JPH06207194A - ジュズダマ内胚乳から得られる中性脂質 - Google Patents

ジュズダマ内胚乳から得られる中性脂質

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JPH06207194A JP5263994A JP26399493A JPH06207194A JP H06207194 A JPH06207194 A JP H06207194A JP 5263994 A JP5263994 A JP 5263994A JP 26399493 A JP26399493 A JP 26399493A JP H06207194 A JPH06207194 A JP H06207194A
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 抗腫瘍のジュズダマ（Ｃｏｉｘ ｌａｃｒｙ
ｍａ−ｊｏｂｉ）内胚乳の中性脂質（ＮＬＥＪ）であっ
て、グリセリドおよびアルキルアシルアセチンを含んで
成るＮＬＥＪの脂肪分解性の脂肪酸残基がアルキル脂肪
酸およびアルケニル脂肪酸を含んで成る中性脂質をジュ
ズダマ内胚乳から抽出し精製する方法、およびこの中性
脂肪を含む製薬組成物を提供する。 【構成】 有機溶媒による抽出、吸収剤による吸収およ
び脱色から成り、且つ １）アルカリ化によるケン化 ２）アセトンによる脱乳化 ３）有機溶媒による抽出 を含む、ＮＬＥＪの抽出および精製法を得る。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗腫瘍効果を有する中
性脂質、その抽出、精製および製薬組成物に関する。更
に詳細には、本発明はジュズダマの内胚乳から得られる
中性脂質、本脂質の内胚乳からの抽出および精製方法お
よびジュズダマの内胚乳から得た中性脂質の注射および
経口投与用の抗腫瘍エマルジョンに関する。
【０００２】
【従来の技術】このジュズダマの内胚乳は、Ｃｏｉｘ
ｌａｃｒｙｍａ−ｊｏｂｉの乾燥内胚乳である。中国で
はこれを伝統的な薬および滋養物として数千年来使用し
てきた。１９６１年に、Ｔｙｕｎｏｓｉｎ Ｕｋｉｔａ
およびＡｋｉｏ Ｔａｎｉｍｕｒａ（Ｕｋｉｔａら、Ｃ
ｈｅｍ Ｐｈａｒｍ．Ｄｕｌｌ．９（１）：４３，１９
６１）は、抗腫瘍成分としてジュズダマの内胚乳からの
ｃｏｉｘｅｎｏｌｉｄｅの抽出およびその抗腫瘍作用試
験の結果を報告した。彼らはｃｏｉｘｅｎｏｌｉｄｅの
式についてもＣ３８Ｈ７０Ｏ４として報告したが、この
製剤調製については触れなかった。これが、マウスのエ
ールリッヒ腹水腫瘍の成長を阻害することが報告され
た。ｃｏｉｘｅｎｏｌｉｄｅは、下記の段階に従い抽出
した：内胚乳の粉末−アセトンにより３回抽出−抽出物
−石油エーテルに溶解し、濾過し、濃縮−褐色シロップ
−石油エーテルに溶解指、石油エーテルによりシリカゲ
ルカラムを通過−溶離液−０．２Ｎ ＫＯＨを加え、酸
性成分を分離−中性油−アルミナカラムおよびシリカカ
ラムを通過−ｃｏｉｘｅｎｏｌｉｄｅ。ｃｏｉｘｅｎｏ
ｌｉｄｅは純粋な化合物として得られ、強い抗腫瘍作用
を示した。しかしその臨床的応用についての報告はな
い。その抽出および精製は２種類のカラムクロマトグラ
フィー（アルミナおよびシリカ）で行われるので、ｃｏ
ｉｘｅｎｏｌｉｄｅの生産率は極めて低く、従って入手
には非常に費用がかかり、市販用製品は作られていな
い。
【０００３】１８世紀に、Ｓｉ Ｐｅｉ−Ｈａｉは、ジ
ュズダマの内胚乳から石油エーテルを使用して直接に未
加工の油を取り出し、静脈内用のエマルジョンを作り上
げた（Ｓｉ Ｐｅｉ−Ｈａｉ、ジュズダマの内胚乳の油
の抽出およびそのエマルジョンの調製、Ｚｈｅｊｉａｎ
ｇ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３（６）：１８−２
０、１９８６）。このジュズダマの内胚乳の油の抽出お
よび精製の段階は、下記の通りである：ジュズダマの内
胚乳の粉末−石油エーテルにより抽出（３回）−抽出物
−吸収、脱色および蒸発−ジュズダマの内胚乳の油状生
成物。この油は、相対的密度が０．９０３３から０．９
０５７（２０℃）、屈折率が１．４６７０から１．４７
０８（２０℃）、ヨウ素価が８３から９０、および酸価
が＜３６であった。この静脈内用のエマルジョンは、
（主成分として）前記の方法で抽出した油状生成物と２
種類の乳化剤であるスパンスおよびツイーンから成って
いた。その組成は、下記のとおりであった。 ジュズダマ内胚乳から得た油 １０ｇ スパンス−８０ １ｇ ツイーン−８０ １．５ｇ 注射用の水 適量を加え、総量を
１００ｍｌとする。
【０００４】この体内腫瘍用のエマルジョンは、製剤の
調製およびその体内分布を調査するためのみに使用され
た。この体内エマルジョンをヒトに臨床的に使用するに
は下記のような障害がある： １．この主な成分であるジュズダマの内胚乳から得た油
状生成物は、純粋なものではないため、中国薬局方の要
件、例えばその酸価はちょうど３６未満に統御されてい
る−に適合する程安全とは言えなかった。 ２．ツイーンおよびスパンスは細胞膜を透過することが
でき、これらは分解−活性および毒性を有する。好適で
あったとしても等浸透性剤（ｉｓｏｏｓｍｏｔｉｃｕ
ｍ）を用いて、分解発生を防止する。実際には、殆どの
市販の静脈内用エマルジョン製剤のうち英国、ドイツ、
米国、フランス、中国および日本製のものは、スパンス
およびツイーンのような乳化剤を含まない。 ３．上記の組成物は、等浸透性剤の本質的な成分を含ん
でおらず、従って妥当ではない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】発明の概要 本発明の目的は、ジュズダマ内胚乳から抗腫瘍性の中性
脂質（ＮＬＥＪ）を得るための抽出および精製方法を提
供することである。この方法は、単純な工程で、廉価な
ものと考えられるが、静脈内使用の要件に適合する標準
的な中性脂質である。本発明のもう一つの目的は、ＮＬ
ＥＪを用いて、Ｏ／Ｗエマルジョンを調製し、抗腫瘍薬
としての製薬組成物を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】簡単な説明 本発明に関するＮＬＥＪは、室温では明るい黄色の透明
液体である。ＮＬＥＪは、石油エーテル、エーテルおよ
びベンゾールに容易に溶解し、アセトンに溶解すること
ができ、メタノール、アルコールに僅かに溶解し、そし
て水に溶解することができない。油状生成物として試験
を行ったところ、ＮＬＥＪは下記の物理化学的定数を示
した：酸価＜０．２０、ヨウ素価９５．００から１０
７．００、ケン化価１８５．００から１９５．００、相
対的密度０．９１５から０．９１８（２０℃）、屈折率
１．４７０から１．４７５（２０℃）。ＮＬＥＪは、ト
リグリセリド（９１．４８±３．４３％）、ジグリセリ
ド（１．４７±０．６３％）、モノグリセリド（５．７
５±３．１９％）およびアキルアシルアセチン（１．０
±０．７８％）を含む。脂肪分解性（ｌｉｐｏｃｌａｓ
ｔｉｃ）脂肪酸残基は、ヘキサデカン酸、オクトデカン
酸、オクタデカン酸およびオクタデカジエン酸を含む。
【０００７】ＮＬＥＪの抽出および精製は、下記の通り
である： 有機溶媒による抽出：有機溶媒は、例えばアセトン、石
油エーテル、エーテル、アルコール、またはヘキサンで
ある。抽出方法は、例えばジュズダマの内胚乳の粉末を
通したパーコレーション、ろ過または滲出である。未加
工の油状生成物が、大量の異物、例えば遊離脂肪酸、色
素なとと共に抽出される。 吸収および脱色：一般的な吸収剤、例えば１％活性炭、
３％白色陶上、１０％アルミナなど。未加工の抽出物を
吸収させると、黄色の油状生成物が得られる。 アルカリ化によるケン化： 適量のアルカリ性溶液（例
えばＮａＯＨまたはＫＯＨ）を加えてケン化すると、エ
マルジョンが得られる。 アセトンによる脱乳化： 好量のアセトンを加えると、
エマルジョンが透明になる。 液−液抽出： 好量の第２の有機溶剤、例えば石油エー
テル、エーテルまたはヘキサンにより、抽出および沈降
を行い、主としてアセトン（酸性成分、水を含む）を含
む相を廃棄し、有機溶媒を蒸発させると、主として本発
明のＮＬＥＪから成る残渣が残る。 精製：アルカリ化、ケン化およびアセトンによる脱乳化
の間に、エマルジョンを熱水で洗浄する段階を加え、お
よび／または液−液抽出の後に、脱色および／または熱
水による洗浄の段階必要に応じて加える。その後、静脈
内使用の要件を満たす高純度のＮＬＥＪが得られる。
【０００８】本発明のエマルジョンは、主成分としてＮ
ＬＥＪを、乳化剤として大豆（または卵）のレシチン
を、そして十分な水を、製剤組成物の内容物として有す
る。これは、グリセロール、ソルビトールまたは数種類
の等浸透性剤（ｉｓｏｏｓｍｏｔｉｃｕｍ）も含む。こ
れは、他の通常の抗腫瘍薬も含むことができる。乳化方
法には、ホモジナイゼーションおよび分散という２つの
通常の段階を含む。製薬組成物内のＮＬＥＪの含量は、
広範囲に変化させることができる。これは、Ｏ／Ｗ型エ
マルジョンである。１００ｍｌのエマルジョンでは、Ｎ
ＬＥＪは５から２５ｇの間である。
【０００９】利用可能性、試験および投与 一般的利用可能性 本発明のＮＬＥＪおよびその製薬組成物は、高い抗腫瘍
活性を有する。特に後者は、肺癌、肝臓癌およびその他
の中期または末期の転移癌の治療薬に使用することがで
き得る。これは身体の免疫性を昂進し、多くの疾患から
身体を保護することができ、従って免疫不全性の疾患に
も用いることができる。ＮＬＥＪエマルジョンと少量の
化学療法剤の併用により、抗腫瘍活性を強化し、化学療
法剤の毒性を減少することができる。
【００１０】試験 ＮＬＥＪおよびその製薬組成物の、ヒト腫瘍に対する抗
腫瘍活性の試験について、例９および例１０で説明す
る。この製薬組成物の免疫性への影響、少量の化学療法
剤との併用による活性の昂進および化学療法剤によって
引き起こされる白血球の減少に対する保護効果について
は、各々例１１、例１２および例１３で説明し、この製
薬組成物の臨床効果については、例１４で説明する。
【００１１】投与 本発明の化合物は、治療上有効量、すなわちこれを必要
とする哺乳動物に投与する場合に腫瘍疾患の有効治療を
行うのに治療上十分な量、を投与した。本明細書におけ
る活性な化合物は、静脈内、動脈内または経口投与する
ことができる。
【００１２】例 下記の例は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施
することができるようにするためのものである。これら
例は、本発明の範囲の制限と考えるべきではなく、単に
本発明の例示および典型例と考えるべきである。
【００１３】例１ ＮＬＥＪの抽出および改良 ジュズダマの乾燥内胚乳粉末１００ｋｇをアセトンで抽
出し、アセトンを蒸発したところ５ｋｇの抽出物を得、
吸着および脱色し、５％熱アルカリ溶液として溶解した
ＮａＯＨ１５２ｇ（または相当する量のＫＯＨ）を添加
してアルカリケン化し、抽出物の酸価によって添加する
アルカリの重量を加減し、高温のアルカリを用いること
によりケン化をより迅速かつ完全にし、エマルジョンを
沈降させた後、分離し、エマルジョンが中性（ｐＨ６〜
７）になるまでエマルジョンを２〜３回洗浄し、１：１
（ｖ／ｖ）のアセトンを添加して脱乳化し、沈降後、ア
セトン相を十分量の石油エーテルで抽出し、沈降を行
い、アセトンを除去したところ、ＮＬＥＪが石油エーテ
ル中に残留し、吸収剤を加えて色素および発熱物質を除
去し、濾過し、石油エーテルを蒸発させたところ、中性
の油状生成物が得られ、その後、熱蒸留水で真空下に
０．５時間煮沸し、中性のオイルを沈降し、１００℃に
加熱して水を蒸発させ、吸収剤を再添加してろ過により
除去したところ、本発明の明るい黄色のＮＬＥＪ２ｋｇ
を得、これを包装し、１６０℃で２時間加熱して滅菌し
た後、静脈内および経口投与用エマルジョンを調製し
た。前記の吸着剤は活性炭、白色陶土アルミナなどであ
る。
【００１４】例２〜８ ＮＬＥＪエマルジョンの組成物 経口投与用、静脈内および動脈内投与用の組成物を、例
２〜８に詳細に例示する。
【００１５】例２ ＮＬＥＪ １０．０ｇ 注射用大豆レシチン １．５ｇ 注射用グリセロール ２．５ｇ 注射用の水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは経口、静脈内または動脈内投与用の
エマルジョンであった。
【００１６】例３ ＮＬＥＪ １０．０ｇ 注射用大豆レシチン １．２ｇ 注射用グリセロール ２．５ｇ 注射用の水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは静脈内または動脈内投与用のエマル
ジョンであった。
【００１７】例４ ＮＬＥＪ １５．０ｇ プルロニックＦ８８ ２．０ｇ グリセロール ２．５ｇ 蒸留水 適量を加えて総量を
１００ｍｌとする。 このエマルジョンは経口投与用のエマルジョンであっ
た。
【００１８】例５ ＮＬＥＪ １５．０ｇ 注射用大豆レシチン ２．０ｇ 注射用グリセロール ２．５ｇ 注射用の水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは静脈内または動脈内投与用のエマル
ジョンであった。
【００１９】例６ ＮＬＥＪ ５．０ｇ リン脂質 ０．７５ｇ グリセロール １．２５ｇ 蒸留水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは経口投与用のエマルジョンであっ
た。
【００２０】例７ ＮＬＥＪ ２．５ｇ リン脂質 ２．５ｇ グリセロール ３．０ｇ 蒸留水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは経口投与用のエマルジョンであっ
た。
【００２１】例８ ＮＬＥＪ １０００ｇ 注射用大豆レシチン １２０ｇ 注射用グリセロール ２５０ｇ 注射用の水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは静脈内または動脈内投与用のエマル
ジョンであった。
【００２２】例９ イン・ビトロでのＮＬＥＪの抗腫瘍活性 （１）白血病Ｐ３８８およびＬ１２１０培養細胞の増殖
に対するＮＬＥＪの阻害作用 方法 異なる濃度のＮＬＥＪ２０μｌを白血病細胞ラインを培
養した９６ウェルのマイクロプレートに２個ずつ添加
し、対照のウェルにはｐｂｓ２０μｌを添加し、このと
き各ウェルの細胞数は９×１０５であり、ＮＬＥＪの最
高濃度は１００μｌとし、細胞を５％ＣＯ２下にて３７
℃で４８時間培養し、細胞をコールターカウンターで計
数し、阻害率および腫瘍細胞のコロニー増殖を５０％阻
害する薬物濃度（ＩＣ５０）を計算した。 阻害率＝（（対照群の細胞数−処理群の細胞数）／（対
照群の細胞数−試験開始時の細胞数））×１００％ 結果 ＮＬＥＪがイン・ビトロにおいて白血病Ｐ３８８および
Ｌ１２１０細胞に対し抗腫瘍活性を有することが明らか
になった。５０μｌを上回る投与量では殆ど全ての細胞
の増殖を阻害した。Ｐ３８８およびＬ１２１０細胞に対
するＮＬＥＪのＩＣ５０は、それぞれ１５．２μｌ／ｍ
ｌおよび２８．８μｌ／ｍｌであった。これらの相関係
数は、それぞれ０．９１３６および０．９４５４であっ
た（図１および表１）。
【００２３】
【表１】
【００２４】（２）結腸腫瘍Ｍ７６０９細胞コロニーの
形成阻害試験 方法 ０．１５％トリプシンで消化して調製した対数増殖期の
結腸癌（Ｍ７６０９）細胞の懸濁液（２０００／ｍｌ）
０．１ｍｌを、直径４ｃｍの円形の細胞容器に２０％ウ
シ血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地３．８ｍｌに添
加して培養し、５％ＣＯ２下にて３７℃で２４時間培養
後に、異なる濃度のＮＬＥＪ ０．１ｍｌを添加し、細
胞を更に９日間培養し、０．１％クリスタルバイオレッ
ト／アルコールで染色した後コロニーを計数し、コロニ
ー形成阻害率およびＩＣ５０を計算した。 結果 ＮＬＥＪは結腸腫瘍Ｍ７６０９の細胞コロニーの形成を
顕著に阻害した。５０μｌ／ｍｌの濃度は全ての形成を
阻害した。結腸腫瘍Ｍ７６０９の細胞コロニーの形成に
対するＮＬＥＪのＩＣ５０は１１．８８μｌ／ｍｌであ
った。この相関係数は０．９４４５であった（図２およ
び表１）。
【００２５】例１０ イン・ビボでの転移性腫瘍に対するＮＬＥＪエマルジョ
ンの治療効果 （１）イン・ビボでの、ヒト肝細胞癌（ＱＧＹ）の生長
に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療効果 方法 活発に増殖中の肝細胞癌（ＱＧＹ）を生理食塩水（１：
４）中でホモジナイズして懸濁液を調製し、各ヌードマ
ウスの腋下に懸濁液０．２ｍｌを皮下接種し、接種の翌
日にヌードマウスを無作為に群分けし、ＮＬＥＪエマル
ジョンの用量を２５ｍｌ／ｋｇ、１２．５ｍｌ／ｋｇお
よび６．２５ｍｌ／ｋｇとし、このエマルジョンをヌー
ドマウスの尾に１０日間毎日静脈内投与し、１群のマウ
スはシクロホスファミド（ＣＴＸ）３０ｍｇ／ｋｇを７
日間毎日腹腔内投与し、対照群のヌードマウスにはＮＬ
ＥＪのみを含有しない対応するエマルジョン（ブランク
エマルジョン）２５ｍｌ／ｋｇを１０日間毎日、ヌード
マウスの尾に静脈内投与した。全てのヌードマウスの腫
瘍組織の検体を接種３０日後に採取し、秤量した。 結果 ＮＬＥＪの、２５ｍｌ／ｋｇ、１２．５ｍｌ／ｋｇおよ
び６．２５ｍｌ／ｋｇの全用量で、ヒト肝細胞癌（ＱＧ
Ｙ）に対し良好な治療効果、および良好な用量活性相関
が認められ、最高用量（２５ｍｌ／ｋｇ）はＣＴＸ投与
とほぼ同程度の高い阻害率を示した（表２）。
【００２６】
【表２】
【００２７】（２）イン・ビボでの、ヒト小細胞肺癌
（ＳＰＣ）の増殖に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療
効果 方法 活発に生長しているＳＰＣ腫瘍組織を２ｍｍの小片に切
断し、各ヌードマウスの腋下に１片ずつ接種し、接種の
翌日にヌードマウスを無作為に群分けして投与し、ＮＬ
ＥＪの用量は２５ｍｌ／ｋｇ ｉｖ ×１０（ｑｄ）と
し、１群のマウスにはダカルバジン（ＤＴＩＣ）を４０
ｍｇ／ｋｇ ｉｖ ×１０（ｑｄ）投与し、対照群のヌ
ードマウスにはブランクエマルジョンを２５ｍｌ／ｋｇ
ｉｖ×１０（ｑｄ）投与し、全てのヌードマウスの腫
瘍組織の検体を接種３０日後に採取し、秤量した。 結果 ２５ｍｌ／ｋｇの用量のＮＬＥＪは、ヒト小細胞肺癌に
対し良好な治療効果を示し、阻害率は６２．３５％であ
った（表３）。
【００２８】
【表３】
【００２９】（３）イン・ビボでの、肺における黒色腫
の転移に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療効果 方法 対数増殖期にあって生長している黒色腫Ｂ１６組織を
０．１５％トリプシンで消化し、その組織からＲＰＭＩ
１６４０培地に２．５×１０５細胞／ｍｌとなるように
懸濁したもの０．２ｍｌをそれぞれのＣ５７ＢＬ／６マ
ウスの尾へ静脈内注射し、接種３日後にマウスを無作為
に群分けし、異なる用量を投与し、接種２１日後にマウ
スを殺し、マウスの肺に転移した黒色腫のコロニー数を
計数し、阻害率を計算して、肺における黒色腫の転移に
対するＮＬＥＪエマルジョンの異なる投与による異なる
効果を比較し、シクロホスファミド１００ｍｇ／ｋｇ
（ＣＴＸ）をＮＬＥＪエマルジョンと比較するために同
じ方法で投与した。 結果 黒色腫の転移に対する、異なる投与による異なる効果 （ｉ）ＮＬＥＪエマルジョンの用量（６．２５ｍｌ／ｋ
ｇ、１２．５ｍｌ／ｋｇ、および２５ｍｌ／ｋｇ）およ
び投与（３日毎、４回、尾静脈内投与）の全ての組み合
わせから、黒色腫Ｂ１６の転移に対する明らかな阻害効
果が示された（表４、図３）。
【００３０】
【表４】
【００３１】（ｉｉ）ＮＬＥＪエマルジョンの用量
（６．２５ｍｌ／ｋｇ、１２．５ｍｌ／ｋｇ、および２
５ｍｌ／ｋｇ）および投与（毎日、７回、尾静脈内投
与）の全ての組み合わせからも、黒色腫Ｂ１６の転移に
対する明らかな阻害効果が示された（表５、図４）。
【００３２】
【表５】
【００３３】（ｉｉｉ）更に、ＮＬＥＪエマルジョンの
用量（６．２５ｍｌ／ｋｇ、１２．５ｍｌ／ｋｇおよび
２５ｍｌ／ｋｇ）および投与（毎日、７回、腹腔内投
与）の全ての組み合わせからも、黒色腫Ｂ１６の転移に
対する明らかな阻害効果が示された（表６、図５）。
【００３４】
【表６】
【００３５】例１１ ＮＬＥＪエマルジョンからのマウス免疫性の昂進 （１）イン・ビトロでの、ＮＬＥＪエマルジョンからの
マウス脾臓リンパ細胞の増殖の誘導 方法 脾臓細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスから無菌的に得、細
胞密度をＲＰＭＩ−１６４０培養液で１×１０７／ｍｌ
に調整し、細胞の入っている各ホールに培地１００μ
ｌ、薬物１００μｌおよびＣｏｎＡ５０μｌを添加し、
但しここで言及した薬物とはＮＬＥＪエマルジョン（４
濃度）、レンチナニン（４濃度）、ブランクエマルジョ
ンおよび水であり、各処理を４回行い、細胞を５％ＣＯ
２下にて、３７℃で４８時間培養した後、３Ｈ−Ｔｄｒ
をウェルに添加し（０．５μｃｉ／ウェル）、更に２０
時間培養した後、細胞を集め、ＣＰＭ値を液体シンチレ
ーションカウンターで測定した。 結果 ＮＬＥＪおよびレンチナニンと培養した細胞では、とち
らも高いＣＰＭ値が認められ、すなわちＮＬＥＪおよび
レンチナニンは双方とも、イン・ビトロでマウス脾臓リ
ンパ細胞の増殖を誘導したことが表７からわかる。用量
とＣＰＭ値の間に相関関係も認められた。
【００３６】
【表７】
【００３７】（２）イン・ビトロでの、マウスのナチュ
ラルキラー細胞の活性に対するＮＬＥＪエマルジョンの
影響 方法 脾臓細胞を効果細胞としてＣ５７ＢＬ／６マウスから無
菌的に得、細胞密度を１×１０６／ｍｌに調整し、目的
細胞であるＹＡＣ−１細胞の密度を１×１０４に調整
し、２つの細胞懸濁液を１：１（ｖ／ｖ）に混合し、す
なわち効果細胞と目的細胞の比を１：１００とし、３Ｈ
−Ｔｄｒをウェルに添加し（０．５μｃｉ／ウェル）、
細胞を５％ＣＯ２下にて３７℃で４８時間培養した後、
細胞を集め、ＣＰＭ値を液体シンチレーションカウンタ
ーで測定し、特異的な阻害率（Ｐｉ）をナチュラルキラ
ー細胞の活性として示し、ＮＬＥＪエマルジョンのＰｉ
をレンチナニンのＰｉと比較し、ブランクエマルジョン
および培地を対照とした。 Ｐｉ＝（１−（処理群のＣＰＭ値／対照群のＣＰＭ
値））×１００％ 結果 これらの結果は、ＮＬＥＪがレンチナニンと同様に、イ
ン・ビトロでマウスのナチュラルキラー細胞の活性を刺
激することを示した（表８）。また、用量とＣＰＭ値の
間には負の相関関係が認められる。
【００３８】
【表８】
【００３９】（３） イン・ビボでの、腫瘍を有するマ
ウスの脾臓リンパ細胞の増殖に対するＮＬＥＪエマルジ
ョンの効果 １×１０４の白血病細胞Ｌ１２１０を各マウスの腋下に
皮下接種し、接種の翌日にマウスを無作為に６群（１０
マウス／群）に分け、この６つの処理群はＮＬＥＪ
６．２５、１２．５、２５ｍｌ／ｋｇ、レンチナニン
１０ｍｌ／ｋｇ、ブランクエマルジョンおよび生理食塩
水であり、７回毎日投与した後にマウスを殺し、マウス
から無菌的にに得た脾臓細胞懸濁液を１×１０７／ｍｌ
の細胞密度に調整し、細胞懸濁液１００μｌおよび培養
液１００μｌを各ウェルに添加し、これを３つのウェル
で繰り返し、５％ＣＯ２下にて３７℃で４８時間培養し
た後、３Ｈ−Ｔｄｒ ０．５μｃｉ／ウェルを添加し、
更に２０時間培養し、集めた細胞のＣＰＭ値を測定し対
照細胞と比較した。 結果 表９から、ＮＬＥＪエマルジョンが白血病を有するマウ
スの脾臓リンパ細胞の増殖を促進することがわかる。さ
らに、マウス免疫性に対するＮＬＥＪエマルジョンの増
強は用量が増すほど増大した。レンチナニンの投与にお
いてマウス免疫性に対する昴進を認めた。
【００４０】
【表９】
【００４１】（４）イン・ビボでの白血病マウスのＮＫ
細胞の活性に対するＮＬＥＪエマルジョンの効果 方法 １×１０４個の白血病細胞Ｌ１２１０を各マウスの腋下
にに皮下接種し、接種の翌日にマウスを無作為に６群
（１０マウス／群）に分け、この６つの投与群はＮＬＥ
Ｊ ６．２５、１２．５、２５ｍｌ／ｋｇ、レンチナニ
ン １０ｍｌ／ｋｇ、ブランクエマルジョンおよび生理
食塩水であり、７回毎日投与した後にマウスを殺し、マ
ウスから無菌的に得た脾臓細胞懸濁液を１×１０６／ｍ
ｌの細胞密度に調整し、この細胞懸濁液（効果細胞）１
００μｌおよびＹＡＣ細胞（標的細胞、１×１０４の細
胞密度）１００μｌ、および３Ｈ−Ｔｄｒ ０．５μｃ
ｉ／ウェルを各ウェルに添加し、これを３つのウェルで
繰り返し、５％ＣＯ２下にて３７℃で２４時間培養した
後、集めた細胞のＣＰＭ値を測定し、特異的阻害率（Ｐ
ｉ）をナチュラルキラー細胞の活性として示した。 Ｐｉ＝（１−（投与群のＣＰＭ値／対照群のＣＰＭ
値））×１００％ 結果 表１０は、白血病細胞を担持するマウスのナチュラルキ
ラー細胞の活性に対するＮＬＥＪエマルジョンおよびレ
ンチナニンの刺激を示し、マウス免疫性の昂進を示唆し
ている。
【００４２】
【表１０】
【００４３】（５）イン・ビボでの、白血病マウスのイ
ンターロイキン−２の誘導に対するＮＬＥＪエマルジョ
ンの影響 方法 １×１０−Ｅ４の白血病細胞Ｌ１２１０を各マウスの腋
の下に皮下接種し、接種の翌日にマウスを無作為に６群
（１０マウス／群）に分け、この６つの投与群はＮＬＥ
Ｊ ６．２５、１２．５、２５ｍｌ／ｋｇ、レンチナニ
ン １０ｍｌ／ｋｇ、ブランクエマルジョン、および生
理食塩水であり、７回毎日投与した後にマウスを殺し、
マウスから無菌的にに得た脾臓細胞懸濁液を１×１０７
／ｍｌの細胞密度に調整し、ＣｏｎＡ ５μｇ／ｍｌを
念有する細胞懸濁液２ｍｌとし、これを３つのウェルで
繰り返し、５％ＣＯ２下にて３７℃で２４時間培養した
後、上澄液を採取し、インターロイキン−２（ＩＬ−
２）の活性を、インターロイキン−２依存性細胞クロー
ンＣＴＬＬを用いて、３Ｈ−Ｔｄｒの取り込みを測定す
る方法により測定した。 結果 表１１は、ＮＬＥＪが全投与群で腫瘍を有するマウスの
インターロイキン−２の誘導を刺激したことを示してい
る。
【００４４】
【表１１】
【００４５】（６）イン・ビボでの、マウス食細胞の食
作用活性に対するＮＬＥＪエマルジョンの効果 方法 スイスマウスを無作為に２群に分け、１群にはＮＬＥＪ
エマルジョンを腹腔内に７回毎日投与し、もう１群には
ブランクエマルジョンを同じ方法で投与し、最終投与後
に加水分解したラクトアルブミン０．５ｍｌを腹腔内投
与し、翌日にニワトリの赤血球懸濁液（２％）１ｍｌを
同じ方法で投与し、３０分後にこのスイスマウスを頚椎
脱臼によって殺し、スイスマウスを仰向けに固定し、開
腹し、腹腔を生理食塩水２ｍｌで１分間洗浄し、水１ｍ
ｌを採取してガラス表面上に滴下し、湿度を保ちながら
３７℃で３０分間インキュベートした後、接着していな
い細胞を洗い落とし、乾燥後にアセトン：メタノール
１：１（ｖ／ｖ）で細胞をガラスに固定し、細胞を４％
ギムザーリン酸緩衝液で３分間染色し、蒸留水で洗浄し
て乾燥し、顕微鏡下で食細胞を計数し（１００個以
上）、下記 食作用率＝（赤血球を貧食している食細胞数／全食細胞
数）×１００％ 食作用指標＝（貧食されている赤血球数／食細胞数）×
１００％ により、食作用率（ＰＰ）および食作用指標（ＰＩ）を
計算した。 結果 表１２から、ＮＬＥＪがマウス食細胞の食作用活性を促
進したことがわかる。
【００４６】
【表１２】
【００４７】例１２ 低用量化学療法と併用した場合のＮＬＥＪエマルジョン
の抗腫瘍活性 （１）イン・ビボでの、Ｗａｌａｅｒ癌肉腫（固形）Ｗ
２５６上の抗腫瘍の治療効果 方法 活発に増殖している腹水Ｗａｌａｅｒ癌肉腫（固形）Ｗ
２５６組織を消化して細胞懸濁液とし、この細胞懸濁液
を１〜２×１０７／ｍｌの細胞密度に調整し、この懸濁
液０．２ｍｌを各ラットの腋の下の皮下に接種し、接種
の翌日にラットを無作為に群分けして投与し、ＮＬＥＪ
エマルジョンの用量は、２０ｍｌ／ｋｇ、１０ｍｌ／ｋ
ｇ、５ｍｌ／ｋｇ ｉｖ×１０（ｑｄ）、シクロホスフ
ァミドの用量は３０ｍｇ／ｋｇ ｉｖ×７（ｑｄ）、１
０ｍｇ／ｋｇ ｉｖ×２（３日目および５日目）とし、
全投与群の腫瘍組織を採取して秤量し、接種後１４日目
の腫瘍阻害率を計算した。 結果 ＮＬＥＪエマルジョンの、腹水Ｗａｌａｅｒ癌肉腫（固
体）Ｗ２５６に対する抗腫瘍の治療効果は、少量のシク
ロホスファミドを用いた化学療法によって昂進された
（表１３）。
【００４８】
【表１３】
【００４９】（２）肉腫（Ｓ−１８０）に対する抗腫瘍
の治療効果 方法 活発に増殖する肉腫（Ｓ−１８０）組織を、生理食塩水
１：３（ｗ／ｖ）により細胞懸濁液に調整し、マウスを
接種および投与した翌日、無作為に群分けした。ＮＬＥ
Ｊエマルジョンの用量は、２５ｍｌ／ｋｇ ｉｖ×７
（ｑｄ）、シクロホスファミドの用量は、３０ｍｇ／ｋ
ｇ ｉｐ×２（２日目および４日目）、ｍｉｔｏｘａｎ
ｔｒｏｎｅ（ＤＨＡＤ）の用量は、２ｍｇ／ｋｇ ｉｐ
×２（２日目および４日目）、マイトマイシンの用量
は、１．５ｍｇ／ｋｇ ｉｐ ×２（２日目および４日
目）であり、全投与群の腫瘍組織を、接種後１４日目に
採取し、秤量し、腫瘍阻害率を計算した。 結果 結果はＮＬＥＪエマルジョンの肉腫に対する抗腫瘍の治
療効果が、少量のシクロホスファミド、ＤＨＡＤおよび
マイトマイシンにより促進されることを示した（表１
４）。
【００５０】
【表１４】
【００５１】例１３ 化学療法により起こった白血球の減少に関するＮＬＥＪ
エマルジョンによる保護 ８０匹のスイスマウスを無作為に８群に分割し、シクロ
ホスファミド４５ｍｇ／ｋｇ ｉｐ×３（２、６、およ
び１０日目）、ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎｅ（ＨＲＴ
Ｎ）１ｍｇ／ｋｇ ｉｐ×３（２、６、および１０日
目）を投与し、各薬剤の２群に、ＮＬＥＪエマルジョン
を用量２．４ｍｌ／ｋｇおよび６．２５ｍｌ／ｋｇ ｉ
ｖ×７（毎日）、同じ回数で投与し、各投与の最初およ
び第４日目に各マウスの眼の角から血液を検体として採
取し、その血液中の白血球を計数した。 結果 表１５および１６は、ＮＬＥＪエマルジョンがシクロホ
スファミド化学療法またはｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎｅ
化学療法の引き起こす白血球の減少からマウスを保護す
ることができることを示している。
【００５２】
【表１５】
【００５３】
【表１６】
【００５４】例１４ ＮＬＥＪエマルジョンの臨床的治療効果 方法 ＮｌＥＪエマルジョンを、様々なヒトの癌治療におい
て、静脈または動脈に投与した。治療の詳細な方法は省
略する。 結果
【００５５】
【表１７】
【００５６】
【表１８】
【００５７】
【表１９】
【００５８】
【表２０】
【００５９】
【表２１】
【００６０】
【表２２】
【図面の簡単な説明】
【図１】 ＮＬＥＪの、白血病Ｐ３８８，Ｌ１２１０
の増殖への効果。
【図２】 結腸腫瘍Ｍ７６０９の細胞コロニーの形成
に関するＮＬＥＪの効果。
【図３】 イン・ビボでの肺における黒色腫（Ｂ１
６）の転移に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療効果
（３日毎）。
【図４】 イン・ビボでの肺における黒色腫（Ｂ１
６）の転移に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療効果
（ｉｖ、毎日）。
【図５】 イン・ビボでの肺における黒色腫（Ｂ１
６）の転移に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療効果
（ｉｐ、毎日）。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年１１月２２日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正内容】
【書類名】 明細書
【発明の名称】 ジュズダマ内胚乳から得られる中性脂
質
【特許請求の範囲】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗腫瘍効果を有する中
性脂質、その抽出、精製および製薬組成物に関する。更
に詳細には、本発明はジュズダマの内胚乳から得られる
中性脂質、本脂質の内胚乳からの抽出および精製方法お
よびジュズダマの内胚乳から得た中性脂質の注射および
経口投与用の抗腫瘍エマルジョンに関する。
【０００２】
【従来の技術】このジュズダマの内胚乳は、Ｃｏｉｘ
ｌａｃｒｙｍａ−ｊｏｂｉの乾燥内胚乳である。中国で
はこれを伝統的な薬および滋養物として数千年来使用し
てきた。１９６１年に、Ｔｙｕｎｏｓｉｎ Ｕｋｉｔａ
およびＡｋｉｏ Ｔａｎｉｍｕｒａ（Ｕｋｉｔａら、Ｃ
ｈｅｍ Ｐｈａｒｍ．Ｄｕｌ１．９（１）：４３，１９
６１）は、抗腫瘍成分としてジュズダマの内胚乳からの
ｃｏｉｘｅｎｏｌｉｄｅの抽出およびその抗腫瘍作用試
験の結果を報告した。彼らはｃｏｉｘｅｎｏｌｉｄｅの
式についてもＣ３８Ｈ７０Ｏ４として報告したが、この
製剤調製については触れなかった。これが、マウスのエ
ールリッヒ腹水腫瘍の成長を阻害することが報告され
た。ｃｏｉｘｅｎｏｌｉｄｅは、下記の段階に従い抽出
した：内胚乳の粉末−アセトンにより３回抽出−抽出物
−石油エーテルに溶解し、濾過し、濃縮−褐色シロップ
−石油エーテルに溶解指、石油エーテルによりシリカゲ
ルカラムを通過−溶離液−０．２Ｎ ＫＯＨを加え、酸
性成分を分離−中性油−アルミナカラムおよびシリカカ
ラムを通過−ｃｏｉｘｅｎｏｌｉｄｅ。ｃｏｉｘｅｎｏ
ｌｉｄｅは純粋な化合物として得られ、強い抗腫瘍作用
を示した。しかしその臨床的応用についての報告はな
い。その抽出および精製は２種類のカラムクロマトグラ
フィー（アルミナおよびシリカ）で行われるので、ｃｏ
ｉｘｅｎｏｌｉｄｅの生産率は極めて低く、従って入手
には非常に費用がかかり、市販用製品は作られていな
い。
【０００３】１８世紀に、Ｓｉ Ｐｅｉ−Ｈａｉは、ジ
ュズダマの内胚乳から石油エーテルを使用して直接に未
加工の油を取り出し、静脈内用のエマルジョンを作り上
げた（Ｓｉ Ｐｅｉ−Ｈａｉ、ジュズダマの内胚乳の油
の抽出およびそのエマルジョンの調製、Ｚｈｅｊｉａｎ
ｇ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３（６）：１８−２
０、１９８６）。このジュズダマの内胚乳の油の抽出お
よび精製の段階は、下記の通りである：ジュズダマの内
胚乳の粉末−石油エーテルにより抽出（３回）−抽出物
−吸収、脱色および蒸発−ジュズダマの内胚乳の油状生
成物。この油は、相対的密度が０．９０３３から０．９
０５７（２０℃）、屈折率が１．４６７０から１．４７
０８（２０℃）、ヨウ素価が８３から９０、および酸価
が＜３６であった。この静脈内用のエマルジョンは、
（主成分として）前記の方法で抽出した油状生成物と２
種類の乳化剤であるスパンスおよびツイーンから成って
いた。その組成は、下記のとおりであった。 ジュズダマ内胚乳から得た油 １０ｇ スパンス−８０ １ｇ ツイーン−８０ １．５ｇ 注射用の水 適量を加え、総量を
１００ｍｌとする。
【０００４】この体内腫瘍用のエマルジョンは、製剤の
調製およびその体内分布を調査するためのみに使用され
た。この体内エマルジョンをヒトに臨床的に使用するに
は下記のような障害がある： １．この主な成分であるジュズダマの内胚乳から得た油
状生成物は、純粋なものではないため、中国薬局方の要
件、例えばその酸価はちょうど３６未満に統御されてい
る−に適合する程安全とは言えなかった。 ２．ツイーンおよびスパンスは細胞膜を透過することが
でき、これらは分解−活性および毒性を有する。好適で
あったとしても等浸透性剤（ｉｓｏｏｓｍｏｔｉｃｕ
ｍ）を用いて、分解発生を防止する。実際には、殆どの
市販の静脈内用エマルジョン製剤のうち英国、ドイツ、
米国、フランス、中国および日本製のものは、スパンス
およびツイーンのような乳化剤を含まない。 ３．上記の組成物は、等浸透性剤の本質的な成分を含ん
でおらず、従って妥当ではない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】発明の概要 本発明の目的は、ジュズダマ内胚乳から抗腫瘍性の中性
脂質（ＮＬＥＪ）を得るための抽出および精製方法を提
供することである。この方法は、単純な工程で、廉価な
ものと考えられるが、静脈内使用の要件に適合する標準
的な中性脂質である。本発明のもう一つの目的は、ＮＬ
ＥＪを用いて、Ｏ／Ｗエマルジョンを調製し、抗腫瘍薬
としての製薬組成物を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】簡単な説明 本発明に関するＮＬＥＪは、室温では明るい黄色の透明
液体である。ＮＬＥＪは、石油エーテル、エーテルおよ
びベンゾールに容易に溶解し、アセトンに溶解すること
ができ、メタノール、アルコールに僅かに溶解し、そし
て水に溶解することができない。油状生成物として試験
を行ったところ、ＮＬＥＪは下記の物理化学的定数を示
した：酸価＜０．２０、ヨウ素価９５．００から１０
７．００、ケン化価１８５．００から１９５．００、相
対的密度０．９１５から０．９１８（２０℃）、屈折率
１．４７０から１．４７５（２０℃）。ＮＬＥＪは、ト
リグリセリド（９１．４８±３．４３％）、ジグリセリ
ド（１．４７±０．６３％）、モノグリセリド（５．７
５±３．１９％）およびアキルアシルアセチン（１．０
±０．７８％）を含む。脂肪分解性（ｌｉｐｏｃｌａｓ
ｔｉｃ）脂肪酸残基は、ヘキサデカン酸、オクトデカン
酸、オクタデカン酸およびオクタデカジエン酸を含む。
【０００７】ＮＬＥＪの抽出および精製は、下記の通り
である： 有機溶媒による抽出：有機溶媒は、例えばアセトン、石
油エーテル、エーテル、アルコール、またはヘキサンで
ある。抽出方法は、例えばジュズダマの内胚乳の粉末を
通したパーコレーション、ろ過または滲出である。未加
工の油状生成物が、大量の異物、例えば遊離脂肪酸、色
素などと共に抽出される。 吸収および脱色：一般的な吸収剤、例えば１％活性炭、
３％白色陶土、１０％アルミナなど。未加工の抽出物を
吸収させると、黄色の油状生成物が得られる。 アルカリ化によるケン化： 適量のアルカリ性溶液（例
えばＮａＯＨまたはＫＯＨ）を加えてケン化すると、エ
マルジョンが得られる。 アセトンによる脱乳化： 好量のアセトンを加えると、
エマルジョンが透明になる。 液−液抽出： 好量の第２の有機溶剤、例えば石油エー
テル、エーテルまたはヘキサンにより、抽出および沈降
を行い、主としてアセトン（酸性成分、水を含む）を含
む相を廃棄し、有機溶媒を蒸発させると、主として本発
明のＮＬＥＪから成る残渣が残る。 精製：アルカリ化、ケン化およびアセトンによる脱乳化
の間に、エマルジョンを熱水で洗浄する段階を加え、お
よび／または液−液抽出の後に、脱色および／または熱
水による洗浄の段階必要に応じて加える。その後、静脈
内使用の要件を満たす高純度のＮＬＥＪが得られる。
【０００８】本発明のエマルジョンは、主成分としてＮ
ＬＥＪを、乳化剤として大豆（または卵）のレシチン
を、そして十分な水を、製剤組成物の内容物として有す
る。これは、グリセロール、ソルビトールまたは数種類
の等浸透性剤（ｉｓｏｏｓｍｏｔｉｃｕｍ）も含む。こ
れは、他の通常の抗腫瘍薬も含むことができる。乳化方
法には、ホモジナイゼーションおよび分散という２つの
通常の段階を含む。製薬組成物内のＮＬＥＪの含量は、
広範囲に変化させることができる。これは、Ｏ／Ｗ型エ
マルジョンである。１００ｍｌのエマルジョンでは、Ｎ
ＬＥＪは５から２５ｇの間である。
【０００９】利用可能性、試験および投与 一般的利用可能性 本発明のＮＬＥＪおよびその製薬組成物は、高い抗腫瘍
活性を有する。特に後者は、肺癌、肝臓癌およびその他
の中期または末期の転移癌の治療薬に使用することがで
き得る。これは身体の免疫性を昂進し、多くの疾患から
身体を保護することができ、従って免疫不全性の疾患に
も用いることができる。ＮＬＥＪエマルジョンと少量の
化学療法剤の併用により、抗腫瘍活性を強化し、化学療
法剤の毒性を減少することができる。
【００１０】試験 ＮＬＥＪおよびその製薬組成物の、ヒト腫瘍に対する抗
腫瘍活性の試験について、例９および例１０で説明す
る。この製薬組成物の免疫性への影響、少量の化学療法
剤との併用による活性の昂進および化学療法剤によって
引き起こされる白血球の減少に対する保護効果について
は、各々例１１、例１２および例１３で説明し、この製
薬組成物の臨床効果については、例１４で説明する。
【００１１】投与 本発明の化合物は、治療上有効量、すなわちこれを必要
とする哺乳動物に投与する場合に腫瘍疾患の有効治療を
行うのに治療上十分な量、を投与した。本明細書におけ
る活性な化合物は、静脈内、動脈内または経口投与する
ことができる。
【００１２】例 下記の例は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施
することができるようにするためのものである。これら
例は、本発明の範囲の制限と考えるべきではなく、単に
本発明の例示および典型例と考えるべきである。
【００１３】例１ ＮＬＥＪの抽出および改良 ジュズダマの乾燥内胚乳粉末１００ｋｇをアセトンで抽
出し、アセトンを蒸発したところ５ｋｇの抽出物を得、
吸着および脱色し、５％熱アルカリ溶液として溶解した
ＮａＯＨ１５２ｇ（または相当する量のＫＯＨ）を添加
してアルカリケン化し、抽出物の酸価によって添加する
アルカリの重量を加減し、高温のアルカリを用いること
によりケン化をより迅速かつ完全にし、エマルジョンを
沈降させた後、分離し、エマルジョンが中性（ｐＨ６〜
７）になるまでエマルジョンを２〜３回洗浄し、１：１
（ｖ／ｖ）のアセトンを添加して脱乳化し、沈降後、ア
セトン相を十分量の石油エーテルで抽出し、沈降を行
い、アセトンを除去したところ、ＮＬＥＪが石油エーテ
ル中に残留し、吸収剤を加えて色素および発熱物質を除
去し、濾過し、石油エーテルを蒸発させたところ、中性
の油状生成物が得られ、その後、熱蒸留水で真空下に
０．５時間煮沸し、中性のオイルを沈降し、１００℃に
加熱して水を蒸発させ、吸収剤を再添加してろ過により
除去したところ、本発明の明るい黄色のＮＬＥＪ２ｋｇ
を得、これを包装し、１６０℃で２時間加熱して滅菌し
た後、静脈内および経口投与用エマルジョンを調製し
た。前記の吸着剤は活性炭、白色陶土アルミナなどであ
る。
【００１４】例２〜８ ＮＬＥＪエマルジョンの組成物 経口投与用、静脈内および動脈内投与用の組成物を、例
２〜８に詳細に例示する。
【００１５】例２ ＮＬＥＪ １０．０ｇ 注射用大豆レシチン １．５ｇ 注射用グリセロール ２．５ｇ 注射用の水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは経口、静脈内または動脈内投与用の
エマルジョンであった。
【００１６】例３ ＮＬＥＪ １０．０ｇ 注射用大豆レシチン １．２ｇ 注射用グリセロール ２．５ｇ 注射用の水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは静脈内または動脈内投与用のエマル
ジョンであった。
【００１７】例４ ＮＬＥＪ １５．０ｇ プルロニックＦ８８ ２．０ｇ グリセロール ２．５ｇ 蒸留水 適量を加えて総量を
１００ｍｌとする。 このエマルジョンは経口投与用のエマルジョンであっ
た。
【００１８】例５ ＮＬＥＪ １５．０ｇ 注射用大豆レシチン ２．０ｇ 注射用グリセロール ２．５ｇ 注射用の水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは静脈内または動脈内投与用のエマル
ジョンであった。
【００１９】例６ ＮＬＥＪ ５．０ｇ リン脂質 ０．７５ｇ グリセロール １．２５ｇ 蒸留水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは経口投与用のエマルジョンであっ
た。
【００２０】例７ ＮＬＥＪ ２．５ｇ リン脂質 ２．５ｇ グリセロール ３．０ｇ 蒸留水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは経口投与用のエマルジョンであっ
た。
【００２１】例８ ＮＬＥＪ １０００ｇ 注射用大豆レシチン １２０ｇ 注射用グリセロール ２５０ｇ 注射用の水 適量を加えて総量を１
００ｍｌとする。 このエマルジョンは静脈内または動脈内投与用のエマル
ジョンであった。
【００２２】例９ イン・ビトロでのＮＬＥＪの抗腫瘍活性 （１）白血病Ｐ３８８およびＬ１２１０培養細胞の増殖
に対するＮＬＥＪの阻害作用 方法 異なる濃度のＮＬＥＪ２０μｌを白血病細胞ラインを培
養した９６ウェルのマイクロプレートに２個ずつ添加
し、対照のウェルにはｐｂｓ２０μｌを添加し、このと
き各ウェルの細胞数は９×１０５であり、ＮＬＥＪの最
高濃度は１００μｌとし、細胞を５％ＣＯ２下にて３７
℃で４８時間培養し、細胞をコールターカウンターで計
数し、阻害率および腫瘍細胞のコロニー増殖を５０％阻
害する薬物濃度（ＩＣ５０）を計算した。 阻害率＝（（対照群の細胞数−処理群の細胞数）／（対
照群の細胞数−試験開始時の細胞数））×１００％ 結果 ＮＬＥＪがイン・ビトロにおいて白血病Ｐ３８８および
Ｌ１２１０細胞に対し抗腫瘍活性を有することが明らか
になった。５０μｌを上回る投与量では殆ど全ての細胞
の増殖を阻害した。Ｐ３８８およびＬ１２１０細胞に対
するＮＬＥＪのＩＣ５０は、それぞれ１５．２μｌ／ｍ
ｌおよび２８．８μｌ／ｍｌであった。これらの相関係
数は、それぞれ０．９１３６および０．９４５４であっ
た（図１および表１）。
【００２３】
【表１】
【００２４】（２）結腸腫瘍Ｍ７６０９細胞コロニーの
形成阻害試験 方法 ０．１５％トリプシンで消化して調製した対数増殖期の
結腸癌（Ｍ７６０９）細胞の懸濁液（２０００／ｍｌ）
０．１ｍｌを、直径４ｃｍの円形の細胞容器に２０％ウ
シ血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地３．８ｍｌに添
加して培養し、５％ＣＯ２下にて３７℃で２４時間培養
後に、異なる濃度のＮＬＥＪ ０．１ｍｌを添加し、細
胞を更に９日間培養し、０．１％クリスタルバイオレッ
ト／アルコールで染色した後コロニーを計数し、コロニ
ー形成阻害率およびＩＣ５０を計算した。 結果 ＮＬＥＪは結腸腫瘍Ｍ７６０９の細胞コロニーの形成を
顕著に阻害した。５０μｌ／ｍｌの濃度は全ての形成を
阻害した。結腸腫瘍Ｍ７６０９の細胞コロニーの形成に
対するＮＬＥＪのＩＣ５０は１１．８８μｌ／ｍｌであ
った。この相関係数は０．９４４５であった（図２およ
び表１）。
【００２５】例１０ イン・ビボでの転移性腫瘍に対するＮＬＥＪエマルジョ
ンの治療効果 （１）イン・ビボでの、ヒト肝細胞癌（ＱＧＹ）の生長
に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療効果 方法 活発に増殖中の肝細胞癌（ＱＧＹ）を生理食塩水（１：
４）中でホモジナイズして懸濁液を調製し、各ヌードマ
ウスの腋下に懸濁液０．２ｍｌを皮下接種し、接種の翌
日にヌードマウスを無作為に群分けし、ＮＬＥＪエマル
ジョンの用量を２５ｍｌ／ｋｇ、１２．５ｍｌ／ｋｇお
よび６．２５ｍｌ／ｋｇとし、このエマルジョンをヌー
ドマウスの尾に１０日間毎日静脈内投与し、１群のマウ
スはシクロホスファミド（ＣＴＸ）３０ｍｇ／ｋｇを７
日間毎日腹腔内投与し、対照群のヌードマウスにはＮＬ
ＥＪのみを含有しない対応するエマルジョン（ブランク
エマルジョン）２５ｍｌ／ｋｇを１０日間毎日、ヌード
マウスの尾に静脈内投与した。全てのヌードマウスの腫
瘍組織の検体を接種３０日後に採取し、秤量した。 結果 ＮＬＥＪの、２５ｍｌ／ｋｇ、１２．５ｍｌ／ｋｇおよ
び６．２５ｍｌ／ｋｇの全用量で、ヒト肝細胞癌（ＱＧ
Ｙ）に対し良好な治療効果、および良好な用量活性相関
が認められ、最高用量（２５ｍｌ／ｋｇ）はＣＴＸ投与
とほぼ同程度の高い阻害率を示した（表２）。
【００２６】
【表２】
【００２７】（２）イン・ビボでの、ヒト小細胞肺癌
（ＳＰＣ）の増殖に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療
効果 方法 活発に生長しているＳＰＣ腫瘍組織を２ｍｍの小片に切
断し、各ヌードマウスの腋下に１片ずつ接種し、接種の
翌日にヌードマウスを無作為に群分けして投与し、ＮＬ
ＥＪの用量は２５ｍｌ／ｋｇ ｉｖ ×１０（ｑｄ）と
し、１群のマウスにはダカルバジン（ＤＴＩＣ）を４０
ｍｇ／ｋｇ ｉｖ ×１０（ｑｄ）投与し、対照群のヌ
ードマウスにはブランクエマルジョンを２５ｍｌ／ｋｇ
ｉｖ×１０（ｑｄ）投与し、全てのヌードマウスの腫
瘍組織の検体を接種３０日後に採取し、秤量した。 結果 ２５ｍｌ／ｋｇの用量のＮＬＥＪは、ヒト小細胞肺癌に
対し良好な治療効果を示し、阻害率は６２．３５％であ
った（表３）。
【００２８】
【表３】
【００２９】（３）イン・ビボでの、肺における黒色腫
の転移に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療効果 方法 対数増殖期にあって生長している黒色腫Ｂ１６組織を
０．１５％トリプシンで消化し、その組織からＲＰＭＩ
１６４０培地に２．５×１０５細胞／ｍｌとなるように
懸濁したもの０．２ｍｌをそれぞれのＣ５７ＢＬ／６マ
ウスの尾へ静脈内注射し、接種３日後にマウスを無作為
に群分けし、異なる用量を投与し、接種２１日後にマウ
スを殺し、マウスの肺に転移した黒色腫のコロニー数を
計数し、阻害率を計算して、肺における黒色腫の転移に
対するＮＬＥＪエマルジョンの異なる投与による異なる
効果を比較し、シクロホスファミド１００ｍｇ／ｋｇ
（ＣＴＸ）をＮＬＥＪエマルジョンと比較するために同
じ方法で投与した。 結果 黒色腫の転移に対する、異なる投与による異なる効果 （ｉ）ＮＬＥＪエマルジョンの用量（６．２５ｍｌ／ｋ
ｇ、１２．５ｍｌ／ｋｇ、および２５ｍｌ／ｋｇ）およ
び投与（３日毎、４回、尾静脈内投与）の全ての組み合
わせから、黒色腫Ｂ１６の転移に対する明らかな阻害効
果が示された（表４、図３）。
【００３０】
【表４】
【００３１】（ｉｉ）ＮＬＥＪエマルジョンの用量
（６．２５ｍｌ／ｋｇ、１２．５ｍｌ／ｋｇ、および２
５ｍｌ／ｋｇ）および投与（毎日、７回、尾静脈内投
与）の全ての組み合わせからも、黒色腫Ｂ１６の転移に
対する明らかな阻害効果が示された（表５、図４）。
【００３２】
【表５】
【００３３】（ｉｉｉ）更に、ＮＬＥＪエマルジョンの
用量（６．２５ｍｌ／ｋｇ、１２．５ｍｌ／ｋｇおよび
２５ｍｌ／ｋｇ）および投与（毎日、７回、腹腔内投
与）の全ての組み合わせからも、黒色腫Ｂ１６の転移に
対する明らかな阻害効果が示された（表６、図５）。
【００３４】
【表６】
【００３５】例１１ ＮＬＥＪエマルジョンからのマウス免疫性の昂進 （１）イン・ビトロでの、ＮＬＥＪエマルジョンからの
マウス脾臓リンパ細胞の増殖の誘導 方法 脾臓細胞は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスから無菌的に得、細
胞密度をＲＰＭＩ−１６４０培養液で１×１０７／ｍｌ
に調整し、細胞の入っている各ホールに培地１００μ
ｌ、薬物１００μｌおよびＣｏｎＡ５０μｌを添加し、
但しここで言及した薬物とはＮＬＥＪエマルジョン（４
濃度）、レンチナニン（４濃度）、ブランクエマルジョ
ンおよび水であり、各処理を４回行い、細胞を５％ＣＯ
２下にて、３７℃で４８時間培養した後、３Ｈ−Ｔｄｒ
をウェルに添加し（０．５μｃｉ／ウェル）、更に２０
時間培養した後、細胞を集め、ＣＰＭ値を液体シンチレ
ーションカウンターで測定した。 結果 ＮＬＥＪおよびレンチナニンと培養した細胞では、どち
らも高いＣＰＭ値が認められ、すなわちＮＬＥＪおよび
レンチナニンは双方とも、イン・ビトロでマウス脾臓リ
ンパ細胞の増殖を誘導したことが表７からわかる。用量
とＣＰＭ値の間に相関関係も認められた。
【００３６】
【表７】
【００３７】（２）イン・ビトロでの、マウスのナチュ
ラルキラー細胞の活性に対するＮＬＥＪエマルジョンの
影響 方法 脾臓細胞を効果細胞としてＣ５７ＢＬ／６マウスから無
菌的に得、細胞密度を１×１０６／ｍｌに調整し、目的
細胞であるＹＡＣ−１細胞の密度を１×１０４に調整
し、２つの細胞懸濁液を１：１（ｖ／ｖ）に混合し、す
なわち効果細胞と目的細胞の比を１：１００とし、３Ｈ
−Ｔｄｒをウェルに添加し（０．５μｃｉ／ウェル）、
細胞を５％ＣＯ２下にて３７℃で４８時間培養した後、
細胞を集め、ＣＰＭ値を液体シンチレーションカウンタ
ーで測定し、特異的な阻害率（Ｐｉ）をナチュラルキラ
ー細胞の活性として示し、ＮＬＥＪエマルジョンのＰｉ
をレンチナニンのＰｉと比較し、ブランクエマルジョン
および培地を対照とした。 Ｐｉ＝（１−（処理群のＣＰＭ値／対照群のＣＰＭ
値））×１００％ 結果 これらの結果は、ＮＬＥＪがレンチナニンと同様に、イ
ン・ビトロでマウスのナチュラルキラー細胞の活性を刺
激することを示した（表８）。また、用量とＣＰＭ値の
間には負の相関関係が認められる。
【００３８】
【表８】
【００３９】（３）イン・ビボでの、腫瘍を有するマウ
スの脾臓リンパ細胞の増殖に対するＮＬＥＪエマルジョ
ンの効果 １×１０４の白血病細胞Ｌ１２１０を各マウスの腋下に
皮下接種し、接種の翌日にマウスを無作為に６群（１０
マウス／群）に分け、この６つの処理群はＮＬＥＪ
６．２５、１２．５、２５ｍｌ／ｋｇ、レンチナニン
１０ｍｌ／ｋｇ、ブランクエマルジョンおよび生理食塩
水であり、７回毎日投与した後にマウスを殺し、マウス
から無菌的にに得た脾臓細胞懸濁液を１×１０７／ｍｌ
の細胞密度に調整し、細胞懸濁液１００μｌおよび培養
液１００μｌを各ウェルに添加し、これを３つのウェル
で繰り返し、５％ＣＯ２下にて３７℃で４８時間培養し
た後、３Ｈ−Ｔｄｒ ０．５μｃｉ／ウェルを添加し、
更に２０時間培養し、集めた細胞のＣＰＭ値を測定し対
照細胞と比較した。 結果 表９から、ＮＬＥＪエマルジョンが白血病を有するマウ
スの脾臓リンパ細胞の増殖を促進することがわかる。さ
らに、マウス免疫性に対するＮＬＥＪエマルジョンの増
強は用量が増すほど増大した。レンチナニンの投与にお
いてマウス免疫性に対する昂進を認めた。
【００４０】
【表９】
【００４１】（４）イン・ビボでの白血病マウスのＮＫ
細胞の活性に対するＮＬＥＪエマルジョンの効果 方法 １×１０４個の白血病細胞Ｌ１２１０を各マウスの腋下
にに皮下接種し、接種の翌日にマウスを無作為に６群
（１０マウス／群）に分け、この６つの投与群はＮＬＥ
Ｊ ６．２５、１２．５、２５ｍｌ／ｋｇ、レンチナニ
ン １０ｍｌ／ｋｇ、ブランクエマルジョンおよび生理
食塩水であり、７回毎日投与した後にマウスを殺し、マ
ウスから無菌的に得た脾臓細胞懸濁液を１×１０６／ｍ
ｌの細胞密度に調整し、この細胞懸濁液（効果細胞）１
００μｌおよびＹＡＣ細胞（標的細胞、１×１０４の細
胞密度）１００μｌ、および３Ｈ−Ｔｄｒ ０．５μｃ
ｉ／ウェルを各ウェルに添加し、これを３つのウェルで
繰り返し、５％ＣＯ２下にて３７℃で２４時間培養した
後、集めた細胞のＣＰＭ値を測定し、特異的阻害率（Ｐ
ｉ）をナチュラルキラー細胞の活性として示した。 Ｐｉ＝（１−（投与群のＣＰＭ値／対照群のＣＰＭ
値））×１００％ 結果 表１０は、白血病細胞を担持するマウスのナチュラルキ
ラー細胞の活性に対するＮＬＥＪエマルジョンおよびレ
ンチナニンの刺激を示し、マウス免疫性の昂進を示唆し
ている。
【００４２】
【表１０】
【００４３】（５）イン・ビボでの、白血病マウスのイ
ンターロイキン−２の誘導に対するＮＬＥＪエマルジョ
ンの影響 方法 １×１０−Ｅ４の白血病細胞Ｌ１２１０を各マウスの腋
の下に皮下接種し、接種の翌日にマウスを無作為に６群
（１０マウス／群）に分け、この６つの投与群はＮＬＥ
Ｊ ６．２５、１２．５、２５ｍｌ／ｋｇ、レンチナニ
ン １０ｍｌ／ｋｇ、ブランクエマルジョン、および生
理食塩水であり、７回毎日投与した後にマウスを殺し、
マウスから無菌的にに得た脾臓細胞懸濁液を１×１０７
／ｍｌの細胞密度に調整し、ＣｏｎＡ ５μｇ／ｍｌを
含有する細胞懸濁液２ｍｌとし、これを３つのウェルで
繰り返し、５％ＣＯ２下にて３７℃で２４時間培養した
後、上澄液を採取し、インターロイキン−２（ＩＬ−
２）の活性を、インターロイキン−２依存性細胞クロー
ンＣＴＬＬを用いて、３Ｈ−Ｔｄｒの取り込みを測定す
る方法により測定した。 結果 表１１は、ＮＬＥＪが全投与群で腫瘍を有するマウスの
インターロイキン−２の誘導を刺激したことを示してい
る。
【００４４】
【表１１】
【００４５】（６）イン・ビボでの、マウス食細胞の食
作用活性に対するＮＬＥＪエマルジョンの効果 方法 スイスマウスを無作為に２群に分け、１群にはＮＬＥＪ
エマルジョンを腹腔内に７回毎日投与し、もう１群には
ブランクエマルジョンを同じ方法で投与し、最終投与後
に加水分解したラクトアルブミン０．５ｍｌを腹腔内投
与し、翌日にニワトリの赤血球懸濁液（２％）１ｍｌを
同じ方法で投与し、３０分後にこのスイスマウスを頚椎
脱臼によって殺し、スイスマウスを仰向けに固定し、開
腹し、腹腔を生理食塩水２ｍｌで１分間洗浄し、水１ｍ
ｌを採取してガラス表面上に滴下し、湿度を保ちながら
３７℃で３０分間インキュベートした後、接着していな
い細胞を洗い落とし、乾燥後にアセトン：メタノール
１：１（ｖ／ｖ）で細胞をガラスに固定し、細胞を４％
ギムザーリン酸緩衝液で３分間染色し、蒸留水で洗浄し
て乾燥し、顕微鏡下で食細胞を計数し（１００個以
上）、下記 食作用率＝（赤血球を貧食している食細胞数／全食細胞
数）×１００％ 食作用指標＝（貧食されている赤血球数／食細胞数）×
１００％ により、食作用率（ＰＰ）および食作用指標（ＰＩ）を
計算した。 結果 表１２から、ＮＬＥＪがマウス食細胞の食作用活性を促
進したことがわかる。
【００４６】
【表１２】
【００４７】例１２ 低用量化学療法と併用した場合のＮＬＥＪエマルジョン
の抗腫瘍活性 （１）イン・ビボでの、Ｗａｌａｅｒ癌肉腫（固形）Ｗ
２５６上の抗腫瘍の治療効果 方法 活発に増殖している腹水Ｗａｌａｅｒ癌肉腫（固形）Ｗ
２５６組織を消化して細胞懸濁液とし、この細胞懸濁液
を１〜２×１０７／ｍｌの細胞密度に調整し、この懸濁
液０．２ｍｌを各ラットの腋の下の皮下に接種し、接種
の翌日にラットを無作為に群分けして投与し、ＮＬＥＪ
エマルジョンの用量は、２０ｍｌ／ｋｇ、１０ｍｌ／ｋ
ｇ、５ｍｌ／ｋｇ ｉｖ×１０（ｑｄ）、シクロホスフ
ァミドの用量は３０ｍｇ／ｋｇ ｉｖ×７（ｑｄ）、１
０ｍｇ／ｋｇ ｉｖ×２（３日目および５日目）とし、
全投与群の腫瘍組織を採取して秤量し、接種後１４日目
の腫瘍阻害率を計算した。 結果 ＮＬＥＪエマルジョンの、腹水Ｗａｌａｅｒ癌肉腫（固
体）Ｗ２５６に対する抗腫瘍の治療効果は、少量のシク
ロホスファミドを用いた化学療法によって昂進された
（表１３）。
【００４８】
【表１３】
【００４９】（２）肉腫（Ｓ−１８０）に対する抗腫瘍
の治療効果 方法 活発に増殖する肉腫（Ｓ−１８０）組織を、生理食塩水
１：３（ｗ／ｖ）により細胞懸濁液に調整し、マウスを
接種および投与した翌日、無作為に群分けした。ＮＬＥ
Ｊエマルジョンの用量は、２５ｍｌ／ｋｇ ｉｖ×７
（ｑｄ）、シクロホスファミドの用量は、３０ｍｇ／ｋ
ｇ ｉｐ×２（２日目および４日目）、ｍｉｔｏｘａｎ
ｔｒｏｎｅ（ＤＨＡＤ）の用量は、２ｍｇ／ｋｇ ｉｐ
×２（２日目および４日目）、マイトマイシンの用量
は、１．５ｍｇ／ｋｇ ｉｐ ×２（２日目および４日
目）であり、全投与群の腫瘍組織を、接種後１４日目に
採取し、秤量し、腫瘍阻害率を計算した。 結果 結果はＮＬＥＪエマルジョンの肉腫に対する抗腫瘍の治
療効果が、少量のシクロホスファミド、ＤＨＡＤおよび
マイトマイシンにより促進されることを示した（表１
４）。
【００５０】
【表１４】
【００５１】例１３ 化学療法により起こった白血球の減少に関するＮＬＥＪ
エマルジョンによる保護 ８０匹のスイスマウスを無作為に８群に分割し、シクロ
ホスファミド４５ｍｇ／ｋｇ ｉｐ×３（２、６、およ
び１０日目）、ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎｅ（ＨＲＴ
Ｎ）１ｍｇ／ｋｇ ｉｐ×３（２、６、および１０日
目）を投与し、各薬剤の２群に、ＮＬＥＪエマルジョン
を用量２．４ｍｌ／ｋｇおよび６．２５ｍｌ／ｋｇ ｉ
ｖ×７（毎日）、同じ回数で投与し、各投与の最初およ
び第４日目に各マウスの眼の角から血液を検体として採
取し、その血液中の白血球を計数した。 結果 表１５および１６は、ＮＬＥＪエマルジョンがシクロホ
スファミド化学療法またはｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎｅ
化学療法の引き起こす白血球の減少からマウスを保護す
ることができることを示している。
【００５２】
【表１５】
【００５３】
【表１６】
【００５４】例１４ ＮＬＥＪエマルジョンの臨床的治療効果 方法 ＮｌＥＪエマルジョンを、様々なヒトの癌治療におい
て、静脈または動脈に投与した。治療の詳細な方法は省
略する。 結果
【００５５】
【表１７】
【００５６】
【表１８】
【００５７】
【表１９】
【００５８】
【表２０】
【００５９】
【表２１】
【００６０】
【表２２】
【図面の簡単な説明】
【図１】ＮＬＥＪの、白血病Ｐ３８８，Ｌ１２１０の増
殖への効果。
【図２】結腸腫瘍Ｍ７６０９の細胞コロニーの形成に関
するＮＬＥＪの効果。
【図３】イン・ビボでの肺における黒色腫（Ｂ１６）の
転移に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療効果（３日
毎）。
【図４】イン・ビボでの肺における黒色腫（Ｂ１６）の
転移に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療効果（ｉｖ、
毎日）。
【図５】イン・ビボでの肺における黒色腫（Ｂ１６）の
転移に対するＮＬＥＪエマルジョンの治療効果（ｉｐ、
毎日）。

Claims (14)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】グリセリドおよびアルキルアシルアセチン
    を含んで成るジュズダマ内胚乳（ＮＬＥＪ）の中性脂質
    であって、ＮＬＥＪの脂肪分解性の脂肪酸残基がアルキ
    ル脂肪酸およびアルケニル脂肪酸を含んで成る、中性脂
    質。
  2. 【請求項２】前記のグリセリドがトリグリセリド、ジグ
    リセリドおよびモノグリセリドを含んで成る、請求項１
    に記載のＮＬＥＪ。
  3. 【請求項３】前記のグリセリドが本質的にヘキサデカン
    酸、オクトデカン酸、オクタデカン酸およびオクタデカ
    ジエン酸の残基を含んで成る、請求項１に記載のＮＬＥ
    Ｊ。
  4. 【請求項４】前記の中性脂質が下記の物理化学的指標：
    酸価＜０．２０、ヨウ素価９５．００から１０７．０
    ０、ケン化値１８５．００から１９５．００、相対密度
    ０．９１５から０．９１８（２０℃）およびジオプトリ
    ー１．４７０から１．４７５、（２０℃）を有する、請
    求項第１、２および３のいずれか１項に記載のＮＬＥ
    Ｊ。
  5. 【請求項５】有機溶媒による抽出、吸収剤による吸収お
    よび脱色から成り、且つ １）アルカリ化によるケン化 ２）アセトンによる脱乳化 ３）有機溶媒による抽出をも含む、請求項１に記載のＮ
    ＬＥＪの抽出および精製法。
  6. 【請求項６】前記のＮＬＥＪの抽出に用いる有機溶媒が
    アセトンである、請求項５に記載の方法。
  7. 【請求項７】前記のＮＬＥＪの精製に使用するアルカリ
    性ケン化が、ＮａＯＨまたはＫＯＨのアルカリ剤を用い
    た方法である、請求項５に記載の方法。
  8. 【請求項８】ＮＬＥＪの精製に用いる抽出が石油エーテ
    ルの有機溶媒を用いる方法である、請求項５に記載の方
    法。
  9. 【請求項９】必要ならば、下記の段階： １） アルカリ性ケン化および脱乳化の間にエマルジョ
    ンを熱水で洗浄する段階、および／または ２） 有機溶媒によりＮＬＥＪを抽出した後に加える吸
    収および脱色の段階、および／または ３） 有機溶媒によりＮＬＥＪを抽出した後に加える熱
    水による洗浄の段階、も含む、請求項５に記載のＮＬＥ
    Ｊの精製方法。
  10. 【請求項１０】請求項１に記載のＮＬＥＪ、乳化剤およ
    び蒸留水を含んで成る、抗腫瘍作用を有する製薬組成
    物。
  11. 【請求項１１】前記の組成物が、 ＮＬＥＪ 有効量 乳化剤 適量 等浸透性剤 適量 蒸留水 適量 である、請求項１０に記載の製薬組成物。
  12. 【請求項１２】前記の組成物が、 ＮＬＥＪ ５〜２５ｇ 大豆または卵のレシチン ０．３〜３．０ｇ グリセロール １．２５〜６ｇ 蒸留水 適量を加えて総量を１００
    ｍｌとする である、請求項１０に記載の製薬組成物。
  13. 【請求項１３】前記の組成物が、 ＮＬＥＪ １０ ｇ 注射用大豆レシチン １．５ｇ 注射用グリセロール ２．５ｇ 注射用水 適量を加えて総量を１００ｍ
    ｌとする である、請求項１０に記載の製薬組成物。
  14. 【請求項１４】前記の組成物が他の抗腫瘍薬を含んで成
    る、請求項１０に記載の製薬組成物。
JP5263994A 1992-09-16 1993-09-16 ジュズダマ内胚乳から得られる中性脂質 Expired - Lifetime JP3005407B2 (ja)

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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006502193A (ja) * 2002-09-28 2006-01-19 大鵬 李 前立腺疾病を治療するためのヨクイニン油軟カプセル剤
WO2013069821A1 (en) * 2011-11-10 2013-05-16 Michio Tani Malignant tumor treatment agent and food and drink including same
JP2017521497A (ja) * 2014-07-18 2017-08-03 ゼンジアン カングライト グループ シーオー．、エルティーディー． １６種のグリセリド含むヨクイニン油、製剤及びその応用
JP2017522441A (ja) * 2014-07-18 2017-08-10 ゼンジアン カングライト グループ シーオー．、エルティーディー． １１種のトリグリセリド含むヨクイニン油、製剤及びその応用
JP2017524047A (ja) * 2014-07-18 2017-08-24 ゼンジアン カングライト グループ シーオー．、エルティーディー． １３種のグリセリド含むヨクイニン油、製剤及びその応用
JP2017524697A (ja) * 2014-07-18 2017-08-31 ゼンジアン カングライト グループ シーオー．、エルティーディー． １３種のグリセリド含む医薬組成物、製剤及びその応用

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5607971A (en) * 1995-06-19 1997-03-04 University Of Iowa Research Foundation Esterified vasoactive lipids for increasing perfusion pressure of the caruncular arterial bed in mammals
WO2002072123A1 (en) * 2001-03-02 2002-09-19 Beppu, Kunihide Preventives or remedies for tumor or papillomaviral diseases
KR20030077743A (ko) * 2002-03-26 2003-10-04 변현규 In½
US7009379B2 (en) * 2002-09-12 2006-03-07 Landis & Gyr, Inc. Electricity meter with power supply load management
US9492493B2 (en) * 2003-09-22 2016-11-15 Dapeng Li Softgel of NLKJ for treating prostate diseases
AU2005262392A1 (en) * 2004-07-01 2006-01-19 Johnson & Johnson Vision Care, Inc. Compositions and methods for treating eye disorders and conditions
US20070265341A1 (en) * 2004-07-01 2007-11-15 The Schepens Eye Research Institute Inc. Compositions and methods for treating eye disorders and conditions
KR100698703B1 (ko) * 2006-03-28 2007-03-23 삼성에스디아이 주식회사 화소 및 이를 이용한 유기전계발광 표시장치
US9744205B2 (en) * 2012-02-01 2017-08-29 Joben Bio-Medical Co., Ltd. Alcohol extract of dehulled adlay seeds for treating breast cancer
CN104388187A (zh) * 2014-10-27 2015-03-04 贵州薏仁集团兴仁薏仁科技有限责任公司 薏米油制备方法
CN107583031A (zh) * 2016-07-06 2018-01-16 陈栋梁 一种清蛋白肽混合物的制备方法及其抑制癌细胞增殖作用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5632282A (en) * 1979-08-18 1981-04-01 Sumitomo Electric Industries Vessel provided with diaphragm
JPH0311017A (ja) * 1989-06-06 1991-01-18 Green Cross Corp:The プロスタグランジンｅ↓１含有薬剤組成物
JPH0469340A (ja) * 1990-07-06 1992-03-04 Asahi Chem Ind Co Ltd プロスタグランジンｅ↓１脂肪乳剤

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1560202A (ja) * 1963-04-23 1969-03-21
JPS52156936A (en) * 1976-06-21 1977-12-27 Kouichi Ogawa Cosmetics
JPS5535052A (en) * 1978-09-05 1980-03-11 Taiyo F D Kk Preparation of coix seed oil for pharmaceutical and cosmetic use
JPS58210022A (ja) * 1982-06-02 1983-12-07 Yasuo Araki ハトムギ有効成分の純品精出法及び定量検定法
JPS58213719A (ja) * 1982-06-02 1983-12-12 Yasuo Araki 薬物的活性剤
JPS61204131A (ja) * 1985-03-07 1986-09-10 Morinaga Milk Ind Co Ltd 排卵誘起剤
JPS63190809A (ja) * 1987-02-02 1988-08-08 Hohoba Japan:Kk 皮膚老化防止化粧料
CN1034859A (zh) * 1989-02-11 1989-08-23 徐万刚 增强免疫营养素的配制和生产方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5632282A (en) * 1979-08-18 1981-04-01 Sumitomo Electric Industries Vessel provided with diaphragm
JPH0311017A (ja) * 1989-06-06 1991-01-18 Green Cross Corp:The プロスタグランジンｅ↓１含有薬剤組成物
JPH0469340A (ja) * 1990-07-06 1992-03-04 Asahi Chem Ind Co Ltd プロスタグランジンｅ↓１脂肪乳剤

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006502193A (ja) * 2002-09-28 2006-01-19 大鵬 李 前立腺疾病を治療するためのヨクイニン油軟カプセル剤
WO2013069821A1 (en) * 2011-11-10 2013-05-16 Michio Tani Malignant tumor treatment agent and food and drink including same
JP2013103886A (ja) * 2011-11-10 2013-05-30 Michishi Tani 悪性腫瘍治療剤及びそれを含む飲食品
JP2017521497A (ja) * 2014-07-18 2017-08-03 ゼンジアン カングライト グループ シーオー．、エルティーディー． １６種のグリセリド含むヨクイニン油、製剤及びその応用
JP2017522441A (ja) * 2014-07-18 2017-08-10 ゼンジアン カングライト グループ シーオー．、エルティーディー． １１種のトリグリセリド含むヨクイニン油、製剤及びその応用
JP2017524047A (ja) * 2014-07-18 2017-08-24 ゼンジアン カングライト グループ シーオー．、エルティーディー． １３種のグリセリド含むヨクイニン油、製剤及びその応用
JP2017524697A (ja) * 2014-07-18 2017-08-31 ゼンジアン カングライト グループ シーオー．、エルティーディー． １３種のグリセリド含む医薬組成物、製剤及びその応用

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