JPH0611331B2 - 固定化ポリミキシン成形品からのエンドトキシン除去方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、固定化ポリミキシン成形品のエンドトキシン
除去方法に関する。

［従来技術］ 固定化ポリミキシン成形品を用いて、例えば、血液、水
溶液中のエンドトキシンを解毒しようとする際、固定化
ポリミキシン成形品に製造工程で混入し、付着したエン
ドトキシンが溶離し、本来の目的とは逆に、血液や水溶
液を汚染してしまうという問題があった。

ところが、エンドトキシンの定量法が確立されていなか
ったため、固定化ポリミキシン成形品に付着したエンド
トキシンを積極的に除去しようとする試みは、従来検討
されていなかった。

例えば、固定化ポリミキシン成形品として、アガロース
にポリミキシンを固定化したものが報告されているが、
積極的なエンドトキシンの除去方法は述べられていな
い。

［発明が解決しようとする問題点］ 本発明は、固定化ポリミキシン成形品に付着したエンド
トキシンを、固定化されたポリミキシンの活性を失うこ
となく、効率よく除去する方法を提供するものである。

［問題点を解決するための手段］ 固定化ポリミキシン成形品をアルカリ溶液と接触させる
ことを特徴とする固定化ポリミキシン成形品からのエン
ドトキシン除去方法。

本発明でいう固定化ポリミキシン成形品とは、ポリミキ
シンを担体に固定化したものである。

また、ポリミキシンとは、Bacillus Polymyxaにより産
生されるペプチド系抗生物質である。ポリミキシンには
ポリミキシンＡ、ポリミキシンＢ_１、ポリミキシン
Ｂ_２、ポリミキシンＤ_１、ポリミキシンＥ_１、およびポ
リミキシンＥ_２等があり、グラム陰性菌に対して抗菌作
用を有するものである。

本発明でいうアルカリ溶液とは、ＰＨ９以上、より好ま
しくは、ＰＨ１２以上の溶液であればよく、特にその種
類などに制限はない。

アルカリ溶液の例としては、ナトリウム、カリウム、リ
チウム、セシウム等で代表されるアルカリ金属、カルシ
ウム、バリウム、マグネシウム等で代表されるアルカリ
土類金属などの水酸化物、または、それらの弱酸塩の水
溶液があり、さらにトリメチルベンジルアンモニウムヒ
ドロキサイド等の四級アンモニウム塩の水酸化物があげ
られる。

とりわけ、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等が好ま
しい。さらにその濃度は１Ｎ以上が好ましい。

溶媒としては、水、食塩水、または、有機溶媒等を用い
ることができる。

また、水と水溶性有機溶媒、例えば水とアルコールなど
の混合溶液が採用される。その時のアルコールの濃度
は、低すぎると効果が小さく、高すぎるとアルカリの溶
解性が低下するので５〜５０％、好ましくは１０〜３０
％の濃度が適用される。

接触手段の例としては、振とう、撹拌あるいはカラムを
通じて連続的に流す方法や浸漬などの手段が採用される
が、中でも溶液の撹拌が好ましく、例えば、超音波撹拌
では成形品の内部まで洗浄が可能であるのでより好まし
い。

溶液の温度は、通常は０℃以上１００℃以下の範囲であ
るが、特に室温付近が好ましく適用される。

本発明でいう成形品としては、たとえば繊維、中空糸、
膜、ビーズ等があるが、これらに限るものではない。

また、その成形品は、耐薬品性、特に耐アルカリ性に優
れていることが必要であり、特に不溶性重合体であるの
が好ましい。例えば不溶性ビニル重合体にポリミキシン
を固定化した成形品が具体例としてあげられる。

不溶性重合体の例としては、スチレン、塩化ビニル、ア
クリル酸アミド、アクリロニトリル、無水マレイン酸、
メチクリル酸エステルなどで代表されるモノビニル化合
物の単独重合体、または、ジビニルベンゼン、あるいは
メチレンビスアクリルアミド等で代表されるポリビニル
化合物との共重合体の他、上記モノビニル化合物重合体
成形品をホルムアルデヒドクロルスルホン酸等で架橋処
理したもの等があげられる。

これらの不活性重合体にポリミキシン分子を共有結合で
固定化するためには、該重合体にα−ハロゲン化アルキ
ル基、または、カルボン酸エステル基等の官能基が重合
体に直接、または、スペーサーを介して結合しているこ
とが必要であり、このスペーサーの長さは、メチレン基
にして４個以上の長さであることが望ましい。

［実施例］ 実施例１ ポリプロピレン（三井“ノーブレン”Ｊ３ＨＧ）５０部
を島成分とし、ポリスチレン（“スタイロン”６６６）
４６部、ポリプロピレン（住友“ノーブレン”ＷＦ−７
２７−Ｆ）４部の混合物を海成分とする海島型複合繊維
（島数１６、単糸繊度２．６デニール、引張強度２．９
ｇ／ｄ、伸度５０％、フィラメント数４２）５０ｇをＮ
−メチロール−α−クロルアセトアミド６０ｇ、ニトロ
ベンゼン４００ｇ、９８％硫酸４００ｇ、およびびパラ
ホルムアルデヒド０．８５ｇからなる混合溶液中に浸
し、２０℃で１時間、反応させた。

繊維を反応液から取り出し、０℃の氷水５中に投じ
て、反応停止させたのち、水で洗浄し、次に繊維に付着
しているニトロベンゼンをメタノールで抽出除去した。
この繊維（繊維Ａ）を５０℃で真空乾燥してクロルアセ
トアミドメチル化繊維７１ｇを得た。

硫酸ポリミキシンＢ（シグマ社；８０００単位／mg）
４．８ｇを６００ｍｌの水に溶かし、この中に繊維Ａ２
２ｇを加え５時間振とうした後、酸化マグネシウム１．
５ｇを添加し、室温で１２時間振とうした。

次にこの繊維を反応母液から取り出し、クロマトカラム
につめて０．１Ｎ−塩酸４８００ｍｌで洗浄してポリミ
キシン固定化繊維（繊維Ｂ）を得た。この洗浄液と反応
母液中のポリミキシン量をミクロビュレット法で測定
し、その量と仕込量の差を繊維に固定化されたポリミキ
シン量とみなした。固定化量は、１．５ｍｇ／ｇであっ
た。

繊維Ｂ１ｇの入った無菌の試験管に、１ＮＮａＯＨ２０
％エチルアルコール溶液３０ｍｌを入れ、超音波洗浄器
で３０分間繊維と溶液を接触させ、液を交換して、再び
超音波洗浄器にかけた。またこの時の溶液の温度は３７
℃に調節した。

エンドトキシン除去後、繊維を無菌のカラムに移し、滅
菌蒸留水を流出水が中性になるまで流した。

次に無菌のトリス−塩酸バッファー６０ｍｌを流し、滅
菌蒸溜水１２０ｍｌを流した。

エンドトキシン除去後、中性化した繊維（繊維Ｃ）を滅
菌三角フラスコに入れ、生理食塩水３０ｍｌを加え、共
栓をし、３７℃で９０分間、振とうし、繊維Ｃの表面に
付着したエンドトキシンを生理食塩水３０ｍｌ中へ溶離
させた。

その結果、繊維Ｃ１ｇ当り２．９ngであり、極めて低い
量であった。

比較例 繊維Ｂを滅菌三角フラスコに入れ、生理食塩水３０ｍｌ
を加え、共栓をし、３７℃で９０分間、振とうし、繊維
Ｂの表面に付着したエンドトキシンを溶離させ、エンド
トキシンを定量した。繊維Ｂ１ｇ当り５６ngであった。

［発明の効果］ 固定化ポリミキシン成形品に付着したエンドトキシン
を、該ポリミキシンの活性を失うことなく、効率よく除
去することができる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】固定化ポリミキシン成形品をアルカリ溶液
   と接触させることを特徴とする固定化ポリミキシン成形
   品からのエンドトキシン除去方法。