JPH0576961B2

JPH0576961B2 -

Info

Publication number: JPH0576961B2
Application number: JP61177512A
Authority: JP
Inventors: Masahiko Ishida; Jusaku Nishimura; Ryoichi Haga; Masami Tsucha
Original assignee: Hitachi Ltd
Current assignee: Hitachi Ltd
Priority date: 1986-07-30
Filing date: 1986-07-30
Publication date: 1993-10-25
Also published as: JPS6335605A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、ポリグルカンに係り、特にグルコア
ミラーゼを高選択的に吸着精製できる架橋化ポリ
グルカンの製造方法に関する。

〔従来の技術〕

現在、ぶどう糖及び異性化糖は、殿粉をα−ア
ミラーゼとグルコアミラーゼを用いて加水分解し
て工業生産されている。このように、アミラーゼ
類（殿粉加水分解酵素群）は殿粉から有用な低分
子物質を工業生産するのに極めて有用である。

一般に、酵素は酵素生産菌を液体培養して製造
される。工業用酵素製剤としては、培養濾液をそ
のまま濃縮した濃縮液か、乾燥した粉末、あるい
は分離精製して得られる濃縮液もしくはその乾燥
粉末として得られる。しかし、培養濾液の濃縮液
や粗乾燥品には、培養液中に含まれる不快臭成分
及び着色成分が多量に含まれるため、目的とする
反応生成物を分離精製する際、最終的に除去する
ことが必要となつてくる。また、培養濾液中に
は、目的酵素を破壊するプロテアーゼをも含むこ
とが多い。このため、酵素反応を利用して有用物
質を生産する際には、これら不利益となる不純物
を除去することが必要となつてくる。このため、
後続の反応生成物の分離精製工程に著しく負担を
かける。一方、一般的な精製方法として知られる
塩析法や液体クロマト単独では部分的な濃縮が限
界であり、分離精度を高めるためにはこれらの操
作条件、例えば沈殿剤の種類、濃度、PH、充填剤
の種類、吸脱着液の種類等、を変えこれらを組み
合せた複雑なプロセスを経ることが必要となる。
それだけではなく、例えば、特開昭61−12284号
公報に記載されるように操作には沈殿剤、溶出剤
として多量の塩を添加することになり、次工程へ
移る際の着塩操作も行わねばならない。以上のこ
とから、これら公知の精製方法は専ら研究用試薬
等に限定されている。なかでも、精製が困難とさ
れているグルコアミラーゼを選択的に効率よく吸
着できる吸着剤が開発されれば、培養濾液から酵
素を一段で高純度に濃縮精製できる。

発明者らは、最近、α−アミラーゼの精製方法
として研究されはじめたアミロース（グルコース
の直鎖状ポリマー）を吸着剤とする吸着法に着目
し、これをグルコアミラーゼに適用してみた。し
かし、吸着容量が極めて低く、グルコアミラーゼ
に対しては実用的でないことが判明した。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明の目的は、培養液などのグルコアミラー
ゼ以外に多種多様の不純物を含むグルコアミラー
ゼ含有液から、該酵素のみを選択的に効率よく吸
着できる吸着剤としてりポリグルカンの製造方法
を提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、α−アミラーゼの精製方法とし
て、従来から公知であるアミロース（グルコース
の直鎖状ポリマー）を吸着剤とする吸着法に着目
し、これをグルコアミラーゼに適用してみた。し
かし、吸着容量は極めて低く、実用的でないこと
が判明した。グルコアミラーゼの吸着剤を探索し
た結果、分岐度の高いグリコーゲンに効果的に吸
着されることならびにアミロペクチンにも比較的
吸着されやすい現象を見い出した。

しかし、これらの高分岐多糖類は水溶性であ
り、吸着剤としては極めて操作しにくいことを知
つた。すなわち、高分岐多糖類や粉末やゲルを添
加しても、これらには吸着されず、溶解している
高分岐多糖類の分子とグルコアミラーゼ分子とが
複合体を形成し溶解したままとなる。本発明者ら
は鋭意研究を続けた結果、グリコーゲンを化学的
に架橋して不溶化することにより上記問題を解決
し、本発明に到達した。

本発明は、グルコースがα−１，４結合により
重合した主鎖に、グルコースがα−１，４結合に
より重合し、α−１，６結合により主鎖から分岐
した、非還元性グルコース残基を開放末端とする
分岐鎖が結合してなるポリグルカンをアミラーゼ
で処理して分岐鎖を短縮化した短縮化ポリグルカ
ン、或はグリコーゲンを分子間、分子内で架橋し
てなる架橋化ポリグルカンにあり、好ましくは、
分岐鎖の分岐点に相当するグルコース残基が、分
子中全グルコース残基数の少なくとも５％以上を
占め、また分岐鎖のグルコース重合数が２以上６
以下である架橋型ポリグルカンにある。また、本
発明は、グルコースがα−１，４結合により重合
した主鎖に、グルコースがα−１，４結合により
重合し、α−１，６結合により主鎖から分岐し
た、非還元性グルコース残基を開放末端とする分
岐鎖が結合してなるポリグルカンを、水に対する
溶解度が60℃において0.01以下となるまで架橋処
理する架橋化ポリグルカンの製造方法にあり、好
ましくは、架橋化前のポリグルカンにアミラーゼ
を添加して、グルコース重合数を短縮化する点に
あり、アミラーゼとしては、β−アミラーゼ、グ
ルコアミラーゼのいずれか一方もしくは両方が通
常、用いられる。

本発明になるポリグルカンに適用しうる酵素
は、α−１，４グリコシド結合の非還元性末端側
を加水分解するアミラーゼ、いわゆるグルコアミ
ラーゼ（γ−アミラーゼ）全般に適用できる。本
酵素としてはグルコアミラーゼであれば、その起
源生物に特に限定されるものではない。例えば、
アスペルギルス属、リゾープス属等の糸状菌を起
源とするグルコアミラーゼ、バシルス属、クロス
トリジウ属などの細菌起源のグルコアミラーゼで
あつても適用できる。

本発明の吸着剤にするための原料のグルカンと
しては、高度に分岐したグルカンが用いられる。
分岐の程度は、分岐点に相当するグルコース残基
が、分子中のグルコース残基総数の５％以上あれ
ば用いることができる。15％以上の分岐点を含む
グルカンならなお好適である。したがつて、グル
カンの例としてはグリコーゲンや高度分岐型のア
ミロペクチンがあげられる。これらグリコーゲン
や高度分岐型アミロペクチンも起源生物には特に
限定されない。例えばグリコーゲンは動物起源の
ものであつても微生物起源のものでも使用でき
る。

また、これらのグルカンとしては、上述した天
然原料から分離したグルカンだけでなく、これら
の分岐を酵素処理で短鎖化した加工グルカンを用
いてもよい。グルカンの短鎖化処理には、前述し
たようにグルコアミラーゼもしくはβ−アミラー
ゼが用いられる。これらの酵素の種類は特に限定
されない。処理時の反応条件は基質のグルカンの
種類、濃度等により適宜選択されるが、分岐鎖の
グルコース重合数２以上、６以下にとどめる様、
適宜調節される。

グルカンの分岐度が５％未満になると、グルコ
アミラーゼの吸着容量が低下し、実用的でない。

上述したグルカンの架橋方法は特に限定されな
いが、その架橋の程度は、グルコアミラーゼを吸
着する際に使用される温度である60℃以下におい
て、100ｇの水に対し、本発明なる吸着剤の溶解
度が0.01ｇ以下になる様に、分子間の架橋を行え
ばよい。したがつて、架橋処理により調製された
本発明なる吸着剤は水和性のゲル又は固体であ
る。

架橋反応及び条件は、グルカンの種類、濃度、
吸着時の使用条件により適宜選択される。反応と
しては例えば、エピハロゲンヒドリンによるグル
コース残基のOH基間の架橋等があげられる。エ
ピハロゲンとしてはエピクロラルヒドリンが最も
実用的である。エピハロゲンの場合その添加量は
原料ポリグルカンの溶液の0.5〜３倍が好適であ
る。原料液中のポリグルカン濃度は少なくとも１
％以上が好ましい。アルカリは苛性ソーダ、苛性
カリ等の強アルカリが用いられるが、その濃度は
1N以上でエピハロゲンのハロゲンに対し等量以
上のアルカリを含むことが必要である。温度は30
℃以上で行われる。時間は温度、アルカリ濃度に
より適宜選定されるが60℃の際30分間以上必要で
ある。

〔作用〕

本発明のポリグルカンは、分岐鎖の長さがグル
コース数２〜６とグルコアミラーゼ分子鎖と同程
度の長さであることから、酵素生産菌の培養濾液
など多糖多様の有機性、機性不純物及び他種の酵
素を含む液中から、本発明実施例に示すように、
グルコアミラーゼを選択的に吸着できる。特に蛋
白質分解酵素など酵素精製に不都合な酵素を除去
できる。さらに高密度にグルコアミラーゼを吸着
できる。

また、本発明のポリグルカンは、いわゆる分子
間および／または分子内三次元架橋されており、
このため水に不溶となつており、単に吸着したグ
ルコアミラーゼを脱着させることにより、容易に
培養濾液から一拠に精製でき、精製プロセスを大
幅に簡略化可能である。

〔実施例〕

実施例１大腸菌のグリコーゲン（推定分子量４×10⁵、
推定分岐度25％）の乾燥粉末５ｇに0.05M酢酸ソ
ーダ緩衝液（PH5.0）を95ml添加し、撹拌しなが
ら70℃に加熱して溶解した。これを50℃まで冷却
し、そのうち30mlを取りアスペルギルス属
（Aspergillus orizea IFO−4M6）起源のグルコ
アミラーゼ10単位を溶解したグルコアミラーゼ溶
液２mlを添加し、40℃に保持した。

２時間後のグルコース生成量を測定した結果、
供試グリコーゲン分子のグルコース残基数に対し
約30％に達した。その時点の分子量は６×10⁴で
あつた。

本液を透析用セロフアンチユーブに充填し、10
℃の水５に対し10時間透析した。内容液を凍結
乾燥し、白色粉末0.9ｇを得た。

これに水10mlを添加し、撹拌しながら70℃に加
熱して溶解して粘性の液体とした。次に6Nの苛
性ソーダ33mlを添加し、これを撹拌機と還流冷却
器を付した200mlの反応フラスコに入れた。次い
で、100mlのエピクロヒドリンを加え、20rpmで
撹拌しつつ、70℃で５時間加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水
層巾のゲル状物を濾別した。このゲル状物にエタ
ノール50mlを添加し、撹拌後濾過してゲル状物を
回収した。回収ゲルを再度エタノール50mlに再懸
濁し、濾過してゲル状物を回収した。本操作をさ
らに３回繰り返した。次に、蒸溜水50mlに懸濁
し、濾別した。本操作を３回繰り返した後再度、
エタノール50mlに分散した。これを濾過し、ゲル
状物を乾燥後、粉砕し、白色粉末0.7ｇを得た。

本粉末の60℃における水への溶解度は水100ｇ
に対し、0.001ｇであつた。さらに、本粉末を60
℃水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末に対
する重量比は13.2であつた。本粉末の非還元末端
基を測定により分岐鎖の平均重合度は4.2であつ
た。次に、本粉末へのグルコアミラーゼの吸着性
を見るため、以下の実験を行つた。

アスペルギルス・オリゼIFO−4176の培養液40
ml（α−アミラーゼ0.50単位／ml、グルコアミラ
ーゼ1.30単位／mlを含む）を６℃に冷却し、上記
の吸着剤粉末0.2ｇを添加し、5rpmで２分間混合
して接触させた。これを濾過し、濾液中のα−ア
ミラーゼ活性、グルコアミラーゼ活性を測定し
た。

上澄液中のα−アミラーゼは0.50単位／ml、グ
ルコアミラーゼは0.01単位／mlであつた。上記吸
着剤に吸着した酵素量を、吸着剤との接触前の酵
素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値として計
算した。その結果、培養濾液中に存在したα−ア
ミラーゼは実質上吸着されず、グルコアミラーゼ
の99％（1.29単位）が吸着された。

次に、本発明吸着剤の代りにα−アミラーゼ吸
着剤として公知のアミロース（馬鈴薯起源）を用
いてα−アミラーゼ及びグルコアミラーゼの吸着
実施を比較例として実施した。

比較例１実施例と同一ロツトのアスペルスギルス・オリ
ゼIFO−4176の培養液40ml（α−アミラーゼ0.50
単位／ml、グルコアミラーゼ1.30単位／mlを含
む）を６℃に冷却し、アミロース粉末0.2ｇを添
加し、5rpmで２分間混合して接触させた。これ
を濾過し、濾液中のα−アミラーゼ活性及びグル
コアミラーゼ活性を測定した。

上澄液中のα−アミラーゼは0.02単位／ml、グ
ルコアミラーゼは1.29単位であつた。上記アミロ
ース粉末に吸着した酵素量を、アミロースとの接
触前の酵素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値
として計算した。その結果、培養濾過中に存在し
たα−アミラーゼはその96％（0.48単位／ml）が
吸着され、グルコアミラーゼは１％（0.01単位／
ml）と事質上吸着されなかつた。

以下、本発明の実施例を用いて、さらに詳しく
紹介する。

実施例２大腸菌のグリコーゲン（推定分子量４×10⁵、
推定分岐度25％）の乾燥粉末10ｇに水90mlを添加
し、撹拌しながら、70℃に加熱して溶解して粘性
の液体とした。これに6Nの苛性ソーダ33mlを添
加し、これを撹拌機と還流冷却器を付した500ml
の反応フラスコに入れた。次いで、140mlのエピ
クロルヒドリンを加え、20rpmで撹拌しつつ、50
℃で５時間加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水
層中のゲル状物を濾別した。このゲル状物にエタ
ノール50mlを添加し、撹拌後濾過してゲル状物を
回収した。回収ゲルを再度エタノール50mlに再懸
濁し、濾過してゲル状物を回収した。本操作をさ
らに３回繰り返した。次に、蒸溜水50mlに懸濁
し、濾別した。本操作を３回繰り返した後再度、
エタノール50mlに分散した。これを濾過し、ゲル
状物を乾燥後、粉砕し、白色粉末9.2ｇを得た。

本粉末の60℃における水への溶解度は水100ｇ
に対し、0.002ｇ以下であつた。さらに、本粉末
を60℃水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末
に対する重量比は11.5であつた。

次に、本粉末へのグルコアミラーゼの吸着性を
見るため、以下の実験を行つた。

アスペルスギルス・オリゼIFO−4176の培養液
40ml（α−アミラーゼ0.50単位／ml、グルコアミ
ラーゼ1.30単位／mlを含む）を６℃に冷却し、上
記の吸着剤粉末0.2ｇを添加し、5rpmで２分間混
合して接触させた。これを濾過し、濾過中のα−
アミラーゼ活性、グルコアミラーゼ活性を測定し
た。

上澄液中のα−アミラーゼは0.50単位／ml、グ
ルコアミラーゼは0.01単位／mlであつた。上記吸
着剤に吸着した酵素量を、吸着剤との接触前の酵
素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値として計
算した。その結果、培養濾液中に存在したα−ア
ミラーゼは実質上吸着されず、グルコアミラーゼ
の99％（51.6単位）が吸着された。

実施例３大腸菌のグリコーゲン（推定分子量４×10⁵、
推定分岐度25％）の乾燥粉末20ｇに水80mlを添加
し、撹拌しながら10Nの苛性ソーダ40mlを添加
し、これを撹拌機と還流冷却器を付した500mlの
反応フラスコに入れた。次いで、200mlのエピク
ロルヒドリンを加え、20rpmで撹拌しつつ、70℃
で48時間加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水
層巾のゲル状物を濾別した。このゲル状物にエタ
ノール50mlを添加し、撹拌後濾過してゲル状物を
回収した。回収ゲルを再度エタノール50mlに再懸
濁し、濾過してゲル状物を回収した。本操作をさ
らに３回繰り返した。次に、蒸溜水50mlに懸濁
し、濾別した。本操作を３回繰り返した後、再度
エタノール50mlに分散した。これを濾過し、ゲル
状物を乾燥後、粉砕し、白色粉末18.3ｇを得た。

本粉末の60℃における水への溶解度は水100ｇ
に対し、0.001ｇ以下であつた。さらに、本粉末
を60℃水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末
に対する重量比は9.6であつた。

上澄液中のα−アミラーゼは0.51単位／ml、グ
ルコアミラーゼは0.01単位／mlであつた。上記吸
着剤に吸着した酵素量を、吸着剤との接触前の酵
素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値として計
算した。その結果、培養濾液中に存在したα−ア
ミラーゼは実質上吸着されず、グルコアミラーゼ
の99％（51.6単位）が吸着された。

実施例４大腸菌のグリコーゲン（推定分子量４×10⁵、
推定分岐度25％）の乾燥粉末30ｇに水70mlを添加
し、撹拌しながら10Nの苛性ソーダ40mlを添加
し、これを撹拌機と還流冷却器を付した500mlの
反応フラスコに入れた。次いで、40mlのエピクロ
ルヒドリンを加え、20rpmで撹拌しつつ、80℃で
48時間加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水
層中のゲル状物を濾別した。このゲル状物にエタ
ノール150mlを添加し、撹拌後濾過してゲル状物
を回収した。回収ゲルを再度エタノール50mlに再
懸濁し、濾過してゲル状物を回収した。本操作を
さらに３回繰り返した。次に、蒸溜水150mlに懸
濁し、濾別した。本操作を３回繰り返した後、再
度エタノール150mlに分散した。これを濾過し、
ゲル状物を乾燥後、粉砕し、白色粉末25ｇを得
た。

本粉末の60℃における水への溶解度は水100ｇ
に対し、0.001ｇ以下であつた。さらに、本粉末
を60℃水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末
に対する重量比は7.9であつた。

次に本粉末へのグルコアミラーゼの吸着性を見
るため、以下の実験を行つた。

上澄液中のα−アミラーゼは0.51単位／ml、グ
ルコアミラーゼは0.02単位／mlであつた。上記吸
着剤に吸着した酵素量を、吸着剤との接触前の酵
素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値として計
算した。その結果、培養濾液中に存在したα−ア
ミラーゼは実質上吸着されず、グルコアミラーゼ
の98％（1.28単位）が吸着された。

実施例５大腸のグリコーゲン（推定分子量４×10⁵、推
定分岐度25％）の乾燥粉末15ｇに水85mlを添加
し、撹拌しながら、6Nの苛性ソーダ33mlを添加
し、これを撹拌機と還流冷却器を付した500mlの
反応フラスコに入れた。次いで、150mlのエピク
ロルヒドリンを加え、15rpmで撹拌しつつ、75℃
で36時間加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水
層中のゲル状物を濾別した。このゲル状物にエタ
ノール100mlを添加し、撹拌後、濾過してゲル状
物を回収した。回収ゲルを再度エタノール50mlに
再懸濁し、濾過してゲル状物を回収した。本操作
をさらに３回繰り返した。次に、蒸溜水50mlに懸
濁し、濾別した。本操作を３回繰り返した後、再
度エタノール150mlに分散した。これを濾過し、
ゲル状物を乾燥後、粉砕し、白色粉末14ｇを得
た。

本粉末の60℃における水への溶解度は水100ｇ
に対し、0.001ｇ以下であつた。さらに、本粉末
を60℃水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末
に対する重量比は8.1であつた。

実施例６牛肝臓のグリコーゲン（推定分子量3.5×10⁵、
推定分岐度27％）の乾燥粉末10ｇに水90mlを添加
し、撹拌しながら70℃に加熱して溶解して粘性の
液体を得た。これに4Nの苛性カリ33mlを添加し、
これを撹拌機と還流冷却器を付した500mlの反応
フラスコに入れた。次いで、140mlのエピクロル
ヒドリンを加え、20rpmで撹拌しつつ、50℃で５
時間加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水
層中のゲル状物を濾別した。このゲル状物にエタ
ノール50mlを添加し、撹拌後濾過してゲル状物を
回収した。回収ゲルを再度エタノール50mlに再懸
濁し、濾過してゲル状物を回収した。本操作をさ
らに３回繰り返した。次に、蒸溜水50mlに懸濁
し、濾別した。本操作を３回繰り返した後、再度
エタノール50mlに分散した。これを濾過し、ゲル
状物を乾燥後、粉砕し、白色粉末9.3ｇを得た。

本粉末の60℃における水への溶解度は水100ｇ
に対し、0.003ｇであつた。さらに、本粉末を60
℃水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末に対
する重量比は12.3であつた。

アスペルギルス・オリゼIFO−4176の培養液40
ml（α−アミラーゼ0.50単位／ml、グルコアミラ
ーゼ1.30単位／mlを含む）を６℃に冷却し、上記
の吸着剤粉末0.2ｇを添加し、5rpmで２分間混合
して接触させた。これを濾過し、濾過中のα−ア
ミラーゼ活性、グルコアミラーゼ活性を測定し
た。

上澄液中のα−アミラーゼは0.50単位／ml、グ
ルコアミラーゼは0.02単位／mlであつた。上記吸
着剤に吸着した酵素量を、吸着剤との接触前の酵
素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値として計
算した。その結果、培養濾液中に存在したα−ア
ミラーゼは実質上吸着されず、グルコアミラーゼ
の98％（1.28単位）が吸着された。

実施例７牛肝臓のグリコーゲン（推定分子量3.5×10⁵、
推定分岐度27％）の乾燥粉末20ｇに水80mlを添加
し、撹拌しながら80℃に加熱して糊状物とした。
これに6Nの苛性ソーダ66mlを添加し、これを撹
拌機と還流冷却器を付した500mlの反応フラスコ
に入れた。次いで、180mlのエピクロルヒドリン
を加え、10rpmで撹拌しつつ、70℃で９時間加熱
した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水
層中のゲル状物を濾別した。このゲル状物にエタ
ノール80mlを添加し、撹拌後濾過してゲル状物を
回収した。回収ゲルを再度エタノール80mlに懸濁
し、濾過してゲル状物を回収した。本操作をさら
に３回繰り返した。次に、蒸溜水50mlに懸濁し、
濾別した。本操作を３回繰り返した後、再度エタ
ノール80mlに分散した。これを濾過し、ゲル状物
を乾燥後、粉砕し、白色粉末9.3ｇを得た。

本粉末の60℃における水への溶解度は水100ｇ
に対し、0.001ｇであつた。さらに、本粉末を60
℃水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末に対
する重量比は7.2であつた。

上澄液中のα−アミラーゼは0.50単位／ml、グ
ルコアミラーゼは0.02単位／mlであつた。上記録
着剤に吸着した酵素量を、吸着剤との接触前の酵
素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値として計
算した。その結果、培養濾液中に存在したα−ア
ミラーゼは実質上吸着されず、グルコアミラーゼ
の98％（1.28単位）が吸着された。

実施例８かき貝のグリコーゲン（推定分子量４×10⁵、
推定分岐度25％）の乾燥粉末10ｇに水90mlを添加
し、撹拌しながら70℃に加熱して溶解して粘性の
液体とした。

これに6Nの苛性ソーダ33mlを添加し、これを
撹拌機と還流冷却器を付した500mlの反応フラス
コに入れた。次いで、140mlのエピクロルヒドリ
ンを加え、15rpmで撹拌しつつ、50℃で５時間加
熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水
層中のゲル状物を濾別した。このゲル状物にエタ
ノール50mlを添加し、撹拌後濾過してゲル状物を
回収した。回収ゲルを再度エタノール50mlに再懸
濁し、濾過してゲル状物を回収した。

本操作をさらに３回繰り返した。次に、蒸溜水
50mlに懸濁し、濾別した。本操作をさらに３回繰
り返した。次に蒸溜水50mlに懸濁し、濾別した。
本操作を３回繰り返した後、再度エタノール50ml
に分散した。

これを濾過し、ゲル状物を乾燥後、粉砕し、白
色粉末9.1ｇを得た。

本粉末の60℃における水への溶解度は水100ｇ
に対し、0.001ｇ以下であつた。さらに、本粉末
を60℃水に１日間浸漬した後の水和ゲルの紛粉末
に対する重量比は10.8であつた。

〔発明の効果〕

本発明によれば、酵素性産菌の培養濾液など多
種多様の有機性、無機性不純物及び他種の酵素を
含む液中から、グルコアミラーゼを選択的に吸着
できる。また、かかる機能を有する吸着剤を容易
に製造できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、架橋剤としてエピハロゲンヒドリン
を用いた本発明請求範囲第１項に相当する物質の
代表的構造単位を示す。第２図は、架橋剤として
エピハロゲンヒドリンを用いた本発明請求範囲第
１項に相当する物質の代表的単位を示す。１…非還元性端、２…分岐鎖、３…架橋鎖、４
…主鎖、５…分岐点。

Claims

【特許請求の範囲】

１グルコースがα−１，４結合により重合した
主鎖にグルコースがα−１，４結合により重合し
α−１，６結合により主鎖から分岐した非還元性
グルコース残基を開放末端とする分岐鎖が結合し
てなるポリグルカンをアミラーゼで処理して分岐
鎖を短縮化したポリグルカン、或はグリコーゲン
を水に対する溶解度が60℃において0.01以下とな
るまで架橋処理することを特徴とする架橋化ポリ
グルカンの製造方法。