JPH059071B2 - - Google Patents
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- JPH059071B2 JPH059071B2 JP4914984A JP4914984A JPH059071B2 JP H059071 B2 JPH059071 B2 JP H059071B2 JP 4914984 A JP4914984 A JP 4914984A JP 4914984 A JP4914984 A JP 4914984A JP H059071 B2 JPH059071 B2 JP H059071B2
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- gtp
- glutamyl
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- cyclohexylamino
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は安定した呈色反応を示し、正確な判定
値を得ることのできる体液中のγ−グルタミルト
ランスペプチダーゼ（以下「γ−GTP」と表わ
す）測定用試薬に関する。 γ−GTPは生体内に存在する転移酵素のひと
つで、γ−グルタミルペプチドを加水分解すると
同時に、γ−グルタミル基を他のペプチドやＬ−
アミノ酸に転移させる反応を触媒する作用がある
が、種々の肝疾患により血清中のγ−GTP活性
が上昇するので、肝疾患の診断を中心とする臨床
検査ではγ−GTP活性の測定は必須の項目とな
つている。 現在、体液中のγ−GTP活性を測定する方法
としては、基質としてγ−グルタミル−Ｐ−ニト
ロアニリドあるいはγ−グルタミル−３−カルボ
キシ−４−ヒドロキシアニリド等の合成基質を用
いて、γ−GTPによる転移反応の結果反応する
Ｐ−ニトロアニリン又は４−ヒドロキシアニリン
等を直接あるいはメタ過ヨウ素酸の存在下でフエ
ノール類等のカプラーと反応させてその呈色を光
学的に測定する方法が行われているが、この際、
メタ過ヨウ素酸塩等の酸化剤を使用し、塩基性下
で発色させることにより、合成基質に加水分解を
生ぜしめ、測定値に大きな誤差を与える原因とな
つている。 従来はこの点に関して各種の緩衝剤などを安定
剤として添加して合成基質の加水分解を抑制する
方法が試みられてきたが、いずれも呈色反応を阻
害したり、濁りを発生させたりして満足すべき結
果は得られなかつた。 本発明者らは、かかる問題について種々検討し
た結果、基質としてγ−グルタミル−３，5′−ジ
ブロム−４−ヒドロキシアニリド（以下「γ−
Glu−DBHA」と表わす）を用いる下記反応式に
よつて示されるγ−GTPの測定に於て、 γ−Glu−DBHA＋グリシルグリシンγ−GTP ―――→ γ−Glu−グリシルグリシン＋DBHA DBHA＋ｐ−キシレノールメタ過ヨウ素酸Na ―――――――――→ キノン色素 ３−シクロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホ
ン酸が有効な安定化作用を示し、該化合物を加え
ることによつて、極めて測定誤差の少ない結果が
得られることを見出した。 すなわち本発明は、γ−Glu−DBHAとグリシ
ルグリシンとの転移反応を利用して体液中のγ−
GTPを測定するγ−GTP測定用試薬において、
安定化剤として３−シクロヘキシルアミノ−１−
プロパンスルホン酸を含有することを特徴とする
γ−GTP測定用試薬に関する。 本発明のγ−GTP測定用試薬における３−シ
クロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸の
含有量は、呈色反応時の濃度が10〜500mmol／
、好ましくは50〜100mmol／となるような
量がよい。 次に本発明試薬の実施例およびそれを使用した
体液中のγ−GTP測定例を説明する。 実施例 １ γ−Glu−DBHA 5mmol／ グリシルグリシン 100mmol／ トリトンＸ−100 0.1W／Ｖ％ ３−シクロヘキシルアミノ−１−プロパンス
ルホン酸 80mmol／ PH＝8.5 実施例 ２ γ−Glu−DBHA 3mmol／ グリシルグリシン 100mmol／ トリトンＸ−100 0.1W／Ｖ％ ３−シクロヘキシルアミノ−１−プロパンス
ルホン酸 50mmol／ PH＝8.5 測定例 体液中のγ−GTP活性を実施例１の試薬を用
いて以下に示すように測定を行なつた。なお効果
を比較するために、実施例１の試薬より３−シク
ロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸を除
いたものを対照試薬として使用して同様に測定を
行なつた。 １ 試薬 (1) 試薬Ａ（実施例１の試薬） (2) 試薬Ｂ（対照試薬、試薬Ａより３−シクロ
ヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸を除い
たもの） (3) 試薬Ｃ（呈色液） ｐ−キシレノール 20mmol／ メタ過ヨウ素酸ナトリウム ５ 〃 水酸化ナトリウム 170 〃 ２ 操作および結果 精製水20μおよび血清20μのそれぞれに２
mlの試薬Ａを加え、37℃で15分間加温し、次に２
mlの試薬Ｃを加えて室温に放置した。試薬Ｃを加
えてから10分後および20分後の吸光度をそれぞれ
610nmで測定した。 また、試薬Ａの代りに試薬Ｂを用いて全く同じ
操作を行なつた。 測定の結果は次表に示すとおりである。
値を得ることのできる体液中のγ−グルタミルト
ランスペプチダーゼ（以下「γ−GTP」と表わ
す）測定用試薬に関する。 γ−GTPは生体内に存在する転移酵素のひと
つで、γ−グルタミルペプチドを加水分解すると
同時に、γ−グルタミル基を他のペプチドやＬ−
アミノ酸に転移させる反応を触媒する作用がある
が、種々の肝疾患により血清中のγ−GTP活性
が上昇するので、肝疾患の診断を中心とする臨床
検査ではγ−GTP活性の測定は必須の項目とな
つている。 現在、体液中のγ−GTP活性を測定する方法
としては、基質としてγ−グルタミル−Ｐ−ニト
ロアニリドあるいはγ−グルタミル−３−カルボ
キシ−４−ヒドロキシアニリド等の合成基質を用
いて、γ−GTPによる転移反応の結果反応する
Ｐ−ニトロアニリン又は４−ヒドロキシアニリン
等を直接あるいはメタ過ヨウ素酸の存在下でフエ
ノール類等のカプラーと反応させてその呈色を光
学的に測定する方法が行われているが、この際、
メタ過ヨウ素酸塩等の酸化剤を使用し、塩基性下
で発色させることにより、合成基質に加水分解を
生ぜしめ、測定値に大きな誤差を与える原因とな
つている。 従来はこの点に関して各種の緩衝剤などを安定
剤として添加して合成基質の加水分解を抑制する
方法が試みられてきたが、いずれも呈色反応を阻
害したり、濁りを発生させたりして満足すべき結
果は得られなかつた。 本発明者らは、かかる問題について種々検討し
た結果、基質としてγ−グルタミル−３，5′−ジ
ブロム−４−ヒドロキシアニリド（以下「γ−
Glu−DBHA」と表わす）を用いる下記反応式に
よつて示されるγ−GTPの測定に於て、 γ−Glu−DBHA＋グリシルグリシンγ−GTP ―――→ γ−Glu−グリシルグリシン＋DBHA DBHA＋ｐ−キシレノールメタ過ヨウ素酸Na ―――――――――→ キノン色素 ３−シクロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホ
ン酸が有効な安定化作用を示し、該化合物を加え
ることによつて、極めて測定誤差の少ない結果が
得られることを見出した。 すなわち本発明は、γ−Glu−DBHAとグリシ
ルグリシンとの転移反応を利用して体液中のγ−
GTPを測定するγ−GTP測定用試薬において、
安定化剤として３−シクロヘキシルアミノ−１−
プロパンスルホン酸を含有することを特徴とする
γ−GTP測定用試薬に関する。 本発明のγ−GTP測定用試薬における３−シ
クロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸の
含有量は、呈色反応時の濃度が10〜500mmol／
、好ましくは50〜100mmol／となるような
量がよい。 次に本発明試薬の実施例およびそれを使用した
体液中のγ−GTP測定例を説明する。 実施例 １ γ−Glu−DBHA 5mmol／ グリシルグリシン 100mmol／ トリトンＸ−100 0.1W／Ｖ％ ３−シクロヘキシルアミノ−１−プロパンス
ルホン酸 80mmol／ PH＝8.5 実施例 ２ γ−Glu−DBHA 3mmol／ グリシルグリシン 100mmol／ トリトンＸ−100 0.1W／Ｖ％ ３−シクロヘキシルアミノ−１−プロパンス
ルホン酸 50mmol／ PH＝8.5 測定例 体液中のγ−GTP活性を実施例１の試薬を用
いて以下に示すように測定を行なつた。なお効果
を比較するために、実施例１の試薬より３−シク
ロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸を除
いたものを対照試薬として使用して同様に測定を
行なつた。 １ 試薬 (1) 試薬Ａ（実施例１の試薬） (2) 試薬Ｂ（対照試薬、試薬Ａより３−シクロ
ヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸を除い
たもの） (3) 試薬Ｃ（呈色液） ｐ−キシレノール 20mmol／ メタ過ヨウ素酸ナトリウム ５ 〃 水酸化ナトリウム 170 〃 ２ 操作および結果 精製水20μおよび血清20μのそれぞれに２
mlの試薬Ａを加え、37℃で15分間加温し、次に２
mlの試薬Ｃを加えて室温に放置した。試薬Ｃを加
えてから10分後および20分後の吸光度をそれぞれ
610nmで測定した。 また、試薬Ａの代りに試薬Ｂを用いて全く同じ
操作を行なつた。 測定の結果は次表に示すとおりである。
【表】
数値は吸光度を示す。
上記の測定結果から明らかなように、本発明の
試薬を用いた場合には、10分後と20分後の吸光度
差が殆どなく、呈色の安定性が非常によいことが
わかる。対照試薬の場合には10分後から20分後に
至る間に吸光度が増しており、呈色の安定性がな
いことを示している。 以上説明したとおり、本発明の試薬は３−シク
ロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸を添
加したことによつて試薬成分である合成基質の加
水分解を抑え、それによつて呈色安定性を得るこ
とができるので、本発明試薬を使用することによ
りγ−GTP測定を正確に行なうことができる。
上記の測定結果から明らかなように、本発明の
試薬を用いた場合には、10分後と20分後の吸光度
差が殆どなく、呈色の安定性が非常によいことが
わかる。対照試薬の場合には10分後から20分後に
至る間に吸光度が増しており、呈色の安定性がな
いことを示している。 以上説明したとおり、本発明の試薬は３−シク
ロヘキシルアミノ−１−プロパンスルホン酸を添
加したことによつて試薬成分である合成基質の加
水分解を抑え、それによつて呈色安定性を得るこ
とができるので、本発明試薬を使用することによ
りγ−GTP測定を正確に行なうことができる。
Claims (1)
- １ γ−グルタミル−３，５−ジブロム−４−ヒ
ドロキシアニリドとグリシルグリシンとの転移反
応を利用して体液中のγ−グルタミルトランスペ
プチダーゼ（γ−GTP）を測定するγ−GTP測
定用試薬において、安定化剤として３−シクロヘ
キシルアミノ−１−プロパンスルホン酸を含有す
ることを特徴とするγ−GTP測定用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4914984A JPS60196200A (ja) | 1984-03-16 | 1984-03-16 | γ−ＧＴＰ測定用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4914984A JPS60196200A (ja) | 1984-03-16 | 1984-03-16 | γ−ＧＴＰ測定用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60196200A JPS60196200A (ja) | 1985-10-04 |
| JPH059071B2 true JPH059071B2 (ja) | 1993-02-03 |
Family
ID=12823035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4914984A Granted JPS60196200A (ja) | 1984-03-16 | 1984-03-16 | γ−ＧＴＰ測定用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60196200A (ja) |
-
1984
- 1984-03-16 JP JP4914984A patent/JPS60196200A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60196200A (ja) | 1985-10-04 |
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