JPH055723A - 電気泳動用試薬供給方法および薄層試薬供給体 - Google Patents
電気泳動用試薬供給方法および薄層試薬供給体Info
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- JPH055723A JPH055723A JP3273856A JP27385691A JPH055723A JP H055723 A JPH055723 A JP H055723A JP 3273856 A JP3273856 A JP 3273856A JP 27385691 A JP27385691 A JP 27385691A JP H055723 A JPH055723 A JP H055723A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 電気泳動用試料への試薬の供給において、前
記試料の溶出が防止され、試薬側に生成物質が移るよう
なことがなく、試料中の水分の蒸発が防止され、一定量
の試薬を再現性よく展開することができ、測定データの
再現性が向上し、特別な技術を必要としないで、簡略に
処理する。 【構成】 試薬を電気泳動後の支持体内の水量で溶解で
きるように試薬濃度を設定して、これをバインダーによ
り薄層にし、この薄層を前記支持体に密着させることに
より、ほぼ瞬時に適切な量の試薬を支持体側に拡散し、
溶解させる。
記試料の溶出が防止され、試薬側に生成物質が移るよう
なことがなく、試料中の水分の蒸発が防止され、一定量
の試薬を再現性よく展開することができ、測定データの
再現性が向上し、特別な技術を必要としないで、簡略に
処理する。 【構成】 試薬を電気泳動後の支持体内の水量で溶解で
きるように試薬濃度を設定して、これをバインダーによ
り薄層にし、この薄層を前記支持体に密着させることに
より、ほぼ瞬時に適切な量の試薬を支持体側に拡散し、
溶解させる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、セルロースアセテート
膜、アガロース、寒天、ポリアクリルアミドゲル等の支
持体に、血清タンパク、アイソザイム、リポタンパク等
の分析試料を展開させ、これに試薬を反応させて、生成
した物質を測定する生化学検査や研究における電気泳動
法において、前記試薬を適切に前記支持体に供給する方
法および該試薬供給に好適な電気泳動用薄層試薬供給体
に関するものである。
膜、アガロース、寒天、ポリアクリルアミドゲル等の支
持体に、血清タンパク、アイソザイム、リポタンパク等
の分析試料を展開させ、これに試薬を反応させて、生成
した物質を測定する生化学検査や研究における電気泳動
法において、前記試薬を適切に前記支持体に供給する方
法および該試薬供給に好適な電気泳動用薄層試薬供給体
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、前記電気泳動法における支持体へ
の試薬の供給は、主に次の二通りの方法により行ってい
た。
の試薬の供給は、主に次の二通りの方法により行ってい
た。
【０００３】第１の方法は、使用前に溶解した試薬を、
図１に示すように、例えば、ピペット１により試薬を電
気泳動させた支持体２の全面に滴下し、この試薬を一定
時間支持体２に吸収させ、その後、余分の試薬を、図２
に示すように、ガラス棒３等により扱いて取り除く方法
である。
図１に示すように、例えば、ピペット１により試薬を電
気泳動させた支持体２の全面に滴下し、この試薬を一定
時間支持体２に吸収させ、その後、余分の試薬を、図２
に示すように、ガラス棒３等により扱いて取り除く方法
である。
【０００４】第２の方法は、使用前に溶解した試薬を、
図３に示すように、例えば、ピペット１により試薬を濾
紙またはセルロースアセテート膜等の含浸膜４に滴下、
吸収させ、図４、図５に示すように、この試薬含浸膜４
を電気泳動させた支持体２に密着させて支持体２に試薬
を供給する方法である。
図３に示すように、例えば、ピペット１により試薬を濾
紙またはセルロースアセテート膜等の含浸膜４に滴下、
吸収させ、図４、図５に示すように、この試薬含浸膜４
を電気泳動させた支持体２に密着させて支持体２に試薬
を供給する方法である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、前記図
１、図２で示した試薬を支持体全面に滴下する方法で
は、定められた試薬量を再現性よく支持体に吸収させる
ことが難しく、操作上高度な技術を必要とし、効率的で
ない。また、同方法では、支持体上の余分な試薬を取り
除く際に支持体から試料が溶出しやすく、溶出すると、
反応後のパターンの輪郭がぼやけたり、近傍のパターン
と重なり、測定が不可能になることがしばしば生じる。
１、図２で示した試薬を支持体全面に滴下する方法で
は、定められた試薬量を再現性よく支持体に吸収させる
ことが難しく、操作上高度な技術を必要とし、効率的で
ない。また、同方法では、支持体上の余分な試薬を取り
除く際に支持体から試料が溶出しやすく、溶出すると、
反応後のパターンの輪郭がぼやけたり、近傍のパターン
と重なり、測定が不可能になることがしばしば生じる。
【０００６】一方、前記図３〜図５で示した試薬含浸膜
を支持体に密着させる方法では、含浸膜から支持体へ試
薬を再現性よく吸収させるのが難しく、しかも操作が繁
雑であり、さらに、反応後に支持体に生じる生成物が含
浸膜側に移ってしまい、パターンの明瞭性を損なう場合
がある。
を支持体に密着させる方法では、含浸膜から支持体へ試
薬を再現性よく吸収させるのが難しく、しかも操作が繁
雑であり、さらに、反応後に支持体に生じる生成物が含
浸膜側に移ってしまい、パターンの明瞭性を損なう場合
がある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決するため
に、本発明の電気泳動用薄層試薬供給体は、少なくとも
前記電気泳動用の試薬とバインダーとの混合物からなる
試薬含有剤が薄層基体上に均一に付着されていることを
特徴とするものである。
に、本発明の電気泳動用薄層試薬供給体は、少なくとも
前記電気泳動用の試薬とバインダーとの混合物からなる
試薬含有剤が薄層基体上に均一に付着されていることを
特徴とするものである。
【０００８】また、本発明方法では、かかる構成の電気
泳動用薄層試薬供給体を、電気泳動された後の支持体薄
膜に密着することによって該支持体薄膜に電気泳動法用
の試薬を均一に供給する。
泳動用薄層試薬供給体を、電気泳動された後の支持体薄
膜に密着することによって該支持体薄膜に電気泳動法用
の試薬を均一に供給する。
【０００９】前記バインダーとしては、水溶性粘着剤が
好ましく、具体的には、ポリビニルアルコールやゼラチ
ンを挙げることができるが、特にポリビニルアルコール
が好ましく、また、これらに限定されるわけではなく、
他の水溶性粘着剤、例えば、澱粉でもよい。
好ましく、具体的には、ポリビニルアルコールやゼラチ
ンを挙げることができるが、特にポリビニルアルコール
が好ましく、また、これらに限定されるわけではなく、
他の水溶性粘着剤、例えば、澱粉でもよい。
【００１０】前記試薬としては、従来周知の試薬が用い
られる。例えば、ＬＤＨ（ラクテイト ディハイドロキ
ナーゼ）アイソザイム試薬を始め、ＣＫ（クレアチンキ
ナーゼ）アイソザイム試薬、アルカリフォスファターゼ
アイソザイム試薬、アミラーゼアイソザイム試薬、コレ
ステロール分画試薬、ＬＡＰ（ロイシンアミノペプチダ
ーゼ）アイソザイム試薬、γＧＴＰ（ガンマーグルタミ
ントランスペプチダーゼ）アイソザイム試薬、コリネス
テラーゼアイソザイム試薬、エノラーゼアイソザイム試
薬等の周知の他の試薬も同様に用いることができる。
られる。例えば、ＬＤＨ（ラクテイト ディハイドロキ
ナーゼ）アイソザイム試薬を始め、ＣＫ（クレアチンキ
ナーゼ）アイソザイム試薬、アルカリフォスファターゼ
アイソザイム試薬、アミラーゼアイソザイム試薬、コレ
ステロール分画試薬、ＬＡＰ（ロイシンアミノペプチダ
ーゼ）アイソザイム試薬、γＧＴＰ（ガンマーグルタミ
ントランスペプチダーゼ）アイソザイム試薬、コリネス
テラーゼアイソザイム試薬、エノラーゼアイソザイム試
薬等の周知の他の試薬も同様に用いることができる。
【００１１】前記薄層基体としては、主にポリエステル
フィルムが用いられるが、他の材質の薄膜材料でもよい
し、ラミネートフィルムでもよい。
フィルムが用いられるが、他の材質の薄膜材料でもよい
し、ラミネートフィルムでもよい。
【００１２】本発明の構成において実用上重要なこと
は、前記試薬含有剤中の試薬濃度を試薬の供給先である
支持体の水分量に比例して調整しておくことである。
は、前記試薬含有剤中の試薬濃度を試薬の供給先である
支持体の水分量に比例して調整しておくことである。
【００１３】本発明の試薬供給体が電気泳動後の支持体
に密着すると、試薬のほぼ全体量が支持体中に移行し、
密着後の試薬供給体中に残留する試薬量は移行試薬量に
比べ、無視できる量である。したがって、支持体の染色
に必要な支持体中試薬濃度を支持体中の含有水分に対し
て実現するだけの試薬量を試薬含有剤中に配合しておく
だけでよいことになる。
に密着すると、試薬のほぼ全体量が支持体中に移行し、
密着後の試薬供給体中に残留する試薬量は移行試薬量に
比べ、無視できる量である。したがって、支持体の染色
に必要な支持体中試薬濃度を支持体中の含有水分に対し
て実現するだけの試薬量を試薬含有剤中に配合しておく
だけでよいことになる。
【００１４】上記処理によって、本発明の試薬供給体
は、試薬を支持体中に過不足なく供給することができ、
その結果、支持体表面の残留試薬の除去に纏わる問題を
考慮しなくて済むことになる。
は、試薬を支持体中に過不足なく供給することができ、
その結果、支持体表面の残留試薬の除去に纏わる問題を
考慮しなくて済むことになる。
【００１５】
【作用】前記のように、本発明では、試薬を（電気泳動
後の）支持体内の含水量で溶解できるように試薬含量を
設定して、これをバインダーにより薄層にし、この薄層
を支持体に密着させることにより、ほぼ瞬時に適切な量
の試薬を支持体側に拡散し、溶解させることを特徴とし
ている。
後の）支持体内の含水量で溶解できるように試薬含量を
設定して、これをバインダーにより薄層にし、この薄層
を支持体に密着させることにより、ほぼ瞬時に適切な量
の試薬を支持体側に拡散し、溶解させることを特徴とし
ている。
【００１６】したがって、本発明によれば、従来のよう
に支持体表面の余分な残留試薬の除去操作を行わなくて
もよいので、試料の溶出が防止され、濾紙による試薬供
給のように試薬側に生成物質が移るようなこともない。
また、反応時には支持体の表面に本発明の薄層試薬供給
体の薄層基体が被覆された状態にあるので、支持体中の
水分の蒸発が防止され、一定量の試薬を再現性よく展開
することができ、測定データの再現性が著しく向上する
とともに、特別な技術を必要としないで処理することが
できる。さらに、使用直前に試薬を溶解する必要がなく
なるので、操作が簡略になる利点もある。
に支持体表面の余分な残留試薬の除去操作を行わなくて
もよいので、試料の溶出が防止され、濾紙による試薬供
給のように試薬側に生成物質が移るようなこともない。
また、反応時には支持体の表面に本発明の薄層試薬供給
体の薄層基体が被覆された状態にあるので、支持体中の
水分の蒸発が防止され、一定量の試薬を再現性よく展開
することができ、測定データの再現性が著しく向上する
とともに、特別な技術を必要としないで処理することが
できる。さらに、使用直前に試薬を溶解する必要がなく
なるので、操作が簡略になる利点もある。
【００１７】
【実施例】以下、本発明の実施例を説明するが、本発明
はなんらこれらの実施例により限定されるものではな
い。
はなんらこれらの実施例により限定されるものではな
い。
【００１８】以下の実施例１、２、３は、本発明をＬＤ
Ｈ(lactate dehydrogenase；乳酸脱水素酵素) アイソザ
イム法に用いるＬＤＨアイソザイム（isoenzyme ）試薬
に適用したものである。
Ｈ(lactate dehydrogenase；乳酸脱水素酵素) アイソザ
イム法に用いるＬＤＨアイソザイム（isoenzyme ）試薬
に適用したものである。
【００１９】（実施例１〜３で用いる薄層試薬体の試薬
含有剤（LDH アイソザイム試薬含有）の好ましい組成） ・DL- 乳酸リチウム ・・・ 50〜500 mM ・ＮＡＤ ・・・ 2〜 20 mM ・ジアホラーゼ ・・・ 2000〜20000 U/リット
ル ・ＭＴＴ ・・・ 1〜 6 mM ・ＮＴＢ ・・・ 0.2〜 2 mM ・ゼラチン ・・・ 2〜 10 ％ なお、前記組成において、 ＮＡＤ；ニコチンアミド アデニンジヌクレオチド ＭＴＴ；3-（4 ，5-ジメチル-2- チアゾリル-2，5-ジフ
ェニル-2Ｈテトラゾリウムブロマイド ＮＴＢ；ニトロテトラゾリウムブルー まず、ゼラチン50ｇを蒸留水１リットルに良くかき混ぜ
（約5 分）、膨潤させてから、湯煎（70℃）により良く
溶かした（5 ｗｔ％）。
含有剤（LDH アイソザイム試薬含有）の好ましい組成） ・DL- 乳酸リチウム ・・・ 50〜500 mM ・ＮＡＤ ・・・ 2〜 20 mM ・ジアホラーゼ ・・・ 2000〜20000 U/リット
ル ・ＭＴＴ ・・・ 1〜 6 mM ・ＮＴＢ ・・・ 0.2〜 2 mM ・ゼラチン ・・・ 2〜 10 ％ なお、前記組成において、 ＮＡＤ；ニコチンアミド アデニンジヌクレオチド ＭＴＴ；3-（4 ，5-ジメチル-2- チアゾリル-2，5-ジフ
ェニル-2Ｈテトラゾリウムブロマイド ＮＴＢ；ニトロテトラゾリウムブルー まず、ゼラチン50ｇを蒸留水１リットルに良くかき混ぜ
（約5 分）、膨潤させてから、湯煎（70℃）により良く
溶かした（5 ｗｔ％）。
【００２０】このようにしてゼラチンが良く溶けたら、
30℃まで冷やし、このゼラチン溶液１リットルに、電気
泳動に使用する支持体に必要な濃度（支持体の水分量に
対応した下記３種）になるように秤量した乳酸リチウ
ム、ＮＡＤ、ジアホラーゼ、ＭＴＴ、ＮＴＢを加え、遮
光状態で良く溶かした。
30℃まで冷やし、このゼラチン溶液１リットルに、電気
泳動に使用する支持体に必要な濃度（支持体の水分量に
対応した下記３種）になるように秤量した乳酸リチウ
ム、ＮＡＤ、ジアホラーゼ、ＭＴＴ、ＮＴＢを加え、遮
光状態で良く溶かした。
【００２１】 ・実施例１・・・乳酸リチウム： 120 mM、 ＮＡＤ ： 5 mM、 ジアホラーゼ： 6000 U/リットル、 ＭＴＴ ： 2 mM、 ＮＴＢ ： 0.6 mM ・実施例２・・・乳酸リチウム： 240 mM、 ＮＡＤ ： 10 mM、 ジアホラーゼ：12000 U/リットル、 ＭＴＴ ： 4 mM、 ＮＴＢ ： 1.2 mM ・実施例３・・・乳酸リチウム： 480 mM、 ＮＡＤ ： 20 mM、 ジアホラーゼ：20000 U/リットル、 ＭＴＴ ： 4 mM、 ＮＴＢ ： 1.2 mM 次に、以下の実施例４、５、６に対応した３種の試薬溶
液を調製した。この実施例４、５、６は、本発明をコレ
ステロール分画を用いた測定法に用いるコレステロール
分画試薬に適用したものである。
液を調製した。この実施例４、５、６は、本発明をコレ
ステロール分画を用いた測定法に用いるコレステロール
分画試薬に適用したものである。
【００２２】（実施例４〜６で用いる薄層試薬体の試薬
含有剤（コレステロール分画試薬含有）の好ましい組
成） ・コレステロールデヒドロキナーゼ ・・・ 4000〜 15000 U/リットル ・コレステロールエステラーゼ ・・・ 6000〜 20000 U/リットル ・ジアホラーゼ ・・・ 30000〜 150000 U/リットル ・ＮＡＤ ・・・ 5〜 20 mM ・ＭＴＴ ・・・ 2.5〜 10 mM ・ＰＶＡ（ポリビニルアルコール） ・・・ 2〜 5 ％ まず、ＰＶＡを蒸留水500 ミリリットルに所望濃度（例
えば、実施例４では４％）の倍濃度（８％）となるよう
に添加し、良くかき混ぜ、さらに、湯煎により良く溶か
した。このようにして得られたＰＶＡ溶液500 ミリリッ
トルに、ＭＴＴを所望の倍濃度となるように溶かした。
含有剤（コレステロール分画試薬含有）の好ましい組
成） ・コレステロールデヒドロキナーゼ ・・・ 4000〜 15000 U/リットル ・コレステロールエステラーゼ ・・・ 6000〜 20000 U/リットル ・ジアホラーゼ ・・・ 30000〜 150000 U/リットル ・ＮＡＤ ・・・ 5〜 20 mM ・ＭＴＴ ・・・ 2.5〜 10 mM ・ＰＶＡ（ポリビニルアルコール） ・・・ 2〜 5 ％ まず、ＰＶＡを蒸留水500 ミリリットルに所望濃度（例
えば、実施例４では４％）の倍濃度（８％）となるよう
に添加し、良くかき混ぜ、さらに、湯煎により良く溶か
した。このようにして得られたＰＶＡ溶液500 ミリリッ
トルに、ＭＴＴを所望の倍濃度となるように溶かした。
【００２３】これに対して、残りの成分をコレステロー
ルデヒドロキナーゼ、コレステロールエステラーゼ、ジ
アホラーゼ、ＮＡＤの順に所望の倍濃度になるように、
蒸留水500 ミリリットルに溶かした。
ルデヒドロキナーゼ、コレステロールエステラーゼ、ジ
アホラーゼ、ＮＡＤの順に所望の倍濃度になるように、
蒸留水500 ミリリットルに溶かした。
【００２４】前記２溶液を混合して電気泳動に使用する
支持体に必要な濃度（支持体の水分量に対応した下記３
種）の試薬溶液１リットルを得た。以上の混合溶解工程
は遮光状態で行った。
支持体に必要な濃度（支持体の水分量に対応した下記３
種）の試薬溶液１リットルを得た。以上の混合溶解工程
は遮光状態で行った。
【００２５】実施例４ ・コレステロールデヒドロキナーゼ ・・・ 7400 U/リットル ・コレステロールエステラーゼ ・・・ 9800 U/リットル ・ジアホラーゼ ・・・ 60000 U/リットル ・ＮＡＤ ・・・ 8.8 mM ・ＭＴＴ ・・・ 4.6 mM ・ＰＶＡ（ポリビニルアルコール） ・・・ 4 ％ 実施例５ ・コレステロールデヒドロキナーゼ ・・・ 11100 U/リットル ・コレステロールエステラーゼ ・・・ 14700 U/リットル ・ジアホラーゼ ・・・ 90000 U/リットル ・ＮＡＤ ・・・ 13.2 mM ・ＭＴＴ ・・・ 6.9 mM ・ＰＶＡ（ポリビニルアルコール） ・・・ 3 ％ 実施例６ ・コレステロールデヒドロキナーゼ ・・・ 14800 U/リットル ・コレステロールエステラーゼ ・・・ 19600 U/リットル ・ジアホラーゼ ・・・ 120000 U/リットル ・ＮＡＤ ・・・ 17.6 mM ・ＭＴＴ ・・・ 9.2 mM ・ＰＶＡ（ポリビニルアルコール） ・・・ 2 ％ 次に、上記組成の試薬溶液1 〜６を対応する支持体（セ
ルロースアセテート膜；乾燥膜厚100 μｍ〜200 μｍ）
の膜厚よりも薄くなるように、周知のコーティング装置
により、薄層基体として採用した50μｍ厚のポリエステ
ルフィルム（ロール）に厚さ50μｍだけ（連続的に）コ
ーティングし、付属の乾燥装置により乾燥した。
ルロースアセテート膜；乾燥膜厚100 μｍ〜200 μｍ）
の膜厚よりも薄くなるように、周知のコーティング装置
により、薄層基体として採用した50μｍ厚のポリエステ
ルフィルム（ロール）に厚さ50μｍだけ（連続的に）コ
ーティングし、付属の乾燥装置により乾燥した。
【００２６】このように試薬溶液のコーティング厚さを
支持体の厚さより薄くするのは、本発明の薄層試薬供給
体と支持体とを密着させた際に、薄層試薬供給体の方が
厚いと支持体中の生成物が薄層試薬体内に移動してくる
可能性が高くなるからである。
支持体の厚さより薄くするのは、本発明の薄層試薬供給
体と支持体とを密着させた際に、薄層試薬供給体の方が
厚いと支持体中の生成物が薄層試薬体内に移動してくる
可能性が高くなるからである。
【００２７】前記試薬溶液のコーティング厚は、試薬溶
液のゼラチン濃度の調整と、試薬溶液の温度およびコー
ティング速度の調整により調節することができる。
液のゼラチン濃度の調整と、試薬溶液の温度およびコー
ティング速度の調整により調節することができる。
【００２８】このようにして得た薄層試薬供給体は、プ
リンターにより一度に必要とする長さ毎にストップマー
クを印刷し、検知機を有する切断機により決められた回
数用に切断してロールとしてもよいし、一枚毎の使用を
目的として単葉に切断してもよい。
リンターにより一度に必要とする長さ毎にストップマー
クを印刷し、検知機を有する切断機により決められた回
数用に切断してロールとしてもよいし、一枚毎の使用を
目的として単葉に切断してもよい。
【００２９】単葉として使用する場合は、図６に示すよ
うに、薄層基体10の上に試薬含有剤11を付着、乾燥さ
せ、単葉に切断された薄層試薬供給体の塗布面側にカバ
ー（例えば、38μｍ厚のポリエステルフィルム）12をそ
の一辺12a においてヒートシールすることにより取り付
ける。この時、カバー12を基体10に対して幾分ずらして
置き、カバー12をめくり易くすることが好ましい。
うに、薄層基体10の上に試薬含有剤11を付着、乾燥さ
せ、単葉に切断された薄層試薬供給体の塗布面側にカバ
ー（例えば、38μｍ厚のポリエステルフィルム）12をそ
の一辺12a においてヒートシールすることにより取り付
ける。この時、カバー12を基体10に対して幾分ずらして
置き、カバー12をめくり易くすることが好ましい。
【００３０】このようにカバー12を設けることにより、
試薬含有剤11の乾燥および表面汚染を防ぐことができ、
後述のように、試薬を供給する支持体への密着性を向上
させ、密着時の周囲装置への汚染をも防止することがで
きる。
試薬含有剤11の乾燥および表面汚染を防ぐことができ、
後述のように、試薬を供給する支持体への密着性を向上
させ、密着時の周囲装置への汚染をも防止することがで
きる。
【００３１】なお、上記カバー12の取付け構成は、主に
薄層試薬供給体を製造後短時間内に使用する場合のもの
である。製造後から使用するまで時間がかかると想定さ
れる場合は、カバーは、その周囲の全辺においてヒート
シールし、使用直前まで試薬面を塵埃の侵入、付着や、
過度の乾燥から保護することが必要となる。このような
構成の薄層試薬供給体は、使用直前に自動切断装置等に
より一辺を除いて他のシール部分を切り離し、図６に示
したような状態にして用いる。
薄層試薬供給体を製造後短時間内に使用する場合のもの
である。製造後から使用するまで時間がかかると想定さ
れる場合は、カバーは、その周囲の全辺においてヒート
シールし、使用直前まで試薬面を塵埃の侵入、付着や、
過度の乾燥から保護することが必要となる。このような
構成の薄層試薬供給体は、使用直前に自動切断装置等に
より一辺を除いて他のシール部分を切り離し、図６に示
したような状態にして用いる。
【００３２】なお、図６中において符号13は前記したス
トップマークである。
トップマークである。
【００３３】前記構成の薄層試薬供給体は、その使用時
に、人手もしくは自動機械により、電気泳動された支持
体に向って送られ、そのカバー12をめくり上げられ、試
薬含有剤11と支持体とが対向接触された状態でカバー12
が下ろされ、支持体を基体10とカバー12とで挟み込む形
でローラー等により軽く圧接されて支持体と試薬含有剤
11とが密着される。密着されると同時に試薬含有剤11中
の試薬は支持体中に拡散、溶解する。この試薬の移行
は、支持体中の水分量に応じて試薬含有剤11中の試薬量
が決められてあるので、必要充分なだけ行われ、しかも
支持体の表面に余分な試薬が残留することもない。
に、人手もしくは自動機械により、電気泳動された支持
体に向って送られ、そのカバー12をめくり上げられ、試
薬含有剤11と支持体とが対向接触された状態でカバー12
が下ろされ、支持体を基体10とカバー12とで挟み込む形
でローラー等により軽く圧接されて支持体と試薬含有剤
11とが密着される。密着されると同時に試薬含有剤11中
の試薬は支持体中に拡散、溶解する。この試薬の移行
は、支持体中の水分量に応じて試薬含有剤11中の試薬量
が決められてあるので、必要充分なだけ行われ、しかも
支持体の表面に余分な試薬が残留することもない。
【００３４】この試薬の移行工程において、従来の方法
では、試薬濃度が分かっていても、電気泳動した支持体
に吸収される試薬濃度は、吸収の度合と希釈により反応
に関与する濃度は分からない。これに対し、本発明で
は、容易に支持体に供給された濃度を求めることができ
る。例えば、実施例１の試薬をタイタンIII セルロース
アセテート膜(Helena Loboratories Corporation製; 寸
法76×60mm) に対して使用すると、次の計算で支持体中
の供給試薬濃度を求めることができる。すなわち、セル
ロースアセテート膜が保持する水分700 マイクロリット
ル、同寸法に塗られた試薬はセルロースアセテート膜の
面積と厚さ50μｍにより228 マイクロリットルとなり、
この試薬は乾燥され、700 マイクロリットルで溶解され
るのであるから、約1 ／3 の濃度となる。したがって、
試薬濃度は、乳酸リチウム：40mM、ＮＡＤ：1.7mM 、ジ
アホラーゼ：2000Ｕ／リットル、ＭＴＴ：0.7mM 、ＮＢ
Ｔ：0.2mM である。
では、試薬濃度が分かっていても、電気泳動した支持体
に吸収される試薬濃度は、吸収の度合と希釈により反応
に関与する濃度は分からない。これに対し、本発明で
は、容易に支持体に供給された濃度を求めることができ
る。例えば、実施例１の試薬をタイタンIII セルロース
アセテート膜(Helena Loboratories Corporation製; 寸
法76×60mm) に対して使用すると、次の計算で支持体中
の供給試薬濃度を求めることができる。すなわち、セル
ロースアセテート膜が保持する水分700 マイクロリット
ル、同寸法に塗られた試薬はセルロースアセテート膜の
面積と厚さ50μｍにより228 マイクロリットルとなり、
この試薬は乾燥され、700 マイクロリットルで溶解され
るのであるから、約1 ／3 の濃度となる。したがって、
試薬濃度は、乳酸リチウム：40mM、ＮＡＤ：1.7mM 、ジ
アホラーゼ：2000Ｕ／リットル、ＭＴＴ：0.7mM 、ＮＢ
Ｔ：0.2mM である。
【００３５】上記のようにして反応が終了した後は、支
持体から薄層試薬体が剥離され、支持体上の分画パター
ンが測定される。
持体から薄層試薬体が剥離され、支持体上の分画パター
ンが測定される。
【００３６】上記のような操作手順にしたがって前記実
施例1 〜６の電気泳動用薄層試薬体をそれぞれに対応す
る支持体に密着させて試薬を供給したところ、それぞれ
の支持体に良好な分画パターンが得られた。
施例1 〜６の電気泳動用薄層試薬体をそれぞれに対応す
る支持体に密着させて試薬を供給したところ、それぞれ
の支持体に良好な分画パターンが得られた。
【００３７】前記実施例では、試薬としてＬＤＨアイソ
ザイム試薬およびコレステロール分画試薬の場合につい
て説明したが、この試薬に限らず、ＣＫアイソザイム試
薬、アルカリフォスファターゼアイソザイム試薬、アミ
ラーゼアイソザイム試薬、ＬＡＰアイソザイム試薬、γ
ＧＴＰアイソザイム試薬、コリネステラーゼアイソザイ
ム試薬、エノラーゼアイソザイム試薬等の周知の他の試
薬にも同様に適用することができる。
ザイム試薬およびコレステロール分画試薬の場合につい
て説明したが、この試薬に限らず、ＣＫアイソザイム試
薬、アルカリフォスファターゼアイソザイム試薬、アミ
ラーゼアイソザイム試薬、ＬＡＰアイソザイム試薬、γ
ＧＴＰアイソザイム試薬、コリネステラーゼアイソザイ
ム試薬、エノラーゼアイソザイム試薬等の周知の他の試
薬にも同様に適用することができる。
【００３８】
【発明の効果】以上説明したように、本発明は、試薬を
（電気泳動後の）支持体内の水量で溶解できるように試
薬濃度を設定して、これをバインダーにより薄層にし、
この薄層を支持体に密着させることにより、ほぼ瞬時に
適切な量の試薬を支持体側に拡散し、溶解させることを
特徴としている。したがって、本発明によれば、試料の
溶出防止が防止され、試薬側に生成物質が移るようなこ
とがない。また、反応時には支持体の表面に薄層基体が
被覆された状態にあるので、支持体中の水分の蒸発が防
止され、一定量の試薬を再現性よく展開することがで
き、測定データの再現性が著しく向上するとともに、特
別な技術を必要としないで処理することができる。さら
に、使用直前に試薬を溶解する必要がなくなるので、操
作が簡略になる利点もある。
（電気泳動後の）支持体内の水量で溶解できるように試
薬濃度を設定して、これをバインダーにより薄層にし、
この薄層を支持体に密着させることにより、ほぼ瞬時に
適切な量の試薬を支持体側に拡散し、溶解させることを
特徴としている。したがって、本発明によれば、試料の
溶出防止が防止され、試薬側に生成物質が移るようなこ
とがない。また、反応時には支持体の表面に薄層基体が
被覆された状態にあるので、支持体中の水分の蒸発が防
止され、一定量の試薬を再現性よく展開することがで
き、測定データの再現性が著しく向上するとともに、特
別な技術を必要としないで処理することができる。さら
に、使用直前に試薬を溶解する必要がなくなるので、操
作が簡略になる利点もある。
【図１】電気泳動処理後の支持体への従来の試薬供給方
法を説明する斜視図である。
法を説明する斜視図である。
【図２】電気泳動処理後の支持体への従来の試薬供給方
法を説明する斜視図である。
法を説明する斜視図である。
【図３】電気泳動処理後の支持体への従来の試薬供給方
法を説明する斜視図である。
法を説明する斜視図である。
【図４】電気泳動処理後の支持体への従来の試薬供給方
法を説明する斜視図である。
法を説明する斜視図である。
【図５】電気泳動処理後の支持体への従来の試薬供給方
法を説明する斜視図である。
法を説明する斜視図である。
【図６】本発明にかかる電気泳動用薄層試薬供給体の一
実施例を示す斜視図である。
実施例を示す斜視図である。
１ ピペット ２ 支持体 ３ ガラス棒 ４ 含浸膜 10 薄層基体 11 試薬含浸剤 12 カバー 12ａ カバーの一辺 13 ストップマーク
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】 セルロースアセテート、アガロース、寒
天、ポリアクリルアミドゲル、澱粉等の材料から構成さ
れている支持体薄膜に試料が塗布され、電気泳動された
後に、該支持体薄膜に密着されることによって該支持体
薄膜に電気泳動法用の試薬を均一に供給する電気泳動用
薄層試薬供給体であって、少なくとも前記電気泳動用の
試薬とバインダーとの混合物からなる試薬含有剤が薄層
基体上に均一に付着されていることを特徴とする電気泳
動用薄層試薬供給体。 【請求項２】 前記試薬含有剤の乾燥後の膜厚が前記支
持体薄膜の膜厚より薄いことを特徴とする請求項１記載
の電気泳動用薄層試薬供給体。 【請求項３】 前記試薬含有剤中の試薬含有量が前記電
気泳動後の支持体中の水分量に比例することを特徴とす
る請求項１または２に記載の電気泳動用薄層試薬供給
体。 【請求項４】 前記バインダーがゼラチンであることを
特徴とする請求項１ないし３のいずれかに記載の電気泳
動用薄層試薬供給体。 【請求項５】 前記バインダーがポリビニルアルコール
であることを特徴とする請求項１ないし３のいずれかに
記載の電気泳動用薄層試薬供給体。 【請求項６】 前記薄層基体がポリエステルフィルムで
あることを特徴とする請求項１ないし５のいずれかに記
載の電気泳動用薄層試薬供給体。 【請求項７】 前記薄層基体の試薬含有剤塗布側にカバ
ーが開閉自在に取り付けられていることを特徴とする請
求項１ないし６のいずれかに記載の電気泳動用薄層試薬
供給体。 【請求項８】 セルロースアセテート、アガロース、寒
天、ポリアクリルアミドゲル、澱粉等の材料から構成し
た支持体薄膜に試料を塗布し、電気泳動した後に、該支
持体薄膜に電気泳動法用の試薬を均一に供給する電気泳
動用試薬供給方法であって、少なくとも前記電気泳動用
の試薬とバインダーとの混合物からなる試薬含有剤を薄
層基体上に均一に付着して薄層試薬供給体を構成し、こ
の試薬供給体を前記支持体薄膜に密着させることにより
該支持体薄膜に前記試薬を供給することを特徴とする電
気泳動用試薬供給方法。 【請求項９】 前記試薬含有剤中の試薬含有量を前記電
気泳動後の支持体中の水分量に比例させることを特徴と
する請求項８に記載の電気泳動用試薬供給方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3273856A JPH055723A (ja) | 1990-11-05 | 1991-10-22 | 電気泳動用試薬供給方法および薄層試薬供給体 |
| EP19910118791 EP0484864A3 (en) | 1990-11-05 | 1991-11-04 | Method for supplying reagent for electrophoresis and thin layer reagent supplier for electrophoresis |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29705890 | 1990-11-05 | ||
| JP2-297058 | 1990-11-05 | ||
| JP3273856A JPH055723A (ja) | 1990-11-05 | 1991-10-22 | 電気泳動用試薬供給方法および薄層試薬供給体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH055723A true JPH055723A (ja) | 1993-01-14 |
Family
ID=26550796
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3273856A Pending JPH055723A (ja) | 1990-11-05 | 1991-10-22 | 電気泳動用試薬供給方法および薄層試薬供給体 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0484864A3 (ja) |
| JP (1) | JPH055723A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006266921A (ja) * | 2005-03-24 | 2006-10-05 | Shimadzu Corp | 分析試料調製用溶媒 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3105958B2 (ja) * | 1991-09-13 | 2000-11-06 | 株式会社ヘレナ研究所 | 生化学検査用反応装置 |
| ZA95227B (en) * | 1994-01-14 | 1995-09-12 | Siegbert Heinrich Bissbort | Gel electrophoresis |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4055394A (en) * | 1976-10-18 | 1977-10-25 | Akzona Incorporated | Diagnostic test card |
| JPS5622956A (en) * | 1979-07-09 | 1981-03-04 | Corning Glass Works | Manufacture of reagenttbinding agent film |
| EP0209576A1 (en) * | 1985-01-25 | 1987-01-28 | WALSH, James William | Membrane processing system and method |
| CA1240736A (en) * | 1985-12-19 | 1988-08-16 | Robert E. Emmons | Use of dry analytical elements to determine electrically separated analytes |
| JPH0668494B2 (ja) * | 1987-08-20 | 1994-08-31 | 富士写真フイルム株式会社 | アルブミン分析用一体型多層分析要素 |
| JPH01101453A (ja) * | 1987-10-15 | 1989-04-19 | Fuji Photo Film Co Ltd | 被分析物質の検出方法 |
-
1991
- 1991-10-22 JP JP3273856A patent/JPH055723A/ja active Pending
- 1991-11-04 EP EP19910118791 patent/EP0484864A3/en not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006266921A (ja) * | 2005-03-24 | 2006-10-05 | Shimadzu Corp | 分析試料調製用溶媒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0484864A2 (en) | 1992-05-13 |
| EP0484864A3 (en) | 1993-02-10 |
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