JPH0579078B2 - - Google Patents

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JPH0579078B2
JPH0579078B2 JP63164855A JP16485588A JPH0579078B2 JP H0579078 B2 JPH0579078 B2 JP H0579078B2 JP 63164855 A JP63164855 A JP 63164855A JP 16485588 A JP16485588 A JP 16485588A JP H0579078 B2 JPH0579078 B2 JP H0579078B2
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Description

【発明の詳細な説明】
微生物の寄託 この発明を実施するのに好適したラクトバチル
ス・カゼイの変種ラムノサス（Lactobacillus
casei var. rhamnosus）は、特許手続上の微生
物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の
規定に基いてアメリカ合衆国、イリノイ州、ペオ
リアのノーザン・リイジヨナル・リサーチ・ラボ
ラトリー（Nothern Regional Research
Laboratory）に、受託番号NRRL−Ｂ−15972と
して寄託されている。何人も名称と受託番号を特
定して上記の国際寄託当局に請求すれば、それを
入手できる。 産業上の利用分野 この発明はラクトバチルス（Lactobacillus）
種、特にラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサ
ス（Lactobacillus casei var. rhamnosus）
NRRL−Ｂ−15972の主たる同定特性を有するラ
クトバチルス・カゼイによつて生産されるところ
の酵母及びカビ（糸状菌）阻害性の製品に、関す
るものである。特にこの発明は上記した製品を生
産する方法と、食品及び他の組成物中での酵母及
びカビの成長を阻害するのに上記製品を利用する
方法に関する。 従来の技術 抗菌性を有する様々な物質が微生物によつて生
産される。乳酸菌は抗細菌性の代謝産物を生産す
ることが知られており、同代謝産物は単離される
ことなく一定の環境条件下におかれて比較的有効
に抗菌作用を行なう。本願出願人の出願に係るヨ
ーロツパ特許庁公開公報No.221499には、上述した
ラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサス
NRRL−Ｂ−15972を用いる酵母及びカビの抑制
法が開示されている。 本ラクトバチルス株は上記公報に記載のように
次の同定特性をもつ。 (a) 菌形態 桿菌 (b) グラム染色 ＋ (c) 運動性 − (d) カタラーゼ ＋、マンニトール ＋、マンノ
ース −、メリビオース −、ラフイノース
−、ガラクトース ±、ソルビトール ＋、シ
ヨ糖 ＋、アドニツト ±、アラビノース
＋、セロビオース ＋、グルコース ＋、ダル
シトール（ガラクチトール） −、サリシン
＋、グリセリン −、イノシツト ±、乳糖
＋、麦芽糖 ＋、キシロース −、トレハロー
ス ＋、ラムノース ＋、デンプン −、ニト
ラートレドクターゼ −、ONPG（オルトニト
ロフエニル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ） − (e) MRSブロス（アメリカ合衆国、ミシガン州、
デトロイトのDifco社製）中におき広範囲の温
度で盛んに成育 (f) MRS寒天培地（MRS）及びバクトペプトン
１％を補充したバレイシヨグルコース寒天培地
（PDAP）（何れもDifco社製）上での細菌阻害
性
【表】
【表】 ヨーロツパ特許公開公報No.221499に開示の抑制
法はこのラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサ
ス NRRL−Ｂ−15972の生細胞を、酵母もしく
はカビの発育を抑制すべき食品、サイロ貯蔵のト
ウモロコシ等に混入することとしている。すなわ
ち上記公報に述べられているように（公報第２頁
46−47行）、NRRL−Ｂ−15972株が生成する抗
菌物質は同株の細胞と結合したものであつて栄養
培地中には分泌されず、細胞から分離して酵母も
しくはカビの発育抑制目的に用いることができな
かつたのである。したがつて上記公報に開示の酵
母及びカビの抑制法は、NRRL−Ｂ−15972の成
育が保持されることとなる食品等にしか適用でき
ないといつた限界を有していた。 発明課題 発明者等は予想外にも、ラクトバチルス・カゼ
イの変種ラムノサス NRRL−Ｂ−15972の生細
胞を硫黄含有有機化合物に富む栄養培地中で培養
すると同細胞が、ポリペプチドを分離するために
通常用いられる方法によつて単離可能な抗菌物質
を培地中に分泌することを見出した。 したがつてこの発明の目的とするところは、
NRRL−Ｂ−15972或はそれに近縁する菌株を用
いるところの本明細書で製品「FIC」或は「糸状
菌阻害化合物（fungal inhibiting compounds）」
と称する新規な酵母及びカビ阻害性製品の製法を
提供して、上述の先行技術が有する限界を打破す
ることにある。この発明の他の目的と長所は以下
に掲げる記述によつて、極く明白に理解できる。 一般的な説明 この発明は酵母及びカビ阻害性製品の製法に係
り、同製法はラクトバチルス・カゼイの変種ラム
ノサス（Lactobacillus casei var. rhamnosus）
NRRL−Ｂ−15972の主たる同定特性を有するラ
クトバチルス属細菌の生細胞を硫黄含有有機化合
物に富む栄養培地中で、該培地中に単離可能な酵
母及びカビ阻害性物質であつて1000ダルトンより
小さな分子量を有し、紫外線吸収スペクトルが
269nmにおいて吸収極大を有し、クロロホルム及
びｎ−ヘキサンに不溶であると共にエタノール、
ｎ−ブタノール及びアセトンに可溶であり、約−
70℃から100℃においてPH３−10の範囲で安定あ
る酵母及びカビ阻害性物質が生産されるように培
養し、培養後に培地を濃縮処理して製品を得るも
のに構成される。 またこの発明は酵母及びカビ阻害性製品に係
り、同製品は、ラクトバチルス・カゼイの変種ラ
ムノサス（（Lactobacillus casei var.
rhamnosus）NRRL−Ｂ−15972の主たる同定特
性を有するラクトバチルス属細菌の生細胞を硫黄
含有有機化合物に富む栄養培地中で培養して産生
される単離可能な酵母及びカビ阻害性物質であつ
て1000ダルトンより小さな分子量を有し、紫外線
吸収スペクトルが269nmにおいて吸収極大を有
し、クロロホルム及びｎ−ヘキサンに不溶である
と共にエタノール、ｎ−ブタノール及びアセトン
に可溶であり、約−70℃から100℃においてPH３
−10の範囲で安定ある酵母及びカビ阻害性物質
を、有効成分とする。 ラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサス
（Lactobacillus casei var. rhamnosus）NRRL
−Ｂ−15972はペニシリウム・カマンベルチ
（Penicillium camemberti）、ボトリチス・アリ
ー（Botryis allii）、カルドスポリウム
（Caldosporium）属、デバリオミセス
（Debaryomyces）種、サツカロミセス・セレビ
シエ（Saccharomyces cerevisiae）を含む広範
囲の酵母、及びカビを阻害する製品（FIC）を生
産する。この発明に係る酵母及びカビ阻害性製品
の製法において用いるものとしてNRRL−Ｂ−
15972が最も有効である天然の（遺伝子工学に依
らない）菌源であると認められるけれども、本菌
株の主たる同定特性を有していて類似の酵母及び
カビ阻害製品（FIC）の生産情報をエンコードす
る（染色体内或はプラスミド内の）遺伝子をもつ
天然の或は遺伝子工学処理されたラクトバチルス
株を、製品（FIC）を生産するために使用するこ
とができる。 ラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサス
NRRL−Ｂ−15972が硫黄含有有機化合物に富ん
だ栄養培地の中で生産する酵母及びカビ阻害性物
質は、複数化合物の混合物である。化合物は極性
を有し、主に269ナノメートルの紫外線を吸収し、
透析試験の結果よりみて1000ダルトンより小さな
分子量を有していてタンパク質ではない。また脂
質ではない。同抗菌性物質は、クロロホルム及び
ｎ−ヘキサンに不溶でありエタノール、ｎ−ブタ
ノール及びアセトンに可溶である点で独特であ
る。本抗菌性物質は温度安定性のもの、すなわち
−70℃から＋100℃で安定であると認められるが、
121℃でのオートクレープ処理によつて破壊され
る。またPH３−10の範囲で安定である。 前述したヨーロツパ特許庁公開公報No.221499が
開示するラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサ
ス NRRL−Ｂ−15972の培養物が、栄養培地中
に分泌されるような抗菌物質を生産せず生細胞を
除去した培地が抗菌性を示さないのに対し、この
発明に従つて硫黄含有有機化合物に富む栄養培地
中で培養される上記菌株は、培地中に分泌されポ
リペチチドの分離のために通常用いられる方法で
単離可能である抗菌物質を生産する。このような
抗菌物質生産性の差異がどのような機序に基づく
ものか明らかでないが、上述公報が開示する細胞
と結合した抗菌物質はおそらくペプチド前駆物質
であると想像される。 この発明に係る酵母及びカビ阻害性製品は広範
囲の温度及びPHで安定であつて、広い利用範囲を
有する。ラクトバチルス属細菌の成育が保持され
ることなる食品等にしか適用できないといつた従
来技術の前述した限界は勿論、打破される。培養
物はラクトバチルス属細菌の生細胞を除去した上
で濃縮した製品とするのが望ましいが、ラクトバ
チルス属細菌による発酵を行なわせる発酵食品等
において同時にカビの成育を阻害することとする
用途において培養物を、生細胞を除去することな
く濃縮した製品を用いることができる。 ラクトバチルス（Lactobacillus）用の種々の
増殖培地を使用できる。同培地は細胞の増殖と製
品（FIC）の生産を促進せねばならない。増殖を
促す培地はタンパク質及び炭素源を含まなければ
ならない。また製品（FIC）を生産するために培
地は、硫黄含有有機化合物を豊富に含んでいるべ
きである。増殖培地は硫黄含有有機化合物、タン
パク質源、炭素源及びミネラルを含んでいるのが
望ましい。天然源からのタンパク質性或はアミノ
酸性の素材は、硫黄含有化合物を含みうる。した
がつて乳、ホエー、酵母、酵母エキス或はタンパ
ク質消化物のようなタンパク質源は硫黄化合物源
となり得て、製品（FIC）の生産を促す。たんぱ
く質源とはなり得ない別の硫黄含有化合物、例え
ばニンニクエキス、糖蜜及びシステインも、使用
することができる。炭素源としてはフルクトー
ス、シヨ糖、デキストロース、乳糖或は糖蜜を用
い得る。マンガン塩及びマグネシウム塩のような
細胞の増殖を促すミネラルはトウモロコシ浸出液
中のものを利用できるし、また純粋な塩として加
えることもできる。アルカリ金属リン酸塩のよう
な緩衝剤も、PHを保持するのに有利に使用でき
る。ケイ皮酸及び／またはアルカリ金属プロピオ
ン酸塩及び／またはフエニルアラニンが上述の培
地中で酵母及びカビ阻害性製品（FIC）の生産を
さらに促進することを、見出した。細胞を10℃と
50℃との間の温度で増殖させるのが望ましい。栄
養培地と増殖条件についての数多くの変形例は、
当業者であれば容易に考え付くであろう。 細胞の増殖後に栄養培地を、大部分の生細胞を
消滅させるように処理し、次に酵母及びカビ阻害
製品（FIC）を得るように濃縮または抽出するの
がよい。酵母及びカビ阻害製品（FIC）は使用前
に乾燥、凍結乾燥もしくは凍結できる。比較的に
濃縮しない形の製品（FIC）を生産するための推
賞できる方法は、酵母及びカビ阻害性の生産物が
培地中で産出された後に増殖培地を噴霧乾燥する
方法である。これらの方法の全ては当業者によく
知られている。 低級アルキルアルコール及びエーテルのような
種々の水と混合しない溶剤を、増殖培地から製品
を抽出するのに使用できる。ｎ−ブタノール、イ
ソプロパノール、アセトン、酢酸エチル或はエタ
ノールを水と組合せて、使用できる。また製品を
分子ふるいクロマトグラフイー、イオン交換クロ
マトグラフイー及び高圧液体クロマトグラフイー
を含むクロマトグラフイー法によつて分離するこ
ともでき、これらのクロマトグラフイー法も当業
者によく知られているところである。製品
（FIC）から不純物を、分子ふるい法及び逆浸透
法を用いて除去することができる。分離のために
実質上どのような化学的及び／または分離的方法
も、利用可能である。 本発明製品（FIC）が酵母及びカビの成育を阻
止するために利用される「組成物（materials）」
とは、製品（FIC）により処理することが望まれ
る何らかの表層を有するものを指す。かかる組成
物は生きている表層も生きていない表層も持ちう
る。本発明に係る酵母及びカビ阻害製品は食品中
で、ペニシリウム・オグザリクム（Penicillium
oxalicum）を少なくとも72時間阻害する量だけ
用いられる。使用するFICの量は、処理すべき組
成物中の酵母及びカビ細胞の個数に依存する。 本発明の方法によりどのような食品も、そして
特に炭酸飲料、コテージチーズ、ヨーグルト、マ
ーガリン、パン、穀物及び堅果（ナツツ）を、保
存することができる。製品（FIC）はPH３−10の
広範囲のPHで有効であるので、同製品は本発明の
方法に従つてどのような食品を保存する上でも特
に有用である。この酵母及びカビ阻害製品
（FIC）は、変敗しがちな発酵食品及び他の保存
食品において特に有利に使用できる。他の食料分
野での用途としては、カビによるアフラトキシン
汚染を阻止するための貯蔵牧草及びトウモロコシ
の処理、ピーナツの処理がある。種々の組成物を
処理でき、作物中或は動物、特に哺乳類中の生き
た組織を含めた処理対象組成物をカビ及び酵母に
よる感染から保護するためにFICを用いることが
できる。哺乳類に対しFICを体内或は体外で局所
的に施用するのがよい。洗剤、石けん、その他の
クレンザーに本製品（FIC）を組合せることもで
きる。 明細な説明 実施例の要約 ラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサス
（Lactobacillus casei var. rhamnosus）NRRL
−Ｂ−15972はペニシリウム・カマンベルチ
（Penicillium camemberti）、ボトリチス・アリ
ー（Botrytis allii）、カルドスポリウム
（Caldosporium）属、デバリオミセス
（Debaryomyces）種、サツカロミセス・セレビ
シエ（Saccharomyces cerevisiae）を含む広範
囲の酵母及びカビを阻害する製品（FIC）を生産
する。製品（FIC）中の化合物（複数）は極性で
あり、1000ダルトンより小さな分子寸法を有し、
タンパク質或は脂質ではない。製品（FIC）は、
クロロホルム及びｎ−ヘキサンに不溶でありエタ
ノール、ｎ−ブタノール及びアセトンに可溶であ
る点で独特である。FICは温度安定性のもの、す
なわち−70℃から＋100℃で安定であると認めら
れるが、121℃でのオートクレープ処理によつて
破壊される。FICはPH３−10の範囲で安定であ
る。栄養学的研究によりアルカリ金属プロピオン
酸塩、フエニルアラニン、及び／またはケイ皮酸
がラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサス
（Lactobacillus casei var. rhamnosus）による、
並びに他のラクトバチルス（Lactobacillus）属
細菌による酵母及びカビ阻害製品の生産をさらに
促進することが、示される。製品（FIC）の精製
は、有機溶剤による抽出及びフラツシユ蒸発を利
用することによつて達成できる。以下の実施例は
本発明に係る酵母及びカビ阻害製品（FIC）の生
産方法と利用方法とを示すものである。 実施例 １ 抗糸状菌活性を示すラクトバチルス
（Lactobacillus）種 種々の活性度を有する抗糸状菌製品がラクトバ
チルス（Lactobacillus）属の細菌によつて生産
される。寒天上で培養した種々の培養物をペニシ
リウム・オグザリクム（Penicillium oxalicum）
の胞子に対して試験した結果を、第１表に示す。 第１表の注(1)…細胞はMRS寒天培地（アメリ
カ合衆国、ミシガン州、デトロイトのDIFCO
社製）上で35℃におき24時間、培養した。
MRS（商標）は酵母エキス、並びにプロテオー
スペプトン、牛肉エキス、酢酸ナトリウム、ク
エン酸ナトリウム、デキストロースを含む。寒
天はゲルを形成するように添加する。次に生細
胞を寒天上に、糸状菌ペニシリウム・オグザリ
クム（Penicillium oxalicum）106胞子／mlの
濃度で植菌した。鮮明な域の幅を測定した。 第１表の注(2)…これらの培養物は二酸化炭素を
含む35℃の密閉チヤンバー内で培養し、次にペ
ニシリウム・オグザリクム（P.oxalicum）に
対し作用させた。第１表に掲げたラクトバチル
ス・ブルガリクス（L.bulgaricus）及びラクト
バチルス・カゼイ（L.casei）株は異なつた遺
伝学的及び生理学的特徴を有する。これらの菌
株は全て、アメリカ合衆国、フロリダ州、サラ
ソタのマイクロライフ テクニツクス インコ
ーポレーテツド（Microlife Technics，Inc.）
に保管されている。
【表】 第１表から判明するように他の何れのラクトバ
チルス（Lactobacillus）株も、ラクトバチル
ス・カゼイの変種ラムノサス（Lactobacillus
casei var. rhamnosus）NRRL−Ｂ−15972ほど
有効ではない。後者の株菌を事後の実施例のため
に用いた。 実施例 ２ 液状の酵母及びカビ阻害製品（FIC）の調製、
生産及び精製 培地培養−ラクトバチルス・カゼイの変種ラム
ノサス（Lactobacillus casei var. rhamnosus）
NRRL−Ｂ−15972の培養物を、重量比で１％の
酵母エキス（英国、ハンプシヤー、バシングスト
ークのOxoid Ltd.製のOxoid−登録商標）を補
充したMRS（商標）ブロス（前出のDifco社製）
中で増殖させた。MRS（商標）は酵母エキス、プ
ロテオース ペプトン、牛肉エキス、酢酸ナトリ
ウム、クエン酸ナトリウム、及びデキストロース
をブロス中に含む。１リツトルの培地を殺菌し、
培養物で植菌し、振とう或は中和することなしに
35℃で18時間増殖させた。 精製は次の１−５の手法で行なつた。 １ フラツシユ蒸発−フラツシユ蒸発器（Roto
−Vap（商標））を用いて細胞と培地を濃縮（１
から100mlまで）した。暗褐色の混合物が残
つた（100ml）。 ２ ブタノール−次に濃縮された細胞−培地懸濁
物に１のｎ−ブタノールを混合した。この混
合物を分液漏斗に入れ、30分間で分離を得た。
底の水の層は捨てた。上層（ｎ−ブタノール
層）を次いでフラツシユ蒸発器を用い、乾いた
粒状物が残るまで濃縮した。次に本粒状物を50
mlの蒸留水中に再懸濁させた。 ３ エタノールによる抽出−この50mlの蒸留水混
合物に250mlのエタノール（100％）を加え、−
70℃で一晩放置して不純物を沈澱させた。沈澱
が生じた後に溶液を、−20℃におき12000×ｇで
20分間遠心力分離にかけた。次に上澄液をフラ
ツシユ蒸発器で濃縮した。油状物を10−20mlの
蒸留水中に再懸濁させた。 ４ カラム展開クロマトグラフイ−125gのシリ
カゲル（アメリカ合衆国、ミズーリ州、セント
ルイスのSigma−商標−社製）を含み28−200
メツシユ、平均孔径22オングストロームの薬剤
用カラム（2.6cm×35cm）を作製した。シリカ
ゲルを、メタノール、クロロホルム及び酢酸エ
チルを１：２：３の比率で混合してある溶剤中
に懸濁させた。カラムの全容量は186mlであつ
た。約５mlの濃縮エタノール分別物（抽出物）
を、このカラムにかけた。カラムを約400mlの
上記溶剤で洗滌した。カラム洗滌物は捨てた。 次に水、５％水酸化アンモニウム、氷酢酸、
アセトン及びｎ−ブタノールをそれぞれ２：
３：３：５：７の比率で混合してなる混合物を
溶剤として、カラムを洗滌した。溶剤を５ml宛
の分別液として集めて行つた。抗糸状菌性物質
を含む20回目から30回目までの分別液を保存し
た。これらの分別液を一つにまとめフラツシユ
蒸発器を用いて濃縮し、次いで５mlの蒸留水中
に再懸濁させた。 ５ アセトンを用いた沈降処理−５mlの濃縮カラ
ム分別物に150mlのアセトンを加え、−70℃で一
晩放置して不純物を除去するように沈澱を生じ
させた。上澄液を遠心分離にかけ、フラツシユ
蒸発器でアセトンを急速蒸発させ、得られた抗
糸状菌性物質を３mlの蒸留水中に再懸濁させ
た。 FICの検定−次の(a)−(d)を用いて、FICの検定
を行なつた。(a)．MRS（Difco）寒天平板、(b)．
MRS（Difco）軟寒天（MRSブロス100ml当り1g
のBacto（商標、Difco）寒天）、55℃で混和させ、
８ml／平板の割合で、(c)．ペニシリウム・オグザ
リクム（Penicillium oxalicum）の胞子108／ml
蒸留水、検定物当り１ml、(d)．被検定物。軟寒天
８mlの胞子（108／ml）と１mlの被検定物を混じ、
混合物を渦流させ、内容物をMRS平板上に注い
で、25℃で養生した。次に平板を糸状菌の生育に
ついて検査した。糸状菌が生育するものとしない
ものとがある。生育度は後述する規準で＋１と＋
４との間に分けられる。最終精製々品は96時間後
にもペニシリウム・オグザリクム（P.oxalicum）
の生育を生じさせなかつた。 実施例 ３ 本実施例は実施例２に類似のFICを生産するた
めの別の抽出法を示すものである。 培地と培養−１％の酵母エキス（OXOID−登
録商標）又は１％のホエータンパク質濃縮物又は
１％のニンニクエキスを補充した葉酸検定培地
（Folic Acid Assay Medium−前出のDIFCO社
製）中で培養物を増殖させた。１リツトルの培地
を殺菌し、培養物で植菌し、振とう或は中和する
ことなしに35℃で18時間増殖させた。 精製を次の１−３の手法で行なつた。 １ ブタノールによる抽出−細胞及び培地の懸濁
物ち５リツトルのｎ−ブタノールを混合した。
混合物を分液漏斗に入れ、ｎ−ブタノール層を
取得した。この層を次に、フラツシユ蒸発器を
用い濃縮した。 ２ エタノールによる抽出−上の混合物（50ml）
に250mlのエタノール（100％）を加え、−70℃
で一晩沈降させた。次に−20℃におき12000×
ｇで20分間、遠心分絵にかけた。次いで上澄液
を傾斜し、フラツシユ蒸発器を用いて濃縮し
た。 ３ 透析−エタノールからの沈澱物を次に、1000
ダルトンの分子寸法を遮断する透析バツグに入
れた。バツクとその内容物を４℃で18時間、蒸
留水（100ml）に対し透析した。次に蒸留水を
フラシユ蒸発器で濃縮した。 実施例２におけると同様にFICを検定した。結
果を第２表に掲げる。 １％のニンニクエキスを補充した葉酸基体の検
定培地が最高濃度のFICを生成した。
【表】 実施例 ４ 各種の栄養培地中でのラクトバチルス・カゼイ
の変種ラムノサス NRRL−Ｂ−15972による
FICの形質発現の比較 ラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサス
（Lactobacillus casei var. rhamnosus）NRRL
−Ｂ−15972を250mlの種々な栄養培地に植菌し
て、25℃で18時間培養した。次に実施例２につい
て前述したのと同様な手段で、細胞及び培地を抽
出し処理した。次いで１mlの抽出物について、実
施例２で述べた検定法を用い１ml当り107胞子の
胞子濃度で糸状菌に対する作用を検定した。検定
平板について糸状菌の生育を養生時間24時間後、
48時間後、及び72時間後にそれぞれ検査した。結
果を第３表に掲げる。
【表】 上の結果は製品（FIC）の生産に対し、栄養培
地の選択が重要であることを示している。ホエー
基体の培地に酵母エキスを補充して良好なラクト
バチルス成長を得る場合にすら、十分な製品
（FIC）が生産されなかつた。また上の結果は製
品（FIC）の生産のために培地の成分が重要であ
るばかりではなく、特定成分のブランド（つま
り、どの会社により提供されたものか）も重要で
あることを示している。培地中のOxoid（登録商
標）酵母エキスを別のブランドの酵母エキス
Tureen（登録商標）と置換えたら、製品（FIC）
の形質発現が減少した。１％のOxoid（登録商標）
酵母エキスを補充したMRS Difco（登録商標）培
地が最高濃度の製品（FIC）生産、したがつて最
高の糸状菌阻害を得させた。ケイ皮酸、フエニル
アラニン、及びプロピオン酸ナトリウムは全て、
FICの生産を高めた。 実施例 ５ 食品において利用するための乾燥FICの調製と
生産 ラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサス
（Lactobacillus casei var. rhamnosus）NRRL
−Ｂ−15972を、次の成分を有するブロス中で増
殖させた：乳糖２％、脱脂粉乳１％、酵母エキス
１％、Na2HPO40.36％、KH2PO40.56％、痕跡量
のMgSO4及びMnSO4。無機塩Na2HPO4及び
KH2PO4は必要とするよりも10倍だけ濃くし、オ
ートクレープ処理した後に増殖培地に加えた。１
リツトルの培地を121℃で５分間殺菌し、培養物
を植菌して35℃で振とうすることなく18時間増殖
させた。 上述の培地中で培養物を35℃で18時間増殖させ
た後、培養容器を70℃の保温槽に45分間入れて、
培養物を熱により不活性とした。次に培地を18時
間、凍結乾燥した。25mlの液状培地から1.2gの乾
燥製品（FIC）が得られた。 その乾燥製品について実施例２で述べたのと同
様な手法を用い、１ml当り107個のペニシリウ
ム・オグザリクム（P.oxalicum）胞子といつた
一定の糸状菌濃度で力価を検定した。結果を第４
表に示す。 また同乾燥製品（FIC）の1gについて、糸状菌
胞子の個数を変えて25℃で力価を検定した結果を
第５表に示す。 第４表及び第５表に掲げた結果は、乾燥した非
抽出のFIC調製物が糸状菌阻害を行なうことを示
している。
【表】
【表】
【表】 実施例 ６ コテージチーズの貯蔵寿命を延ばすための乾燥
製品（FIC）の利用 実施例５の製品（FIC）をコテージチーズの表
面にふりかけ、そのコテージチーズに対しペニシ
リウム・オグザリクム（P.oxalicum）の胞子を
105／mlの割合で加えた。製品（FIC）は1.0g／ml
の濃度で用いた。約35gのコテージチーズを、各
試験ごとに用いた。試験は25℃で実施した。 結果を第６表に示す。
【表】 −＝菌集合体が存在せず。
＋４＝菌集合体の最終的な緑色沈着物が
出現。食用不可。
本発明に係る製品（FIC）は比較的低濃度で、
107胞子／mlまでの濃度のペニシリウム・オグザ
リクム（Penicillium oxalicum）を少なくとも
24時間、阻害する。製品（FIC）は、それによつ
て処理される組成物中で極めて重大な個数である
103胞子／mlまでの糸状菌を極く容易に阻害する。
10胞子／mlより多い糸状菌個数は重要視されるべ
き数値である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ ラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサス
    （Lactobacillus casei var. rhamnosus）NRRL
    −Ｂ−15972の主たる同定特性を有するラクトバ
    チルス属細菌の生細胞を硫黄含有有機化合物に富
    む栄養培地中で、該培地中に単離可能な酵母及び
    カビ阻害性物質であつて1000ダルトンより小さな
    分子量を有し、紫外線吸収スペクトルが269nmに
    おいて吸収極大を有し、クロロホルム及びｎ−ヘ
    キサンに不溶であると共にエタノール、ｎ−ブタ
    ノール及びアセトンに可溶であり、約−70℃から
    100℃においてPH３−10の範囲で安定である酵母
    及びカビ阻害性物質が生産されるように培養し、
    培養後に培地を濃縮処理して製品を得る酵母及び
    カビ阻害性製品の製法。 ２ 請求項１に記載の製法において、培養後の前
    記培地からラクトバチルス属細菌の生細胞を除去
    した上で、該培地を濃縮処理して製品を得る酵母
    及びカビ阻害性製品の製法。 ３ 請求項１に記載の製法において、培養後の前
    記培地に水と混合しない有機溶剤を混合してこの
    有機溶剤中に前記物質を抽出した上で、該有機溶
    剤を培地から分離し、この有機溶剤から前記物質
    を分離して製品を得る酵母及びカビ阻害性製品の
    製法。 ４ 請求項１に記載の製法において、培養後の前
    記培地に水と混合しない有機溶剤を混合してこの
    有機溶剤中に前記物質を抽出した上で、該有機溶
    剤を培地から分離し、この有機溶剤から前記物質
    を分離し、分離した物質をさらに液体クロマトグ
    ラフイー法を用い精製して製品を得る酵母及びカ
    ビ阻害製品の製法。 ５ 請求項１に記載の製法において、培養後の前
    記培地に水と混合しない有機溶剤を混合してこの
    有機溶剤中に前記物質を抽出した上で、該有機溶
    剤を培地から分離し、この有機溶剤から前記物質
    を分離し、分離した物質をさらに透析膜を用いた
    液体透析により精製して製品を得る酵母及びカビ
    阻害性製品の製法。 ６ ラクトバチルス・カゼイの変種ラムノサス
    （Lactobacillus casei var. rhamnosus）NRRL
    −Ｂ−15972の主たる同定特性を有するラクトバ
    チルス属細菌の生細胞を硫黄含有有機化合物に富
    む栄養培地中で培養して産出される単離可能な酵
    母及びカビ阻害性物質であつて1000ダルトンより
    小さな分子量を有し、紫外線吸収スペクトルが
    269nmにおいて吸収極大を有し、クロロホルム及
    びｎ−ヘキサンに不溶であると共にエタノール、
    ｎ−ブタノール及びアセトンに可溶であり、約−
    70℃から100℃においてPH３−10の範囲で安定で
    ある酵母及びカビ阻害性物質を、有効成分とする
    酵母及びカビ阻害性製品。 ７ 前記したラクトバチルス属の生細胞を除去し
    てある請求項６の酵母及びカビ阻害性製品。
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