JPH0622657A

JPH0622657A - イネカルスからの植物体作出方法

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Publication number: JPH0622657A
Application number: JP7766192A
Authority: JP
Inventors: Kenji Takigawa; 健次滝川; Shigeharu Tateyama; 重春舘山; Hiroo Uchibori; 博雄内堀; Atsushi Nakazono; 敦之中園; Ryo Sogabe; 陵曽我部; Haruo Konishi; 晴夫小西
Original assignee: NAASARII TECHNOL KK
Current assignee: NAASARII TECHNOL KK
Priority date: 1992-03-31
Filing date: 1992-03-31
Publication date: 1994-02-01
Anticipated expiration: 2009-06-22
Also published as: JPH0646906B2

Abstract

(57)【要約】【構成】イネカルスをタンク培養機液体培地中で培養
して幼植物体を誘導するに際し、培養初期には酸素移動
容量係数を0.01〜1.00(1/min) とし、培養後期にはその
値を1/6 〜4/5 に低下させ、さらにその培地中に新たな
培養液を添加することを特徴とする、イネカルスからの
植物体作出方法。【効果】イネカルスからの幼植物体への誘導を効率的
に行い、イネ苗の大量生産、イネ苗の工業化を可能にす
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、イネカルスからの植物
体作出方法、特に植物組織培養技術を利用するととも
に、タンク培養機を用いたイネ苗の大量増殖法に関する
ものである。

【０００２】

【従来の技術】近年、組織培養技術の発達により多数の
植物で大量増殖による商業化の可能性が拓けつつある。
イネについても大量増殖の可能性を示唆する技術がいく
つか報告されている。イネ苗を組織培養によって増殖し
ようとする場合、次の二通りの方法が考えられる。ま
ず、第一の方法としては、イネ植物体組織片より直接、
不定芽または不定胚を分化・誘導する方法がある。この
技術については既にD.H.Lingら〔PlantCell Rep.,2,172
(1983)〕、W.Wernickeら〔Z.Pflanzen Physiol.,103,3
61 (1981),Eur. J. Cell Biol. 24,347 (1981)〕、D.
A. Stuart and S. G. Strickland〔国際公開公報 WO 8
7/02701 〕などによって報告されているが、個体もしく
は不定胚の分化・誘導率は大変低く、増殖効率の点か
ら、商業的な大量増殖技術には至っていない。

【０００３】また比較的高率で胚様体が得られた例とし
ては、松野ら〔特開平１−256319号公報〕が主に種子根
を用いて１ｇ根当り約5000個の胚様体を得ている。しか
し培養期間が14週間と長い上、胚様体からの植物体再生
率については特に開示されていない。また、外植片の量
的確保が難しく、更に外植片が増殖可能な場合でもその
増殖効率は満足すべきものではなく、商業的な大量増殖
技術としては適切でない。

【０００４】第二の方法として、イネ植物体組織片よ
り、カルスを誘導・増殖し、カルスから不定芽または不
定胚を誘導・作出し、それらを植物体に再生する方法が
ある。イネのカルス誘導には子房、葯、未熟胚、完熟種
子、幼若葉、根、茎頂、幼穂等多くの部位が外植片とし
て用いられているが、何れも再分化率が低く、小量の外
植片から多数の再生植物体を得る大量増殖技術は開発さ
れていない。

【０００５】高率で不定胚を誘導した報告例としては、
K. Ozawa and A. Komamine〔Bio Industry 6,343-350
(1989)、Theor. Appl. Genet.,77,205-211 (1989)〕
が、外植片として「Konansou」未熟胚を用い誘導したカ
ルスをプロリン及びカゼイン加水分解物を添加した液体
増殖培地で３日毎に継代維持したカルスから、固体再分
化培地を用いて、最高で移植したカルスの90％以上から
不定胚を誘導している。しかし、カルスを誘導する外植
片が未熟胚に限定されており、他の部位を外植片とした
場合は、当該技術は適用できないことが明らかになって
いる。また、未熟胚を外植片とする場合、外植片の供給
が時間的制約を受けるとともに、相当量の労力を必要と
している。さらに、外植片として未熟胚を用いてはいて
も、その適用範囲は特定の品種に限られており通常の栽
培品種には適用できないことが明かとなっている。

【０００６】さらに、比較的高率で植物体を再生させた
報告例として、T. Abe and Y. Futsuhara 〔J. Plant P
hysiol.,121,111-118 (1985)〕が「Gaiya Dhan Tosar」
の根由来カルスを 2,4ーD 3ppmを含むＭＳ寒天培地上で
継代・増殖させ、これを再分化培地（Kinetin 1ppm、C
asein 2000ppmを含むＭＳ寒天培地）に移植することに
より、移植した60％のカルスから89本の植物体（200 個
体／１ｇカルスに相当）を得ている。N. V. Raghava Ra
m and M. W. Nabors〔Plant Cell Tissue Organ Cultur
e,4,241-248(1985)〕は「Pokkali」の胚盤由来カルスに
おいて、再分化培地（BA 0.5ppmを含むＭＳ寒天培地）
へのカルスの置床密度を6.5mg/1mlとすること、及び培
地のコンディショニング（Ｅカルスを２週間置床後除去
する）を行うことにより、計算上、１ｇのカルスから22
0 本の植物体を得ている。しかしこれらの報告は、特定
の品種に関するものであり、その方法を通常の栽培品種
に適用したところ十分な再分化率は得られなかった。

【０００７】また、液体培地での不定胚及び胚様体の誘
導については、前述の K. Ozawa and A. Komamine〔 Bi
o Industry 6,343-350(1989)、Theor.Appl.Genet.,77,2
05-211 (1989)〕、T.Yoshida〔BRAIN テクノニュース1
3,1ー2(1988)〕、吉田ら〔育種学雑誌（別２）,140ー141
（1988）、同（別１）,62ー63(1989)〕、T.Abe and Y.Fu
tsuhara 〔Japan. J.Breed .36、1ー6(1986)〕等がある
が、いずれも適応可能な品種が限られているとともに、
イネ植物体に適用した場合その生産効率は必ずしも充分
でなく、また不定胚胚様体からの苗化については、特に
開示されていない。 T. Yoshida の報告によれば１ｇの
培養物から得られる植物体数は１８個体と低い値となっ
ている。

【０００８】更に、最近では本出願人によるものとし
て、旋回培養機を用いたイネ植物体の作出方法に関する
出願がある〔特願平3-57332 号明細書、特願平3-57333
号明細書〕。しかし、この方法もイネの組織培養の工業
的利用への途を拓くものとしてその技術価値は高いが、
具体的な方法を示しているのはフラスコによる旋回培養
方法についてのみであり、タンク培養等を用いた大量培
養方法に関する具体的な手段については示されていな
い。

【０００９】このように組織培養技術を利用したイネ植
物体の作出方法に関する報告は、数多くあるが、いずれ
も実験室レベルのものであり、産業的に利用できる段階
には至っていない。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】食料の安定供給は国民
生活にとって必須の課題であり、イネについては特にそ
の要請は強い。このような国民的な要請に応えるものと
して、近年その進歩の著しい組織培養技術に対して大き
な期待が寄せられている。本発明の目的は、組織培養技
術を活用し、タンク培養機を用いてイネの幼植物体を工
業的規模で大量かつ安定的に作出することにある。

【００１１】なお、本発明において「幼植物体」という
ときは、カルスから分化・再生した茎葉を有する植物体
であって未置床のものをいい、発根の有無は問わない。

【００１２】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、タンク培
養機を用いてイネカルスより植物体を作出する方法につ
いて鋭意研究を行った結果、カルスより幼植物体を誘導
する際に、酸素移動容量係数（以下ｋ_Lａという）を限
定して培養し、また培養後期にそのｋ_Lａを低下させる
ことにより、大量にイネ植物体を作出することができる
ことを見出し、さらに誘導過程において、その培地に培
養液を添加することにより、その作出効率が一層高まる
ことを見出し、本発明を完成した。

【００１３】すなわち、本発明はイネカルスをタンク培
養機液体培地中で培養して幼植物体を誘導するに際し、
ｋ_Lａを0.01〜1.00(1/min) として培養した後、該幼植
物体を苗化培地に移植することを特徴とする、イネカル
スからの植物体作出方法である。また、本発明はｋ_Lａ
を培養初期には0.01〜1.00(1/min) で培養し、培養後期
には培養初期のｋ_Lａの1/６〜4/５に低下させて培養す
ることを特徴とする、上記記載のイネカルスからの植物
体作出方法である。

【００１４】さらに、本発明は幼植物の誘導過程におい
て、タンク培養機液体培地に培養液を添加することを特
徴とする、上記記載のイネカルスからの植物体作出方法
である。以下本発明を（I）イネ外植片よりカルスを増
殖するまでの過程、（II）カルスより幼植物体を誘導す
る過程、（III）幼植物体よりイネ植物体を作出する過
程に分けて説明する。（I）イネ外植片よりカルスを増殖するまでの過程１）カルスの誘導に用いる植物体本発明において適応可能なイネ科の種は、特に限定され
るものではないが、イネ属に関しては、例えばジャポニ
カ、インディカ、ジャヴァニカ、アフリカイネ及びこれ
らの雑種等を挙げることができる。２）カルス誘導に用いる外植片カルスを得るための外植片としては、生長点または形成
層を有するものであればよく根、葉（葉身、葉鞘）、
茎、種子（玄米）、胚盤、胚様体、幼植物体、不定芽、
幼穂等を例示することができる。また分裂活性の高い胚
珠、葯等も外植片とすることができる。３）カルスの誘導外植片からカルスを誘導するための誘導培地は、少なく
とも無機塩、１種または２種以上のオーキシン、糖類を
必須成分とし、浸透圧調節剤、ビタミン、アミノ酸類、
カゼイン加水分解物、ｐＨ調節剤等を必要に応じて添加
したものである。具体的に従来から植物の組織培養に用
いられている基本培地、例えば、ＭＳ培地〔Murasige a
nd Skoog、Physiol.plant.,15,473-497 (1962)〕、Ｎ６
培地〔Chu et al.、Sci.Sin.,18,658-668 (1975)〕、
リンスマイヤー・スクーグ（Linsmaier and Skoog) ホ
ワイト(White) 、ガンボルグ(Ganborg) のB-５培地ヘ
ラー(Heller)、コーレンバッハ・シュミット(Kohlenbac
h and Schmidt)等にオーキシンを添加して調整される液
体培地もしくは固体培地を用いることができる。これら
の従来公知の培地の組成などは、例えば、原田及び駒
嶺著「植物細胞培養」ｐ390-391、理工学社、1984年に
記載されている。

【００１５】培地の糖類としては、シュークロース、グ
ルコース、フルクトース、マルトース等を例示でき、そ
の濃度は、0.1 〜10％が好ましく0.5 〜６％で用いるこ
とが特に好ましい。オーキシンとしては、2,4-ジクロロ
フェノキシ酢酸（2,4ーD）、インドール−３−酢酸（Ｉ
ＡＡ）、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）等を例示でき、これ
らを単独で使用することができるが、組み合わせて使用
することもできる。その添加濃度は、2,4ーDの場合は、
0.1〜20ppmで用いることが好ましく、2〜6ppmが特に好
ましい。浸透圧調節剤としてはソルビトール、マンニト
ール等を例示でき、濃度としては０．５〜12％（w/v）
が好ましく、１〜６％が特に好ましい。

【００１６】アミノ酸類としてはL-プロリン等を例示で
き１〜100mM の濃度で添加することが好ましい。カゼイ
ン加水分解物は、10〜500ppmの濃度で添加することが好
ましい。ｐＨ調節剤としてはＭＥＳ〔2-(N-Morpholino)
ethanesulfonic acid,monohydrate〕等を例示でき、培
地のｐＨは5.4 〜6.4 に調整することが好ましい。

【００１７】また、固体培地を調整するときのゲル化剤
としては、寒天、ジェランガム等を例示でき、これらの
濃度は寒天0.8 〜１％、ジェランガム0.2 〜0.3 ％が好
ましい。次に、外植片からカルスを誘導しようとする場
合には、上述した誘導培地をまず調整し、無菌の、また
は無菌化した外植片を置床する。外植片の無菌化は、常
法に従いエチルアルコール、次亜塩素酸ナトリウム液等
を用い実施できる。外植片を置床後、15〜35℃（好まし
くは25〜32℃）の温度下、静置もしくは浸透培養するこ
とによりカルスを誘導できる。４）カルスの増殖カルスを増殖させるための増殖培地は、少なくとも無機
塩類、１種または２種以上のオーキシン、糖類、浸透圧
調節剤を必須成分とし、ビタミン、アミノ酸類、カゼイ
ン加水分解物、ｐＨ調節剤等を必要に応じて添加したも
のである。

【００１８】具体的には上記の誘導培地に浸透圧調節剤
を添加した液体培地を例示できる。浸透圧調節剤として
はソルビトール、マンニトール等を例示でき、濃度とし
ては１〜10％（w/v）が好ましく、１〜６％が特に好ま
しい。カルスを誘導する際に、誘導培地に添加すると好
ましい結果が得られるビタミン類、アミノ酸類、カゼイ
ン加水分解物、ｐＨ調節剤等は、カルスの増殖に於いて
も同様な結果を有する。

【００１９】誘導されたカルスの具体的培養条件を以下
に示す。３）の誘導工程により、外植片からカルスが誘
導されたらカルスを外植片から取り除き増殖培地に移植
し、誘導工程と同じ条件で培養することによりカルスが
増殖される。また、増殖培地でのカルスの継代を１週間
毎に行うことにより好ましい結果が得られる。（II）カルスより幼植物体を誘導する過程培養に用いるタンク培養機としては、通常市販の通気攪
拌型培養機、気泡塔型培養機等でよく、通気攪拌型培養
機の場合、攪拌羽根として、スクリュー、タービン、タ
ーボ翼等一般的な羽根形状のものを使用することができ
る。

【００２０】培養時の通気に関しては、通常の空気を用
いればよいが、その際にｋ_Lａは0.01〜1.00(1/min) で
あることが好ましく、更に好ましくは0.05〜0.9(1/min)
である。また、培養後期に培養初期のｋ_Lａの1/６〜4/
５に低下させることは、本発明の好ましい態様である。
このように、ｋ_Lａを一定の範囲に調節するには、攪拌
速度の調節、通気量の調節、通気性気体性状の調節、培
地量の調節等いずれの方法を用いてもよく、またこれら
の手段を二つ以上組み合わせて行うことも可能である。
また、上記のようにｋ_Lａを低下させる時期は、幼植物
体の誘導の状態に応じて決めればよいが、カルス移植後
14〜30日に行うことが好ましい。

【００２１】タンク培養機液体培地に添加する培養液と
しては、該培地に培地成分を新たに加える溶液であれ
ば、任意の成分組成の溶液を用いることができ、例えば
下記に示す培養開始時の培地と同じ組成の溶液やこれら
のうち特定の成分を増量させた溶液、さらには特定成分
を単独で添加することもできる。また単に添加するだけ
でなく、予め該培地を抜き取り、その後培養液を添加す
ることにより、該培地の一部または全部を交換すること
も可能である。添加する培養液の量は、培養の状態に応
じて適宜決めればよく、例えば幼植物体への誘導の状態
が良好で、培地中の養分等の消耗が激しいときは、初期
培地量と等量もしくは２倍の量程度の培養液を添加する
ことが好ましい。またこのような処理は、一回だけでは
なく、複数回繰り返して行うことも可能である。

【００２２】用いる培地は、少なくとも無機塩類、糖類
を必須成分とし、必要に応じて植物生長調節物質、浸透
圧調節剤、ビタミン類、アミノ酸類、カゼイン加水分解
物、ｐＨ調節剤等を添加した液体培地、および該液体培
地から糖類を除去した所謂無糖液体培地の双方を選択的
に用い得る。有糖液体培地としては、具体的には、前記
ＭＳ培地、Ｎ６培地、リンスマイヤー・スクーグ（Lins
maier and Skoog) ホワイト(White) 、ガンボルグ(Gan
borg) のB-５培地ヘラー(Heller)、コーレンバッハ・
シュミット(Kohlenbach and Schmidt)等を例示すること
ができ、その無機塩類は1/4 〜４倍の濃度で用いること
が好ましく、1/2 〜２倍の濃度で用いることが特に好ま
しい。燐酸塩に関しては0.1mM 〜50mMの添加が好ましく
0.5mM 〜20mMの添加が特に好ましい。カルシウム塩に関
しては0.003mM 〜30mMが好ましく0.03mM〜10mMが特に好
ましい。微量金属類は添加しなくても良いが、例えばＭ
Ｓに含まれているような微量金属類を添加することによ
り更に良い結果が得られる。無機窒素（Ｎ）源に関して
は硝酸態窒素とアンモニア態窒素で供給することができ
るが、硝酸態窒素のみあるいは硝酸態窒素とアンモニア
態窒素を組み合わせて用いることが好ましく、硝酸態窒
素濃度は10mM〜200mM が好ましく20mM〜120mM が特に好
ましい。アンモニア態窒素濃度は０mM〜40mMが好ましく
0.1mM 〜10mMが特に好ましい。この時、アンモニア態／
硝酸態の比が０以上２以下であることが好ましく0.001
以上１以下で用いることが特に好ましい。糖類を用いる
場合には、糖類としてはシュークロス、グルコース、フ
ルクトース、マルトース等を例示でき、その濃度は、0.
1 ％〜６％が好ましく、0.5 ％〜３％で用いることが特
に好ましい。植物生長調節物質としてオーキシン、サイ
トカイニンを例示することができ、これらを単独で使用
することができるが組み合わせることによりより良好な
結果が得られる。オーキシンとしてＮＡＡ、ＩＡＡ、2,
4ーD等を例示することができ、濃度としてはＮＡＡ及び
ＩＡＡ 0.01ppm 〜10ppm 、2,4ーD 0.001ppm〜0.1ppmが
好ましく、ＮＡＡ0.04ppm 〜４ppm が特に好ましい。ま
たこれらを単独で使用することもできるが、組み合わせ
て使用することもできる。サイトカイニンとしてカイネ
チン、ベンジルアデニン（ＢＡ）、ゼアチン等を例示す
ることができ、0.001ppm〜10ppm の濃度が好ましく、こ
れらを単独で使用することができるが組み合わせて使用
することもできる。ＡＢＡは０〜0.1ppmの濃度が好まし
い。浸透圧調節剤としてはソルビトール、マンニトール
等が挙げられ、濃度としては0.5 〜12％(w/v) が好まし
く、ソルビトール１％〜６％が特に好ましい。アミノ酸
類としてはＬ−プロリン等を例示でき１〜100mM の濃度
で添加することが好ましい。カゼイン加水分解物は、10
〜5000ppm の濃度で添加することが好ましい。ｐＨ調節
剤としてはＭＥＳが挙げられ、濃度は１mM〜40mMが好ま
しい。

【００２３】カルスより幼植物体を誘導するためには、
上述したような培地、条件等により温度15℃〜35℃で、
25〜45日間培養すればよく、また幼植物体が誘導され始
め後は、通常の組織培養に用いるように照明を用いて照
度を上昇させることも可能である。（III）幼植物体よりイネ植物体を作出する過程。

【００２４】上述の工程で得られた幼植物体の苗化は、
下記のような従来公知の苗化培地へ移植し慣用の方法で
培養することにより、イネの苗を得ることができる。苗
化培地は有糖および無糖双方のものを用い得るが、無糖
培地のものが特に好ましい。有糖の苗化培地は少なくと
も無機塩類、糖類を必要とし、必要に応じて植物成長調
節物質、浸透圧調節剤、ビタミン、アミノ酸類、カゼイ
ン加水分解物、ｐＨ調節剤等を必要に応じて添加した固
体培地である。具体的には前述のＭＳ培地、Ｎ６培地、
リンスマイヤー・スクーグ（Linsmaier and Skoog) ホ
ワイト(White) 、ガンボルグ(Ganborg) のB-５培地ヘ
ラー(Heller)、コーレンバッハ・シュミット(Kohlenbac
h and Schmidt)等を例示することができる。

【００２５】培地の糖類としては、シュークロース、グ
ルコース、フルクトース、マルトース等を例示でき、そ
の濃度は、0.1％〜10.0%が好ましく0.5%〜6.0%で用いる
ことが特に好ましい。植物生長調節物質としてオーキシ
ン、サイトカイニン、これらを単独で使用することがで
きるが組み合わせることによりより良好な結果が得られ
る。オーキシンとしてＮＡＡ、ＩＡＡ、2,4ーD等を例示
することができ、濃度としてはＮＡＡ及びＩＡＡ 0.01
ppm 〜10ppm 、2,4ーD0.001ppm〜0.1ppmが好ましい。ま
たこれらを単独で使用することもできるが、組み合わせ
て使用することもできる。

【００２６】サイトカイニンとしてカイネチン、ベンジ
ルアデニン（ＢＡ）、ゼアチン等を例示することがで
き、0.001ppm〜10ppm の濃度が好ましく、これらを単独
で使用することができるが組み合わせて使用することも
できる。浸透圧調節剤としてはソルビトール、マンニト
ール等が挙げられ、濃度としては0.5 〜12％(W/V) が好
ましく、ソルビトール１％〜６％が特に好ましい。アミ
ノ酸類としてはＬ−プロリン等を例示でき１〜100mM の
濃度で添加することが好ましい。カゼイン加水分解物
は、10〜5000ppm の濃度で添加することが好ましい。

【００２７】ｐＨ調節剤としてはＭＥＳが挙げられ、濃
度は１mM〜40mMが好ましい。培地の支持体としてはゲル
化剤であるシュランガム、寒天等を例示することができ
その濃度はゲルライト0.2 〜0.9 ％、寒天0.8 ％〜1.8
％で用いることが好ましい。またセラミックファイバ
−、ロックウール、等市販の培地支持体に上記液体培地
を滲み込ませたものを使用することもできる。

【００２８】上記の苗化培地に、発芽幼植物体を置床
し、15〜35℃の温度で培養することによりイネ苗が作出
できる。

【００２９】

【実施例】

実施例１イネ品種「ササニキシ」の完熟種子を剥皮後、70％エタ
ノールで５秒間処理し、次亜塩素酸ナトリウム (有効塩
素10％) で30分処理することにより殺菌し、滅菌水で良
く洗浄した後、下記のカルス誘導培地上に置床した。29
℃、暗黒下で、10日間培養し、胚盤の部分から生じたカ
ルスを摘出し、カルス誘導培地と同一の成分組成である
下記に示す増殖培地に移植し、24時間連続弱光下、100r
pmで旋回培養を行い継代維持した。なお、液体増殖培地
１L 当り10ｇのカルスを置床した。

【００３０】このように液体増殖培地で数代継代したカ
ルスを、下記の幼植物体誘導培地を入れたタンク培養機
に移植し培養を行なった。この時培養機として2.5L通気
攪拌型培養機を用い、ｋ_La を0.05〜0.09(1/min) で培
養を行った。4 週間培養後、培地を全量下記交換培地に
交換し、更に２週間培養を行ったところすべてのｋ_Lａ
において3mm 以上の長さの幼植物体形成が認められた。
その結果を表１に示す。

【００３１】

【表１】

【００３２】なおｋ_Lａが0.01(1/min) より低い場合に
は、培養物が増殖せず幼植物体を誘導することができな
かった。また、K_La が1.0(1/min) より高い場合も、培
養初期に培養物が培養容器の壁面に付着し、幼植物体を
誘導することができなかった。＜誘導培地＞１％シュークロース、３％ソルビトー
ル、12mM プロリン、100ppm カゼイン加水分解物、５
mM ＭＥＳ、４ppm 2, ４−Ｄ、0.２％ゲルライトを
含むＮ６個体培地。＜増殖培地＞１％シュークロース、３％ソルビトー
ル、12mM プロリン、100ppm カゼイン加水分解物、５
mM ＭＥＳ、４ppm 2, ４−Ｄを含むＮ６液体培地。＜幼植物体誘導培地＞１％シュークロース、３％ソ
ルビトール、12mM プロリン、100ppmカゼイン加水分解
物、25mM ＭＥＳ、0.４ppm ＮＡＡ、0.５ppm カイネチ
ンを含む、塩濃度を1/2に希釈したＮ６液体培地。＜交換培地＞1.５％シュークロース、1.５％ソルビ
トール、1000ppm カゼイン加水分解物、2.５mM ＭＥ
Ｓ、1.０ppm ＮＡＡ、0.５ppm カイネチンを含む、塩濃
度1/2に希釈したＮ６液体培地。実施例２実施例１と同様に誘導されたカルスで2.5L通気攪拌型培
養機を用い、培養初期ｋ_La を培養開始後３週間で実施
例１と同様の交換培地に全量交換するとともに、ｋ_La
を培養初期値に対し1/6 〜4/5 に変更し、更に3 週間培
養を行ったところ表２に示すように3mm 以上の長さの幼
植物体の形成が認められた。

【００３３】

【表２】

【００３４】表２に示すように、実施例１の方法に従い
ｋ_La を一定の値に保ったもの（表２最下段）に比べ、
その作出効率に顕著な向上がみられた。実施例３実施例２の方法において、培養３週間後、初期培地を全
量抜き取り、実施例１と同じ交換培地を初期培地量に対
して２倍の量投入する培地交換（表中に培地交換法と記
載する）と、培養３週間後初期培地はそのままとし、実
施例１と同じ交換培地量と等量添加し（表中に培地添加
法と記載する）、総培地量を初期に対して２倍量として
後期培養を行う培地添加法での培養を行った。その結
果、表３に示すように３mm以上の幼植物体がどちらの方
法でも認められた。

【００３５】

【表３】

【００３６】実施例４実施例１の＜幼植物体誘導培地＞＜交換培地＞を用い、
通気空気量を0.２vvmとし、気泡塔型培養槽で培養した
ところ、３mm以上の長さの幼植物体が、最終培地１Ｌ当
り 1,500個形成された。

【００３７】

【発明の効果】本発明は、タンク培養機を用いたイネカ
ルスからの幼植物体の誘導を、フラスコによる旋回培養
と同様もしくはそれ以上の効率で可能にするものであ
り、これによって、イネ苗の大量生産、イネ苗の工業化
を可能ならしめるものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者曽我部陵東京都板橋区舟渡４−５−５−201 (72)発明者小西晴夫東京都板橋区舟渡４−５−５−101

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】イネカルスをタンク培養機液体培地中で
培養して幼植物体を誘導するに際し、酸素移動容量係数
を0.01〜1.00(1/min) として培養した後、該幼植物体を
苗化培地に移植することを特徴とする、イネカルスから
の植物体作出方法。
【請求項２】酸素移動容量係数を培養初期には0.01〜
1.00(1/min) で培養し、培養後期には培養初期の酸素移
動容量係数の1/６〜4/５に低下させて培養することを特
徴とする、請求項１記載のイネカルスからの植物体作出
方法。
【請求項３】幼植物体の誘導過程において、タンク培
養機液体培地に培養液を添加することを特徴とする、請
求項１または請求項２記載のイネカルスからの植物体作
出方法。