瘍の化学感受性を十分に回復しないことで ある。

我々はこれらの問題のいずれにも立ち向かう物質の類を発見した。我々はＭＤＩ ？細胞を抗癌剤に対して十分に感作することができるキナゾリンジオン化合物の 類を見出し、そして抗精神病薬としての限られた臨床試験において、ＭＤＲ腫瘍 の化学感作のためのこれらの薬物の代表例の適当な血漿水準を達成した。

〔情報の開示〕

本発明に使用する種類のキナゾリンジオン化合物は大脳抑制薬活性を持ち、そし て条件回避行動（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄａｖｏｉｄａｎｃｅ　ｂｅｈａｖｉｏ ｒ）を抑制すると米国特許第３．８１９．６３０号に開示されている。

細胞のドキソルビシンに対する多剤耐性を回避すると報告された多数の化合物の 構造活性相関の総説が「抗腫瘍性薬物に対する耐性Ｊ　（Ｄ、　Ｋｅｓｓｅ１編 集）　（ＣＲＣＰｒｅｓｓ。

ｆｃ、、Ｂｏｃａ　ｌ？ａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ、１９８９年、５章、６３〜 ８０ページ）に＾ｖｎｅｒ　Ｒａｍｕにより「薬剤耐性Ｐ３８８細胞におけるド キソルビシン感受性を回復する化合物の構造活性相関」という表題で報告されて いる。

〔発明の要約〕

次の一般式 （式中、Ｘは３〜７個の炭素原子を持つアルキレン鎖であり：Ｒ１及びＲ２の各 々は水素、塩素、フッ素、臭素又は１〜４個の炭素原子を持ちモして直鎖又は分 岐鎖である低級アルコキシであり：Ｒ８は水素又は１〜３個の炭素原子を持つ直 鎖又は分岐鎖である低級アルキルであり：Ｒ４及びＲ５の各々は水素、塩素、フ ッ素、臭素又は１〜４個の炭素原子を持ちモして直鎖又は分岐鎖である低級アル キルチオであるものとし、但しＲ４及びＲ５の１つは水素以外のものである）の 化合物：又はその医薬的に許容される酸付加塩は多剤耐性（ＭＤＲ）細胞を抗癌 剤に感作するために有用である。

一般式■の化合物は癌を持ち、そして１つ又は複数の化学療法剤に対する耐性が 生じた患者を治療するために有用である。式Ｉの化合物をそのような患者に投与 することにより、患者の薬剤耐性細胞は感作されるか又は前記細胞が化学療法剤 （１つ又は複数）に対して感受性になるように変化を受け、それにより前記物質 （１つ又は複数）による患者の治療を再開又は継続することを可能にする。

〔発明の詳細な説明〕

一般式Ｉにおいて、Ｘは３〜７個の炭素原子を持つアルキレン部分を表し、そし て基−（ＣＦＩ２）。−で表すこともでき、式中ｎは３〜７の整数である。

１〜４個の炭素原子を持ち、モして直鎖又は分岐鎖であって、Ｒ１とＲ２で表さ れる低級アルコキシ基の例はメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポ キシ、ｎ−ブトキン、ｔｅｒｔ−ブトキシ及びイソブトキシである。

基Ｒ３は水素又は１〜３個の炭素を持つ低級アルキル基を表し、メチル、エチル 又はｎ−プロピル、又はイソプロピルである。

Ｒ１とＲ５で表されるアルキルチオ基はアルキル基が直鎖又は分岐鎖である基ア ルキルＣｌ−４−３−と表すことができ、例えばメチルチオ、エチルチオ、ｎ− プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、イソブチルチオ及びｔｅｒ ｔ−ブチルチオである。

一般式■の化合物は米国特許第３．８１９．６３０号に記述されているように作 られ、その適正な部分、特にコラム１．５３〜７２行及びコラム２〜６の全文を 参照により本明細書に組み入れる。式■の化合物を得る方法はチャートＩと■に 示されており、これは大部分米国特許第３．８１９．６３０号に記述されている のと同じである。チャート■においてｎは３〜７であり、Ｒ６はアルキル０１− １であり、そしてすべての他の記号は式Ｉにおけると同じである。チャート■に おいて、すべての記号は式Ｉにおけると同じであり、そして化合物（５）をチャ ートエに示すように処理して式Ｉの化合物を得ることができる。

式１の化合物はその酸付加塩を含めて１つ又は複数の抗癌剤に対して耐性になっ た患者の癌細胞を感作し又は変化させるために有用である。式■の化合物は事実 上多剤耐性（ＭＤＲ）になった癌細胞のいずれも感作する能力がある。現在ＭＤ Ｈに関連しており、そして臨床療法条件下で結果として癌細胞に治療に対する耐 性を生ずることが知られている多数の抗癌剤がある。そのような抗癌剤はビンカ ・アルカロイド例えばビンブラスチンとビンクリスチン、アントラサイクリン例 えばドキソルビシンとダウノルビシン、親油性抗葉酸剤例えばトリメトレキセー トとビリトレキセム、エピポドフィロトキシン例えばエトポシド、合成アナログ 例えば米国特許第４．５５６．６５４号に記述されたアントラピラゾール特に例 えば７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−（（２−ヒドロキシエチル）アミノコ エチル）−５−（（２−（メチルアミノ）エチル〕アミノ〕アントラ（１，９− ｃｄｌ　ピラゾール−６（２Ｈ）−オン・二塩酸（ＣＩ−９３７）、又は米国特 許第４．６０４．３９０号に記述されたベンゾチオピラノインダゾール特に５− （（２−アミノエチル）アミノ）−２−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−２ １１−［１）ベンゾチオピラノ［４，３，２−ｃｄ］インダゾール−８−オール ・二塩酸（ＣＩ−９５８）　、及びタフソールを含む。

本発明を実施する場合、一般式■の化合物は薬剤耐性癌患者が確認され次第、す なわち患者の癌細胞が患者の治療に用いられる１つ又は複数の抗癌剤に対して耐 性になったという事実により治療に対して反応を示さない患者の確認があり次第 役立つようになる。典型的には、そのような患者を最初に高い用量の式Ｉの化合 物で治療して癌細胞を感作するために十分な血中水準に到達させる。

高い用量は化合物により変動させ得るが、典型的には１日当たり１０００１１９ 〜２０００１９を１日又は２日好ましくは１日であろう。一旦感作用化合物の適 正な血中水準が達成されたら、投薬量を化合物の血中水準を維持するに適当な水 準まで減らし、そして抗癌療法を再開する。典型的には、式Ｉの化合物の「維持 」用量は２００１〜４００ｍｑの化合物の１日当たり３回投与であろう。抗癌治 療は抗癌剤（１つ又は複数）を感作用化合物の維持用量と共に共同投与すること を除いて患者が薬剤耐性と診断された以前と同じ方法で継続されるであろう。

本発明を実施する場合、式■の化合物を経口的又は非経口的、特に静脈内又は皮 下に投与することができる。

経口投与が好ましい。

本発明の化合物から医薬組成物を製造するには、不活性の医薬的に許容される担 体は固体又は液体のいずれであってもよい。固体形態の製剤は粉末、錠剤、分散 性顆粒、カプセル及びカシェ−を含む。

固体担体は希釈剤、着香料、可溶化剤、潤滑剤、懸濁剤、バインダー又は錠剤崩 壊剤として作用することも可能な１つ又は複数の物質であることができ、それは カプセル化材料であることもできる。

粉末の場合、担体は微粉砕した固体であり、これが微粉砕した活性物質と混合物 になっている。錠剤の場合、活性化合物を必要な結合特性を持っ担体と適当な比 率で混合し、そして所望の形と大きさに成形する。

粉末と錠剤は好ましくは重量で約５〜約７０％の活性成分を含む。適当な担体は 炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、乳糖、砂糖、ペクチン 、デ午ストリン、澱粉、トラガカントゴム、メチルセルロース、ナトリウム・カ ルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、ココアバターなどである。

用語「製剤」には活性化合物のカプセルを作るための担体であるカプセル化材料 との配合物を含めるものであり、前記カプセル中で活性成分（他の担体と共に又 は単独で）は担体により囲まれ、従ってそれと一体化している。同様の方法で、 カシェ−も含まれる。

錠剤、粉末、カシェ−及びカプセルも経口投与に適する固体投薬形態として使用 することができる。

液体形態の製剤は経口投与に適する溶液、又は経口投与に適する懸濁液と乳濁液 とを含む。経口投与用水溶液は活性化合物を水に溶解し、そして所望により適当 な着香料、着色剤、安定剤及び増粘剤を添加して製造することができる。経口用 水性懸濁液は微粉砕した活性成分を粘性材料例えば天然又は合成ゴム、樹脂、メ チルセルロース、ナトリウム・カルボキシメチルセルロース及び医薬配合技術で 知られている他の懸濁剤と一緒に水に分散させることにより作ることができる。

医薬製剤は単位投薬形態であるのが好ましい。そのような形態で製剤は活性成分 の適当量を含む単位用量に分割される。単位投薬形態は包装した製剤、製剤の個 別の量を含む包装品であることができ、例えば小分は包装した（　ｐａｃｋｅｔ ｅｄ）錠剤、カプセル及びバイアル瓶又はアンプルに入れた粉末である。単位投 薬形態はカプセル、カシェ−又は錠剤自体であることもでき、又はそれは適当数 のこれらの包装済み形態のいずれかであることもできる。

本発明の実施に使用するための好ましい式Ｉの化合物はＸがブチレンすなわち− （ＣＨｚ）シであり、Ｒ４が水素であり、そしてＲ３がプロピルチオ基であるそ れである。Ｒ，が２位でプロピルチオである化合物がより好ましい。

式Ｉの化合物を例証する実施例は次の物を含む。

キナゾリンジオン（チオベリトン）・−塩酸（ＬＨ，３ｔｌ）−キナゾリンジオ ン・−塩酸−２，４−（ＩＨ，３Ｈ）−キナゾリンジオン・−塩酸４　３−　［ ４−（４−（２，３−ジクロロフェニル）−１−ピペラジニルコブチル）　−２ ，４−（ＩＢ、３Ｈ）　−キナゾリンジオン・−塩酸 一キ士ゾリンジオン・−塩酸 ２．４−　（１１１，３Ｂ）−キナゾリンジオン・−塩酸７　３−（４−（４− （２−（メチルチオ）フェニル〕−１−ピペラジニル〕ブチル）　−２，４−Ｃ ＩＨ，３Ｈ）−キナゾリンジオン・−塩酸 ８　３−［４−（４−［２−（ブチルチオ）フェニル〕−１−ピペラジニル〕ブ チル］　−２，４−（ＬＨ，３Ｈ）−キナゾリンジオン・−塩酸 −２，４−（１１１，３■）−キナシリジオン・−塩酸１０　６−メチル−３− （４−［４−（２−（プロピルチオ）フェニル〕−１−ピペラジニル〕ブチル〕 −２，４−（１［１，３Ｈ）−キナゾリンジオン・−塩酸現在化学感作剤として 臨床試験中にある３つの物質であるベラパミル、アミオダロン及びサイクロス不 リノハを含む可能性のあるｍＩＤＲ用化学感作剤の比較研究において、我々は種 々の薬物に耐性を持つネズミ白血病細胞であるＰ３８８Ｒ細胞におけるアドリア マイシンの活性を増強する点でチオベリトン（実施例１）がすべての他の薬物よ りすぐれていることを見出した。サイクロスポリンＡ及びベラパミルを使用した 場合と同様に、チオベリトンは薬剤感受性の親Ｐ３８８細胞におけるアドリアマ イシンの活性に対してほとんど効果を示さなかった。チオベリトンはビンクリス チン、トリメトレキセート及びアントラピラゾール、Ｃｌ−９３７に対してＰ３ ８８Ｒ細胞を十分に感作した。チオベリトンは細胞内の薬物水準を増すことによ り１１ＤＲのＰ３８８細胞を感作する。その化学感作活性が血清タンパク質との 結合により消失するアミオダロンと異なり、ＭＤＩ？細胞中におけるチオベリト ンの活性は血清タンノくり質により変わらないようである。アドリアマイシンに 感受性のＰ３８８細胞（Ｐ３８８Ｓ）及びアドリアマイシンに耐性のＰ３８８細 胞（Ｐ３８ｇ／八〇Ｒ）へ研究を実行する場合、種々の濃度の抗癌薬に単独で又 は変更剤若しくは感作剤の５μｇ／ｍｌと一緒に７２時間さらした。この結果を 次の表Ｉに示すが、ここでは抗癌薬の単独又は変更剤と組み合わせた場合の効果 を７２時間の細胞増殖を５０％阻害する濃度であるＩＤ５゜で表す。

表■においてＴｌ０Ｐはチオベリトンを意味し、ＶＥＲはべラバミルを意味し、 モしてＣｓＡはサイクロスポリンＡを意味する。

（ＣＩ−９３７） ＣｓＡ　９５　１０８ ＶＥＲ２１３０ ＣｓＡ　２１　２７ ＣｓＡ　１１　１２ ＣｓＡ　１９．８　２５２ 註：ａ結果は各々３回の繰り返しで行った２回の実験の平均値である。

Ｐ３８８耐性細胞中におけるアドリアマイシンの活性を増す式Ｉの化合物の能力 を証明する追加の研究の結果を次の表■に示す。

表Ｉと表■に示すデータを得るために使用したＰ３８８ネズミ白血病細胞は５ｏ ｕｔｈｅｒｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ（Ｂｉｒ＠ｉｎｇｈａｍ 、＾Ｌ）から入手し、そして担腫瘍ＤＢ＾／２マウスの腹水液から培養し、そし て１０％馬血清、１０μＭ２−メルカプトエタノール及びゲンタマイシン（５０ μ９／ＩＩＬ）を補ったフィッシャー培地で維持した。細胞をコールタ−カウン ター、ＺＦ型装置（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、　Ｉｎｃ、。

Ｂｉａｌｅａｈ、　ＦＬ）を用いて計数した。生死判別はトリバンブルー排除に より測定した。一般的な方法理論はＷ、　Ｄ。

Ｋｌｏｈｓ等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、４６巻、４３５２〜４３５６ ページ（１９８６年９月）及びＷ、Ｄ、Ｋｌｏｈｓ等、Ｊ、Ｎａｔ’１．　Ｃａ ｎｃｅｒＩｎｓｔ、、　７５巻、３５３〜３５９ページ（１９８５年）により記 述されている。

本発明の実施における式１の化合物の使用を、更に次の患者の治療の例により例 証する。

ＭＤＲ白血病を持ち、そしてＭＤＲ群に含まれることが知られている薬品を用い る抗癌治療に反応しないことが確認された患者が３日間にわたって次のチオペリ トン及びアドリアマイシンの投薬治療を受ける。

治療口　アドリアマイシン　チオペリトン１　１５００舅９ ２　６０ｍｇ／冨２　１０００肩９ ３　６０翼９／Ｉｔ”　１０００翼９ ４　６０ｍｑｌ■”　１０００ｍｇ ５６０真ｇ／鱈２１０００麓９ ７　１０００富９ 治療に引き続き、白血病細胞の骨髄及び／又は血液の水準を観察することにより 結果を測定する。

チャートＩ 要　約　書 １つ又は複数の抗癌剤を用いる治療に対して耐性になった癌細胞をキナゾリンジ オン化合物で処理することからなる前記細胞を感作する方法。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. １．癌細胞を次の式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘは３〜７個の炭素原子を持つアルキレン鎖であり；Ｒ１及びＲ２の各 々は水素、塩素、フッ素、臭素又は１〜４個の炭素原子を持ちそして直鎖又は分 岐鎖である低級アルコキシ基であり；Ｒ３は水素又は１〜３個の炭素原子を持つ 直鎖又は分岐鎖の低級アルキルであり；Ｒ４及びＲ５の各々は水素、塩素、フッ 素、臭素又は１〜４個の炭素原子を持ちそして直鎖又は分岐鎖である低級アルキ ルチオ基であるものとし、但しＲ４及びＲ５の１つは水素以外のものである）の 化合物；又はその医薬的に許容される酸付加塩の抗癌剤に対する多剤耐性を逆転 させることが可能な量で処理することからなる癌細胞における抗癌剤に対する多 剤耐性を逆転させる方法。
2. ２．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘは３〜７個の炭素原子を持つアルキレン鎖であり；Ｒ１及びＲ２の各 々は水素、塩素、フッ素、臭素又は１〜４個の炭素原子を持ちそして直鎖又は分 岐鎖である低級アルコキシ基であり；Ｒ３は水素又は１〜３個の炭素原子を持つ 直鎖又は分岐鎖の低級アルキルであり；Ｒ４及びＲ５の各々は水素、塩素、フッ 素、臭素又は１〜４個の炭素原子を持ちそして直鎖又は分岐鎖である低級アルキ ルチオ基であって、但しＲ４及びＲ５の１つは水素以外である）の化合物；又は その医薬的に許容される酸付加塩の有効な量で多剤耐性癌細胞を処理することか らなる多剤耐性癌細胞を抗癌剤に対して感受性にする方法。
3. ３．多剤に対して耐性の癌細胞を持つ患者に抗癌剤及び次の式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘは３〜７個の炭素原子を持つアルキレン鎖であり；Ｒ１及びＲ２の各 々は水素、塩素、フッ素、臭素又は１〜４個の炭素原子を持ちそして直鎖又は分 岐鎖である低級アルコキシ基であり；Ｒ３は水素又は１〜３個の炭素原子を持つ 直鎖又は分岐鎖の低級アルキルであり；Ｒ４及びＲ５の各々は水素、塩素、フッ 素、臭素又は１〜４個の炭素原子を持ちそして直鎖又は分岐鎖である低級アルキ ルチオ基であって、但しＲ４及びＲ５の１つは水素以外である）の化合物；又は その医薬的に許容される酸付加塩の耐性細胞を抗癌剤に対して感受性にすること が可能な量を投与することからなる多剤に対して耐性の癌細胞を持つ患者の治療 方法。
4. ４．次の一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘは３〜７個の炭素原子を持つアルキレン鎖であり；Ｒ１及びＲ２の各 々は水素、塩素、フッ素、臭素又は１〜４個の炭素原子を持ちそして直鎖又は分 岐鎖である低級アルコキシ基であり；Ｒ３は水素又は１〜３個の炭素原子を持つ 直鎖又は分岐鎖の低級アルキルであり；Ｒ４及びＲ５の各々は水素、塩素、フッ 素、臭素又は１〜４個の炭素原子を持ちそして直鎖又は分岐鎖である低級アルキ ルチオ基であって、但しＲ４及びＲ５の１つは水素以外である）の化合物；又は その医薬的に許容される酸付加塩の薬物蓄積を増加させることが可能な量で多剤 耐性癌細胞を処理することからなる多剤耐性癌細胞における薬物蓄積と細胞毒性 を増加させる方法。