JPH06178687A - ヒトｓｔ２をコードするｄｎａ、該ｄｎａの発現産物、該ｄｎａを発現させることによる発現産物の製造方法 - Google Patents
ヒトｓｔ２をコードするｄｎａ、該ｄｎａの発現産物、該ｄｎａを発現させることによる発現産物の製造方法Info
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- JPH06178687A JPH06178687A JP4353589A JP35358992A JPH06178687A JP H06178687 A JPH06178687 A JP H06178687A JP 4353589 A JP4353589 A JP 4353589A JP 35358992 A JP35358992 A JP 35358992A JP H06178687 A JPH06178687 A JP H06178687A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ヒトＳＴ２をコードするゲノムＤＮＡ、ヒト
ＳＴ２をコードするｃＤＮＡ、ヒトＳＴ２を単離する。
これらは、癌細胞の検出、増殖抑制などに有用である。 【構成】 ヒトゲノムＤＮＡライブラリーから、マウス
ＳＴ２のｃＤＮＡをプローブとして用いて、ヒトＳＴ２
をコードするゲノムＤＮＡ断片を単離した。また、この
ＤＮＡ断片の一部をＰＣＲプライマーとして用いて、種
々のヒトｃＤＮＡライブラリーからヒトＳＴ２の一部を
コードするｃＤＮＡ断片を合成し、該ｃＤＮＡ断片をプ
ローブとして用いて、ヒトｃＤＮＡライブラリーから、
ヒトＳＴ２の全長をコードするｃＤＮＡを単離した。更
に、このｃＤＮＡを発現ベクターに挿入したベクターを
培養細胞に導入し、培養細胞内でヒトＳＴ２を大量に発
現させた。
ＳＴ２をコードするｃＤＮＡ、ヒトＳＴ２を単離する。
これらは、癌細胞の検出、増殖抑制などに有用である。 【構成】 ヒトゲノムＤＮＡライブラリーから、マウス
ＳＴ２のｃＤＮＡをプローブとして用いて、ヒトＳＴ２
をコードするゲノムＤＮＡ断片を単離した。また、この
ＤＮＡ断片の一部をＰＣＲプライマーとして用いて、種
々のヒトｃＤＮＡライブラリーからヒトＳＴ２の一部を
コードするｃＤＮＡ断片を合成し、該ｃＤＮＡ断片をプ
ローブとして用いて、ヒトｃＤＮＡライブラリーから、
ヒトＳＴ２の全長をコードするｃＤＮＡを単離した。更
に、このｃＤＮＡを発現ベクターに挿入したベクターを
培養細胞に導入し、培養細胞内でヒトＳＴ２を大量に発
現させた。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒトＳＴ２をコードす
るＤＮＡ、該ＤＮＡの少なくとも一部分を有しヒトＳＴ
２と選択的にハイブリダイズすることのできるＤＮＡ、
該ＤＮＡを含有するベクター、該ベクターを保持する形
質転換体、ヒトＳＴ２、該ＤＮＡを発現させてヒトＳＴ
２を製造する方法に関する。
るＤＮＡ、該ＤＮＡの少なくとも一部分を有しヒトＳＴ
２と選択的にハイブリダイズすることのできるＤＮＡ、
該ＤＮＡを含有するベクター、該ベクターを保持する形
質転換体、ヒトＳＴ２、該ＤＮＡを発現させてヒトＳＴ
２を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】細胞分裂では、Ｇ１ 期と呼ばれるＤＮ
Ａ合成準備期、Ｓ期と呼ばれるＤＮＡ合成期、Ｇ２ と
呼ばれる分裂準備期、Ｍ期と呼ばれる分裂期及びＧ０
期と呼ばれる静止期が出現することが知られている。こ
こで、分裂を繰り返す細胞はＧ１ 期→Ｓ期→Ｇ２ 期
→Ｍ期→Ｇ１ 期の増殖サイクルを繰り返すが、Ｍ期か
らＧ０ 期に移行した細胞は分裂の休止状態となる。し
かし、Ｇ０ 期にある休止状態の細胞も増殖刺激等によ
ってＧ１期に移行し、再び増殖サイクルに入ることがで
きる。
Ａ合成準備期、Ｓ期と呼ばれるＤＮＡ合成期、Ｇ２ と
呼ばれる分裂準備期、Ｍ期と呼ばれる分裂期及びＧ０
期と呼ばれる静止期が出現することが知られている。こ
こで、分裂を繰り返す細胞はＧ１ 期→Ｓ期→Ｇ２ 期
→Ｍ期→Ｇ１ 期の増殖サイクルを繰り返すが、Ｍ期か
らＧ０ 期に移行した細胞は分裂の休止状態となる。し
かし、Ｇ０ 期にある休止状態の細胞も増殖刺激等によ
ってＧ１期に移行し、再び増殖サイクルに入ることがで
きる。
【０００３】動物の組織中には、周期の異なる細胞が存
在しているが、それら細胞を抽出し、Ｇ０ 期で分裂を
停止させ、再び人為的な刺激を与えることでＧ０ 期か
らＧ１ 期への移行を開始させる技術が知られるように
なるにつれて、Ｇ０ 期からＧ１ 期にかけて特異的に
発現する遺伝子（ＤＮＡ）を解明しようとする研究が盛
んになっている。Ｇ０ 期にある細胞がＧ１ 期に移行
し増殖サイクルに入る機構が明らかになれば、癌細胞等
の細胞分裂の制御などに応用することが可能であり、こ
の研究は基礎研究のみにとどまるものではない。
在しているが、それら細胞を抽出し、Ｇ０ 期で分裂を
停止させ、再び人為的な刺激を与えることでＧ０ 期か
らＧ１ 期への移行を開始させる技術が知られるように
なるにつれて、Ｇ０ 期からＧ１ 期にかけて特異的に
発現する遺伝子（ＤＮＡ）を解明しようとする研究が盛
んになっている。Ｇ０ 期にある細胞がＧ１ 期に移行
し増殖サイクルに入る機構が明らかになれば、癌細胞等
の細胞分裂の制御などに応用することが可能であり、こ
の研究は基礎研究のみにとどまるものではない。
【０００４】実際に、従来より分裂をＧ０ 期で停止さ
せた動物細胞標品を使用し、これに人為的な刺激を与え
てＧ０ 期からＧ１ 期へ移行させ、このときに特異的
に発現するＲＮＡを抽出するなどの研究が行われている
（Ｌｉｎｚｅｒ，Ｄ．Ｉ．Ｈ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第３０巻、４２７１頁
（１９８３年）、Ｌｉｎｚｅｒ，Ｄ．Ｉ．Ｈ．ら、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第８１
巻、４２５５頁（１９８４年）、Ｈｉｒｓｃｈｈｏｒ
ｎ，Ｒ．Ｒ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ、第８１巻、６００４頁（１９８４年）、
Ｌａｕ，Ｌ．Ｆ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．第４巻、３１４５
頁（１９８５年）、Ｌａｕ，Ｌ．Ｆ．ら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第８４巻、１１
８２頁（１９８７年）、Ｃｈａｖｒｉｅｒ，Ｐ．ら、
ＥＭＢＯ Ｊ．第７巻、２９頁（１９８８年））。
せた動物細胞標品を使用し、これに人為的な刺激を与え
てＧ０ 期からＧ１ 期へ移行させ、このときに特異的
に発現するＲＮＡを抽出するなどの研究が行われている
（Ｌｉｎｚｅｒ，Ｄ．Ｉ．Ｈ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第３０巻、４２７１頁
（１９８３年）、Ｌｉｎｚｅｒ，Ｄ．Ｉ．Ｈ．ら、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第８１
巻、４２５５頁（１９８４年）、Ｈｉｒｓｃｈｈｏｒ
ｎ，Ｒ．Ｒ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ、第８１巻、６００４頁（１９８４年）、
Ｌａｕ，Ｌ．Ｆ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．第４巻、３１４５
頁（１９８５年）、Ｌａｕ，Ｌ．Ｆ．ら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第８４巻、１１
８２頁（１９８７年）、Ｃｈａｖｒｉｅｒ，Ｐ．ら、
ＥＭＢＯ Ｊ．第７巻、２９頁（１９８８年））。
【０００５】これらの研究によって、細胞がＧ０ 期か
らＧ１ 期へ移行する際には、例えばｃ−ｍｙｃ、ｃ−
ｆｏｓ等の癌遺伝子が特異的に発現することが明らかに
なっている。
らＧ１ 期へ移行する際には、例えばｃ−ｍｙｃ、ｃ−
ｆｏｓ等の癌遺伝子が特異的に発現することが明らかに
なっている。
【０００６】しかし、これらの研究はＧ０ 期からＧ１
期への移行の際の遺伝子の発現に注目しようとするあ
まり、非特異的ＤＮＡを排除する目的で、Ｇ０ 期にあ
る細胞を人為的に刺激した後２〜３時間後という極めて
短時間に特異的に発現されるＤＮＡのみを対象としてお
り、Ｓ期直前等で発現されるものについての知見はなか
った。
期への移行の際の遺伝子の発現に注目しようとするあ
まり、非特異的ＤＮＡを排除する目的で、Ｇ０ 期にあ
る細胞を人為的に刺激した後２〜３時間後という極めて
短時間に特異的に発現されるＤＮＡのみを対象としてお
り、Ｓ期直前等で発現されるものについての知見はなか
った。
【０００７】本発明者は先に、Ｇ０ 期にあるマウス由
来の培養細胞を人為的に刺激した後、約１０時間後とい
う比較的長時間の後に特異的に発現される遺伝子に着目
して研究を行った結果、マウス線維芽細胞のＧ０ 期か
らＧ１ 期の移行期に特異的に発現するｍＲＮＡを鋳型
としてｃＤＮＡを合成することによって従来知られてい
なかったＤＮＡを単離し、更には該ＤＮＡがコードする
蛋白質を発現することに成功し（Ｔｏｍｉｎａｇａ，
Ｓ． ｅｔ ａｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２５
８，３０１−３０４（１９８９），Ｔｏｍｉｎａｇａ．
Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ａｃｔａ，１０９０，１−８（１９９１））、この蛋
白質をマウスＳＴ２と命名した。
来の培養細胞を人為的に刺激した後、約１０時間後とい
う比較的長時間の後に特異的に発現される遺伝子に着目
して研究を行った結果、マウス線維芽細胞のＧ０ 期か
らＧ１ 期の移行期に特異的に発現するｍＲＮＡを鋳型
としてｃＤＮＡを合成することによって従来知られてい
なかったＤＮＡを単離し、更には該ＤＮＡがコードする
蛋白質を発現することに成功し（Ｔｏｍｉｎａｇａ，
Ｓ． ｅｔ ａｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２５
８，３０１−３０４（１９８９），Ｔｏｍｉｎａｇａ．
Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ａｃｔａ，１０９０，１−８（１９９１））、この蛋
白質をマウスＳＴ２と命名した。
【０００８】このマウスＳＴ２をコードするＤＮＡを特
徴付ける性質は次の通りである。
徴付ける性質は次の通りである。
【０００９】少なくともマウスのＣＤ−１種の脳組
織、心臓組織、肺組織、肝臓組織、脾臓組織、膵臓組
織、腎臓組織、筋肉組織又は睾丸組織から調製される細
胞では発現されないが、少なくともＢＡＬＢ／ｃ−３Ｔ
３（マウス線維芽細胞）細胞のＧ０ 期から開始される
細胞増殖の際に発現される。すなわち、Ｇ０ 期（静止
期）にある前記細胞では該ＤＮＡは発現されないが、こ
れら細胞がＧ０ 期からＧ１ 期に移行するにしたがっ
て発現される。
織、心臓組織、肺組織、肝臓組織、脾臓組織、膵臓組
織、腎臓組織、筋肉組織又は睾丸組織から調製される細
胞では発現されないが、少なくともＢＡＬＢ／ｃ−３Ｔ
３（マウス線維芽細胞）細胞のＧ０ 期から開始される
細胞増殖の際に発現される。すなわち、Ｇ０ 期（静止
期）にある前記細胞では該ＤＮＡは発現されないが、こ
れら細胞がＧ０ 期からＧ１ 期に移行するにしたがっ
て発現される。
【００１０】少なくともマウスＢＡＬＢ／ｃ−３Ｔ３
細胞であってＧ０ 期を経由せずにＭ期からＧ１ 期を
経由してＳ期に移行した細胞においても発現されるが、
その発現量は該細胞のＧ０ 期から開始される細胞分裂
における発現量以下である。すなわち、例えば分裂組織
に由来する細胞では、Ｇ０ 期を経由せずにＭ期からす
ぐ次の細胞周期に移行することがある。このような細胞
においても該ＤＮＡは発現されているが、その発現量
は、Ｇ０ 期からＧ１ 期に移行する際の発現量と比較
するとわずかである。
細胞であってＧ０ 期を経由せずにＭ期からＧ１ 期を
経由してＳ期に移行した細胞においても発現されるが、
その発現量は該細胞のＧ０ 期から開始される細胞分裂
における発現量以下である。すなわち、例えば分裂組織
に由来する細胞では、Ｇ０ 期を経由せずにＭ期からす
ぐ次の細胞周期に移行することがある。このような細胞
においても該ＤＮＡは発現されているが、その発現量
は、Ｇ０ 期からＧ１ 期に移行する際の発現量と比較
するとわずかである。
【００１１】Ｇ０ 期からの細胞増殖開始後約５〜１
２時間でその発現は極大を迎える。すなわち、従来知ら
れていたＤＮＡではＧ０ 期からの分裂の開始後２〜３
時間程度で特異的に発現するが、該ＤＮＡはこれらとは
異なる性質を有する。
２時間でその発現は極大を迎える。すなわち、従来知ら
れていたＤＮＡではＧ０ 期からの分裂の開始後２〜３
時間程度で特異的に発現するが、該ＤＮＡはこれらとは
異なる性質を有する。
【００１２】その発現により分子量が１８〜２８Ｓの
細胞質ＲＮＡが合成される。
細胞質ＲＮＡが合成される。
【００１３】このように、本発明者が先に単離したマウ
スＳＴ２をコードするＤＮＡは従来知られたＤＮＡとは
異なった性質を有していた。本発明者らは更に、マウス
ＳＴ２をコードするｃＤＮＡの塩基配列を決定した。そ
して、決定された塩基配列をもとに、マウスＳＴ２の３
３７残基からなるアミノ酸配列を推定した（Ｔｏｍｉｎ
ａｇａ，Ｓ． ｅｔ ａｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔ
ｔ．，２５８，３０１−３０４（１９８９））。このア
ミノ酸配列から、マウスＳＴ２の性質が次のように推定
された。
スＳＴ２をコードするＤＮＡは従来知られたＤＮＡとは
異なった性質を有していた。本発明者らは更に、マウス
ＳＴ２をコードするｃＤＮＡの塩基配列を決定した。そ
して、決定された塩基配列をもとに、マウスＳＴ２の３
３７残基からなるアミノ酸配列を推定した（Ｔｏｍｉｎ
ａｇａ，Ｓ． ｅｔ ａｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔ
ｔ．，２５８，３０１−３０４（１９８９））。このア
ミノ酸配列から、マウスＳＴ２の性質が次のように推定
された。
【００１４】イムノグロブリン・スーパーファミリー
に属し、３個のイムノグロブリン様ドメインを形成し得
る一次構造を有する蛋白質である。ここで、イムノグロ
ブリン・スーパーファミリーとは、イムノグロブリン様
ドメインを持ち、細胞間連絡に関与する蛋白質であり、
イムノグロブリン様ドメインとはイムノグロブリンに存
在する、システイン同志のＳ−Ｓ結合により形成される
ループと類似した構造を意味する。３個のイムノグロブ
リン様ドメインを形成し得るとは、少なくとも６個以上
のシステイン残基を有することを意味する。
に属し、３個のイムノグロブリン様ドメインを形成し得
る一次構造を有する蛋白質である。ここで、イムノグロ
ブリン・スーパーファミリーとは、イムノグロブリン様
ドメインを持ち、細胞間連絡に関与する蛋白質であり、
イムノグロブリン様ドメインとはイムノグロブリンに存
在する、システイン同志のＳ−Ｓ結合により形成される
ループと類似した構造を意味する。３個のイムノグロブ
リン様ドメインを形成し得るとは、少なくとも６個以上
のシステイン残基を有することを意味する。
【００１５】９個の糖鎖が結合し得る部位を有する蛋
白質である。該蛋白質は９個のアスパラギンを有してい
るからである。
白質である。該蛋白質は９個のアスパラギンを有してい
るからである。
【００１６】アミノ酸配列が公知であるマウスＩＬ−
１レセプター中の膜外部位、マウス神経細胞付着蛋白
質、マウス基底膜プロテオグリカン、ＨＬＡ−６−２、
分泌型チキンＩｇＭを構成する重鎖中の定常部位とのア
ミノ酸配列類似性（アミノ酸配列の同一性）が、それぞ
れ２５．１％、２２．７％、１９．０％、２０．８％、
１６．５％である。
１レセプター中の膜外部位、マウス神経細胞付着蛋白
質、マウス基底膜プロテオグリカン、ＨＬＡ−６−２、
分泌型チキンＩｇＭを構成する重鎖中の定常部位とのア
ミノ酸配列類似性（アミノ酸配列の同一性）が、それぞ
れ２５．１％、２２．７％、１９．０％、２０．８％、
１６．５％である。
【００１７】
【発明が解決しようとする課題】このように、細胞がＧ
０ 期からＧ１ 期に移行する際、移行開始後比較的長
い時間の後発現するマウスＳＴ２についてはその詳細が
明らかにされたが、マウスＳＴ２に類似する蛋白質、特
にヒト由来の蛋白質については全く知見がなかった。
０ 期からＧ１ 期に移行する際、移行開始後比較的長
い時間の後発現するマウスＳＴ２についてはその詳細が
明らかにされたが、マウスＳＴ２に類似する蛋白質、特
にヒト由来の蛋白質については全く知見がなかった。
【００１８】
【課題を解決するための手段】本発明者は、マウスＳＴ
２ｃＤＮＡ由来のＤＮＡプローブを用いて、ヒト顆粒球
由来のゲノムＤＮＡライブリーをスクリーニングし、該
ＤＮＡプローブと特異的にハイブリダイズするクローン
を得た。そして、このクローンに含まれるゲノムＤＮＡ
断片の塩基配列を明らかにし、マウスＳＴ２をコードす
るゲノムＤＮＡの塩基配列との対比からエクソン部を推
定した。このエクソン部の塩基配列を基に合成したＰＣ
Ｒプライマーを用いて様々な細胞由来のヒトｃＤＮＡラ
イブラリー中のＤＮＡを増幅し、２つのＰＣＲプライマ
ーで挟まれる領域が増幅されるライブラリーを選択し
た。そして先に単離したマウスＳＴ２ｃＤＮＡ断片とハ
イブリダイズするヒトゲノムＤＮＡ断片をプローブにし
て、ヒトＳＴ２をコードするｃＤＮＡをクローニングす
ることに成功した。
２ｃＤＮＡ由来のＤＮＡプローブを用いて、ヒト顆粒球
由来のゲノムＤＮＡライブリーをスクリーニングし、該
ＤＮＡプローブと特異的にハイブリダイズするクローン
を得た。そして、このクローンに含まれるゲノムＤＮＡ
断片の塩基配列を明らかにし、マウスＳＴ２をコードす
るゲノムＤＮＡの塩基配列との対比からエクソン部を推
定した。このエクソン部の塩基配列を基に合成したＰＣ
Ｒプライマーを用いて様々な細胞由来のヒトｃＤＮＡラ
イブラリー中のＤＮＡを増幅し、２つのＰＣＲプライマ
ーで挟まれる領域が増幅されるライブラリーを選択し
た。そして先に単離したマウスＳＴ２ｃＤＮＡ断片とハ
イブリダイズするヒトゲノムＤＮＡ断片をプローブにし
て、ヒトＳＴ２をコードするｃＤＮＡをクローニングす
ることに成功した。
【００１９】更にクローニングしたｃＤＮＡを動物細胞
中で発現させ、ヒトＳＴ２を取得することに成功した。
中で発現させ、ヒトＳＴ２を取得することに成功した。
【００２０】本発明のＤＮＡは、例えば配列番号４のア
ミノ酸配列を有する蛋白質を発現し得るものである。
ミノ酸配列を有する蛋白質を発現し得るものである。
【００２１】このようなＤＮＡの一例としては、配列番
号２または配列番号３の塩基配列を有するものがあげら
れる。
号２または配列番号３の塩基配列を有するものがあげら
れる。
【００２２】また、本発明の蛋白質は、本発明のＤＮＡ
によりコードされるものであり、その他には何ら制限は
ない。本発明の蛋白質の一例として、配列番号４で表さ
れるアミノ酸配列を有するものがあげられる。
によりコードされるものであり、その他には何ら制限は
ない。本発明の蛋白質の一例として、配列番号４で表さ
れるアミノ酸配列を有するものがあげられる。
【００２３】また、本発明の蛋白質には、「シグナルペ
プチドを含有するもの」と「シグナルペプチド含有しな
いもの（成熟蛋白質）」の両者とも含まれる。
プチドを含有するもの」と「シグナルペプチド含有しな
いもの（成熟蛋白質）」の両者とも含まれる。
【００２４】本発明のＤＮＡは後に示されるような手法
を用いてヒト細胞より取得することが可能である。ま
た、本発明の蛋白質は本発明のＤＮＡを適当なベクター
に連結し、これを使用して遺伝子工学的に調製すること
が可能である。
を用いてヒト細胞より取得することが可能である。ま
た、本発明の蛋白質は本発明のＤＮＡを適当なベクター
に連結し、これを使用して遺伝子工学的に調製すること
が可能である。
【００２５】ＤＮＡはヒト細胞のゲノムから単離して
も、ヒト細胞由来のｍＲＮＡを鋳型とするｃＤＮＡから
単離してもよい。また、化学合成によって製造すること
も可能である。ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡの採取源となる
細胞はヒト細胞であれば特に限定されないが、ｍＲＮＡ
の場合はＳＴ２が発現している細胞から取得することが
望ましい。例えば本発明のＤＮＡの両末端に、オリゴヌ
クレオチドを結合させた後に適当な制限酵素を用いて制
限部位を形成したＤＮＡ断片を取得し、一方選択した宿
主を形質転換可能でかつ該宿主中で自己増殖可能なベク
ターのプロモーター等の構造遺伝子の発現に必要な配列
の下流を先の制限酵素により切断したＤＮＡ断片を取得
し、これらを結合させることで発現ベクターを得、該発
現ベクターで形質転換された宿主細胞に本発明の蛋白質
を発現させることが可能である。
も、ヒト細胞由来のｍＲＮＡを鋳型とするｃＤＮＡから
単離してもよい。また、化学合成によって製造すること
も可能である。ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡの採取源となる
細胞はヒト細胞であれば特に限定されないが、ｍＲＮＡ
の場合はＳＴ２が発現している細胞から取得することが
望ましい。例えば本発明のＤＮＡの両末端に、オリゴヌ
クレオチドを結合させた後に適当な制限酵素を用いて制
限部位を形成したＤＮＡ断片を取得し、一方選択した宿
主を形質転換可能でかつ該宿主中で自己増殖可能なベク
ターのプロモーター等の構造遺伝子の発現に必要な配列
の下流を先の制限酵素により切断したＤＮＡ断片を取得
し、これらを結合させることで発現ベクターを得、該発
現ベクターで形質転換された宿主細胞に本発明の蛋白質
を発現させることが可能である。
【００２６】本発明のＤＮＡは、従来の宿主・ベクター
系にて発現可能であるが、中でもＣＨＯやＣＯＳ等の動
物細胞を使用する発現系を使用するとよい。
系にて発現可能であるが、中でもＣＨＯやＣＯＳ等の動
物細胞を使用する発現系を使用するとよい。
【００２７】本発明のＤＮＡについては、また、その塩
基配列の一部であって従来知られたＤＮＡの塩基配列と
区別可能な配列を利用してＤＮＡプローブ等を調製する
ことが可能である。このようなプローブを用いれば、例
えば組織中の細胞分裂の盛んな細胞塊等を探知すること
が可能である。
基配列の一部であって従来知られたＤＮＡの塩基配列と
区別可能な配列を利用してＤＮＡプローブ等を調製する
ことが可能である。このようなプローブを用いれば、例
えば組織中の細胞分裂の盛んな細胞塊等を探知すること
が可能である。
【００２８】現在では、既知のＤＮＡについてその一部
を欠失させ、置換し又は他の塩基を挿入することで該Ｄ
ＮＡの発現により発現される蛋白質をより低分子化（時
には可溶化することもある）し、該蛋白質が有する性質
を増強し又は消失させ、更には例えば一定の宿主中で発
現しやすいようにすることが一般的に行われている。本
発明においても、本発明のＤＮＡにこのような操作を行
うことには何等制限はない。一方、既知の蛋白質につい
ても、その一部を欠失させ、置換し又は他のアミノ酸残
基を挿入することで該蛋白質をより低分子化（時には可
溶化することもある）し、該蛋白質が有する性質を増強
しあるいは消失させ又は新たな機能を追加する操作が一
般的に行われている。前記したＤＮＡについての操作と
同様に、本発明の蛋白質についてこのような操作を行う
ことについては何等制限はない。
を欠失させ、置換し又は他の塩基を挿入することで該Ｄ
ＮＡの発現により発現される蛋白質をより低分子化（時
には可溶化することもある）し、該蛋白質が有する性質
を増強し又は消失させ、更には例えば一定の宿主中で発
現しやすいようにすることが一般的に行われている。本
発明においても、本発明のＤＮＡにこのような操作を行
うことには何等制限はない。一方、既知の蛋白質につい
ても、その一部を欠失させ、置換し又は他のアミノ酸残
基を挿入することで該蛋白質をより低分子化（時には可
溶化することもある）し、該蛋白質が有する性質を増強
しあるいは消失させ又は新たな機能を追加する操作が一
般的に行われている。前記したＤＮＡについての操作と
同様に、本発明の蛋白質についてこのような操作を行う
ことについては何等制限はない。
【００２９】
【実施例】以下に本発明を更に詳細に説明するために実
施例を記載するが、これら実施例は本発明を限定するも
のではない。
施例を記載するが、これら実施例は本発明を限定するも
のではない。
【００３０】実施例１ ヒトＳＴ２をコードするゲノム
ＤＮＡのクローニング 顆粒球由来のヒトゲノムＤＮＡライブラリーを、マウス
ＳＴ２ｃＤＮＡ（Ｔｏｍｉｎａｇａ，Ｓ． ｅｔ ａ
ｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２５８，３０１−３０
４（１９８９））（配列番号１に対応）をプローブにし
てスクリーニングした（Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ． ｅｔ
ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ（１９８２）記載の方法による）。約２Ｘ１０6個
のプラークから３個のポジティブクローンを選択し、組
換えファージを精製した。組換えファージの制限酵素切
断によるマッピング、サザンハイブリダイゼーション分
析、塩基配列の決定によって、３つのクローンは同一の
ゲノムＤＮＡ断片を含有することを確認した。
ＤＮＡのクローニング 顆粒球由来のヒトゲノムＤＮＡライブラリーを、マウス
ＳＴ２ｃＤＮＡ（Ｔｏｍｉｎａｇａ，Ｓ． ｅｔ ａ
ｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２５８，３０１−３０
４（１９８９））（配列番号１に対応）をプローブにし
てスクリーニングした（Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ． ｅｔ
ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ（１９８２）記載の方法による）。約２Ｘ１０6個
のプラークから３個のポジティブクローンを選択し、組
換えファージを精製した。組換えファージの制限酵素切
断によるマッピング、サザンハイブリダイゼーション分
析、塩基配列の決定によって、３つのクローンは同一の
ゲノムＤＮＡ断片を含有することを確認した。
【００３１】クローニングされたヒトＳＴ２をコードす
るゲノムＤＮＡ断片の塩基配列の一部分を、マウスＳＴ
２のｃＤＮＡの塩基配列（Ｔｏｍｉｎａｇａ，Ｓ． ｅ
ｔａｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２５８，３０１−
３０４（１９８９））と比較した。図１に示すように、
該ヒトＳＴ２をコードするゲノムＤＮＡの塩基配列の一
部分は、第７エクソンの全部と第８エクソンの一部を含
んでいた。図１において、□で囲った配列はエクソン部
分、アステリスクは終始コドンを表す。
るゲノムＤＮＡ断片の塩基配列の一部分を、マウスＳＴ
２のｃＤＮＡの塩基配列（Ｔｏｍｉｎａｇａ，Ｓ． ｅ
ｔａｌ．， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２５８，３０１−
３０４（１９８９））と比較した。図１に示すように、
該ヒトＳＴ２をコードするゲノムＤＮＡの塩基配列の一
部分は、第７エクソンの全部と第８エクソンの一部を含
んでいた。図１において、□で囲った配列はエクソン部
分、アステリスクは終始コドンを表す。
【００３２】実施例２ ヒトＳＴ２ｃＤＮＡを含むヒト
ｃＤＮＡライブラリーの選択 図１（配列番号２に対応）で示したヒトＳＴ２ゲノムＤ
ＮＡの塩基配列に基づいて、ヒトＳＴ２ｃＤＮＡを含む
ヒトｃＤＮＡライブラリーの選択に用いるＰＣＲプライ
マーを設計した。該ＰＣＲプライマーは図１中の矢印で
示される２種類の１本鎖ＤＮＡである。
ｃＤＮＡライブラリーの選択 図１（配列番号２に対応）で示したヒトＳＴ２ゲノムＤ
ＮＡの塩基配列に基づいて、ヒトＳＴ２ｃＤＮＡを含む
ヒトｃＤＮＡライブラリーの選択に用いるＰＣＲプライ
マーを設計した。該ＰＣＲプライマーは図１中の矢印で
示される２種類の１本鎖ＤＮＡである。
【００３３】図１から明らかなように、ライブラリー中
にヒトＳＴ２ｃＤＮＡが存在すれば、ＰＣＲ法による増
幅によって、３０５塩基のＤＮＡ断片が製造される。ま
た、ライブラリー中にヒトＳＴ２ゲノムＤＮＡが存在す
れば、ＰＣＲ法による増幅によって３９７ｂｐのＤＮＡ
断片が製造される。
にヒトＳＴ２ｃＤＮＡが存在すれば、ＰＣＲ法による増
幅によって、３０５塩基のＤＮＡ断片が製造される。ま
た、ライブラリー中にヒトＳＴ２ゲノムＤＮＡが存在す
れば、ＰＣＲ法による増幅によって３９７ｂｐのＤＮＡ
断片が製造される。
【００３４】該ＰＣＲプライマーによって、種々のヒト
細胞由来のｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲ法で増幅し、
その後ポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって、増
幅されたＤＮＡ断片の長さを分析した。反応はＴａｑポ
リメラーゼの存在下、９４°Ｃ１分、５０°Ｃ２分、７
２°Ｃ３分を３０サイクル繰り返した。エチジウムブロ
マイドで染色されたゲルの写真を図２に示す。レーンの
上にｃＤＮＡライブラリーを製造する際に用いたヒト細
胞のクローン名を、レーンの右横にＤＮＡ断片の大きさ
を示す。１７のｃＤＮＡライブラリーのうち、５つのラ
イブラリーにおいて、３０５塩基のＤＮＡ断片が増幅さ
れ、これらのライブラリー中にヒトＳＴ２ｃＤＮＡが存
在していることが判明した。なお、対照であるヒトゲノ
ムＤＮＡライブラリー（図２の最も右のレーン）におい
ては、３９７塩基のＤＮＡ断片が増幅され、ＰＣＲ反応
が正常に行われていることが確認された。
細胞由来のｃＤＮＡライブラリーをＰＣＲ法で増幅し、
その後ポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって、増
幅されたＤＮＡ断片の長さを分析した。反応はＴａｑポ
リメラーゼの存在下、９４°Ｃ１分、５０°Ｃ２分、７
２°Ｃ３分を３０サイクル繰り返した。エチジウムブロ
マイドで染色されたゲルの写真を図２に示す。レーンの
上にｃＤＮＡライブラリーを製造する際に用いたヒト細
胞のクローン名を、レーンの右横にＤＮＡ断片の大きさ
を示す。１７のｃＤＮＡライブラリーのうち、５つのラ
イブラリーにおいて、３０５塩基のＤＮＡ断片が増幅さ
れ、これらのライブラリー中にヒトＳＴ２ｃＤＮＡが存
在していることが判明した。なお、対照であるヒトゲノ
ムＤＮＡライブラリー（図２の最も右のレーン）におい
ては、３９７塩基のＤＮＡ断片が増幅され、ＰＣＲ反応
が正常に行われていることが確認された。
【００３５】上記５つのｃＤＮＡライブラリーのうち、
２Ｆ１と５Ｃ１０はコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ Ａ）ま
たはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）で活
性化されるヘルパーＴ細胞のクローンである（Ｙｏｋｏ
ｔａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８４，７３８８−７３９
２（１９８７）、Ｌｅｅ，Ｆ． ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８
２，４３６０−４３６４（１９８５）、Ｙｏｋｏｔａ，
Ｔ． ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８３，５８９４−５８９８
（１９８６））。
２Ｆ１と５Ｃ１０はコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ Ａ）ま
たはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）で活
性化されるヘルパーＴ細胞のクローンである（Ｙｏｋｏ
ｔａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８４，７３８８−７３９
２（１９８７）、Ｌｅｅ，Ｆ． ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８
２，４３６０−４３６４（１９８５）、Ｙｏｋｏｔａ，
Ｔ． ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８３，５８９４−５８９８
（１９８６））。
【００３６】実施例３ ヒトＳＴ２をコードするｃＤＮ
Ａのクローニング 実施例２の５Ｃ１０クローン由来のｃＤＮＡライブラリ
ーを、実施例２でＰＣＲ法による増幅で得られた３０５
塩基のＤＮＡ断片をプローブとしてスクリーニングした
（Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ． ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８２）記載
の方法による）。約７Ｘ１０5 個のコロニーから２つ
のポジティブクローンを得た。長いｃＤＮＡ断片を有す
るクローンからｃＤＮＡを単離し、ｐＵＣ１９にサブク
ローニングし、全塩基配列を決定したところ、該ｃＤＮ
Ａ断片は、ヒトＳＴ２の全オープンリーディングフレー
ム（ＯＲＦ）を含んでいた。決定された塩基配列を図３
に示す。図３中、配列の上段は決定された塩基配列（配
列番号３に対応）を、下段は塩基配列から推定されたア
ミノ酸配列（配列番号４に対応）を示す。また、シグナ
ルペプチドの推定切断部位を矢印で、Ｎ−結合型糖鎖の
推定結合部位を
Ａのクローニング 実施例２の５Ｃ１０クローン由来のｃＤＮＡライブラリ
ーを、実施例２でＰＣＲ法による増幅で得られた３０５
塩基のＤＮＡ断片をプローブとしてスクリーニングした
（Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ． ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８２）記載
の方法による）。約７Ｘ１０5 個のコロニーから２つ
のポジティブクローンを得た。長いｃＤＮＡ断片を有す
るクローンからｃＤＮＡを単離し、ｐＵＣ１９にサブク
ローニングし、全塩基配列を決定したところ、該ｃＤＮ
Ａ断片は、ヒトＳＴ２の全オープンリーディングフレー
ム（ＯＲＦ）を含んでいた。決定された塩基配列を図３
に示す。図３中、配列の上段は決定された塩基配列（配
列番号３に対応）を、下段は塩基配列から推定されたア
ミノ酸配列（配列番号４に対応）を示す。また、シグナ
ルペプチドの推定切断部位を矢印で、Ｎ−結合型糖鎖の
推定結合部位を
【化１】 で、イムノグロブリン様ドメインの形成に関与すると推
定されるシステインの位置を□で示す。なお、ヒトＳＴ
２のアミノ酸配列から、公知の方法（Ｖｏｎ Ｈｅｉｊ
ｎｅ，Ｇ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，
１４，４６８３−４６９０（１９８６））によってシグ
ナルペプチド領域を検索したところ、Ｎ末端から１７番
目のアミノ酸がシグナルペプチドを構成していることが
推定された。シグナルペプチドの切断部位は図３中上向
きの白抜き矢印で示す。
定されるシステインの位置を□で示す。なお、ヒトＳＴ
２のアミノ酸配列から、公知の方法（Ｖｏｎ Ｈｅｉｊ
ｎｅ，Ｇ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，
１４，４６８３−４６９０（１９８６））によってシグ
ナルペプチド領域を検索したところ、Ｎ末端から１７番
目のアミノ酸がシグナルペプチドを構成していることが
推定された。シグナルペプチドの切断部位は図３中上向
きの白抜き矢印で示す。
【００３７】本発明のＤＮＡは後に示されるヒトＳＴ２
のアミノ酸配列と他のタンパク質のアミノ酸配列とをＧ
ｅｎＢａｎｋＤＮＡデータベース及びＮＢＲＦ蛋白デー
タベースを用いて検索した結果、ヒトＳＴ２は、ヒトＩ
Ｌ１−Ｒ１（重複する２９９アミノ酸中２３．７％）、
ヒトＩＬ１−Ｒ２（重複する３１９アミノ酸中２２．９
％）、ワクシニアウイルスＢ１６Ｒ蛋白質（重複する２
９２アミノ酸中２４．３％）、ショウジョウバエＣｅｋ
２蛋白質（重複する１８７アミノ酸中２３．５％）、ニ
ワトリｋｌｇ蛋白質（重複する１４８アミノ酸中２５．
０％）とホモロジーを有していた。これらの蛋白質のア
ミノ酸配列を対比して図４に示す。図４中「Ｈｕ」はヒ
トを、「Ｍｕ」はマウスを、「Ｖａｃｃｉｎｉａ」は
ワクシニアウイルスＢ１６Ｒ蛋白質を示す。また「：」
は同一のアミノ酸を、「＊」は対比していないアミノ酸
を、「□」は６種類のアミノ酸で保存されているアミノ
酸を、「▽」または「☆」は６種類のアミノ酸で保存さ
れているイムノグロブリン様ドメインの形成に関与する
と推定されるシステインを、それぞれ示す。
のアミノ酸配列と他のタンパク質のアミノ酸配列とをＧ
ｅｎＢａｎｋＤＮＡデータベース及びＮＢＲＦ蛋白デー
タベースを用いて検索した結果、ヒトＳＴ２は、ヒトＩ
Ｌ１−Ｒ１（重複する２９９アミノ酸中２３．７％）、
ヒトＩＬ１−Ｒ２（重複する３１９アミノ酸中２２．９
％）、ワクシニアウイルスＢ１６Ｒ蛋白質（重複する２
９２アミノ酸中２４．３％）、ショウジョウバエＣｅｋ
２蛋白質（重複する１８７アミノ酸中２３．５％）、ニ
ワトリｋｌｇ蛋白質（重複する１４８アミノ酸中２５．
０％）とホモロジーを有していた。これらの蛋白質のア
ミノ酸配列を対比して図４に示す。図４中「Ｈｕ」はヒ
トを、「Ｍｕ」はマウスを、「Ｖａｃｃｉｎｉａ」は
ワクシニアウイルスＢ１６Ｒ蛋白質を示す。また「：」
は同一のアミノ酸を、「＊」は対比していないアミノ酸
を、「□」は６種類のアミノ酸で保存されているアミノ
酸を、「▽」または「☆」は６種類のアミノ酸で保存さ
れているイムノグロブリン様ドメインの形成に関与する
と推定されるシステインを、それぞれ示す。
【００３８】実施例４ 組換え培養細胞におけるヒトＳＴ２の発現 実施例３で得られた、図３に示す塩基配列を有するヒト
ＳＴ２ｃＤＮＡを、発現ベクターｐＥＦ−ＢＯＳ（Ｍｉ
ｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ． ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１８，５３２２（１９９
０））のＢｓｔＸＩ部位（ＥＦ−１αプロモーターの下
流に存在）に挿入した。ｃＤＮＡの挿入が正しい方向で
行われたかどうか制限酵素マッピングにより確認し、正
しく挿入されたプラスミドをＤＥＡＥ−デキストラン法
（クロロキン処理も行う）によってＣＯＳ７細胞に導入
した（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１６．３０
（１９８９）記載の方法による）。プラスミドを導入し
てから３０時間後細胞を洗浄し、35Ｓ−メチオニンを含
有する培地で発現する蛋白質を放射標識し、放射標識開
始１２時間後に細胞上清を回収した。上清中の蛋白質を
ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって分
離し、フルオログラフィーによって、ゲル中の蛋白質の
位置を確認した。図５にその結果を示す。図５中、１の
レーンはヒトＳＴ２ｃＤＮＡが挿入されていないｐＥＦ
−ＢＯＳで形質転換された細胞の培養上清（対照）を、
２のレーンはヒトＳＴ２ｃＤＮＡが挿入されているｐＥ
Ｆ−ＢＯＳで形質転換された細胞の培養上清を示す。矢
印で示される蛋白質のバンドは図３に示すヒトＳＴ２の
推定アミノ酸配列から計算される分子量を有し、レーン
２のみで現れていることから、ヒトＳＴ２に対応するバ
ンドであると判定できる。このことから、ヒトＳＴ２ｃ
ＤＮＡが挿入された発現ベクターｐＥＦ−ＢＯＳで形質
転換されたＣＯＳ７細胞は、大量のヒトＳＴ２を発現す
ることが確認された。
ＳＴ２ｃＤＮＡを、発現ベクターｐＥＦ−ＢＯＳ（Ｍｉ
ｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ． ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１８，５３２２（１９９
０））のＢｓｔＸＩ部位（ＥＦ−１αプロモーターの下
流に存在）に挿入した。ｃＤＮＡの挿入が正しい方向で
行われたかどうか制限酵素マッピングにより確認し、正
しく挿入されたプラスミドをＤＥＡＥ−デキストラン法
（クロロキン処理も行う）によってＣＯＳ７細胞に導入
した（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１６．３０
（１９８９）記載の方法による）。プラスミドを導入し
てから３０時間後細胞を洗浄し、35Ｓ−メチオニンを含
有する培地で発現する蛋白質を放射標識し、放射標識開
始１２時間後に細胞上清を回収した。上清中の蛋白質を
ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって分
離し、フルオログラフィーによって、ゲル中の蛋白質の
位置を確認した。図５にその結果を示す。図５中、１の
レーンはヒトＳＴ２ｃＤＮＡが挿入されていないｐＥＦ
−ＢＯＳで形質転換された細胞の培養上清（対照）を、
２のレーンはヒトＳＴ２ｃＤＮＡが挿入されているｐＥ
Ｆ−ＢＯＳで形質転換された細胞の培養上清を示す。矢
印で示される蛋白質のバンドは図３に示すヒトＳＴ２の
推定アミノ酸配列から計算される分子量を有し、レーン
２のみで現れていることから、ヒトＳＴ２に対応するバ
ンドであると判定できる。このことから、ヒトＳＴ２ｃ
ＤＮＡが挿入された発現ベクターｐＥＦ−ＢＯＳで形質
転換されたＣＯＳ７細胞は、大量のヒトＳＴ２を発現す
ることが確認された。
【００３９】
【発明の効果】本発明のＤＮＡは、細胞がＧ０ 期から
Ｇ１ 期に移行する際に特異的に発現されるものであ
る。従って、該ＤＮＡが発現して出現するＲＮＡに対す
るアンチセンスＲＮＡ等を使用し、該ＤＮＡの発現を特
異的に抑制することで細胞増殖に関する重要な知見を得
ることが可能となる。このような効果は、本発明の蛋白
質についても同様であり、例えば該蛋白質を認識する抗
体を調製し、これを使用することで細胞増殖に関する重
要な知見を得ることが可能である。これらのことは、癌
などの、従来有効な治療薬が知られていない疾病につい
て、その増殖を抑制し、強いてはそのような増殖性細胞
を選択的に攻撃するような薬剤を開発するために必要な
基礎的技術を提供することを意味するものである。
Ｇ１ 期に移行する際に特異的に発現されるものであ
る。従って、該ＤＮＡが発現して出現するＲＮＡに対す
るアンチセンスＲＮＡ等を使用し、該ＤＮＡの発現を特
異的に抑制することで細胞増殖に関する重要な知見を得
ることが可能となる。このような効果は、本発明の蛋白
質についても同様であり、例えば該蛋白質を認識する抗
体を調製し、これを使用することで細胞増殖に関する重
要な知見を得ることが可能である。これらのことは、癌
などの、従来有効な治療薬が知られていない疾病につい
て、その増殖を抑制し、強いてはそのような増殖性細胞
を選択的に攻撃するような薬剤を開発するために必要な
基礎的技術を提供することを意味するものである。
【００４０】また、これらＤＮＡや蛋白質に対する拡散
プローブや標識抗体を使用することで組織中に存在する
癌細胞等の増殖性細胞を探知することも可能となる。
プローブや標識抗体を使用することで組織中に存在する
癌細胞等の増殖性細胞を探知することも可能となる。
【００４０】
【図１】 ヒトＳＴ２をコードするゲノムＤＮＡの塩基
配列の一部と、ヒトＳＴ２ｃＤＮＡを含むｃＤＮＡライ
ブラリーを選択するために用いたＰＣＲプライマーを示
す図である。
配列の一部と、ヒトＳＴ２ｃＤＮＡを含むｃＤＮＡライ
ブラリーを選択するために用いたＰＣＲプライマーを示
す図である。
【図２】 種々のｃＤＮＡライブラリーに対し、ヒトＳ
Ｔ２をコードするゲノムＤＮＡのエクソン内に含まれる
プライマーを用いてＰＣＲ法による増幅を行って得たＤ
ＮＡ断片を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で分析
した結果を示す図である。
Ｔ２をコードするゲノムＤＮＡのエクソン内に含まれる
プライマーを用いてＰＣＲ法による増幅を行って得たＤ
ＮＡ断片を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で分析
した結果を示す図である。
【図３】 ヒトＳＴ２ｃＤＮＡの塩基配列及び該ＤＮＡ
がコードする推定アミノ酸配列を示す図である。
がコードする推定アミノ酸配列を示す図である。
【図４】 ヒトＳＴ２のアミノ酸配列とヒトＳＴ２に類
似する蛋白質のアミノ酸配列とを対比した図である。
似する蛋白質のアミノ酸配列とを対比した図である。
【図５】 ヒトＳＴ２のＣＯＳ７細胞での発現を示す図
である。
である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年７月１９日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正内容】
【図２】 種々のｃＤＮＡライブラリーに対し、ヒトＳ
Ｔ２をコードするゲノムＤＮＡのエクソン内に含まれる
プライマーを用いてＰＣＲ法による増幅を行って得たＤ
ＮＡ断片を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で分析
した結果を示す図である（電気泳動写真）。
Ｔ２をコードするゲノムＤＮＡのエクソン内に含まれる
プライマーを用いてＰＣＲ法による増幅を行って得たＤ
ＮＡ断片を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で分析
した結果を示す図である（電気泳動写真）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正内容】
【図５】 ヒトＳＴ２のＣＯＳ７細胞での発現を示す図
である（電気泳動写真）。
である（電気泳動写真）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (12)
- 【請求項１】 配列番号１の塩基配列を有するマウスＳ
Ｔ２のｃＤＮＡとハイブリダイズするヒトＳＴ２をコー
ドするＤＮＡ - 【請求項２】 ヒトｍＲＮＡを鋳型として合成されたｃ
ＤＮＡである請求項１記載のＤＮＡ。 - 【請求項３】 ヒトゲノム由来のＤＮＡである請求項１
記載のＤＮＡ。 - 【請求項４】 配列番号４のアミノ酸配列を有する蛋白
質をコードする請求項１記載のＤＮＡ。 - 【請求項５】 配列番号２の塩基配列を有する請求項１
記載のＤＮＡ。 - 【請求項６】 配列番号３の塩基配列を有する請求項１
記載のＤＮＡ。 - 【請求項７】 請求項１〜６のいずれかの項に記載のＤ
ＮＡの少なくとも一部分を有し、ヒトＳＴ２をコードす
るＤＮＡと選択的にハイブリダイズするＤＮＡ断片。 - 【請求項８】 請求項１〜６のいずれかの項に記載のＤ
ＮＡを含有するベクター。 - 【請求項９】 請求項８に記載のベクターを保持する形
質転換体。 - 【請求項１０】 動物細胞である請求項９記載の形質転
換体。 - 【請求項１１】 請求項１〜６のいずれかの項に記載の
ＤＮＡによりコードされるヒトＳＴ２。 - 【請求項１２】 請求項７記載の形質転換体を培養し
て、発現されるヒトＳＴ２を回収することを特徴とす
る、ヒトＳＴ２の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4353589A JP2732005B2 (ja) | 1992-12-14 | 1992-12-14 | ヒトｓｔ２をコードするｄｎａ、該ｄｎａの発現産物、該ｄｎａを発現させることによる発現産物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4353589A JP2732005B2 (ja) | 1992-12-14 | 1992-12-14 | ヒトｓｔ２をコードするｄｎａ、該ｄｎａの発現産物、該ｄｎａを発現させることによる発現産物の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06178687A true JPH06178687A (ja) | 1994-06-28 |
| JP2732005B2 JP2732005B2 (ja) | 1998-03-25 |
Family
ID=18431864
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4353589A Expired - Lifetime JP2732005B2 (ja) | 1992-12-14 | 1992-12-14 | ヒトｓｔ２をコードするｄｎａ、該ｄｎａの発現産物、該ｄｎａを発現させることによる発現産物の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2732005B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6323334B1 (en) | 1999-09-24 | 2001-11-27 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid molecules encoding a 103 gene product and uses therefor |
| US7432060B2 (en) | 2000-11-09 | 2008-10-07 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Methods for diagnosis of cardiovascular disease |
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| JPH03172182A (ja) * | 1989-11-30 | 1991-07-25 | Shinichi Tominaga | 細胞増殖期に発現するｄｎａまたはｒｎａの製造方法 |
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1992
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