JPH0593726A - 検体測定の方法及び装置、並びにこれに用いる試薬 - Google Patents
検体測定の方法及び装置、並びにこれに用いる試薬Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 抗原抗体反応や核酸のハイブリダイゼーショ
ン等を利用して検体中の特定微量成分を検出するに際し
て、ノイズ成分の影響を排除して精度の高い測定が行な
える手法、並びにこのための試薬の提供。 【構成】 検体中の特定成分に対し活性な物質を担体粒
子に結合させた第１の試薬と、前記特定成分に対し活性
な物質を第１標識で標識した第２の試薬とを検体と反応
させて、得られた複合体中の個々の物質を測定して前記
特定成分を測定する方法において、上記担体粒子は前記
第１標識とは異なる第２標識で標識され、該第２標識を
検出して、該第２標識の検出をトリガとして前記第１標
識を検出すること特徴とする検体測定方法。
ン等を利用して検体中の特定微量成分を検出するに際し
て、ノイズ成分の影響を排除して精度の高い測定が行な
える手法、並びにこのための試薬の提供。 【構成】 検体中の特定成分に対し活性な物質を担体粒
子に結合させた第１の試薬と、前記特定成分に対し活性
な物質を第１標識で標識した第２の試薬とを検体と反応
させて、得られた複合体中の個々の物質を測定して前記
特定成分を測定する方法において、上記担体粒子は前記
第１標識とは異なる第２標識で標識され、該第２標識を
検出して、該第２標識の検出をトリガとして前記第１標
識を検出すること特徴とする検体測定方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は例えば抗原抗体反応や核
酸のハイブリダイゼーションを利用して検体中の特定微
量成分を検出する検体測定の技術分野に関する。
酸のハイブリダイゼーションを利用して検体中の特定微
量成分を検出する検体測定の技術分野に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年の特定微量成分の検出技術の進歩
は、臨床検査の分野で各種疾病の早期診断や発病後の診
断等に大きな役割を演じてきている。１９５８年S.A.Be
rson らによって放射線ヨードを用いて標識してインス
リンを定量するという方法が発表されて以来、ＩｇＥ、
ＩｇＧ、ＣＲＰ、マイクログロブリン等の血漿蛋白、Ａ
ＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ１９−９等の腫瘍マーカー、ＴＳ
Ｈ、Ｔ3 等のホルモン類、血中薬物、ＨＢＶ、ＨＩＶ等
のウイルス及びその抗体、ＤＮＡやＲＮＡ等の核酸が測
定可能になり、しかも自動化により多数の検体処理が可
能になった。
は、臨床検査の分野で各種疾病の早期診断や発病後の診
断等に大きな役割を演じてきている。１９５８年S.A.Be
rson らによって放射線ヨードを用いて標識してインス
リンを定量するという方法が発表されて以来、ＩｇＥ、
ＩｇＧ、ＣＲＰ、マイクログロブリン等の血漿蛋白、Ａ
ＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ１９−９等の腫瘍マーカー、ＴＳ
Ｈ、Ｔ3 等のホルモン類、血中薬物、ＨＢＶ、ＨＩＶ等
のウイルス及びその抗体、ＤＮＡやＲＮＡ等の核酸が測
定可能になり、しかも自動化により多数の検体処理が可
能になった。
【０００３】これら生体微量成分の多くは抗原抗体反応
を利用した免疫学的な方法、もしくは核酸−核酸ハイブ
リダイゼーションを利用した方法が用いられている。こ
うした分析方法の例としては、被検出物質と特異的に結
合する抗体又は抗原又は一本鎖の核酸をプローブとし
て、これを微粒子、ビーズ、反応槽の壁等の固相表面に
固定し、被検出物質と抗原抗体反応もしくは核酸ハイブ
リダイゼーションを行わせる。この際に、酵素、蛍光性
物質、発光性物質などの検知感度の高い標識物質を担持
した標識化抗体や標識化抗原を用いて、抗原抗体複合物
や二本鎖の核酸を検出することで被検出物質を定量する
ものである。
を利用した免疫学的な方法、もしくは核酸−核酸ハイブ
リダイゼーションを利用した方法が用いられている。こ
うした分析方法の例としては、被検出物質と特異的に結
合する抗体又は抗原又は一本鎖の核酸をプローブとし
て、これを微粒子、ビーズ、反応槽の壁等の固相表面に
固定し、被検出物質と抗原抗体反応もしくは核酸ハイブ
リダイゼーションを行わせる。この際に、酵素、蛍光性
物質、発光性物質などの検知感度の高い標識物質を担持
した標識化抗体や標識化抗原を用いて、抗原抗体複合物
や二本鎖の核酸を検出することで被検出物質を定量する
ものである。
【０００４】図９は被検出物質を抗原とした蛍光免疫測
定法（サンドイッチ法）の代表的な例を示す説明図であ
る。担体粒子２１に検体中に含まれる抗原２２と特異的
に結合する第１の物質である抗体２４を予め固定化した
第１の試薬を用意して、これを例えば血清等の検体を混
合して検体中の抗原２２と抗原抗体反応を行なう（第１
反応）。次に抗原２２と特異的に結合する抗体２３に蛍
光物質２５を標識化した第２の試薬を加えて混合し、複
合体を生成する（第２反応）。この第２反応の後に複合
体の蛍光測定を行なうことで検体中の抗原２２を定量す
る。
定法（サンドイッチ法）の代表的な例を示す説明図であ
る。担体粒子２１に検体中に含まれる抗原２２と特異的
に結合する第１の物質である抗体２４を予め固定化した
第１の試薬を用意して、これを例えば血清等の検体を混
合して検体中の抗原２２と抗原抗体反応を行なう（第１
反応）。次に抗原２２と特異的に結合する抗体２３に蛍
光物質２５を標識化した第２の試薬を加えて混合し、複
合体を生成する（第２反応）。この第２反応の後に複合
体の蛍光測定を行なうことで検体中の抗原２２を定量す
る。
【０００５】図１０はいわゆるフローサイトメトリの技
術を利用して、上記サンドイッチ法の蛍光測定を行なう
例を示す。上記のような手順で得られた反応後の複合体
３１、３２を含むサンプル液を反応液槽３８中に用意す
る。なおサンプル液中には反応複合体と共に検体中の様
々な物質、担体粒子、標識物質などが混在している。こ
の反応液槽３８にポンプ３９によって圧力を与えてサン
プル液をフローセル３５に送り込む。フローセル３５内
にはシース液３４が流れており、シースフロー原理によ
って層流が形成され多数の複合体３１、３２は細い一列
の配列になって流れる。この流れに対してレーザ光源３
６から標識蛍光物質を励起させ得る波長のレーザ光が照
射される。複合体３１がレーザ光によって照射される
と、担体粒子によって散乱光３７ａが発生し、同時に標
識物質３３ａからの蛍光光３７ｂも発せられる。ところ
が反応の標識物質３３ａや被検出物質３３ｂや担体粒子
３３ｃが単独で流れてきても散乱光３７ａと蛍光光３７
ｂは同時には発生しない（あるいは非常に微弱である）
ため、あるレベル以上の散乱光と蛍光光が同時に発生し
た時にのみデータをとり込むようにすれば、反応後の複
合体３１、３２のみをそれ以外のノイズ成分から選択的
に分離して測定することができる。
術を利用して、上記サンドイッチ法の蛍光測定を行なう
例を示す。上記のような手順で得られた反応後の複合体
３１、３２を含むサンプル液を反応液槽３８中に用意す
る。なおサンプル液中には反応複合体と共に検体中の様
々な物質、担体粒子、標識物質などが混在している。こ
の反応液槽３８にポンプ３９によって圧力を与えてサン
プル液をフローセル３５に送り込む。フローセル３５内
にはシース液３４が流れており、シースフロー原理によ
って層流が形成され多数の複合体３１、３２は細い一列
の配列になって流れる。この流れに対してレーザ光源３
６から標識蛍光物質を励起させ得る波長のレーザ光が照
射される。複合体３１がレーザ光によって照射される
と、担体粒子によって散乱光３７ａが発生し、同時に標
識物質３３ａからの蛍光光３７ｂも発せられる。ところ
が反応の標識物質３３ａや被検出物質３３ｂや担体粒子
３３ｃが単独で流れてきても散乱光３７ａと蛍光光３７
ｂは同時には発生しない（あるいは非常に微弱である）
ため、あるレベル以上の散乱光と蛍光光が同時に発生し
た時にのみデータをとり込むようにすれば、反応後の複
合体３１、３２のみをそれ以外のノイズ成分から選択的
に分離して測定することができる。
【０００６】図１１は図１０の測定における前方散乱光
及び蛍光の測定信号の波形を示す図である。同図は理想
的な測定例であるが、フローセルのレーザ光が照射され
ている部分に複合体が流れてきた場合には担体粒子によ
って大きな散乱光が発生するので前方散乱光強度５１が
増加し、それ以外の場合には弱い。そこでこの前方散乱
光の強度がある一定値以上になった時トリガ信号５２を
生成し、そのタイミングで蛍光強度５３を測定すれば、
複合体からの蛍光強度を選択的に得ることができる。も
し蛍光の発生があれば被検出物質が存在して抗原抗体反
応あるいは核酸ハイブリダイゼーション反応が起きてい
ると判断され、逆に蛍光の発生がなければ反応が起きて
いないと判断できる。そして多数の測定の統計的な処理
により被検出物質の定量が可能である。
及び蛍光の測定信号の波形を示す図である。同図は理想
的な測定例であるが、フローセルのレーザ光が照射され
ている部分に複合体が流れてきた場合には担体粒子によ
って大きな散乱光が発生するので前方散乱光強度５１が
増加し、それ以外の場合には弱い。そこでこの前方散乱
光の強度がある一定値以上になった時トリガ信号５２を
生成し、そのタイミングで蛍光強度５３を測定すれば、
複合体からの蛍光強度を選択的に得ることができる。も
し蛍光の発生があれば被検出物質が存在して抗原抗体反
応あるいは核酸ハイブリダイゼーション反応が起きてい
ると判断され、逆に蛍光の発生がなければ反応が起きて
いないと判断できる。そして多数の測定の統計的な処理
により被検出物質の定量が可能である。
【０００７】
【発明が解決しようとしている課題】しかしながら実際
には図１１のような理想的な出力は得られず、図１２に
示すように複合体そのものによる前方散乱光強度の増加
以外にも、他の原因によって光強度の増加が起こってし
まう。この原因としては、もともとの反応液中に含まれ
る浮遊物や気泡の発生によるものが考えられる。このよ
うな場合、図１２に示すように前方散乱光強度は複合体
によるピーク６１のほかに、浮遊物や気泡などによるピ
ーク６２が発生してしまうので、トリガ信号も複合体に
よる信号６３以外に浮遊物や気泡などによる信号６４が
作成されてしまい、その時点での蛍光強度（ゼロレベ
ル）を読み取ってしまう。するとあたかも抗原抗体反応
もしくは核酸ハイブリダイゼーション反応が起きていな
い担体粒子が存在したように誤認してしまうことにな
り、特に定量の測定精度に著しい悪影響を与えてしま
う。
には図１１のような理想的な出力は得られず、図１２に
示すように複合体そのものによる前方散乱光強度の増加
以外にも、他の原因によって光強度の増加が起こってし
まう。この原因としては、もともとの反応液中に含まれ
る浮遊物や気泡の発生によるものが考えられる。このよ
うな場合、図１２に示すように前方散乱光強度は複合体
によるピーク６１のほかに、浮遊物や気泡などによるピ
ーク６２が発生してしまうので、トリガ信号も複合体に
よる信号６３以外に浮遊物や気泡などによる信号６４が
作成されてしまい、その時点での蛍光強度（ゼロレベ
ル）を読み取ってしまう。するとあたかも抗原抗体反応
もしくは核酸ハイブリダイゼーション反応が起きていな
い担体粒子が存在したように誤認してしまうことにな
り、特に定量の測定精度に著しい悪影響を与えてしま
う。
【０００８】本発明は上記課題を解決し、精度の高い測
定が行なえる検体測定の手法、並びにこのための試薬を
提供することを目的とする。
定が行なえる検体測定の手法、並びにこのための試薬を
提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、検体中
の特定成分に対し活性な物質を担体粒子に結合させた第
１の試薬と、前記特定成分に対し活性な物質を第１標識
で標識した第２の試薬とを検体と反応させて、得られた
複合体中の個々の物質を測定して前記特定成分を測定す
る方法において、上記担体粒子は前記第１標識とは異な
る第２標識で標識され、該第２標識を検出して、該第２
標識の検出をトリガとして前記第１標識を検出すること
特徴とするものである。
の特定成分に対し活性な物質を担体粒子に結合させた第
１の試薬と、前記特定成分に対し活性な物質を第１標識
で標識した第２の試薬とを検体と反応させて、得られた
複合体中の個々の物質を測定して前記特定成分を測定す
る方法において、上記担体粒子は前記第１標識とは異な
る第２標識で標識され、該第２標識を検出して、該第２
標識の検出をトリガとして前記第１標識を検出すること
特徴とするものである。
【００１０】
【実施例】 （実施例１）以下、本発明にかかる実施例を図面を用い
て詳細に説明する。第１の実施例では担体粒子の標識物
質として照射光に対する波長変換物質、具体的には蛍光
物質を使用し、発生する蛍光光により担体粒子を識別す
るものである。
て詳細に説明する。第１の実施例では担体粒子の標識物
質として照射光に対する波長変換物質、具体的には蛍光
物質を使用し、発生する蛍光光により担体粒子を識別す
るものである。
【００１１】本実施例に用いられる試薬について詳しく
述べる。第１の試薬は、例えば粒子径１μｍ程度のポリ
スチレン系微粒子に蛍光物質を標識したものに対して、
検体中の被検出物質に対して活性な第１の物質を結合さ
せることにより得られる。蛍光標識した担体粒子は、例
えばポリスチレンなどのポリマー微粒子に蛍光性物質を
物理結合あるいは化学結合させることにより、あるいは
ポリマー微粒子を重合する時に蛍光性のモノマーを共重
合することにより得られる。蛍光物質としてはシアニン
系色素、アクリジン系色素、ローダミン系色素などがあ
り、後述する第２の試薬の蛍光特性とは異なる蛍光性物
質を適宣選択して用いられる。又、蛍光性微粒子に被検
出物質に対し活性な第１の物質を結合させるのは定法に
より物理結合又は化学結合によりなされる。
述べる。第１の試薬は、例えば粒子径１μｍ程度のポリ
スチレン系微粒子に蛍光物質を標識したものに対して、
検体中の被検出物質に対して活性な第１の物質を結合さ
せることにより得られる。蛍光標識した担体粒子は、例
えばポリスチレンなどのポリマー微粒子に蛍光性物質を
物理結合あるいは化学結合させることにより、あるいは
ポリマー微粒子を重合する時に蛍光性のモノマーを共重
合することにより得られる。蛍光物質としてはシアニン
系色素、アクリジン系色素、ローダミン系色素などがあ
り、後述する第２の試薬の蛍光特性とは異なる蛍光性物
質を適宣選択して用いられる。又、蛍光性微粒子に被検
出物質に対し活性な第１の物質を結合させるのは定法に
より物理結合又は化学結合によりなされる。
【００１２】被検出物質に対し活性な第１の物質として
は、例えば、天然もしくは合成のぺプチド、蛋白質、酵
素、糖類、レクチン、ウイルス、細菌、核酸、ＤＮＡ、
ＲＮＡ、抗体などがある。その中でも、臨床的には特に
有用な物質として以下のものがあげられる。ＩｇＧ、Ｉ
ｇＥなどの免疫グロブリン、補体、ＣＲＰ、フェリチ
ン、α1 又はβ2 マイクログロブリンなどの血漿蛋白及
びそれらの抗体、 α−フェトプロテイン、癌胎児性抗
原（ＣＥＡ）、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５などの主要
マーカー及びそれらの抗体、 黄体化ホルモン（Ｌ
Ｈ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト繊毛性ゴナド
トロビン（ｈＣＧ）、エストロジェン、インシュリンな
どのホルモン類及びそれらの抗体、 ＨＢＶ関連抗原Ｈ
ＩＶ、ＡＴＬなどのウイルス感染関連物質及びそれらの
抗体、ジフテリア菌、ボツリヌス菌、マイコプラズマ、
梅毒トレポネーマなどのバクテリア類及びそれらの抗
体、 トキソプラズマ、トリコモナス、リーシュマニ
ア、トリパノゾーマ、マラリア原虫などの原虫類及びそ
れらの抗体、 フェニトイン、フェノバルビタールなど
の抗てんかん薬、キニジン、ジコキシニンなどの心血管
薬、テオフィリンなどの抗喘息薬、クロラムフェニコー
ル、ゲンタマイシンなどの抗生物質などの薬物類及びそ
れらの抗体、 その他酵素、菌体外毒素（ストレプトリ
ジンＯなど）及びそれらの抗体などがあり、検体中の被
検出物質と抗原抗体反応を起こす物質が被検出物質の種
類に応じて適宣選択される。
は、例えば、天然もしくは合成のぺプチド、蛋白質、酵
素、糖類、レクチン、ウイルス、細菌、核酸、ＤＮＡ、
ＲＮＡ、抗体などがある。その中でも、臨床的には特に
有用な物質として以下のものがあげられる。ＩｇＧ、Ｉ
ｇＥなどの免疫グロブリン、補体、ＣＲＰ、フェリチ
ン、α1 又はβ2 マイクログロブリンなどの血漿蛋白及
びそれらの抗体、 α−フェトプロテイン、癌胎児性抗
原（ＣＥＡ）、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５などの主要
マーカー及びそれらの抗体、 黄体化ホルモン（Ｌ
Ｈ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト繊毛性ゴナド
トロビン（ｈＣＧ）、エストロジェン、インシュリンな
どのホルモン類及びそれらの抗体、 ＨＢＶ関連抗原Ｈ
ＩＶ、ＡＴＬなどのウイルス感染関連物質及びそれらの
抗体、ジフテリア菌、ボツリヌス菌、マイコプラズマ、
梅毒トレポネーマなどのバクテリア類及びそれらの抗
体、 トキソプラズマ、トリコモナス、リーシュマニ
ア、トリパノゾーマ、マラリア原虫などの原虫類及びそ
れらの抗体、 フェニトイン、フェノバルビタールなど
の抗てんかん薬、キニジン、ジコキシニンなどの心血管
薬、テオフィリンなどの抗喘息薬、クロラムフェニコー
ル、ゲンタマイシンなどの抗生物質などの薬物類及びそ
れらの抗体、 その他酵素、菌体外毒素（ストレプトリ
ジンＯなど）及びそれらの抗体などがあり、検体中の被
検出物質と抗原抗体反応を起こす物質が被検出物質の種
類に応じて適宣選択される。
【００１３】又、上記のような抗原抗体反応ではなく、
核酸ハイブリダイゼーションを利用する場合には、第１
の物質としては検査対象となる核酸の塩基配列に対して
相補的な塩基配列を持つ核酸プローブが用いられる。
核酸ハイブリダイゼーションを利用する場合には、第１
の物質としては検査対象となる核酸の塩基配列に対して
相補的な塩基配列を持つ核酸プローブが用いられる。
【００１４】一方、第２の試薬は、被検査物質に対して
活性で且つ前記第１の物質とは異なる第２の物質に対し
て、前記担体粒子を標識した蛍光性物質の蛍光特性とは
異なる蛍光特性を有する蛍光物質、発光性物質などの標
識物質を結合させたものである。結合には多価アミン、
カルボジイミド類などの架橋剤を用いて化学結合され
る。
活性で且つ前記第１の物質とは異なる第２の物質に対し
て、前記担体粒子を標識した蛍光性物質の蛍光特性とは
異なる蛍光特性を有する蛍光物質、発光性物質などの標
識物質を結合させたものである。結合には多価アミン、
カルボジイミド類などの架橋剤を用いて化学結合され
る。
【００１５】第１の試薬、第２の試薬ともに水を主成分
とする分散媒体に分散される。又、分散媒体には適宣ｐ
Ｈ緩衝剤、蛋白質、界面活性剤、水溶性高分子化合物な
どが添加される。第１の試薬と第２の試薬と検体の反応
は被検出物質と試薬中の被検出物質に対し活性な物質の
反応性、被検出物質の濃度などにより条件は異なり、そ
れぞれ適正な条件で反応後、反応液を水を主成分とする
希釈液により希釈されてサンプル液が作成される。
とする分散媒体に分散される。又、分散媒体には適宣ｐ
Ｈ緩衝剤、蛋白質、界面活性剤、水溶性高分子化合物な
どが添加される。第１の試薬と第２の試薬と検体の反応
は被検出物質と試薬中の被検出物質に対し活性な物質の
反応性、被検出物質の濃度などにより条件は異なり、そ
れぞれ適正な条件で反応後、反応液を水を主成分とする
希釈液により希釈されてサンプル液が作成される。
【００１６】図１は実施例の測定装置の構成図である。
いわゆるシースフロー原理によってフローセル１の流通
部１ａ内を高速の層流となったシース液に包まれてサン
プル液が紙面垂直方向に通過し、サンプル液中に含まれ
る種々の微小物は一列になって順次流れる。この流れと
直交する方向にレーザ光源２が配置され、出射するレー
ザ光はレンズ３によって楕円形状の微小スポットに変換
されて流通部に向けて照射される。レーザ光の波長は担
体粒子を標識する蛍光物質、及び第２の物質を標識する
蛍光物質の双方を励起させ得るものが使用される。照射
位置を通過する微小物体から発生する前方散乱光を暗視
野原理によって測定するために、フローセル１を挟んで
レンズ３と反対の光軸上に波長選択フィルタ１０、光ス
トッパ１１、集光レンズ４ａ、４ｂ、光検出器５が順次
に配置されている。波長選択フィルタ１０は測定目的に
応じて波長選択特性の異なるフィルタを切り替えること
ができるよになっている。特定の本実施例では波長選択
フィルタ１０はレーザ光の波長λを選択的に透過する特
性を有したものを用いる。
いわゆるシースフロー原理によってフローセル１の流通
部１ａ内を高速の層流となったシース液に包まれてサン
プル液が紙面垂直方向に通過し、サンプル液中に含まれ
る種々の微小物は一列になって順次流れる。この流れと
直交する方向にレーザ光源２が配置され、出射するレー
ザ光はレンズ３によって楕円形状の微小スポットに変換
されて流通部に向けて照射される。レーザ光の波長は担
体粒子を標識する蛍光物質、及び第２の物質を標識する
蛍光物質の双方を励起させ得るものが使用される。照射
位置を通過する微小物体から発生する前方散乱光を暗視
野原理によって測定するために、フローセル１を挟んで
レンズ３と反対の光軸上に波長選択フィルタ１０、光ス
トッパ１１、集光レンズ４ａ、４ｂ、光検出器５が順次
に配置されている。波長選択フィルタ１０は測定目的に
応じて波長選択特性の異なるフィルタを切り替えること
ができるよになっている。特定の本実施例では波長選択
フィルタ１０はレーザ光の波長λを選択的に透過する特
性を有したものを用いる。
【００１７】一方、サンプル液の流れの方向とレーザ光
の照射方向の光軸にそれぞれ直交する方向の光軸上に、
フローセル１側から順に集光レンズ６ａ、６ｂ、コリメ
ートレンズ６ｃ、波長選択特性を有するダイクロイック
ミラー７ａ、７ｂ及び反射ミラー７ｃが配置されてい
る。ダイクロイックミラー７ａ，７ｂの反射方向にはバ
リアフィルタ８ａ、８ｂ、光検出器９ａ、９ｂが配置さ
れており、反射ミラー７ｃの反射方向にはバリアフィル
タ８ｃ、光検出器９ｃが配置されている。
の照射方向の光軸にそれぞれ直交する方向の光軸上に、
フローセル１側から順に集光レンズ６ａ、６ｂ、コリメ
ートレンズ６ｃ、波長選択特性を有するダイクロイック
ミラー７ａ、７ｂ及び反射ミラー７ｃが配置されてい
る。ダイクロイックミラー７ａ，７ｂの反射方向にはバ
リアフィルタ８ａ、８ｂ、光検出器９ａ、９ｂが配置さ
れており、反射ミラー７ｃの反射方向にはバリアフィル
タ８ｃ、光検出器９ｃが配置されている。
【００１８】フローセル１の流通部１ａを順次流れるサ
ンプル液中の担体粒子や気泡やゴミなどによって散乱光
が発生し、担体粒子に標識される蛍光色素によって第１
の波長の蛍光光１が、又、第２の物質の蛍光標識物質に
よって第２の波長の蛍光光２が発生する。蛍光光１はダ
イクロイックミラー７ａ，バリアフィルタ８ａの組によ
って波長選別されて光検出器９ａで強度検出される。
又、蛍光光２はダイクロイックミラー７ｂ，バリアフィ
ルタ８ｂの組によって波長選別され光検出器９ｂによっ
て強度検出される。又、光検出器９ｃは側方散乱光強度
を検出するためのものであるが、本実施例では使用しな
いため省略しても良い。
ンプル液中の担体粒子や気泡やゴミなどによって散乱光
が発生し、担体粒子に標識される蛍光色素によって第１
の波長の蛍光光１が、又、第２の物質の蛍光標識物質に
よって第２の波長の蛍光光２が発生する。蛍光光１はダ
イクロイックミラー７ａ，バリアフィルタ８ａの組によ
って波長選別されて光検出器９ａで強度検出される。
又、蛍光光２はダイクロイックミラー７ｂ，バリアフィ
ルタ８ｂの組によって波長選別され光検出器９ｂによっ
て強度検出される。又、光検出器９ｃは側方散乱光強度
を検出するためのものであるが、本実施例では使用しな
いため省略しても良い。
【００１９】図２は蛍光性標識された担体粒子を用いた
本実施例の測定の説明図であり、フローセル中の流通部
内の様子を示す。シース液３４に包まれるようにして流
れるサンプル液中には、複合体３１、３２、蛍光標識さ
れた第２の物質３３ａ，被検出物質３３ｂ，担体粒子３
３ｃ、その他ゴミや気泡等が混在しており、これらが流
通部内を順次流れる。照射レーザ光によって、担体粒子
からは散乱光及び蛍光光１が発生し、蛍光物質からは蛍
光光２が発生する。なお蛍光物質や被検出物質は非常に
微小であるためこれらからは散乱光は発生しない、ある
いは発生するにしても非常に微弱である。担体粒子と被
検出物質と蛍光物質との複合体３１、３２が照射位置を
通過すると、散乱光、蛍光光１、蛍光光２の全て発生す
る。蛍光光１が検出されたら担体粒子であると判断さ
れ、本実施例ではこれをトリガにして蛍光光２を検出す
る。又、蛍光光１と散乱光の出力の論理積をとって担体
粒子を認識しても良い。
本実施例の測定の説明図であり、フローセル中の流通部
内の様子を示す。シース液３４に包まれるようにして流
れるサンプル液中には、複合体３１、３２、蛍光標識さ
れた第２の物質３３ａ，被検出物質３３ｂ，担体粒子３
３ｃ、その他ゴミや気泡等が混在しており、これらが流
通部内を順次流れる。照射レーザ光によって、担体粒子
からは散乱光及び蛍光光１が発生し、蛍光物質からは蛍
光光２が発生する。なお蛍光物質や被検出物質は非常に
微小であるためこれらからは散乱光は発生しない、ある
いは発生するにしても非常に微弱である。担体粒子と被
検出物質と蛍光物質との複合体３１、３２が照射位置を
通過すると、散乱光、蛍光光１、蛍光光２の全て発生す
る。蛍光光１が検出されたら担体粒子であると判断さ
れ、本実施例ではこれをトリガにして蛍光光２を検出す
る。又、蛍光光１と散乱光の出力の論理積をとって担体
粒子を認識しても良い。
【００２０】図３は図１に示す装置における測定信号の
波形図である。従来は蛍光光を検出するためのトリガ信
号を生成するのに前方散乱光強度を用いていたが、図３
の７２のように担体粒子以外のゴミや気泡等によっても
前方散乱光強度が大きなるためここでトリガ信号が発生
してしまい精度上問題があった。これに対して本実施例
では蛍光光１を基準に、これがある閾値を越えたらトリ
ガ信号７４を生成する。あるいは散乱光（前方又は側
方）と蛍光光１の論理積によってトリガ信号を生成する
ようにしても良い。そしてこのトリガ信号のタイミング
で蛍光光２の強度７５を測定する。よって本実施例では
従来のようにゴミや気泡等のノイズ成分の影響を受ける
ことなく、複合体中の標識物質量を精度良く測定して検
体中の被検出成分の定量を高精度に行なうことができ
る。
波形図である。従来は蛍光光を検出するためのトリガ信
号を生成するのに前方散乱光強度を用いていたが、図３
の７２のように担体粒子以外のゴミや気泡等によっても
前方散乱光強度が大きなるためここでトリガ信号が発生
してしまい精度上問題があった。これに対して本実施例
では蛍光光１を基準に、これがある閾値を越えたらトリ
ガ信号７４を生成する。あるいは散乱光（前方又は側
方）と蛍光光１の論理積によってトリガ信号を生成する
ようにしても良い。そしてこのトリガ信号のタイミング
で蛍光光２の強度７５を測定する。よって本実施例では
従来のようにゴミや気泡等のノイズ成分の影響を受ける
ことなく、複合体中の標識物質量を精度良く測定して検
体中の被検出成分の定量を高精度に行なうことができ
る。
【００２１】次に上記実施例の作用効果を明確にするた
めに次の実験を行なった。粒径１．０μｍ、粒子濃度
０．５ｗｔ％の蛍光性物質ＦＩＴＣを結合させたエポキ
シ化ポリスチレン微粒子の水分散液を１００００倍に希
釈して、上記測定装置で測定を行なった。測定は従来例
の方法と本実施例の方法とを比較するため、まず前方散
乱光の強度をトリガにしてそのトリガ数を３０秒カウン
トした。次に蛍光光１の強度をトリガにして同様に３０
秒間トリガ数をカウントした。その結果、前方散乱光を
トリガにした従来の方法の方が約２０％ほどカウント数
が多かった。この結果でカウント数が高いのは、水分散
液に含まれるゴミや気泡等のノイズ成分が影響してこれ
らがカウント値に含まれてしまったものと考えられる。
このように担体粒子に蛍光性物質ＦＩＴＣを結合させた
標識微粒子を用いることによりＳ／Ｎ比の高い高精度検
出が可能となった。
めに次の実験を行なった。粒径１．０μｍ、粒子濃度
０．５ｗｔ％の蛍光性物質ＦＩＴＣを結合させたエポキ
シ化ポリスチレン微粒子の水分散液を１００００倍に希
釈して、上記測定装置で測定を行なった。測定は従来例
の方法と本実施例の方法とを比較するため、まず前方散
乱光の強度をトリガにしてそのトリガ数を３０秒カウン
トした。次に蛍光光１の強度をトリガにして同様に３０
秒間トリガ数をカウントした。その結果、前方散乱光を
トリガにした従来の方法の方が約２０％ほどカウント数
が多かった。この結果でカウント数が高いのは、水分散
液に含まれるゴミや気泡等のノイズ成分が影響してこれ
らがカウント値に含まれてしまったものと考えられる。
このように担体粒子に蛍光性物質ＦＩＴＣを結合させた
標識微粒子を用いることによりＳ／Ｎ比の高い高精度検
出が可能となった。
【００２２】（実施例２）次に本発明の第２の実施例を
説明する。本実施例では担体粒子の標識に照射光に対す
る波長変換物質、具体的には高調波発生物質（例えばＳ
ＨＧやＴＨＧ）を使用し、これによって波長変換された
光を検出することにより担体粒子を識別するものであ
る。
説明する。本実施例では担体粒子の標識に照射光に対す
る波長変換物質、具体的には高調波発生物質（例えばＳ
ＨＧやＴＨＧ）を使用し、これによって波長変換された
光を検出することにより担体粒子を識別するものであ
る。
【００２３】本実施例おいては、第１の試薬は、例えば
粒子径１μｍ程度のＳＨＧ（第二高調波発生）活性を持
つ微粒子に検体中の被検出物質に対して活性な第１の物
質を結合させることにより得られる。ＳＨＧ活性を持つ
微粒子の一例として、二次の超分子分極率βが大きい分
極性物質を含有するポリマー微粒子などが挙げられる。
より具体的な例として、ｐ−ニトロアニリンをポリオキ
シエチレンやラクトンポリマーにドープさせてＳＨＧ活
性を有する材料を製造することができる。又、スチレン
モノマーにｐ−ニトロアニリンを化学修飾して乳化重合
することにより、ＳＨＧ活性を持つ微粒子に被検出物質
に対して活性な第１の物質を結合させるのは、常法によ
り物理結合又は化学結合によりなされる。
粒子径１μｍ程度のＳＨＧ（第二高調波発生）活性を持
つ微粒子に検体中の被検出物質に対して活性な第１の物
質を結合させることにより得られる。ＳＨＧ活性を持つ
微粒子の一例として、二次の超分子分極率βが大きい分
極性物質を含有するポリマー微粒子などが挙げられる。
より具体的な例として、ｐ−ニトロアニリンをポリオキ
シエチレンやラクトンポリマーにドープさせてＳＨＧ活
性を有する材料を製造することができる。又、スチレン
モノマーにｐ−ニトロアニリンを化学修飾して乳化重合
することにより、ＳＨＧ活性を持つ微粒子に被検出物質
に対して活性な第１の物質を結合させるのは、常法によ
り物理結合又は化学結合によりなされる。
【００２４】図４は上記ＳＨＧ物質で標識された担体粒
子を用いた本実施例の測定の説明図であり、フローセル
中の流通部内の様子を示す。なお測定装置全体の構成は
先の図１とほぼ同様であり、図１の波長選択フィルタ１
０はレーザ光の波長λの半波長λ／２を選別透過する特
性を有し、光検出器５によってＳＨＧ物質で波長変換さ
れた光を検出するようになっている。なお、担体粒子の
標識として第三高調波を発生するＴＨＧ物質を用いる場
合には波長選択フィルタ１０はλ／３の波長を選択する
ものを使用する。シース液３４に包まれるようにして流
れるサンプル液中には、複合体３１、３２、蛍光標識さ
れた第２の物質３３ａ，被検出物質３３ｂ，担体粒子３
３ｃ、その他ゴミや気泡等が混在しており、これらが流
通部内を順次流れる。波長λの照射レーザ光によって、
担体粒子からは波長λの散乱光１及びＳＨＧ物質によっ
て波長変換された波長λ／２の散乱光２が発生し、蛍光
物質からは蛍光光が発生する。なお蛍光物質や被検出物
質は非常に微小であるためこれらからは散乱光は発生し
ない、あるいは発生するにしても非常に微弱である。担
体粒子と被検出物質と蛍光物質との複合体３１、３２が
照射位置を通過すると、散乱光１、散乱光２、蛍光光の
全て発生する。図１における波長選択フィルタ１０では
散乱光２（λ／２）が波長選択され、これが光検出器５
で検出されたら担体粒子であると判断され、本実施例で
はこれをトリガにして蛍光光を検出する。なお、散乱光
１と散乱光２を同時に検出できるような光学系を設けて
散乱光１と散乱光２のそれぞれの強度の論理積を演算し
てこれをトリガとしても良い。
子を用いた本実施例の測定の説明図であり、フローセル
中の流通部内の様子を示す。なお測定装置全体の構成は
先の図１とほぼ同様であり、図１の波長選択フィルタ１
０はレーザ光の波長λの半波長λ／２を選別透過する特
性を有し、光検出器５によってＳＨＧ物質で波長変換さ
れた光を検出するようになっている。なお、担体粒子の
標識として第三高調波を発生するＴＨＧ物質を用いる場
合には波長選択フィルタ１０はλ／３の波長を選択する
ものを使用する。シース液３４に包まれるようにして流
れるサンプル液中には、複合体３１、３２、蛍光標識さ
れた第２の物質３３ａ，被検出物質３３ｂ，担体粒子３
３ｃ、その他ゴミや気泡等が混在しており、これらが流
通部内を順次流れる。波長λの照射レーザ光によって、
担体粒子からは波長λの散乱光１及びＳＨＧ物質によっ
て波長変換された波長λ／２の散乱光２が発生し、蛍光
物質からは蛍光光が発生する。なお蛍光物質や被検出物
質は非常に微小であるためこれらからは散乱光は発生し
ない、あるいは発生するにしても非常に微弱である。担
体粒子と被検出物質と蛍光物質との複合体３１、３２が
照射位置を通過すると、散乱光１、散乱光２、蛍光光の
全て発生する。図１における波長選択フィルタ１０では
散乱光２（λ／２）が波長選択され、これが光検出器５
で検出されたら担体粒子であると判断され、本実施例で
はこれをトリガにして蛍光光を検出する。なお、散乱光
１と散乱光２を同時に検出できるような光学系を設けて
散乱光１と散乱光２のそれぞれの強度の論理積を演算し
てこれをトリガとしても良い。
【００２５】図５は図１に示す装置における測定信号の
波形図である。従来は蛍光光を検出するためのトリガ信
号を生成するのに前方散乱光強度（λ）を用いていた
が、図５の７２のように担体粒子以外のゴミや気泡等に
よっても前方散乱光強度が大きくなるためここでトリガ
信号が発生してしまい精度上問題があった。これに対し
て本実施例ではＳＨＧ物質によって波長変換された波長
λ／２の散乱光２を基準に、これがある閾値を越えたら
トリガ信号７４を生成する。そしてこのトリガ信号のタ
イミングで蛍光光の強度７５を測定する。よって本実施
例では従来のようにゴミや気泡等のノイズ成分の影響を
受けることなく、複合体中の標識物質量を精度良く測定
して検体中の被検出成分の定量を高精度に行なうことが
できる。
波形図である。従来は蛍光光を検出するためのトリガ信
号を生成するのに前方散乱光強度（λ）を用いていた
が、図５の７２のように担体粒子以外のゴミや気泡等に
よっても前方散乱光強度が大きくなるためここでトリガ
信号が発生してしまい精度上問題があった。これに対し
て本実施例ではＳＨＧ物質によって波長変換された波長
λ／２の散乱光２を基準に、これがある閾値を越えたら
トリガ信号７４を生成する。そしてこのトリガ信号のタ
イミングで蛍光光の強度７５を測定する。よって本実施
例では従来のようにゴミや気泡等のノイズ成分の影響を
受けることなく、複合体中の標識物質量を精度良く測定
して検体中の被検出成分の定量を高精度に行なうことが
できる。
【００２６】次に上記実施例の作用効果を明確にするた
めに次の実験を行なった。粒径１．０μｍ、粒子濃度
０．５ｗｔ％のｐ−ニトロアニリンをドープさせたＳＨ
Ｇ活性を有するポリスチレン微粒子の水分散液を１００
００倍に希釈して、上記測定装置で測定を行なった。測
定は従来例の方法と本実施例の方法とを比較するため、
まず波長選択フィルタ１０として波長λを選択するもの
を用いて、波長λの前方散乱光１の強度をトリガにして
そのトリガ数を３０秒カウントした。次に波長選択フィ
ルタ１０として波長λ／２を選択するものを用いて、波
長λ／２の前方散乱光２の強度をトリガにして同様に３
０秒間トリガ数をカウントした。その結果、前方散乱光
１をトリガにした従来の方法の方が約２０％ほどカウン
ト数が多かった。この結果でカウント数が高いのは、水
分散液に含まれるゴミや気泡等のノイズ成分が影響して
これらがカウント値に含まれてしまったものと考えられ
る。このように担体粒子にＳＨＧ活性物質を結合させた
標識微粒子を用いることによりＳ／Ｎ比の高い高精度検
出が可能となった。
めに次の実験を行なった。粒径１．０μｍ、粒子濃度
０．５ｗｔ％のｐ−ニトロアニリンをドープさせたＳＨ
Ｇ活性を有するポリスチレン微粒子の水分散液を１００
００倍に希釈して、上記測定装置で測定を行なった。測
定は従来例の方法と本実施例の方法とを比較するため、
まず波長選択フィルタ１０として波長λを選択するもの
を用いて、波長λの前方散乱光１の強度をトリガにして
そのトリガ数を３０秒カウントした。次に波長選択フィ
ルタ１０として波長λ／２を選択するものを用いて、波
長λ／２の前方散乱光２の強度をトリガにして同様に３
０秒間トリガ数をカウントした。その結果、前方散乱光
１をトリガにした従来の方法の方が約２０％ほどカウン
ト数が多かった。この結果でカウント数が高いのは、水
分散液に含まれるゴミや気泡等のノイズ成分が影響して
これらがカウント値に含まれてしまったものと考えられ
る。このように担体粒子にＳＨＧ活性物質を結合させた
標識微粒子を用いることによりＳ／Ｎ比の高い高精度検
出が可能となった。
【００２７】（実施例３）次に本発明の第３の実施例を
説明する。本実施例では担体粒子の標識に磁性物質を使
用し、磁気を検出することにより担体粒子を識別するも
のである。
説明する。本実施例では担体粒子の標識に磁性物質を使
用し、磁気を検出することにより担体粒子を識別するも
のである。
【００２８】本実施例おいては、第１の試薬は、例えば
粒子径１μｍ程度の磁化し得る物質を含む微粒子に検体
中の被検出物質に対して活性な第１の物質を結合させる
ことにより得られる。磁性体にはマグネタイトやγ−フ
ェライト等の各種化合物磁性体、あるいは鉄、コバルト
等の金属磁性体等、種々の材料によるものがあり、検体
に対して安定な物質を選択することができる。又、磁性
微粒子に被検出物質に対して活性な第１の物質を結合さ
せるのは、常法により物理結合又は化学結合によりなさ
れる。
粒子径１μｍ程度の磁化し得る物質を含む微粒子に検体
中の被検出物質に対して活性な第１の物質を結合させる
ことにより得られる。磁性体にはマグネタイトやγ−フ
ェライト等の各種化合物磁性体、あるいは鉄、コバルト
等の金属磁性体等、種々の材料によるものがあり、検体
に対して安定な物質を選択することができる。又、磁性
微粒子に被検出物質に対して活性な第１の物質を結合さ
せるのは、常法により物理結合又は化学結合によりなさ
れる。
【００２９】図６は本実施例の測定装置の構成図を示す
もので、先の図１のものと同一の符号は同一の部材を表
す。フローセル１を流れる反応液の中の複合体は、磁石
２０によって固体微粒子が磁化され、磁気センサである
磁束計２１によって磁気測定が行われる。なお、予め磁
化された担体粒子を使用するならば磁石２０はなくても
良い。
もので、先の図１のものと同一の符号は同一の部材を表
す。フローセル１を流れる反応液の中の複合体は、磁石
２０によって固体微粒子が磁化され、磁気センサである
磁束計２１によって磁気測定が行われる。なお、予め磁
化された担体粒子を使用するならば磁石２０はなくても
良い。
【００３０】図７は上記磁化し得る物質を含む担体粒子
（磁性微粒子）を用いた本実施例の測定の説明図であ
り、フローセル中の流通部内の様子を示す。シース液３
４に包まれるようにして流れるサンプル液中には、複合
体３１、３２、蛍光標識された第２の物質３３ａ，被検
出物質３３ｂ，担体粒子３３ｃ、その他ゴミや気泡等が
混在しており、これらが流通部内を順次流れる。照射レ
ーザ光によって、担体粒子からは従来例のように散乱光
が発生し、蛍光物質からは蛍光光が発生する。なお蛍光
物質や被検出物質は非常に微小であるためこれらからは
散乱光は発生しない、あるいは発生するにしても非常に
微弱である。担体粒子と被検出物質と蛍光物質との複合
体３１、３２が照射位置を通過すると、散乱光及び蛍光
光の両方が発生する。本実施例の装置では固体微粒子が
磁化し得る物質を含むため、磁石２０と磁気センサ２１
を用いることにより、固体微粒子の磁気強度測定を行な
うことで、この磁気強度のピーク７３が固体微粒子を示
すことになる。よってこれをトリガにして蛍光光を検出
する。又、散乱光と磁気強度の出力の論理積をとって担
体粒子を認識しても良い。
（磁性微粒子）を用いた本実施例の測定の説明図であ
り、フローセル中の流通部内の様子を示す。シース液３
４に包まれるようにして流れるサンプル液中には、複合
体３１、３２、蛍光標識された第２の物質３３ａ，被検
出物質３３ｂ，担体粒子３３ｃ、その他ゴミや気泡等が
混在しており、これらが流通部内を順次流れる。照射レ
ーザ光によって、担体粒子からは従来例のように散乱光
が発生し、蛍光物質からは蛍光光が発生する。なお蛍光
物質や被検出物質は非常に微小であるためこれらからは
散乱光は発生しない、あるいは発生するにしても非常に
微弱である。担体粒子と被検出物質と蛍光物質との複合
体３１、３２が照射位置を通過すると、散乱光及び蛍光
光の両方が発生する。本実施例の装置では固体微粒子が
磁化し得る物質を含むため、磁石２０と磁気センサ２１
を用いることにより、固体微粒子の磁気強度測定を行な
うことで、この磁気強度のピーク７３が固体微粒子を示
すことになる。よってこれをトリガにして蛍光光を検出
する。又、散乱光と磁気強度の出力の論理積をとって担
体粒子を認識しても良い。
【００３１】図８は図６に示す装置における測定信号の
波形図である。従来は蛍光光を検出するためのトリガ信
号を生成するのに前方散乱光強度を用いていたが、図８
の７２のように担体粒子以外のゴミや気泡等によっても
前方散乱光強度が大きくなるためここでトリガ信号が発
生してしまい精度上問題があった。これに対して本実施
例では通過する担体粒子の磁気強度を検出して、これが
ある閾値を越えたらトリガ信号７４を生成する。あるい
は磁気強度と散乱光の論理積によってトリガ信号を生成
するようにしても良い。そしてこのトリガ信号のタイミ
ングで蛍光光の強度７５を測定する。よって本実施例で
は従来のようにゴミや気泡等のノイズ成分の影響を受け
ることなく、複合体中の標識物質量を精度良く測定して
検体中の被検出成分の定量を高精度に行なうことができ
る。
波形図である。従来は蛍光光を検出するためのトリガ信
号を生成するのに前方散乱光強度を用いていたが、図８
の７２のように担体粒子以外のゴミや気泡等によっても
前方散乱光強度が大きくなるためここでトリガ信号が発
生してしまい精度上問題があった。これに対して本実施
例では通過する担体粒子の磁気強度を検出して、これが
ある閾値を越えたらトリガ信号７４を生成する。あるい
は磁気強度と散乱光の論理積によってトリガ信号を生成
するようにしても良い。そしてこのトリガ信号のタイミ
ングで蛍光光の強度７５を測定する。よって本実施例で
は従来のようにゴミや気泡等のノイズ成分の影響を受け
ることなく、複合体中の標識物質量を精度良く測定して
検体中の被検出成分の定量を高精度に行なうことができ
る。
【００３２】次に上記実施例の作用効果を明確にするた
めに次の実験を行なった。粒径１．０μｍ、粒子濃度
０．５ｗｔ％のマグネタイトを粒子中に混合した磁性ポ
リスチレン微粒子の水分散液を１００００倍に希釈し
て、上記測定装置で測定を行なった。測定は従来例の方
法と本実施例の方法とを比較するため、まず前方散乱光
の強度をトリガにしてそのトリガ数を３０秒カウントし
た。次に磁気センサ２１で得られる磁気強度をトリガに
して同様に３０秒間トリガ数をカウントした。その結
果、前方散乱光をトリガにした従来の方法の方が約２０
％ほどカウント数が多かった。この結果でカウント数が
高いのは、水分散液に含まれるゴミや気泡等のノイズ成
分が影響してこれらがカウント値に含まれてしまったも
のと考えられる。このように磁性標識した微粒子を用い
ることによりＳ／Ｎ比の高い高精度検出が可能となっ
た。
めに次の実験を行なった。粒径１．０μｍ、粒子濃度
０．５ｗｔ％のマグネタイトを粒子中に混合した磁性ポ
リスチレン微粒子の水分散液を１００００倍に希釈し
て、上記測定装置で測定を行なった。測定は従来例の方
法と本実施例の方法とを比較するため、まず前方散乱光
の強度をトリガにしてそのトリガ数を３０秒カウントし
た。次に磁気センサ２１で得られる磁気強度をトリガに
して同様に３０秒間トリガ数をカウントした。その結
果、前方散乱光をトリガにした従来の方法の方が約２０
％ほどカウント数が多かった。この結果でカウント数が
高いのは、水分散液に含まれるゴミや気泡等のノイズ成
分が影響してこれらがカウント値に含まれてしまったも
のと考えられる。このように磁性標識した微粒子を用い
ることによりＳ／Ｎ比の高い高精度検出が可能となっ
た。
【００３３】（変形例）本発明は上記実施例の形態に限
らず種々の変形が可能である。例えば担体粒子の標識に
放射性物質を使用し、放射線強度を検出してこれにより
担体粒子を識別することができる。この場合、放射線の
検出器は図７の磁気センサ２１と同様に配置すれば良
い。
らず種々の変形が可能である。例えば担体粒子の標識に
放射性物質を使用し、放射線強度を検出してこれにより
担体粒子を識別することができる。この場合、放射線の
検出器は図７の磁気センサ２１と同様に配置すれば良
い。
【００３４】又、以上の各実施例においては蛍光物質で
第２の物質を標識したが、例えば高調波発生物質、磁性
物質、放射性物質等で第２の物質を標識し、担体粒子自
身の標識をこの第２の物質の標識情報とは異ならせて区
別するようにしても本発明の作用効果は得られる。
第２の物質を標識したが、例えば高調波発生物質、磁性
物質、放射性物質等で第２の物質を標識し、担体粒子自
身の標識をこの第２の物質の標識情報とは異ならせて区
別するようにしても本発明の作用効果は得られる。
【００３５】
【発明の効果】以上説明したように、担体粒子に特有の
標識をしてその標識を検出することで従来の測定法に比
べてより高精度の測定が行えるという効果がある。
標識をしてその標識を検出することで従来の測定法に比
べてより高精度の測定が行えるという効果がある。
【図１】本発明の第１の実施例の測定装置の構成図であ
る。
る。
【図２】第１の実施例の測定を説明するための図であ
る。
る。
【図３】第１の実施例の測定で得られる検出信号の波形
図である。
図である。
【図４】第２の実施例の測定を説明するための図であ
る。
る。
【図５】第２の実施例の測定で得られる検出信号の波形
図である。
図である。
【図６】第３の実施例の測定装置の構成図である。
【図７】第３の実施例の測定を説明するための図であ
る。
る。
【図８】第３の実施例の測定で得られる検出信号の波形
図である。
図である。
【図９】従来のサンドイッチ法の説明図である。
【図１０】フローサイトメトリ技術を利用して蛍光測定
を行なう従来例の説明図である。
を行なう従来例の説明図である。
【図１１】従来例における理想的な測定波形図である。
【図１２】従来例における実際の測定波形図である。
１ フローセル ２ レーザ光源 ５ 光検出器 ７ａ，７ｂ ダイクロイックミラー ８ａ，８ｂ，８ｃ バリアフィルタ ９ａ，９ｂ，９ｃ 光検出器 ２０ 磁石 ２１ 磁気センサ
フロントページの続き (72)発明者 西村 松臣 東京都大田区下丸子３丁目30番２号キヤノ ン株式会社内 (72)発明者 宮崎 健 東京都大田区下丸子３丁目30番２号キヤノ ン株式会社内
Claims (9)
- 【請求項１】 検体中の特定成分に対し活性な物質を担
体粒子に結合させた第１の試薬と、前記特定成分に対し
活性な物質を第１標識で標識した第２の試薬とを検体と
反応させて、得られた複合体中の個々の物質を測定して
前記特定成分を測定する方法において、 上記担体粒子は前記第１標識とは異なる第２標識で標識
され、該第２標識を検出して、該第２標識の検出をトリ
ガとして前記第１標識を検出すること特徴とする検体測
定方法。 - 【請求項２】 検体中の特定成分に対し活性な物質を担
体粒子に結合させた第１の試薬と、前記特定成分に対し
活性な物質を第１標識で標識した第２の試薬とを検体と
反応させて得られた複合体中の物質が順次通過するフロ
ーセルと、該通過する個々の物質を測定する測定手段と
を有し、該検出結果に基づいて前記特定成分を検出する
装置において、 上記担体粒子は前記第１標識とは異なる第２標識で標識
され、該第２標識を検出する手段と、該第２標識の検出
をトリガとして前記第１標識を検出する手段を有するこ
と特徴とする検体測定装置。 - 【請求項３】 検体中の特定成分に対し活性な物質を担
体粒子に結合させた第１の試薬と、前記特定成分に対し
活性な物質を第１標識で標識した第２の試薬とを有し、
上記担体粒子は前記第１標識とは異なる第２標識で標識
されたことを特徴とする検体測定用試薬。 - 【請求項４】 前記担体粒子を照射光に対する波長変換
物質で標識した請求項１記載の方法又は請求項２記載の
装置又は請求項３記載の試薬 - 【請求項５】 前記波長変換物質は蛍光物質である請求
項４記載の方法又は装置又は試薬。 - 【請求項６】 前記波長変換物質は高調波発生物質であ
る請求項４記載の方法又は装置又は試薬。 - 【請求項７】 前記担体粒子を磁性物質で標識した請求
項１記載の方法又は請求項２記載の装置又は請求項３記
載の試薬。 - 【請求項８】 前記担体粒子を放射性物質で標識した請
求項１記載の方法又は請求項２記載の装置又は請求項３
記載の試薬。 - 【請求項９】 前記活性作用は抗原抗体反応もしくは核
酸ハイブリダイゼーションである請求項１記載の方法又
は請求項２記載又は請求項３記載の試薬。
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|---|---|---|---|
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| EP92116288A EP0536593B1 (en) | 1991-10-01 | 1992-09-23 | Method for specimen measurement, and reagent therefor |
| AT92116288T ATE169738T1 (de) | 1991-10-01 | 1992-09-23 | Verfahren zum nachweis eines speziellen bestandteils in einer probe und reagens dazu. |
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|---|---|
| JPH0593726A true JPH0593726A (ja) | 1993-04-16 |
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