JPH0569821B2 - - Google Patents

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請求の範囲 １ 構造式Ｉのシス−セコステロール及び構造式
のトランス−セコステロール 【化】 【化】 （式中、Ｒはメチル、エチル又はプロピルであ
り、X¹及びX²は独立に水素又はアセチル基を表
わす。） からなる群から選ばれる化合物。 ２ Ｒがメチルであり、X¹及びX²が水素を表わ
し、化合物が構造式のシス−セコステロールで
ある請求の範囲第１項記載の化合物。 ３ Ｒがエチルであり、X¹及びX²が水素を表わ
し、化合物が構造式のシス−セコステロールで
ある請求の範囲第１項記載の化合物。 ４ Ｒがプロピルであり、X¹及びX²が水素を表
わし、化合物が構造式のシス−セコステロール
である請求の範囲第１項記載の化合物。 明細書 本発明は白血病細胞の正常マクロフアージへの
分化（differentiation）のような悪性細胞の分化
を生起するのに有効な一群のセコステロール化合
物に関するものである。 悪性病に対する有用な治療法は悪性細胞の正常
細胞への分化を刺激し、それにより悪性転換を阻
止及び／又は逆転させる化合物を投与することで
ある。すなわち、スダら（米国特許第4391802号）
によつて1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物類
（例えば、特に1α，25−ジヒドロキシビタミンD₃
及び1α−ヒドロキシビタミンD₃）は、例えば、
悪性細胞（特に白血病細胞）の非悪性マクロフア
ージ（単球）への分化を生起する効能により示さ
れる強力な抗白血病活性を有していることが示さ
れた。それ故、これらの化合物はある種の悪性
病、特に白血病の治療に有用である。しかしなが
ら、そのような治療に用いられた場合、これらの
既知の1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物はまた
非常に強力なカルセミツク（calcemic）剤であ
るという欠点、すなわち、腸内カルシウム吸収を
刺激して血液カルシウム水準を上げ、骨カルシウ
ム吸収を生じさせるという欠点をもつている。こ
のカルセミツク活性は実にこれらの化合物のよく
知られた典型的な機能を表わすものである。さら
に、これらの化合物の細胞分化活性（及び、従つ
て、抗白血病活性）はそのカルセミツク活性に相
関している。例えば、悪性細胞のマクロフアージ
への分化を生起するのに最も強力な化合物である
１，25−ジヒドロキシビタミンD₃はまたカルシ
ウム輸送を刺激する、すなわち血清のカルシウム
水準を上げる最も強力なビタミンＤ代謝体であ
る。細胞分化剤として実際に使用するには、この
強力なカルセミツク活性は悪政細胞の分化に効力
を表わすのに必要とされる投与量では治療体に非
生理学的な高すぎる血清カルシウム水準をもたら
すことになるから、もちろん好ましくない副作用
である。 効果的な細胞分化（すなわち、悪性転換の逆
転）が上に述べた好ましくない副作用（強力なカ
ルセミツク作用）をもたない新規なセコステロー
ルによつて達成され得ることがここに見出され
た。この作用の選択性及び特殊性により本発明の
セコステロールは悪性細胞分化を達成するのに有
用かつ好ましい薬剤となるものである。 純粋に構造的には、この種のセコステロールは
既知の一部のビタミンＤ化合物群と類似性をもつ
ている。しかしなが、本発明のセコステロールは
既知のビタミンＤ化合物とは異なり、生体内にお
いて標準的なビタミンＤ活性、すなわち腸内カル
シウム輸送の刺激もしくは骨カルシウムの流通活
性を示さず、従つて、機能的観点からビタミンＤ
誘導体として分類することはできない。従来技術
の観点からすれば、これらのセコステロールが白
血病細胞の正常な（非悪性）マクロフアージへの
分化を生起するのに著しく有効であると発見され
たことは、上述したように既知のビタミンＤ関連
化合物の強力な細胞分化活性は常に強力なカルセ
ミツク活性に密接に相関していたのであるからか
えつて驚くべき、かつ、予期外のことである。こ
のように、本発明のセコステロールは上述した既
知のビタミンＤ関連抗白血病剤の欠点を克服する
ものであり、白血病のような悪性疾患の抑制及び
治療用の好ましい薬剤であると考えることができ
る。この発見は、これらセコステロールは患者に
悪性細胞の正常細胞への分化を起させるのに十分
な投与量を同時に非生理学的高度かつ有害な血液
カルシウム水準にもたらすことなく投与すること
ができるから悪性疾患治療に有効な方法を提供す
るものである。 このような濁特、かつ今まで知られていなかつ
た活性パターンを示す本発明のセコステロールは
構造式Ｉのシス−セコステロール及び構造式の
トランス−セコステロールからなる群から選ばれ
る化合物である。 【化】 【化】 式中Ｒはメチル、エチル又はプロピル基であ
り、X¹及びX²はそれぞれ独立に水素又はアセチ
ル基を表わす。 ここで、X¹及びX²をアセチル基以外のアシル
基とすることもできる。参考のために例示する
と、そのようなアシル基は、すべての異性体を含
む炭素原子数１〜６のアルカノイル基又はベンゾ
イル、又はハロー、ニトロー又はアルキル−置換
ベンゾイル基のようなアロイル基、又はオキサリ
ル、マロニル、スクシンノイル、グロタロイル、
又はアジポイルのようなジカルボキシルアシル基
である。アルキル基はすべての異性体を含む炭素
原子数１〜６の炭素水素基である。 セコステロール化合物の生物学的性質 人間の白血病細胞の分化に関する構造式の化合
物の生物学的活性 下記の検定に必要であつた薬品及び試薬は次の
ような商業的供給源から得た。４−β−ホルボー
ル12−ミリステート−13−アセテート（PAM）、
ニトロブル−テトラゾリウム（NBT）及びα−
酢酸ナフチル−エステラーゼ検定用試薬類（α−
酢酸ナフチル、濃厚トリズマル^TM
（TRIZMAL^TM）7.6緩衝液、メイヤーヘマトキシ
リン溶液、フアーストブルーPR塩、濃厚シトレ
ート、エチレングリコールモノメチルエーテル）
はミズリー州セントルイスのシグマ化学会社から
入手し、羊の赤血球（アルセバース溶液中細胞50
％）、子牛胎児血清及びRPM1−1640培地はニユ
ーヨーク州グランドアイランドのギブコ研究所か
ら入手し、羊の赤血球に対する兎の抗血清（兎ヘ
モリシン）はバージニア州マクレーンのフロー研
究所から入手した。 細胞培養：人間の白血病細胞（HL−60細胞）
の10mlアリコート（10％の子牛胎児血清を有する
RPMI−1640培地１mlあたり約２×10⁵個の細胞）
をペトリ皿上に平板状にひろげ５％CO₂雰囲気
下、37℃で培養した。16時間後、10〜20μのエ
タノールに溶解した種々の量の試験化合物（下記
の第１表に記載）をそれぞれ２枚の皿に投与し
た。対照培養にはエタノールのみを用いた。化合
物投与後４日に細胞を収穫し、それぞれのアリコ
ートを血球計数器下で計数した。試験化合物によ
つて生起された分化の程度を検定するため、収穫
した培養物はリン酸塩緩衝食塩液（PBS）に再
懸濁（約10⁶細胞／ml）させ、これらの細胞培養
物アリコートに下記の３種の検定をそれぞれ実施
した。 (a) 分化に対するニトロブル−テトラゾリウム
（NBT）還元検定 この検定は単球白血球は、ホルボールエステ
ルにより刺激されて超酸化物を生成することが
できるという事実に基づくものである。超酸化
物は可溶性ニトロブル−テトラゾリウム
（NBT）を黒青色の沈澱物であるホルマザンに
還元することができる性質により検出すること
ができる。HL−60細胞によつて示される
NBT−還元活性は、従つて、その非悪性単球
への分化の尺度を提供する。検定はジヤーナ
ル・オブ・セルラー・フイジオロジー118、277
（1984）記載のエンらの方法に準じて行つた。
NBT試薬は50mgのNBTと5μｇの4β−ホルボ
ール12−ミリステート−13−アセテートを50ml
のリン酸塩緩衝食塩水に溶解することにより調
整した。この試薬（200μ）を収穫した細胞
（約10⁶細胞／リン酸塩緩衝食塩水１ml）200μ
に添加した。混合物は37℃の水浴中で30分間培
養した。その後細胞数を計数し、NBTをフオ
ルマザン青に還元した細胞のパーセントを記録
した。結果は下記の第１表に示す。 (b) ロゼツト形成検定 この検定は分化した単球と兎の抗体及びマウ
スの補体を塗布した羊の赤血球との間にロゼツ
ト（rosetteバラ花）が形成されることに基づ
くものである。検定はインターナシヨナル・ジ
ヤーナル・オブ・キヤンサー15、731（1975）記
載のローテムサツクスの方法に準じて行つた。
羊の赤血球をリン酸塩緩衝食塩水で３回洗浄
し、0.5％（ｖ／ｖ）懸濁液に再懸濁した。赤
血球と等容積の兎の羊赤血球に対する抗血清の
１：1500溶液を混合し、37℃で30分間培養し
た。抗体塗布赤血球（EA）をPH7.0のリン酸塩
緩衝食塩水で３回洗浄し、0.5％（ｖ／ｖ）で
再懸濁した。新鮮なマスウの血液を回転分離し
血清を集めた。EAと等容積のマウス血清の
１：10溶液を混合し、37℃で30分間培養し、次
いでリン酸塩緩衝食塩水で３回洗浄し、抗体と
補体を塗布した赤血球（EAC）が１％（ｖ／
ｖ）濃度になるようにRPM1培地に再懸濁し、
100μのEACをHL−60細胞（RPM1 100μ
中約10⁶個の細胞）アリコートと混合し、37℃
で30分間培養し、その後500×ｇで３分間遠心
分離した。ペレツトを分散させ、EACと接合
した細胞数（すなわちロゼツタ数）を測定し、
存在する全細胞に対する％表示した。HL−60
細胞の単球への分化を示す「ロゼツト形成％」
は下記の第１表に示した。 (c) α−酢酸ナフチル・エステラーゼ活性の検定 α−酢酸ナフチル・エステラーゼは単球の特
徴を示す酵素である。すなわち、この酵素の存
在はHL−60細胞の単球への分化を示すもので
ある。検定はα−酢酸ナフチルを酵素加水分解
して遊離のナフトールを分離させ、これがジア
ゾニウムと結合して酵素活性の位置に着色度の
高い析出物を作り出すことに基づくものであ
る。検定はテクニカル・ブレチンNo.90（ミズリ
ー州63178、セントルイスのシグマ化学会社）
に記載の方法で行つた。細胞はスライドガラス
上にシトレート−アセトン−メタノール固定剤
中に室温で30秒間固定した。次にスライドを脱
イオン水を用いて洗浄し、少なくとも20分間気
乾した。次にスライドをPH7.6のトリズマル^TM
緩衝濃厚液の１：10溶液50mlにフアーストブル
ーRP塩25mgを溶解し、α−ナフトール20mg
（エチレングリコールモノメチルエーテル２ml
中）を添加することにより調製した着色液中で
着色した。スライドは37℃で30分間（遮光下
で）培養した。その後洗浄し、メイヤーのヘマ
トキシリン溶液中で５〜10分間逆着色し、洗浄
後気乾した。α−ナフチルエステラーゼ活性を
示す黒色粒をもつ細胞のパーセントを測定し
た。結果を下記の第１表に示す。 【表】 上記の結果は一般構造式のセコステロールの
人間の白血病細胞のマクロフアージ（単球）への
分化用薬剤としての効率を示している。この化合
物は使用した３種の分化検定法のすべてにおいて
高度に有意義な活性を示し、約10^-6Mの濃度で50
％の分化を達成した。比較のため、上記の表には
強力な抗白血病作用をもつ既知のビタミン誘導体
２種、すなわち1α−ヒドロキシビタミンＤ（1α−
OH−D₃）及び1α，25−ジヒドロキシビタミンＤ
（１，25−（OH）₂D₃）により示された細胞分化活
性も含まれている。表示のデータはセコステロー
ル（）の活性度水準が1.25−（OH）₂D₃（最も強
力な白血球細胞分化性ビダミンＤ誘導体）により
示されたそれよりは低いが、人間の白血病治療に
有効であるとして知られた化合物（スダら米国特
許第4391802号）である1α−ヒドロキシビタミン
D₃により示されたそれとほぼ同等であることを
示している。 構造式のセコステロールのカルシウム代謝及び
カルシウム輸送の検定 ホルツマン社（ビスコンシン州マジソン）から
購入した乳離れした雄のラツトにスダら［ジヤー
ナル・オブ・ニユートリシヨン100、1049（1970）］
により記載された低カルシウム、ビタミンＤ欠乏
食を３週間随意に与えた。次いで、ラツトは各６
匹からなる４群に分けた。第１の群（対照群）に
は95％のエタノール0.05mlを頚静脈注射した。第
２群及び第３群には同じ経路であるエタノール
0.05mlに溶解したセコステロールＩ（Ｒ＝CH₃、
X¹＝X²＝Ｈ）をそれぞれ625ピコモル及び6250ピ
コモル投与し、第４群には1α，25−ジヒドロキ
シビタミンD₃を625ピコモル（エタノール0.05ml
中）頚静脈注射した。投与後７時間にラツトは斬
首により殺害し、血液を集め遠心分離して血清を
得た。血清カルシウム濃度を通常通り原子吸光分
光計により測定した。結果は下記の第２表に示
す。 これらと同じラツトの腸を少量取りだし、洗浄
後裏がえししてマーチン及びデルカ［アメリカ
ン・ジヤーナル・オブ・フイジオロジー216、
1351（1969）］の方法に準じてカルシウム輸送活性
度を測定した。漿膜カルシウム／粘膜カルシウム
の濃度比で表わした腸内カルシウム輸送活性度測
定値を第２表に示す。 【表】 上記の結果はセコステロールＩ（Ｒ＝CH₃、X¹
＝X²＝Ｈ）が高投与量においても何ら有意のカ
ルセミツク活性を示さないことを示している。こ
の化合物は血清カルシウム水準を高めず、従つて
有意な骨カルシウム流通活性に欠けている。さら
にこの化合物は１動物あたり6250ピコモルの投与
においても腸内カルシウム輸送を刺激しない。同
じ条件で、既知のビタミンＤ代謝体である１，25
−（OH）₂D₃は予期されたように低投与量で10倍
も活性である。 構造式のセコステロール同族体（Ｒ＝Ｈ、
X¹＝X²＝Ｈ）の上記と類似の条件（投与感応を
化合物注射後12時間で測定した以外同じ条件）下
での検定は次の第３表に示すように非常によく似
た結果を与えた。 【表】 第３表のデータもまた構造式のセコステロー
ル（Ｒ＝Ｈ、X¹＝X²＝Ｈ）が高い投与量におい
てさえも生体内で腸カルシウム輸送又は骨からの
カルシウム流通に関し何らの感応も生起させない
ことを示している。 それ故、一般構造式Ｉ（Ｒは水素、メチル、エ
チル、プロピルである）のこれらセコステロール
は生体内で骨のミネラル流通及び腸カルシウム輸
送活動に関し何ら有意の生物学的関応を生起させ
ないから、生体内で典型的なビタミンＤ機能を遂
行しないと結論することができる。 上述のデータは本発明のセコステロールが通常
的でなくかつ予期されないような能力を有してい
ることを証拠だてるものである。これらは既知の
ビタミンＤ関連化合物の一部のように非常に大き
な細胞分化活性を示すが、ビタミンＤの誘導体の
典型的なカルセミツク活性は示さない。従つて、
既知の坑白血病ビタミＤ化合物のような好ましく
ないカルセミツク作用を持つていないため本発明
のセコステロールは白血病のような悪性病治療用
の新規な好ましい方法を提供する。 本化合物は丸薬、カプセル又は錠剤として製薬
したり、製薬上無害かつ許容される溶倍又は油中
の溶液、乳濁液、分散液又は懸濁液として製薬す
ることができ、これらの製剤は酸化防止剤、乳化
剤、着色剤、結着剤又は塗布物質のような製薬上
無害又は有益な成分を追加含有していてもよい。 本化合物は経口剤として又は適当な無菌溶液の
注射又は注入により投与することができる。本化
合物は悪性細胞の正常のマクロフアージへの分化
に十分効果的な量で有利に投与される。１日当り
2μｇから1000μｇの投与量が適しているが、投与
すべき量は当業者によく理解されているように病
気の軽重及び患者の状態、及び感応性に応じて調
製すべきであると理解される。 セコステロール化合物の調製 セコステロールＩ（Ｒ＝Ｈである）はラムらの
方法［ステロイド26、422（1975）］によつて調製
することができる。Ｒがメチル、エチル又はプロ
ピルである構造式及びのセコステロールは新
しい化合物であり、反応工程スキームＩに示した
一般工程により調製することができる。出発物質
として適しているのは一般構造式１〜のｉ−エーテ
ルステロイドであり、式中Ｒは所望の最終製品に
応じてメチル、エチル又はプロピルにすることが
できる。構造式１〜の化合物の構造式２〜の５−エン
ステロイドへの変換は既知の方法による氷酢酸中
の加溶媒分解により達成される。次に５−エンス
テロイドはＣ−７におけるアリル臭素化と脱臭素
化水素反応を順次用いて脱水素化され５，７−ジ
エンステロイド（３〜）となり、化合物３〜の酢酸基
はけん化されて対応する構造式４〜のアルコールが
得られる。アルコール４〜４の溶液に紫外線照射す
るとステロイドの環Ｂが開環され最初のセコステ
ロール誘導体（５(10)，６，８−トリエン）が得ら
れる。これは所望により標準的なガスクロマトグ
ラフイー法により精製単離することができるが、
一般的に最も有利な方法として直接熱的に異性化
して構造式５〜の５，７，10(19)−トリエン化合物に
することができる。 続いてこの中間体の所望とされる1α−ヒドロ
キシル化類似体への変換は米国特許第4195027号
及び第4260549号に示された一般的な方法により
行うことができる。中間体５〜（プロセススキーム
）は先ずトシル化されて3β−トシレート（６〜）
となり、次にこのトシレートは緩衝メタノール中
で加溶媒分解され、構造式７〜７で示される６−メ
トキシ−３，５−シクロ−誘導体が作られる。ト
シレートの他のアルコール溶媒（例えば、エタノ
ール、プロパノール、ブタノール）中での可溶媒
分解では類似体、６−Ｏ−アルキル−３，５−シ
クロ中間体が作られる。このアルキル基は使用し
たアルコールのアルキル部分（例えば、エチル、
プロピル、ブチルなど）から誘導される。これら
化合物７〜の６−Ｏ−アルキル−同族体のどれでも
本工程の次の反応用として使用することができ
る。中間体７〜のヒドロペルオキシド存在下での２
酸化セレンによる酸化が所望の1α−ヒドロキシ
官能基を生じ化合物８〜が得られる。次にこの中間
体を低分子量の有機酸を含有する媒質中で加溶媒
分解し、構造式９〜（X¹＝アシル、X²＝Ｈ）をも
つ３−アシレート及び対応する構造式１０〜（X¹
＝アシル、X²＝Ｈ）のトランス異性体（それぞ
れのアシル基は加溶媒分解に使用した有機酸から
誘導される）が得られる。これら５，６−シス及
び５，６−トランス3β−アシレート（化合物９〜．
び１０〜）はそれぞれが純粋な形で得られるようこ
の階段で有利に分離される。次にこれはけん化
（例えばメタノール中の塩基）に付すことができ
対応する遊離ヒドロキシ化合物９〜（X¹＝X²＝Ｈ）
及び１０〜（X¹＝X²＝Ｈ）が得られる。これとは
別に９〜及び１０〜のモノシアレート又は遊離ヒドロ
キシ化合物は通常の既知条件下（例えば、窒素系
溶媒中の酸無水物又はハロゲン化アシル）でアシ
ル化し、Ｃ−１−モノアシル、Ｃ−３−モノアシ
ル又はＣ−１，３−ジアシル誘導体のうちどちら
か所望のものを作ることができる。これらは構造
９〜及び10の化合物で、X¹＝アシル、X²＝Ｈ、又
はX¹＝Ｈ、X²＝アシル、又はX¹＝アシル、X²＝
アシル（アシル基は同じであつても異なつていて
もよい）となる化合物である。 上述した説明及び反応工程スキームから出発物
質の側鎖の性質が最終生成物の側鎖構造を決定す
ることは明らかである。すなわち、出発物質とし
てＲがメチルである構造式１〜のステロイドを使用
すれば、Ｒがメチルの構造式９〜ａ及び１０〜ａの生
成物を得られる。出発物質としてＲがエチルの化
合物１はＲがエチルの９〜ａ及び１０〜ａの生成物を
与え、Ｒがプロピルのステロイド１を上述した工
程で処理すればＲがプロピルを表わす生成物９〜ａ
及び１０〜ａが得られる。 反応工程スキームＩ中の構造式１０〜の５，６−
トランス化合物は対応する構造式９〜の５，６−シ
ス−化合物の生物学的活性類似としての用途があ
るが、当業者公知のトランス、シス異性化工程に
より構造式９〜の５，６−シス生成物に転換するこ
ともできる。 出発物質の調製 構造式１〜の出発物質（Ｒ＝CH₃、CH₂CH₃又は
CH₂CH₃CH₃）は従来の方法により、スチグマス
テロールから調製することができる。すなわち、
スチグマステロールをそのｉ−エーテル誘導体へ
転換し、側鎖の二重結合をオゾン分解的に開裂
し、次にヒドリド還元すれば次に示す構造をもつ
既知の22−アルコールが得られる。 【化】 このアルコールのトシル化に続く22−トシレー
トのヒドリド還元により直接Ｒ＝CH₃の構造式１〜
の化合物が得られる。 上述の22−トシル中間体をシアン化ナトリウム
で処理すると対応する23−ニトリル誘導体が得ら
れる。このニトリルの２段ヒドリド還元により23
−アルコールが得られ、これをトシル化後、その
23−トシロキシ中間体をもう１度ヒドリド還元す
ればＲ＝エチルの構造式１〜の出発化合物が得られ
る。 同様に、上述の23−トシロキシ中間体をシアン
化ナトリウムで処理して得られた対応する24−ニ
トリル誘導体をヒドリド還元（24−アルコールを
得る）後もう１度順次トシル化及びヒドリド還元
すれば、Ｒがｎ−プロピルを表わす構造式１〜の化
合物が得られる。 本発明の新規な化合物の調製について次の例に
よりさらに詳細に記載する。これらの例において
アラビヤ数字で識別する生成物（例えば化合物
１〜、２〜、３〜など）は反応工程スキームにおいて同
じ数字をつけた構造に対応する。 実施例 １ 化合物9a及び10a（X¹＝X²＝Ｈ）の調製 3β−アセトキシ−23，24−ジノルコル−５−エ
ン(2) 化合物１（Ｒ＝CH₃）（1.26ｇ、3.8ミリモル）の
氷酢酸（35ml）溶液を4.5時間70℃に加熱した。
反応混合物を冷却し、氷水中へ注入し、水酸化ナ
トリウム10％水溶液で中和し、クロロホルム（３
×100ml）で抽出した。クロロホルム抽出物を水
（２×50ml）、塩化ナトリウム飽和溶液（２×50
ml）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾
燥し、ろ過後乾固により化合物２（Ｒ＝CH₃）を
0.86ｇ（63％収率）を得た。 質量スペクトルｍ／ｅ（相対強度）、358（M⁺、
２）、298（100）、283(15)、255(6)、190(9)、177
（23）；¹H−NMR（CDCI₃）、δ0.66（ｓ、18−Ｈ）、
0.81（ｄ、Ｊ＝７、Hz、22−Ｈ）、0.95（ｄ、Ｊ＝
70、Hz、21−Ｈ）、1.02（ｓ、19−Ｈ）、2.06（ｓ、
３−OCOCH₃）、4.59（ｍ、３−Ｈ）、5.38（ｍ、６
−Ｈ）． 3β−アセトキシ−23，24−ジノルコラ−５，７
−ジエン(3)（Ｒ＝CH₃） 微粉砕炭酸水素ナトリウム（0.7ｇ、８ミリモ
ル）を含有する乾燥ヘキサン（50ml）中に２〜（Ｒ
＝CH₃）（0.6ｇ、８ミリモル）を溶解し、撹拌し
ながら窒素雰囲気下80℃で還流加熱し、１，３−
ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン（0.24
ｇ、0.85ミリモル）を添加した。反応を20分間進
行させた。反応混合物は冷却後ろ過し、減圧下で
濃縮した。 残留物を直ちに15mlの乾燥キシレン中に溶解
し、キシレン（25ml）とｓ−コリジン（0.4ｇ、
3.3ミリモル）の混合物中へ滴加した。混合液は
窒素を用いてフラツシングし、冷却し、ベンゼン
（50ml）で希釈し、３％塩酸水溶液（３×20ml）、
炭酸水素ナトリウム飽和溶液（１×25ml）、水
（１×25ml）塩化ナトリウム飽和水溶液（２×25
ml）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾
燥し、ろ過した。溶媒を減圧下で蒸発させた。 油状の残留物を乾燥ジオキサン（40ml）に溶解
し、ｐ−トルエンスルホン酸（0.076ｇ、0.4ミリ
モル）を添加した。混合物を窒素を用いてフラツ
シングし、70℃で0.5時間還流処理した。冷却後、
水（100ml）を用いて希釈し、酢酸エチルで抽出
（１×70ml、２×60ml）し、抽出液を炭酸水素ナ
トリウム飽和溶液（１×30ml）、塩化ナトリウム
飽和溶液（２×30ml）で順次洗浄し、無水硫酸マ
グネシウム上で乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で
蒸発させることにより所望の５，７−ジエン
（３〜）（10％酢酸エチル−ヘキサン中でRf0.29）及
び２，４，６−トリエン（10％酢酸エチル：ヘキ
サン中でRFf0.5）を含有する油を得た。10％酢
酸エチル−ヘキサンを用いる分取TLCにより約
43％の収率で３〜（Ｒ＝CH₃）0.26ｇを得た。 UV（C₂H₅OH）λ_nax282、293、272、262nｍ；
質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）、356（M⁺、
^５）、296（100）、281（59）、253（56）、211（29）
、158
（75）、143（74）；¹h−NMR（CDCl₃）：0.62（ｓ、
18−Ｈ）、0.88（ｄ、Ｊ＝7.0、Hz、22−Ｈ）0.95
（ｓ、19−Ｈ）0.96（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、
2.04（ｓ、３−OCOC₃）、4.7（ｍ、３−Ｈ）、5.4
（ｍ、７−Ｈ）、5.58（ｍ、６−Ｈ）． 3β−ヒドロキシ−23，24−ジノルコラ−５，７
−ジエン（４〜）（Ｒ＝CH₃） 10％水酸化ナトリウムメタノール溶液を３〜（Ｒ
＝CH₃）（259mg：25％酢酸エチル−ヘキサンで
Rf0.56）のエーテル（15ml）溶液中へ撹拌下窒素
雰囲気下で５分以上の時間をかけて滴加した。反
応を23℃で進行させ、TLCで監視した。反応は
35分間内で終了した。反応混合物はエーテル
（100ml）で希釈し、水（30ml）を添加した。層を
分離させ、水の層をエーテル（２×50ml）で抽出
した。エーテル抽出液は合体し、水（２×30ml）、
塩化ナトリウム飽和溶液（２×30ml）で順次洗浄
し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過後減
圧下で蒸発乾固させ、25％酢酸エチル／ヘキサン
を用いる分取TLCにより４〜を200mg（77％収率）
を得た。 UV（C₂H₅OH）：λ_nax282、293、272、262nｍ；
質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）、314
（M⁺、85）、296(12)、281（1000）、261(6)、255
（60）、211（22）、171（30）、143（78）、¹H−NMR
（CDCl₃）：δ0.62（ｓ、18H）、0.87（ｄ、Ｊ＝7.0
Hz、22−Ｈ）、0.95（ｓ、19−Ｈ）、0.97（ｄ、Ｊ
＝7.0Hz、21−Ｈ）、3.63（sh、３−Ｈ）、5.38
（ｍ、７−Ｈ）、5.58（ｍ、６−Ｈ）。 セコステロール５〜（Ｒ＝CH₃） ベンゾエーテル（１：４）混合液（100ml）に
溶解した５，７−ジエン（４〜）（36mg）をビコー
ルフイルターつきハノビア608A石英−中圧水銀
上記紫外線ランプを装備し、２重壁の水冷石英浸
液ウエルをもつジヤケツト中に入れた。混合物を
4.5分間照射した。照射通連続的に窒素による系
のパージを行つた。次に溶媒を減圧下で除去し、
残留物を乾燥エタノール中に再溶解した。窒素を
用いたフラツシングした後窒素雰囲気下で３時間
70℃の加熱還流処理した。その後冷却し、減圧下
で濃縮した。20％酢酸エチル−ヘキサンを用いる
TLC精製により５〜（Ｒ＝CH₃）を31.7％収率
（11.4mg）で得た。 UV（C₂H₅OH）λ_nax264nｍ；質量スペクトル：
ｍ／ｅ（相対強度）314（M⁺、14）、296（21）、
281(4)、271(2)、253(3)、136（82）、118（100）；
¹H−NMR（CDCl₃）：δ0.54（ｓ、18−Ｈ）、0.85
（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、22−Ｈ）、0.94（ｄ、Ｊ＝0.7
Hz、21−Ｈ）、3.93（ｍ、３−Ｈ）、4.82（ｍ（シ
ヤープ）、19(Z)−Ｈ）、5.04（ｍ（シヤープ）、19
(E)−Ｈ）、6.02（ｄ、Ｊ＝12.0Hz、７−Ｈ）、6.22
（ｄ、Ｊ＝12.0Hz、６−Ｈ）。 トシレート６〜（Ｒ＝CH₃） ５〜（15mg、47ミリモル、30％酢酸エチル−ヘキ
サン中Rf0.28）の乾燥ピリジン（0.5ml）溶液を
窒素雰囲気下５℃においてｐ−トルエンスルホン
酸クロリド（22mg、117ミリモル）で24時間処理
した。反応生成物は氷水を用いて急冷し、混合物
をエーテル（３×30ml）で抽出した。抽出液は合
体し、３％塩酸水溶液（２×30ml）、炭酸水素ナ
トリウム飽和水溶液（１×50ml）、塩化ナトリウ
ム飽和水溶液（１×15ml）で順次洗浄し、無水硫
酸マグネシウム上で乾燥し、減圧下で濃縮するこ
とにより20mgのトシレート６〜（Ｒ＝CH₃）（30％
酢酸エチル−ヘキサン中でRf0.6）を得た。 ３，５−シクロ−誘導体７〜（Ｒ＝CH₃） 粗トシレート６〜（Ｒ＝CH₃）（20mg、0.41ミリ
モル、25％酢酸エチル−ヘキサン中でRf0.5）を
撹拌下の微粉砕炭酸水素ナトリウム（200mg、2.4
ミリモル）の無水メタノール（20ml）溶媒中に添
加した。混合物を窒素雰囲気下で55℃加熱還流処
理を８時間行い、冷却し、エーテル（100ml）で
希釈し、水（３×30ml）、塩化ナトリウム飽和水
溶液（１×30ml）で順次洗浄し、無水硫酸マグネ
シウム上で乾燥し、ろ過後溶媒を減圧下蒸発させ
た。粗混合物を10％酢酸エチル−ヘキサンを用い
る分取TLCでクロマトグラフイー処理して、50
％収率で７〜（Ｒ＝CH₃）（７mg、10％酢酸エチル
−ヘキサン中Rf0.66）を得た。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）、328（M⁺、
14）、296(15)、281(7)、253（37）、159（28）、135
（34）、145（30）；¹H−NMR（CDCl₃）：δ 0.55
（ｓ、18−Ｈ）、0.85（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、22−Ｈ）、
0.93（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、3.26（ｓ、６(R)
−OCH₃）、4.18（ｄ、Ｊ＝10Hz、６−Ｈ）、4.89
（ｍ（シヤープ）、19(Z)−Ｈ）、5.0（ｄ、Ｊ＝10
Hz、７−Ｈ）、5.06（ｍシヤープ） 1α−ヒドロキシ−化合物８〜（Ｒ＝CH₃） ｔ−ブチルヒドロペルオキシド（7μ、0.05ミ
リモル）を２酸化セレン（SeO₂；1.1mg、10マイ
クロモル）の１％乾燥ピリジン−塩化メチレン
（５ml）懸濁物へ窒素雰囲気下で添加した。混合
物は23℃で0.5時間撹拌した後、さらに10mlの１
％乾燥ピリジン−塩化メチレン溶液を用いて希釈
した。混合物は氷浴上で冷却し、乾燥塩化メチレ
ン中の中間体７〜（Ｒ＝CH₃）（７mg、21マイクロ
モル、25％酢酸エチル−ヘキサン中Rf0.62）を添
加した。反応をTLCで監視した。23℃で16分間
反応を行つた後、水酸化ナトリウム10％溶液（20
ml）を添加して反応を急停止させた。混合物はエ
ーテル（100ml）で希釈し、相分解させ、エーテ
ル相を水酸化ナトリウム10％水溶液（２×25ml）、
水２×20ml）、塩化ナトリウム飽和水溶液（２×
20ml）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で
乾燥した。ろ過後減圧下で溶媒を蒸発させた。残
留物を25％酢酸エチル−ヘキサンを使用して分取
TLC処理し、1α−ヒドロキシ−誘導体８〜（Ｒ＝
CH₃）（３mg、25％酢酸エチル−ヘキサン中
Rf0.15）を41％収率で得た。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）：344（M⁺、
34）、312（77）、271（42）、177（567）、135（100）
、
¹H−NMR（CDCl₃）：δ 0.55（ｓ、18−Ｈ）、
0.85（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、22−Ｈ）、0.94（ｄ、Ｊ＝
7.0Hz、21−Ｈ）、3.26（ｓ、６(R)−OCH₃）、4.17
（ｍ（シヤープ）、６−Ｈ）、4.22：ｍ（シヤー
プ）、１−Ｈ）4.94（ｄ、Ｊ＝９Hz、７−Ｈ）
5.16（ｄ、Ｊ＝2.2Hz、19(Z)−Ｈ）、5.24（ｄ、Ｊ
＝2.2Hz、19(E)−Ｈ）． ５，６−シス及びトランスセコステロール3β−
アセテート９〜ａ〜及び１〜０〜ａ〜（X¹＝CH₃CO、X²
＝
Ｈ） ８（Ｒ＝CH₃）（３mg）の氷酢酸（0.5ml）溶液
を窒素雰囲気下で20分間55℃に加熱し、冷却し、
氷冷却した炭酸水素ナトリウム溶液（15ml）の上
に注ぎ込み、エーテル（３×30ml）で抽出した。
エーテル抽出物は合体し、炭酸水素ナトリウム飽
和水溶液（１×20ml）、水（２×20ml）、塩化ナト
リウム飽和液（１×20ml）で順次洗浄し、無水硫
酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃
縮した。残留物は35％酢酸エチル−ヘキサン中で
クロマトグラフイー処理（多重溶離、４回）して
0.8mgの５，６−シス−3β−アセテート（９〜ａ〜）
と0.45ｇの５，６−トランス−3β−アセテート
（１〜０〜ｂ〜をそれぞれ得た。 アセテート９〜ａ〜（X¹＝CH₃CO、X²＝Ｈ）：UV
（C₂H₅OH）：λmax264nｍ、λmin228nｍ、質
量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）：372（M⁺、
７）、312（40）、269(10)、189(15)、134（100）；¹H
−NMR（CDCl₃）：δ 0.54（ｓ、18−Ｈ）、0.85
（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、22−Ｈ）、0.92（ｄ、Ｊ＝7.0
Hz、21−Ｈ）、2.02（ｓ、３−OCOCH₃）、4.4
（ブロード、１−Ｈ）、5.01：（ｍ（シヤープ）、
19(Z)−Ｈ）、5.21（ｍ、３−Ｈ）、5.33（ｍ−シヤ
ープ）、19(E)−Ｈ、6.0（ｄ、Ｊ＝12.0Hz、７−
Ｈ）、6.34（ｄ、Ｊ＝12.0Hz、６−Ｈ）、 アセテート１〜０〜ａ〜（X¹＝CH₃CO、X²＝Ｈ）：UV
（C₂H₅OH）：λmax273nｍ、λmin228nｍ、質
量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）372（M⁺、
３）、328(4)、312(14)、269(6)、177（37）、149
（58）、135（100）；¹H−NMR（CDCl₃）：δ
0.54（ｓ、18−Ｈ）、0.85（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、22−
Ｈ）、0.92（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、2.02（ｓ、
３−OCOCH₃）、4.4（ブロード、１−Ｈ）、
4.99：（ｍ（シヤープ）、19(Z)−Ｈ）、5.13（ｍ（シ
ヤープ、19(E)−Ｈ）、5.8（ｄ、Ｊ＝12.0Hz、７
−Ｈ）、6.58（ｄ、Ｊ＝12.0Hz、６−Ｈ）、 1α−ヒドロキシ−セロステロール９〜ａ〜（X¹＝X²
＝Ｈ） 上記の実験で得られた3β−アセテート９〜ａ〜の
エーテル溶液（10ml）を水酸化ナトリウムの10％
メタノール溶液を用い、窒素雰囲気下23℃におい
て0.5時間加水分解した。混合物は水（10ml）で
希釈し、エーテルで抽出（３×50ml）した。エー
テル抽出物は合体して水（２×10ml）、塩化ナト
リウム飽和溶液（２×10ml）で順次洗浄し、無水
マグネシウム上で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発
乾固させた。 残留物は５％イソプロパノール−ヘキサンを用
い、265nｍでゾルバツクス−シルの分析用カラ
ム（4.6mm×25cm）上でのHPLCにより精製し、
９〜ａ〜（X¹＝X²＝Ｈ）を得た。高分解能質量スペ
クトル分析：計算値（C₂₂H₃₄O₂として）
330.2599、測定値330.2541；UV（C₂H₅OH）：
λmax264nｍ、λmin227nｍ；質量スペクトル
ｍ／ｅ（相対強度）330（M⁺、55）、312（71）、287
(7)、269(7)、251(5)、189（21）、152（73）、134
（100）；¹H−NMR（CDCl₃）：δ 0.54（ｓ、18−
Ｈ）、0.85（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、22−Ｈ）、0.93（ｄ、Ｊ
＝7.0Hz、21−Ｈ）、4.23（ｍ、３−Ｈ）、4.43（ｍ、
１−Ｈ）、5.0：（ｓ、19(Z)−Ｈ）、5.34（ｓ、19(E)
−Ｈ）、6.02（ｄ、Ｊ＝12.0Hz、７−Ｈ）、6.39（ｄ、
Ｊ＝12.0Hz、６−Ｈ）、 ５，６−トランス−類似体１〜０〜ａ〜（X¹＝X²＝Ｈ） 同じ方法で3βアセテート（１〜０〜ａ〜）を加水分
解し、５％イソプロパノール−ヘキサンを用い、
273nｍでのHPLCにより精製して１〜０〜ａ〜（X¹＝
X²＝Ｈ）を得た。高分解能質量スペクトル分
析：計算値（C₂₂H₃₄O₂）330.2559、測定値
330.2532；UV（C₂H₅OH）：λmax273nｍ、
λmin227nｍ；質量スペクトルｍ／ｅ（相対強
度）、330（M⁺、69）、312（48）、287（21）、269(18)
、
251(15)、189（31）、152（76）、134（100）、 実施例 ２ 化合物９〜ｂ〜及び１〜０〜ｂ〜（X¹＝X²＝Ｈ）の調
製 3β−アセトキシ−24−ノルコル−５−エン
（２，Ｒ＝エチル）１（Ｒ＝エチル）（0.5ｇ：25％
酢酸エチル−ヘキサン中Rf0.8）の氷酢酸（７ml）
溶液を70℃に4.5時間加熱した。反応混合物は冷
却し、氷水中へ注ぎこみ、水酸化ナトリウム10％
水曜得を用いて中和し、クロロホルムで抽出（３
×70ml）した。勇気抽出物は水（２×25ml）、塩
化ナトリウム飽和溶液（２×25ml）で順次洗浄し
た後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。これ
をろ過し、減圧下で蒸発乾固させ、２〜（Ｒ＝エチ
ル）（25％酢酸エチル−ヘキサン中Rf0.18）を収
率約90％で含有する残留物を得た。この物質はそ
の後精製することなく使用した。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）372（M⁺、
１）、312（100）、298（38）、283(7)、255(12)、191
（30）；¹H−NMR（CDCl₃）：δ 0.69（ｓ、18−
Ｈ）、0.82（ｔ、Ｊ＝7.5Hz、23−Ｈ）、0.9（ｄ、
Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、1.05（ｓ、19−Ｈ）、2.04
（ｓ、３−OCOCH₃）、4.58：（ｍ、３−Ｈ）、
5.38（ｄ、Ｊ＝４、６−Ｈ）、 3β−アセトキシ−24−ノルコラ−５，７−ジ
エン（３〜）（Ｒ＝エチル） ２〜（Ｒ＝エチル）（270mg、0.72ミリモル）の微
粉砕炭酸水素ナトリウム（600mg、7.14ミリモル）
含有ヘキサン（50ml）溶液を撹拌しながら窒素雰
囲気下80℃で加熱還流処理し、その後１，３−ジ
ブロモ−５，５−ジメチルヒドラントイン（125
mg、0.43ミリモル）を添加した。反応を80℃で20
分間進行させ、その後冷却し、ろ過した。ろ液は
真空乾固させた。残留物は直ちに乾燥キシレン
（５ml）に溶解し、キシレン（30ml）とＳ−コリ
ジン（174mg、144ミリモル）の混合液中へ滴加し
た。次に混合物を窒素でフラツシングし、145℃
で1.5時間還流処理した。次に冷却し、、ベンゼン
（100ml）で希釈し、塩酸３％溶液（３×20ml）、
炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（１×20ml）、塩
化ナトリウム飽和溶液（２×20ml）で順次洗浄
し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過し、
減圧下で蒸発乾固させた。 残留物をジオキサン（20ml）溶解し、ｐ−トル
エンスルホン酸（60mg、0.32ミリモル）を添加し
た。混合物は窒素を用いてフラツシングし、70℃
で30分間還流処理し、冷却し、水（10ml）で希釈
し、酢酸エチルで抽出（１×100ml、２×50ml）
した。抽出有機相を炭酸水素ナトリウム飽和水溶
液（１×25ml）、水（１×25ml）、塩化ナトリウム
飽和溶液（２×20ml）で順次洗浄した後、無水硫
酸マグネジウム上で乾燥した。これをろ過し、減
圧下で蒸発乾固させた。残留物を10％酢酸エチル
−ヘキサンを用い分取TLCによるクロマトグラ
フイー処理し、３〜（Ｒ＝エチル）を148mg（54％）
得た。 UV（C₂H₅OC）：λ_nax282nｍ、283、272、262、質
量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）370（M⁺、
４）、328(3)、310（100）、296（22）、253(14)、158
（45）、¹H−NMR（CDCl₃）：δ 0.63（ｓ、18−
Ｈ）、0.84（ｔ、Ｊ＝7.5Hz、23−Ｈ）、0.95（ｄ、
Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、0.96（ｓ、19−Ｈ）、2.04
（ｓ、３−OCOCH₃）、4.71：（ｍ、３−Ｈ）、
5.4（ｄ、７−Ｈ）、5.58（ｍ、６−Ｈ）、 3β−ヒドロキシ−24−ノルコラ−５，７−ジ
エン（４〜）（Ｒ＝エチル） 水酸化ナトリウムのメタノール溶液（10％溶
液）を３〜（130mg、0.35ミリモル、15％酢酸エチ
ル−ヘキサン中Rf0.4）のエーテル（20ml）溶液
へ窒素雰囲気中、撹拌下で滴加した。反応を23℃
で40分間進行させた。次にエーテル（100ml）で
希釈し、水（20ml）を加えて相を分離させた。次
に水相をエーテルで抽出（２×60ml）し、エーテ
ル抽出物を合体し、水（２×30ml）、塩化ナトリ
ウム飽和水溶液（２×30ml）で順次洗浄し、無水
硫酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過し、減圧下で
蒸発乾固させた。残留物を30％酢酸エチル−ヘキ
サン中で分取TLCによるクロマトグラフイー処
理し、４〜（Ｒ＝エチル）（15％酢酸エチル−ヘキ
サン中Rf0.09）を103mg（89％）得た。 UV（C₂H₅OC）：λ_nax282、293、272、262nｍ質量
スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）328（M⁺、
100）、314(16)、310(8)、295（86）、281(15)、269
（45）、255(13)；¹H−NMR（CDCl₃）：δ 0.63
（ｓ、18−Ｈ）、0.84（ｔ、Ｊ＝7.5Hz、23−Ｈ）、
0.94（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、0.96（ｓ、19−
Ｈ）、3.64（ｍ、３−Ｈ）、5.38（ｍ、７−Ｈ）、
5.74（ｍ、６−Ｈ）、 セコステロール類似体５〜（Ｒ＝エチル） １：４乾燥ベンゼン−エーテル（150ml）中の
５，７−ジエン４〜（Ｒ＝エチル）（125mg）を上述
の例１の場合と同じ方法で25分間照射した。溶媒
を減圧下で蒸発させた。粗残留物を直ちに窒素飽
和した乾燥エタノール（30ml）に溶解した。溶液
は窒素雰囲気下70℃で３時間還流処理し次いで冷
却し、減圧下で濃縮した。30％酢酸エチル−ヘキ
サン溶液でシリカゲルプレートを用いる分取
TLCによる精製で５〜（Ｒ＝エチル）（30mg）を約
24％収率で得た。 UV（C₂H₅OC）：λ_nax264nｍ、λ_nio227nｍ；質量
スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）328（M⁺、
23）、310(3)、295(10)、271(9)、253(11)、136（81）
、
118（100）；¹H−NMR（CDCl₃）：δ 0.55（ｓ、
18−Ｈ）、0.83（ｔ、Ｊ＝7.5Hz、23−Ｈ）、0.92
（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、3.93（ブロード、３
−Ｈ）、4.81（ｍ、（シヤープ）19(Z)−Ｈ）、5.01
（ｍ（シヤープ）、19(E)−Ｈ、6.02（ｄ、Ｊ＝12.5
Hz、７−Ｈ）、6.22（ｄ、Ｊ＝12.5Hz、６−Ｈ）、 トシレート６〜（Ｒ＝エチル） ５〜（Ｒ＝エチル）（15mg、0.045ミリモル：25％
酢酸エチル−ヘキサン中Rf0.23）の乾燥ピリジン
（１ml）溶液を５℃窒素雰囲気下でｐ−トルエン
スルホン酸クロリド（20mg、0.105ミリモル）を
用い24時間処理した。反応物は氷水を用いて急冷
し、混合物はエーテルで抽出（３×50ml）した。
有機相は合体し、水（２×20ml）、塩酸３％水溶
液（２×20ml）、炭酸水素ナトリウム飽和溶液
（２×20ml）及び塩化ナトリウム飽和溶液（１×
20ml）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で
乾燥し、減圧下濃縮による95％以上の純度で22mg
のトシレート６〜（Ｒ＝エチル）を得た。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）484（M⁺、
８）、310（72）、296(18)、295(20)、281(10)、253
（39）、158（65）、143（47）、118（100）． ３，５−シクロ−誘導体７〜（Ｒ＝エチル） トシレート６〜（Ｒ＝エチル）（22mg、0.045ミリ
モル；25％酢酸エチル−ヘキサン中Rf0.54）を微
粉砕炭酸水素ナトリウム（60mg、0.71ミリモル）
の無水メタノール（20ml）懸濁液へ撹拌下で添加
した。混合物は窒素雰囲気下で55℃に８時間加熱
し、冷却し、エーテル（150ml）で希釈し、水
（２×30ml）及び塩化ナトリウム飽和溶液（２×
30ml）で洗浄した。無水硫酸マグネシウム上で乾
燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して約68％収率で粗
生成物７〜（Ｒ＝エチル）（25％酢酸エチル−ヘキ
サン中Rf0.6）を得た。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）342（M⁺、
10）、328(12)、310(11)、253(8)、149（41）、136
（67）、118（100）． 1α−ヒドロキシ−３，５−シクロ−誘導体８〜
（Ｒ＝エチル） ｔ−ブチルヒドロペルオキシド（14.0μ、0.1
ミリモル）を乾燥１％ピリジン−塩化メチレン
（10ml）中の２酸化セレン（2.4mg、0.22ミリモ
ル）懸濁液へ添加し、氷浴上で冷却した。乾燥塩
化メチレン（５ml）中のシクロビタミン７〜（Ｒ＝
エチル）（15mg、0.044ミリモル；25％酢酸エチル
−ヘキサン中Rf0.6）を添加した。反応をTLCで
監視し40分間進行させ、水酸化ナトリウム10％溶
液（10ml）を添加し貧農物を急冷した。混合物を
エーテル（150ml）で希釈し、相分離を行い、エ
ーテル相を水酸化ニトリウム10％溶液（２×30
ml）、水（２×30ml）、塩化ナトリウム（２×30
ml）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾
燥した。それをろ過し、減圧下で濃縮した。25％
酢酸エチル−ヘキサンを用いる分取LTCにより
約50％収率で８〜（Ｒ＝エチル）（mg、25％酢酸エ
チル−ヘキサン中でRf0.18）を得た。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）358（M⁺、
21）、326（48）、285（35）、269(15)、191（50）、13
5
（100）；¹H−NMR（CDCl₃）：δ 0.55（ｓ、18
−Ｈ）、0.85（ｔ、Ｊ＝7.5Hz、23−Ｈ）、0.92
（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、3.27（ｓ、6R−
OCH₃）、4.18（ｄ、Ｊ＝10Hz、６−Ｈ）、4.22
（ｍ、１−Ｈ）、4.95（ｄ、Ｊ＝10Hz、７−Ｈ）、
5.16（ｄ、Ｊ＝2.0Hz、19(Z)−Ｈ）、5.26（ｄ、Ｊ
＝2.2Hz、19(E)−Ｈ） ５，６−シス及びトランスセコステロール3β
−アセテート９〜ｂ〜及び１〜０〜ｂ〜（X¹＝CH₃CO、
X²＝Ｈ） ８〜（Ｒ＝エチル）（８mg）の氷酢酸（0.5ml）溶
液を窒素雰囲気下55℃で15分間加熱し、冷却し、
氷冷した炭酸水素ナトリウム溶液（15ml）上へ注
入した。混合物をエーテル（３×30ml）で抽出
し、エーテル抽出物を炭酸水素ナトリウム飽和溶
液（１×20ml）、水（２×20ml）、塩化ナトリウム
飽和水溶液（１×20ml）で順次洗浄し、無水硫酸
マグネシウム上で乾燥し、ろ過した。ろ過を減圧
濃縮し、30％酢酸エチル−ヘキサン（×２）での
分取TLCによりクロマトグラフイー処理して５，
６−3β−アセート９〜ｂ〜（X¹＝CH₃CO、X²＝Ｈ）
（25％酢酸エチル−ヘキサンでRf0.13）及び５，
６−トランス−3β−アセテート１〜０〜ｂ〜（X¹＝
CH₃CO、X²＝Ｈ）（25％酢酸エチル−ヘキサン
でRf0.11）を得た。 生成はさらに１％イソプロパノール−ヘキサン
中でゾルバツクス−シルカラム（4.6mm×25cm）
を用いるHPLCで精製し、アセテート９〜ｂ〜及び１〜
０〜ｂ〜をそれぞれ28.9％及び10.4％収率で得た（保
持容積39ml及び46.5ml）。 3β−アセテート９〜ｂ〜（X¹＝CH₃CO、X²＝Ｈ） UV（C₂H₅OC）λ_nax264nｍ、λ_nio226nｍ；質量ス
ペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）386（M⁺、17）、
326（45）、308(8)、269(16)、203(17)、134（100）、¹
H−
NMR（CDCl₃）：δ 0.55（ｓ、18−Ｈ）、0.84（ｔ、
Ｊ＝7.5Hz、23−Ｈ）、0.92（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−
Ｈ）、2.04（ｓ、３−OCOCH₃）、4.41（ｍ、１−
Ｈ）、5.02（ｍ（シヤープ）、19(Z)−Ｈ）、5.22（ｍ
、
３−Ｈ）、5.35（ｍ（シヤープ）、19(E)−Ｈ）6.03
（ｄ、Ｊ＝12.5Hz、７−Ｈ）、6.35（ｄ、Ｊ＝12.5
Hz、６−Ｈ）． 3β−アセテート１〜０〜ｂ〜（X¹＝CH₃CO、X²＝
Ｈ） UV（C₂H₅OC）λ_nax273nｍ、λ_nio226nｍ；質量ス
ペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）：386（M⁺、12）、
326（64）、312(8)、297(9)、279(4)、269（21）、203
（28）、134（100）；¹H−NMR（CDCl₃）：δ
0.56（ｓ、18−Ｈ）、0.85（ｔ、Ｊ＝7.5Hz、23−
Ｈ）、0.93（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、2.30（ｓ、
３−OCOCH₃）、4.49（ｍ、１−Ｈ）、5.0（ｍ（シ
ヤープ）、19(Z)−Ｈ）、5.14（ｍ（シヤープ）、19
(E)−Ｈ）、5.26（ｍ、３−Ｈ）、5.82（ｄ、Ｊ＝
12.5Hz、７−Ｈ）、6.58（ｄ、Ｊ＝12.5Hz、６−
Ｈ）、 1α−ヒドロキシ−セコステロール９〜ｂ〜及び１〜
０〜ｂ〜（X¹＝X²＝Ｈ） 3β−アセテート9b（X¹＝CH₃CO、X²＝Ｈ）
（1.5mg、20％酢酸エチル−ヘキサン中Rf0.31）を
水酸化ナトリウムの10％メタノール（２ml）溶液
を用い、窒素下23℃で0.5時間加水分解処理した。
混合物はエーテル（50ml）で希釈し、水（５ml）
を添加した。相を分離し、水の層をエーテル（２
×30ml）で抽出した。エーテル抽出液を合体し、
水（２×10ml）、塩化ナトリウム飽和液（２×10
ml）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾
燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して9b（X¹＝X²＝
Ｈ）（20％酢酸エチル−ヘキサン中Rf0.06）を得
た。 同様にアセテート１〜０〜ｂ〜（X¹＝CH₃CO、X²＝
Ｈ）（0.75mg、40％酢酸エチル−ヘキサン中
Rf0.26）を加水分解して５，６−トランス−異性
体１〜０〜ｂ〜（Ｒ＝エチル、X¹＝X²＝Ｈ）（40％酢酸
エチル−ヘキサン中Rf0.06）を得た。 両生成物は順次60％酢酸エチル−ヘキサンによ
る分取TLC、７％イソプロパノール−ヘキサン
を用いるゾルバツクス−シル分析用カラム（4.6
mm×2.5cm）上のHPLC及び90％メタノール−水
を用いるゾルバツク−ODS分析用カラム（4.6mm
×25cm）上の逆相HPLC（RPHPLC）によるクロ
マトグラフイー処理にかけた。 化合物９〜ｂ〜（X¹＝X²＝Ｈ） UV（C₂H₅OC）：λ_nax264nｍ、λ_nio227nｍ；高分
解能質量分析：計算値（C₂₂H₃₆O₂）344.2715；
測定値344.2707；質量スペクトル：ｍ／ｅ（相
対強度）344（M⁺、23）、326(12)、287(7)、269(6)、
251(5)、203(9)、152(7)、134（100）；¹H−NMR
（CDCl₃）：δ 0.52（ｓ、18−Ｈ）、0.82（ｔ、Ｊ
＝7.5Hz、23−Ｈ）、0.90（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−
Ｈ）、4.29（ｍ、３−Ｈ）、4.42（ｍ、１−Ｈ）、
4.99（ｍ（シヤープ）、19(Z)−Ｈ）、5.31（ｍ（シヤ
ープ）、19(E)−Ｈ）、6.0（ｄ、Ｊ＝12.5Hz、７−
Ｈ）、6.37（ｄ、Ｊ＝12.5Hz、６−Ｈ）、 ５，６−トランス−化合物１〜０〜ｂ〜（X¹＝X²＝
Ｈ） UV（C₂H₅OC）：λ_nax273nｍ、λ_nio226nｍ；高分
解能質量分析：計算値（C₂₃H₃₆O₂）334.2715；
測定値344.2705；質量スペクトル：ｍ／ｅ（相
対強度）344（M⁺、12）、326(6)、387(4)、269(4)、
251(3)、203(6)、152（30）、134（100）：¹H−
NMR（CDCl₃）：δ 0.56（ｓ、18−Ｈ）、0.84
（ｔ、Ｊ＝7.5Hz、23−Ｈ）、0.91（ｄ、Ｊ＝7.0
Hz、21−Ｈ）、4.22（ｍ（シヤープ）、３−Ｈ）、
4.48（ｍ、（シヤープ）、１−Ｈ）、4.96（ｓ、19
(Z)−Ｈ）、5.12（ｍ（シヤーブ）、19(E)−Ｈ）．
5.88（ｄ、Ｊ＝12.5Hz、７−Ｈ）、6.57（ｄ、Ｊ＝
12.5Hz、６−Ｈ）、 実施例 ３ 化合物９〜ｃ〜及び１〜０〜ｃ〜の調製 6β−メトキシ−3α，５−シクロ−5α−コラン
（化合物１〜、Ｒ＝プロピル）について上記の実施
例２に示したすべての反応段階を類似実験条件下
で行い構造式９〜ｃ〜の（X¹＝X²＝Ｈ）の1α−ヒド
ロキシ−セコステロール類似体及び構造式１〜０〜ｃ〜
（X¹＝X²＝Ｈ）の対応する５，６−トランス−化
合物を得た。 参考例 １ 出発物質 化合物１〜（Ｒ＝メチル）の合成 (a) （22E）−6β−メトキシ−3α，５−シクロ−
5α−スチグマスト−22−エン（スチグマステ
リルｉ−メチルエーテル） 新たに結晶化させたｐ−トルエンスルホン酸
クロリド（20ｇ、0.10モル）をスチグマステロ
ール（25ｇ、0.06モル：30％酢酸エチル−ヘキ
サン中Rf0.26）の乾燥ピリジン（250ml）溶液
中に添加した。反応混合液は23℃で24時間撹拌
を続け、その後炭素水素ナトリウムウ飽和水溶
液中へ徐々に注入した。沈澱物をろ過により集
め、中性になるまで水で数回洗浄し、減圧下で
１夜乾燥し、93.2％の収率でスチグマステリル
−3β−トシレート（32.06ｇ）を得た。 このトシレートは精製することなくｉ−エー
テルに転換した。トシレート（32ｇ、0.06モ
ル）のクロロホルム（100ml）溶液を還流下の
微粉砕炭酸水素ナトリウム（30ｇ、0.36モル）
のメタノール（400ml）溶媒中へ徐々に添加し
た。混合液は還流下で14時間撹拌し、冷却し、
約100mlまで濃縮した。ヘキサン（300ml）を加
え、得られた混合液を水（100ml）で洗浄した。
相分離し、水層を再びヘキサン（２×100ml、
１×100ml）で抽出した。有機層を合体し、水
（２×100ml）、塩化ナトリウム飽和水溶液（２
×100ml）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウ
ム上で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して所望
のｉ−メチルエーテル（10％酢酸エチル−ヘキ
サン中でRf0.52）を含有する粗油24ｇを得た。 質量スペクトル；ｍ／ｅ（相対強度）426
（M⁺、87）、411（34）、394（54）、371（59）、368
(19)、351（21）、255（61）、83（100）． (b) 6β−メトキシ−3α，５−シクロ−23，24−
ジノール−5α−コラン−22−オール 上記の方法で得たスチグマステリルｉ−エー
テル（5.0ｇ、11.70ミリモル、30％酢酸エチル
−ヘキサン中でRf0.64）の１％ピリジン−塩化
メチレン（100ml）溶液をドライアイス−アセ
トン浴上で撹拌しながら−69℃に冷却し、過剰
のオゾンにより青白い青色が持続するようにな
るまでウエルバツク型式T816のオゾン発生機
を用いて発生させたオゾンで処理した。混合液
は酸素で５分間パージし、23℃に加温した。ホ
ウ加水素ナトリウム（0.7ｇ、18.4ミリモル）
のエタノール溶液を添加した。２時間後、反応
混合液をエーテル（200ml）で希釈した。水
（100ml）を添加し、相分離し、水の層をエーテ
ル（２×200ml）で抽出した。合体した有機分
を塩化ナトリウム飽和水溶液（２×50ml）で洗
浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過
し、減圧下で蒸発乾固させた。残留物をシリカ
ゲルカラム上で分離し、20％酢酸−ヘキサンを
用いる溶離により所望の22−アルコール誘導体
を65％収率で26ｇを得た。 質量スペクトル：ｍ？ｅ（相対強度）346
（M⁺、75）、331（52）、314（89）、291（100）、288
（30）；¹H−NMR（CDCl₃）：δ0.44（ｍ、３−
Ｈ）、0.65（ｍ、４−Ｈ）、0.75（ｓ、18−Ｈ）、
1.04（ｓ、19−Ｈ）、1.08（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−
Ｈ）、2.77（ｍ、シヤープ、６−Ｈ）、3.22（ｓ、
６−OCH₃）． (c) 6β−メトキシ−3α，５−シクロ−23，24−
ジノル−5α−コラン−22−イルトシレート ｐ−トルエンスルホン酸クロリド（2.0ｇ、
11ミリモル）を上述の実験で得た22−アルコー
ル（1.9ｇ、5.5ミリモル）の乾燥ピリジン（35
ml）溶液中へへ添加した。反応混合液は23℃で
18時間撹拌し、氷冷した炭酸水素ナトリウム飽
和水溶液（50ml）の中に注入し、酢酸エチルで
抽出（２×150ml、１×100ml）した。有機抽出
液を水（３×50ml）、塩化ナトリウム飽和液
（２×50ml）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシ
ウム上で乾燥した。次にろ過し、減圧下で蒸発
乾固させた。残留物を減圧下で１夜乾燥し、22
−トシレートを91.0％収率で2.2ｇを得た。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）500
（M⁺、69）、485（49）、468（100）、445（79）、442
(20)、296(20)、273（24）、 (d) 6β−メトキシ−3α，５−シクロ−23，24−
ジノル−5α−コラン（化合物１〜、Ｒ＝メチル） 無水エーテル（100ml）中の22−トシレート
（2.15ｇ、４ミリモル）へ0.22mgのリチウムア
ルミニウム水素化物（LiAlH、0.22mg、６ミリ
モル）を添加した。反応混合液を10時間還流処
理し、冷却し、塩化ナトリウム飽和水溶液で過
剰の反応物を分解した。混合液をろ過し、層を
分離した。水の層をエーテル（２×100ml）で
逆抽出した。エーテル分を合体し、水（１×50
ml）、塩化ナトリウム飽和溶液（２×50ml）で
順次洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥
し、蒸発乾固させ、真空下で乾燥して96.0％収
率で化合物１〜（Ｒ＝メチル）を得た。 質量分析：ｍ／ｅ（相対強度）330（M⁺、
41）、315（46）、298（100）、283（21）、275（81）
、
272(18)、177（45）；¹H−NMR（CDCl₃）：δ：
0.40（ｍ、３−Ｈ）、0.64（ｍ、４−Ｈ）、0.72
（ｓ、18−Ｈ）、0.85（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、22−Ｈ）、
0.92（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、2.77（ｍ（シヤー
プ）６−Ｈ）、3.3（ｍ、６−OCH₃）、 参考例 ２ 出発物質、化合物１〜（Ｒ＝メチル）の調製 (a) 6β−メトキシ−3α，５−シクロ−24−ノル
−5α−コラン−23−ニトリル上記の参考例１
(c)で得た22−トシレート（10ｇ、22ミリモル、
25％酢酸エチル−ヘキサン中Rf0.53）のジメチ
ルスルホキシド（200ml）溶液ヘシアン化ナト
リウム（1.95ｇ、40ミリモル）を添加した。混
合物を窒素雰囲気、80℃で２時間撹拌した後、
冷却し、室温で１時間撹拌した。次いで氷冷し
た塩化アンモニウム飽和液（250ml）上へ注入
し、エーテル（３×450ml）で抽出した。合体
したエーテル分を水（３×200ml）、塩化ナトリ
ウム飽和溶液（２×200ml）で順次洗浄し、無
水硫酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過し、減圧
下で濃縮して所望の23−ニトリル誘導体（粗生
成物7.05ｇ、25％酢酸エチル−ヘキサン中の
Rf0.57）を得た。この粗生成混合物は精製する
ことなく次の実験に使用した。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）355
（M⁺、33）、340（46）、323（64）、308(4)、297(17)
、
300（100）、218(11)、149（31）；¹H−NMR
（CDCl₃）：δ0.43（ｍ、３−Ｈ）、0.68（ｍ、４−
Ｈ）、0.74（ｓ、18−Ｈ）、1.02（ｓ、19−Ｈ）、
1.15（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、2.77（ｔ、Ｊ＝
2.5Hz、６−Ｈ）、 (b) 6β−メトキシ−3α，５−シクロ−24−ノル
−5α−コラン−23−オール 上記の(a)で得たニトリル誘導体（7.0ｇ、
19.7ミリモル、10％酢酸エチル−ヘキサン溶液
中Rf0.27）の乾燥ベンゼン（150ml）溶液を窒
素雰囲気下で氷の上で冷却し、この溶液ヘジイ
ソブチル水素化アルミニウム〔DIBAL−Ｈ、
1.5モルトルエン（20ml、30ミリモル）溶液〕
を徐々に添加した。添加が完了した後氷浴を取
りはずし、反応を23℃で３時間進行させた。メ
タノール（150ml）を添加してアルミニウム錯
塩を分解させ、混合液を氷水（200ml）上へ注
入した。混合液をろ過し、水の層をエーテル
（３×150ml）で抽出した。有機相を合体し、塩
化ナトリウム飽和溶液（２×60ml）で洗浄し、
無水硫酸マグネシウム上で乾燥し減圧下で濃縮
して6.25ｇの生成分を得た。この生成物は原料
の23−ニトリルと予期された23−アルデヒドの
混合物であつた。この混合物は再び同じ還元剤
を用いて処理した。すなわち、粗生成物を乾燥
ベンゼンに溶解し、DIBAL−Ｈ（17.5ml、26、
25ミリモリ）で処理した。上述のような仕上げ
操作及び濃縮残留物のシリカゲルを用いるクロ
マトグラフイー、10％酢酸エチル−ヘキサンを
用いる溶離により所望の23−アルコール（10％
酢酸エチル−ヘキサン中Rf0.03）を0.85ｇ得
た。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）360
（M⁺、75）、345（59）、328（99）、305（100）、302
（29）、281（22）、255（23）；¹H−NMR
（CDCl₃）：δ0.44（ｍ、３−Ｈ）、0.65（ｍ、４−
Ｈ）、0.72（ｓ、18−Ｈ）、0.93（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、
21−Ｈ）、1.02（ｓ、19−Ｈ）、2.77（ｍ、シヤー
プ、６−Ｈ）、3.3（ｓ、６−OCH₃）、 残余の生成物（２ｇ）は対応する23−アルデ
ヒドであり、もし所望ならば上記の条件でさら
に還元処理してさらにいくらかの量の23−アル
コール生成物を得ることができる。 (c) 23−ヒドロキシ−6β−メトキシ−3α，５−
シクロ−24−ノル−5α−コラン−23−トシレ
ート、 ｐ−トルエンスルホン酸クロリド（0.95ｇ、
5.0ミリモル）を上記の(b)で得た23−アルコー
ル（0.85ｇ、2.36ミリモル）の乾燥ピリジン
（25ml）溶液へ添加した。反応混合物は０℃で
24時間放置後氷冷した炭酸水素ナトリウム飽和
水溶液（25ml）中へ注入し、酢酸エチル（３×
100ml）で抽出し、水（３×40ml）、塩化ナトリ
ウム飽和液（２×40ml）で洗浄し、無水硫酸マ
グネシウム上で乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発
乾固させて約95％収率で23−トシレート（1.15
ｇ）を得た。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）514（M⁺、
42）、499（26）、482（100）、468(14)、459（42）、
456(12)、361(13)、255（29）． (d) 6β−メトキシ−３，５−シクロ−24−ノル
−5α−コラン（化合物１〜、Ｒ＝エチル） 上記のトシレート（1.15ｇ、2.08ミリモル、
10％酢酸エチル−ヘキサン中Rf0.7）の無水エ
ーテル（100ml）溶液にLiAlH₄（0.12ｇ、３ミ
リモル）を添加した。反応混合液は５時間還流
処理し、冷却した後過剰の試薬を塩化ナトリウ
ム飽和溶液により分解させた。混合液をろ過
し、相分離し、水相分をエーテル（２×100ml）
で抽出した。エーテル抽出液は合体し、水（１
×50ml）、塩化ナトリウム飽和液（２×50ml）
で洗浄し、無水酸マグネシウム上で乾燥し、減
圧下で蒸発乾固された後真空乾燥して所望の24
−ノル−コラン誘導体（化合物１、Ｒ＝エチ
ル）を約82％収率（0.59ｇ、10％酢酸エチル−
ヘキサン中Rf0.64）で得た。 質量スペクトル：ｍ／ｅ（相対強度）344
（M⁺、９）、329(12)、312(19)、289（22）、286(4)、
255(7)、191(11)、69（90）；¹H−NMR（CDCl₃）：
δ0.44（ｍ、３−Ｈ）、0.65（ｍ、４−Ｈ）、0.72
（ｓ、18−Ｈ）、0.82（ｔ、Ｊ＝7.5Hz、23−Ｈ）、
0.9（ｄ、Ｊ＝7.0Hz、21−Ｈ）、1.02（ｓ、19−
Ｈ）、2.77（ｍ、シヤープ、６−Ｈ）、3.32（ｓ、
６−OCH₃）． 参考例 ３ 出発物質 化合物１（Ｒ＝プロピル）の調製 上記の参考例２(c)で得られた23−トシレートを
参考例２(a)で述べたの類似の条件下でシアン化ナ
トリウムを用いて処理し、6β−メトキシ−3α，
５−シクロ−5α−コラン−24−ニトリルを得る。
このニトリルを上記参考例２(b)の方法を用いて還
元することにより6β−メトキシ−3α，５−シク
ロ−5α−コラン−24−オールが得られる。この
アルコールは上の参考例２(c)で述べたのと類似の
方法により対応する24−トシレートに変え、この
トシレートを上の参考例２(d)で述べたようなヒド
リド還元処理すれば所望の化合物、6β−メトキ
シ3α，５−シクロ−5α−コラン（Ｒ＝プロピル
の化合物１）が得られる。 反応工程スキーム 【化】 【化】 【化】