JPH0572919B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、医薬として実用に供しうる高純度の
メチルコバラミンの製造方法に関する。

従来の技術 メチルコバラミンは、血液および髄液存在型の
補酵素型B₁₂として、神経細胞などの組織移行性
に優れている。生化学的にはメチル基転移反応に
関与し、核酸・蛋白・脂質代謝においてB₁₂同族
体の中で最も優れた生体内活性を示す。臨床的に
は、巨赤芽球性貧血に有効であるのみならず、糖
尿病性神経障害、多発性神経炎などの末梢性神経
障害治療剤として有効である。

メチルコバラミンの製法についての種々の方法
が知られているが、代表的な方法としては例えば
出発原料としてシアノコバラミンを使用する方法
がある（特公昭45−38059）。

発明が解決しようとする問題点 この合成法によつて得られたメチルコバラミン
含有溶液中には、微量のシアノコバラミン、ヒド
ロキソコバラミン、更に黄色物質、塩類などが含
有されている。したがつて、いかにしてこれらの
メチルコバラミン以外の挾雑成分を除き、高純度
のメチルコバラミンを得るかが問題である。

これらの挾雑成分を除去する方法としては、こ
れらの物質は塩類を除いてその性質が近似してい
るため、吸着性の差を利用した方法、例えば、イ
オン交換樹脂クロマトグラフイーによる方法およ
び水−アセトン結晶化法などがすでに知られてい
る。

しかしながら、これらの方法は、次のような欠
点を有する。すなわち、イオン交換樹脂交脂クロ
マトグラフイーによる方法は、イオン交換樹脂が
高価なため、再利用するための別途設備を要する
という欠点を有し、また水−アセトン結晶化法で
は化学的性質が近似しているため、メチルコバラ
ミンの分離精製は困難であるという欠点を有して
いる。

問題点を解決するための手段 そこで、本発明者等は、これらの欠点を有しな
い高純度メチルコバラミンを得るため、長年にわ
たつて研究を重ねてきたが、次の手段により解決
できることを見い出し、本発明を完成した。すな
わち、 シアノコバラミンを常法によりメチル化して、
メチルコバラミンを主成分とする反応混合物を
得、この反応混合物を出発物質として、これを精
製し、高純度のメチルコバラミンを得る工程にお
いて、次の４つの工程を結合することを特徴とす
る高純度のメチルコバラミンの製造方法。

反応混合液のPHを約2.5〜7.0にする工程、 シリカゲルに接触させ、該吸着物に低級脂肪
族ケトン−水を流出せしめる工程 該吸着物に、低級脂肪族アルコール類−水を
流出せしめ、吸着物を留出する工程 該留出液を濃縮し、低級脂肪族アルコール類
−水−低級脂肪族ケトン類に溶解し、該溶液に
低級脂肪族ケトン類を加えて結晶化させ、結晶
部より高純度のメチルコバラミンを得る工程 の工程 反応混合物のPHを約2.5〜7.0に調整する工程で
あるが、通常は希塩酸水溶液、好ましくは0.03N
以下の希塩酸を用いておこなう。PHは５前後が最
も好ましい。この範囲のPHに調整することによつ
て吸着量の増加と溶出分離に著しく効果がある。
PH7.0を超えた場合は未分離となり不利である。

の工程 このメチル化反応液を、シリカゲルに接触させ
る工程である。シリカゲルとしては例えばシリカ
ゲル−40（メルク社製）などを用いる。シリカゲ
ル−40は細孔径が40Åで他のシリカゲルに比し大
きく吸着に有利である。

溶出は、低級脂肪族ケトン−水、好ましくはア
セトンを用い、sv0.5〜1.0でおこなうことが好結
果を与える。アセトンは、約５％のアセトンルが
好ましい。10％以上のアセトン水溶液では未分離
で、全成分が溶出する可能性がある。

この操作により目的物質は吸着部にあり、コバ
ルト原子にメチル基が２個配位した副生物塩化ナ
トリウムなどが非吸着部分として除かれる。

の工程 目的物質であるメチルコバラミンを含む吸着物
に、更に低級脂肪族アルコール類−水を流出せし
め、吸着物を留出する工程である。この際svは
0.5〜1.0の範囲でおこなうことが好ましい。

低級脂肪族アルコール類とは、メタノール、エ
タノール、プロパノール、ブタノールなどがあげ
られるが、メタノールが最も好ましい。メタノー
ルの濃度は15％前後が好ましい結果を与える。

この工程により目的物質であるメチルコバラミ
ンは非吸着部分にあり、吸着されるのは黄色不純
物およびヒドロキソコバラミンである。非吸着部
分には、メチルコバラミンのほか、シアノコバラ
ミンが存在するものと考えられる。

の工程 非吸着部分に含まれている目的物質であるメチ
ルコバラミンを取り出す工程であり、本工程によ
つて高純度メチルコバラミンが得られる。

具体的には、の工程により得られた留出液
（非吸着部分）を濃縮した後、低級脂肪族アルコ
ール類−水−低級脂肪族ケトン類に溶解し、次い
で該溶液に低級脂肪族ケトン類を加えて結晶化さ
せ、結晶部より高純度のメチルコバラミンを得
る。

低級脂肪族アルコールとは、メタノール、エタ
ノール、プロパノール、ブタノールなどをいい、
低級脂肪族ケトン類とは、アセトン、メチルエチ
ルケトンなどをいう。これらのうち、最も好まし
いものは、メタノールとアセトンである。メタノ
ール−水−アセトン等の最も好ましい割合は、約
2.5：1.10である。

本工程は、留出液に含まれている微量のシアノ
コバラミンと、目的物質であるメチルコバラミン
とを分離する方法であり、シアノコバラミンとメ
チルコバラミンの溶解差を利用している。

本発明のメリツトを要約すると次のとおりであ
る。

(1) 高純度・高収率のメチルコバラミンを得る工
業的な方法である。

(2) 本法では、シリカゲルクロマトの再精製工程
を、低級アルコールおよび低級ケトンの水溶液
で同一カラム内での溶出除去をおこなうため、
大幅な時間短縮と、精製設備が不要となる。

次に、本発明の代表的な実施例を掲げるが、本
発明がこれらのみに限定されることがないことは
いうまでもない。

実施例 １ 特公昭45−38059に記載されているシアノコバ
ラミンからメチルコバラミンを製造する方法にし
たがい還元・メチル化反応（シアノコバラミン８
ｇ）をおこない、反応溶液から残余のヨードメチ
ルを濃縮留去し、95％メチルコバラミン含有メタ
ノール水溶液600c.c.を得た。この溶液を希塩酸水
溶液（0.03N以下）を徐々に滴下し、PH5.0とす
る。次いでシリカゲル（Kieselgel−40 メルク
社製）500c.c.が充填されたカラムにsv0.5の流速で
吸着させる。次いで５％アセトン水溶液600c.c.を
sv0.5の流速にて流し、ヒドロキソコバラミン、
食塩および金属錯体塩の除去をおこなう。その後
50％メタノール水溶液800c.c.をsv1.0の流速にてカ
ラムに流し、微量のシアノコバラミンを含有する
メチルコバラミン溶液500c.c.を溶出した。この溶
液をリン酸−セルロースおよびダウエツクス２
（Dowex２）よりなる混合床カラム（10c.c.）を
用いて、sv1.0の流速にて流し、通過液は60℃加
温下、減圧濃縮し、100c.c.水溶液とした。

次にメタノール250c.c.を加え、40℃１時間溶解
後冷却下アセトン1000c.c.を徐々に滴下し、結晶
7.0ｇ（収率87.5％）を得た。

結晶はHPLC法にて、メチルコバラミン含量
99.7％であり、シアノコバラミンは検出されなか
つた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ シアノコバラミンを常法によりメチル化し
   て、メチルコバラミンを主成分とする反応混合物
   を得、この反応混合物を出発物質として、これを
   精製し、高純度のメチルコバラミンを得る工程に
   おいて、次の４つの工程を結合することを特徴と
   する高純度のメチルコバラミンの製造法。 反応混合液のPHを約2.5〜7.0に調整する工
   程、 シリカゲルに接触させ、該吸着物に低級脂肪
   族ケトン−水を流出させる工程、 次いで該吸着物に、低級脂肪族アルコール−
   水を流出せしめ、吸着物を留出する工程、 該留出液を濃縮し、低級脂肪族アルコール−
   水−低級脂肪族ケトンに溶解し、該溶液に低級
   脂肪族ケトンを加えて結晶化させ、結晶部より
   高純度のメチルコバラミンを得る工程。 ２ 工程において、流速svが0.5〜1.0である特
   許請求の範囲第１項記載の高純度のメチルコバラ
   ミンの製造方法。 ３ 工程において、流速svが0.5〜1.0である特
   許請求の範囲第１項記載の高純度のメチルコバラ
   ミンの製造方法。 ４ 工程およびにおいて、流速svが0.5〜1.0
   である特許請求の範囲第１項記載の高純度のメチ
   ルコバラミンの製造方法。 ５ 工程およびにおいて、低級脂肪族ケトン
   がアセトンである特許請求の範囲第１項記載の高
   純度のメチルコバラミンの製造方法。 ６ 工程およびにおいて、低級脂肪族アルコ
   ールがメタノールである特許請求の範囲第１項記
   載の高純度のメチルコバラミンの製造方法。 ７ 工程において、低級脂肪族アルコール−水
   −低級脂肪族ケトンが2.5：１：10である特許請
   求の範囲第１項記載の高純度のメチルコバラミン
   の製造方法。 ８ 工程において、低級脂肪族アルコールがメ
   タノールであり、低級脂肪族ケトンがアセトンで
   ある特許請求の範囲第７項記載の高純度のメチル
   コバラミンの製造方法。 ９ 工程において、PHが5.0〜6.0である特許請
   求の範囲第１項記載の高純度のメチルコバラミン
   の製造方法。 １０ 工程において、PHが5.0〜6.0であり、工
   程およびにおいて、低級脂肪族ケトンがアセ
   トンであり、工程およびにおいて、低級脂肪
   族アルコールがメタノールであり、工程および
   において、流速svが0.5〜1.0であり、工程に
   おけるメタノール−水−アセトンが2.5：１：10
   の割合である特許請求の範囲第１項記載の高純度
   のメチルコバラミンの製造方法。