JPH0588787B2 - - Google Patents
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- JPH0588787B2 JPH0588787B2 JP61130506A JP13050686A JPH0588787B2 JP H0588787 B2 JPH0588787 B2 JP H0588787B2 JP 61130506 A JP61130506 A JP 61130506A JP 13050686 A JP13050686 A JP 13050686A JP H0588787 B2 JPH0588787 B2 JP H0588787B2
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- Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Magnetic Means (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、抗原・抗体の測定法に関し、特に、
安全で、高感度、高信頼性である上に極めて短時
間で測定結果が得られる測定法に関する。
安全で、高感度、高信頼性である上に極めて短時
間で測定結果が得られる測定法に関する。
従来、試料液中の抗原又は抗体の濃度を測定す
る方法の１つとして、ラテツクス凝集法が知られ
ている。この方法は、測定しようとする抗原又は
抗体と特異的に反応する抗体又は抗原を固定化し
たポリエチレン等のラテツクス粒子を試料液中に
分散させ、抗原−抗体反応に伴なつて生成するラ
テツクス粒子の凝集塊量を光散乱を利用して光学
的に測定し、もつて試料液中の抗原又は抗体の濃
度を測定するものである。
る方法の１つとして、ラテツクス凝集法が知られ
ている。この方法は、測定しようとする抗原又は
抗体と特異的に反応する抗体又は抗原を固定化し
たポリエチレン等のラテツクス粒子を試料液中に
分散させ、抗原−抗体反応に伴なつて生成するラ
テツクス粒子の凝集塊量を光散乱を利用して光学
的に測定し、もつて試料液中の抗原又は抗体の濃
度を測定するものである。
上記のラテツクス凝集法はラジオイムノアツセ
イのように危険性がなく安全で、またエンザイム
イムノアツセイに比べ簡便であるとの利点を有す
るが、抗原−抗体反応に伴なうラテツクス粒子の
凝集に長い場合には約２時間以上という長時間を
要するため短時間で測定結果が得られないという
問題を有している。また、凝集塊量の測定に高価
な光学装置を必要とする不利もある。
イのように危険性がなく安全で、またエンザイム
イムノアツセイに比べ簡便であるとの利点を有す
るが、抗原−抗体反応に伴なうラテツクス粒子の
凝集に長い場合には約２時間以上という長時間を
要するため短時間で測定結果が得られないという
問題を有している。また、凝集塊量の測定に高価
な光学装置を必要とする不利もある。
そこで、本発明の目的は、高感度、高信頼性で
かつ安全であるばかりでなく、短時間で測定結果
を得ることができる抗原・抗体の測定法、特に抗
原・抗体濃度測定法を提供することにある。
かつ安全であるばかりでなく、短時間で測定結果
を得ることができる抗原・抗体の測定法、特に抗
原・抗体濃度測定法を提供することにある。
〔問題点を解決するための手段〕
本発明は、かかる測定法として、試料液中の抗
原又は抗体の濃度を測定する方法であつて、前記
の抗原又は抗体に特異的に結合し得る抗体又は抗
原を固定化した磁気微粒子を前記試料液中に分散
させることにより抗原−抗体反応を生起させ、抗
原−抗体−磁気微粒子結合体を生成させ、 次に、試料液に磁界を適用して前記の抗原−抗
体−磁気微粒子結合体の凝集塊を生成させ、 次に、磁界の適用を停止して、未反応の抗体又
は抗原を固定化した磁気微粒子を試料液中に分散
させ、 次に、試料液中に懸濁する前記凝集塊濃度を測
定する、 工程を有する抗原・抗体濃度測定法を提供する
ものである。
原又は抗体の濃度を測定する方法であつて、前記
の抗原又は抗体に特異的に結合し得る抗体又は抗
原を固定化した磁気微粒子を前記試料液中に分散
させることにより抗原−抗体反応を生起させ、抗
原−抗体−磁気微粒子結合体を生成させ、 次に、試料液に磁界を適用して前記の抗原−抗
体−磁気微粒子結合体の凝集塊を生成させ、 次に、磁界の適用を停止して、未反応の抗体又
は抗原を固定化した磁気微粒子を試料液中に分散
させ、 次に、試料液中に懸濁する前記凝集塊濃度を測
定する、 工程を有する抗原・抗体濃度測定法を提供する
ものである。
本発明において、抗原又は抗体の固定化に用い
る磁気微粒子の材料は、特に限定されず、例え
ば、磁性金属微粉、Fe3O4，γ−Fe2O3，Co−γ
−Fe2O3、（NiCuZn）Ｏ・Fe2O3，（CuZn）Ｏ，
Fe2O3.（Mn・Zn）O.Fe2O3，（NiZn）Ｏ・Fe2O3，
SrO・6Fe2O3，BaO・6Fe2O3，SiO2で被覆した
Fe3O4（粒径200Å）〔Enzyme Microb.
Technol.，vol.2，p.2−10（1980）参照〕，各種の
高分子材料（ナイロン、ポリアクリルアミド等）
とフエライトとの複合微粒子等が挙げられる。ま
た、これらの磁気別粒子の粒径は、50Å〜10μm
の範囲が好ましく、特に100Å〜1μmの範囲であ
ることが好ましい。磁気微粒子の粒径が小さすぎ
ると外部磁場による凝集操作が不可能となるか、
もしくは非常に強い磁場を要する。また、粒径が
大きすぎると試料液に良好に分散させることが困
難となる。
る磁気微粒子の材料は、特に限定されず、例え
ば、磁性金属微粉、Fe3O4，γ−Fe2O3，Co−γ
−Fe2O3、（NiCuZn）Ｏ・Fe2O3，（CuZn）Ｏ，
Fe2O3.（Mn・Zn）O.Fe2O3，（NiZn）Ｏ・Fe2O3，
SrO・6Fe2O3，BaO・6Fe2O3，SiO2で被覆した
Fe3O4（粒径200Å）〔Enzyme Microb.
Technol.，vol.2，p.2−10（1980）参照〕，各種の
高分子材料（ナイロン、ポリアクリルアミド等）
とフエライトとの複合微粒子等が挙げられる。ま
た、これらの磁気別粒子の粒径は、50Å〜10μm
の範囲が好ましく、特に100Å〜1μmの範囲であ
ることが好ましい。磁気微粒子の粒径が小さすぎ
ると外部磁場による凝集操作が不可能となるか、
もしくは非常に強い磁場を要する。また、粒径が
大きすぎると試料液に良好に分散させることが困
難となる。
上記の材料および粒径を有するものの中でも特
に好ましいものとして、SiO2で被覆した粒径約
200ÅのFe3O4粒子、及び粒径200〜300Åのγ−
Fe2O3粒子を挙げることができる。さらに、この
ような好ましい磁気微粒子として、走磁性細菌か
ら得られる磁鉄鉱（Fe3O4）からなる微粒子（粒
径約500Å）が挙げられる。前記走磁性細菌は、
例えば特開昭62−61599号に開示された方法およ
び採取器により淡水又は海水から容易に採取する
ことができる。
に好ましいものとして、SiO2で被覆した粒径約
200ÅのFe3O4粒子、及び粒径200〜300Åのγ−
Fe2O3粒子を挙げることができる。さらに、この
ような好ましい磁気微粒子として、走磁性細菌か
ら得られる磁鉄鉱（Fe3O4）からなる微粒子（粒
径約500Å）が挙げられる。前記走磁性細菌は、
例えば特開昭62−61599号に開示された方法およ
び採取器により淡水又は海水から容易に採取する
ことができる。
本発明に用いられる抗原又は抗体を固定化した
磁気微粒子は、上記の磁気微粒子に所要の抗原又
は抗体を固定化することにより製造することがで
きる。抗原又は抗体の磁気微粒子への固定化は、
抗原又は抗体の固定化技術として公知の方法によ
り行なうことができ、例えば、シランカツプリン
グ剤、ブドウ状球菌より得られるProteinAを磁
気微粒子に被膜させ、そして抗体を結合させる方
法等を用いて行なう。
磁気微粒子は、上記の磁気微粒子に所要の抗原又
は抗体を固定化することにより製造することがで
きる。抗原又は抗体の磁気微粒子への固定化は、
抗原又は抗体の固定化技術として公知の方法によ
り行なうことができ、例えば、シランカツプリン
グ剤、ブドウ状球菌より得られるProteinAを磁
気微粒子に被膜させ、そして抗体を結合させる方
法等を用いて行なう。
上記の磁気微粒子に固定化される抗体又は抗原
の種類は、被測定対象である特定の抗原又は抗体
に対して抗体又は抗原の関係にあるものであり、
試料液中の抗原又は抗体に応じて選択される。か
かる抗原又は抗体の例としては次のものを挙げる
ことがでできる。
の種類は、被測定対象である特定の抗原又は抗体
に対して抗体又は抗原の関係にあるものであり、
試料液中の抗原又は抗体に応じて選択される。か
かる抗原又は抗体の例としては次のものを挙げる
ことがでできる。
抗原類：IgG、IgA、IgM、IgE、アルブミン、
HCG、AFP、カルジオライピン抗原、血液型物
質、コンカナバリンＡ、DNT、ブロスタグラン
ジン、CRP、HBs、ヒト成長ホルモン、ステロ
イドホルモン、CEA、IgD等： 抗体類：抗アルブミン抗体、抗HCG抗体、抗
IgG抗体、抗IgA抗体、抗IgM抗体、抗IgE抗体、
抗IgD抗体、抗AFP抗体、抗DNT抗体、抗プロ
スタグランジン抗体、抗ヒト凝固フアクター抗
体、抗CRP抗体、抗HBs抗体、抗ヒト成長ホル
モン抗体、抗ステロイドホルモン抗体、およびこ
れらを含む血清、並びにモノクローナル抗体： 本発明の方法により測定し得る試料液中の抗原
又は抗体の例としても上記例示のものを挙げるこ
とができる。
HCG、AFP、カルジオライピン抗原、血液型物
質、コンカナバリンＡ、DNT、ブロスタグラン
ジン、CRP、HBs、ヒト成長ホルモン、ステロ
イドホルモン、CEA、IgD等： 抗体類：抗アルブミン抗体、抗HCG抗体、抗
IgG抗体、抗IgA抗体、抗IgM抗体、抗IgE抗体、
抗IgD抗体、抗AFP抗体、抗DNT抗体、抗プロ
スタグランジン抗体、抗ヒト凝固フアクター抗
体、抗CRP抗体、抗HBs抗体、抗ヒト成長ホル
モン抗体、抗ステロイドホルモン抗体、およびこ
れらを含む血清、並びにモノクローナル抗体： 本発明の方法により測定し得る試料液中の抗原
又は抗体の例としても上記例示のものを挙げるこ
とができる。
本発明の方法においては、まず、抗原又は抗体
を固定化した磁気微粒子を試料液中に分散させ
る。例えば、１mgの抗体固定化磁気微粒子を0.5
％の界面活性剤（Tween80）を含む0.15N NaCl
溶液4.5mlに懸濁し、60Wで１分間超音波をかけ
て分散させる。
を固定化した磁気微粒子を試料液中に分散させ
る。例えば、１mgの抗体固定化磁気微粒子を0.5
％の界面活性剤（Tween80）を含む0.15N NaCl
溶液4.5mlに懸濁し、60Wで１分間超音波をかけ
て分散させる。
次に１〜100μg／mlの抗原溶液を0.5ml加え撹拌
する。この分散処理により、試料液中に存在した
抗体又は抗原は磁気微粒子上に固定化されている
抗原又は抗体に結合し、抗原−抗体−磁気微粒子
からなる三元結合体を生成する。これらの結合体
は、抗原−抗体反応の進行により隣接する結合体
同士で凝集する傾向にあるが、放置するとその速
度は極めて緩慢である。
する。この分散処理により、試料液中に存在した
抗体又は抗原は磁気微粒子上に固定化されている
抗原又は抗体に結合し、抗原−抗体−磁気微粒子
からなる三元結合体を生成する。これらの結合体
は、抗原−抗体反応の進行により隣接する結合体
同士で凝集する傾向にあるが、放置するとその速
度は極めて緩慢である。
本発明の方法ではこの段階で試料液に磁界を適
用する。すると、前記結合体同士の凝集が促進さ
れ、極く短時間、即ち１〜10分間で凝集が終了し
凝集塊が生成する。この凝集塊の生成量（凝集塊
の大きさ×数）は試料中に存在した抗原又は抗体
の濃度に比例する。なお、試料液に磁界を適用す
る方法は特に限定されず、例えば、試料液の容器
の外側に対向させて磁石を配置する方法、試料容
器を電磁石のコイルの中に設置する方法等が挙げ
られる。
用する。すると、前記結合体同士の凝集が促進さ
れ、極く短時間、即ち１〜10分間で凝集が終了し
凝集塊が生成する。この凝集塊の生成量（凝集塊
の大きさ×数）は試料中に存在した抗原又は抗体
の濃度に比例する。なお、試料液に磁界を適用す
る方法は特に限定されず、例えば、試料液の容器
の外側に対向させて磁石を配置する方法、試料容
器を電磁石のコイルの中に設置する方法等が挙げ
られる。
上記の凝集塊の生成時には、未反応の抗原又は
抗体固定化磁気微粒子も磁界の作用やクーロン力
等で物理的に凝集したり、前記凝集塊に付着する
可能性があるが、この段階で磁界の適用が停止さ
れ、撹拌、振動等により分散処理を施すと、この
ような未反応抗原又は抗体を有する磁気微粒子の
凝集物や付着物は、再び液中に微細に分散され
る。一方、前記の抗原−抗体反応により生成した
凝集塊はその状態のまま液中に残存することにな
る。
抗体固定化磁気微粒子も磁界の作用やクーロン力
等で物理的に凝集したり、前記凝集塊に付着する
可能性があるが、この段階で磁界の適用が停止さ
れ、撹拌、振動等により分散処理を施すと、この
ような未反応抗原又は抗体を有する磁気微粒子の
凝集物や付着物は、再び液中に微細に分散され
る。一方、前記の抗原−抗体反応により生成した
凝集塊はその状態のまま液中に残存することにな
る。
次に、液中に存在する凝集塊の生成量（大きさ
×数）を測定する。測定法は特に限定されない
が、自動測定化に適する点で好ましい方法とし
て、イメージセンサを利用する方法が挙げられ
る。この方法は、凝集塊を含む試料を光学顕微鏡
に供し、CCDカメラにより顕微鏡視野の像をと
らえる。背景（バツクグランド）が白い画素とし
て示されるのに対し、凝集塊は黒い画素として示
される。黒い画素数から凝集塊の大きさと数をコ
ンピユータ処理によりヒストグラム化し凝集塊の
生成量を求める。あるいは他の方法としては、凝
集塊の大きさおよび数に依存する赤外光の散乱の
度合を測定する方法を用いることもできる。前記
のイメージセンサを利用する方法は、従来のラテ
ツクス凝集法ではラテツクス粒子の光透過性のた
めに利用することに技術的な困難があつたが、本
発明の磁気微粒子凝集法では容易にこれを利用す
ることができるため、、凝集塊の測定を安価な装
置を用いて行なうことができる。
×数）を測定する。測定法は特に限定されない
が、自動測定化に適する点で好ましい方法とし
て、イメージセンサを利用する方法が挙げられ
る。この方法は、凝集塊を含む試料を光学顕微鏡
に供し、CCDカメラにより顕微鏡視野の像をと
らえる。背景（バツクグランド）が白い画素とし
て示されるのに対し、凝集塊は黒い画素として示
される。黒い画素数から凝集塊の大きさと数をコ
ンピユータ処理によりヒストグラム化し凝集塊の
生成量を求める。あるいは他の方法としては、凝
集塊の大きさおよび数に依存する赤外光の散乱の
度合を測定する方法を用いることもできる。前記
のイメージセンサを利用する方法は、従来のラテ
ツクス凝集法ではラテツクス粒子の光透過性のた
めに利用することに技術的な困難があつたが、本
発明の磁気微粒子凝集法では容易にこれを利用す
ることができるため、、凝集塊の測定を安価な装
置を用いて行なうことができる。
以下、本発明を実施例により具体的に説明す
る。
る。
実施例 １
(1) （MnZn）Ｏ・Fe2O3で表わされるフエライ
トからなる平均粒径300Åの粒子に、５ml／ｇ
フエライトのアセトンを添加し、35℃で５分間
強く撹拌した。次に、γ−アミノプロピルトリ
エトキシシラン5μ／ｇフエライトを加え、
35℃でアセトンがほぼ完全に蒸発するまで撹拌
した。次に、フエライト微粒子を約100ml／ｇ
フエライトのアセトン中に懸濁させ、懸濁後３
分以内に生じた沈殿物は除去し、その後24時間
放置後までに生じた沈殿物0.2gに25mlの２％グ
ルタルアルデヒド溶液（0.1M Na−borate緩
衝液に溶解）を加え、20℃で撹拌後1M
NaOH水溶液を徐々に加えて溶液のPHを11.0に
調整し、１時間反応させた。その後、遠心によ
り得られた沈殿物を水で洗浄後、抗ヒトIgG血
清液中に懸濁し、４℃で16時間撹拌した。こう
して、抗ヒトIgG抗体固定化フエライト微粒子
を得た。
トからなる平均粒径300Åの粒子に、５ml／ｇ
フエライトのアセトンを添加し、35℃で５分間
強く撹拌した。次に、γ−アミノプロピルトリ
エトキシシラン5μ／ｇフエライトを加え、
35℃でアセトンがほぼ完全に蒸発するまで撹拌
した。次に、フエライト微粒子を約100ml／ｇ
フエライトのアセトン中に懸濁させ、懸濁後３
分以内に生じた沈殿物は除去し、その後24時間
放置後までに生じた沈殿物0.2gに25mlの２％グ
ルタルアルデヒド溶液（0.1M Na−borate緩
衝液に溶解）を加え、20℃で撹拌後1M
NaOH水溶液を徐々に加えて溶液のPHを11.0に
調整し、１時間反応させた。その後、遠心によ
り得られた沈殿物を水で洗浄後、抗ヒトIgG血
清液中に懸濁し、４℃で16時間撹拌した。こう
して、抗ヒトIgG抗体固定化フエライト微粒子
を得た。
(2) 上記の抗体固定化フエライト微粒子１mgを
0.5％ポリソルベート（polysorbate）80
（Tween80）を含む0.154N NaCl水溶液５mlに
懸濁し、60Wで１分間超音波をかけて分散処理
し、次に０，１，10，100μg／mlの４種類の濃
度でヒトIgGを加えた。
0.5％ポリソルベート（polysorbate）80
（Tween80）を含む0.154N NaCl水溶液５mlに
懸濁し、60Wで１分間超音波をかけて分散処理
し、次に０，１，10，100μg／mlの４種類の濃
度でヒトIgGを加えた。
これら４種類の濃度でヒトIgGを含む試料に
磁石を近づけ、フエライト微粒子を凝集させて
抗原−抗体反応によるフエライト微粒子間結合
を生じさせた。
磁石を近づけ、フエライト微粒子を凝集させて
抗原−抗体反応によるフエライト微粒子間結合
を生じさせた。
次にこれらを激しく振とうして抗原−抗体反
応による結合以外（クーロン力、磁力等）によ
つて凝集している塊りを分散させた。次にこれ
らの試料を光学顕微鏡で観察するとヒトIgG濃
度が0μg／mlの試料ではフエライト微粒子の凝
集塊が認められなかつたが、ヒトIgGを含む試
料では数μm〜数10μmの凝集塊が認められた。
そこでこれらの顕微鏡像をCCDカメラとコン
ピユーターにより画像処理し、凝集度を定量化
した。
応による結合以外（クーロン力、磁力等）によ
つて凝集している塊りを分散させた。次にこれ
らの試料を光学顕微鏡で観察するとヒトIgG濃
度が0μg／mlの試料ではフエライト微粒子の凝
集塊が認められなかつたが、ヒトIgGを含む試
料では数μm〜数10μmの凝集塊が認められた。
そこでこれらの顕微鏡像をCCDカメラとコン
ピユーターにより画像処理し、凝集度を定量化
した。
実施例 ２
(1) ヒト血清アルブミン66重量％、平均粒径300
ÅのFe3O4微粒子19重量％およびブドウ状球菌
タンパクＡ（staphylococcal protein Ａ）15重
量％からなる混合物190mgを0.5mlの水に懸濁し
た後、綿実油60mlを加え、60Wで１分間超音波
を作用させて均一に分散させた。次に、全体を
50℃の綿実油200ml中に徐々に加え、撹拌を10
分間行なつた。2000×ｇで15分間遠心分離を行
ない、得られた沈殿物を無水エーテルで洗浄し
綿実油を除去した。次に、2000×ｇで15分間遠
心分離し、沈殿物を水で洗浄し、大気中で乾燥
した。こうして得た処理物を0.5mgとり、0.1％
のポリソルベート80（Tween80）を含む0.154N
NaCl0.2mlを加えて懸濁させた。この懸濁液に
抗ヒトIgG0.5mgを加え、37℃で40分間反応さ
せ、抗体（抗ヒトIgG）固定化Fe3O4微粒子を
得た。
ÅのFe3O4微粒子19重量％およびブドウ状球菌
タンパクＡ（staphylococcal protein Ａ）15重
量％からなる混合物190mgを0.5mlの水に懸濁し
た後、綿実油60mlを加え、60Wで１分間超音波
を作用させて均一に分散させた。次に、全体を
50℃の綿実油200ml中に徐々に加え、撹拌を10
分間行なつた。2000×ｇで15分間遠心分離を行
ない、得られた沈殿物を無水エーテルで洗浄し
綿実油を除去した。次に、2000×ｇで15分間遠
心分離し、沈殿物を水で洗浄し、大気中で乾燥
した。こうして得た処理物を0.5mgとり、0.1％
のポリソルベート80（Tween80）を含む0.154N
NaCl0.2mlを加えて懸濁させた。この懸濁液に
抗ヒトIgG0.5mgを加え、37℃で40分間反応さ
せ、抗体（抗ヒトIgG）固定化Fe3O4微粒子を
得た。
(2) 上記の抗体固定化Fe3O4微粒子１mgを0.5％ポ
リソルベート80（Tween80）を含む0.154N
NaCl水溶液５mlに懸濁し、60Wで１分間超音
波をかけて分散処理し、次に０，１，10，
100μg／mlの４種類の濃度でヒトIgGを加えた。
これら４種類の濃度でヒトIgGを含む試料に磁
石を近づけ、Fe3O4微粒子を凝集させて抗原−
抗体反応によるフエライト微粒子間結合を生じ
させた。
リソルベート80（Tween80）を含む0.154N
NaCl水溶液５mlに懸濁し、60Wで１分間超音
波をかけて分散処理し、次に０，１，10，
100μg／mlの４種類の濃度でヒトIgGを加えた。
これら４種類の濃度でヒトIgGを含む試料に磁
石を近づけ、Fe3O4微粒子を凝集させて抗原−
抗体反応によるフエライト微粒子間結合を生じ
させた。
次にこれらを激しく振とうして抗原−抗体反応
による結合以外（クーロン力、磁力等）によつて
凝集している塊りを分散させた。次にこれらの試
料を光学顕微鏡で観察するとヒトIgG濃度が
0μg／mlの試料ではFe3O4微粒子の凝集塊が認め
られなかつたが、ヒトIgGを含む試料では数μm
〜数10μmの凝集塊が認められた。そこでこれら
の顕微鏡像をCCDカメラとコンピユーターによ
り画像処理し、凝集度を定量化した。
による結合以外（クーロン力、磁力等）によつて
凝集している塊りを分散させた。次にこれらの試
料を光学顕微鏡で観察するとヒトIgG濃度が
0μg／mlの試料ではFe3O4微粒子の凝集塊が認め
られなかつたが、ヒトIgGを含む試料では数μm
〜数10μmの凝集塊が認められた。そこでこれら
の顕微鏡像をCCDカメラとコンピユーターによ
り画像処理し、凝集度を定量化した。
実施例 ３
(1) 平均粒径300Åの磁鉄鉱（Fe3O4）粒子10mg
をγ−アミノプロピルトリエトキシシラン中に
加え、室温で10分間撹拌した。0.1Mリン酸緩
衝液（PH7.0）で洗浄後、2.5％濃度でグルタル
アルデヒドを含む0.1Mリン酸緩衝液（PH7.0）
中、室温で１時間反応させた。次いで、0.1M
リン酸緩衝液で洗浄後１，８−ジアミノ−４−
アミノメチルオクタン原液と室温で１時間反応
させた。0.1Mリン酸緩衝液で洗浄後、再び2.5
％グルタルアルデヒドを含む0.1Mリン酸緩衝
液（PH7.0）中で１時間反応させた。次に、
Fe3O4微粒子を抗ヒトIgG1mg／mlを含む0.1M
リン酸緩衝液生理食塩水４ml中に懸濁し、４℃
で12時間撹拌して反応を進めた。こうして抗体
（抗ヒトIgG）を固定化したFe3O4微粒子を得
た。
をγ−アミノプロピルトリエトキシシラン中に
加え、室温で10分間撹拌した。0.1Mリン酸緩
衝液（PH7.0）で洗浄後、2.5％濃度でグルタル
アルデヒドを含む0.1Mリン酸緩衝液（PH7.0）
中、室温で１時間反応させた。次いで、0.1M
リン酸緩衝液で洗浄後１，８−ジアミノ−４−
アミノメチルオクタン原液と室温で１時間反応
させた。0.1Mリン酸緩衝液で洗浄後、再び2.5
％グルタルアルデヒドを含む0.1Mリン酸緩衝
液（PH7.0）中で１時間反応させた。次に、
Fe3O4微粒子を抗ヒトIgG1mg／mlを含む0.1M
リン酸緩衝液生理食塩水４ml中に懸濁し、４℃
で12時間撹拌して反応を進めた。こうして抗体
（抗ヒトIgG）を固定化したFe3O4微粒子を得
た。
(2) 上記の抗体固定化Fe3O4微粒子１mgを0.5％ポ
リソルベート80（Tween80）を含む0.154N
NaCl水溶液５mlに懸濁し、60Wで１分間超音
波をかけて分散処理し、次に０，１，10，
100μg／mlの４種類の濃度でヒトIgGを加えた。
リソルベート80（Tween80）を含む0.154N
NaCl水溶液５mlに懸濁し、60Wで１分間超音
波をかけて分散処理し、次に０，１，10，
100μg／mlの４種類の濃度でヒトIgGを加えた。
これら４種類の濃度でヒトIgGを含む試料に磁
石を近づけ、Fe3O4微粒子を凝集させて抗原−抗
体反応によるフエライト微粒子間結合を生じさせ
た。
石を近づけ、Fe3O4微粒子を凝集させて抗原−抗
体反応によるフエライト微粒子間結合を生じさせ
た。
次にこれらを激しく振とうして抗原−抗体反応
による結合以外（クーロン力、磁力等）によつて
凝集している塊りを分散させた。次にこれらの試
料を光学顕微鏡で観察するとヒトIgG濃度が
Oμg／mlの試料ではFe3O4微粒子の凝集塊が認め
られなかつたが、ヒトIgGを含む試料では数μm
〜数10μmの凝集塊が認められた。そこでこれら
の顕微鏡像をCCDカメラとコンピユーターによ
り画像処理し、凝集度を定量化した。
による結合以外（クーロン力、磁力等）によつて
凝集している塊りを分散させた。次にこれらの試
料を光学顕微鏡で観察するとヒトIgG濃度が
Oμg／mlの試料ではFe3O4微粒子の凝集塊が認め
られなかつたが、ヒトIgGを含む試料では数μm
〜数10μmの凝集塊が認められた。そこでこれら
の顕微鏡像をCCDカメラとコンピユーターによ
り画像処理し、凝集度を定量化した。
本発明の抗原・抗体の測定法は、安全であり、
高感度、高信頼性であるばかりでなく、極めて短
時間で測定結果が得られる利点があり、さらに自
動測定化にも適している。具体的には、抗原又は
抗体の濃度測定法として利用すると、従来のラテ
ツクス凝集法によると測定に長い場合24時間以上
という長時間を要したが、本発明の方法では、１
時間程度で測定結果が得られる。
高感度、高信頼性であるばかりでなく、極めて短
時間で測定結果が得られる利点があり、さらに自
動測定化にも適している。具体的には、抗原又は
抗体の濃度測定法として利用すると、従来のラテ
ツクス凝集法によると測定に長い場合24時間以上
という長時間を要したが、本発明の方法では、１
時間程度で測定結果が得られる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 試料液中の抗原又は抗体の濃度を測定する方
法であつて、前記の抗原又は抗体に特異的に結合
し得る抗体又は抗原を固定化した磁気微粒子を前
記試料液中に分散させることにより抗原−抗体反
応を生起させ、抗原−抗体−磁気微粒子結合体を
生成させ、 次に、試料液に磁界を適用して前記の抗原−抗
体−磁気微粒子結合体の凝集塊を生成させ、 次に、磁界の適用を停止して、未反応の抗体又
は抗原を固定化した磁気微粒子を試料液中に分散
させ、 次に、試料液中に懸濁する前記凝集塊濃度を測
定する、 工程を有する抗原・抗体濃度測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61130506A JPS62287159A (ja) | 1986-06-05 | 1986-06-05 | 抗原・抗体の濃度測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61130506A JPS62287159A (ja) | 1986-06-05 | 1986-06-05 | 抗原・抗体の濃度測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62287159A JPS62287159A (ja) | 1987-12-14 |
| JPH0588787B2 true JPH0588787B2 (ja) | 1993-12-24 |
Family
ID=15035908
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61130506A Granted JPS62287159A (ja) | 1986-06-05 | 1986-06-05 | 抗原・抗体の濃度測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62287159A (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2603843B2 (ja) * | 1988-01-29 | 1997-04-23 | 三菱化学株式会社 | 抗原又は抗体の測定法 |
| US5238811A (en) * | 1988-04-26 | 1993-08-24 | Nippon Telegraph And Telephone Corporation | Laser magnetic immunoassay method and apparatus therefor and superparamagnetic material-labeled body and method for the manufacture of same |
| US5236824A (en) * | 1988-04-26 | 1993-08-17 | Nippon Telegraph And Telephone Corporation | Laser magnetic immunoassay method and method by a magnetophoresis apparatus therefor |
| JPH02210262A (ja) * | 1989-02-10 | 1990-08-21 | Shinotesuto Kenkyusho:Kk | 間接凝集反応測定法 |
| JPH02281142A (ja) * | 1989-04-24 | 1990-11-16 | Tdk Corp | 抗原または抗体の測定方法 |
| SE535918C2 (sv) * | 2010-06-10 | 2013-02-19 | Hemocue Ab | Detektion av magnetiskt inmärkta biologiska komponenter |
-
1986
- 1986-06-05 JP JP61130506A patent/JPS62287159A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62287159A (ja) | 1987-12-14 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |