JPH0573726B2 - - Google Patents
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- JPH0573726B2 JPH0573726B2 JP62230090A JP23009087A JPH0573726B2 JP H0573726 B2 JPH0573726 B2 JP H0573726B2 JP 62230090 A JP62230090 A JP 62230090A JP 23009087 A JP23009087 A JP 23009087A JP H0573726 B2 JPH0573726 B2 JP H0573726B2
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- liposomes
- hemoglobin
- physiologically active
- aqueous solution
- active substance
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
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- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は、生理活性物質の保持効率を高めたリ
ポソームの製法に関する。 〔従来の技術〕 従来のリポソームの製法としてはいわゆる薄膜
法、界面活性剤除去法及び逆相法等が知られてい
る。薄膜法は容器の内面にリポソーム形成脂質の
薄膜をつくり、そこへ取り込ませたい物質を溶解
させた水溶液を加え、震盪処理するかまたは超音
波処理してリポソームをつくる方法である。界面
活性剤除去法は取り込ませたい物質を溶解させた
水溶液にリポソーム形成脂質と界面活性剤を溶解
させて混合ミセルをつくり、次いで透析等により
界面活性剤を除去しリポソームをつくる方法であ
る。逆相法は、リポソーム形成脂質を溶かした有
機溶媒溶液に取り込ませたい物質を溶解させた水
溶液を加えＷ／Ｏ型エマルジヨンを作成し、次い
で有機溶媒をエバポレーシヨンで除去してリポソ
ームをつくる方法である。 〔発明が解決しようとする問題点〕 上記の製法によれば、取り込ませたい生理活性
物質の量ならびに濃度を大きくするために、生理
活性物質の溶解した水溶液を高濃度にすると、リ
ポソームが形成されなかつたり多重膜のリポソー
ムが形成されたりしてリポソームの内部に取り込
ませることのできる物質の量が逆に非常に少ない
ものとなる場合があつた。従つて、リポソーム内
に高濃度に生理活性物質を保持する必要のあるド
ラツグデリバリー等の用途には、上記製法のリポ
ソームの使用が耐えがたいものであるという欠点
があつた。 そこで、本発明の目的は、内部に高濃度の物質
を取り込んでなるリポソームの製法を提供するこ
とにある。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明は、水性溶媒中でリポソームを形成し、
得られたリポソーム懸濁液と水溶性生理活性物質
またはその水溶液を混合し、この混合液を除水し
て濃縮した後リポソームを再形成することを特徴
とするリポソームの製法である。 この発明においてリポソームを再形成するため
の方法としては高圧吐出処理法あるいは、凍結融
解処理法が挙げられる。又、水溶性生理活性物質
としては、ヘモグロビン等を挙げることができ
る。 以下に本発明に係る製法をさらに詳細に説明す
る。まず純水あるいは低濃度の水溶液中において
公知の方法（例えば超音波処理法）で均一なリポ
ソームを形成させた後生理活性物質あるいはその
水溶液と混合し、これを限外濾過等により濃縮
し、次いで高圧吐出処理あるいは凍結融解処理を
行うことにより、保持効率が飛躍的に高いリポソ
ームが再形成できる。 リポソームは、リン脂質が完全に水和しラメラ
相（２分子膜）を形成している状態のときに作成
されやすい。そこで、目的のリポソームを形成さ
せる前に、リン脂質がリポソームの形成しやすい
水溶液中で予めリポソームを形成させる。次いで
生理活性物質あるいはその水溶液を加え混合し、
さらにこれを除水して濃縮すると生理活性物質は
濃縮されリポソーム粒子間の間隔が短くなる。こ
の状態で高圧吐出処理あるいは凍結融解処理を行
えば、高濃度の生理活性物質の水溶液を内水相に
保持したリポソームが再形成される。 本発明で使用する膜成分物質は、ホスフアチジ
ルコリン、スフインゴミエリン、ホスフアチジル
エタノールアミン、ホスフアチジルセリン等に代
表されるリン脂質で卵黄、大豆その他の天然材料
に由来するもの、または合成により得られるもの
を単独でまたは混合して主成分とする。さらに膜
安定化剤としてコレステロール、コレスタノール
等のステロール類や荷電物質としてホスフアチジ
ン酸、ジセチルホスフエート、高級飽和脂肪酸等
を添加してもよい。また酸化防止剤としてトコフ
エロール等を加えてもよい。これら膜成分物質の
比率は、特に限定されないが好ましくは、リン脂
質１重量部に対し、ステロール類を０〜２重量
部、荷電物質０〜0.2重量部が適当である。 本発明のリポソーム製剤に保持させる薬剤とし
ては、特に制限はなく、種々の水溶性生理活性物
質が使用でき、リポソーム形態が望まれる薬剤で
あればよい。例えばヘモグロビン等の酸素運搬物
質、ウロキナーゼ、スーパーオキシドデイスムタ
ーゼ等の酵素剤、塩酸ドキシサイクリン、硫酸ゲ
ンタマイシン等の抗生物質、インシユリン、
ACTH（副腎皮質刺激ホルモン）等のホルモン剤
が挙げられる。 本発明のリポソームの製法を実施するに際して
は、以下のような手順によればよい。 まず、リポソームを水性溶媒中で形成させる。
その方法は、特開昭60−7933号、特開昭60−7934
号に記載された方法の他既知の方法が利用でき
る。例えば、膜成分物質をクロロホルム等の有機
溶媒に完全に溶解した後、撹拌しながら溶媒を除
去して、膜成分物質の構成要素が分子レベルで混
合した均一系乾燥物を作り、水性溶媒中で膜成分
物質の相転移温度（Tc）以上を保ち、激しく撹
拌し分散させ、次いで超音波処理を行い、均一な
リポソーム懸濁液を得る。 水性溶媒としては、純水あるいは塩、糖類の水
溶液が使用され、その使用比率は、膜成分物質１
重量部に対し、10〜1000重量部程度が適当であ
る。またここでいう均一なリポソーム懸濁液は、
大部分が一枚膜リポソームを形成していることが
望ましいが、リポソーム再形成の手段が高圧吐出
処理である場合には、多重膜リポソームが大部分
を占めてもよい。 次いで、このリポソーム懸濁液に生理活性物質
あるいは生理活性物質水溶液を混合する。さらに
これを既知の方法、例えば限外濾過により除水し
て濃縮する。 濃縮は、リポソーム懸濁液の膜成分物質濃度が
50〜500mg／ml程度が適当であり、濃縮終了時に
生理活性物質は飽和濃度近くに達していることが
望ましい。 次いで、この液を既知の方法を利用してリポソ
ームを再形成させる。生理活性物質が高分子の場
合、液は高粘性を有するので高圧吐出処理あるい
は凍結融解処理が好んで用いられる、また超音波
処理を用いてもよい。高圧吐出処理の場合、フレ
ンチプレス細胞破砕機、パール細胞破砕機等を利
用し、膜成分リン脂質の相転移温度（Tc）以上
で圧力100〜2000Kg／cm2１〜20回処理を行うこと
が適当である。ただし、膜成分物質にコレステロ
ール等のステロール類を添加すれば、相転移は不
明瞭となりTc以下においても膜成分物質の流動
性がある程度見られるので、膜成分リン脂質の
Tcが生理活性物質の失活しやすい温度にある場
合は、あらかじめステロール類を膜成分に添加し
ておき、生理活性物質との混合以降は、失活する
可能性の低い温度域で製造を行うことが望まし
い。また、凍結融解処理において、膜成分に負荷
電物質を添加した場合Ca2+，Ｍｇ2+などの２価の
金属イオンを10〜100mMの濃度添加する必要が
ある。これは、荷電により反撥しあう粒子を金属
イオンによりバインドし、融合を促進させるため
である。このイオンは予め水性溶媒に含有させて
もよいし、凍結融解処理直前に添加させてもよ
い。凍結融解処理では、液を−20℃〜−100℃に
て完全に凍結させ、次いで５℃〜40℃にて融解す
る操作を１〜数回行うことによりリポソームは再
形成される。 このようにして製造したリポソームは、透析、
ゲル濾過、限外濾過、遠心分離等で保持されなか
つた生理活性物質等を除き、目的の外液と交換す
ることもできる。またメンブランフイルターによ
り適当な粒径のリポソームのみを回収することも
できる。 〔実施例〕 次に実施例及び比較例を示して本発明をさらに
具体的に説明する。 実施例 １ 完全水素添加卵黄ホスフアチジルコリン2.31
ｇ、コレステロール1.16ｇ、ホスフアチジル酸ナ
トリウム塩（完全水添卵黄ホスフアチジルコリン
由来）0.31ｇを秤量し、ナスフラスコ（容量１
）内でクロロホルム100mlに溶解した。次いで
ロータリーエバポレーターにて、クロロホルムを
除去し、さらに真空乾燥機にて完全に乾燥した膜
成分混合物を得た。 この乾燥物に純水200mlを加え、80℃にて振り
まぜると、乾燥物はすぐに膨潤し容易に分散し
た。さらにこれをバス型超音波装置にて分散し、
透明感のある白色液を得た。この液を光学顕微鏡
にて観察すると1μ以下のブラウン運動する粒子
が大部分であつた。 この白色液とヘモグロビン7.0W／Ｖ％水溶液
200mlを混合し、４℃にて限外濾過膜（分画分子
量50000）で限外濾過を行い、40mlまで濃縮した。
（このとき膜成分濃度は、約90mg／mlになつてい
ると思われる） この液をフレンチプレス細胞破砕機にて４℃圧
力600Kg／cm2で10回処理を行つた。未保持のヘモ
グロビンを分離するため処理液を生理食塩水にて
10倍容に希釈したのち、４℃にて遠心分離
（180000×ｇ，30分間）を行つた。得られた沈澱
を生理食塩水にて再懸濁し遠心分離を行う操作を
３回繰り返し、遠心上清には、ヘモグロビンがほ
とんど検出されなくなつた。最終的に得られた沈
澱は、100mlになるように生理食塩水で懸濁した。 最終懸濁液は桃色を呈しており、その可視吸光
スペクトルからヘモグロビンは酸化変性がほとん
ど起きていなことを確認した。この液のヘモグロ
ビン濃度をシアンメトヘモグロビン法にて測定す
ると28.8mg／mlであつた。また、含リン定量及び
コレステロール定量からの膜成分濃度換算値は、
24.9mg／mlであつた。これらの値から、添加した
ヘモグロビン量に対する最終懸濁液中ヘモグロビ
ン量（これをヘモグロビン収率とする）を求める
と20.6％となる。また膜成分重量あたりのヘモグ
ロビン重量をカプセル化効率とすると1.16とな
る。この懸濁液を光学顕微鏡により観察すると
1μ以下の粒子が大部分を占めていた。 実施例 ２ 完全水素添加卵黄ホスフアチジルコリン2.31
ｇ、コレステロール1.16ｇ、ホスフアチジン酸ナ
トリウム塩（完全水添卵黄ホスフアチジルコリン
由来）0.31ｇから、実施例１と同様にして膜成分
物質の乾燥物を得た。 次いで、純水200mlを加え、実施例１と同様な
操作を行い、透明感のある白色液を得た。さらに
ヘモグロビン7.0W／Ｖ％水溶液200mlを混合し実
施例１と同様の操作を行い、40mlまで濃縮した。 この液に塩化カルシウム・２水塩0.28ｇを溶解
した。この液を−80℃に冷却してある冷凍庫内で
３時間放置して凍結し、その後、水道水流水中
（約12℃）で解凍した。このような凍結解凍操作
を計３回行つてリポソームの再形成を行つた。 さらに、未保持のヘモグロビンを分離するため
に、実施例１と同様に遠心分離を繰り返して遠心
上清にほとんどヘモグロビンが検出されないリポ
ソーム沈澱を得、これを生理食塩水で100mlに懸
濁した。 この懸濁液は、桃色を呈しておりその可視吸光
スペクトルからヘモグロビンはほとんど酸化変性
が起きていないことが確認できた。また光学顕微
鏡による観察では1μ以下の粒子が大部分を占め
ていた。実施例１と同様にヘモグロビン収率及び
カプセル化効率を求めると18.4％，1.03であつ
た。 比較例１ （低濃度のヘモグロビン液のカプセル
化例） 完全水素添加卵黄ホスフアチジルコリン2.31
ｇ、コレステロール1.16ｇ、ホスフアチジン酸ナ
トリウム塩（完全水添卵黄ホスフアチジルコリン
由来）0.31ｇから、実施例１と同様にして、膜成
分物質の乾燥物を得た。次いで7.0W／Ｖ％ヘモ
グロビン水溶液を加え、振りまぜ膜成分を懸濁し
た後フレンチプレス細胞破砕機にて圧力600Kg／
cm2で10回処理（４℃）を行つた。実施例１と同様
にして未保持のヘモグロビンを遠心分離にて除去
し、生理食塩水にて100mlに懸濁した。 この液のヘモグロビン収率及びカプセル化効率
を求めると11.2％，0.49であつた。 比較例２ （高濃度ヘモグロビン液の従来法によ
るカプセル化例） 完全水素添加卵黄ホスフアチジルコリン2.31
ｇ、コレステロール1.16ｇホスフアチジン酸ナト
リウム塩（完全水添卵黄ホスフアチジルコリン由
来）0.31ｇから、実施例１と同様にして膜成分物
質の乾燥物をナスフラスコ内に得た。次いで
35W／Ｖ％ヘモグロビン水溶液40mlを加え４℃に
て振りまぜたが、膜成分はほとんど固形のまま変
化しなかつた。次いで４℃にてバス型超音波処理
機にて分散した。これをさらにフレンチプレス細
胞破砕機にて圧力600Kg／cm2で10回処理（４℃）
を行つた。実施例１と同様にして未保持のヘモグ
ロビンを遠心分離にて除去し、生理食塩水にて
100mlに懸濁した。 この液のヘモグロビン収率及びカプセル化効率
は、11.0％，0.53であつた。 表１に、前述の実施例、比較例のヘモグロビン
収率、カプセル化効率のデータを示す。
ポソームの製法に関する。 〔従来の技術〕 従来のリポソームの製法としてはいわゆる薄膜
法、界面活性剤除去法及び逆相法等が知られてい
る。薄膜法は容器の内面にリポソーム形成脂質の
薄膜をつくり、そこへ取り込ませたい物質を溶解
させた水溶液を加え、震盪処理するかまたは超音
波処理してリポソームをつくる方法である。界面
活性剤除去法は取り込ませたい物質を溶解させた
水溶液にリポソーム形成脂質と界面活性剤を溶解
させて混合ミセルをつくり、次いで透析等により
界面活性剤を除去しリポソームをつくる方法であ
る。逆相法は、リポソーム形成脂質を溶かした有
機溶媒溶液に取り込ませたい物質を溶解させた水
溶液を加えＷ／Ｏ型エマルジヨンを作成し、次い
で有機溶媒をエバポレーシヨンで除去してリポソ
ームをつくる方法である。 〔発明が解決しようとする問題点〕 上記の製法によれば、取り込ませたい生理活性
物質の量ならびに濃度を大きくするために、生理
活性物質の溶解した水溶液を高濃度にすると、リ
ポソームが形成されなかつたり多重膜のリポソー
ムが形成されたりしてリポソームの内部に取り込
ませることのできる物質の量が逆に非常に少ない
ものとなる場合があつた。従つて、リポソーム内
に高濃度に生理活性物質を保持する必要のあるド
ラツグデリバリー等の用途には、上記製法のリポ
ソームの使用が耐えがたいものであるという欠点
があつた。 そこで、本発明の目的は、内部に高濃度の物質
を取り込んでなるリポソームの製法を提供するこ
とにある。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明は、水性溶媒中でリポソームを形成し、
得られたリポソーム懸濁液と水溶性生理活性物質
またはその水溶液を混合し、この混合液を除水し
て濃縮した後リポソームを再形成することを特徴
とするリポソームの製法である。 この発明においてリポソームを再形成するため
の方法としては高圧吐出処理法あるいは、凍結融
解処理法が挙げられる。又、水溶性生理活性物質
としては、ヘモグロビン等を挙げることができ
る。 以下に本発明に係る製法をさらに詳細に説明す
る。まず純水あるいは低濃度の水溶液中において
公知の方法（例えば超音波処理法）で均一なリポ
ソームを形成させた後生理活性物質あるいはその
水溶液と混合し、これを限外濾過等により濃縮
し、次いで高圧吐出処理あるいは凍結融解処理を
行うことにより、保持効率が飛躍的に高いリポソ
ームが再形成できる。 リポソームは、リン脂質が完全に水和しラメラ
相（２分子膜）を形成している状態のときに作成
されやすい。そこで、目的のリポソームを形成さ
せる前に、リン脂質がリポソームの形成しやすい
水溶液中で予めリポソームを形成させる。次いで
生理活性物質あるいはその水溶液を加え混合し、
さらにこれを除水して濃縮すると生理活性物質は
濃縮されリポソーム粒子間の間隔が短くなる。こ
の状態で高圧吐出処理あるいは凍結融解処理を行
えば、高濃度の生理活性物質の水溶液を内水相に
保持したリポソームが再形成される。 本発明で使用する膜成分物質は、ホスフアチジ
ルコリン、スフインゴミエリン、ホスフアチジル
エタノールアミン、ホスフアチジルセリン等に代
表されるリン脂質で卵黄、大豆その他の天然材料
に由来するもの、または合成により得られるもの
を単独でまたは混合して主成分とする。さらに膜
安定化剤としてコレステロール、コレスタノール
等のステロール類や荷電物質としてホスフアチジ
ン酸、ジセチルホスフエート、高級飽和脂肪酸等
を添加してもよい。また酸化防止剤としてトコフ
エロール等を加えてもよい。これら膜成分物質の
比率は、特に限定されないが好ましくは、リン脂
質１重量部に対し、ステロール類を０〜２重量
部、荷電物質０〜0.2重量部が適当である。 本発明のリポソーム製剤に保持させる薬剤とし
ては、特に制限はなく、種々の水溶性生理活性物
質が使用でき、リポソーム形態が望まれる薬剤で
あればよい。例えばヘモグロビン等の酸素運搬物
質、ウロキナーゼ、スーパーオキシドデイスムタ
ーゼ等の酵素剤、塩酸ドキシサイクリン、硫酸ゲ
ンタマイシン等の抗生物質、インシユリン、
ACTH（副腎皮質刺激ホルモン）等のホルモン剤
が挙げられる。 本発明のリポソームの製法を実施するに際して
は、以下のような手順によればよい。 まず、リポソームを水性溶媒中で形成させる。
その方法は、特開昭60−7933号、特開昭60−7934
号に記載された方法の他既知の方法が利用でき
る。例えば、膜成分物質をクロロホルム等の有機
溶媒に完全に溶解した後、撹拌しながら溶媒を除
去して、膜成分物質の構成要素が分子レベルで混
合した均一系乾燥物を作り、水性溶媒中で膜成分
物質の相転移温度（Tc）以上を保ち、激しく撹
拌し分散させ、次いで超音波処理を行い、均一な
リポソーム懸濁液を得る。 水性溶媒としては、純水あるいは塩、糖類の水
溶液が使用され、その使用比率は、膜成分物質１
重量部に対し、10〜1000重量部程度が適当であ
る。またここでいう均一なリポソーム懸濁液は、
大部分が一枚膜リポソームを形成していることが
望ましいが、リポソーム再形成の手段が高圧吐出
処理である場合には、多重膜リポソームが大部分
を占めてもよい。 次いで、このリポソーム懸濁液に生理活性物質
あるいは生理活性物質水溶液を混合する。さらに
これを既知の方法、例えば限外濾過により除水し
て濃縮する。 濃縮は、リポソーム懸濁液の膜成分物質濃度が
50〜500mg／ml程度が適当であり、濃縮終了時に
生理活性物質は飽和濃度近くに達していることが
望ましい。 次いで、この液を既知の方法を利用してリポソ
ームを再形成させる。生理活性物質が高分子の場
合、液は高粘性を有するので高圧吐出処理あるい
は凍結融解処理が好んで用いられる、また超音波
処理を用いてもよい。高圧吐出処理の場合、フレ
ンチプレス細胞破砕機、パール細胞破砕機等を利
用し、膜成分リン脂質の相転移温度（Tc）以上
で圧力100〜2000Kg／cm2１〜20回処理を行うこと
が適当である。ただし、膜成分物質にコレステロ
ール等のステロール類を添加すれば、相転移は不
明瞭となりTc以下においても膜成分物質の流動
性がある程度見られるので、膜成分リン脂質の
Tcが生理活性物質の失活しやすい温度にある場
合は、あらかじめステロール類を膜成分に添加し
ておき、生理活性物質との混合以降は、失活する
可能性の低い温度域で製造を行うことが望まし
い。また、凍結融解処理において、膜成分に負荷
電物質を添加した場合Ca2+，Ｍｇ2+などの２価の
金属イオンを10〜100mMの濃度添加する必要が
ある。これは、荷電により反撥しあう粒子を金属
イオンによりバインドし、融合を促進させるため
である。このイオンは予め水性溶媒に含有させて
もよいし、凍結融解処理直前に添加させてもよ
い。凍結融解処理では、液を−20℃〜−100℃に
て完全に凍結させ、次いで５℃〜40℃にて融解す
る操作を１〜数回行うことによりリポソームは再
形成される。 このようにして製造したリポソームは、透析、
ゲル濾過、限外濾過、遠心分離等で保持されなか
つた生理活性物質等を除き、目的の外液と交換す
ることもできる。またメンブランフイルターによ
り適当な粒径のリポソームのみを回収することも
できる。 〔実施例〕 次に実施例及び比較例を示して本発明をさらに
具体的に説明する。 実施例 １ 完全水素添加卵黄ホスフアチジルコリン2.31
ｇ、コレステロール1.16ｇ、ホスフアチジル酸ナ
トリウム塩（完全水添卵黄ホスフアチジルコリン
由来）0.31ｇを秤量し、ナスフラスコ（容量１
）内でクロロホルム100mlに溶解した。次いで
ロータリーエバポレーターにて、クロロホルムを
除去し、さらに真空乾燥機にて完全に乾燥した膜
成分混合物を得た。 この乾燥物に純水200mlを加え、80℃にて振り
まぜると、乾燥物はすぐに膨潤し容易に分散し
た。さらにこれをバス型超音波装置にて分散し、
透明感のある白色液を得た。この液を光学顕微鏡
にて観察すると1μ以下のブラウン運動する粒子
が大部分であつた。 この白色液とヘモグロビン7.0W／Ｖ％水溶液
200mlを混合し、４℃にて限外濾過膜（分画分子
量50000）で限外濾過を行い、40mlまで濃縮した。
（このとき膜成分濃度は、約90mg／mlになつてい
ると思われる） この液をフレンチプレス細胞破砕機にて４℃圧
力600Kg／cm2で10回処理を行つた。未保持のヘモ
グロビンを分離するため処理液を生理食塩水にて
10倍容に希釈したのち、４℃にて遠心分離
（180000×ｇ，30分間）を行つた。得られた沈澱
を生理食塩水にて再懸濁し遠心分離を行う操作を
３回繰り返し、遠心上清には、ヘモグロビンがほ
とんど検出されなくなつた。最終的に得られた沈
澱は、100mlになるように生理食塩水で懸濁した。 最終懸濁液は桃色を呈しており、その可視吸光
スペクトルからヘモグロビンは酸化変性がほとん
ど起きていなことを確認した。この液のヘモグロ
ビン濃度をシアンメトヘモグロビン法にて測定す
ると28.8mg／mlであつた。また、含リン定量及び
コレステロール定量からの膜成分濃度換算値は、
24.9mg／mlであつた。これらの値から、添加した
ヘモグロビン量に対する最終懸濁液中ヘモグロビ
ン量（これをヘモグロビン収率とする）を求める
と20.6％となる。また膜成分重量あたりのヘモグ
ロビン重量をカプセル化効率とすると1.16とな
る。この懸濁液を光学顕微鏡により観察すると
1μ以下の粒子が大部分を占めていた。 実施例 ２ 完全水素添加卵黄ホスフアチジルコリン2.31
ｇ、コレステロール1.16ｇ、ホスフアチジン酸ナ
トリウム塩（完全水添卵黄ホスフアチジルコリン
由来）0.31ｇから、実施例１と同様にして膜成分
物質の乾燥物を得た。 次いで、純水200mlを加え、実施例１と同様な
操作を行い、透明感のある白色液を得た。さらに
ヘモグロビン7.0W／Ｖ％水溶液200mlを混合し実
施例１と同様の操作を行い、40mlまで濃縮した。 この液に塩化カルシウム・２水塩0.28ｇを溶解
した。この液を−80℃に冷却してある冷凍庫内で
３時間放置して凍結し、その後、水道水流水中
（約12℃）で解凍した。このような凍結解凍操作
を計３回行つてリポソームの再形成を行つた。 さらに、未保持のヘモグロビンを分離するため
に、実施例１と同様に遠心分離を繰り返して遠心
上清にほとんどヘモグロビンが検出されないリポ
ソーム沈澱を得、これを生理食塩水で100mlに懸
濁した。 この懸濁液は、桃色を呈しておりその可視吸光
スペクトルからヘモグロビンはほとんど酸化変性
が起きていないことが確認できた。また光学顕微
鏡による観察では1μ以下の粒子が大部分を占め
ていた。実施例１と同様にヘモグロビン収率及び
カプセル化効率を求めると18.4％，1.03であつ
た。 比較例１ （低濃度のヘモグロビン液のカプセル
化例） 完全水素添加卵黄ホスフアチジルコリン2.31
ｇ、コレステロール1.16ｇ、ホスフアチジン酸ナ
トリウム塩（完全水添卵黄ホスフアチジルコリン
由来）0.31ｇから、実施例１と同様にして、膜成
分物質の乾燥物を得た。次いで7.0W／Ｖ％ヘモ
グロビン水溶液を加え、振りまぜ膜成分を懸濁し
た後フレンチプレス細胞破砕機にて圧力600Kg／
cm2で10回処理（４℃）を行つた。実施例１と同様
にして未保持のヘモグロビンを遠心分離にて除去
し、生理食塩水にて100mlに懸濁した。 この液のヘモグロビン収率及びカプセル化効率
を求めると11.2％，0.49であつた。 比較例２ （高濃度ヘモグロビン液の従来法によ
るカプセル化例） 完全水素添加卵黄ホスフアチジルコリン2.31
ｇ、コレステロール1.16ｇホスフアチジン酸ナト
リウム塩（完全水添卵黄ホスフアチジルコリン由
来）0.31ｇから、実施例１と同様にして膜成分物
質の乾燥物をナスフラスコ内に得た。次いで
35W／Ｖ％ヘモグロビン水溶液40mlを加え４℃に
て振りまぜたが、膜成分はほとんど固形のまま変
化しなかつた。次いで４℃にてバス型超音波処理
機にて分散した。これをさらにフレンチプレス細
胞破砕機にて圧力600Kg／cm2で10回処理（４℃）
を行つた。実施例１と同様にして未保持のヘモグ
ロビンを遠心分離にて除去し、生理食塩水にて
100mlに懸濁した。 この液のヘモグロビン収率及びカプセル化効率
は、11.0％，0.53であつた。 表１に、前述の実施例、比較例のヘモグロビン
収率、カプセル化効率のデータを示す。
以上述べたように本発明は、水性溶媒中でリポ
ソームを形成し、得られたリポソーム懸濁液と水
溶性生理活性物質または、その水溶液を混合し、
この混合液を除水して濃縮した後、リポソームを
再形成するようにしたので、リポソーム内部に生
理活性物質を高濃度に保持することが可能とな
る。
ソームを形成し、得られたリポソーム懸濁液と水
溶性生理活性物質または、その水溶液を混合し、
この混合液を除水して濃縮した後、リポソームを
再形成するようにしたので、リポソーム内部に生
理活性物質を高濃度に保持することが可能とな
る。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 水性溶媒中でリポソームを形成し、得られた
リポソーム懸濁液と水溶性生理活性物質またはそ
の水溶液を混合し、この混合液を除水して濃縮し
た後、リポソームを再形成することを特徴とする
リポソームの製法。 ２ リポソームの再形成を高圧吐出処理により行
う特許請求の範囲第１項記載のリポソームの製
法。 ３ リポソームの再形成を凍結融解処理により行
う特許請求の範囲第１項記載のリポソームの製
法。 ４ 水溶性生理活性物質がヘモグロビンである特
許請求の範囲第１項記載のリポソームの製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62230090A JPS6475418A (en) | 1987-09-14 | 1987-09-14 | Production of liposome |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62230090A JPS6475418A (en) | 1987-09-14 | 1987-09-14 | Production of liposome |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6475418A JPS6475418A (en) | 1989-03-22 |
| JPH0573726B2 true JPH0573726B2 (ja) | 1993-10-15 |
Family
ID=16902389
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62230090A Granted JPS6475418A (en) | 1987-09-14 | 1987-09-14 | Production of liposome |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6475418A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5049392A (en) * | 1989-01-18 | 1991-09-17 | The Liposome Company, Inc. | Osmotically dependent vesicles |
| HUP0101713A2 (hu) * | 2001-04-27 | 2003-02-28 | István Horváth | Eljárás mesterséges vér előállítására liofilezett vagy friss vérből nyerhető hemoglobin felhasználásával |
| EP1920765A1 (en) * | 2006-11-07 | 2008-05-14 | Medigene AG | Liposome preparation by single-pass process |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5782310A (en) * | 1980-11-11 | 1982-05-22 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Production of liposome preparation |
-
1987
- 1987-09-14 JP JP62230090A patent/JPS6475418A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6475418A (en) | 1989-03-22 |
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