JPH0597891A

JPH0597891A - 血管弛緩ペプチド類

Info

Publication number: JPH0597891A
Application number: JP3304056A
Authority: JP
Inventors: Masaki Ihara; 正樹伊原; Toshihiko Saeki; 敏彦佐伯; Naohiro Fukuroda; 尚宏袋田; Kyoko Nakamichi; 京子中道; Mitsuo Yano; 光夫矢野
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1991-04-24
Filing date: 1991-10-23
Publication date: 1993-04-20
Also published as: WO1992019644A1

Abstract

(57)【要約】【構成】一般式Ｘ¹−Ｘ²−Ａｌａ−Ｘ³−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｘ⁴
−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘ⁵−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ［Ｉ］［式中、Ｘ¹は水素原子、アシル基、アミノ基がアシル
基を有していてもよい任意のアミノ酸残基又は任意の２
〜４個のアミノ酸からなる任意の配列を有するＮ−末端
がアシル基を有していてもよいペプチド残基を示し、Ｘ
²はＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕを示し、Ｘ³はＶａｌ又はＡｌ
ａを示し、Ｘ⁴はＨｉｓ又はＡｌａを示し、Ｘ⁵はＩｌｅ
又はＡｌａを示す］で表されるペプチド又はその製薬上
許容されうる塩を含有することを特徴とする血管弛緩
剤。【効果】上記化合物又はその製薬上許容しうる塩を含
有することを特徴とする薬剤は、血管弛緩剤として期待
される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、強力な血管弛緩活性を
有する生理活性ペプチド類及びそれらの用途に関するも
のである。

【０００２】本発明の化合物は、エンドセリン受容体の
うち、血管平滑筋上にあり、血管収縮に関与する受容体
サブタイプ（ＥＴ_A）には作用せず、血管内皮上にあ
り、血管弛緩に関与する受容体サブタイプ（ＥＴ_B）に
作用することにより、強力な血管弛緩活性を有し、医薬
の分野、特に高血圧、心筋梗塞、狭心症、急性腎不全、
脳梗塞、脳血管攣縮の治療剤として利用できる。

【０００３】

【従来の技術】エンドセリンは２１個のアミノ酸から成
るポリペプチドであり、ヒト、ブタの内皮細胞より産生
され、強力な血管収縮作用を有し、動物に静注した場
合、一過性の降圧とともに、持続的で強い昇圧作用を有
する。また、エンドセリンには、構造の類似したファミ
リーペプチドとして、３種のエンドセリン（エンドセリ
ン−１，エンドセリン−２，エンドセリン−３）が人を
含む動物で存在していることが知られている［ネイチャ
ー（Ｎａｔｕｒｅ），３３２，４１１−４１５（１９８
８）、フェブス・レターズ（ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒ
ｓ），２３１，４４０−４４４（１９８８）、バイオケ
ミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュ
ニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．），１５４，８６８−８７５
（１９８８）、同，１６４，７４−８０（１９８９）及
びプロシーディング・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ），８６，２８６３−２８６７（１９８
９）参照］。

【０００４】さらに、エンドセリン−１は血管収縮活性
のほか内皮依存性の血管弛緩活性も有しており、血管収
縮および弛緩作用はそれぞれ別々のエンドセリン受容体
サブタイプを活性化して生じることが知られている。エ
ンドセリンによる血管収縮は主に血管平滑筋上のエンド
セリン受容体（ＥＴ_A）の活性化により引き起こされ、
ＥＴ−１の活性がＥＴ−３に比べて高い特徴を有する。
一方、血管弛緩は血管内皮上のエンドセリン受容体（Ｅ
Ｔ_B）の活性化により、血管弛緩物質（ＥＤＲＦ）が生
産され、血管平滑筋に働いて血管弛緩が生じ、この活性
はエンドセリン−１とエンドセリン−３で同等である
［ヨーロピーアン・ジャーナル・オブ・ファーマコロジ
ー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．），１５９，３
２５−３２６（１９８９）、ジャパニーズ・ジャーナル
・オブ・ファーマコロジー・サプリメント・ファースト
（Ｊａｐ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．），５５（ｓｕｐ
ｐｌ．Ｉ），１８５（１９９１）］。これらエンドセリ
ン受容体間の選択性が異なるエンドセリン受容体サブタ
イプは組織内分布が異なっており、血管内皮を除く心血
管系ではＥＴ_A受容体が多く、血管内皮およびこれら以
外の組織ではＥＴ_B受容体が多く、またそれぞれの受容
体蛋白も異なることが示されている［ジャパニーズ・ジ
ャーナル・オブ・ファーマコロジー・サプリメント・フ
ァースト（Ｊａｐ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．），５２
（ｓｕｐｐｌ．Ｉ），２０３（１９９０）、ネイチャー
（Ｎａｔｕｒｅ），３４８，７３０−７３５（１９９
０）］。また、腎臓近位尿細管由来のＬＬＣ−ＰＫ₁細
胞は、ＥＴ_B受容体を持っておりエンドセリンによりサ
イクリックＧＭＰ産生を促進することから、ＥＴ_B受容
体の活性化は利尿作用をも有することが示唆される［ジ
ャパニーズ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・サ
プリメント・ファースト（Ｊａｐ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｌ），５５（ｓｕｐｐｌ．Ｉ），７０（１９９
１）］。

【０００５】従って、選択的にＥＴ_B受容体だけを活性
化する物質は血管弛緩活性および腎臓の利尿作用を示
し、医薬品として有用であると考えられる。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】エンドセリンのＥＴ_B
受容体を選択的に活性化することにより血管弛緩作用を
有する新規ペプチドを創製することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、エンドセ
リンのフラグメントの合成より、一般式Ｘ¹−Ｘ²−Ａｌａ−Ｘ³−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｘ⁴
−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘ⁵−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ［Ｉ］［式中、Ｘ¹は水素原子、アシル基、アミノ基がアシル
基を有していてもよい任意のアミノ酸残基又は任意の２
〜４個のアミノ酸からなる任意の配列を有するＮ−末端
がアシル基を有していてもよいペプチド残基を示し、Ｘ
²はＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕを示し、Ｘ³はＶａｌ又はＡｌ
ａを示し、Ｘ⁴はＨｉｓ又はＡｌａを示し、Ｘ⁵はＩｌｅ
又はＡｌａを示す］で表されるペプチド又はその製薬上
許容されうる塩が血管弛緩作用を有することを見出し、
本発明を完成させた。

【０００８】本発明に係る化合物のエンドセリン受容体
親和性は、下記に示すブタ動脈平滑筋及び小脳膜分画に
おけるエンドセリン−１結合阻害試験及びブタ摘出肺動
脈標本に於けるノルエピネフリン収縮に対する阻害試験
の項に記載した方法により測定した。

【０００９】本発明に係る化合物は、下記血管収縮阻害
試験に示される如く、強い血管弛緩作用を有し、従って
本発明は、高血圧、急性腎不全、心筋梗塞、狭心症、脳
梗塞、脳血管攣縮、の治療及び／又は予防剤として期待
されるものである。

【００１０】本明細書において、任意のアミノ酸又は任
意のアミノ酸残基とはアラニン、アルギニン、アスパラ
ギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グ
ルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイ
シン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリ
ン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、
バリン又はその残基を意味し、アシル基とはアセチル
基、プロパノイル基、イソプロパノイル基、ブタノイル
基、イソブタノイル基、ｔｅｒｔ−ブタノイル基、ペン
タノイル基又はイソペンタノイル基等の炭素数２〜５個
の脂肪族アシル基又はベンゾイル基、ナフトイル基等の
芳香族アシル基を意味し、また、本明細書に記載されて
いる各種略号の意味は以下のとおりである。略号略号の意味ＡｌａＬ−アラニンＡｓｐＬ−アスパラギン酸ＧｌｕＬ−グルタミン酸ＨｉｓＬ−ヒスチジンＩｌｅＬ−イソロイシンＬｅｕＬ−ロイシンＬｙｓＬ−リジンＭｅｔＬ−メチオニンＰｈｅＬ−フェニルアラニンＴｒｐＬ−トリプトファンＴｙｒＬ−チロシンＶａｌＬ−バリンＢｏｃｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル^ｔＢｕｔｅｒｔ−ブチルＦｍｏｃ９−フルオレニルメトキシカルボニルＴｒｔトリチルＴｏｓｐ−トルエンスルホニルＴＦＡトリフルオロ酢酸ＤＣＣＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドＤＩＰＣＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミドＨＯＢＴ・Ｈ₂Ｏ１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール・一水和物ＺベンジルオキシカルボニルＭＯＰＳ３−モルホリノプロパンスルホン酸ＨＥＰＥＳ２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸Ｔｒｉｓトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンＰＭＳＦフェニルメタンスルホニル＝フルオリド次に、本発明の新規ペプチドの製造法について説明す
る。

【００１１】本発明化合物は、ペプチド化学の分野にお
ける通常の固相法又は液相法によるアミノ酸の縮合反応
を行うことにより製造することができる。（ａ）固相法目的とするペプチド誘導体は、市販のペプチドシンセサ
イザー、例えばアプライド・バイオシステムズ社製モデ
ル４３１Ａを用い、クロロメチル樹脂［バイオケミス
トリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），３，１３８５
（１９６４）］、オキシメチル樹脂［ケミストリー・ア
ンド・インダストリー（Ｃｈｅｍ．Ｉｎｄ．（Ｌｏｎｄ
ｏｎ）），１９６６，１５９７］、ｐ−アルコキシベン
ジルアルコール樹脂［ジャーナル・オブ・ジ・アメリカ
ン・ケミカル・ソサエティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．），９５，１３２８（１９７３）］、官能化された
ポリアミド樹脂［バイオオーガニック・ケミストリー
（ＢｉｏｏｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ），８，
３５１−３７０（１９７９）］等の不溶性担体上で逐次
的に縮合反応を行うことにより得られる。まずペプチド
誘導体におけるＣ末端アミノ酸に選択されたアミノ酸の
α−アミノ基を保護し、もし側鎖に反応性官能基が存在
する場合にはその側鎖官能基をも保護した後、公知の方
法に従いカルボン酸エステルの形で不溶性担体に共有結
合させる。次いで、α−アミノ保護基を除去した後、次
の配列順のアミノ保護誘導体（必要ならば側鎖官能基
も保護する）を、例えばＤＣＣ又はＤＩＰＣ等の縮合剤
及び必要ならばＨＯＢＴ・Ｈ₂Ｏ等の添加剤と同時に加
えて縮合させる。このアミノ保護誘導体はペンタフルオ
ロフェニルエステル、酸アジド等のようなカルボキシ活
性化アミノ酸の形で使用してもよい。このような脱保護
及び縮合を繰返して目的のペプチド誘導体を得る。アミ
ノ保護基としては通常当業界でよく知られているもの、
例えばＺ基、Ｂｏｃ基、Ｆｍｏｃ基、ｐ−メトキシベン
ジルオキシカルボニル基及びｐ−ニトロベンジルオキシ
カルボニル基等のようなウレタン型保護基から選択され
る。α−アミノ基の保護に関してはＦｍｏｃ基又はＢｏ
ｃ基の使用が好適である。Ｆｍｏｃ基は該縮合反応の後
に比較的緩和な塩基の作用、例えばピペリジン／Ｎ−メ
チルピロリドン溶液、ピペリジン／ＤＭＦ溶液等により
容易に除去することができ、一方、Ｂｏｃ基は比較的緩
和な酸の作用、例えばＴＦＡにより容易に除去すること
ができる。

【００１２】α−アミノ基の保護にＦｍｏｃ基を使用す
る場合には、アスパラギン酸のカルボキシ基はｔｅｒｔ
−ブチルエステル又はトリチルエステルとして、セリ
ン、イソセリン及びチロシンの水酸基はｔｅｒｔ−ブチ
ルエーテルとして、ヒスチジンのイミダゾリル基はＴｒ
ｔ基で保護すればよい。これらの保護基はＦｍｏｃ基除
去条件下では安定なため、ペプチド鎖伸長終了後、樹脂
より切り出したペプチド誘導体の全ての保護基をＴＦＡ
等の緩和な酸と処理することにより同時に除去すること
ができる。一方、α−アミノ基の保護にＢｏｃ基を使用
する場合には、セリン及びチロシンの水酸基をベンジル
エーテルとして、ヒスチジンのイミダゾリル基をＴｏｓ
基で、トリプトファンのインドリル基をホルミル基で保
護すればよい。これらの保護基はＢｏｃ基除去条件下で
は安定なため、ペプチド鎖伸長終了後、樹脂より切り出
したペプチド誘導体の全ての保護基を接触水素化分解処
理、ふっ化水素処理、トリフルオロメタンスルホン酸ト
リメチルシリル／チオアニソール／ＴＦＡ処理［ケミカ
ル・アンド・ファーマシューティカル・ブレチン（Ｃｈ
ｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．），３５，３４４７−５
２（１９８７）］等により、同時に除去することができ
る。

【００１３】ペプチド鎖伸長終了後のペプチド誘導体の
樹脂からの脱離は、当業者によく知られた種々の方法に
より行うことができる。例えば、樹脂としてＰ−アルコ
キシベンジルアルコ−ル樹脂を用いた場合には、ＴＦＡ
等の緩和な酸の作用、好適にはＴＦＡ／ｍ−クレゾール
／エタンジチオール溶液により、Ｃ末端がカルボキシ基
のペプチド誘導体を得ることができる。

【００１４】反応混合物から担体樹脂を除くには、ペプ
チド成分を溶解できる溶媒に混合物を懸濁させてから樹
脂を濾別するか、又は樹脂及びペプチド成分を一旦沈澱
として試薬から分離し、次いでペプチド成分のみを酢酸
等に溶解して樹脂を濾別すればよい。樹脂を除去した後
に本発明化合物を単離、精製するためには、溶液を濃縮
後、残渣をそれ自体が公知の手段（例えば再結晶、再沈
澱、分配操作、順相若しくは逆相クロマトグラフィー又
はイオン交換クロマトグラフィー等）により行えばよ
い。（ｂ）液相法本発明のペプチドは、一般的なペプチド誘導体の液相法
でも製造することができる。即ち、アミノ酸を１個ずつ
縮合させるか、複数のアミノ酸からなる縮合物同士を縮
合させるか又はこれらを組合せた方法により、更に縮合
反応後必要に応じてペプチドのＣ末端及び／又は側鎖の
保護基をアルカリ加水分解、接触水素化分解により除去
することにより製造することができる。縮合反応は、Ｄ
ＣＣ法、アジド法、活性エステル法、混合酸無水物法等
の公知の方法［例えばエム・ボダンスキー（Ｍ．Ｂｏｄ
ａｎｓｋｙ）及びエム・エイ・オンデッティ（Ｍ．Ａ．
Ｏｎｄｅｔｔｉ）著、ペプチド・シンセシス、インター
サイエンス、ニューヨーク（ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔ
ｈｅｓｉｓ，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮｅｗＹｏｒ
ｋ）１９６６年；エフ・エム・フィン（Ｆ．Ｍ．Ｆｉ
ｎｎ）及びケイ・ホフマン（Ｋ．Ｈｏｆｍａｎｎ）著、
ザ・プロテインズ（ＴｈｅＰｒｏｔｅｉｎｓ），第
２巻，エイチ・ネンラス（Ｈ．Ｎｅｎｒａｔｈ）及び
アール・エル・ヒル（Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ）編集、アカデ
ミック・プレス・インコーポレイテッド、ニューヨーク
（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓＩｎｃ．，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ）１９７６年；泉屋信夫他著、ペプチド合成、
丸善（株）１９７５年等に記載されている］により行う
ことができる。

【００１５】α−アミノ保護基としては通常当業者でよ
く知られているもの、例えばＺ基、Ｂｏｃ基、ｐ−メト
キシベンジルオキシカルボニル基及びｐ−ニトロベンジ
ルオキシカルボニル基等のウレタン型保護基から選択さ
れる。一方、α−カルボキシ保護基としてはメチル、エ
チル、ベンジル及びｔｅｒｔ−ブチルエステル等から選
択されるが、縮合後の各保護基の選択的除去が可能であ
るようにＮ末端保護基に応じて選択すべきである。例え
ばＮ端保護基がＢｏｃ基である場合、Ｃ端側はメチル、
エチル又はベンジルエステルとして保護することが好ま
しい。Ｂｏｃ基は比較的緩和な酸、例えばＴＦＡの作用
により容易に除去されるが、この条件下でこれらカルボ
キシ保護基は安定である。一方、メチル及びエチルエス
テルはアルカリ加水分解で、また、ベンジルエステルは
接触水素化分解で容易に除去される。

【００１６】以上の様にして製造されたペプチド誘導体
に、酸無水物又は酸ハロゲン化物を必要に応じて塩基の
存在下に反応させることによりＮ−末端がアシル化され
たペプチド誘導体を得ることができる。更に場合によ
り、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム等のアル
カリ又はアルカリ土類金属の塩、例えばジメチルアミ
ン、トリエチルアミン、ベンジルアミン、ジシクロヘキ
シルアミン等の非毒性有機アミンとの塩、例えばリジ
ン、アルギニン等の塩基性アミノ酸との付加塩、例えば
フェニルアラニンアミド、ロイシンアミド等のアミノ酸
のアミド誘導体との付加塩、例えば塩酸、硫酸等の鉱酸
との酸付加塩、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸等
の酸性アミノ酸との酸付加塩、例えばマレイン酸、フマ
ル酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸等の有機酸との酸付
加塩に導くことができる。

【００１７】以下に薬理試験例を示し、本発明化合物の
血管弛緩作用を説明する。

【００１８】薬理試験（１）エンドセリン結合阻害試験ブタ大動脈平滑筋及び小脳を４℃にて１０ｍＭＭＯＰ
ＳｐＨ７．４緩衝液中でポリトロンによりホモジェナ
イズした。ホモジネートにショ糖を２０％になるように
加え、１０００×ｇにて１５分間遠心し、更に上澄を１
００００×ｇにて１５分間遠心した。この上澄を更に、
９００００×ｇにて４０分間遠心し、得られた沈澱を５
ｍＭＨＥＰＥＳ／ＴｒｉｓｐＨ７．４緩衝液中に懸
濁させ２５ｍｇ／ｍｌになるように膜分画を調製した。

【００１９】この膜分画４μｌを５０ｍＭＴｒｉｓ／
ＨＣｌｐＨ７．４緩衝液Ａ（１０μＭ塩化カルシウ
ム、１０μＭ塩化マグネシウム、０．１ｍＭＰＭＳ
Ｆ、１μＭペプスタチンＡ、２μＭロイペプチン、
１ｍＭ１，１０−フェナンスロリン、０．１％牛血
清アルブミンを含む）３５２μｌ中に懸濁させた。この
懸濁液に、（Ａ）最終濃度が０．２μＭとなる非標識エ
ンドセリン−１（非特異的結合用）、（Ｂ）緩衝液Ａ
（全結合用）、又は（Ｃ）さまざまな濃度の被験化合物
４μｌを加え、更にそれぞれに^１２５Ｉ−エンドセリン
−１（１２０００〜１８０００ｃｐｍ）４０μｌを加え
た。これらの混合物を２５℃にて４時間インキュベーシ
ョンし、グラスフィルターＧＦ／Ｃにて濾過を行い、５
ｍＭＨＥＰＥＳ／ＴｒｉｓｐＨ７．４（０．３％牛
血清アルブミンを含む）にて洗浄後グラスフィルター上
の放射能量の測定より被験化合物の^１２５Ｉ−エンドセ
リン−１結合阻害率Ｄ（％）を次式により求めた。

【００２０】

【数１】さまざまな濃度の本発明化合物による^１２５Ｉ−エンド
セリン−１結合阻害率より、５０％結合阻害濃度を求め
た。

【００２１】第１表に示すように、本発明化合物は小脳
に選択的で極めて強いエンドセリン結合阻害活性を有す
ることがわかった。

【００２２】

【表１】（２）ブタ摘出肺動脈標本におけるノルエピネフリン収
縮に対する作用ブタ肺から、外径約１ｍｍの肺動脈を摘出し、そのラセ
ン状標本（内皮温存）を作製した。標本をクレブス・ヘ
ンゼライト（Ｋｒｅｂｓ・Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ）栄養液
で満たした器官槽内に懸垂し、張力を等尺性に記録し
た。ノルエピネフリン（１μＭ）にて収縮を起こし、収
縮が安定した後、被験化合物を投与し、その弛緩反応を
観察した。弛緩反応の程度はノルエピネフリン収縮を１
００％とした時の％で表した。その結果より、各被験化
合物が４０％弛緩を起こすのに必要な濃度（ＥＤ₄₀）を
算出し、表２に示した。

【００２３】

【表２】表２に示すように、各被験化合物はいずれも血管弛緩作
用を有することが判明した。（３）腎臓近位尿細管由来細胞における細胞内カルシウ
ム濃度に対する作用ブタ腎臓の近位尿細管由来の細胞ＬＬＣ−ＰＫ₁（アメ
リカンタイプカルチャ− コレクションＣＲＬ１
３９２）を用い、細胞内カルシウム濃度に及ぼす各実施
例の化合物の作用を次の方法で測定した。

【００２４】カバーグラス上に培養したＬＬＣ−ＰＫ₁
を８μＭｆｕｒａ２−アセトキシメチルエステル（同
仁化学研究所製）、２．５ｍＭプロベネシド、０．０
５％クレモフォア（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ（シグマ
社製）を加えたクレブス・ヘンゼライト・ヘペス（Ｋｒ
ｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ−ＨＥＰＥＳ）緩衝液（ｐ
Ｈ７．４）中で、室温にて１時間インキュベートした。
これを３４０ｎｍと３８０ｎｍで励起し、５００ｎｍの
蛍光を測定して３４０／３８０比をモニターし、これよ
り細胞内カルシウム濃度を算出した。本発明化合物の細
胞内カルシウム濃度上昇作用（化合物添加前と添加後の
最大値の差：Δ［Ｃａ²⁺］）を表３に示した。

【００２５】

【表３】表３に示すように、本発明化合物は腎臓近位尿細管由来
細胞の細胞内カルシウム濃度の上昇作用を有しているこ
とがわかった。このような腎臓近位尿細管細胞での細胞
内カルシュウム濃度上昇作用は、グアニレートサイクレ
ースの活性化を引き起こし、利尿作用をもたらす。

【００２６】このように本発明化合物は優れた血管弛緩
作用を有し、医薬品の分野で血管拡張剤として有用であ
り、高血圧症、急性腎不全、心筋梗塞、狭心症、脳梗
塞、脳血管攣縮等の治療薬となり得る。このような疾患
の治療剤として使用する場合、本発明化合物は単独或は
他の治療薬と組合せて使用することもできる。

【００２７】本発明化合物は、当分野で公知の固体又は
液体の賦形剤担体と混合し、非経口投与、経口投与又は
外部投与に適した医薬製剤の形で使用することができ
る。医薬製剤としては、例えば注射剤、吸入剤、シロッ
プ剤若しくは乳剤等の液剤、例えば錠剤、カプセル剤若
しくは粒剤等の固形剤又は例えば軟膏、座剤等の外用剤
等が挙げられる。また、これらの製剤には必要に応じて
助剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、吸収促進剤又は界面活
性剤等の通常使用される添加剤が含まれていてもよい。
添加剤としては注射用蒸留水、生理食塩水、リンゲル
液、グルコース、ショ糖シロップ、ゼラチン、食用油、
カカオ脂、エチレングリコール、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ラクトース、ショ糖、コーンスターチ、ステ
アリン酸マグネシウム又はタルク等が挙げられる。

【００２８】血管弛緩物質としての本発明化合物の投与
量は、投与方法、患者の年齢、体重、及び治療する患者
の容態等に応じて異なるが、成人に対する代表的な投与
方法は経口投与又は非経口投与であり、成人患者に対し
て経口投与の場合１日あたり０．０５〜１０ｍｇ／ｋｇ
体重であり、非経口投与の場合１日あたり０．１〜５ｍ
ｇ／ｋｇ体重である。

【００２９】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明するが、もとより本発明はこれらの実施例のみに限
定されるものではない。実施例１Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌ
ｅ−Ｔｒｐの合成（配列番号４の化合物）アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製ペプチドシンセサイザ−モデル
４３１Ａを用い、標準Ｆｍｏｃ法によりｐ−アルコキ
シベンジルアルコール樹脂（２７３ｍｇ：０．２５ｍｍ
ｏｌ相当量）に、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌ
ｅ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢ
ｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒ
ｔ）、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍｏｃ
−Ｔｙｒ（^ｔＢｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｌａを順次カップリングした（４５４ｍｇ：中間体−
１）。そのうち３０４ｍｇを用いて、更にＦｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（Ｏ^ｔＢｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢｕ）を順次カップリングした（３
２９ｍｇ：中間体−２）。このカップリング反応は、Ｎ
−メチルピロリドン中、室温下に縮合剤としてはＤＣＣ
−ＨＯＢｔを用いて行い、Ｆｍｏｃの除去はピペリジン
／Ｎ−メチルピロリドン溶液を用いた。この中間体−２
１１３ｍｇに、ＴＦＡ９．５ｍｌ、ｍ−クレゾール
０．５ｍｌ、エタンジチオール０．２５ｍｌの混合液を
添加し室温で９０分間撹拌した。反応液をグラスフィル
タ−にあけ樹脂をＴＦＡで洗浄した後、濾液と洗浄液を
合わせ減圧濃縮し、残渣に冷ジエチルエ−テルを加えペ
プチドを沈澱させた。得られた沈殿物を冷ジエチルエ−
テルで洗浄後乾燥させ、２２．５ｍｇを得た。

【００３０】沈殿物１３．２ｍｇを５０％酢酸−水の混
合溶媒に溶解し、逆層高速液体クロマトグラフィー［カ
プセルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）Ｃ₁₈：２
０ｍｍ×２５０ｍｍ，溶媒：３５％アセトニトリル含有
０．１％ＴＦＡ水溶液，流速：１０ｍｌ／ｍｉｎ］で精
製し、凍結乾燥することにより白色粉末として標題化合
物４．１ｍｇを得た。

【００３１】ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺：１７２０実施例２Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖ
ａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓ
ｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐの合成（配列番号１の化合
物）実施例１で得た中間体−２１５０ｍｇを用い、実施例
１と同様の条件下、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅ
ｕを順次カップリングした（１６４ｍｇ）。得られたカ
ップリングした樹脂１０９ｍｇに、ＴＦＡ９．５ｍ
ｌ、ｍ−クレゾール０．５ｍｌ、エタンジチオール０．
２５ｍｌの混合液を添加し室温で９０分間撹拌した。反
応液をグラスフィルタ−にあけ樹脂をＴＦＡで洗浄した
後、濾液と洗浄液を合わせ減圧濃縮し、残渣に冷ジエチ
ルエ−テルを加えペプチドを沈澱させた。得られた沈殿
物を冷ジエチルエ−テルで洗浄後乾燥させ、３２．１ｍ
ｇを得た。

【００３２】沈殿物１２．３ｍｇを５０％酢酸／水の混
合溶媒に溶解し、逆層高速液体クロマトグラフィー［カ
プセルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）Ｃ₁₈：２
０ｍｍ×２５０ｍｍ、溶媒：３５％アセトニトリル含有
０．１％ＴＦＡ水溶液，流速：１０ｍｌ／ｍｉｎ］で精
製し、凍結乾燥することにより白色粉末として標題化合
物３．８ｍｇを得た。

【００３３】ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺：１９６４実施例３Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖ
ａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓ
ｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐの合成（配列番号３の化合
物）アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製ペプチドシンセサイザ−モデル
４３１Ａを用い、標準Ｆｍｏｃ法によりｐ−アルコキ
シベンジルアルコール樹脂（２５６ｍｇ：０．２５ｍｍ
ｏｌ相当量）にＦｍｏｃ−Ｔｒｐ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ、
Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢｕ）、Ｆ
ｍｏｃ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）及びＦｍ
ｏｃ−Ａｌａを順次カップリングした（２９８ｍｇ：中
間体−３）。

【００３４】中間体−３のうち１００ｍｇを用い、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（^ｔＢｕ）、Ｆｍｏｃ
−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ^ｔ
Ｂｕ）、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢ
ｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ及びＦｍｏｃ−Ｌｅｕを実施例
１と同様の条件下で順次カップリングした（１０８ｍ
ｇ）。得られたカップリングした樹脂１０８ｍｇを取
り、ＴＦＡ９．５ｍｌ、ｍ−クレゾール０．５ｍｌ、
エタンジチオール０．２５ｍｌの混合液を添加し室温で
９０分間撹拌した。反応液をグラスフィルタ−にあけ樹
脂をＴＦＡで洗浄した後、濾液と洗浄液を合わせ減圧濃
縮し、残渣に冷ジエチルエ−テルを加えペプチドを沈澱
させた。得られた沈殿物を冷ジエチルエ−テルで洗浄後
乾燥させ、２２．１ｍｇを得た。

【００３５】沈殿物９．７ｍｇを５０％酢酸／水の混合
溶媒に溶解し、逆層高速液体クロマトグラフィー［カプ
セルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）Ｃ₁₈：２０
ｍｍ×２５０ｍｍ、溶媒：３５％アセトニトリル含有
０．１％ＴＦＡ水溶液，流速：１０ｍｌ／ｍｉｎ］で精
製し、凍結乾燥することにより白色粉末として標題化合
物１．１ｍｇを得た。

【００３６】ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺：１９０７実施例４Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖ
ａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓ
ｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐの合成（配列番号２の化合
物）実施例３で得た中間体−３のうち９９ｍｇを用い、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（^ｔＢｕ）、Ｆｍｏｃ
−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ^ｔ
Ｂｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ−Ａｌ
ａ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕを実施例１と
同様の条件下で順次カップリングした（１０５ｍｇ）。
得られたカップリングした樹脂１０５ｍｇに、ＴＦＡ
９．５ｍｌ、ｍ−クレゾール０．５ｍｌ、エタンジチオ
ール０．２５ｍｌの混合液を添加し室温で９０分間撹拌
した。反応液をグラスフィルタ−にあけ樹脂をＴＦＡで
洗浄した後、濾液と洗浄液を合わせ減圧濃縮し、残渣に
冷ジエチルエ−テルを加えペプチドを沈澱させた。得ら
れた沈殿物を冷ジエチルエ−テルで洗浄後乾燥させた
（２３．４ｍｇ）。

【００３７】沈殿物８．５ｍｇを５０％酢酸／水の混合
溶媒に溶解し、逆層高速液体クロマトグラフィー［カプ
セルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）Ｃ₁₈：２０ｍ
ｍ×２５０ｍｍ、溶媒：３５％アセトニトリル含有０．
１％ＴＦＡ水溶液，流速：１０ｍｌ／ｍｉｎ］で精製
し、凍結乾燥することにより白色粉末として標題化合物
２．６ｍｇを得た。

【００３８】ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺：１９２０実施例５Ｎ−アセチル−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈ
ｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ
−Ｔｒｐの合成アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製ペプチドシンセサイザ−モデル
４３１Ａを用い、標準Ｆｍｏｃ法によりｐ−アルコキ
シベンジルアルコール樹脂（２５７ｍｇ：０．２５ｍｍ
ｏｌ相当量）に、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌ
ｅ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢ
ｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒ
ｔ）、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍｏｃ
−Ｔｙｒ（^ｔＢｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ^ｔＢｕ）を順次カップリン
グした（４８５ｍｇ）。このカップリング反応は、Ｎ−
メチルピロリドン中、室温下に行い、Ｆｍｏｃの脱離は
ピペリジン／Ｎ−メチルピロリドン溶液を用い、また縮
合剤としてはＤＣＣ−ＨＯＢｔを用いた。このカップリ
ングした樹脂１２０ｍｇを取り、塩化メチレン５ｍｌ、
無水酢酸０．２ｍｌ、ピリジン０．２ｍｌを添加し、室
温下にて１時間反応させ、Ｎ末端アミノ基のアセチル化
を行った。反応終了後、塩化メチレンにて残渣を洗浄
後、ＴＦＡ９．５ｍｌ、ｍ−クレゾール０．５ｍｌ、
エタンジチオール０．２５ｍｌの混合液を添加し、室温
で９０分間撹拌した。反応液をグラスフィルタ−にあけ
樹脂をＴＦＡで洗浄した後、濾液と洗浄液を合わせ減圧
濃縮し、残渣に冷ジエチルエ−テルを加えペプチドを沈
澱させた。得られた沈殿物を冷ジエチルエ−テルで洗浄
後乾燥させ、２５．３ｍｇを得た。

【００３９】沈殿物９．８ｍｇを５０％酢酸／水の混合
溶媒に溶解し、逆層高速液体クロマトグラフィー［カプ
セルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）Ｃ₁₈：２０
ｍｍ×２５０ｍｍ，溶媒：３５％アセトニトリル含有
０．１％ＴＦＡ水溶液，流速：１０ｍｌ／ｍｉｎ］で精
製し、凍結乾燥することにより白色粉末として標題化合
物２．３ｍｇを得た。

【００４０】ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺：１５１９実施例６Ｎ−アセチル−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ
−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐの合成アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製ペプチドシンセサイザ−モデル
４３１Ａを用い、標準Ｆｍｏｃ法によりｐ−アルコキ
シベンジルアルコール樹脂（３１１ｍｇ：０．３ｍｍｏ
ｌ相当量）に、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ、
Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢｕ）、Ｆ
ｍｏｃ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（^ｔ
Ｂｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｕ（Ｏ^ｔＢｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏ
ｃ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｍｅ
ｔ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕを順次カップリングした（１０２
２ｍｇ）。このカップリング反応は、Ｎ−メチルピロリ
ドン中、室温下に行い、Ｆｍｏｃの脱離はピペリジン／
Ｎ−メチルピロリドン溶液を用い、また縮合剤としては
ＤＣＣ−ＨＯＢｔを用いた。このカップリングした樹脂
１８２ｍｇを取り、Ｎ−メチルピロリドン４．５ｍ
ｌ、無水酢酸０．５ｍｌを添加し、室温下にて１時間反
応させ、Ｎ末端アミノ基のアセチル化を行った。反応終
了後、Ｎ−メチルピロリドン、塩化メチレンにて残渣を
洗浄後、ＴＦＡ９．５ｍｌ、ｍ−クレゾール０．５ｍ
ｌ、エタンジチオール０．２５ｍｌの混合液を添加し、
室温で９０分間撹拌した。反応液をグラスフィルタ−に
あけ、樹脂をＴＦＡで洗浄した後、濾液と洗浄液を合わ
せ減圧濃縮し、残渣に冷ジエチルエ−テルを加えペプチ
ドを沈澱させた。得られた沈殿物を冷ジエチルエ−テル
で洗浄後乾燥させ、７４．５ｍｇを得た。

【００４１】沈殿物１６．３ｍｇを水４ｍｌ、酢酸３．
５ｍｌ、アセトニトリル３ｍｌの混合溶媒に溶解し、逆
層高速液体クロマトグラフィー［カプセルパック（Ｃ
ＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）Ｃ₁₈：２０ｍｍ×２５０ｍ
ｍ，溶媒：４０％アセトニトリル含有０．１％ＴＦＡ水
溶液，流速：１０ｍｌ／ｍｉｎ］で精製し、凍結乾燥す
ることにより白色粉末として標題化合物５．９ｍｇを得
た。

【００４２】ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺：２００６実施例７Ｎ−アセチル−Ｄ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−
Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉ
ｌｅ−Ｔｒｐの合成アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製ペプチドシンセサイザ−モデル
４３１Ａを用い、標準Ｆｍｏｃ法によりｐ−アルコキシ
ベンジルアルコ−ル樹脂（３１６ｍｇ：０．３ｍｍｏｌ
相当量）に、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）、Ｆｍ
ｏｃ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ
−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（^tＢ
ｕ）を順次カップリングした（８０４ｍｇ：中間体−
４）。このカップリング反応は、Ｎ−メチルピロリドン
中、室温下で行い、Ｆｍｏｃの脱離はピペリジン／Ｎ−
メチルピロリドン溶液を用い、また縮合剤としてはＤＣ
Ｃ−ＨＯＢｔを用いた。

【００４３】中間体−４のうち３９９ｍｇを用い、Ｆｍ
ｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｇｌ
ｕ（Ｏ^tＢｕ）を同様の条件下で順次カップリングした
（４１５ｍｇ）。このカップリングした樹脂２０５ｍｇ
を取り、Ｎ−メチルピロリドン４．５ｍｌ、無水酢酸
０．５ｍｌを添加し、室温下にて１時間反応させ、Ｎ末
端アミノ基のアセチル化を行った。反応終了後、Ｎ−メ
チルピロリドン及び塩化メチレンにて順次残さを洗浄
後、ＴＦＡ９．５ｍｌ、ｍ−クレゾ−ル０．５ｍｌ、エ
タンジチオ−ル０．２５ｍｌの混合液を添加し、室温で
９０分間撹拌した。反応液をグラスフィルタ−にあけ樹
脂をＴＦＡで洗浄した後、ろ液と洗浄液を合わせ減圧濃
縮し、残さに冷ジエチルエ−テルを加えペプチドを沈澱
させた。得られた沈殿物を冷ジエチルエ−テルで洗浄乾
燥させ、８６．３ｍｇを得た。

【００４４】沈殿物２０ｍｇを５０％酢酸／水の混合溶
媒に溶解し、逆層高速液体クロマトグラフィ−［カプセ
ルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）Ｃ₁₈：２０ｍ
ｍ×２５０ｍｍ、溶媒：４０％アセトニトリル含有０．
１％ＴＦＡ水溶液、流速：１０ｍｌ／ｍｉｎ］で精製
し、凍結乾燥することにより白色粉末として標題化合物
７．２ｍｇを得た。

【００４５】ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺：１５１９実施例８Ｎ−アセチル−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｐｈ
ｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ
−Ｔｒｐの合成アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ社製ペプチドシンセサイザ−モデル４
３１Ａを用い、標準Ｆｍｏｃ法によりｐ−アルコキシベ
ンジルアルコ−ル樹脂（２５８ｍｇ：０．２５ｍｍｏｌ
相当量）に、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^tＢｕ）、Ｆｍ
ｏｃ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ
−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（^tＢ
ｕ）、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｕ（Ｏ^tＢｕ）を順次カップリングした（６６５
ｍｇ）。このカップリングした樹脂１９２ｍｇを取り、
Ｎ−メチルピロリドン４．５ｍｌ、無水酢酸０．５ｍｌ
を添加し、室温下にて１時間反応させ、Ｎ末端アミノ基
のアセチル化を行った。反応終了後、Ｎ−メチルピロリ
ドン及び塩化メチレンにて順次残渣を洗浄後、ＴＦＡ
９．５ｍｌ、ｍ−クレゾ−ル０．５ｍｌ、エタンジチオ
−ル０．２５ｍｌの混合液を添加し、室温で９０分間撹
拌した。反応液をグラスフィルタ−にあけ樹脂をＴＦＡ
で洗浄した後、濾液と洗浄液を合わせ減圧濃縮し、残渣
に冷ジエチルエ−テルを加えペプチドを沈澱させた。得
られた沈殿物を冷ジエチルエ−テルで洗浄乾燥させ、７
５ｍｇを得た。沈殿物１１．０ｍｇを５０％酢酸／水
の混合溶媒に溶解し、逆層高速液体クロマトグラフィ−
［カプセルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）
Ｃ₁₈：２０ｍｍ×２５０ｍｍ、溶媒：３６％アセトニト
リル含有０．１％ＴＦＡ水溶液、流速：１０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］で精製し、凍結乾燥することにより白色粉末として
標題化合物４．６ｍｇを得た。

【００４６】ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺：１４９１実施例９Ｎ−アセチル−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈ
ｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ
−Ｔｒｐの合成アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ社製ペプチドシンセサイザ−モデル４
３１Ａを用い、標準Ｆｍｏｃ法によりｐ−アルコキシベ
ンジルアルコ−ル樹脂（３０９ｍｇ：０．３ｍｍｏｌ相
当量）に、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｉｌｅを順次カップリングした（４７２ｍｇ：中
間体−５）。中間体−５のうち１５８ｍｇを用い、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^tＢｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｙｒ（^tＢｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ^tＢｕ）を同様の条
件下で順次カップリングした（２２０ｍｇ）。このカッ
プリングした樹脂１０９ｍｇを取り、Ｎ−メチルピロリ
ドン４．５ｍｌ、無水酢酸０．５ｍｌを添加し、室温下
にて１時間反応させ、Ｎ末端アミノ基のアセチル化を行
った。反応終了後、Ｎ−メチルピロリドン及び塩化メチ
レンにて順次残渣を洗浄後、ＴＦＡ９．５ｍｌ、ｍ−ク
レゾ−ル０．５ｍｌ、エタンジチオ−ル０．２５ｍｌの
混合液を添加し、室温で９０分間撹拌した。反応液をグ
ラスフィルタ−にあけ樹脂をＴＦＡで洗浄した後、濾液
と洗浄液を合わせ減圧濃縮し、残渣に冷ジエチルエ−テ
ルを加えペプチドを沈澱させた。得られた沈殿物を冷ジ
エチルエ−テルで洗浄乾燥させ、３２ｍｇを得た。

【００４７】沈殿物１４ｍｇを５０％酢酸／水の混合溶
媒に溶解し、逆層高速液体クロマトグラフィ−［カプセ
ルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）Ｃ₁₈：２０ｍ
ｍ×２５０ｍｍ、溶媒：４３％アセトニトリル含有０．
１％ＴＦＡ水溶液、流速：１０ｍｌ／ｍｉｎ］で精製
し、凍結乾燥することにより白色粉末として標題化合物
１．１ｍｇを得た。

【００４８】ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺：１４５３実施例１０Ｎ−アセチル−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈ
ｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉｌｅ
−Ｔｒｐの合成アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製ペプチドシンセサイザ−モデル
４３１Ａを用い、標準Ｆｍｏｃ法によりｐ−アルコキシ
ベンジルアルコ−ル樹脂（２５８ｍｇ：０．２５ｍｍｏ
ｌ相当量）に、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ、
Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^tＢｕ）、Ｆ
ｍｏｃ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（^t
Ｂｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｕ（Ｏ^tＢｕ）を順次カップリングした（６６
３ｍｇ）。このカップリングした樹脂１８２ｍｇを取
り、Ｎ−メチルピロリドン４．５ｍｌ、無水酢酸０．５
ｍｌを添加し、室温下にて１時間反応させ、Ｎ末端アミ
ノ基のアセチル化を行った。反応終了後、Ｎ−メチルピ
ロリドン及び塩化メチレンにて順次残渣を洗浄後、ＴＦ
Ａ９．５ｍｌ、ｍ−クレゾ−ル０．５ｍｌ、エタンジチ
オ−ル０．２５ｍｌの混合液を添加し、室温で９０分間
撹拌した。反応液をグラスフィルタ−にあけ樹脂をＴＦ
Ａで洗浄した後、濾液と洗浄液を合わせ減圧濃縮し、残
渣に冷ジエチルエ−テルを加えペプチドを沈澱させた。
得られた沈殿物を冷ジエチルエ−テルで洗浄乾燥させ、
７７ｍｇを得た。沈殿物１４．５ｍｇを５０％酢酸／
水の混合溶媒に溶解し、逆層高速液体クロマトグラフィ
−［カプセルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）
Ｃ ₁₈：２０ｍｍ×２５０ｍｍ、溶媒：３６％アセトニト
リル含有０．１％ＴＦＡ水溶液、流速：１０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］で精製し、凍結乾燥することにより白色粉末として
標題化合物６．６ｍｇを得た。

【００４９】ＦＡＢ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺：１４７７

【００５０】

【発明の効果】本発明に係る化合物は、強い血管弛緩作
用を有することから、ヒトの高血圧症、急性腎不全、心
筋梗塞、狭心症、脳梗塞及び脳血管攣縮の治療薬として
有用である。

【００５１】

【配列表】

【００５２】配列番号：１配列の長さ：１６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００５３】配列番号：２配列の長さ：１６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００５４】配列番号：３配列の長さ：１６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００５５】配列番号：４配列の長さ：１４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者中道京子東京都目黒区下目黒２丁目９番３号萬有製薬株式会社中央研究所内 (72)発明者矢野光夫東京都目黒区下目黒２丁目９番３号萬有製薬株式会社中央研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式Ｘ¹−Ｘ²−Ａｌａ−Ｘ³−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｘ⁴
−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｘ⁵−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ［Ｉ］［式中、Ｘ¹は水素原子、アシル基、アミノ基がアシル
基を有していてもよい任意のアミノ酸残基又は任意の２
〜４個のアミノ酸からなる任意の配列を有するＮ−末端
がアシル基を有していてもよいペプチド残基を示し、Ｘ
²はＧｌｕ又はＤ−Ｇｌｕを示し、Ｘ³はＶａｌ又はＡｌ
ａを示し、Ｘ⁴はＨｉｓ又はＡｌａを示し、Ｘ⁵はＩｌｅ
又はＡｌａを示す］で表されるペプチド又はその製薬上
許容されうる塩。
【請求項２】Ｘ¹が水素原子、アシル基、又はＡｌａ、
Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ａ
ｓｐ、Ｇｌｕ及びＬｙｓからなる群から選ばれるアミノ
基がアシル基を有していてもよいアミノ酸残基、又はＡ
ｌａ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｐｈ
ｅ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ及びＬｙｓからなる群から選ばれる
２〜４個のアミノ酸残基よりなる任意の配列を有するＮ
−末端がアシル基を有していてもよいペプチド残基であ
る請求項１記載のペプチド又はその製薬上許容されうる
塩。
【請求項３】Ｘ¹が水素原子又はＬｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓ
ｐ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｌｅｕ
−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ａｓｐ−Ｌｙｓ若しくはＡ
ｌａ−Ｌｙｓである請求項１記載のペプチド又はその製
薬上許容されうる塩。
【請求項４】以下の化学式で示される化合物又はその製
薬上許容されうる塩。Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌ
ｅ−Ｔｒｐ、Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ
−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−
Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｌｅｕ−Ｍ
ｅｔ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙ
ｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ
−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−
Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｈ
ｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｎ−
アセチル−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−
Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔ
ｒｐ、Ｎ−アセチル−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ
−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−
Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｎ
−アセチル−Ｄ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐ
ｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌ
ｅ−Ｔｒｐ、Ｎ−アセチル−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−
Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｉ
ｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｎ−アセチル−Ｇｌｕ−Ａｌａ
−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−
Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｎ−アセチル−Ｇｌ
ｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｈｉｓ
−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ
【請求項５】請求項１記載の式［Ｉ］で表される化合物
又はその製薬上許容されうる塩を含有することを特徴と
する高血圧、急性腎不全、心筋梗塞、狭心症、脳梗塞、
脳血管攣縮の治療及び／又は予防剤。