JPH06228185A - Ｄ３２９物質とその誘導体，その製造法及び用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 抗腫瘍活性を有する新規物質並びに当該物質
の効率的な製造法を確立すること。 【構成】 次式（Ｉ）： 【化１】 で表されるＤ３２９物質またはその誘導体あるいはその
医薬的に許容される塩、ストレプトミセス属に属し、上
記式（Ｉ）で表されるＤ３２９物質を生産する能力を有
する微生物を培地に培養し、培養物から当該物質を採取
することを特徴とするＤ３２９物質またはその医薬的に
許容される塩の製造法、次式（II) : 【化2 】 で表されるＤ３２９Ｓ物質、該Ｄ３２９Ｓ物質に前記式
（Ｉ）における置換基Ｒ¹ およびＲ² を導入することを
特徴とするＤ３２９物質またはその誘導体の製造法並び
に前記式（Ｉ）で表されるＤ３２９物質またはその誘導
体あるいはその医薬的に許容される塩を有効成分として
含有する抗腫瘍剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は請求項１記載の一般式
（Ｉ）で表される新規抗腫瘍性Ｄ３２９物質またはその
誘導体あるいはその医薬的に許容される塩，その製造法
及び当該Ｄ３２９物質を有効成分として含有する抗腫瘍
剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】チャートリューシン(Chartreusin) が優
れた抗腫瘍活性を有することは既に知られている〔プロ
グレス・イン・メディシナル・ケミストリー (Progress
in Medicinal Chemistry)１９巻、247 頁、1982年〕。
しかし、チャートリューシンは極めて水溶性が低いため
に臨床的に使用されるには至っていない。また、チャー
トリューシンのデメチル体であるデメチルチャートリュ
ーシンが優れた抗腫瘍活性を有することも知られている
（特開平２−５９５９６号）。チャートリューシンにつ
いては化学合成的手法により種々の誘導体が合成されて
おり、それらの中にはチャートリューシンより優れた抗
腫瘍活性を有する化合物も知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】抗腫瘍物質はこれまで
に数多くのものが臨床的に用いられているが、その抗腫
瘍活性は化学構造と強い相関関係があることから、新規
化学構造を有する抗腫瘍物質の開発が常に求め続けられ
ている。

【０００４】本発明は、公知の抗腫瘍物質よりも有効な
医薬となりうる新規抗腫瘍物質を提供すると共に、その
製造法を確立することにより上記課題を解決しようとす
るものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決すべく検討を重ね、土壌より分離したチャートリュ
ーシン生産菌にニトロソグアニジン処理を施して得た変
異株の生産物を多数分析したところ、Ｄ３２９−１８５
株がＤ３２９Ｃ物質を生産することを見出し、先に特許
出願した（特開平４−２９０８９２）。本発明者らは、
さらに抗腫瘍性Ｄ３２９Ｃ物質生産菌の培養物を検索し
たところ、本菌株は優れた抗腫瘍活性を有する一般式
（Ｉ）で表される新規なＤ３２９物質を生産することを
見出し、その物理化学的性質を明らかにすることにより
本発明を完成した。

【０００６】すなわち、本発明は次式（Ｉ）：

【０００７】

【化１２】

【０００８】（式中、Ｒ¹ は

【０００９】

【化１３】

【００１０】

【化１４】

【００１１】または

【００１２】

【化１５】

【００１３】を示し、Ｒ² は

【００１４】

【化１６】

【００１５】または

【００１６】

【化１７】

【００１７】を示す。）で表されるＤ３２９物質、具体
的にはＤ３２９Ｐ物質，Ｄ３２９Ｑ物質，Ｄ３２９Ｒ物
質およびそれらの誘導体またはそれらの医薬的に許容さ
れる塩を提供すると共に、ストレプトミセス属に属する
Ｄ３２９物質を生産する能力を有する微生物を培地に培
養し、その培養物から上記式（Ｉ）で表されるＤ３２９
物質を採取することを特徴とするＤ３２９物質またはそ
の医薬的に許容される塩の製造法並びに当該Ｄ３２９物
質またはその誘導体あるいはその医薬的に許容される塩
を有効成分として含有する抗腫瘍剤を提供するものであ
る。

【００１８】本発明のＤ３２９物質を生産する能力を有
する微生物は、ストレプトミセス（Streptomyces）属に
属する菌種である。その一例として、チャートリューシ
ンを生産する能力を有するストレプトミセス・チャート
リューシス（Streptomyces chartreusis) Ｄ３２９株
（以下、Ｄ３２９株と称する。）をニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）処理することにより得た変異株Ｄ３２９−１
８５株〔生工研条寄第３２６９号,(FERM BP-3269) 〕を
挙げることができる。

【００１９】Ｄ３２９株は、本発明者らにより埼玉県大
宮市において採集された土壌より分離されたもので、そ
の菌学的性質は以下の通りである。 （１）形態的特徴 栄養菌糸は各種培地上でよく発達し、分断は起こさな
い。分枝した栄養菌糸から形成される気菌糸はブルー系
あるいはグレー系の色調を呈し、１０〜５０個あるいは
それ以上の胞子の連鎖が認められ、ラセン状をしてい
る。胞子表面はとげ状で、その大きさは0.７×0.９〜1.
１μm で円柱状である。菌核，胞子のう，遊走子は見出
されない。

【００２０】（２）各種培地における性状 各種培地上における培養性状を第１表に示す。なお、色
調として（ ）内に示す番号はアイエスシーシー・エヌ
ビーエス・カラー・ネーム・チャ−ト（ＩＳＣＣ−ＮＢ
Ｓ Ｃｏｌｏｒ−Ｎａｍｅ ｃｈａｒｔ）に記載のもの
を用い、２８℃、３週間目の各培地における観察の結果
である。

【００２１】

【表１】

【００２２】（３）生理的性状 生育温度範囲（酵母エキス・麦芽エキス寒天、１４日
間培養）：１５〜４５℃ ゼラチンの液化 ： 陽性 デンプンの加水分解 ： 陽性 脱脂牛乳の凝固 ： 陽性 脱脂牛乳のペプトン化 ： 陽性 硝酸塩の還元 ： 陽性 セルロースの分解 ： 陰性 炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天、２８
℃、１４日間培養）：利用する；L-アラビノース，D-キ
シロース，L-ラムノース，D-グルコース，D-ガラクトー
ス，D-フルクトース，D-マンニトール，サリシン，スク
ロース，ラフィノース，イノシトール （４）細胞壁組織 全菌体中のジアミノピメリン酸を分析した結果ＬＬ型で
あった。

【００２３】以上、Ｄ３２９株の菌学的性状を要約する
と、ＬＬ−ジアミノピメリン酸を有し、気菌糸の形態は
ラセン状で、胞子の表面はとげ状である。気菌糸の色調
はブルーからグレー系を呈す。可溶性色素は、各種培地
でイエローからブラウンの色素を生産し、ペプトン・酵
母エキス寒天培地でメラニン様色素を生産する。これら
の諸性質からＤ３２９株はストレプトミセス（Streptom
yces）属に属する菌株と考えられ、「バージーズ・マニ
ュアル・オブ・デターミナティブ・バクテリオロジー
（Bergey's Manual of Determinative Bacteriology
）」第８版及びＩＳＰ報告「インターナショナル・ジ
ャーナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー
（International Journal of Systematic Bacteriolog
y）」第１８巻、６９頁、２７９頁（１９６８年）、同
１９巻、３９１頁（１９６９年）、同２２巻、２６５頁
（１９７２年）より検索した結果、ストレプトミセス・
チャートリューシスが近縁種として挙げられる。そこ
で、Ｄ３２９株とストレプトミセス・チャートリューシ
スＪＣＭ４５７０とを比較した結果をまとめると、第２
表及び第３表のようになる。

【００２４】

【表２】

【００２５】

【表３】

【００２６】表から明らかなように、とげ状の胞子表面
を有し、その胞子鎖はラセン状である形態的特徴、気菌
糸の色調、ペプトン・酵母エキス寒天培地及びトリプト
ン・酵母エキス液体培地でメラニン様色素を生成する点
及び糖の資化性などで両者はよく一致する。なお、両者
は可溶性色素の生産の点で違いがみられるが、これはＤ
３２９株が多量のチャートリューシン（黄色〜オリーブ
色）を生産することに起因すると考えられる。従って、
Ｄ３２９株をストレプトミセス・チャートリューシス
（Streptomyceschartreusis）と同定した。

【００２７】Ｄ３２９株をニトロソグアニジン処理して
得た変異株Ｄ３２９−１８５株はストレプトミセス・チ
ャートリューシス（Streptomyces chartreusis）Ｄ３２
９−１８５として工業技術院生命工学工業技術研究所に
生工研条寄第３２６９号（FERM BP-3269）として寄託さ
れている。

【００２８】本発明のＤ３２９物質は、上記微生物の培
養によって得られるが、類似化合物を原料として化学修
飾的に得ることも、また化学合成的手法を用いて全合成
的に得ることも可能である。微生物の培養による場合の
使用菌株としては、例えばＤ３２９−１８５株が挙げら
れる。Ｄ３２９−１８５株は、他の多くの放線菌に観察
されるように、その性状が変化しやすいことから、Ｄ３
２９物質生産菌株としては上記Ｄ３２９−１８５株に加
え、自然変異株，人工変異株（紫外線照射，コバルト６
０照射，化学変異誘起剤添加等による）、さらには形質
接合体，遺伝子組換え体であっても、Ｄ３２９物質を生
産する能力を有するものは、すべて本発明に使用でき
る。Ｄ３２９物質は、Ｄ３２９−１８５株を適当な培地
で好気的に培養し、培養物から単離することにより製造
することができる。

【００２９】ここで、培地としてはＤ３２９−１８５株
が利用できる任意の栄養源を含むものが用いられる。具
体例としては、例えば炭素源としてグルコース，フルク
トース，グリセリン，澱粉，デキストリン，糖蜜，動植
物油、さらには菌の資化性により炭化水素，アルコール
類等も単独または組み合わせて利用できる。一方、窒素
源としては、大豆粉，ペプトン，小麦胚芽，肉エキス，
酵母エキス，綿実粕，コーンスチープリカー，オートミ
ール，ファーマメディア（登録商標），硫酸アンモニウ
ム，硝酸ナトリウム，塩化アンモニウム，尿素，グルタ
ミン酸ナトリウム等の天然物あるいは有機・無機の窒素
化合物が単独または組み合わせて利用できる。また、必
要ならば塩化ナトリウム，炭酸カルシウム，硫酸銅，塩
化マンガンをはじめ、ナトリウム，カリウム，カルシウ
ム，マグネシウム，コバルト，塩素，硫酸，燐酸及びそ
の他のイオンを生成できる無機塩類を単独または組み合
わせて添加してもよい。さらに、培養中の発泡を抑える
ために、一般に用いられている消泡剤、例えばシリコー
ンＫＭ７３（登録商標），アデカノール（登録商標）等
を適宜添加することもできる。

【００３０】培養方法は、一般的な抗生物質の生産方法
と同様に、好気的液体培養が最適である。培養条件は、
温度が２５〜３７℃、好ましくは２８〜３０℃で、かつ
好気的条件下で培養すればよい。この方法によるＤ３２
９物質の生産量は通常、振とう培養で培養１４〜２０日
目に最高となる。培養物中のＤ３２９物質の蓄積量が最
高に達した時点で培養を停止し、培養物から目的物、主
にＰ，ＱまたはＲを回収・精製する。

【００３１】培養物よりＤ３２９物質を得るには、微生
物の培養物より抗生物質を精製・単離する際に通常用い
られる方法、特に後記実施例に示すように、本物質が脂
溶性であるという特性を考慮して実施することができ
る。すなわち、培養物から各種溶媒（アセトン，クロロ
ホルム，酢酸エチルなど）を用いて本物質の抽出を行
う。溶媒に移行したＤ３２９物質は以下のような各種手
法を用いて単離・精製することができる。すなわち、合
成吸着剤（ダイヤイオンＨＰ−２０／三菱化成社製、ア
ンバーライトＸＡＤ−２／ローム・アンド・ハース社製
など）、ゲル濾過剤（セファデックスＬＨ−２０／ファ
ルマシア社製、トヨパールＨＷ−４０／東ソー社製な
ど）、さらにシリカゲル，セルロース，アルミナ，化学
修飾シリカゲルなどの担体を単独あるいは適宜組み合わ
せることによって有効に行われる。

【００３２】上記の培養により得られるＤ３２９物質
は、前述の如く、一般式（Ｉ）で表される。この式で表
される化合物の具体例を示すと、前記式（ａ）で表され
るＤ３２９Ｐ物質、前記式（ｂ）で表されるＤ３２９Ｑ
物質、更には下記式

【００３３】

【化１８】

【００３４】で示されるＤ３２９Ｒ物質（ｃ）などがあ
る。

【００３５】さらに、これらＤ３２９ＰおよびＱの誘導
体は下記のようにして得られる。すなわち、これらの物
質に反応剤としてキサントヒドロール，塩化ベンジルオ
キシカルボニル等を作用させることにより、該誘導体を
得ることができる。さらに詳細には、Ｄ３２９Ｐまたは
Ｑ物質に上述した反応剤を−１０℃〜１５０℃、好まし
くは１０〜８０℃にて、要すれば酸または塩基の存在下
反応させることによりこれらの誘導体が得られる。ここ
で酸とは酢酸，塩酸，硫酸等が、塩基とは水酸化ナトリ
ウム，水酸化カリウム，炭酸水素ナトリウム等が挙げら
れる。

【００３６】本発明のＤ３２９物質は、Ｄ３２９Ｓ物質
を原料として通常の化学修飾または化学合成法により製
造することができる。すなわち、化学反応によりＤ３２
９Ｓ物質に前記一般式（Ｉ）の化合物における置換基Ｒ
¹ 及びＲ² を導入することによって、目的とするＤ３２
９物質を得ることができる。

【００３７】本発明のＤ３２９物質の糖鎖は、すべての
立体配置をとり得る。また、Ｄ３２９物質の塩の具体例
としては、酸付加体として塩酸，硫酸，リン酸などとの
無機酸類、あるいは酢酸，乳酸，プロピオン酸，マレイ
ン酸，オレイン酸，パルミチン酸，クエン酸，コハク
酸，酒石酸，フマル酸，グルタミン酸，パントテン酸，
ラウリルスルホン酸などとの有機酸塩が挙げられる。

【００３８】本発明のＤ３２９物質またはその誘導体あ
るいはその医薬的に許容される塩は、抗腫瘍活性を有し
ており、抗腫瘍剤としての利用が期待される。この化合
物は、経口的または非経口的に投与することができる。
経口投与剤としては、通常散剤，錠剤，乳剤，カプセル
剤，顆粒剤，液剤などの形態があり、内服剤の賦形剤の
具体例を挙げると、散剤，その他の内服用粉末剤におけ
る賦形剤としては、乳糖，澱粉，デキストリン，リン酸
カルシウム，炭酸カルシウム，合成及び天然ケイ酸アル
ミニウム，酸化マグネシウム，水酸化アルミニウム，ス
テアリン酸マグネシウム，重炭酸ナトリウムなどが挙げ
られ、液剤における賦形剤としては、水，グリセリン，
単シロップなどが挙げられる。

【００３９】また、非経口投与剤としては、注射剤等の
形態があり、注射剤の場合は、無菌の水性または非水性
の溶液剤，懸濁剤，乳濁剤を包含する。水性の溶液剤，
懸濁剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が
含まれる。非水溶性の溶液剤，懸濁剤としては、例えば
プロピレングリコール，ポリエチレングリコール，オリ
ーブ油のような植物油，エタノールのようなアルコール
類，ポリソルベート８０（登録商標）等がある。このよ
うな組成物は、さらに潤滑剤，乳化剤，分散剤のような
補助剤を含んでもよい。これらは、例えばバクテリア保
留フイルターによる濾過または照射によって無菌化され
る。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に
無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して使用すること
もできる。

【００４０】上記の各製剤は常法に従って調製すること
ができる。本発明化合物の投与量は、投与方法，患者の
年令，体重，状態および疾患の種類によっても異なる
が、通常、経口的には一日あたり１〜３００ｍｇ、好ま
しくは１０〜１００ｍｇ、非経口的には一日あたり１〜
２００ｍｇ、好ましくは５〜５０ｍｇであり、これを１
〜５回に分割して投与すればよい。

【００４１】

【実施例】以下に本発明を実施例により詳細に説明する
が、本発明はその要旨を越えない限り、以下の実施例お
よび試験例に制約されるものではない。 実施例１ 乾燥酵母1.０％，リン酸水素二カリウム0.２％，硫酸マ
グネシウム0.１％，マンニトール0.５％，硫酸第一鉄１
０ppm ，塩化マンガン１０ppm ，硫酸亜鉛１０ppm ，硫
酸銅１０ppm ，塩化コバルト１０ppm から成る液体培地
をpH8.０に調整し、この培地１００mlを分注した５００
ml容三角フラスコを１２１℃で１５分間滅菌した。次い
で、Ｄ３２９−１８５株（FERM BP-3269）を寒天斜面培
地上より上記三角フラスコに植菌した。

【００４２】３０℃で４日間振とう培養し、一次種培養
液を調製した。この一次種培養液を同じ培地組成を持つ
培地をそれぞれ６００ml分注した１７本の３リットル容
三角フラスコに４％ずつ植菌し、３０℃で１６日間振と
う培養した。培養終了後の培養液を遠心分離して菌体を
含むケーキと上澄とに分離した。得られた菌体を含むケ
ーキは８０％アセトン1.７リットルに浸漬し、室温で５
時間攪拌した。菌体等は固形物を吸引濾過によって除去
し、アセトン抽出液を得た。

【００４３】一方、遠心上澄は合成吸着剤ＨＰ−２０
（三菱化成社製）２７０ｍｌを充填したカラムに吸着さ
せ、次いでイオン交換水１リットルで洗った。さらに、
１リットルの８０％アセトンで溶出し、アセトン溶液を
得た。前述の菌体からのアセトン抽出液と合わせて減圧
下に濃縮してアセトンを除去し、１リットルとした。こ
の濃縮液を0.５リットルのｎ−ブタノールで３回抽出を
行い、得られたｎ−ブタノール溶液を合わせて減圧下で
濃縮し、粗抽出物2.７ｇを得た。

【００４４】このようにして得た粗抽出物をシリカゲル
（ワコーゲルＦＣ−４０、和光純薬工業社製）３５０ｇ
を充填したカラムに吸着させ、ジクロロメタン−メタノ
ール混合液（９：１）で溶出した。Ｄ３２９Ｐ物質を含
むフラクションを集めて減圧下に濃縮乾固し、1.０ｇを
得た。引き続いて、シリカゲル（ワコーゲルＦＣ−４
０、和光純薬工業社製）１１０ｇを充填したカラムに吸
着させ、ジクロロメタン−メタノール混合液（９７：
３）で溶出した。Ｄ３２９Ｐ物質を含むフラクションを
集めて減圧下に濃縮乾固し、粗精製物0.２ｇを得た。こ
の粗精製物0.２ｇを高速液体クロマトグラフィー（カラ
ム ウォーターズ社製、ＮＯＶＡ−ＰＡＫＨＲ Ｃ−１
８ φ２５mm×１００mm）にかけ、イオン交換水−アセ
トニトリル（７５：２５）の系で溶出した。Ｄ３２９Ｐ
物質画分を濃縮乾固し、純粋なＤ３２９Ｐ物質４６mgを
得た。この物質の物理化学的性質を以下に示す。この物
質の細胞障害活性については後述する試験例に示す。

【００４５】Ｄ３２９Ｐ物質 （イ）分子量及び分子式 ６５１， Ｃ₃₃Ｈ₃₃Ｏ₁₃Ｎ （ロ）マススペクトル（FD-MS ） m/z ６５１（Ｍ⁺ ） （ハ）高速液体クロマトグラフィー カプセルパック Ｃ₁₈カラム（φ4.6mm ×150mm 、資生
堂社製）でイオン交換水／アセトニトリル＝７／３の系
で流速１ml/ 分のとき、6.０分で溶出した。

【００４６】（ニ）紫外部吸収スペクトル メタノール溶液中で測定したスペクトルは図１に示す通
りである。 （ホ）赤外部吸収スペクトル ＫＢｒディスク法で測定したスペクトルは図２に示す通
りである。 （ヘ）プロトン核磁気共鳴スペクトル 重ピリジン中５０℃でテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を
基準として測定した４００ＭＨｚプロトン核磁気共鳴ス
ペクトルは図３に示す通りである。

【００４７】（ト）炭素１３核磁気共鳴スペクトル 重ピリジン中でテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を基準と
して測定した１００ＭＨｚ炭素１３核磁気共鳴スペクト
ルは以下に示す通りである。 δ:182.0(s), 178.8(s), 158.9(s), 156.1(s), 152.2
(s), 147.8(s), 145.9(s),134.9(s), 133.7(s), 133.4
(d), 132.2(d), 130.8(d), 125.3(d), 120.9(d), 119.8
(s), 119.1(d), 118.3(s), 106.8(s), 103.7(s), 101.8
(d), 100.9(d), 81.6(d), 80.2(d), 74.2(d), 72.7(d),
71.9(d), 69.4(d), 69.0(d), 67.4(d), 56.8(q), 24.1
(q), 17.2(q), 17.1(q)

【００４８】（チ）溶解性 ジメチルスルフォキサイド，ピリジン，テトラヒドロフ
ランに可溶、メタノール，アセトン，クロロホルムに難
溶、ベンゼン，ｎ−ヘキサンに不溶 （リ）酸性・中性・塩基性の区別 塩基性 （ヌ）外観 紫色粉末

【００４９】実施例２ 乾燥酵母1.０％，リン酸水素二カリウム0.２％，硫酸マ
グネシウム0.１％，マンニトール0.５％，硫酸第一鉄１
０ppm ，塩化マンガン１０ppm ，硫酸亜鉛１０ppm ，硫
酸銅１０ppm ，塩化コバルト１０ppm から成る液体培地
をpH8.０に調整し、この培地１００mlを分注した５００
ml容三角フラスコを１２１℃で１５分間滅菌した。次い
で、Ｄ３２９−１８５株（FERM BP-3269）を寒天斜面培
地上より上記三角フラスコに植菌した。

【００５０】３０℃で４日間振とう培養し、一次種培養
液を調製した。この一次種培養液を同じ培地組成を持つ
培地をそれぞれ６００ml分注した３本の３リットル容三
角フラスコに４％ずつ植菌し、３０℃で１４日間振とう
培養した。培養終了後の培養液を遠心分離して菌体を含
むケーキと上澄とに分離した。得られた菌体を含むケー
キは８０％アセトン1.５リットルに浸漬し、室温で５時
間攪拌した。菌体等は固形物を吸引濾過によって除去
し、アセトン抽出液を得た。

【００５１】一方、遠心上澄は合成吸着剤ＨＰ−２０
（三菱化成社製）２２０ｍｌを充填したカラムに吸着さ
せ、次いでイオン交換水0.６リットルで洗った。さら
に、0.８リットルの８０％アセトンで溶出し、アセトン
溶液を得た。前述の菌体からのアセトン抽出液と合わせ
て減圧下に濃縮してアセトンを除去し、0.５リットルと
した。この濃縮液を0.３リットルのｎ−ブタノールで４
回抽出を行い、得られたｎ−ブタノール溶液を合わせて
減圧下で濃縮し、粗抽出物3.４ｇを得た。

【００５２】得られた粗抽出物をシリカゲル（ワコーゲ
ルＦＣ−４０、和光純薬工業社製）３５０ｇを充填した
カラムに吸着させ、ジクロロメタン−メタノール混合液
（９３：７）で溶出した。Ｄ３２９Ｐ物質を含むフラク
ションを集めて減圧下に濃縮乾固し、0.５ｇを得た。引
き続いて、シリカゲル（ワコーゲルＦＣ−４０、和光純
薬工業社製）１１０ｇを充填したカラムに吸着させ、ジ
クロロメタン−メタノール混合液（９５：５）で溶出し
た。Ｄ３２９Ｐ物質を含むフラクションを集めて減圧下
に濃縮乾固し、粗精製物0.３ｇを得た。この粗精製物0.
３ｇを化学修飾シリカゲル（ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＱ １
２０−Ｓ５０，ワイエムシィ社製）１３０ｇを充填した
カラムに吸着させ、イオン交換水−アセトニトリル（７
５：２５）の系で溶出した。Ｄ３２９Ｐ物質画分を濃縮
乾固し、純粋なＤ３２９Ｐ物質３６mgを得た。この物質
の物理化学的性質および後述する細胞障害活性について
は実施例１で得られた物質と同じである。

【００５３】実施例３ 乾燥酵母1.０％，リン酸水素二カリウム0.２％，硫酸マ
グネシウム0.１％，マンニトール0.５％，硫酸第一鉄１
０ppm ，塩化マンガン１０ppm ，硫酸亜鉛１０ppm ，硫
酸銅１０ppm ，塩化コバルト１０ppm から成る液体培地
をpH8.０に調整し、この培地１００mlを分注した５００
ml容三角フラスコを１２１℃で１５分間滅菌した。次い
で、Ｄ３２９−１８５株（FERM BP-3269）を寒天斜面培
地上より上記三角フラスコに植菌した。

【００５４】３０℃で４日間振とう培養し、一次種培養
液を調製した。この一次種培養液を同じ培地組成を持つ
培地をそれぞれ６００ml分注した１１本の３リットル容
三同じ培地組成を持つ培地をそれぞれ６００ml分注した
１１本の３リットル容三角フラスコに４％ずつ植菌し、
３０℃で１９日間振とう培養した。培養終了後の培養液
を遠心分離して菌体を含むケーキと上澄とに分離した。
得られた菌体を含むケーキは８０％アセトン5.０リット
ルに浸漬し、室温で５時間攪拌した。菌体等の固形物を
吸引濾過によって除去し、アセトン抽出液を得た。

【００５５】一方、遠心上澄は合成吸着剤ＨＰ−２０
（三菱化成社製）６００ｍｌを充填したカラムに吸着さ
せ、次いでイオン交換水1.５リットルで洗った。さら
に、1.５リットルの８０％アセトンで溶出し、アセトン
溶液を得た。前述の菌体からのアセトン抽出液と合わせ
て減圧下に濃縮してアセトンを除去し、2.５リットルと
した。この濃縮液を1.８リットルの酢酸エチルで３回抽
出を行い、得られた酢酸エチル溶液を合わせて減圧下で
濃縮し、酢酸エチル抽出物3.８ｇを得た。引き続いて、
水層を1.８リットルのｎ−ブタノールで３回抽出を行
い、得られたｎ−ブタノール溶液を合わせて減圧下で濃
縮し、ｎ−ブタノール抽出物3.０ｇを得た。

【００５６】得られたｎ−ブタノール抽出物をシリカゲ
ル（ワコーゲルＣ−２００、和光純薬工業社製）３５０
ｇを充填したカラムに吸着させ、ジクロロメタン−メタ
ノール混合液（９：１→７：３→１：１）で順次溶出し
た。Ｄ３２９Ｑ物質を含むフラクションを集めて減圧下
に濃縮乾固し、1.３ｇを得た。引き続いて、シリカゲル
（ワコーゲルＦＣ−４０、和光純薬工業社製）３５０ｇ
を充填したカラムに吸着させ、ジクロロメタン−メタノ
ール混合液（９：１→８：２）で溶出した。Ｄ３２９Ｑ
物質を含むフラクションを集めて減圧下に濃縮乾固し、
粗精製物0.３ｇを得た。この粗精製物0.３ｇを化学修飾
シリカゲル（ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＱ １２０−Ｓ５０，
ワイエムシィ社製）１３０ｇを充填したカラムに吸着さ
せ、イオン交換水−アセトニトリル（７：３）の系で溶
出した。Ｄ３２９Ｑ物質画分を濃縮乾固し、純粋なＤ３
２９Ｑ物質５mgを得た。この物質の物理化学的性質を以
下に示す。この物質の細胞障害活性については後述する
試験例に示す。

【００５７】Ｄ３２９Ｑ物質 （イ）分子量及び分子式 ６３７， Ｃ₃₂Ｈ₃₁Ｏ₁₃Ｎ （ロ）マススペクトル（FAB-MS, Pos.) m/z ６３８（Ｍ＋Ｈ）⁺ （ハ）高速液体クロマトグラフィー カプセルパック Ｃ₁₈カラム（φ4.6mm ×150mm 、資生
堂社製）でイオン交換水／アセトニトリル＝７／３の系
で流速１ml/ 分のとき、4.９分で溶出した。

【００５８】（ニ）紫外部吸収スペクトル メタノール溶液中で測定したスペクトルは図４に示す通
りである。 （ホ）赤外部吸収スペクトル ＫＢｒディスク法で測定したスペクトルは図５に示す通
りである。 （ヘ）プロトン核磁気共鳴スペクトル 重ピリジン中５０℃でテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を
基準として測定した４００ＭＨｚプロトン核磁気共鳴ス
ペクトルは図６に示す通りである。

【００５９】（ト）炭素１３核磁気共鳴スペクトル 重ピリジン中でテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を基準と
して測定した１００ＭＨｚ炭素１３核磁気共鳴スペクト
ルは以下に示す通りである。 δ:182.2, 179.0, 159.0, 156.2, 152.2, 147.9, 146.
0, 134.9, 133.9, 133.4,132.1, 130.9, 125.4, 121.0,
119.8, 119.2, 118.4, 106.8, 103.8, 102.1, 101.0,
80.5, 74.1, 73.5, 72.6, 71.9, 71.9, 70.5, 67.6, 2
4.0, 17.2, 17.1

【００６０】（チ）溶解性 ピリジンに可溶、ジメチルスルフォキサイド，メタノー
ルに難溶、テトラヒドロフラン，アセトン，クロロホル
ム，ベンゼン，ｎ−ヘキサンに不溶 （リ）酸性・中性・塩基性の区別 塩基性 （ヌ）外観 紫色粉末

【００６１】実施例４ 乾燥酵母1.０％，リン酸水素二カリウム0.２％，硫酸マ
グネシウム0.１％，マンニトール2.０％，硫酸第一鉄１
０ppm ，塩化マンガン１０ppm ，硫酸亜鉛１０ppm ，硫
酸銅１０ppm ，塩化コバルト１０ppm から成る液体培地
をpH8.０に調整し、この培地１００mlを分注した５００
ml容三角フラスコを１２１℃で１５分間滅菌した。次い
で、Ｄ３２９−１８５株（FERM BP-3269）を寒天斜面培
地上より上記三角フラスコに植菌した。

【００６２】３０℃で４日間振とう培養し、一次種培養
液を調製した。この一次種培養液を同じ培地組成を持つ
培地をそれぞれ６００ml分注した１６本の３リットル容
三角フラスコに４％ずつ植菌し、３０℃で２０日間振と
う培養した。培養終了後の培養液を遠心分離して菌体を
含むケーキと上澄とに分離した。得られた菌体を含むケ
ーキは８０％アセトン5.０リットルに浸漬し、室温で一
晩静置した。菌体等の固形物を吸引濾過によって除去
し、アセトン抽出液を得た。

【００６３】一方、遠心上澄は合成吸着剤ＨＰ−２０
（三菱化成社製）1.４リットルを充填したカラムに吸着
させ、次いでイオン交換水3.０リットルで洗った。さら
に、3.０リットルの８０％アセトンで溶出し、アセトン
溶液を得た。前述の菌体からのアセトン抽出液と合わせ
て減圧下に濃縮してアセトンを除去し、1.５リットルと
した。この濃縮液を1.０リットルの酢酸エチルで３回抽
出を行い、得られた酢酸エチル溶液を合わせて減圧下で
濃縮し、酢酸エチル抽出物4.２ｇを得た。引き続いて、
水層を1.０リットルのｎ−ブタノールで４回抽出を行
い、得られたｎ−ブタノール溶液を合わせて減圧下で濃
縮し、ｎ−ブタノール抽出物3.１ｇを得た。

【００６４】得られたｎ−ブタノール抽出物をシリカゲ
ル（ワコーゲルＦＣ−４０、和光純薬工業社製）３５０
ｇを充填したカラムに吸着させ、ジクロロメタン−メタ
ノール混合液（９２：８→７：３→１：１）で溶出し
た。Ｄ３２９Ｑ物質を含むフラクションを集めて減圧下
に濃縮乾固し、0.２ｇを得た。引き続いて、シリカゲル
（ワコーゲルＦＣ−４０、和光純薬工業社製）１２０ｇ
を充填したカラムに吸着させ、ジクロロメタン−メタノ
ール混合液（９５：５）で溶出した。Ｄ３２９Ｑ物質を
含むフラクションを集めて減圧下に濃縮乾固し、粗精製
物２０mgを得た。粗精製物２０mgを高速液体クロマトグ
ラフィー（カラム ウォーターズ社製、ＮＯＶＡ−ＰＡ
Ｋ ＨＲ Ｃ−１８ φ２５mm×１００mm）にかけ、イ
オン交換水−アセトニトリル（７７：２３）の系で溶出
した。Ｄ３２９Ｑ物質画分を濃縮乾固し、純粋なＤ３２
９Ｑ物質１２mgを得た。この物質の物理化学的性質及び
後述する細胞障害活性については実施例３で得られた物
質と同じである。

【００６５】実施例５ 乾燥酵母1.０％，リン酸水素二カリウム0.２％，硫酸マ
グネシウム0.１％，マンニトール2.０％，硫酸第一鉄１
０ppm ，塩化マンガン１０ppm ，硫酸亜鉛１０ppm ，硫
酸銅１０ppm ，塩化コバルト１０ppm から成る液体培地
をpH8.０に調整し、この培地１００mlを分注した５００
ml容三角フラスコを１２１℃で１５分間滅菌した。次い
で、Ｄ３２９−１８５株（FERM BP-3269）を寒天斜面培
地上より上記三角フラスコに植菌した。

【００６６】３０℃で４日間振とう培養し、一次種培養
液を調製した。この一次種培養液を同じ培地組成を持つ
培地をそれぞれ６００ml分注した１１本の３リットル容
三角フラスコに４％ずつ植菌し、３０℃で１９日間振と
う培養した。培養終了後の培養液を遠心分離して菌体を
含むケーキと上澄とに分離した。得られた菌体を含むケ
ーキは８０％アセトン5.０リットルに浸漬し、室温で５
時間攪拌した。菌体等の固形物を吸引濾過によって除去
し、アセトン抽出液を得た。

【００６７】一方、遠心上澄は合成吸着剤ＨＰ−２０
（三菱化成社製）６００ｍｌを充填したカラムに吸着さ
せ、次いでイオン交換水1.５リットルで洗った。さら
に、1.５リットルの８０％アセトンで溶出し、アセトン
溶液を得た。前述の菌体からのアセトン抽出液と合わせ
て減圧下に濃縮してアセトンを除去し、2.５リットルと
した。この濃縮液を1.８リットルの酢酸エチルで３回抽
出を行い、得られた酢酸エチル溶液を合わせて減圧下で
濃縮し、酢酸エチル抽出物3.８ｇを得た。引き続いて、
水層を1.８リットルのｎ−ブタノールで３回抽出を行
い、得られたｎ−ブタノール溶液を合わせて減圧下で濃
縮し、ｎ−ブタノール抽出物3.０ｇを得た。

【００６８】得られたｎ−ブタノール抽出物をシリカゲ
ル（ワコーゲルＣ−２００、和光純薬工業社製）３５０
ｇを充填したカラムに吸着させ、ジクロロメタン−メタ
ノール混合液（９：１→７：３→１：１）で順次溶出し
た。Ｄ３２９Ｒ物質を含むフラクションを集めて減圧下
に濃縮乾固し、1.３ｇを得た。引き続いて、シリカゲル
（ワコーゲルＦＣ−４０、和光純薬工業社製）３５０ｇ
を充填したカラムに吸着させ、ジクロロメタン−メタノ
ール混合液（９：１→８：２）で溶出した。Ｄ３２９Ｒ
物質を含むフラクションを集めて減圧下に濃縮乾固し、
0.２ｇを得た。

【００６９】これを化学修飾シリカゲル（ＹＭＣ ＯＤ
Ｓ−ＡＱ １２０−Ｓ５０，ワイエムシィ社製）１２０
ｇを充填したカラムに吸着させ、イオン交換水−アセト
ニトリル（７：３）の系で溶出した。Ｄ３２９Ｒ物質を
含むフラクションを集めて減圧下に濃縮乾固し、粗精製
物１６mgを得た。この粗精製物を高速液体クロマトグラ
フィー（カラム 資生堂社製、カプセルパック Ｃ₁₈
φ６ｍｍ×２５０ｍｍ）にかけ、イオン交換水−アセト
ニトリル（１：１）の系で分取し、Ｄ３２９Ｒ物質画分
を濃縮乾固し、純粋なＤ３２９Ｒ物質0.５mgを得た。こ
の物質の物理化学的性質を以下に示す。

【００７０】Ｄ３２９Ｒ物質 （イ）分子量及び分子式 ７９７， Ｃ₃₉Ｈ₄₃Ｏ₁₇Ｎ （ロ）マススペクトル（FAB-MS, Pos.) m/z ８２０（Ｍ＋Ｎａ）⁺ （ハ）高速液体クロマトグラフィー カプセルパック Ｃ₁₈カラム（φ4.6mm ×150mm 、資生
堂社製）でイオン交換水／アセトニトリル＝７／３の系
で流速１ml/ 分のとき、4.０分で溶出した。

【００７１】（ニ）紫外部吸収スペクトル メタノール溶液中で測定したスペクトルは図７に示す通
りである。 （ホ）赤外部吸収スペクトル ＫＢｒディスク法で測定したスペクトルは図８に示す通
りである。 （ヘ）プロトン核磁気共鳴スペクトル 重ピリジン中テトラメチルシラン（ＴＭＳ）を基準とし
て測定した４００ＭＨｚプロトン核磁気共鳴スペクトル
は図９に示す通りである。

【００７２】（ト）炭素１３核磁気共鳴スペクトル 重ピリジン中でテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を基準と
して測定した１００ＭＨｚ炭素１３核磁気共鳴スペクト
ルは以下に示す通りである。 δ:182.3, 179.3, 158.9, 155.2, 152.1, 147.9, 145.
9, 135.0, 134.3, 133.4,132.0, 130.7, 125.7, 121.4,
120.7, 120.2, 118.8, 107.2, 104.1, 100.5, 96.6, 9
6.3, 81.3, 77.9, 73.63, 73.56, 73.4, 72.9, 71.6, 6
9.9, 68.7, 68.6,67.1, 66.9, 56.5, 24.1, 17.2, 17.
0, 16.5

【００７３】（チ）溶解性 ジメチルスルフォキサイド，ピリジン，テトラヒドロフ
ラン，メタノールに可溶、アセトンに難溶、クロロホル
ム，ベンゼン，ｎ−ヘキサンに不溶 （リ）酸性・中性・塩基性の区別 塩基性 （ヌ）外観 紫色粉末

【００７４】実施例６ 乾燥酵母1.０％，リン酸水素二カリウム0.２％，硫酸マ
グネシウム0.１％，マンニトール2.０％，硫酸第一鉄１
０ppm ，塩化マンガン１０ppm ，硫酸亜鉛１０ppm ，硫
酸銅１０ppm ，塩化コバルト１０ppm から成る液体培地
をpH8.０に調整し、この培地１００mlを分注した５００
ml容三角フラスコを１２１℃で１５分間滅菌した。次い
で、Ｄ３２９−１８５株（FERM BP-3269）を寒天斜面培
地上より上記三角フラスコに植菌した。

【００７５】３０℃で４日間振とう培養し、一次種培養
液を調製した。この一次種培養液を同じ培地組成を持つ
培地をそれぞれ６００ml分注した１６本の３リットル容
三角フラスコに４％ずつ植菌し、３０℃で２０日間振と
う培養した。培養終了後の培養液を遠心分離して菌体を
含むケーキと上澄とに分離した。得られた菌体を含むケ
ーキは８０％アセトン5.０リットルに浸漬し、室温で一
晩静置した。菌体等の固形物を吸引濾過によって除去
し、アセトン抽出液を得た。

【００７６】一方、遠心上澄は合成吸着剤ＨＰ−２０
（三菱化成社製）1.４リットルを充填したカラムに吸着
させ、次いでイオン交換水3.０リットルで洗った。さら
に、3.０リットルの８０％アセトンで溶出し、アセトン
溶液を得た。前述の菌体からのアセトン抽出液と合わせ
て減圧下に濃縮してアセトンを除去し、1.５リットルと
した。この濃縮液を1.０リットルの酢酸エチルで３回抽
出を行い、得られた酢酸エチル溶液を合わせて減圧下で
濃縮し、酢酸エチル抽出物4.２ｇを得た。引き続いて、
水層を1.０リットルのｎ−ブタノールで４回抽出を行
い、得られたｎ−ブタノール溶液を合わせて減圧下で濃
縮し、ｎ−ブタノール抽出物3.１ｇを得た。

【００７７】得られたｎ−ブタノール抽出物をシリカゲ
ル（ワコーゲルＦＣ−４０、和光純薬工業社製）３５０
ｇを充填したカラムに吸着させ、ジクロロメタン−メタ
ノール混合液（９２：８→７：３→１：１）で順次溶出
した。Ｄ３２９Ｒ物質を含むフラクションを集めて減圧
下に濃縮乾固し、0.２ｇを得た。引き続いて、シリカゲ
ル（ワコーゲルＦＣ−４０、和光純薬工業社製）１２０
ｇを充填したカラムに吸着させ、ジクロロメタン−メタ
ノール混合液（９５：５）で溶出した。Ｄ３２９Ｒ物質
を含むフラクションを集めて減圧下に濃縮乾固し、粗精
製物１２ｍｇを得た。この粗精製物を高速液体クロマト
グラフィー（カラム ワイエムシィ社製、Ｒ−ＳＩＬ−
５ φ4.６ｍｍ×２５０ｍｍ）にかけ、ジクロロメタン
−メタノール（９５：５）の系で溶出した。Ｄ３２９Ｒ
物質画分を濃縮乾固し、純粋なＤ３２９Ｒ物質１mgを得
た。この物質の物理化学的性質は実施例５で得られた物
質と同じである。

【００７８】実施例７ Ｄ３２９Ｓ物質を原料として通常の化学修飾または化学
合成的手法により前述したＤ３２９Ｐ，Ｑ及びＲ物質を
得た。なお、Ｄ３２９Ｓ物質は、下記の実施例８及び９
に示すように、Ｄ３２９Ｐ，Ｑ及びＲ物質からも誘導す
ることができる。

【００７９】実施例８ Ｄ３２９Ｐ物質5.０ｍｇを１規定塩酸0.６ｍｌと共に小
サンプル管に入れ、密栓し、１００℃で３時間攪拌し
た。室温まで放冷後、生じた沈澱を吸引濾過し、少量の
イオン交換水で洗い、濾紙上に残ったＤ３２９Ｓ物質2.
４ｍｇを得た。この物質の物理化学的性質を以下に示
す。

【００８０】Ｄ３２９Ｓ物質 （イ）分子量及び分子式 ３４５， Ｃ₂₀Ｈ₁₁Ｏ₅ Ｎ （ロ）マススペクトル（FD-MS) m/z ３４５（Ｍ⁺ ） （ハ）高速液体クロマトグラフィー カプセルパック Ｃ₁₈カラム（φ4.6mm ×150mm 、資生
堂社製）でイオン交換水／アセトニトリル＝１／１の系
で流速１ml/ 分のとき、8.３分で溶出した。

【００８１】（ニ）赤外部吸収スペクトル ＫＢｒディスク法で測定したスペクトルは図１０に示す
通りである。 （ホ）溶解性 ジメチルスルフォキサイド，ピリジン，テトラヒドロフ
ランに可溶、アセトン，クロロホルム，ベンゼンに難
溶、メタノール，ｎ−ヘキサンに不溶 （ヘ）酸性・中性・塩基性の区別 塩基性 （ト）外観 紫色粉末

【００８２】実施例９ Ｄ３２９Ｑ物質3.０ｍｇを１規定塩酸0.４ｍｌと共に小
サンプル管に入れ、密栓し、１００℃で３時間攪拌し
た。室温まで放冷後、生じた沈澱を吸引濾過し、少量の
イオン交換水で洗い、濾紙上に残ったＤ３２９Ｓ物質1.
５ｍｇを得た。この物質の物理化学的性質は実施例８で
得られた物質と同じである。

【００８３】以上のような方法によって得られたＤ３２
９物質、特にＤ３２９Ｐ，Ｑ，ＲおよびＳ物質の物理化
学的性質を実施例中に示したが、さらに構造研究を行な
った結果、これらのＤ３２９物質の化学構造を前記構造
式のように決定した。この物理化学的性質に一致する公
知の化合物は存在しないことより、Ｄ３２９物質は新規
な化合物であると認定される。

【００８４】実施例１０ キサンチルＤ３２９Ｐ物質 Ｄ３２９Ｐ物質３０ｍｇの酢酸溶液５ｍｌに室温攪拌下
キサントヒドロール１１ｍｇを加え６０℃にて３時間攪
拌した。反応液を氷水１５ｍｌに注ぎジクロルメタン２
０ｍｌで２回抽出した。ジクロルメタン層を分離後１５
ｍｌの飽和重曹水で２回水洗し、１５ｍｌの飽和食塩水
で２回洗浄し、さらに無水硫酸ナトリウムで乾燥した。
無水硫酸ナトリウムを濾過して除き、得られたジクロル
メタン溶液を減圧下濃縮して、紫色の油状物質を得た。
これを減圧乾燥後シリカゲルプレートを用いた分取薄層
クロマトグラフィー（展開溶媒 ジクロルメタン：メタ
ノール＝９：１）にて精製しキサンチル誘導体３5.７ｍ
ｇを得た。

【００８５】（イ）マススペクトル（FD-MS) m/z ８３２（Ｍ⁺ ＋Ｈ） （ロ）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）：２２
９，２６２，４０８，５４０，５８０ （ハ）赤外部吸収スペクトル ＫＢｒディスク法で測定した赤外線スペクトルは図１１
に示す通りである。 （ニ）プロトン核磁気共鳴スペクトル 重クロロホルム（２７℃）でテトラメチルシラン（ＴＭ
Ｓ）を基準として測定した４００Ｍｚプロトン核磁気共
鳴スペクトルは図１２に示す通りである。 （ホ）炭素１３核磁気共鳴スペクトル 重クロロホルム（２７℃）でテトラメチルシラン（ＴＭ
Ｓ）を基準として測定した１００ＭＨｚ炭素１３核磁気
共鳴スペクトルは図１３に示す通りである。

【００８６】ベンジルオキシカルボニルＤ３２９Ｐ物質 Ｄ３２９Ｐ物質２０ｍｇのテトラヒドロフラン溶液５ｍ
ｌに室温攪拌下、塩化ベンジルオキシカルボニル0.０１
ｍｌ及び炭酸水素ナトリウム0.１ｇを加え１２時間攪拌
した。１５ｍｌの１Ｎ塩酸で酸性として２０ｍｌの酢酸
エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を２０ｍｌの飽和
重曹水で２回洗浄し、２０ｍｌの飽和食塩水で２回洗浄
し、さらに無水硫酸ナトリウムで乾燥した。無水硫酸ナ
トリウムを濾過して除き、得られた酢酸エチル溶液を減
圧下濃縮して、紫色の油状物質を得た。これを減圧乾燥
後、シリカゲルプレートを用いた分取薄層クロマトグラ
フィー（展開溶媒 ジクロルメタン：メタノール＝９：
１）にて精製しキサンチル誘導体３5.７ｍｇを得た。

【００８７】（イ）マススペクトル（FD-MS) m/z ７７１ （ロ）紫外部吸収スペクトル（メタノール中）：２２
８，２６１，４０５，５４０，５８０

【００８８】

【試験例】

（１）抗腫瘍活性 マウス繊維肉腫Ｍｅｔｈ Ａ細胞をマウス１匹あたり
１×１０⁶ 個腹腔内に移植したＣＤＦ₁ マウスに対し
て、細胞移植後２４時間後から１日１回、計４回ジメチ
ルスルフォキサイド１０％水溶液に溶解したＤ３２９Ｐ
物質を腹腔内に投与したときの治療効果を延命効果で測
定し、結果を第４表に示した。なお、表中の延命効果
は、対照群の平均生存日数（Ｃ）に対する治療群の平均
生存日数（Ｔ）の比を百分率をもって表したものであ
る。

【００８９】

【表４】

【００９０】種々の培養細胞に対する細胞障害活性を
検討した。各細胞を９６穴マイクロプレートに蒔き込
み、３７℃で５％ＣＯ₂ 存在下に培養した。２４時間後
に種々の濃度の被検物質を添加し、さらに９６時間後、
ＭＴＴ法（医学のあゆみ、１４１巻、５３３〜５３７ペ
ージ、１９８７年）に基づき、５０％増殖阻害濃度（Ｉ
Ｃ₅₀）を算出した。各細胞に対するＩＣ₅₀値を第５表に
示した。

【００９１】

【表５】

【００９２】（２）急性毒性 ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いた急性毒性試験において腹腔
内投与でＤ３２９Ｐ物質、Ｄ３２９Ｑ物質ともに１００
mg／kgでも毒性を示さなかった。ここで、試験例は示さ
ないが、Ｄ３２９Ｒ物質も同様の効果及び低毒性を示し
た。

【００９３】

【発明の効果】本発明のＤ３２９物質、すなわちＤ３２
９Ｐ，ＱおよびＲ物質は、毒性が少なく優れた抗腫瘍作
用を示すことより、抗癌剤として有用であると考えら
れ、医療用の抗癌剤としての利用が期待される。また、
化学合成的手法によって誘導体を合成することにより、
活性のさらに向上することも期待され、合成中間体とし
ても高い価値を有する。

【図面の簡単な説明】

【図１】 Ｄ３２９Ｐ物質のメタノール中で測定した紫
外部吸収スペクトル図である。

【図２】 Ｄ３２９Ｐ物質のＫＢｒディスク法で測定し
た赤外部吸収スペクトル図である。

【図３】 Ｄ３２９Ｐ物質の重ピリジン中、５０℃でテ
トラメチルシラン（ＴＭＳ）を基準として測定したプロ
トン核磁気共鳴スペクトル図である。

【図４】 Ｄ３２９Ｑ物質のメタノール中で測定した紫
外部吸収スペクトル図である。

【図５】 Ｄ３２９Ｑ物質のＫＢｒディスク法で測定し
た赤外部吸収スペクトル図である。

【図６】 Ｄ３２９Ｑ物質の重ピリジン中、５０℃でテ
トラメチルシラン（ＴＭＳ）を基準として測定したプロ
トン核磁気共鳴スペクトル図である。

【図７】 Ｄ３２９Ｒ物質のメタノール中で測定した紫
外部吸収スペクトル図である。

【図８】 Ｄ３２９Ｒ物質のＫＢｒディスク法で測定し
た赤外部吸収スペクトル図である。

【図９】 Ｄ３２９Ｒ物質の重ピリジン中、室温でテト
ラメチルシラン（ＴＭＳ）を基準として測定したプロト
ン核磁気共鳴スペクトル図である。

【図１０】 Ｄ３２９Ｓ物質のＫＢｒディスク法で測定
した赤外部吸収スペクトル図である。

【図１１】 キサンチルＤ３２９Ｐ誘導体物質のＫＢｒ
ディスク法で測定した赤外部吸収スペクトル図である。

【図１２】 キサンチルＤ３２９Ｐ誘導体物質の重クロ
ロホルム中、２７℃でテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を
基準として測定したプロトン核磁気共鳴スペクトル図で
ある。

【図１３】 キサンチルＤ３２９Ｐ誘導体物質の重クロ
ロホルム中、２７℃でテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を
基準として測定した炭素１３磁気共鳴スペクトル図であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 中村 武彦 静岡県焼津市岡当目10番地 サッポロビー ル株式会社医薬開発研究所内 (72)発明者 棟方 正信 静岡県焼津市岡当目10番地 サッポロビー ル株式会社医薬開発研究所内 (72)発明者 岡本 能弘 静岡県焼津市岡当目10番地 サッポロビー ル株式会社医薬開発研究所内 (72)発明者 内田 秀明 愛知県名古屋市天白区植田山４−503 メ ゾンドポプラ202号

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次式（Ｉ）： 【化１】 （式中、Ｒ¹ は 【化２】 【化３】 または 【化４】 を示し、Ｒ² は 【化５】 または 【化６】 を示す。）で表されるＤ３２９物質またはその誘導体、
   あるいはその医薬的に許容される塩。
2. 【請求項２】 次式（ａ）： 【化７】 で表されるＤ３２９Ｐ物質またはその医薬的に許容され
   る塩。
3. 【請求項３】 次式（ｂ）： 【化８】 で表されるＤ３２９Ｑ物質またはその医薬的に許容され
   る塩。
4. 【請求項４】 次式 【化９】 で表される請求項２記載の化合物Ｄ３２９Ｐ物質の誘導
   体またはその医薬的に許容される塩。
5. 【請求項５】 次式 【化１０】 で表される請求項２記載の化合物Ｄ３２９Ｐ物質の誘導
   体またはその医薬的に許容される塩。
6. 【請求項６】 次式（II）： 【化１１】 で表されるＤ３２９Ｓ物質。
7. 【請求項７】 請求項６記載の式（II）で表されるＤ３
   ２９Ｓ物質に請求項１記載の置換基Ｒ¹ およびＲ² を導
   入することを特徴とする請求項１記載の式（Ｉ）で表さ
   れるＤ３２９物質またはその誘導体の製造法。
8. 【請求項８】 ストレプトミセス属に属し、請求項１記
   載のＤ３２９物質を生産する能力を有する微生物を培地
   に培養し、その培養物から当該Ｄ３２９物質を採取する
   ことを特徴とするＤ３２９物質またはその医薬的に許容
   される塩の製造法。
9. 【請求項９】 Ｄ３２９物質を生産する能力を有する微
   生物がストレプトミセス・チャートリューシスＤ３２９
   −１８５株〔Streptomyces chartreusis, 生工研条寄第
   ３２６９号，(FERM BP-3269)〕である請求項８記載のＤ
   ３２９物質またはその医薬的に許容される塩の製造法。
10. 【請求項１０】 ストレプトミセス属に属し、請求項２
    記載のＤ３２９Ｐ物質を生産する能力を有する微生物を
    培地に培養し、その培養物から当該Ｄ３２９Ｐ物質を採
    取することを特徴とするＤ３２９Ｐ物質またはその医薬
    的に許容される塩の製造法。
11. 【請求項１１】 Ｄ３２９Ｐ物質を生産する能力を有す
    る微生物がストレプトミセス・チャートリューシスＤ３
    ２９−１８５株〔Streptomyces chartreusis, 生工研条
    寄第３２６９号，(FERM BP-3269)〕である請求項１０記
    載のＤ３２９Ｐ物質またはその医薬的に許容される塩の
    製造法。
12. 【請求項１２】 ストレプトミセス属に属し、請求項３
    記載のＤ３２９Ｑ物質を生産する能力を有する微生物を
    培地に培養し、その培養物から当該Ｄ３２９Ｑ物質を採
    取することを特徴とするＤ３２９Ｑ物質またはその医薬
    的に許容される塩の製造法。
13. 【請求項１３】 Ｄ３２９Ｑ物質を生産する能力を有す
    る微生物がストレプトミセス・チャートリューシスＤ３
    ２９−１８５株〔Streptomyces chartreusis, 生工研条
    寄第３２６９号，(FERM BP-3269)〕である請求項１２記
    載のＤ３２９Ｑ物質またはその医薬的に許容される塩の
    製造法。
14. 【請求項１４】 請求項１記載のＤ３２９物質またはそ
    の誘導体あるいはその医薬的に許容される塩を有効成分
    として含有する抗腫瘍剤。