JPH06237779A - 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法Info
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリ
ウム属に属し、野生株に比べてα−ケトグルタル酸デヒ
ドロゲナーゼ活性が低下し、かつＬ−グルタミン酸生産
能を有する変異株をビオチン濃度１０乃至１０００μｇ
／ｌの液体栄養培地中でビオチン作用抑制物質を培地に
添加することなく培養し、培養液中にＬ−グルタミン酸
を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発
酵法によるＬ−グルタミン酸の製造法。 【効果】 本発明の方法によれば、発酵法によりＬ−グ
ルタミン酸を工業的にさらに安価に製造することができ
る。
ウム属に属し、野生株に比べてα−ケトグルタル酸デヒ
ドロゲナーゼ活性が低下し、かつＬ−グルタミン酸生産
能を有する変異株をビオチン濃度１０乃至１０００μｇ
／ｌの液体栄養培地中でビオチン作用抑制物質を培地に
添加することなく培養し、培養液中にＬ−グルタミン酸
を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする発
酵法によるＬ−グルタミン酸の製造法。 【効果】 本発明の方法によれば、発酵法によりＬ−グ
ルタミン酸を工業的にさらに安価に製造することができ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、発酵法によるＬ−グル
タミン酸の製造法に関する。Ｌ−グルタミン酸は食品、
医薬品、化学品等として重要なアミノ酸である。
タミン酸の製造法に関する。Ｌ−グルタミン酸は食品、
医薬品、化学品等として重要なアミノ酸である。
【０００２】
【従来の技術】従来よりＬ−グルタミン酸はブレビバク
テリウム属またはコリネバクテリウム属に属する微生物
を用いた発酵法により工業的に生産されている。従来の
Ｌ−グルタミン酸発酵においては、培地に含まれるビオ
チンもしくはビオチン活性物質の濃度がＬ−グルタミン
酸の生産性に大きく影響することが知られており、ビオ
チンもしくはビオチン活性物質が生育の適量以下の制限
条件下において培養を行うか、あるいは甘藷、甜菜から
の糖汁もしくは廃糖蜜等のビオチン過剰原料を炭素源と
して使用する場合はペニシリンＧ、Ｆ、Ｋ、Ｏ、Ｖ、Ｘ
等のペニシリン類またはシュクロースモノパルミテー
ト、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート等
の高級脂肪酸もしくはその誘導体より成る界面活性剤を
ビオチン作用抑制物質として培地に添加する等の方法で
培養が行われていた。
テリウム属またはコリネバクテリウム属に属する微生物
を用いた発酵法により工業的に生産されている。従来の
Ｌ−グルタミン酸発酵においては、培地に含まれるビオ
チンもしくはビオチン活性物質の濃度がＬ−グルタミン
酸の生産性に大きく影響することが知られており、ビオ
チンもしくはビオチン活性物質が生育の適量以下の制限
条件下において培養を行うか、あるいは甘藷、甜菜から
の糖汁もしくは廃糖蜜等のビオチン過剰原料を炭素源と
して使用する場合はペニシリンＧ、Ｆ、Ｋ、Ｏ、Ｖ、Ｘ
等のペニシリン類またはシュクロースモノパルミテー
ト、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート等
の高級脂肪酸もしくはその誘導体より成る界面活性剤を
ビオチン作用抑制物質として培地に添加する等の方法で
培養が行われていた。
【０００３】一方、ブレビバクテリウム属の細菌におい
てα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性の存在を明
らかにした上で本酵素活性の低下した変異株を誘導し、
そのＬ−グルタミン酸生産能を調べた報告があるが、該
変異株のＬ−グルタミン酸生産能は親株とほぼ同じであ
ったとされている（Agric. Biol. Chem., 44, 1897〜19
04 (1980)、Agric. Biol. Chem., 46, 493〜500 (198
2)）。
てα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性の存在を明
らかにした上で本酵素活性の低下した変異株を誘導し、
そのＬ−グルタミン酸生産能を調べた報告があるが、該
変異株のＬ−グルタミン酸生産能は親株とほぼ同じであ
ったとされている（Agric. Biol. Chem., 44, 1897〜19
04 (1980)、Agric. Biol. Chem., 46, 493〜500 (198
2)）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、発酵
法によりＬ−グルタミン酸を工業的にさらに安価に製造
する方法を提供することである。
法によりＬ−グルタミン酸を工業的にさらに安価に製造
する方法を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、従来の発
酵法によるＬ−グルタミン酸の製造法を改良すべく鋭意
研究した結果、ブレビバクテリウム属またはコリネバク
テリウム属に属し、野生株に比べてα−ケトグルタル酸
デヒドロゲナーゼ活性が低下し、かつＬ−グルタミン酸
生産能を有する変異株をビオチン過剰原料を炭素源とす
る液体栄養培地中で培養すると、ペニシリン類や界面活
性剤等のビオチン作用抑制物質を培地に添加することな
く高蓄積、高収率でＬ−グルタミン酸が生産されること
を見い出し、本発明を完成するに至った。
酵法によるＬ−グルタミン酸の製造法を改良すべく鋭意
研究した結果、ブレビバクテリウム属またはコリネバク
テリウム属に属し、野生株に比べてα−ケトグルタル酸
デヒドロゲナーゼ活性が低下し、かつＬ−グルタミン酸
生産能を有する変異株をビオチン過剰原料を炭素源とす
る液体栄養培地中で培養すると、ペニシリン類や界面活
性剤等のビオチン作用抑制物質を培地に添加することな
く高蓄積、高収率でＬ−グルタミン酸が生産されること
を見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】すなわち、本発明は、ブレビバクテリウム
属またはコリネバクテリウム属に属し、野生株に比べて
α−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低下し、か
つＬ−グルタミン酸生産能を有する変異株をビオチン濃
度１０乃至１０００μｇ／ｌの液体栄養培地中でビオチ
ン作用抑制物質を培地に添加することなく培養し、培養
液中にＬ−グルタミン酸を生成蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とする発酵法によるＬ−グルタミン酸の
製造法を提供するものである。
属またはコリネバクテリウム属に属し、野生株に比べて
α−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低下し、か
つＬ−グルタミン酸生産能を有する変異株をビオチン濃
度１０乃至１０００μｇ／ｌの液体栄養培地中でビオチ
ン作用抑制物質を培地に添加することなく培養し、培養
液中にＬ−グルタミン酸を生成蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とする発酵法によるＬ−グルタミン酸の
製造法を提供するものである。
【０００７】本発明で使用する変異株は、ブレビバクテ
リウム属またはコリネバクテリウム属に属し、野生株に
比べてα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低下
し、かつＬ−グルタミン酸生産能を有するものであれば
いかなるものでもよいが、具体的に例示すると以下のよ
うな菌株を挙げることができる。ブレビバクテリウム・
ラクトフェルメンタム ＡＪ１２８２１（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−４１７２） ブレビバクテリウム・フラバム ＡＪ１２８２２（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−４１７３） コリネバクテリウム・グルタミカム ＡＪ１２８２３
（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１７４）
リウム属またはコリネバクテリウム属に属し、野生株に
比べてα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低下
し、かつＬ−グルタミン酸生産能を有するものであれば
いかなるものでもよいが、具体的に例示すると以下のよ
うな菌株を挙げることができる。ブレビバクテリウム・
ラクトフェルメンタム ＡＪ１２８２１（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−４１７２） ブレビバクテリウム・フラバム ＡＪ１２８２２（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−４１７３） コリネバクテリウム・グルタミカム ＡＪ１２８２３
（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１７４）
【０００８】これらの変異株は、ブレビバクテリウム属
またはコリネバクテリウム属のＬ−グルタミン酸生産菌
を親株として変異誘導することによって得られる。親株
はブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属に
属し、Ｌ−グルタミン酸生産能を有するものであれば特
に限定されないが、例えば以下のような野生株を使用す
ることができる。 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＴＣＣ
１３８６９ ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ１４０６７ ブレビバクテリウム・ディバリカタム ＡＴＣＣ１４０
２０ ブレビバクテリウム・サッカロリティカム ＡＴＣＣ１
４０６６ コリネバクテリウム・グルタミカム ＡＴＣＣ１３０３
２ コリネバクテリウム・アセトアシドフィラム ＡＴＣＣ
１３８７０
またはコリネバクテリウム属のＬ−グルタミン酸生産菌
を親株として変異誘導することによって得られる。親株
はブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属に
属し、Ｌ−グルタミン酸生産能を有するものであれば特
に限定されないが、例えば以下のような野生株を使用す
ることができる。 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＴＣＣ
１３８６９ ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ１４０６７ ブレビバクテリウム・ディバリカタム ＡＴＣＣ１４０
２０ ブレビバクテリウム・サッカロリティカム ＡＴＣＣ１
４０６６ コリネバクテリウム・グルタミカム ＡＴＣＣ１３０３
２ コリネバクテリウム・アセトアシドフィラム ＡＴＣＣ
１３８７０
【０００９】上記変異株の変異誘導方法としては、紫外
線照射、Ｘ線照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の通
常の方法が用いられ、例えば２５０μｇ／ｍｌのＮ−メ
チル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンにより３
０℃で２０分間処理する方法等がある。また、遺伝子組
換え法により育種することもできる。
線照射、Ｘ線照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の通
常の方法が用いられ、例えば２５０μｇ／ｍｌのＮ−メ
チル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンにより３
０℃で２０分間処理する方法等がある。また、遺伝子組
換え法により育種することもできる。
【００１０】変異処理した菌株から本発明の変異株を分
離する方法は限定されないが、例えば、Ｌ−グルタミン
酸を単一炭素源及び単一窒素源とする培地で生育できな
いが、この培地のＬ−グルタミン酸をコハク酸及びアン
モニアで代替した培地で生育可能な菌株として分離する
方法がある（Agric. Biol. Chem., 46, 493〜500 (198
2)）。以下に変異株の取得方法の具体例を示す。
離する方法は限定されないが、例えば、Ｌ−グルタミン
酸を単一炭素源及び単一窒素源とする培地で生育できな
いが、この培地のＬ−グルタミン酸をコハク酸及びアン
モニアで代替した培地で生育可能な菌株として分離する
方法がある（Agric. Biol. Chem., 46, 493〜500 (198
2)）。以下に変異株の取得方法の具体例を示す。
【００１１】ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタ
ム ＡＴＣＣ１３８６９の菌体にＮ−メチル−Ｎ′−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジンによる通常の変異処理
（２５０μｇ／ｍｌ、３０℃、２０分）を施した後、表
１の組成の固体培地上で培養し、コロニーを形成させ
た。これよりレプリカ法により、Ｌ−グルタミン酸を単
一炭素源及び単一窒素源とする培地で生育できない変異
株を分離した。すなわち、表２の組成の培地上では、３
０℃で２日間培養しても生育できないが、Ｌ−グルタミ
ン酸ナトリウムをコハク酸１０ｇ／ｌ及びアンモニア水
１ｍｌ／ｌで代替した同培地上では同条件下で生育して
くるコロニーを採取した。かくして得られた変異株の１
つがブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＪ
１２８２１（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１７２）である。同様
の方法により、ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣ
Ｃ１４０６７を親株としてブレビバクテリウム・フラバ
ム ＡＪ１２８２２（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１７３）を、
またコリネバクテリウム・グルタミカム ＡＴＣＣ１３
０３２を親株としてコリネバクテリウム・グルタミカム
ＡＪ１２８２３（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１７４）を得た。
ム ＡＴＣＣ１３８６９の菌体にＮ−メチル−Ｎ′−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジンによる通常の変異処理
（２５０μｇ／ｍｌ、３０℃、２０分）を施した後、表
１の組成の固体培地上で培養し、コロニーを形成させ
た。これよりレプリカ法により、Ｌ−グルタミン酸を単
一炭素源及び単一窒素源とする培地で生育できない変異
株を分離した。すなわち、表２の組成の培地上では、３
０℃で２日間培養しても生育できないが、Ｌ−グルタミ
ン酸ナトリウムをコハク酸１０ｇ／ｌ及びアンモニア水
１ｍｌ／ｌで代替した同培地上では同条件下で生育して
くるコロニーを採取した。かくして得られた変異株の１
つがブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＪ
１２８２１（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１７２）である。同様
の方法により、ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣ
Ｃ１４０６７を親株としてブレビバクテリウム・フラバ
ム ＡＪ１２８２２（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１７３）を、
またコリネバクテリウム・グルタミカム ＡＴＣＣ１３
０３２を親株としてコリネバクテリウム・グルタミカム
ＡＪ１２８２３（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１７４）を得た。
【００１２】
【表１】
【００１３】
【表２】
【００１４】次に、各親株並びに変異株のα−ケトグル
タル酸デヒドロゲナーゼ活性を以下のようにして測定し
た。表３に示す組成の培地２０ｍｌを５００ｍｌ容振と
うフラスコに張り込み、１１５℃、１０分間加熱殺菌し
た。これに供試菌株を接種して３１．５℃、３６時間培
養した。得られた培養液より菌体を遠心分離し洗浄した
後、３０％グリセロールを含む０．１Ｍ濃度ＴＥＳ（Ｎ
−トリス（ハイドロキシメチル）メチル−２−アミノエ
タンスルホン酸）−ＮａＯＨ緩衝液２０ｍｌに懸濁し
た。菌体を超音波破砕して遠心分離した上清をセファデ
ックスＧ−２５カラムを用いてゲル濾過し、これを粗酵
素液とした。次いで表４に示す組成の反応液を用いて粗
酵素液のα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性を調
べた。反応は反応液１．５ｍｌに粗酵素液０．１ｍｌを
添加することにより開始し、室温にて３６５ｎｍにおけ
る吸光度の変化を追跡した。対照として反応液からα−
ケトグルタル酸を除いたものを使用した。
タル酸デヒドロゲナーゼ活性を以下のようにして測定し
た。表３に示す組成の培地２０ｍｌを５００ｍｌ容振と
うフラスコに張り込み、１１５℃、１０分間加熱殺菌し
た。これに供試菌株を接種して３１．５℃、３６時間培
養した。得られた培養液より菌体を遠心分離し洗浄した
後、３０％グリセロールを含む０．１Ｍ濃度ＴＥＳ（Ｎ
−トリス（ハイドロキシメチル）メチル−２−アミノエ
タンスルホン酸）−ＮａＯＨ緩衝液２０ｍｌに懸濁し
た。菌体を超音波破砕して遠心分離した上清をセファデ
ックスＧ−２５カラムを用いてゲル濾過し、これを粗酵
素液とした。次いで表４に示す組成の反応液を用いて粗
酵素液のα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性を調
べた。反応は反応液１．５ｍｌに粗酵素液０．１ｍｌを
添加することにより開始し、室温にて３６５ｎｍにおけ
る吸光度の変化を追跡した。対照として反応液からα−
ケトグルタル酸を除いたものを使用した。
【００１５】
【表３】
【００１６】
【表４】
【００１７】表５にその結果を示す。これから明らかな
ように、上述の方法により得られた変異株はいずれも親
株として用いた野生株に比べてα−ケトグルタル酸デヒ
ドロゲナーゼ活性が著しく低下していた。
ように、上述の方法により得られた変異株はいずれも親
株として用いた野生株に比べてα−ケトグルタル酸デヒ
ドロゲナーゼ活性が著しく低下していた。
【００１８】
【表５】
【００１９】本発明で使用する変異株を野生株と比較し
た場合のα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性の低
下の度合は特に限定されるものではないが、野生株に比
べて５分の１乃至５００分の１、好ましくは１０分の１
乃至１００分の１程度に活性が下がっている変異株の使
用が好ましい。
た場合のα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性の低
下の度合は特に限定されるものではないが、野生株に比
べて５分の１乃至５００分の１、好ましくは１０分の１
乃至１００分の１程度に活性が下がっている変異株の使
用が好ましい。
【００２０】得られた変異株を用いてＬ−グルタミン酸
を生成蓄積させるには、甘藷、甜菜からの糖汁あるいは
廃糖蜜等のビオチン過剰原料を炭素源とする液体栄養培
地またはデンプン糖化液、酢酸等の炭素源にビオチンを
過剰に添加した液体培地中で培養を行う。ここで、従来
の方法では、ビオチンを過剰に含む液体培地中に培養を
行う場合にはビオチン作用抑制物質、すなわちペニシリ
ンＧ、Ｆ、Ｋ、Ｏ、Ｖ、Ｘ等のペニシリン類またはシュ
ークロースモノパルミテート、ポリオキシエチレンソル
ビタンモノパルミテート等の高級脂肪酸もしくはその誘
導体より成る界面活性剤を培地に添加することがＬ−グ
ルタミン酸を高収率で生産するために必要であったが、
野生株に比べてα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活
性が低下した本発明の変異株を使用する場合、１０乃至
１０００μｇ／ｌの高濃度のビオチンを含む液体栄養培
地で培養する際においても上記のようなビオチン作用抑
制物質の添加を行うことなく高収率、高蓄積でＬ−グル
タミン酸を生成蓄積させることができる。
を生成蓄積させるには、甘藷、甜菜からの糖汁あるいは
廃糖蜜等のビオチン過剰原料を炭素源とする液体栄養培
地またはデンプン糖化液、酢酸等の炭素源にビオチンを
過剰に添加した液体培地中で培養を行う。ここで、従来
の方法では、ビオチンを過剰に含む液体培地中に培養を
行う場合にはビオチン作用抑制物質、すなわちペニシリ
ンＧ、Ｆ、Ｋ、Ｏ、Ｖ、Ｘ等のペニシリン類またはシュ
ークロースモノパルミテート、ポリオキシエチレンソル
ビタンモノパルミテート等の高級脂肪酸もしくはその誘
導体より成る界面活性剤を培地に添加することがＬ−グ
ルタミン酸を高収率で生産するために必要であったが、
野生株に比べてα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活
性が低下した本発明の変異株を使用する場合、１０乃至
１０００μｇ／ｌの高濃度のビオチンを含む液体栄養培
地で培養する際においても上記のようなビオチン作用抑
制物質の添加を行うことなく高収率、高蓄積でＬ−グル
タミン酸を生成蓄積させることができる。
【００２１】使用する液体栄養培地は、炭素源の他に、
窒素源、無機イオンその他の栄養素を適宜含有する。窒
素源としては、通常のＬ−グルタミン酸発酵に用いられ
るアンモニウム塩、アンモニア水、アンモニアガス、尿
素等が用いられ、その他リン酸塩、マグネシウム塩等の
無機イオンが必要に応じて適宜使用される。また、必要
により、サイアミン等の微量栄養素が適宜培地に添加さ
れる。
窒素源、無機イオンその他の栄養素を適宜含有する。窒
素源としては、通常のＬ−グルタミン酸発酵に用いられ
るアンモニウム塩、アンモニア水、アンモニアガス、尿
素等が用いられ、その他リン酸塩、マグネシウム塩等の
無機イオンが必要に応じて適宜使用される。また、必要
により、サイアミン等の微量栄養素が適宜培地に添加さ
れる。
【００２２】培養は好気的条件下で行うのがよく、培養
温度２４〜４２℃、培養中ｐＨは５〜９に制御するのが
よく、ｐＨの調整には無機あるいは有機の酸性あるいは
アルカリ性物質、さらには尿素、炭酸カルシウム、アン
モニアガス等を使用することができる。
温度２４〜４２℃、培養中ｐＨは５〜９に制御するのが
よく、ｐＨの調整には無機あるいは有機の酸性あるいは
アルカリ性物質、さらには尿素、炭酸カルシウム、アン
モニアガス等を使用することができる。
【００２３】培養液からのＬ−グルタミン酸を採取する
方法は、イオン交換樹脂処理、晶析等公知の方法を適宜
組み合わせることにより行われる。
方法は、イオン交換樹脂処理、晶析等公知の方法を適宜
組み合わせることにより行われる。
【００２４】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳細に説
明する。
明する。
【００２５】実施例１ 表６の組成の種母培地を調製し、その２０ｍｌずつを５
００ｍｌ容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。この培地
に各菌株を接種し、３１．５℃に保ちつつ１５時間振盪
培養した（以下、これを種母培養液という）。
００ｍｌ容肩付フラスコに入れ加熱殺菌した。この培地
に各菌株を接種し、３１．５℃に保ちつつ１５時間振盪
培養した（以下、これを種母培養液という）。
【００２６】
【表６】
【００２７】次に、表７の組成を有する培地を別に調製
し、その２０ｍｌずつを５００ｍｌ容振盪フラスコに分
注し１１５℃で１０分加熱殺菌した。なお、この培地中
のビオチン濃度は６０μｇ／ｌであった。
し、その２０ｍｌずつを５００ｍｌ容振盪フラスコに分
注し１１５℃で１０分加熱殺菌した。なお、この培地中
のビオチン濃度は６０μｇ／ｌであった。
【００２８】
【表７】
【００２９】これらの培地に上記の種母培養液を張り込
み量の１０％相当接種し、往復振とう機により３１．５
℃で培養を行った。培養中、培養液をｐＨ６．０〜８．
５に保つように４５０ｍｇ／ｍｌの濃度の尿素溶液を少
量ずつ添加した。３６時間で発酵を終了し、培養液中に
蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を測定した。
み量の１０％相当接種し、往復振とう機により３１．５
℃で培養を行った。培養中、培養液をｐＨ６．０〜８．
５に保つように４５０ｍｇ／ｍｌの濃度の尿素溶液を少
量ずつ添加した。３６時間で発酵を終了し、培養液中に
蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を測定した。
【００３０】その結果、表８に示すように、親株ではＬ
−グルタミン酸の蓄積が極めて低かったのに対して、α
−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低下した変異
株は、いずれも良好にＬ−グルタミン酸を生成蓄積し
た。
−グルタミン酸の蓄積が極めて低かったのに対して、α
−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低下した変異
株は、いずれも良好にＬ−グルタミン酸を生成蓄積し
た。
【００３１】
【表８】
【００３２】実施例２ 表９の組成の培地を調製し、１リットル容ジャーファー
メンターに３００ｍｌずつ張込み１２０℃で１０分加熱
殺菌した。なお、この培地中のビオチン濃度は１５０μ
ｇ／ｌであった。
メンターに３００ｍｌずつ張込み１２０℃で１０分加熱
殺菌した。なお、この培地中のビオチン濃度は１５０μ
ｇ／ｌであった。
【００３３】
【表９】
【００３４】これらの培地に実施例１の各菌株の種母培
養液を張込み量の１０％相当を接種し３１．５℃で通気
撹拌培養を行った。培養中アンモニアガスにより培養液
のｐＨを７．８に調製した。３２時間で発酵を終了し、
培養液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を測定
した。
養液を張込み量の１０％相当を接種し３１．５℃で通気
撹拌培養を行った。培養中アンモニアガスにより培養液
のｐＨを７．８に調製した。３２時間で発酵を終了し、
培養液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を測定
した。
【００３５】その結果、表１０に示すように、親株では
Ｌ−グルタミン酸の蓄積が極めて低かったのに対して、
α−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低下した変
異株は、いずれも良好にＬ−グルタミン酸を生成蓄積し
た。
Ｌ−グルタミン酸の蓄積が極めて低かったのに対して、
α−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低下した変
異株は、いずれも良好にＬ−グルタミン酸を生成蓄積し
た。
【００３６】
【表１０】
【００３７】実施例３ 表１１の組成にビオチンを３、１０、５０、３００、１
０００μｇ／ｌの各濃度で添加した培地を調製し、１リ
ットル容ジャーファーメンターに３００ｍｌずつ張込み
１２０℃で１０分加熱殺菌した。
０００μｇ／ｌの各濃度で添加した培地を調製し、１リ
ットル容ジャーファーメンターに３００ｍｌずつ張込み
１２０℃で１０分加熱殺菌した。
【００３８】
【表１１】
【００３９】これらの培地に実施例１の各菌株の種母培
養液を張込み量の１０％相当を接種し３１．５℃で通気
撹拌培養を行った。培養中アンモニアガスにより培養液
のｐＨを７．８に調整した。３０時間で発酵を終了し、
培養液中に生成蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を
測定した。
養液を張込み量の１０％相当を接種し３１．５℃で通気
撹拌培養を行った。培養中アンモニアガスにより培養液
のｐＨを７．８に調整した。３０時間で発酵を終了し、
培養液中に生成蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を
測定した。
【００４０】その結果、表１２に示すように、ビオチン
濃度を３μｇ／ｌに制限したＬ−グルタミン酸生産培地
においては、親株と変異株のＬ−グルタミン酸蓄積量並
びに対糖収率はほぼ同等であった。一方、ビオチン濃度
１０乃至１０００μｇ／ｌの培地においては、親株はＬ
−グルタミン酸生産能が低下したのに対して、α−ケト
グルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低下した変異株は良
好にＬ−グルタミン酸を生成蓄積した。
濃度を３μｇ／ｌに制限したＬ−グルタミン酸生産培地
においては、親株と変異株のＬ−グルタミン酸蓄積量並
びに対糖収率はほぼ同等であった。一方、ビオチン濃度
１０乃至１０００μｇ／ｌの培地においては、親株はＬ
−グルタミン酸生産能が低下したのに対して、α−ケト
グルタル酸デヒドロゲナーゼ活性が低下した変異株は良
好にＬ−グルタミン酸を生成蓄積した。
【００４１】
【表１２】
【００４２】
【発明の効果】本発明のＬ−グルタミン酸の製造法によ
れば、高濃度のビオチンを含有する培地においてもペニ
シリン類あるいは界面活性剤等のビオチン作用抑制物質
を培地に添加することなくＬ−グルタミン酸を高収率、
高蓄積で生産することができる。
れば、高濃度のビオチンを含有する培地においてもペニ
シリン類あるいは界面活性剤等のビオチン作用抑制物質
を培地に添加することなくＬ−グルタミン酸を高収率、
高蓄積で生産することができる。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年８月２７日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２９】これらの培地に上記の種母培養液を張り込
み量の１０％相当接種し、往復振とう機により３１．５
℃で培養を行った。培養中、培養液をｐＨ６．０〜８．
５に保つように４５０ｍｇ／ｍｌの濃度の尿素溶液を少
量ずつ添加した。３６時間で発酵を終了し、培養液中に
蓄積したＬ−グルタミン酸の量を測定した。
み量の１０％相当接種し、往復振とう機により３１．５
℃で培養を行った。培養中、培養液をｐＨ６．０〜８．
５に保つように４５０ｍｇ／ｍｌの濃度の尿素溶液を少
量ずつ添加した。３６時間で発酵を終了し、培養液中に
蓄積したＬ−グルタミン酸の量を測定した。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３４】これらの培地に実施例１の各菌株の種母培
養液を張込み量の１０％相当を接種し３１．５℃で通気
撹拌培養を行った。培養中アンモニアガスにより培養液
のｐＨを７．８に調製した。３２時間で発酵を終了し、
培養液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の量を測定した。
養液を張込み量の１０％相当を接種し３１．５℃で通気
撹拌培養を行った。培養中アンモニアガスにより培養液
のｐＨを７．８に調製した。３２時間で発酵を終了し、
培養液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の量を測定した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３９】これらの培地に実施例１の各菌株の種母培
養液を張込み量の１０％相当を接種し３１．５℃で通気
撹拌培養を行った。培養中アンモニアガスにより培養液
のｐＨを７．８に調整した。３０時間で発酵を終了し、
培養液中に生成蓄積したＬ−グルタミン酸の量を測定し
た。
養液を張込み量の１０％相当を接種し３１．５℃で通気
撹拌培養を行った。培養中アンモニアガスにより培養液
のｐＨを７．８に調整した。３０時間で発酵を終了し、
培養液中に生成蓄積したＬ−グルタミン酸の量を測定し
た。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正内容】
【００４０】その結果、表１２に示すように、ビオチン
濃度を３μｇ／ｌに制限したＬ−グルタミン酸生産培地
においては、親株と変異株のＬ−グルタミン酸蓄積量は
ほぼ同等であった。一方、ビオチン濃度１０乃至１００
０μｇ／ｌの培地においては、親株はＬ−グルタミン酸
生産能が低下したのに対して、α−ケトグルタル酸デヒ
ドロゲナーゼ活性が低下した変異株は良好にＬ−グルタ
ミン酸を生成蓄積した。
濃度を３μｇ／ｌに制限したＬ−グルタミン酸生産培地
においては、親株と変異株のＬ−グルタミン酸蓄積量は
ほぼ同等であった。一方、ビオチン濃度１０乃至１００
０μｇ／ｌの培地においては、親株はＬ−グルタミン酸
生産能が低下したのに対して、α−ケトグルタル酸デヒ
ドロゲナーゼ活性が低下した変異株は良好にＬ−グルタ
ミン酸を生成蓄積した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 石井 恵史 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の 素株式会社川崎工場内 (72)発明者 河原 義雄 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の 素株式会社中央研究所内
Claims (1)
- 【請求項１】 ブレビバクテリウム属またはコリネバク
テリウム属に属し、野生株に比べてα−ケトグルタル酸
デヒドロゲナーゼ活性が低下し、かつＬ−グルタミン酸
生産能を有する変異株をビオチン濃度１０乃至１０００
μｇ／ｌの液体栄養培地中でビオチン作用抑制物質を培
地に添加することなく培養し、培養液中にＬ−グルタミ
ン酸を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
る発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP02681193A JP3301140B2 (ja) | 1993-02-16 | 1993-02-16 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
| KR1019930016391A KR100198039B1 (ko) | 1993-02-16 | 1993-08-24 | 발효에 의한 l-글루탐산의 제조방법 |
| PH46945A PH31685A (en) | 1993-02-16 | 1993-09-23 | Method of producing l-glutamic acid by fermentation. |
| CN94101578A CN1049689C (zh) | 1993-02-16 | 1994-02-08 | 通过发酵制备ｌ－谷氨酸的方法 |
| BR9400574A BR9400574A (pt) | 1993-02-16 | 1994-02-11 | Processo de produção de ácido L-glutâmico por fermentação |
| MYPI94000316A MY111441A (en) | 1993-02-16 | 1994-02-14 | Method of producing l-glutamic acid by fermentation |
| FR9401748A FR2701489B1 (fr) | 1993-02-16 | 1994-02-16 | Procede de production d'acide l-glutamique par fermentation. |
| US08/354,014 US5492818A (en) | 1993-02-16 | 1994-12-05 | Method of producing L-glutamic acid by fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP02681193A JP3301140B2 (ja) | 1993-02-16 | 1993-02-16 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06237779A true JPH06237779A (ja) | 1994-08-30 |
| JP3301140B2 JP3301140B2 (ja) | 2002-07-15 |
Family
ID=12203677
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP02681193A Expired - Lifetime JP3301140B2 (ja) | 1993-02-16 | 1993-02-16 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5492818A (ja) |
| JP (1) | JP3301140B2 (ja) |
| KR (1) | KR100198039B1 (ja) |
| CN (1) | CN1049689C (ja) |
| BR (1) | BR9400574A (ja) |
| FR (1) | FR2701489B1 (ja) |
| MY (1) | MY111441A (ja) |
| PH (1) | PH31685A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001072701A (ja) * | 1999-06-29 | 2001-03-21 | Ajinomoto Co Inc | タピオカ澱粉の製造方法及びアミノ酸の発酵生産方法 |
| JP2007097573A (ja) * | 2004-12-28 | 2007-04-19 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−グルタミン酸生産菌及びｌ−グルタミン酸の製造方法 |
| WO2008075483A1 (ja) * | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2012147989A1 (en) | 2011-04-25 | 2012-11-01 | Ajinomoto Co.,Inc. | A method for producing an l-amino acid belonging to the glutamate family, using a coryneform bacterium |
| EP2949660A1 (en) | 2004-12-28 | 2015-12-02 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing l-glutamic acid |
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|---|---|---|---|---|
| KR100513996B1 (ko) * | 1996-11-21 | 2005-12-07 | 아지노모토 가부시키가이샤 | 연속발효에의한l-글루탐산의제조방법 |
| JP3812019B2 (ja) * | 1996-11-21 | 2006-08-23 | 味の素株式会社 | 連続発酵によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
| JP4304837B2 (ja) * | 2000-07-05 | 2009-07-29 | 味の素株式会社 | Ｌ−グルタミン酸生産菌及びｌ−グルタミン酸の製造法 |
| US7205132B2 (en) * | 2004-09-10 | 2007-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid |
| JP4595506B2 (ja) * | 2004-11-25 | 2010-12-08 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造方法 |
| US7794989B2 (en) * | 2004-12-28 | 2010-09-14 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid |
| JP2010130899A (ja) | 2007-03-14 | 2010-06-17 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−グルタミン酸系アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法 |
| RU2007147436A (ru) * | 2007-12-21 | 2009-06-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Бактерия-продуцент (2s,3r,4s)-4-гидрокси-l-изолейцина и способ продукции (2s,3r,4s)-4-гидрокси-l-изолейцина |
| JP2016192903A (ja) | 2013-09-17 | 2016-11-17 | 味の素株式会社 | 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法 |
| JP5958653B2 (ja) | 2013-10-02 | 2016-08-02 | 味の素株式会社 | アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法 |
| CN104629768B (zh) * | 2015-01-22 | 2017-12-15 | 河海大学 | 一种降低滩涂盐碱地土壤碱性的微生物制品 |
| CN105274181A (zh) * | 2015-10-28 | 2016-01-27 | 新疆阜丰生物科技有限公司 | 一种从发酵液中提取γ-聚谷氨酸的方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5224593B2 (ja) * | 1973-10-17 | 1977-07-01 | ||
| JPS561889A (en) * | 1979-06-20 | 1981-01-10 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-glutamic acid by fermentation |
| US4411991A (en) * | 1980-10-07 | 1983-10-25 | Kanegafuchi Chemical Industry Company, Limited | Process for fermentative production of amino acids |
| JPS57115190A (en) * | 1980-12-29 | 1982-07-17 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-glutamic acid by fermentation |
| JPS58158192A (ja) * | 1982-03-15 | 1983-09-20 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
| DE68922460T2 (de) * | 1988-11-01 | 1996-02-15 | Asahi Chemical Ind | Thermoplastische Polymerzusammensetzung. |
| EP0469517A3 (en) * | 1990-07-30 | 1992-10-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing l-glutamic acid |
-
1993
- 1993-02-16 JP JP02681193A patent/JP3301140B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1993-08-24 KR KR1019930016391A patent/KR100198039B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1993-09-23 PH PH46945A patent/PH31685A/en unknown
-
1994
- 1994-02-08 CN CN94101578A patent/CN1049689C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-02-11 BR BR9400574A patent/BR9400574A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-02-14 MY MYPI94000316A patent/MY111441A/en unknown
- 1994-02-16 FR FR9401748A patent/FR2701489B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-05 US US08/354,014 patent/US5492818A/en not_active Expired - Lifetime
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| WO2008075483A1 (ja) * | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| WO2012147989A1 (en) | 2011-04-25 | 2012-11-01 | Ajinomoto Co.,Inc. | A method for producing an l-amino acid belonging to the glutamate family, using a coryneform bacterium |
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| Publication number | Publication date |
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| FR2701489B1 (fr) | 1996-11-15 |
| FR2701489A1 (fr) | 1994-08-19 |
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