JPH056559B2 - - Google Patents

Info

Publication number
JPH056559B2
JPH056559B2 JP58039146A JP3914683A JPH056559B2 JP H056559 B2 JPH056559 B2 JP H056559B2 JP 58039146 A JP58039146 A JP 58039146A JP 3914683 A JP3914683 A JP 3914683A JP H056559 B2 JPH056559 B2 JP H056559B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
csf
stability
stable
inhibitor
inactivated
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP58039146A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS59166089A (ja
Inventor
Masayoshi Ono
Kunitake Hirashima
Masami Betsusho
Ikuo Imazeki
Hitoshi Nomura
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chugai Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority to JP58039146A priority Critical patent/JPS59166089A/ja
Priority to EP84102620A priority patent/EP0118908A3/en
Publication of JPS59166089A publication Critical patent/JPS59166089A/ja
Publication of JPH056559B2 publication Critical patent/JPH056559B2/ja
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はCSF（コロニー刺激因子）抑制物質に
関する。
本発明者等はヒトの甲状腺癌細胞より樹立した
CSF産生細胞株T3M−５株を培養している際、
CSFの高濃度含有液は濃度に依存したCSF活性を
示さず、低下傾向が見ろれることに気づき、この
知見に基づき検討の結果、CSF抑制物質の分離に
成功し本発明を完成するに至つた。
本発明のCSF抑制物質は次の理化学的性質を有
する。
(1) 分子量：ゲル過法で５〜６万セアデツクス
Ｇ−75（フアルマシア社製）を用いたゲル過
法によつた。
カラムサイズ；直径10mm、高さ1000mm ペツト体積；78.5ml 流速；4.0ml／hr 溶出溶液；0.15MNacl含有0.01M−トリス塩酸
緩衝液（pH7.4） 以下に示す標準蛋白の溶出液量から検量線を求
め、CSF抑制物質の溶出液量から分子量を決定し
た。
γ−Glcbulin 160000 Albumin 66000 Ovalbumin 45000 Chymotrypsinogen Ａ 25700 Cytochrome Ｃ 12400 (2) 等電点：pH4.7 セフアデツクスIEF（フアルマシア社製）を
用いたフラツトベツト等電点電気泳動法によつ
た。Phfrmalyte（フアルマシア社製）を用いて
８ワツトで45分間前泳動してpH勾配（2.5〜
5.0）を作成したのち、CSF抑制物質（144mg）
を添加し60ワツトで５時間泳動させてCSF活性
抑制物質作用を調べ、等電点を決定した。
(3) pH安定性：pH5〜９で安定。pH3以下およ
び11以上で失活する。
0.01M−トリス塩酸緩衝液中にCSF抑制物質
を加え、氷冷下24時間放置したのち、0.01M−
トリス塩酸緩衝液（pH7）に対して１昼夜透析
後CSF抑制活性を調べた。
(4) 紫外部吸収：280nｍに局大吸収を有する。
(5) 酵素反応：DNase（3.175IU）、RNase
（761U）及びトリプシン（0.2％）では失活せ
ず、プロナーゼ（科研化学製）（0.5IU）で完全
に失活する。
(6) 温度安定性：37℃で安定56℃、30分でほぼ失
活。
このような性質は従来よりCSF抑制物質として
知られるPG−Ｅ、chalone、ラクトフエリン、血
清中のリポ蛋白、インターフエロン等とはその分
布、分子量、等電点等においてそれぞれ相違し、
新規物質であることを示している。また、培養時
添加するFCSそのものを後記実施例と同様に処理
しても抑制物質は検出できなかつたので、本抑制
物質が血清由来のものでないことは明らかであ
る。
本発明のCSF抑制物質は上記性質の他にCSFに
依存せず分裂増殖を続けれヒトの白血病細胞株Ｋ
−562に対して正常細胞には影響を与えない極め
て低濃度でそのコロニー形勢を抑制するという性
質を有し抗白血病剤としても期待される。
実施例 ヒト甲状腺癌より株化されたCSF産生細胞であ
るT3M−５細胞（この細胞は1981年日本血液学
会に於いてCSFの生産性について発表され、東京
大学第三内科、財団法人実験動物中央研究所及び
中外製薬株式会社研究所等に保存されている。）
を1.0〜2.0×107コずつ10％FCS含有Ｆ−10培地
500ｍ１に懸濁し、ローラボトル中37℃、で１週
間回転培養した（0.5rpm）。
同時に培養した20本のローラボトル中の培養上
漬を合し（約101）濃縮後、0.01％Tween20及び
0.15MNacl含有0.01Mトリス塩酸緩衝液pH7.4で
膨潤・平均化したセフアデツクスＧ−75（フアル
マシア社製）によりゲル過し、分子量５〜６万
の画分を分取する。
得られた画分をDEAEセルフアロースCL−6B
に吸着させ、塩濃度を0.04M、0.08M及び0.15M
と段階的に上昇させて溶出する。次いで0.5M−
Nacl含有0.1Mクエン酸緩衝液（pH5）で溶出さ
れる画分をCSF抑制物質画分とした。
このようにして得られたCSF抑制物質画分７ml
中の蛋白量は1000mgであつた。
十分量のCSF存在下でのマウス骨髄細胞を用い
るコロニーアツセイ法で本画分の蛋白量約1200μ
ｇ添加によつて90％阻害が見られたた。尚、ヒト
骨髄細胞に対しては約120μｇ２￥90％阻害が見
られた。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ CSF産生の培養液中に蓄積され、次の理化学
    的性質を有するCSF抑制物質。 １ 分子量：ゲル過法で５〜６万 ２ 等電点：pH4.7 ３ pH安定性：pH5〜９で安定。pH3以下およ
    び11以上で失活する。 ４ 紫外部吸収：280nｍに極大吸収を有する。 ５ 各種酵素に対する安定性：DNase
    （3.175IU）、RNase（76IU）及びトリプシン（0.2
    ％）では失活せず、プロナーゼ（科研化学製）
    （0.5IU）で完全に失活する。 ６ 温度安定性：37℃で安定56℃、30分でほぼ失
    活。
JP58039146A 1983-03-11 1983-03-11 Ｃｓｆ抑制物質 Granted JPS59166089A (ja)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP58039146A JPS59166089A (ja) 1983-03-11 1983-03-11 Ｃｓｆ抑制物質
EP84102620A EP0118908A3 (en) 1983-03-11 1984-03-09 Csf inhibitory substance

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP58039146A JPS59166089A (ja) 1983-03-11 1983-03-11 Ｃｓｆ抑制物質

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS59166089A JPS59166089A (ja) 1984-09-19
JPH056559B2 true JPH056559B2 (ja) 1993-01-26

Family

ID=12544964

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP58039146A Granted JPS59166089A (ja) 1983-03-11 1983-03-11 Ｃｓｆ抑制物質

Country Status (2)

Country Link
EP (1) EP0118908A3 (ja)
JP (1) JPS59166089A (ja)

Also Published As

Publication number Publication date
JPS59166089A (ja) 1984-09-19
EP0118908A2 (en) 1984-09-19
EP0118908A3 (en) 1987-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Saklatvala et al. Purification to homogeneity of pig leucocyte catabolin, a protein that causes cartilage resorption in vitro
Mizel Studies on the purification and structure-function relationships of murine lymphocyte activating factor (interleukin 1)
JP2562192B2 (ja) 血清アルブミンの純化方法
JP2509407B2 (ja) 生物学的に活性な化合物の単離方法
HU196832B (en) Process for separating plasma proteins from cell cultures
JPH0381290A (ja) 精製されたアルブミン溶液の製造方法
JPH05500602A (ja) 微生物学的に生成されたキモシンの回収方法
Lappin et al. Monocyte C1‐inhibitor synthesis in patients with C1‐inhibitor deficiency
Chaga et al. Isolation and characterization of catalase from Penicillium chrysogenum
Krystal et al. CM Affi‐Gel Blue chromatography of human urine: a simple one‐step procedure for obtaining erythropoietin suitable for in vitro erythropoietic progenitor assays
Malhotra Purification and characterization of dicoumarol-induced prothrombins. III. Alumina pH 4.6 atypical (2-Gla)+ variant
Echetebu et al. Multiple forms of human y-glutamyltransferase
Bassett Large scale preparation of wheat germ agglutinin
Prydz Studtes on Proconvertin (Factor VII) II. Purification
Larsson et al. Characterization of a human mitogenic factor (MF) released by phytohemagglutinin-activated lymphocytes
JPS62244441A (ja) 抗体固定化担体
JPS6226226A (ja) 抗腫瘍性ポリペプチド
RU2048521C1 (ru) Способ получения полипептида со свойствами лимфотоксина человека
US7365173B2 (en) Method for the production of pure virally inactivated butyrylcholinesterase
JPH022390A (ja) 新規なヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子
Mazitsos et al. Designed chimaeric galactosyl–mimodye ligands for the purification of Pseudomonas fluorescens β-galactose dehydrogenase
JPH0361440B2 (ja)
Slavik et al. [101] Purification of thymidylate synthetase from enzyme-poor sources by affinity chromatography
JPS59166089A (ja) Ｃｓｆ抑制物質
SU767121A1 (ru) Способ выделени и очистки трипсина и химотрипсина