JPH06103307B2 - 免疫分析方法 - Google Patents
免疫分析方法Info
- Publication number
- JPH06103307B2 JPH06103307B2 JP62214735A JP21473587A JPH06103307B2 JP H06103307 B2 JPH06103307 B2 JP H06103307B2 JP 62214735 A JP62214735 A JP 62214735A JP 21473587 A JP21473587 A JP 21473587A JP H06103307 B2 JPH06103307 B2 JP H06103307B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- measured
- complement
- microcapsule
- Prior art date
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- Expired - Lifetime
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ［発明の目的］ （産業上の利用分野） 本発明は、免疫分析方法に関する。
（従来の技術） 近年医療分野においては病気の診断等を行うに際し、高
度の信頼性をもって抗原を簡便迅速に定量することが極
めて重要な課題になってきた。
度の信頼性をもって抗原を簡便迅速に定量することが極
めて重要な課題になってきた。
免疫化学的測定法による抗原の定量法として、（Ａ）放
射化免疫測定法（ラジオイムノアッセイ）、（Ｂ）酵素
免疫測定法、（Ｃ）逆受身赤血球凝集反応法、及び
（Ｄ）一元放射状免疫拡散法等が挙げられるが、これら
の方法は次の如き欠点を有するものであった。即ち、 Ａ方法：洗浄操作を必要とし、またラジオアイソトープ
を使用するため特別の設備を必要とする等莫大な設備費
と繁雑な手数を要する。
射化免疫測定法（ラジオイムノアッセイ）、（Ｂ）酵素
免疫測定法、（Ｃ）逆受身赤血球凝集反応法、及び
（Ｄ）一元放射状免疫拡散法等が挙げられるが、これら
の方法は次の如き欠点を有するものであった。即ち、 Ａ方法：洗浄操作を必要とし、またラジオアイソトープ
を使用するため特別の設備を必要とする等莫大な設備費
と繁雑な手数を要する。
Ｂ方法：一般的に洗浄の操作を必要とし且つ判定まで長
時間を要する。
時間を要する。
Ｃ方法：ダイリユーターにて試料を２倍に随段希釈する
操作及びドロッパーにて希釈度等を低下する操作を必要
とするため繁雑な手数を要する。又判定までに長時間を
要すると共に、抗原量を２倍階段希釈の終末値で判定す
るため殺駁な判定になるおそれがある。
操作及びドロッパーにて希釈度等を低下する操作を必要
とするため繁雑な手数を要する。又判定までに長時間を
要すると共に、抗原量を２倍階段希釈の終末値で判定す
るため殺駁な判定になるおそれがある。
Ｄ方法：判定までに多大な時間を要すると共に感度的に
も不十分である。
も不十分である。
かかる欠点を除去した免疫分析方法として、測定対象抗
原に対する二種の抗体のうち、第１の抗体を、リポソー
ムなどのマイクロカプセル表面に結合し、これと試料と
を混合した後、第２の抗体と補体とを混合し、第２の抗
体により活性化された補体でマイクロカプセル膜を壊
し、マイクロカプセル内から溶出してきた物質（蛍光分
質など）を計測することにより、試料中の測定対象抗原
量を測定しようとしたものがある。
原に対する二種の抗体のうち、第１の抗体を、リポソー
ムなどのマイクロカプセル表面に結合し、これと試料と
を混合した後、第２の抗体と補体とを混合し、第２の抗
体により活性化された補体でマイクロカプセル膜を壊
し、マイクロカプセル内から溶出してきた物質（蛍光分
質など）を計測することにより、試料中の測定対象抗原
量を測定しようとしたものがある。
（発明が解決しようとする問題点） ところで近年、細胞培養によりモノクローナル抗体を得
る技術が進歩し、従来、動物を免疫して得てきた抗体も
このモノクローナル抗体に移行しつつある。そこで上記
の免疫分析方法における第２の抗体としてこのモノクロ
ーナル抗体が適用された。
る技術が進歩し、従来、動物を免疫して得てきた抗体も
このモノクローナル抗体に移行しつつある。そこで上記
の免疫分析方法における第２の抗体としてこのモノクロ
ーナル抗体が適用された。
ところが、第２の抗体としてモノクローナル抗体を適用
した場合に測定感度が低いという問題点を生じた。
した場合に測定感度が低いという問題点を生じた。
そこで本発明はかかる事情に鑑みて成されたもので、第
１の抗体をマイクロカプセルに結合し、これと、測定対
象抗原を含有する試料とを混合した後、これに第２の抗
体と補体とを添加して測定対象抗原量の定量分析を可能
とする免疫分析方法において、測定感度の向上を図るこ
とを目的としている。
１の抗体をマイクロカプセルに結合し、これと、測定対
象抗原を含有する試料とを混合した後、これに第２の抗
体と補体とを添加して測定対象抗原量の定量分析を可能
とする免疫分析方法において、測定感度の向上を図るこ
とを目的としている。
［発明の構成］ （問題点を解決するための手段） 本発明は、第１の抗体をモノクローナル抗体とし、第２
の抗体をポリクローナル抗体としたものである。
の抗体をポリクローナル抗体としたものである。
（作 用） 本願発明者が鋭意研究を重ねた結果、第２の抗体として
１種類のモノクローナル抗体だけでは反応しないことが
判明した。なぜなら補体は２個以上の抗体が近接してい
るところで初めて活性化し、第２の抗体が１種類のモノ
クローナル抗体である場合、２個以上の抗体が近接して
いる可能性が極めて低いからである。
１種類のモノクローナル抗体だけでは反応しないことが
判明した。なぜなら補体は２個以上の抗体が近接してい
るところで初めて活性化し、第２の抗体が１種類のモノ
クローナル抗体である場合、２個以上の抗体が近接して
いる可能性が極めて低いからである。
これを模式図により説明すると次のようになる。
第１図（ａ）は第２の抗体がモノクローナル抗体の場合
を示している。マイクロカプセル内物質２を含有するマ
イクロカプセル１の表面に第１の抗体３が結合し、それ
に、被測定抗原４が結合し、第２の抗体５が結合する。
第２の抗体５により補体が活性化されるわけであるが、
補体が活性化されるためには２個以上の第２の抗体５が
近接していなくてはならない。すなわち、第１の抗体３
がマイクロカプセル上のごく近接した位置に結合してい
なければならない。このことは技術的に不可能ではない
が大変困難なことである。
を示している。マイクロカプセル内物質２を含有するマ
イクロカプセル１の表面に第１の抗体３が結合し、それ
に、被測定抗原４が結合し、第２の抗体５が結合する。
第２の抗体５により補体が活性化されるわけであるが、
補体が活性化されるためには２個以上の第２の抗体５が
近接していなくてはならない。すなわち、第１の抗体３
がマイクロカプセル上のごく近接した位置に結合してい
なければならない。このことは技術的に不可能ではない
が大変困難なことである。
第１図（ｂ）は第２の抗体がポリクローナル抗体の場合
を示している。第１の抗体３に結合した被測定抗原４に
２個以上の第２の抗体５が結合し、必然的に、ごく近傍
に２個以上の第２の抗体５が存在することとなる。これ
により補体が容易に活性化され、マイクロカプセル１膜
を破壊することとなる。従って、第１の抗体にモノクロ
ーナル抗体を適用し、第２の抗体にポリクローナル抗体
を適用することで、測定感度が向上する。
を示している。第１の抗体３に結合した被測定抗原４に
２個以上の第２の抗体５が結合し、必然的に、ごく近傍
に２個以上の第２の抗体５が存在することとなる。これ
により補体が容易に活性化され、マイクロカプセル１膜
を破壊することとなる。従って、第１の抗体にモノクロ
ーナル抗体を適用し、第２の抗体にポリクローナル抗体
を適用することで、測定感度が向上する。
（実施例） 以下、本発明を実施例により具体的に説明する。
本実施例では、血清中のフェリチンを測定する場合につ
いて説明する。
いて説明する。
第１の抗体として、抗ヒトフェリチン抗体モノクローナ
ル抗体（マウス由来）を用い、これを、蛍光物質である
カルボキシフルオレッセインを封入したマイクロカプセ
ルに結合する。マイクロカプセルは例えばリポソームで
あり、このリポソームに抗体を結合させる方法としては
レイザーマン（Leserman）等の方法（ネイチャー,Natur
e,288,602-604,1980）、マルチン（Martin）等の方法
（バイオケミストリー,Biochemistry 20,4229-4238,198
1）などがある。そしてこれに血清を反応させた後、第
２の抗体（抗ヒトフェリチン抗体ポリクローナル抗体
（ウサギ由来））と補体（モルモット血清）とを添加し
て反応させる。ここで、第２の抗体としてポリクローナ
ル抗体を用いているため補体が容易に活性化され、リポ
ソームが破壊される。これにより、遊離された蛍光物質
を光学的に検出し、得られた蛍光強度から、リポソーム
の溶解率を求める。第２図に示すように血清中のフェリ
チン濃度が増加するにつれリポソーム溶解率が増加する
ので、フェリチン濃度未知の血清についてリポソームの
溶解率を求めることによってフェリチン濃度を知ること
ができる。
ル抗体（マウス由来）を用い、これを、蛍光物質である
カルボキシフルオレッセインを封入したマイクロカプセ
ルに結合する。マイクロカプセルは例えばリポソームで
あり、このリポソームに抗体を結合させる方法としては
レイザーマン（Leserman）等の方法（ネイチャー,Natur
e,288,602-604,1980）、マルチン（Martin）等の方法
（バイオケミストリー,Biochemistry 20,4229-4238,198
1）などがある。そしてこれに血清を反応させた後、第
２の抗体（抗ヒトフェリチン抗体ポリクローナル抗体
（ウサギ由来））と補体（モルモット血清）とを添加し
て反応させる。ここで、第２の抗体としてポリクローナ
ル抗体を用いているため補体が容易に活性化され、リポ
ソームが破壊される。これにより、遊離された蛍光物質
を光学的に検出し、得られた蛍光強度から、リポソーム
の溶解率を求める。第２図に示すように血清中のフェリ
チン濃度が増加するにつれリポソーム溶解率が増加する
ので、フェリチン濃度未知の血清についてリポソームの
溶解率を求めることによってフェリチン濃度を知ること
ができる。
このように本実施例においては、第１の抗体として抗ヒ
トフェリチン抗体モノクローナル抗体を適用し、第２の
抗体として抗ヒトフェリチン抗体ポリクローナル抗体を
適用しているので、フェリチンに２個以上の抗体が存在
することになり、補体が容易に活性化されリポソームが
破壊されることから測定感度が高く、フェリチン濃度を
適確に測定することができる。
トフェリチン抗体モノクローナル抗体を適用し、第２の
抗体として抗ヒトフェリチン抗体ポリクローナル抗体を
適用しているので、フェリチンに２個以上の抗体が存在
することになり、補体が容易に活性化されリポソームが
破壊されることから測定感度が高く、フェリチン濃度を
適確に測定することができる。
以上本発明の一実施例について説明したが、本発明は上
記実施例に限定されるものではなく、種々の変形実施が
可能となる。
記実施例に限定されるものではなく、種々の変形実施が
可能となる。
［発明の効果］ 以上詳述したように本発明によれば、第１の抗体をマイ
クロカプセルに結合し、これと、測定対象抗原を含有す
る試料とを混合した後、これに第２の抗体と補体とを添
加して測定対象抗原量の定量分析を可能とする免疫分析
方法において、測定感度の向上を図ることができる。
クロカプセルに結合し、これと、測定対象抗原を含有す
る試料とを混合した後、これに第２の抗体と補体とを添
加して測定対象抗原量の定量分析を可能とする免疫分析
方法において、測定感度の向上を図ることができる。
第１図（ａ），（ｂ）は本発明の原理を説明するための
模式図、第２図はフェリチン測定検量線図である。 １……マイクロカプセル、３……第１の抗体、 ４……被測定抗原、５……第２の抗体。
模式図、第２図はフェリチン測定検量線図である。 １……マイクロカプセル、３……第１の抗体、 ４……被測定抗原、５……第２の抗体。
Claims (1)
- 【請求項１】第１の抗体をマイクロカプセルに結合し、
これと、測定対象抗原を含有する試料とを混合した後、
これに第２の抗体と補体とを添加し、前記マイクロカプ
セルを破壊せしめて前記測定対象抗原量の定量分析を可
能とする免疫分析方法において、前記第１の抗体をモノ
クローナル抗体とし、前記第２の抗体をポリクローナル
抗体としたことを特徴とする免疫分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62214735A JPH06103307B2 (ja) | 1987-08-28 | 1987-08-28 | 免疫分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62214735A JPH06103307B2 (ja) | 1987-08-28 | 1987-08-28 | 免疫分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6459070A JPS6459070A (en) | 1989-03-06 |
| JPH06103307B2 true JPH06103307B2 (ja) | 1994-12-14 |
Family
ID=16660740
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62214735A Expired - Lifetime JPH06103307B2 (ja) | 1987-08-28 | 1987-08-28 | 免疫分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06103307B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04303770A (ja) * | 1991-03-30 | 1992-10-27 | Toyo Ink Mfg Co Ltd | 抗原の免疫分析法 |
| JP2017203665A (ja) * | 2016-05-10 | 2017-11-16 | 国立大学法人信州大学 | 光開裂性マイクロカプセル、それを用いたセンサ、及びそれを用いた被測定物質の測定方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0799373B2 (ja) * | 1984-12-13 | 1995-10-25 | 日水製薬株式会社 | 抗原の定量法 |
| JPH079428B2 (ja) * | 1985-04-30 | 1995-02-01 | 株式会社東芝 | 免疫分析方法 |
-
1987
- 1987-08-28 JP JP62214735A patent/JPH06103307B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6459070A (en) | 1989-03-06 |
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