JPH0556780A - ラツカーゼ阻害剤および用途 - Google Patents

ラツカーゼ阻害剤および用途

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JPH0556780A
JPH0556780A JP3247086A JP24708691A JPH0556780A JP H0556780 A JPH0556780 A JP H0556780A JP 3247086 A JP3247086 A JP 3247086A JP 24708691 A JP24708691 A JP 24708691A JP H0556780 A JPH0556780 A JP H0556780A
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hydroxyglycine
bilirubin
oxidase
browning
hadacidin
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JP3247086A
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Sawao Murao
澤夫 村尾
Yuuji Hinode
裕二 日野出
Takashi Shin
隆志 新
Eiko Matsumura
瑛子 松村
Hisatoku Jin
久徳 神
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 ハダシジン及び／又はＮ−ヒドロキシグリシ
ンを除草剤、褐変防止剤、化粧料並びにビリルビンオキ
シダーゼのラッカーゼ作用阻害剤として使用する。 【構成】 ハダシジン及び／又はＮ−ヒドロキシグリシ
ンを除草剤、食品の褐変防止剤、メラニン色素形成阻害
剤としての化粧料に応用する。更にこれらをビリルビン
オキシダーゼと共存させ、酸化酵素−ペルオキシダーゼ
−色原体の系において、ビリルビンオキシダーゼの色原
体への反応を抑制するがビリルビンへの反応は阻害しな
いことにより臨床検査分野でのビリルビンの測定干渉を
回避或いは軽減させる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ラッカーゼ阻害剤及び
その用途に関する。更に詳細にはラッカーゼ阻害剤とし
てのハダシジン或いはＮ−ヒドロキシグリシンに関し、
更に該阻害剤を用いた除草剤、褐変防止剤、化粧料或い
は臨床検査用試薬への用途に関する。
【０００２】具体的には例えば、よもぎ等の除草剤、じ
ゃがいもやりんご等の野菜類の褐変防止剤、皮膚化粧
料、臨床検査で使用されるビリルビンオキシダーゼのラ
ッカーゼ作用阻害剤等への利用に関する。
【０００３】除草剤、褐変防止剤、皮膚化粧料としては
ラッカーゼ作用阻害剤としての作用を利用する。また、
臨床検査の分野での利用としては、該ラッカーゼ阻害剤
を生体成分の酸化酵素−ペルオキシダーゼ−色原体系で
測定するに際して、生体成分中のビリルビンの干渉を回
避又は軽減することのためにビリルビンオキシダーゼを
用いる反応系に添加することによって、ビリルビンオキ
シダーゼのラッカーゼ作用を防止するものである。
【０００４】除草剤、褐変防止剤、皮膚化粧料の利用と
してラッカーゼ阻害剤としては従来ではいろいろな合成
薬剤が利用され、更に天然物質としてはコウジ酸等が利
用されているが、コウジ酸以外の他の天然成分による同
様の作用を期待できる物質の開発が望まれていた。
【０００５】臨床検査分野では生体成分を酸化酵素−ペ
ルオキシダーゼ−色原体系で測定するに際しての、ビリ
ルビンの干渉は未だ解決されていない大きな問題であっ
た。
【０００６】ビリルビンによる上記測定系での干渉機序
としては主に下記のようなものが挙げられる。 （１）ビリルビンの特異吸収（４５０ｎｍ付近）による
直接的影響 （２）ビリルビンがペルオキシダーゼの水素供与体とな
る。 （３）ビリルビンが生成した呈色色素に作用して色素を
分解する。
【０００７】ビリルビンの血清中での濃度は正常人では
１ｍｇ／ｄｌ以下であるが、疾病により２０ｍｇ／ｄｌ
に達することもあり、その影響を如何に回避するかが臨
床検査上重大な課題である。
【０００８】
【従来の技術】カット野菜類の褐変防止としては、リン
酸塩や亜硫酸塩が使われてきたが食品衛生上の問題から
使用が禁止され、同様の目的でアスコルビン酸やコウジ
酸が利用されてきたがその効果は十分とはいえなかった
（特開平２−３１６６１、特開平２−６９１５６、特開
平２−２７３１４０）。
【０００９】化粧料としては皮膚の表面に発生するソバ
カス等を薄くするためにハイドロキノン類等が利用され
ているがその副作用などに問題があり、化粧料への応用
は困難であった。更にコウジ酸単独或いは他の成分を混
用して応用する例なども報告されているが、その効果は
満足できるものではなかった（特開平１−１２１２０
５、特開平３−１１０１０、特開平２−１５０１７）。
【００１０】臨床検査分野におけるビリルビンの干渉を
回避する方法としては、例えばフェリシアン化物、アス
コルビン酸又はＥＤＴＡ−鉄錯体を添加する方法、或い
はマッシュルーム起源のビリルビン特異性菌性酵素又は
ビリルビンオキシダーゼを反応系に添加してビリルビン
を消去する方法（特公昭５５−２５８４０号、特開昭５
５−１３８６５６号、特開昭５５−２９７１８号、特開
昭５７−７１３９８号、特開昭５９−１８０００号）等
が知られているが、何れも欠点があり、充分に満足でき
る方法とはいえなかった。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ラッカーゼ
阻害作用を有する物質を広く自然界より検索し、ペニシ
リウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に属する菌株が上
記の目的の物質を生産することをみいだし、該物質を同
定したところハダシジン及びハダシジンの加水分解物で
あるＮ−ヒドロキシグリシンであることを見いだして完
成したものである。
【００１２】ハダシジンは化学式Ｃ3Ｈ5ＮＯ4（分子量
１１９．０８）で表される抗癌性抗生物質として知ら
れ、アデニロコハク酸シンテターゼを基質Ｌ−アスパラ
ギン酸に対して拮抗的に阻害し、アデニンヌクレオチド
の生合成を抑制する作用があることが知られている。し
かし、本物質がラッカーゼ作用を阻害することは知られ
ていない。加えて、本物質の加水分解物であるＮ−ヒド
ロキシグリシンにもこの作用があることは全く知られて
いなかった。
【００１３】即ち、本発明の特徴とするところはハダシ
ジン或いはＮ−ヒドロキシグリシンを有効成分とするラ
ッカーゼ阻害剤であり、これを除草剤、褐変防止剤、化
粧料および臨床検査用試薬への応用を提供するところに
ある。
【００１４】より詳しくは、臨床検査用試薬の利用分野
としてはビリルビンオキシダーゼとの併用が考えられ
る。
【００１５】ビリルビンオキシダーゼはビリルビンに作
用してビリベルジンを経てほぼ無色の生成物に変化せし
める結果、ビリルビンの特異吸収を減少させると共にビ
リルビンの還元性をなくす。更に、この酵素は過酸化水
素を生成しない特徴を有するため、ビリルビンの干渉除
去のためには特に有用な方法である。
【００１６】しかしながらビリルビンオキシダーゼは測
定系の試薬に含まれる、４−アミノアンチピリン、フェ
ノール、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−
（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）−ｍ−トル
イジン（以下、ＴＯＯＳという）等と若干の反応性があ
るため、ブランク値を上昇させるという欠点がある。
【００１７】本発明はこのような欠点を改良し、ビリル
ビンオキシダーゼによるビリルビンの干渉を回避又は軽
減し、臨床検査の測定精度を向上することを可能にする
技術をも提供するものである。
【００１８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記のよう
な問題点を解決して目的を達成するために鋭意研究を重
ねた結果、ハダシジン、Ｎ−ヒドロキシグリシンがラッ
カーゼを強く阻害することを見いだした。
【００１９】本発明における除草剤、褐変防止剤、化粧
料について先ず述べる。本発明にはハダシジン及び／又
はＮ−ヒドロキシグリシンを主たる有効成分とするが、
これに従来利用されてきた各種の薬剤を併用しても良
い。
【００２０】除草剤、褐変防止剤、化粧料としての配合
量は任意に選択できるが、通常は０．００１から１０％
が配合される。
【００２１】次いで、臨床検査用試薬への応用について
述べる。本発明者らは、検討を重ねることによって、ハ
ダシジン及び／又はＮ−ヒドロキシグリシンがビリルビ
ンオキシダーゼの４−アミノアンチピリン、フェノー
ル、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン又はＴＯＯＳ等の色原体
への反応は阻害するが、ビリルビンへの作用はほとんど
阻害しないことを見いだし、この物質を酸化酵素−ペル
オキシダーゼ−色原体系の測定にビリルビンオキシダー
ゼと共存させることによって、ビリルビンオキシダーゼ
によってビリルビンを消去して干渉作用を回避する事が
でき、同時にビリルビンオキシダーゼによる測定系への
影響を回避することができることを見いだし本発明を完
成した。特にＮ−ヒドロキシグリシンにその作用が強い
ことを見いだした。
【００２２】即ち、本発明の要旨は試料とりわけ臨床検
査で用いるような血清、血漿、尿などの検体中に含まれ
る生体成分を酸化酵素−ペルオキシダーゼ−色原体系で
測定するに際し、ビリルビンオキシダーゼ、Ｎ−ヒドロ
キシグリシンを添加しビリルビンを消失させ生体成分を
測定する方法であり、この方法によりビリルビンの干渉
は回避又は軽減される。
【００２３】本発明においてのハダシジンは、本発明者
等が土壌より分離したペニシリウム属に属する菌株〔本
菌株はペニシリウム・エスピー ＹＨ−３１（Ｐｅｎｉ
ｃｉｌｌｉｕｍ ＳＰ． ＹＨ−３１）と命名され、工
業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第１２４４
５号（ＦＥＲＭ Ｐ−１２４４５）として寄託されてい
る。〕（以下、ＹＨ−３１株という。）が生産すること
をみいだし、更に加水分解してＮ−ヒドロキシグリシン
をも生産することをみいだした。
【００２４】ハダシジンはＹＨ−３１株を試験例１の条
件で培養・精製して生産することができ、Ｎ−ヒドロキ
シグリシンは試験例２に従って調製することができる。
【００２５】更にハダシジン、Ｎ−ヒドロキシグリシン
は試験例３の様な合成法によっても製造することができ
る。
【００２６】ハダシジン及びＮ−ヒドロキシグリシンは
ビリルビンオキシダーゼの４−アミノアンチピリン、フ
ェノール、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン又はＴＯＯＳ等の
色原体に対する反応活性は阻害するが、ビリルビンに対
する活性はほとんど阻害しない性質を有する。
【００２７】ビリルビンオキシダーゼは、ミロセシウム
（Ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）属、トリコデルマ（Ｔｒｉ
ｃｈｏｄｅｒｍａ）属又はコプリナス（Ｃｏｐｒｉｎｕ
ｓ）属に属する菌株より生産される酵素である。
【００２８】本発明における酸化酵素−ペルオキシダー
ゼ−色原体の測定とは定量しようとする成分から過酸化
水素を生成させる酸化酵素を利用するものである。例え
ばグルコースオキシダーゼを用いたグルコースの測定、
コレステロールオキシダーゼを用いたコレステロールの
測定、ガラクトースオキシダーゼを用いたガラクトース
の測定、ウリカーゼを用いた尿酸の測定、アミンオキシ
ダーゼを用いたスペルミジンの測定等が挙げられる。
【００２９】色原体としては、４−アミノアンチピリン
とフェノールの組み合わせが主に利用される。そのほか
に感度を上げるために３−メチル−２−ベンゾチアゾリ
ノンヒドラゾンとＮ，Ｎ−ジメチルアニリンの組み合わ
せ、４−アミノアンチピリンとｐ−クロルフェノールの
組み合わせ、４−アミノアンチピリンとＴＯＯＳの組み
合わせ、４−アミノアンチピリンと３−メチル−Ｎ−
（β−ヒドロキシエチル）−アニリンの組み合わせ、４
−アミノアンチピリンとＮ−エチル−Ｎ−（３−メチル
フェニル）−Ｎ’−アセチルエチレンジアミンの組み合
わせ等多くの色原体が利用されるようになった。またこ
れらは適宜組み合わせを変えても利用される。
【００３０】以下、試験例、実施例で本発明を詳細に説
明する。試験例１ ＹＨ−３１株の培養およびハダシジンの精製 培地組成 肉エキス １ ％ ＮａＣｌ ０．５ ％ アデカノール ０．０１％ ペプトン １ ％ グルコース １ ％ ｐＨ ７．２
【００３１】培養条件 培養温度 ３０ ℃ 攪拌 ２００ ｒｐｍ 通気量 ２０ ｌ（１vvm） ２０ｌ培地 ／ ３０ｌ ジャーファメンター
【００３２】精製法 ２規定の水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整した培養
ろ液２０ｌに、活性炭２００ｇを加え、２時間攪拌して
不純物を活性炭に吸着させた。ろ紙（ＴＯＹＯろ紙Ｎ
ｏ．２）を用いて活性炭を吸引ろ別後、イオン交換水１
ｌで２回洗浄し、洗浄液もろ液に加えた。このろ液を１
ｌまで減圧濃縮した後、凍結乾燥した。乾燥物をメタノ
ール１ｌで３回抽出後、メタノールを減圧溜去し、残渣
を水２００ｍｌに溶解させ、エタノール５００ｍｌを加
えて結晶化を行い粗結晶９．９ｇを得た。粗結晶９．９
ｇを水１００ｍｌに溶解し、脱色用活性炭１．０ｇを加
え１時間攪拌後、ろ紙にてろ過した。ろ液にエタノール
３００ｍｌを加えて再結晶を行い、ハダシジンのＮａ塩
７．８ｇを得た。
【００３３】試験例２ Ｎ−ヒドロキシグリシンの調製試験例１ で得られたハダシジンのＮａ塩６．５ｇを６５
ｍｌの水に溶解し、１００ｍｌカラムにつめた陽イオン
交換樹脂（Ｈ+型）に通した後、更に２００ｍｌの水を
流し洗浄した。この陽イオン交換樹脂通過液と洗浄液を
合わせ５０ｍｌまで減圧濃縮した後、トリフルオロ酢酸
１．０ｍｌ加え、沸騰水浴中で８分間加熱した。この溶
液を減圧乾固し１０ｍｌの水で３回洗浄後、３５ｍｌの
水を加え加熱溶解し室温に放置することにより１．１ｇ
のＮ−ヒドロキシグリシンを得た。
【００３４】試験例３ ハダシジン、Ｎ−ヒドロキシグ
リシンの合成 グリオキシル酸オキシムの合成 ヒドロキシルアミン ＋ グリオキシル酸 → グリオキシル酸オキシム H2NOH・HCL OHC-COOH・H2O HO-N=CH-COOH
【００３５】塩酸ヒドロキシルアミン７ｇとグリオキ
シル酸一水和物９．２ｇを２５ｍｌの水で溶解し、室温
で一夜攪拌後、２５ｍｌのエーテルで抽出する。このエ
ーテル抽出液を無水硫酸マグネシウムで脱水し、ろ紙で
ろ過、減圧乾固後、エーテルで再結晶することにより
７．１ｇのグリオキシル酸オキシムを得た。
【００３６】 Ｎ−ヒドロキシグリシンの合成 グリオキシル酸オキシム シアノ水素化ホウ素ナトリウム Ｎ−ヒドロキシグリシ ン HO-N=CH-COOH −−−−−−−−−→ HO-NH-CH2-COOH NaBH3CN
【００３７】メタノール５０ｍｌに１．０５ｇのシア
ノ水素化ホウ素ナトリウムと２．２３ｇのグリオキシル
酸オキシムを溶解し、塩酸でｐＨ２以下に調製、室温で
１時間攪拌後減圧乾固する。２０ｍｌ水を加えガスが出
なくなるまで緩く加熱後、冷却結晶化した。結晶を水で
再結晶することにより、０．３４ｇのＮ−ヒドロキシグ
リシンを得た。
【００３８】 ハダシジンの合成 Ｎ−ヒドロキシグリシン ＋ 蟻酸 → ハダシジン HO-NH-CH2-COOH HCOOH OHC-N(OH)-CH2-COOH
【００３９】９１ｍｇのＮ−ヒドロキシグリシンに
１．７ｍｌの蟻酸と０．４ｍｌの無水酢酸を加え、５０
℃で１０分間加熱した減圧濃縮した。残渣を２ｍｌの水
に溶解し、２規定の水酸ナトリウムでｐＨ７に調製後、
減圧濃縮し、水−エタノール系で再結晶することにより
９２ｍｇのハダシジンを得た。
【００４０】試験例４ 試験例１で得られたハダシジン
と試験例２で得られたＮ−ヒドロキシグリシンの諸性質
【００４１】 ハダシジンＮａ塩 Ｎ−ヒドロキシグリシン −−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−− 分子量(マススヘ゜クトル) （フリー １１９） ９１ 元素分析 Ｃ3Ｈ4ＮＯ4Ｎａ Ｃ2Ｈ5ＮＯ3 理論値： C:25.54,H:2.86,N:9.92,Na:16.3 C:26.37,H:5.53,N:15.38 分析値： C:25.36,H:2.75,N:9.87,Na:16.1 C:26.03,H:5.40,N:15.00 旋光度[α]D(27℃) ０°(c=1.00,H20) ０°(c=0.50,H20) 紫外線吸収スヘ゜クトル 末端吸収 末端吸収 融点 １９８〜１９９℃（dec.） １４１〜１４２℃(dec.) 溶解度 水 易溶 難溶 メタノール 溶 不溶 アセトン 不溶 不溶 発色試薬 ニンヒト゛リン ＋ ＋ 塩化第二鉄 ＋ −
【００４２】赤外線吸収スペクトル及び各磁気共鳴ス
ペクトルは試験例３で合成したハダシジン、Ｎ−ヒドロ
キシグリシンと一致した。
【００４３】試験例５ Ｎ−ヒドロキシグリシンのビリ
ルビンオキシダーゼ阻害作用の検討 ビリルビンオキシダーゼ（２．５μｇ）１００μｌとＮ
−ヒドロキシグリシン（５０〜１００μｇ）１００μｌ
を３７℃、１０分インキュベーション後、２０μｇ／ｍ
ｌビリルビン含有の０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
８．４）を２．５ｍｌ添加し、３７℃で反応させる。４
４０ｎｍの吸光度の減少を測定することにより、酵素活
性を求めた。
【００４４】Ｎ−ヒドロキシグリシンに代えて、水を用
いた場合の酵素活性をコントロールとして阻害活性を求
めた。
【００４５】試験例６ ビリルビンオキシダーゼのＮ，
Ｎ−ジエチルアニリンに対する活性阻害作用の検討 ビリルビンオキシダーゼ（５０μｇ）１００μｌとＮ−
ヒドロキシグリシン（２５〜１００μｇ）１００μｌを
３７℃，１０分インキュベーション後、４ｍＭのＮ，Ｎ
−ジエチルアニリン含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
６．０）を２．５ｍｌ添加し、３７℃で反応させる。４
７２ｎｍの吸光度の増加を測定することにより、酵素活
性を求めた。
【００４６】Ｎ−ヒドロキシグリシンに代えて水を使用
した場合の酵素活性をコントロールとして阻害率を求め
た。
【００４７】試験例７ ビリルビンオキシダーゼの４−
アミノアンチピリン−フェノールに対する活性阻害作用
の検討 ビリルビンオキシダーゼ（１００μｇ）１００μｌとＮ
−ヒドロキシグリシン（２５〜１００μｇ）１００μｌ
を３７℃，１０分インキュベーション後、２．５ｍＭの
４−アミノアンチピリンと０．１７ｍＭのフェノール含
有の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）を２．５ｍｌ
添加し、３７℃で反応させる。５１０ｎｍの吸光度の増
加を測定することにより、酵素活性を求めた。
【００４８】Ｎ−ヒドロキシグリシンの代わりに水を使
用した場合の酵素活性をコントロールとして阻害率を求
めた。
【００４９】試験例８ ビリルビンオキシダーゼの４−
アミノアンチピリン−ＴＯＯＳに対する活性阻害作用の
検討 ビリルビンオキシダーゼ（５０μｇ）１００μｌとＮ−
ヒドロキシグリシン（２５〜１００μｇ）１００μｌを
３７℃，１０分インキュベーション後、０．３ｍＭの４
−アミノアンチピリンと１．０ｍＭのＴＯＯＳ含有の
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）を２．５ｍｌ添加
し、３７℃で反応させる。５５５ｎｍの吸光度の増加を
測定することにより、酵素活性を求めた。
【００５０】Ｎ−ヒドロキシグリシンの代わりに水を使
用した場合の酵素活性をコントロールとして阻害率を求
めた。
【００５１】試験例９ ビリルビンオキシダーゼの４−
アミノアンチピリン−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリンに対す
る活性阻害作用の検討 ビリルビンオキシダーゼ（５０μｇ）１００μｌとＮ−
ヒドロキシグリシン（２５〜１００μｇ）１００μｌを
３７℃，１０分インキュベーション後、０．３ｍＭの４
−アミノアンチピリンと１．０ｍＭのＮ，Ｎ−ジエチル
アニリン含有の０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）を
２．５ｍｌ添加し、３７℃で反応させる。５５０ｎｍの
吸光度の増加を測定することにより、酵素活性を求め
た。
【００５２】Ｎ−ヒドロキシグリシンの代わりに水を使
用した場合の酵素活性をコントロールとして阻害率を求
めた。試験例５〜試験例９の結果を表１に示す。
【００５３】
【表１】
【００５４】上記の結果より、Ｎ−ヒドロキシグリシン
はビリルビンオキシダーゼのビリルビンに対する活性は
ほとんど阻害しないが、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、４
−アミノアンチピリンとフェノールの組み合わせ、４−
アミノアンチピリンとＴＯＯＳの組み合わせ、４−アミ
ノアンチピリンとＮ，Ｎ−ジエチルアニリンの組み合わ
せに対しての反応活性は強く阻害することが判る。
【００５５】以下の実施例において、ハダシジン、Ｎ−
ヒドロキシグリシンは、ＨＹ−３１株より精製したもの
を使用し、他は食添規格のものを用いた。
【００５６】
【実施例】実施例１ よもぎの枯死試験 よもぎの幼苗３０本を約１０ｃｍの高さ（４〜５枚の
葉）の段階でポットに移植し、そのまま１週間育種し
た。１週間後、生育状態が平均的になるように１０本づ
つ３つのグループに分けた。それぞれのグループに水
（対象区）、０．０２５重量％のハダシジン水溶液、
０．０２５重量％のＮ−ヒドロキシグリシン水溶液を葉
の表面が湿る程度に噴霧し、葉の状態を肉眼で観察し
た。経時的な変化を表２に示した。
【００５７】
【表２】
【００５８】表中の記号は、下記の基準で示した。 −：変化なし ±：葉が僅かに黄色化 ＋：葉が萎れる ++：葉が枯れる
【００５９】表２に示すようにハダシジン、Ｎ−ヒドロ
キシグリシン処理区では、対象区に比較してよもぎの葉
の枯死に効果が見られた。
【００６０】実施例２ じゃがいもの褐変防止 市販のじゃがいもを洗浄し皮をむいた後スライスし、１
００ｇづつ３群に分けた。それぞれを、水（対照）、
０．３重量％のハダシジン水溶後、０．３重量％のＮ−
ヒドロキシグリシン水溶液に１分間浸漬し、軽く水切り
した後プラスチックトレイに載せラップで覆い、室温
（２０℃）に放置し褐変の様子を肉眼で観察した。経時
的な褐変を表３に示した。
【００６１】
【表３】
【００６２】表中の記号は下記の基準で示した。 −：変化（褐変）なし ±：僅かに褐変 ＋：褐変あり ++：かなり褐変
【００６３】表３に示すようにハダシジン、Ｎ−ヒドロ
キシグリシン処理区では、対象区と比較して、じゃがい
もの褐変の防止効果が認められた。
【００６４】実施例２ りんごの褐変 市販のりんごを皮をむいた後スライスし、１００ｇづつ
３群に分けた。それぞれを実施例１と同様に、水（対
照）、０．３重量％のハダシジン水溶液、０．３重量％
のＮ−ヒドロキシグリシン水溶液に１分間浸漬し、軽く
水切りした後プラスチックトレイに載せラップで覆い、
室温（２０℃）に放置し褐変の様子を肉眼で観察した。
経時的な褐変を表４に示した。
【００６５】
【表４】
【００６６】表中の記号は下記の基準で示した。 −：変化（褐変）なし ±：僅かに褐変 ＋：褐変あり ++：かなり褐変
【００６７】表４に示すようにハダシジン、Ｎ−ヒドロ
キシグリシン処理区では、対象区と比較してりんごの褐
変の防止効果が認められた。
【００６８】実施例３ ごぼうの褐変防止 市販のごぼうを洗浄し皮をむいた後すばやくスライス
し、１００ｇづつ３群に分けた。それぞれを実施例１と
同様に、水（対照）、０．３重量％のハダシジン水溶
液、０．３重量％のＮ−ヒドロキシグリシン水溶液に１
分間浸漬し、軽く水切りした後プラスチックトレイに載
せラップで覆い、室温（２０℃）に放置し褐変の様子を
肉眼で観察した。経時的な褐変を表５に示した。
【００６９】
【表５】
【００７０】表中の記号は下記の基準で示した。 −：変化（褐変）なし ±：僅かに褐変 ＋：褐変あり ++：かなり褐変
【００７１】表５に示すようにＮ−ヒドロキシグリシン
処理区では、対象区と比較してごぼうの褐変の防止効果
が認められた。
【００７２】実施例４ 山芋の褐変防止 市販の山芋を洗浄し皮をむいた後おろし金ですりおろ
し、２０ｇづつ５群に分けた。それぞれに、表６に示し
た各種溶液（Ａ）〜（Ｄ）を０．５ｍｌ添加し、無処理
区（対象区）では水０．５ｍｌを添加し、よく混合した
後プラスチックトレイに載せラップで覆い、室温（２０
℃）に放置し褐変の様子を肉眼で観察した。尚、褐変防
止の増強剤としてアスコルビン酸を添加した。経時的な
褐変を表７に示した。
【００７３】
【表６】
【００７４】
【表７】
【００７５】表中の記号は下記の基準で示した。 −：変化（褐変）なし ±：僅かに褐変 ＋：褐変あり ++：かなり褐変
【００７６】表７に示すように処理区（Ｃ）では、対象
区と比較して山芋の褐変の防止効果が認められた。
【００７７】実施例５ 味噌の褐変防止 蒸煮した米にハダシジン又はＮ−ヒドロキシグリシンと
市販の種麹の混合物を添加し、３日間、２８℃で麹を作
った。その後、食塩及び蒸し大豆と共に２０ｌビーカー
に仕込み、室温（２０℃）、２ヶ月間熟成させた。その
後、熟成した味噌の中心から一部とり、測色計ＮＤ−１
００１ＤＰ（日本電色社製）をもちいて、色の測定を行
った。その結果を表８に示した。
【００７８】
【表８】
【００７９】表８に示すようにハダシジン、Ｎ−ヒドロ
キシグリシン添加区では、対象区と比較してともに味噌
の褐変化を抑制していることを確認した。
【００８０】実施例６ 太陽暴露試験 健常男子５名の上背部と前腕部にそれぞれ５×５ｃｍの
部位を４カ所づづ設けた。各部位に表９に示した試料
Ａ、試料Ｂ及び試料Ｃをそれぞれ５０ｍｇ均一に塗布し
た。又、対象区には水５０ｍｌ塗布した。上背部と前腕
部のそれぞれの部位を太陽直射光に４時間暴露させ、赤
斑の発生状態を４時間後と１日後の肉眼で観察した。そ
の結果を表１０（４時間後）、表１１（１日後）に示
す。
【００８１】
【表９】
【００８２】
【表１０】
【００８３】
【表１１】
【００８４】表中の記号は、下記の基準でその人数を示
した。 −：変化（赤斑）なし ±：僅かに赤斑 ＋：赤斑あり ++：かなり激しい赤斑
【００８５】表１０、表１１に示したように対象区、コ
ントロール（試料Ａ）と比較してハダシジン添加区（試
料Ｂ）、Ｎ−ヒドロキリシン添加区（試料Ｃ）は、赤班
の発生の抑制効果が認められた。
【００８６】実施例７ 試験管に以下に示す〜のサンプルを各０．１ｍｌ採
り、その後下記の試薬Ａを添加し３７℃，５分インキュ
ベーションした。その後、試薬Ｂを添加し３７℃、５分
反応し、５５５ｎｍの吸光度を測定した。同様に、ビリ
ルビンオキシダーゼとＮ−ヒドロキシグリシンを含有し
ない試薬系でも測定した。
【００８７】サンプル ２０ｍｇ／ｄｌアルブミン結合ビリルビンを含む１
５ｍｇ／ｄｌのグルコース溶液 １０ｍｇ／ｄｌアルブミン結合ビリルビンを含む１
５ｍｇ／ｄｌのグルコース溶液 １５ｍｇ／ｄｌのグルコース溶液
【００８８】 試薬Ａ ０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０） ０．５ｍｌ （１．８ｍＭ ４−アミノアンチピリン含有） ２００ｍｇ／ｍｌ コール酸ナトリウム ０．１ｍｌ ８ｍｇ／ｍｌ Ｎ−ヒドロキシグリシン ０．５ｍｌ ビリルビンオキシダーゼ（３単位／ｍｌ） ０．１ｍｌ （ミロセシウム属起源）
【００８９】 試薬Ｂ ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０） ２．０ｍｌ 〔ＴＯＯＳ（１．５ｍＭ）、 グルコースオキシダーゼ（３０単位／ｍｌ） ペルオキシダーゼ（１０単位／ｍｌ） ムタロターゼ（１単位／ｍｌ）含有〕 結果を表１２に示す。
【００９０】
【表１２】
【００９１】ビリルビンオキシダーゼとＮ−ヒドロキシ
グリシンを含有しない試薬系ではビリルビンの干渉作用
を受けるが、ビリルビンオキシダーゼとＮ−ヒドロキシ
グリシンを含有した試薬系ではビリルビンの干渉が回避
されたことが判る。
【００９２】実施例８ 実施例７ において、ミロセシウム属起源のビリルビンオ
キシダーゼに代えてトリコデルマ属起源のビリルビンオ
キシダーゼを使用して同様にして行った。その結果、実
施例７と同様の結果となった。
【００９３】実施例９ 実施例７ で使用した〜のサンプルを試験管に各０．
１ｍｌ採り、その後下記の試薬Ａを添加し３７℃，５分
インキュベーションした。その後、試薬Ｂを添加し３７
℃、５分反応し、５５０ｎｍの吸光度を測定した。
【００９４】同様に、ビリルビンオキシダーゼとＮ−ヒ
ドロキシグリシンを含有しない試薬系でも測定した。 試薬Ａ ０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０） ０．５ｍｌ （１．８ｍＭの４−アミノアンチピリン含有） ２００ｍｇ／ｍｌコール酸ナトリウム ０．１ｍｌ ０．８ｍｇ／ｍｌのＮ−ヒドロキシグリシン ０．５ｍｌ ビリルビンオキシダーゼ（３単位／ｍｌ） ０．１ｍｌ （ミロセシウム属起源）
【００９５】 試薬Ｂ ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０） ２．０ｍｌ 〔ＴＯＯＳ（１．５ｍＭ）、 アジ化ナトリウム（５ｍＭ） グルコースオキシダーゼ（３０単位／ｍｌ） ペルオキシダーゼ（１０単位／ｍｌ） ムタロターゼ（１単位／ｍｌ）含有〕 結果を表１３に示す。
【００９６】
【表１３】
【００９７】ビリルビンオキシダーゼとＮ−ヒドロキシ
グリシンを含有した試薬系ではビリルビンの干渉が回避
されたことが判る。
【００９８】実施例１０ 試験管に以下に示す〜のサンプルを各０．１ｍｌ採
り、その後下記の試薬Ａを添加し３７℃，５分インキュ
ベーションした。その後、試薬Ｂを添加し３７℃、５分
反応し、５５０ｎｍの吸光度を測定した。同様に、ビリ
ルビンオキシダーゼとＮ−ヒドロキシグリシンを含有し
ない試薬系でも測定した。
【００９９】サンプル ２０ｍｇ／ｄｌアルブミン結合ビリルビンを含む５
０ｍｇ／ｄｌのコレステロール溶液 １０ｍｇ／ｄｌアルブミン結合ビリルビンを含む５
０ｍｇ／ｄｌのコレステロール溶液 ５０ｍｇ／ｄｌのコレステロール溶液
【０１００】 試薬Ａ ０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０） ０．５ｍｌ （１．８ｍＭの４−アミノアンチピリン含有） ２００ｍｇ／ｍｌコール酸ナトリウム ０．１ｍｌ ８ｍｇ／ｍｌのＮ−ヒドロキシグリシン ０．５ｍｌ ビリルビンオキシダーゼ（３単位／ｍｌ） ０．１ｍｌ （ミロセシウム属起源）
【０１０１】 試薬Ｂ ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０） ２．０ｍｌ 〔フェノール（０．０９％）、 コレステロールオキシダーゼ（１．５単位／ｍｌ）、 ペルオキシダーゼ（１０単位／ｍｌ）、 トリトンＸ−１００（０．１％）含有〕 結果を表１４に示す。
【０１０２】
【表１４】
【０１０３】ビリルビンオキシダーゼとＮ−ヒドロキシ
グリシンを含有しない試薬系ではビリルビンの干渉作用
を受けるが、ビリルビンオキシダーゼとＮ−ヒドロキシ
グリシンを含有した試薬系ではビリルビンの干渉が回避
されたことが判る。
【０１０４】実施例１１ 実施例１０ において、ミロセシウム属起源のビリルビン
オキシダーゼに代えてトリコデルマ属起源のビリルビン
オキシダーゼを使用して同様にして行った。その結果、
実施例１０と同様の結果となった。
【０１０５】
【発明の効果】本発明により、ハダシジン及び／又はＮ
−ヒドロキシグリシンを除草剤、褐変防止剤、化粧料等
に応用でき更にＮ−ヒドロキシグリシンがビリルビンオ
キシダーゼの４−アミノアンチピリン、フェノール、
Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン又はＴＯＯＳ等への反応は阻
害するが、ビリルビンへの作用はほとんど阻害しないこ
と利用して、この物質を酸化酵素−ペルオキシダーゼ−
色原体系の測定にビリルビンオキシダーゼと共存させる
ことによって、ビリルビンオキシダーゼによってビリル
ビンを消去して干渉作用を回避する事ができ、同時にビ
リルビンオキシダーゼによる測定系への影響を回避する
ことができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｑ 1/26 6807−4Ｂ 1/28 6807−4Ｂ

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】ハダシジン及び／又はＮ−ヒドロキシグリ
    シンを有効成分とするラッカーゼ阻害剤。
  2. 【請求項２】ハダシジン及び／又はＮ−ヒドロキシグリ
    シンを有効成分とする除草剤。
  3. 【請求項３】ハダシジン及び／又はＮ−ヒドロキシグリ
    シンを有効成分とする食品の褐変防止剤。
  4. 【請求項４】ハダシジン及び／又はＮ−ヒドロキシグリ
    シンを有効成分とする化粧料。
  5. 【請求項５】Ｎ−ヒドロキシグリシンを有効成分とする
    ビリルビンオキシダーゼのラッカーゼ作用阻害剤。
  6. 【請求項６】Ｎ−ヒドロキシグリシンによるビリルビン
    オキシダーゼのラッカーゼ作用を阻害する方法。
  7. 【請求項７】ビリルビンオキシダーゼによるビリルビン
    を消去する方法において、Ｎ−ヒドロキシグリシンを共
    存させることを特徴とするビリルビンの消去法。
  8. 【請求項８】酸化酵素、ペルオキシダーゼ及び色原体を
    用いる測定法において、ビリルビンオキシダーゼとＮ−
    ヒドロキシグリシンを共存させることを特徴とするビリ
    ルビンの干渉除去方法。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0228232A (ja) * 1988-04-22 1990-01-30 Sumitomo Chem Co Ltd 熱可塑性エラストマー組成物およびその製造方法
PL427085A1 (pl) * 2018-09-17 2019-05-06 Politechnika Wroclawska Zastosowanie hydrazydu kwasu 4-hydroksybenzoesowego oraz zastosowanie hydrazydo-hydrazonów pochodnych kwasu 4-hydroksybenzoesowego i aldehydów zawierających fragment aromatyczny

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JPH0228232A (ja) * 1988-04-22 1990-01-30 Sumitomo Chem Co Ltd 熱可塑性エラストマー組成物およびその製造方法
PL427085A1 (pl) * 2018-09-17 2019-05-06 Politechnika Wroclawska Zastosowanie hydrazydu kwasu 4-hydroksybenzoesowego oraz zastosowanie hydrazydo-hydrazonów pochodnych kwasu 4-hydroksybenzoesowego i aldehydów zawierających fragment aromatyczny
PL238660B1 (pl) * 2018-09-17 2021-09-20 Politechnika Wroclawska Zastosowanie hydrazydu kwasu 4-hydroksybenzoesowego oraz zastosowanie hydrazydo-hydrazonów pochodnych kwasu 4-hydroksybenzoesowego i aldehydów zawierających fragment aromatyczny

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