JPH06135839A - コレステロール抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 医薬品あるいは食品素材として適用可能な効
果の強いコレステロール抑制剤を提供する。 【構成】 マクロフォモプシス（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｏ
ｐｓｉｓ）属に属する微生物を培養して生産されるβ−
グルカンを有効成分とするコレステロール抑制剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、有効成分としてマクロ
フォモプシス（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｏｐｓｉｓ）属に属
する微生物を培養して生産されるβ−グルカンを含有す
るコレステロール抑制剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、脂肪もしくはコレステロールを摂
取することが多くなり、高脂血症、動脈硬化症などの成
人病が増加している。食餌性のコレステロールを適正に
保つ食生活が望まれているが、ますます高脂肪、高コレ
ステロールの食事を取る傾向にある。このように過剰に
摂取されるコレステロールから、生体内のコレステロー
ル値を適正に保つ有効なコレステロール上昇抑制剤が望
まれている。また、すでにコレステロール値が高くなっ
てしまった高コレステロール血症に対する有効なコレス
テロール低下剤が望まれている。

【０００３】食物繊維の中にペクチン、グァーガム等コ
レステロール上昇抑制作用を有する物質が知られている
が（栄養学雑誌，３３巻，２７３頁，１９７５年）、そ
の効果は弱く、コレステロール上昇抑制を示すには多量
の摂取を必要とするという欠点がある。また、胆汁酸金
属イオン封鎖剤（ｂｉｌｅ ｓａｌｔ ｓｅｑｕｅｓｔ
ｒａｎｔ）であるコレスチラミンおよび他の樹脂状物質
なども、コレステロール上昇抑制効果を示すが、医薬品
としては多量に摂取しなければならず（アニュ−アル
レビュー オブ ファーマコロジー；Ａｎｕａｌ Ｒｅ
ｖｉｅｗ ｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１３巻，２
８７頁，１９７３年）、さらに吐き気や便秘を引き起こ
す副作用があるなどの欠点を有している。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的と
するところは、医薬品あるいは食品素材としても適用可
能であり、かつ少量で強い効果を示すコレステロール抑
制剤を提供するにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】上述の目的は、マクロフ
ォモプシス（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｏｐｕｓｉｓ）属に属
する微生物を培養して生産されるβ−グルカン又は該β
−グルカンを分子量１００，０００〜３，０００，００
０に低分子化した低粘性β−グルカンを含有するコレス
テロール抑制剤によって達成される。

【０００６】以下、本発明について詳細に説明する。

【０００７】本発明において用いられるβ−グルカン
は、糸状菌であるマクロフォモプシス（Ｍａｃｒｏｐｈ
ｏｍｏｐｓｉｓ）属に属する微生物を培養して得られる
β−グルカンで、以下の特徴を有するものである。ａ）
主鎖のＤ−グルコピラノシル残基はすべてβ−１，３結
合である。ｂ）主鎖のＤ−グルコピラノシル残基４個に
対して１個の割合でβ−１，６結合のＤ−グルコピラノ
シル残基１個からなる側鎖を持つ。

【０００８】β−グルカンの製造に関しては既に検討さ
れているが（特開平２−１２２７０１号公報）、以下に
その概略を示す。

【０００９】β−グルカンの製造に用いる微生物として
は、例えば、微工研受託９３６６号として寄託されたマ
クロフォモプシスＫＡＢ５５株と命名されたもの等が挙
げられる。

【００１０】本糸状菌の培養に用いられる炭素源として
は例えば、ブドウ糖，麦芽糖，デンプン，ショ糖，フラ
クトース，糖蜜，及びこれらの混合物等が挙げられる。
これらの糖類を用いた場合、培養物中にはβ−グルカン
と副産物であるα−グルカンが同時に蓄積されるが、炭
素源としてガラクトースを骨格として含む糖を用いれ
ば、マクロフォモプシス属に属する微生物に、β−グル
カンのみを選択的に培養物中に産生、蓄積させることが
できる（特願平３−２０１５０２号）。

【００１１】ガラクトースを骨格として含む糖として
は、例えばガラクトース，ラクトース，メリビオース，
ラフィノース，スタキオース等が挙げられるが、β−グ
ルカンの収率が高いという点でラクトースが特に好まし
い。

【００１２】窒素源としては、概ね微生物の培養に用い
られる有機体，無機体の窒素源の全てが使用可能であ
り、例えば脱脂綿実粉（ファーマメディア），コーンス
ティープリカー，酵母エキス，乾燥酵母，各種ペプト
ン，オートミール肉エキス，カゼイン加水分解物，アン
モニウム塩，硝酸塩などが挙げられる。

【００１３】その他添加物として塩化ナトリウム，マグ
ネシウム，カルシウム，リン酸等の無機塩が挙げられ
る。

【００１４】更に該培地には必要に応じて鉄，銅，マン
ガン等の金属塩を微量配合してもよい。

【００１５】培養条件はｐＨ３．５〜９．０が好まし
く、更に好ましくはｐＨ５．０〜８．０、培養温度は１
０〜４０℃が好ましく、更に好ましくは２０〜３５℃
で、通常３〜７日間培養する。

【００１６】培養終了後、培養液を濾過または遠心分離
などの適当な方法で処理して該微生物体を除去する。次
に、得られる濾液または上清に、適当な沈殿剤たとえば
エタノール，メタノール，イソプロパノール，プロパノ
ール，アセトン等の有機溶剤を加え、β−グルカンを沈
殿させる。この沈殿物を濾過又は遠心分離等の適当な方
法で分離し、さらに水に再溶解させた後、沈殿剤による
沈殿をくり返した後、透析，凍結乾燥をすることにより
精製β−グルカンが得られる。

【００１７】このようにして得られるβ−グルカンは高
粘性であるが、精製したβ−グルカン及び培養液からの
沈殿形成から精製に至る任意の過程で、アルカリ処理，
エンドグルカナーゼによる部分分解，超音波処理等の低
粘度化処理を行うことにより、低粘性のβ−グルカンを
得ることもできる。

【００１８】これらの低粘度化における処理条件は、β
−グルカンの精製度，β−グルカンの濃度等により異な
るが、最終的に得られるβ−グルカンの分子量が１０
０，０００〜３，０００，０００となるよう処理温度，
処理時間等を調整することが好ましい。この低分子化し
たβ−グルカンは、低粘性であるため、扱い易いという
利点を有している。

【００１９】本発明のコレステロール抑制剤は上述のよ
うにして得られるβ−グルカン以外に、各種添加剤，賦
形剤等を、本発明の目的を損なわない範囲で適宜配合す
ることができる。

【００２０】本発明のコレステロール抑制剤は、経口で
投与される。投与量は、患者の年齢，体重，症状等によ
り異なるが、成人に投与する場合、一般には１日あたり
β−グルカンとして１０〜５，０００ｍｇ，より好まし
くは１００〜１，０００ｍｇの量が適している。

【００２１】

【作用】本発明のコレステロール抑制剤は、生体内のコ
レステロール値の上昇を抑制するほか、高脂血症に対し
て有効なコレステロール値の低下作用を有している。

【００２２】以下に製造例、試験例および実施例を示し
て、本発明およびその効果を具体的に説明する。尚、本
発明はこれにより何等制限されるものではない。

【００２３】製造例１ マクロフォモプシス属に属する菌株ＫＡＢ５５（微工研
受諾９３６６号）を下記表１に示した組成の培地にて３
日間前培養し、これの１５ｌを同組成の培地３００ｌを
入れた５００ｌ容ジャーファーメンター（ケイエフエン
ジニアリング社製）に植菌して２５℃で４日間培養を行
った。通気量は１．２ｖｖｍ、攪拌回転数は６０ｒｐｍ
で本培養を行った。

【００２４】

【表１】

【００２５】得られた培養液を８０００回転／分、２０
分で遠心分離して菌体を除去し、上澄に対して２０％容
量のイソプロパノールを加えβ−グルカンを析出させ
た。これを１０，０００回転／分、５分で遠心分離し、
β−グルカンを回収した。回収したβ−グルカンを再び
水に溶解させ上記操作を繰り返して夾雑物を除去した
後、乾燥してβ−グルカンを培養液１ｌあたり１．６グ
ラム得た。以下これを高粘性β−グルカンと記載する。

【００２６】製造例２ 製造例１で得たβ−グルカン２０ｇを水２ｌに溶解し、
さらにＮａＯＨを１２０ｇ加えてこれを溶解した。室温
で３０分静置後−規定塩酸を加えて中和したのち、８０
０ｍｌのイソプロパノールを加えてβ−グルカンを析出
させた。これを１０，０００回転／分、５分で遠心分離
し、β−グルカンを回収した。回収したβ−グルカンを
再び水に溶解させ、イソプロパノールによるβ−グルカ
ンの析出および遠心による回収をもう１度繰り返して夾
雑物を除去した後、乾燥してβ−グルカンを１８ｇ得
た。

【００２７】このようにアルカリ処理して得たグルカン
を粘度を１重量％水溶液の２５℃での粘度をビスメトロ
ン回転粘度計で測定した。また分子量をＨＰＬＣ（ゲル
濾過カラム）で測定した。結果を表２に示す。アルカリ
処理により、β−グルカンの粘性が著しく低下し、また
分子量も低下した。以下これを低粘性β−グルカンと記
載する。

【００２８】

【表２】

【００２９】 試験例１（コレステロール上昇抑制効果試験） ＳＤ系雄ラット（５週齢）を市販飼料ＭＦ（オリエンタ
ル酵母社製）で４日間予備飼育した後、体重がほぼ等し
くなるように１群６匹ずつ５群に群分けした。市販飼料
ＭＦ（オリエンタル酵母社製）に対してコレステロー
ル，コール酸ナトリウムをそれぞれ最終含有率１重量
％，０．２重量％となる様加え高コレステロール食（対
照飼料）を作製した。また、試験飼料として製造例１で
製造した高粘性β−グルカンを対照飼料に加えた高コレ
ステロール食（試験飼料Ａ〜Ｃ），あるいは公知のコレ
ステロール抑制剤であるコレスチラミン（シグマ社製）
を最終含有率０．５重量％となるよう加えた高コレステ
ロール食（比較飼料）を作製した。

【００３０】これら５種類の飼料を５群のラットに自由
摂取させた。高コレステロール食移行直前および移行５
日後に尾静脈より採血し、市販の臨床検査試薬（コレス
テロールＥテスト，和光純薬製）で血清コレステロール
値を測定した。

【００３１】上記試験結果を表３に示す。本発明のコレ
ステロール低下剤である高粘性β−グルカンの投与によ
り、用量依存的に血中コレステロールの上昇抑制効果が
認められた。高粘性β−グルカンを０．２重量％混餌投
与した実験群（試験飼料Ｃ投与群）の血清コレステロー
ル値は、対照飼料を与えた実験群より有意に低くなり、
少量の投与でコレステロール上昇抑制効果が認められた
（Ｄｕｎｃａｎの多重比較に基づく）。

【００３２】しかも、高粘性β−グルカンを０．２重量
％混餌投与した実験群（試験飼料Ｃ投与群）の血清コレ
ステロール値は、コレスチラミンを０．５重量％混餌投
与した実験群（比較飼料投与群）の値より低く、高粘性
β−グルカンはコレスチラミンに対して優るとも劣らな
いコレステロール上昇抑制効果を有していることが示さ
れた。

【００３３】

【表３】

【００３４】表中の数字は平均値±標準誤差である。平
均値の肩字の異なる実験群（ａ，ｂ，ｃ）はＤｕｎｃａ
ｎ法による統計解析で有意差あり（ｐ＜０．０５）。

【００３５】試験例２（コレステロール値低下試験） ＳＤ系雄ラット（５週齢）を市販飼料ＭＦ（オリエンタ
ル酵母社製）で４日間予備飼育した後、体重がほぼ等し
くなるように１群７匹ずつ２群に群分けした。これらの
ラットに対して、試験例１で用いた高コレステロール食
（対照飼料）を３日間自由摂取させ、高コレステロール
血症を惹起させた。

【００３６】この２群の高コレステロール血症ラット２
群のうち、１群を試験群として、試験例１で用いた高コ
レステロール食（試験飼料Ｂ）を２日間自由摂取させ
て、高粘性β−グルカンのコレステロール低下作用を調
べた。

【００３７】尚、もう一方の対照実験群には引続き対照
飼料を自由摂取させた。高コレステロール食移行直前、
移行３日後及び５日後に、尾静脈より採血して、市販の
臨床検査試薬（コレステロールＥテスト、和光純薬製）
で血清コレステロール値を測定した。

【００３８】上記試験結果を表４に示す。高コレステロ
ール食を３日間投与することにより試験群，対照群いず
れも血清コレステロール値が大きく上昇し、高コレステ
ロール血症を惹起することができた。対照群のラットは
高コレステロール食の投与をさらに２日間継続したが、
血清コレステロール値の低下は認められなかった。一
方、試験群のラットは高粘性β−グルカンを１重量％混
餌投与することにより、血清コレステロール値が有意に
低くなり（対応のあるｔ検定に基づく）、高粘性β−グ
ルカンの血中コレステロールの低下作用が認められた。

【００３９】

【表４】

【００４０】表中の数字は平均値±標準誤差である。 ^*
ｔ検定による統計解析で対照に対して有意差あり（ｐ＜
０．０１）、試験群の高コレステロール食移行３日の値
に対して対応のあるｔ検定で有意差あり（ｐ＜０．００
１）。

【００４１】試験例３（コレステロール抑制試験） ＳＤ系雄ラット（５週齢）を市販飼料ＭＦ（オリエンタ
ル酵母社製）で４日間予備飼育した後、体重がほぼ等し
くなるように１群６匹ずつ３群に群分けした。

【００４２】試験例１で用いた対照飼料に、製造例１で
製造した高粘性β−グルカン，製造例２で製造した低粘
性β−グルカンをそれぞれ最終含有率１重量％となるよ
う加えた高コレステロール食（試験飼料Ｄ，Ｅ）を作製
した。これら２種類の試験飼料及び対照飼料を、それぞ
れ３群のラットに自由摂取させた。高コレステロール食
移行直前および移行５日後に尾静脈より採血し、市販の
臨床検査試薬（コレステロールＥテスト，和光純薬製）
で血清コレステロール値を測定した。

【００４３】上記試験結果を表５に示す。高コレステロ
ール食移行５日後の血清コレステロール値は、試験飼料
Ｄ投与群および試験飼料Ｅ投与群いずれも対照飼料投与
群に対して有意に低い値を示した。さらに、試験飼料Ｄ
投与群および試験飼料Ｅ投与群の血清コレステロール値
はほぼ等しい値であり、アルカリ処理により低粘性化し
たβ−グルカンも未処理の高粘性β−グルカンと同様、
コレステロール抑制効果を有していることが示された。

【００４４】

【表５】

【００４５】表中の数字は平均値±標準誤差である。平
均値の肩字の異なる実験群（ａ，ｂ）はＤｕｎｃａｎ法
による統計解析で有意差あり（ｐ＜０．０５）。

【００４６】試験例４（安全性試験） ＳＤ系雄ラット（５週齢）を市販飼料ＭＦ（オリエンタ
ル酵母社製）で４日間予備飼育した後、体重がほぼ等し
くなるように１群６匹ずつ２群に群分けした。試験群及
び対照群に、それぞれ試験例１で用いた試験飼料Ａ又は
市販飼料ＭＦ（オリエンタル酵母社製）を投与し、７日
間観察した。

【００４７】飼料摂取量から推定したラットへのβ−グ
ルカンの投与量は１日あたり５ｇ／ｋｇ以上であった。
この間ラットの死亡例は認められず、行動観察において
全く異常は認められなかった。また、体重増加の推移に
おいても対照群に対して有意な差異は認められなかっ
た。

【００４８】実施例１〔錠剤〕 １錠中に有効成分として製造例１で製造した高粘性β−
グルカン１００ｍｇを含有する錠剤を以下の通り調製し
た。

【００４９】

【表６】

【００５０】（調製法）高粘性β−グルカン，乳糖，ト
ウモロコシデンプンおよび結晶セルロースの混合物にヒ
ドロキシプロピルセルロースを３０ｇの水に溶解して加
え、充分練合した。この練合物を２０メッシュの篩に通
して顆粒状に造粒して乾燥した後、得られた顆粒にステ
アリン酸マグネシウムを混合し、１錠２００ｍｇに打錠
した。

【００５１】実施例２〔カプセル剤〕 １錠中に有効成分として製造例１で製造した高粘性βグ
ルカン１００ｍｇを含有するカプセル剤を以下の通り調
製した。

【００５２】

【表７】

【００５３】（調製法）上記の各成分を充分混合し、混
合物の３００ｍｇずつを２号カプセルに充填してカプセ
ル剤を得た。

【００５４】実施例３〔顆粒剤〕 １ｇ中に有効成分として製造例１で製造した高粘性β−
グルカン１００ｍｇを含有する顆粒剤を以下の通り調製
した。

【００５５】

【表８】

【００５６】（調製法）高粘性β−グルカン，乳糖およ
びトウモロコシデンプンの混合物にヒドロキシプロピル
セルロースを３０ｇの水に溶解して加え、充分練合し
た。この練合物を２０メッシュの篩に通して造粒して乾
燥し、整粒を行って顆粒剤を得た。

【００５７】実施例４〔ドリンク剤〕 １００ｍｌ中に有効成分として製造例１で製造した高粘
性β−グルカン３００ｍｇを含有する顆粒剤を以下の通
り調製した。

【００５８】

【表９】

【００５９】（調製法）精製水８５０ｍｌに６０℃で上
記（ａ）〜（ｄ）の成分を加えて溶解後、上記成分
（ｅ）を加えて充分混合した。これに精製水を加えて１
０００ｍｌとしてさらに充分混合後、９０℃まで加温し
て１００ｍｌずつドリンク瓶にホットパックしてドリン
ク剤を得た。

【００６０】

【発明の効果】以上の様に、本発明のコレステロール抑
制剤は、生体内コレステロール値の上昇を抑制し、高脂
血症の予防に対して有効であること，及び既に上昇して
しまったコレステロール値を低下させる効果をも有する
ことは明らかである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 マクロフォモプシス（Ｍａｃｒｏｐｈｏ
   ｍｏｐｓｉｓ）属に属する微生物を培養して生産され
   る、下記のような結合様式をもつβ−グルカンを含有す
   るコレステロール抑制剤。 ａ）主鎖のＤ−グルコピラノシル残基はすべてβ−１，
   ３結合である。 ｂ）主鎖のＤ−グルコピラノシル残基４個に対して１個
   の割合でβ−１，６結合のＤ−グルコピラノシル残基１
   個からなる側鎖を持つ。
2. 【請求項２】 マクロフォモプシス（Ｍａｃｒｏｐｈｏ
   ｍｏｐｓｉｓ）属に属する微生物を培養して生産され
   る、下記のような結合様式をもつβ−グルカンを、分子
   量１００，０００〜３，０００，０００に低分子化した
   低粘性β−グルカンを含有するコレステロール抑制剤。 ａ）主鎖のＤ−グルコピラノシル残基はすべてβ−１，
   ３結合である。 ｂ）主鎖のＤ−グルコピラノシル残基４個に対して１個
   の割合でβ−１，６結合のＤ−グルコピラノシル残基１
   個からなる側鎖を持つ。