JPH06213899A - 血清試料中のｌｄｌの特異的定量法およびそのための試 薬 - Google Patents
血清試料中のｌｄｌの特異的定量法およびそのための試 薬Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 水溶性ポリアニオンの存在下で生物学的液体
中のＬＤＬを特異的に定量する方法、並びにこの目的に
適する試薬を提供する。 【構成】 アニオン側枝を有する水溶性櫛型ポリマーを
分析すべき試料に添加し、形成されたＬＤＬ特異的凝集
物の含有量を濁り度測定法で直接定量する。アニオン櫛
型ポリマーは、一般式（Ｉ） 〔式中、基Ｒ１は水素または低級炭化水素基（好ましく
はメチル基）であり、Ｘは酸素原子またはＮＨ基であ
り、Ａは２−１０個の炭素原子からなる直鎖状または分
枝状の炭化水素鎖であり（分枝鎖が好ましい）、そして
Ｚは に相当する〕で表されるアクリル酸エステルモノマーか
ら誘導される。
中のＬＤＬを特異的に定量する方法、並びにこの目的に
適する試薬を提供する。 【構成】 アニオン側枝を有する水溶性櫛型ポリマーを
分析すべき試料に添加し、形成されたＬＤＬ特異的凝集
物の含有量を濁り度測定法で直接定量する。アニオン櫛
型ポリマーは、一般式（Ｉ） 〔式中、基Ｒ１は水素または低級炭化水素基（好ましく
はメチル基）であり、Ｘは酸素原子またはＮＨ基であ
り、Ａは２−１０個の炭素原子からなる直鎖状または分
枝状の炭化水素鎖であり（分枝鎖が好ましい）、そして
Ｚは に相当する〕で表されるアクリル酸エステルモノマーか
ら誘導される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、水溶性ポリアニオンの
存在下で生物学的液体中のＬＤＬを特異的に定量する方
法、並びにこの目的に適する試薬に関するものである。
ポリアニオンは側枝が酸基（特に分枝アルカンスルホン
酸基）を有する櫛型構造 (comb structure) をもつ点に
特徴がある。
存在下で生物学的液体中のＬＤＬを特異的に定量する方
法、並びにこの目的に適する試薬に関するものである。
ポリアニオンは側枝が酸基（特に分枝アルカンスルホン
酸基）を有する櫛型構造 (comb structure) をもつ点に
特徴がある。
【０００２】
【従来の技術】血漿（特に血清）中のＬＤＬレベルの測
定は臨床上非常に重要であり、総コレステロール含有量
の８０％までがいわゆる低密度リポタンパク質（low-de
nsitylipoprotein ：ＬＤＬまたはβ画分）の形で運搬
される。かくして、今日ではこれらの粒子の部分が脂質
代謝において主要なアテローム発生成分であると考えら
れている。さらに、血漿ＬＤＬ濃度の上昇は高血圧、高
インシュリン血、内毒素といった多数の病毒に匹敵しう
る直接的内皮損傷作用を有し、そしてアテローム性動脈
硬化巣に蓄積しているコレステロールはもともと血漿中
ではＬＤＬコレステロールの形で存在していたことが知
られている。
定は臨床上非常に重要であり、総コレステロール含有量
の８０％までがいわゆる低密度リポタンパク質（low-de
nsitylipoprotein ：ＬＤＬまたはβ画分）の形で運搬
される。かくして、今日ではこれらの粒子の部分が脂質
代謝において主要なアテローム発生成分であると考えら
れている。さらに、血漿ＬＤＬ濃度の上昇は高血圧、高
インシュリン血、内毒素といった多数の病毒に匹敵しう
る直接的内皮損傷作用を有し、そしてアテローム性動脈
硬化巣に蓄積しているコレステロールはもともと血漿中
ではＬＤＬコレステロールの形で存在していたことが知
られている。
【０００３】現在では、血漿（特に血清）中のＬＤＬお
よびβコレステロールの定量法が数多く存在している
（Mills, G.L., Lane, P.A., Weech, P.K., A guideboo
k to lipoprotein technique, Elsevier, Amsterdam, 1
984; Cremer, P., and Seidel,D., Deutsch. Gesell. K
lin. Chem. Mittl. 21 (1990), 215-232 ）。超遠心分
離や電気泳動のような分画化法と、沈殿法とは基本的に
区別される。前者が抱える問題点は、それらが高価な設
備を必要とし、さらに時間がかかることである。従っ
て、今日ではそれらは主として基準および確認のために
使用されている。しかし、主に陰電荷を有する高分子物
質の沈殿は実験室での日常的な作業の一部となってい
る。臨床上の診断においては、特にデキストラン硫酸、
ポリ硫酸ビニル、多環式界面活性アニオンまたはヘパリ
ンがＬＤＬの沈殿試薬として使われている。ところが、
それらにはいくつかの欠点がある。ヘパリンを酸性媒体
中で沈殿させたり、多環式アニオンを以前にまたは現に
脂質分解活性を有する血清試料中で沈殿させると、ＬＤ
Ｌコレステロールの測定値が誤って上昇する。デキスト
ラン硫酸やポリ硫酸ビニル（これらは、現在では、ＬＤ
Ｌ測定において最高の精度を示すので特に優れた試薬と
いえる）を用いる場合は、以前にまたは現に脂質分解活
性を有する血清試料が誤って低下した結果を示す。その
上、デキストラン硫酸含有沈殿試薬による測定は、分析
すべき試料中に高レベルの遊離脂肪酸やトリグリセリド
が存在する場合に、不当に低下した測定値をもたらす。
この問題はヘパリン処置を施した患者においてより一層
頻繁に発生する。さらに、全ての沈殿法は、ＬＤＬのほ
かにもＬＤＬ様リポタンパク質のＬｐ（ａ）を全部沈殿
させるという欠点も抱えている。かくして、この手法は
完全にＬＤＬ特異的というわけではない。
よびβコレステロールの定量法が数多く存在している
（Mills, G.L., Lane, P.A., Weech, P.K., A guideboo
k to lipoprotein technique, Elsevier, Amsterdam, 1
984; Cremer, P., and Seidel,D., Deutsch. Gesell. K
lin. Chem. Mittl. 21 (1990), 215-232 ）。超遠心分
離や電気泳動のような分画化法と、沈殿法とは基本的に
区別される。前者が抱える問題点は、それらが高価な設
備を必要とし、さらに時間がかかることである。従っ
て、今日ではそれらは主として基準および確認のために
使用されている。しかし、主に陰電荷を有する高分子物
質の沈殿は実験室での日常的な作業の一部となってい
る。臨床上の診断においては、特にデキストラン硫酸、
ポリ硫酸ビニル、多環式界面活性アニオンまたはヘパリ
ンがＬＤＬの沈殿試薬として使われている。ところが、
それらにはいくつかの欠点がある。ヘパリンを酸性媒体
中で沈殿させたり、多環式アニオンを以前にまたは現に
脂質分解活性を有する血清試料中で沈殿させると、ＬＤ
Ｌコレステロールの測定値が誤って上昇する。デキスト
ラン硫酸やポリ硫酸ビニル（これらは、現在では、ＬＤ
Ｌ測定において最高の精度を示すので特に優れた試薬と
いえる）を用いる場合は、以前にまたは現に脂質分解活
性を有する血清試料が誤って低下した結果を示す。その
上、デキストラン硫酸含有沈殿試薬による測定は、分析
すべき試料中に高レベルの遊離脂肪酸やトリグリセリド
が存在する場合に、不当に低下した測定値をもたらす。
この問題はヘパリン処置を施した患者においてより一層
頻繁に発生する。さらに、全ての沈殿法は、ＬＤＬのほ
かにもＬＤＬ様リポタンパク質のＬｐ（ａ）を全部沈殿
させるという欠点も抱えている。かくして、この手法は
完全にＬＤＬ特異的というわけではない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、他のリポタンパク質粒子による干渉、または高濃度
のトリグリセリドや遊離脂肪酸による干渉、あるいはヘ
パリン添加試料による干渉が存在しない、ＬＤＬの簡便
かつ迅速な特異的定量法を提供することにある。
は、他のリポタンパク質粒子による干渉、または高濃度
のトリグリセリドや遊離脂肪酸による干渉、あるいはヘ
パリン添加試料による干渉が存在しない、ＬＤＬの簡便
かつ迅速な特異的定量法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】この目的は、アニオン側
枝を有する水溶性櫛型ポリマー（comb polymer）を分析
すべき試料に添加し、続いて、形成されたＬＤＬ特異的
凝集物の含有量を濁り度測定法で直接定量することによ
り達成される。本発明のアニオン櫛型ポリマーは、一般
式（Ｉ）：
枝を有する水溶性櫛型ポリマー（comb polymer）を分析
すべき試料に添加し、続いて、形成されたＬＤＬ特異的
凝集物の含有量を濁り度測定法で直接定量することによ
り達成される。本発明のアニオン櫛型ポリマーは、一般
式（Ｉ）：
【０００６】
【化３】
【０００７】〔式中、基Ｒ1 は水素または低級炭化水素
基（好ましくはメチル基）であり、Ｘは酸素原子または
ＮＨ基であり、Ａは２−１０個の炭素原子からなる直鎖
状または分枝状の炭化水素鎖であり（分枝鎖が好まし
い）、そしてＺは
基（好ましくはメチル基）であり、Ｘは酸素原子または
ＮＨ基であり、Ａは２−１０個の炭素原子からなる直鎖
状または分枝状の炭化水素鎖であり（分枝鎖が好まし
い）、そしてＺは
【０００８】
【化４】
【０００９】に相当する〕で表されるアクリル酸エステ
ルモノマーから誘導される。特に、２−アクリルアミド
−２−メチル−１−プロパンスルホン酸、２−アクリル
アミドグリコール酸、またはアクリル酸（２−ホスホ−
１，１−ジメチルエチルアミド）のホモポリマーおよび
／または前記モノマーのコポリマーが好ましい。
ルモノマーから誘導される。特に、２−アクリルアミド
−２−メチル−１−プロパンスルホン酸、２−アクリル
アミドグリコール酸、またはアクリル酸（２−ホスホ−
１，１−ジメチルエチルアミド）のホモポリマーおよび
／または前記モノマーのコポリマーが好ましい。
【００１０】本発明のアニオン櫛型ポリマーは２×１０
4 −５×１０6 ダルトンの分子量（ゲル透過クロマトグ
ラフィーによる）をもつことが好ましく、特におよそ５
×１０5 ダルトンの分子量が好ましい。本発明のアニオ
ン櫛型ポリマーは、当業者に知られた溶液重合、懸濁重
合または乳化重合のような方法を使って製造することが
できる（Meth. d. Organ. Chemie (Houben-Weyl), Bd.
E 20, Makrom. Stoffe, Thieme Verlag, Stuttgart, 19
87) 。好ましい方法は、例えば Polymer 31 (1990), 12
69-1276 (Huglin and Rego) に記載されるような溶液重
合である。重合方法は水性系に含まれかつフリーラジカ
ルを形成する通常の開始剤、特に過酸化物、過硫酸塩ま
たは過硫酸塩／重亜硫酸塩、もしくは対応するアゾ化合
物によって促進される。これも当業者に公知である。本
発明のアニオン櫛型ポリマーの製造に適する開始剤はペ
ルオクソ二硫酸アンモニウムである。
4 −５×１０6 ダルトンの分子量（ゲル透過クロマトグ
ラフィーによる）をもつことが好ましく、特におよそ５
×１０5 ダルトンの分子量が好ましい。本発明のアニオ
ン櫛型ポリマーは、当業者に知られた溶液重合、懸濁重
合または乳化重合のような方法を使って製造することが
できる（Meth. d. Organ. Chemie (Houben-Weyl), Bd.
E 20, Makrom. Stoffe, Thieme Verlag, Stuttgart, 19
87) 。好ましい方法は、例えば Polymer 31 (1990), 12
69-1276 (Huglin and Rego) に記載されるような溶液重
合である。重合方法は水性系に含まれかつフリーラジカ
ルを形成する通常の開始剤、特に過酸化物、過硫酸塩ま
たは過硫酸塩／重亜硫酸塩、もしくは対応するアゾ化合
物によって促進される。これも当業者に公知である。本
発明のアニオン櫛型ポリマーの製造に適する開始剤はペ
ルオクソ二硫酸アンモニウムである。
【００１１】１種または数種の本発明ポリアニオンの濃
度は０．０１−０．５０ｍｇ／ｍｌであり、０．０５−
０．３０ｍｇ／ｍｌの範囲が好ましい。０．０７−０．
２０ｍｇ／ｍｌの範囲が特に好ましい。一般に、本発明
の測定では、緩衝能が弱酸性、中性または弱アルカリ性
のｐＨ範囲にある緩衝物質を使用することができる。特
に好ましい物質は酢酸ナトリウムおよび／またはクエン
酸である。これらの緩衝物質の１つを用いる場合の測定
では、ｐＨ５−６の範囲のｐＨ値が好ましく、５．１０
−５．５０の範囲がより好ましく、５．２０−５．３０
のｐＨ範囲が特に好ましい。緩衝剤の濃度は０．０３−
０．１５ｍｏｌ／ｌの範囲であるべきである。特に好ま
しい濃度範囲は０．０５−０．０７ｍｏｌ／ｌである。
度は０．０１−０．５０ｍｇ／ｍｌであり、０．０５−
０．３０ｍｇ／ｍｌの範囲が好ましい。０．０７−０．
２０ｍｇ／ｍｌの範囲が特に好ましい。一般に、本発明
の測定では、緩衝能が弱酸性、中性または弱アルカリ性
のｐＨ範囲にある緩衝物質を使用することができる。特
に好ましい物質は酢酸ナトリウムおよび／またはクエン
酸である。これらの緩衝物質の１つを用いる場合の測定
では、ｐＨ５−６の範囲のｐＨ値が好ましく、５．１０
−５．５０の範囲がより好ましく、５．２０−５．３０
のｐＨ範囲が特に好ましい。緩衝剤の濃度は０．０３−
０．１５ｍｏｌ／ｌの範囲であるべきである。特に好ま
しい濃度範囲は０．０５−０．０７ｍｏｌ／ｌである。
【００１２】その他の好適な態様としては、トリス・Ｈ
Ｃｌ緩衝剤、ビス〔２−ヒドロキシエチル〕イミノ−ト
リス〔ヒドロキシメチル〕メタン（ビス−トリス）また
は１−〔Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−アミ
ノ〕−２−プロパノール（ＢＡＰ）緩衝剤を２価金属イ
オンの存在下で使用するものであり、その際の緩衝剤の
濃度は０．０１−０．１５ｍｏｌ／ｌの範囲であり、金
属塩の濃度は０．０１−０．２０ｍｏｌ／ｌの範囲であ
り、そしてｐＨ範囲は５．５−９．０である。特に好ま
しい態様では、緩衝剤の濃度が０．０２−０．１ｍｏｌ
／ｌの範囲であり、金属塩の濃度が０．０２−０．１５
ｍｏｌ／ｌの範囲であり、そしてｐＨ範囲は７．０−
８．５である。一般に、知られている２価金属イオンの
塩はどれも使用できるが、好ましいイオンはＭｇ2+、Ｃ
ａ2+、Ｍｎ2+およびＣｕ2+である。Ｍｇ2+とＣａ2+が特
に好ましい。ポリアニオンの濃度は上記のように選択し
なければならない。
Ｃｌ緩衝剤、ビス〔２−ヒドロキシエチル〕イミノ−ト
リス〔ヒドロキシメチル〕メタン（ビス−トリス）また
は１−〔Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−アミ
ノ〕−２−プロパノール（ＢＡＰ）緩衝剤を２価金属イ
オンの存在下で使用するものであり、その際の緩衝剤の
濃度は０．０１−０．１５ｍｏｌ／ｌの範囲であり、金
属塩の濃度は０．０１−０．２０ｍｏｌ／ｌの範囲であ
り、そしてｐＨ範囲は５．５−９．０である。特に好ま
しい態様では、緩衝剤の濃度が０．０２−０．１ｍｏｌ
／ｌの範囲であり、金属塩の濃度が０．０２−０．１５
ｍｏｌ／ｌの範囲であり、そしてｐＨ範囲は７．０−
８．５である。一般に、知られている２価金属イオンの
塩はどれも使用できるが、好ましいイオンはＭｇ2+、Ｃ
ａ2+、Ｍｎ2+およびＣｕ2+である。Ｍｇ2+とＣａ2+が特
に好ましい。ポリアニオンの濃度は上記のように選択し
なければならない。
【００１３】本発明の他の主題は、本発明のアニオン櫛
型ポリマーとｐＨ範囲５−９の緩衝物質を含む試薬であ
る。ポリアニオンの量は０．０１−０．５０ｍｇ／ｍｌ
（試薬溶液）の範囲であり、好ましくはポリ−（２−ア
クリルアミド−２−メチル−１−プロパンスルホン酸）
（ＰＡＭＰＳ）、ポリ−アクリル酸（２−ホスホ−１，
１−ジメチルエチルアミド）（ＰＡＰ）、ポリ−２−ア
クリルアミドグリコール酸（ＰＡＡＧ）、ポリ−（２−
アクリルアミド−２−メチル−１−プロパンスルホン酸
−ＣＯ−２−アクリルアミドグリコール酸）〔Ｐ（ＡＭ
ＰＳ−ＡＡＧ）〕および／または対応するコポリマーお
よび／または対応するポリ（メト）アクリル酸エステル
が０．０５−０．３０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で、より好
ましくは０．０７−０．２０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で添
加される。酢酸ナトリウム、トリス・ＨＣｌ、ビス−ト
リス、ＢＡＰおよび／またはクエン酸が特に好ましい緩
衝物質であるとわかった。緩衝剤の好ましい濃度は０．
０１−０．１５ｍｏｌ／ｌの範囲である。
型ポリマーとｐＨ範囲５−９の緩衝物質を含む試薬であ
る。ポリアニオンの量は０．０１−０．５０ｍｇ／ｍｌ
（試薬溶液）の範囲であり、好ましくはポリ−（２−ア
クリルアミド−２−メチル−１−プロパンスルホン酸）
（ＰＡＭＰＳ）、ポリ−アクリル酸（２−ホスホ−１，
１−ジメチルエチルアミド）（ＰＡＰ）、ポリ−２−ア
クリルアミドグリコール酸（ＰＡＡＧ）、ポリ−（２−
アクリルアミド−２−メチル−１−プロパンスルホン酸
−ＣＯ−２−アクリルアミドグリコール酸）〔Ｐ（ＡＭ
ＰＳ−ＡＡＧ）〕および／または対応するコポリマーお
よび／または対応するポリ（メト）アクリル酸エステル
が０．０５−０．３０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で、より好
ましくは０．０７−０．２０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で添
加される。酢酸ナトリウム、トリス・ＨＣｌ、ビス−ト
リス、ＢＡＰおよび／またはクエン酸が特に好ましい緩
衝物質であるとわかった。緩衝剤の好ましい濃度は０．
０１−０．１５ｍｏｌ／ｌの範囲である。
【００１４】ＬＤＬを測定する場合、試薬のｐＨ範囲は
５．１−９．０であり、ｐＨ５．１−５．５またはｐＨ
７．０−８．５が好ましい。アッセイ温度は１０−４０
℃の範囲で変化させることができ、好ましい温度は約３
７℃である。分析すべき試料と試薬溶液との容量比は変
化しうる。１：１−１：１００の比が好ましいとわかっ
た。好適な態様では、約１０容量部の血清試料（例えば
１０μｌ）を３５０容量部の試薬溶液（例えば３５０μ
ｌ）と混合する。
５．１−９．０であり、ｐＨ５．１−５．５またはｐＨ
７．０−８．５が好ましい。アッセイ温度は１０−４０
℃の範囲で変化させることができ、好ましい温度は約３
７℃である。分析すべき試料と試薬溶液との容量比は変
化しうる。１：１−１：１００の比が好ましいとわかっ
た。好適な態様では、約１０容量部の血清試料（例えば
１０μｌ）を３５０容量部の試薬溶液（例えば３５０μ
ｌ）と混合する。
【００１５】公知の沈殿試薬と比較して、本発明のアニ
オン櫛型ポリマーにおいて認められたＬＤＬ特異的凝集
は次のような利点をもっている： １．試料の予備処理を必要としない迅速な測定（約１−
１０分）； ２．形成された凝集物が安定した状態で存在し、かくし
て直接、再現可能に測定できる； ３．ＬＤＬコレステロールの定量が非常に広い測定範囲
で線形である（５０−３５０ｍｇ／ｄｌのＬＤＬコレス
テロール）； ４．ＬＤＬを除いて、他のアポタンパク質Ｂ含有リポタ
ンパク質（超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、Ｌｐ
（ａ））および／またはキロミクロンが本発明のポリア
ニオンと相互に作用せず、かくして検出されない。
オン櫛型ポリマーにおいて認められたＬＤＬ特異的凝集
は次のような利点をもっている： １．試料の予備処理を必要としない迅速な測定（約１−
１０分）； ２．形成された凝集物が安定した状態で存在し、かくし
て直接、再現可能に測定できる； ３．ＬＤＬコレステロールの定量が非常に広い測定範囲
で線形である（５０−３５０ｍｇ／ｄｌのＬＤＬコレス
テロール）； ４．ＬＤＬを除いて、他のアポタンパク質Ｂ含有リポタ
ンパク質（超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、Ｌｐ
（ａ））および／またはキロミクロンが本発明のポリア
ニオンと相互に作用せず、かくして検出されない。
【００１６】これまで知られていないやり方で、本発明
の方法および試薬は、他のリポタンパク質画分を前もっ
て分離する必要性なしに、１−５分以内でＬＤＬ粒子を
完全に凝集させる。従って、ＬＤＬ濃度またはＬＤＬコ
レステロール測定用の分析器または簡便な光度計（濁度
計）を使用することが可能であり、このことは日常的な
分析作業にとって望ましい。さらに、ＬＤＬ凝集物中に
存在するアポタンパク質Ｂ−１００および／またはＬＤ
Ｌ粒子の他の分子成分を測定することも可能である。
の方法および試薬は、他のリポタンパク質画分を前もっ
て分離する必要性なしに、１−５分以内でＬＤＬ粒子を
完全に凝集させる。従って、ＬＤＬ濃度またはＬＤＬコ
レステロール測定用の分析器または簡便な光度計（濁度
計）を使用することが可能であり、このことは日常的な
分析作業にとって望ましい。さらに、ＬＤＬ凝集物中に
存在するアポタンパク質Ｂ−１００および／またはＬＤ
Ｌ粒子の他の分子成分を測定することも可能である。
【００１７】本発明方法が線形の測定シグナルを形成す
る広範な測定範囲には、診断上関係のある範囲、特に上
昇したＬＤＬ値（＞１９０ｍｇ／ｄｌ）の範囲が含ま
れ、これはワンポイント較正法のみを必要とするという
利点を有する。延長された線形範囲の他の結果として、
リポタンパク質の電気泳動または超遠心分離のような複
雑な基準方法を必要とせずに、より正確な方法でＬＤＬ
の上昇レベルを定量的にモニターすることもできる。
る広範な測定範囲には、診断上関係のある範囲、特に上
昇したＬＤＬ値（＞１９０ｍｇ／ｄｌ）の範囲が含ま
れ、これはワンポイント較正法のみを必要とするという
利点を有する。延長された線形範囲の他の結果として、
リポタンパク質の電気泳動または超遠心分離のような複
雑な基準方法を必要とせずに、より正確な方法でＬＤＬ
の上昇レベルを定量的にモニターすることもできる。
【００１８】本発明の方法および試薬はＬＤＬを凝集さ
せるが、ＬＤＬ様Ｌｐ（ａ）は凝集させない。このこと
は、知られているＬＤＬ沈殿試薬の全てがＬｐ（ａ）画
分をほぼ定量的に沈殿させることを考慮すると、驚くべ
きことである。かくして、本発明の場合には、本発明に
よるＬＤＬ凝集および定量後に、当業者に知られている
方法でジスルフィド橋を介して連結されるＬｐ（ａ）粒
子のＬｐ（ａ）部分を還元的に切断することにより簡単
な方法でＬｐ（ａ）画分を定量することも可能である。
その後、差をとることにより、リポタンパク質（ａ）の
含有量を求めることができる。
せるが、ＬＤＬ様Ｌｐ（ａ）は凝集させない。このこと
は、知られているＬＤＬ沈殿試薬の全てがＬｐ（ａ）画
分をほぼ定量的に沈殿させることを考慮すると、驚くべ
きことである。かくして、本発明の場合には、本発明に
よるＬＤＬ凝集および定量後に、当業者に知られている
方法でジスルフィド橋を介して連結されるＬｐ（ａ）粒
子のＬｐ（ａ）部分を還元的に切断することにより簡単
な方法でＬｐ（ａ）画分を定量することも可能である。
その後、差をとることにより、リポタンパク質（ａ）の
含有量を求めることができる。
【００１９】さらに、分析器上で本発明方法を実施する
ために、それぞれの反応成分を担体材料に含浸させる
か、共有結合で結合させることができる。担体材料は吸
収性、膨潤性またはフィルム形成性の材料、例えば紙や
フリース材料（例えばティーバッグの紙）のような試験
片に使用できる担体材料でありうる。反応成分は複数の
担体（それらを相互に連結させて、それら自体を担体材
料として使用し得る）に分配することができる。
ために、それぞれの反応成分を担体材料に含浸させる
か、共有結合で結合させることができる。担体材料は吸
収性、膨潤性またはフィルム形成性の材料、例えば紙や
フリース材料（例えばティーバッグの紙）のような試験
片に使用できる担体材料でありうる。反応成分は複数の
担体（それらを相互に連結させて、それら自体を担体材
料として使用し得る）に分配することができる。
【００２０】
【実施例】以下の実施例は本発明をより詳細に説明する
ためのものである。実施例１ (a) ラジカル重合によるポリ−（２−アクリルアミド−
２−メチル−１−プロパンスルホン酸）（ＰＡＭＰＳ）
の製造 ２−アクリルアミド−２−メチル−１−プロパンスルホ
ン酸（ＡＭＰＳ）８．４１２ｇを再蒸留水１００ｍｌに
溶解し、この溶液を窒素に３０分間さらすか、超音波浴
中で処理した。このバッチに、再蒸留水１００ｍｌ中の
ペルオクソ二硫酸アンモニウム２２．８ｍｇの溶液（予
め窒素に３０分間さらすか、超音波浴中で処理したも
の）を激しく攪拌しながら加え、５０℃まで加熱した。
３０分後、温度を７０℃に上げ、反応混合物を２０ｍｌ
の容量にまで減少させた。１２−１４０００ダルトンの
排出限界を有する透析チューブを使って、この反応混合
物を４日間再蒸留水に対して透析した。透析物を乾燥す
るまで蒸発させ、平均分子量５×１０5 ダルトン（ゲル
透過クロマトグラフィー）の結晶質ＰＡＭＰＳを得た。
ためのものである。実施例１ (a) ラジカル重合によるポリ−（２−アクリルアミド−
２−メチル−１−プロパンスルホン酸）（ＰＡＭＰＳ）
の製造 ２−アクリルアミド−２−メチル−１−プロパンスルホ
ン酸（ＡＭＰＳ）８．４１２ｇを再蒸留水１００ｍｌに
溶解し、この溶液を窒素に３０分間さらすか、超音波浴
中で処理した。このバッチに、再蒸留水１００ｍｌ中の
ペルオクソ二硫酸アンモニウム２２．８ｍｇの溶液（予
め窒素に３０分間さらすか、超音波浴中で処理したも
の）を激しく攪拌しながら加え、５０℃まで加熱した。
３０分後、温度を７０℃に上げ、反応混合物を２０ｍｌ
の容量にまで減少させた。１２−１４０００ダルトンの
排出限界を有する透析チューブを使って、この反応混合
物を４日間再蒸留水に対して透析した。透析物を乾燥す
るまで蒸発させ、平均分子量５×１０5 ダルトン（ゲル
透過クロマトグラフィー）の結晶質ＰＡＭＰＳを得た。
【００２１】同様にして、次のアニオン櫛型ポリマーを
製造した： (b): ポリ−メタクリル酸−（２−スルホプロピルエス
テル）（ＰＭＡＳ）； (c): ポリ−２−アクリルアミドグリコール酸（ＰＡＡ
Ｇ）； (d): ポリ−アクリル酸−（２−ホスホ−１，１−ジメ
チル−エチルアミド）（ＰＡＰ）；および (e): ポリ−（２−アクリルアミド−２−メチル−１−
プロパンスルホン酸−ＣＯ−２−アクリルアミドグリコ
ール酸）〔Ｐ（ＡＭＰＳ−ＡＡＧ）〕、１：１の比のＡ
ＭＰＳとＡＡＧから。
製造した： (b): ポリ−メタクリル酸−（２−スルホプロピルエス
テル）（ＰＭＡＳ）； (c): ポリ−２−アクリルアミドグリコール酸（ＰＡＡ
Ｇ）； (d): ポリ−アクリル酸−（２−ホスホ−１，１−ジメ
チル−エチルアミド）（ＰＡＰ）；および (e): ポリ−（２−アクリルアミド−２−メチル−１−
プロパンスルホン酸−ＣＯ−２−アクリルアミドグリコ
ール酸）〔Ｐ（ＡＭＰＳ−ＡＡＧ）〕、１：１の比のＡ
ＭＰＳとＡＡＧから。
【００２２】実施例２ ＬＤＬコレステロールの定量 試薬溶液：０．１５ｍｇ／ｍｌ ＰＡＭＰＳ（遊離酸） ０．０５ｍｏｌ／ｌ 酢酸ナトリウム／クエン酸、ｐＨ
５．２０（ｐＨを調整するために酢酸またはクエン酸
（０．０５ｍｏｌ／ｌ）を使用した） 試料：血清 血清試料１０μｌと試薬溶液３５０μｌを３７℃で混合
した。１−２分後、濁りの結果としての吸光度の増加を
５０５ｎｍで測定した。ＬＤＬコレステロールの較正は
既知のＬＤＬコレステロール含有量の血清試料（標準）
を用いて行った。脂肪血症の血清試料を分析する場合
は、特に試料ブランクの補正を行うべきである。
５．２０（ｐＨを調整するために酢酸またはクエン酸
（０．０５ｍｏｌ／ｌ）を使用した） 試料：血清 血清試料１０μｌと試薬溶液３５０μｌを３７℃で混合
した。１−２分後、濁りの結果としての吸光度の増加を
５０５ｎｍで測定した。ＬＤＬコレステロールの較正は
既知のＬＤＬコレステロール含有量の血清試料（標準）
を用いて行った。脂肪血症の血清試料を分析する場合
は、特に試料ブランクの補正を行うべきである。
【００２３】
【表１】 回帰分析： 定数 ０．５２８ 標準偏差Ｙ ５．５７７ Ｒ二乗 ０．９９８ 測定数 ４ 自由度 ２ Ｘ係数 ５４１．８９１ 標準偏差ｄ． １５．１８５ Ｒ＝０．９９９
【００２４】2.1 ｐＨ値に依存するＬＤＬコレステロ
ールの定量（ＰＡＭＰＳ） この方法は実施例２に記載するように行った。但し、ｐ
Ｈ値がそれぞれ５．３０、５．４０および５．５０の３
つの追加の試薬混合物を調製した。
ールの定量（ＰＡＭＰＳ） この方法は実施例２に記載するように行った。但し、ｐ
Ｈ値がそれぞれ５．３０、５．４０および５．５０の３
つの追加の試薬混合物を調製した。
【００２５】対応する結果を表２および図２に示す。さ
らに、表２には従来技術の方法（クアントリップ（Quan
tolip:登録商標),Immuno GmbH 製, Heidelberg, FRG ）
を用いて得られた測定結果と、それぞれのトリグリセリ
ド（ＴＧ）含有量も示してある。
らに、表２には従来技術の方法（クアントリップ（Quan
tolip:登録商標),Immuno GmbH 製, Heidelberg, FRG ）
を用いて得られた測定結果と、それぞれのトリグリセリ
ド（ＴＧ）含有量も示してある。
【００２６】
【表２】
【００２７】2.2 ＬＤＬコレステロールの定量：ＬＤ
Ｌ含有量（ＬＤＬを添加）への依存 ヒト血清を含む試料に、Wieland, H. and Seidel, D.
(Clin. Chem., 28(1982), 1335-1337) に従って超遠心
分離機を用いて単離したＬＤＬ（１．００６−１．０６
３ｇ／ｍｌの密度画分）を加えた。定量は実施例２に記
載するように行った。
Ｌ含有量（ＬＤＬを添加）への依存 ヒト血清を含む試料に、Wieland, H. and Seidel, D.
(Clin. Chem., 28(1982), 1335-1337) に従って超遠心
分離機を用いて単離したＬＤＬ（１．００６−１．０６
３ｇ／ｍｌの密度画分）を加えた。定量は実施例２に記
載するように行った。
【００２８】
【表３】 回収率（ＬＤＬコレステロール） 平均値：９８％ Ｐ１：０．０５ｍｏｌ／ｌ酢酸ナトリウム／クエン酸緩
衝液，ｐＨ５．２０ ＩＶ＝初期値
衝液，ｐＨ５．２０ ＩＶ＝初期値
【００２９】2.3 ＬＤＬコレステロールの定量：トリ
グリセリド（ＴＧ）に富む血清試料を用いた場合のＬＤ
Ｌ含有量（ＬＤＬを添加）への依存 2.2 に示したように、血清試料にＬＤＬを添加した。
グリセリド（ＴＧ）に富む血清試料を用いた場合のＬＤ
Ｌ含有量（ＬＤＬを添加）への依存 2.2 に示したように、血清試料にＬＤＬを添加した。
【００３０】
【表４】 回収率（ＬＤＬコレステロール） 平均値：１０８％
【００３１】実施例３：方法の比較 3.1 本発明方法（ＰＡＭＰＳ）と超遠心分離法（Ｕ
Ｃ、基準方法）の比較 この方法は Armstrong, V.W. and Seidel, D. (Arztl.
Lab. 31 (1985), p.325-330)に従って行った。
Ｃ、基準方法）の比較 この方法は Armstrong, V.W. and Seidel, D. (Arztl.
Lab. 31 (1985), p.325-330)に従って行った。
【００３２】ＬＤＬコレステロールの結果を表５および
図５に示す。
図５に示す。
【００３３】
【表５】 回帰分析： 定数 −１．１６６ 標準偏差Ｙ ６．９５９ Ｒ二乗 ０．９６１ 測定数 １３ 自由度 １１ Ｘ係数 １．０２４ 標準偏差ｄ． ０．０６１ Ｒ＝０．９８０
【００３４】3.2 本発明方法（ＰＡＭＰＳ）とデキス
トラン硫酸法の比較 ＰＡＭＰＳによるＬＤＬコレステロールの測定は実施例
２に記載したように行った。デキストラン硫酸によるＬ
ＤＬコレステロールの測定の場合には、ImmunoGmbH 製
のクアントリップ（登録商標）を製造者の指示通りに使
用した。
トラン硫酸法の比較 ＰＡＭＰＳによるＬＤＬコレステロールの測定は実施例
２に記載したように行った。デキストラン硫酸によるＬ
ＤＬコレステロールの測定の場合には、ImmunoGmbH 製
のクアントリップ（登録商標）を製造者の指示通りに使
用した。
【００３５】ＬＤＬコレステロールの比較測定の結果を
表６および図６に示す。
表６および図６に示す。
【００３６】
【表６】 回帰分析： 定数 ９．７５８ 標準偏差Ｙ １０．４３８ Ｒ二乗 ０．９５２ 測定数 １６ 自由度 １４ Ｘ係数 ０．９１１ 標準偏差ｄ． ０．０５４ Ｒ＝０．９７６
【００３７】3.3 ＬＤＬコレステロールの定量に及ぼ
す遊離脂肪酸（ＦＦＡ）の影響 デキストラン硫酸（ＤＳ，クアントリップ，Immuno Gmb
H 製, Heidelberg）またはポリ硫酸ビニル沈殿試薬（Bo
ehringer Mannheim ）を用いると、分析すべき物質中に
高濃度の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）が存在する場合、ＬＤＬ
コレステロールの測定において望ましくない干渉が起こ
った。２ｍｍｏｌ／ｌより高い血清レベルの遊離脂肪酸
（正常範囲：０．３−１．０ｍｍｏｌ／ｌ）は、ＬＤＬ
粒子とこれらの沈殿試薬との相互作用を妨げて不完全な
ＬＤＬ沈殿に導き、従って測定値を不当に低下させた。
この好ましくない性質は、分析すべき物質をあまりに長
期間、またはあまりに暑い環境で貯蔵した場合にも、in
vitro脂肪分解の増加のために生じた（Seidel, D., Ar
mstrong, V.W., Cremer, P., Internist 28 (1987), 60
6-614 ）。
す遊離脂肪酸（ＦＦＡ）の影響 デキストラン硫酸（ＤＳ，クアントリップ，Immuno Gmb
H 製, Heidelberg）またはポリ硫酸ビニル沈殿試薬（Bo
ehringer Mannheim ）を用いると、分析すべき物質中に
高濃度の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）が存在する場合、ＬＤＬ
コレステロールの測定において望ましくない干渉が起こ
った。２ｍｍｏｌ／ｌより高い血清レベルの遊離脂肪酸
（正常範囲：０．３−１．０ｍｍｏｌ／ｌ）は、ＬＤＬ
粒子とこれらの沈殿試薬との相互作用を妨げて不完全な
ＬＤＬ沈殿に導き、従って測定値を不当に低下させた。
この好ましくない性質は、分析すべき物質をあまりに長
期間、またはあまりに暑い環境で貯蔵した場合にも、in
vitro脂肪分解の増加のために生じた（Seidel, D., Ar
mstrong, V.W., Cremer, P., Internist 28 (1987), 60
6-614 ）。
【００３８】ヒト血清を含む試料は、Spector and Hoa
k, Anal. Biochem. 32 (1969), 297-302 に従って遊離
脂肪酸（ＦＦＡ：ステアリン酸、パルミチン酸）を富化
させた。
k, Anal. Biochem. 32 (1969), 297-302 に従って遊離
脂肪酸（ＦＦＡ：ステアリン酸、パルミチン酸）を富化
させた。
【００３９】
【表７】
【００４０】3.4 超低密度リポタンパク質（ＶＬＤ
Ｌ）の共凝集 アポタンパク質Ｂ含有ＶＬＤＬ粒子の存在下でのＬＤＬ
粒子に対する本発明試薬の選択的凝集特性を実証するた
めに、公知方法で超遠心分離機により単離した１容量部
のＶＬＤＬ（コレステロール：１５３ｍｇ／ｄｌ；トリ
グリセリド：４８８ｍｇ／ｄｌ）を１容量部の血清試料
（総コレステロール：３３４ｍｇ／ｄｌ；トリグリセリ
ド：１０７ｍｇ／ｄｌ；ＬＤＬコレステロール：２４１
ｍｇ／ｄｌ）に加えた。
Ｌ）の共凝集 アポタンパク質Ｂ含有ＶＬＤＬ粒子の存在下でのＬＤＬ
粒子に対する本発明試薬の選択的凝集特性を実証するた
めに、公知方法で超遠心分離機により単離した１容量部
のＶＬＤＬ（コレステロール：１５３ｍｇ／ｄｌ；トリ
グリセリド：４８８ｍｇ／ｄｌ）を１容量部の血清試料
（総コレステロール：３３４ｍｇ／ｄｌ；トリグリセリ
ド：１０７ｍｇ／ｄｌ；ＬＤＬコレステロール：２４１
ｍｇ／ｄｌ）に加えた。
【００４１】続いて、本発明試薬（ＰＡＭＰＳ）を用い
たＬＤＬコレステロール濃度の濁り度測定により、１２
５ｍｇ／ｄｌの測定値を得た。従って、本発明の方法は
アポタンパク質Ｂ含有ＬＤＬ粒子の凝集に対して非常に
選択的である。デキストラン硫酸沈殿法（クアントリッ
プ）を用いた場合は、ＬＤＬコレステロール濃度の初期
値が２４０ｍｇ／ｄｌと測定された。ＶＬＤＬを１：１
（ｖ／ｖ）の比で加えた血清では、４９ｍｇ／ｄｌの値
を得た。この不当に低いＬＤＬコレステロール値は、当
業者に知られているデキストラン硫酸沈殿試薬を用いた
とき、トリグリセリドとＶＬＤＬに富む血清において不
完全なＬＤＬ沈殿が起こった結果である。
たＬＤＬコレステロール濃度の濁り度測定により、１２
５ｍｇ／ｄｌの測定値を得た。従って、本発明の方法は
アポタンパク質Ｂ含有ＬＤＬ粒子の凝集に対して非常に
選択的である。デキストラン硫酸沈殿法（クアントリッ
プ）を用いた場合は、ＬＤＬコレステロール濃度の初期
値が２４０ｍｇ／ｄｌと測定された。ＶＬＤＬを１：１
（ｖ／ｖ）の比で加えた血清では、４９ｍｇ／ｄｌの値
を得た。この不当に低いＬＤＬコレステロール値は、当
業者に知られているデキストラン硫酸沈殿試薬を用いた
とき、トリグリセリドとＶＬＤＬに富む血清において不
完全なＬＤＬ沈殿が起こった結果である。
【００４２】3.5 Ｌｐ（ａ）の共凝集 総コレステロール濃度が１０４ｍｇ／ｄｌで、ＬＤＬコ
レステロール濃度が１０４ｍｇ／ｄｌで、本発明方法に
より測定したＬＤＬコレステロール濃度が７１ｍｇ／ｄ
ｌである１容量部のＬｐ（ａ）を含まない正常グリセリ
ド値の血清（トリグリセリド：１２０ｍｇ／ｄｌ）を、
１容量部の単離Ｌｐ（ａ）〔コレステロール濃度：１２
０ｍｇ／ｄｌ；Armstrong, V.W., Walli, A.K., Seide
l, D.J.,Lipid Research, 1985, 26, 1314-1323 〕に加
えた。続いて、本発明試薬（ＰＡＭＰＳ）を用いたＬＤ
Ｌコレステロール濃度の濁り度測定により、３４ｍｇ／
ｄｌの測定値を得た。
レステロール濃度が１０４ｍｇ／ｄｌで、本発明方法に
より測定したＬＤＬコレステロール濃度が７１ｍｇ／ｄ
ｌである１容量部のＬｐ（ａ）を含まない正常グリセリ
ド値の血清（トリグリセリド：１２０ｍｇ／ｄｌ）を、
１容量部の単離Ｌｐ（ａ）〔コレステロール濃度：１２
０ｍｇ／ｄｌ；Armstrong, V.W., Walli, A.K., Seide
l, D.J.,Lipid Research, 1985, 26, 1314-1323 〕に加
えた。続いて、本発明試薬（ＰＡＭＰＳ）を用いたＬＤ
Ｌコレステロール濃度の濁り度測定により、３４ｍｇ／
ｄｌの測定値を得た。
【００４３】デキストラン硫酸沈殿法（クアントリッ
プ）を用いた場合は、ＬＤＬコレステロール濃度の初期
値が７２ｍｇ／ｄｌと測定された。Ｌｐ（ａ）を１：１
（ｖ／ｖ）の比で加えた血清では、９６ｍｇ／ｄｌの値
を得た。このことは、デキストラン硫酸試薬が望ましく
ない方法でＬｐ（ａ）画分をも定量的に沈殿させること
を実証している。かくして、本発明方法は有利にもＬｐ
（ａ）粒子を凝集させず、それらをＬＤＬ粒子として誤
って検出することがない。
プ）を用いた場合は、ＬＤＬコレステロール濃度の初期
値が７２ｍｇ／ｄｌと測定された。Ｌｐ（ａ）を１：１
（ｖ／ｖ）の比で加えた血清では、９６ｍｇ／ｄｌの値
を得た。このことは、デキストラン硫酸試薬が望ましく
ない方法でＬｐ（ａ）画分をも定量的に沈殿させること
を実証している。かくして、本発明方法は有利にもＬｐ
（ａ）粒子を凝集させず、それらをＬＤＬ粒子として誤
って検出することがない。
【図１】ＬＤＬコレステロールの濁り度測定における測
定シグナルの線形性を示した図である。
定シグナルの線形性を示した図である。
【図２】本発明方法のｐＨ依存性を示した図である。緩
衝剤濃度：０．１５ｍｇ／ｍｌ酢酸ナトリウム／０．０
７ｍｏｌ／ｌクエン酸。
衝剤濃度：０．１５ｍｇ／ｍｌ酢酸ナトリウム／０．０
７ｍｏｌ／ｌクエン酸。
【図３】ＬＤＬ（超遠心分離ＵＣ）を添加した正常血清
試料のＬＤＬコレステロールの濁り度測定におけるＬＤ
Ｌ依存性を示した図である。
試料のＬＤＬコレステロールの濁り度測定におけるＬＤ
Ｌ依存性を示した図である。
【図４】ＬＤＬ（ＵＣ）を添加したＴＧ富化血清試料の
ＬＤＬコレステロールの濁り度測定におけるＬＤＬ依存
性を示した図である。
ＬＤＬコレステロールの濁り度測定におけるＬＤＬ依存
性を示した図である。
【図５】本発明方法（ＰＡＭＰＳ）と超遠心分離法（Ｕ
Ｃ）を用いたＬＤＬコレステロールの比較測定の結果を
示した図である。
Ｃ）を用いたＬＤＬコレステロールの比較測定の結果を
示した図である。
【図６】本発明方法（ＰＡＭＰＳ）とデキストラン硫酸
を用いたＬＤＬコレステロールの比較測定の結果を示し
た図である。
を用いたＬＤＬコレステロールの比較測定の結果を示し
た図である。
【図７】a) 本発明のＰＡＭＰＳ試薬；（０．０５ｍｏ
ｌ／ｌ酢酸ナトリウム／クエン酸、ｐＨ５．２０） b) デキストラン硫酸沈殿試薬；（クアントリップ：登
録商標） を用いて測定したＬＤＬコレステロールレベルに対する
遊離脂肪酸（ＦＦＡ）の影響を示した図である。
ｌ／ｌ酢酸ナトリウム／クエン酸、ｐＨ５．２０） b) デキストラン硫酸沈殿試薬；（クアントリップ：登
録商標） を用いて測定したＬＤＬコレステロールレベルに対する
遊離脂肪酸（ＦＦＡ）の影響を示した図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ヴォルフ−ディーター エンゲル ドイツ連邦共和国 Ｄ−82340 フェルダ フィンク アオミラーシュトラーセ ９エ イ (72)発明者 アンゲリカ クールレ−ヴァイテンヒラー ドイツ連邦共和国 Ｄ−82327 チュトツ ィンク アム ホーヘンベルク 12
Claims (6)
- 【請求項１】 緩衝剤とＬＤＬ凝集剤を添加し、そして
ＬＤＬ凝集物を直接測定することを特徴とする、他の血
清リポタンパク質の存在下でＬＤＬ画分を特異的に定量
する方法。 - 【請求項２】 アルカンスルホン酸、アルカンホスホン
酸および／またはアルカン炭酸の側基を有する分子量２
０，０００−５，０００，０００ダルトン（ゲル透過ク
ロマトグラフィー）の水溶性櫛型ポリマーをＬＤＬ凝集
剤として添加し、かつｐＨが５−９の範囲であることを
特徴とする、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 ＬＤＬ凝集剤が反応混合物中に０．０５
−０．３０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在することを特徴とす
る、請求項１または２記載の方法。 - 【請求項４】 ポリ−（２−アクリルアミド−２−メチ
ル−１−プロパンスルホン酸）、ポリ−２−アクリルア
ミド−グリコール酸、ポリ−アクリル酸−（２−ホスホ
−１，１−ジメチル−エチルアミド）および／またはポ
リ−（２−アクリルアミド−２−メチル−１−プロパン
スルホン酸−ＣＯ−２−アクリルアミドグリコール酸）
および／または対応する共重合体および／またはポリ
（メト）アクリル酸エステルおよびそれらの共重合体を
添加することを特徴とする、請求項１−３のいずれか１
つに記載の方法。 - 【請求項５】 添加されるＬＤＬ凝集剤が、一般式
（Ｉ）： 【化１】 〔式中、基Ｒ1 は水素または低級炭化水素基（好ましく
はメチル基）であり、Ｘは酸素原子またはＮＨ基であ
り、Ａは２−１０個の炭素原子からなる直鎖状または分
枝状の炭化水素鎖であり（分枝鎖が好ましい）、そして
Ｚは 【化２】 である〕で表されるモノマーから構成されることを特徴
とする、請求項１−４のいずれか１つに記載の方法。 - 【請求項６】 (1) アルカンスルホン酸、アルカンホス
ホン酸および／またはアルカン炭酸の側基を有する櫛型
ポリマー、および(2) ｐＨ５−９の緩衝剤を含有し、当
該ポリアニオンが２０，０００−５，０００，０００ダ
ルトン（ゲル透過クロマトグラフィー）の分子量を有
し、そして当該緩衝剤が酢酸ナトリウム、トリス−ＨＣ
ｌ、ビス−トリスまたはＢＡＰおよび／またはクエン酸
であることを特徴とする、他の血清リポタンパク質の存
在下でＬＤＬを特異的に定量するための試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4223355:0 | 1992-07-16 | ||
| DE4223355A DE4223355A1 (de) | 1992-07-16 | 1992-07-16 | Verfahren und Reagenz zur spezifischen Bestimmung von LDL in Serumproben |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06213899A true JPH06213899A (ja) | 1994-08-05 |
| JP2609505B2 JP2609505B2 (ja) | 1997-05-14 |
Family
ID=6463314
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5175061A Expired - Fee Related JP2609505B2 (ja) | 1992-07-16 | 1993-07-15 | 血清試料中のｌｄｌの特異的定量法およびそのための試薬 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5795786A (ja) |
| EP (1) | EP0579138B1 (ja) |
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