JPS6324896A - 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法Info
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- JPS6324896A JPS6324896A JP61169555A JP16955586A JPS6324896A JP S6324896 A JPS6324896 A JP S6324896A JP 61169555 A JP61169555 A JP 61169555A JP 16955586 A JP16955586 A JP 16955586A JP S6324896 A JPS6324896 A JP S6324896A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は調味料に広く利用されているＬ−グルタミン酸
の製造法に関するものである。
の製造法に関するものである。
（従来の技術）
従来よりブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属
に属する微生物により、Ｌ−グルタミン酸は発酵法によ
り工業的に生産されている。
に属する微生物により、Ｌ−グルタミン酸は発酵法によ
り工業的に生産されている。
発酵法によるＬ−リジンの製造法に関し、高濃度エチレ
ングリコール（３０９／ｄｉ ）に耐性を有し、Ｌ−リ
ジン生産能を有するコリネバクテリウム属又はブレビバ
クテリウム属に属する微生物がＬ−リジンを大量に生成
することが知られている（特開昭５７−１１５１８６）
。しかし、Ｌ−グルタミン酸発酵において、高濃度食塩
（１０ｇＡ以上）に耐性を有するＬ−グルタミン酸生産
菌が高蓄積でＬ−グルタミン酸を生成することは今まで
に知られていない。
ングリコール（３０９／ｄｉ ）に耐性を有し、Ｌ−リ
ジン生産能を有するコリネバクテリウム属又はブレビバ
クテリウム属に属する微生物がＬ−リジンを大量に生成
することが知られている（特開昭５７−１１５１８６）
。しかし、Ｌ−グルタミン酸発酵において、高濃度食塩
（１０ｇＡ以上）に耐性を有するＬ−グルタミン酸生産
菌が高蓄積でＬ−グルタミン酸を生成することは今まで
に知られていない。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明が解決しようとする問題点は発酵法によりＬ−ア
ミノ酸を工業的にさらに安価に製造する方法を開発する
ことにある。
ミノ酸を工業的にさらに安価に製造する方法を開発する
ことにある。
（問題点を解決する為の手段）
本発明者等は、従来の発酵法によるＬ−グルタミン酸の
製造法を改良すべく鋭意研究した結果、ブレビバクテリ
ウム属又はコリネバクテリウム属のＬ−グルタミン酸生
産菌より誘導した高濃度塩類存在下でも生育可能な変異
株の中からＬ−グルタミン酸生産能の優秀な菌株を分離
育成することに成功した。本発明は、ブレビバクテリウ
ム属又はコリネ゛バクテリウム属に萬し高濃度塩類存在
下でも生育可能でかつＬ−グルタミン酸生成能を有する
変異株を肢体培地中で培養し培養液中にＬ−グルタミン
酸を生成蓄積させて、これを採取することを特徴とする
発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造方法であり、本発
明に使用する高濃度塩類存在下でも生育可能な菌株とし
ては、具体的−例として高濃度ＮａＣＬ存在下で生育可
能な菌株ブレビバクテリウムラクトファーメンタム（Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ ｉｕｍＬａｃｔｏｆｓｒｍｅｎ
ｔｕｍ ＡＪ １２３００ ）及びコリネパクテリウム
ダルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌ
ｕｔａｍｉｃｕｍＡＪ１２３０１）がある。
製造法を改良すべく鋭意研究した結果、ブレビバクテリ
ウム属又はコリネバクテリウム属のＬ−グルタミン酸生
産菌より誘導した高濃度塩類存在下でも生育可能な変異
株の中からＬ−グルタミン酸生産能の優秀な菌株を分離
育成することに成功した。本発明は、ブレビバクテリウ
ム属又はコリネ゛バクテリウム属に萬し高濃度塩類存在
下でも生育可能でかつＬ−グルタミン酸生成能を有する
変異株を肢体培地中で培養し培養液中にＬ−グルタミン
酸を生成蓄積させて、これを採取することを特徴とする
発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造方法であり、本発
明に使用する高濃度塩類存在下でも生育可能な菌株とし
ては、具体的−例として高濃度ＮａＣＬ存在下で生育可
能な菌株ブレビバクテリウムラクトファーメンタム（Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ ｉｕｍＬａｃｔｏｆｓｒｍｅｎ
ｔｕｍ ＡＪ １２３００ ）及びコリネパクテリウム
ダルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌ
ｕｔａｍｉｃｕｍＡＪ１２３０１）がある。
これらの菌株はそれぞれブレビバクテリウムラクトファ
ーメンタムＡＴＣＣ１３８６９，コリネパクテリウムグ
ルタミカムＡＴＣＣ１３０３２を親株として変異誘導し
たものであり、その池親株としてコリネノ９クテリウム
アセトアシドフイラムＡＴＣＣ１３８７０゜ブレビバク
テリウムフラバムＡＴＣＣ１４０６７、ブレビバクテリ
ウム・ディバリカタム（Ｅｒｅｖｆｂａｃｔｅｒ１ｕｍ
ｄａｖ＊ｒｉｃａｔｕｍ ） ＮＲＲＬＢ −２３１１
１，ブレビバクテリウム・サツ力ロライティカム（Ｂｒ
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｓａｃｃｈａｒｏｌｉｔｉｃ
ｕｍ ） ＡＴＣＣ１４０６６等のブレビバクテリウム
属更にはコリネバ多チリウム・アセティグルタミカム（
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｌｕｍ ａｃｅｔｉｇｌｕｔ
ａｍｉｃｕｍ）ＡＴＣＣ１５８０６、ミクロバクテリウ
ム・アンモニアフイラム（Ｍｌｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ ａｍｍｏｎｌａｐｈｉｌｕｍ ）ＡＴＣＣ１５３５
４等のＬ−グルタミン酸生産菌も親株として使用するこ
とができる。
ーメンタムＡＴＣＣ１３８６９，コリネパクテリウムグ
ルタミカムＡＴＣＣ１３０３２を親株として変異誘導し
たものであり、その池親株としてコリネノ９クテリウム
アセトアシドフイラムＡＴＣＣ１３８７０゜ブレビバク
テリウムフラバムＡＴＣＣ１４０６７、ブレビバクテリ
ウム・ディバリカタム（Ｅｒｅｖｆｂａｃｔｅｒ１ｕｍ
ｄａｖ＊ｒｉｃａｔｕｍ ） ＮＲＲＬＢ −２３１１
１，ブレビバクテリウム・サツ力ロライティカム（Ｂｒ
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｓａｃｃｈａｒｏｌｉｔｉｃ
ｕｍ ） ＡＴＣＣ１４０６６等のブレビバクテリウム
属更にはコリネバ多チリウム・アセティグルタミカム（
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｌｕｍ ａｃｅｔｉｇｌｕｔ
ａｍｉｃｕｍ）ＡＴＣＣ１５８０６、ミクロバクテリウ
ム・アンモニアフイラム（Ｍｌｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ ａｍｍｏｎｌａｐｈｉｌｕｍ ）ＡＴＣＣ１５３５
４等のＬ−グルタミン酸生産菌も親株として使用するこ
とができる。
上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照射、Ｘ線
照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の通常の方法が用
いられ、例えば２５０μｇ７ｔｔｔｔのＮ−二トローＮ
′−メチルーＮ−二トロングアニジンにより３０℃で２
０分間処理する方法等がある。尚、高濃度塩類とは培養
液中に微生物を培養する際、添加することにより培養液
中の浸透圧を高めそれによって生育が遅延・阻害される
塩類全天い、例えば塩化ナトリウム・塩化カリウム・塩
化アンモニウム・塩化マグネシウム・塩化カルシウム・
塩化第−銖・塩化第二鉄、塩化マンガン・塩化（２）マ
ンガン・硫酸アンモニウム・硫酸ナトリウム・硫酸カリ
ウム・硫酸第１鉄・硫酸マグネシウム・硫酸第２鉄・リ
ン酸１カリウム・リン酸２カリウム・リン酸１ナトリウ
ム・リン酸２ナトリウム・リン酸アンモニウム・グルタ
ミン酸ナトリウム・グルタミン酸アンモニウム・ソルビ
トール番シュクロースφフラクトース暢グルコース・フ
マール酸・クエク゛リ ン酸・エチレンＰコール等があり高濃度塩類存在下生育
可能法とは上記の如き塩類を高濃度に含有した培地中（
固体・液体）で親株が生育し得ない条件下でも生育し得
るような菌株を云う。−例としてＮａＣ１高濃度存在下
における実験結果を第１表に示す。
照射、放射線照射、変異誘起剤処理等の通常の方法が用
いられ、例えば２５０μｇ７ｔｔｔｔのＮ−二トローＮ
′−メチルーＮ−二トロングアニジンにより３０℃で２
０分間処理する方法等がある。尚、高濃度塩類とは培養
液中に微生物を培養する際、添加することにより培養液
中の浸透圧を高めそれによって生育が遅延・阻害される
塩類全天い、例えば塩化ナトリウム・塩化カリウム・塩
化アンモニウム・塩化マグネシウム・塩化カルシウム・
塩化第−銖・塩化第二鉄、塩化マンガン・塩化（２）マ
ンガン・硫酸アンモニウム・硫酸ナトリウム・硫酸カリ
ウム・硫酸第１鉄・硫酸マグネシウム・硫酸第２鉄・リ
ン酸１カリウム・リン酸２カリウム・リン酸１ナトリウ
ム・リン酸２ナトリウム・リン酸アンモニウム・グルタ
ミン酸ナトリウム・グルタミン酸アンモニウム・ソルビ
トール番シュクロースφフラクトース暢グルコース・フ
マール酸・クエク゛リ ン酸・エチレンＰコール等があり高濃度塩類存在下生育
可能法とは上記の如き塩類を高濃度に含有した培地中（
固体・液体）で親株が生育し得ない条件下でも生育し得
るような菌株を云う。−例としてＮａＣ１高濃度存在下
における実験結果を第１表に示す。
第１表の各菌株の生育度は次のように測定した。
ポリペプトン１％、酵母エキス１％食塩０，５〜２０．
０チ寒天２％（ｐ）１７．０）を含有する培地を１２０
℃で２０分間殺菌し寒天グレートｔ−ｇ製した。このプ
レートにブイヨンスラントで２４時間培養した菌株を無
菌水で懸濁してプレート当り１００〜２００個の菌数を
植菌し培養温度３１，５℃で４１３５卒斗時間培養し出
現したコロニーの大きさを測定した。上記の高濃度塩類
存在下で生育可能な菌株を用いてＬ−グルタミン酸を生
成・蓄積させるにはＬ−グルタミン酸発酵に用いられる
常法を用いて行えばよい。
０チ寒天２％（ｐ）１７．０）を含有する培地を１２０
℃で２０分間殺菌し寒天グレートｔ−ｇ製した。このプ
レートにブイヨンスラントで２４時間培養した菌株を無
菌水で懸濁してプレート当り１００〜２００個の菌数を
植菌し培養温度３１，５℃で４１３５卒斗時間培養し出
現したコロニーの大きさを測定した。上記の高濃度塩類
存在下で生育可能な菌株を用いてＬ−グルタミン酸を生
成・蓄積させるにはＬ−グルタミン酸発酵に用いられる
常法を用いて行えばよい。
すなわち、使用する培地としては、通常の炭素源、窒素
源、無機イオンその他の栄養素の含有する通常の培地が
用いられる炭素源として例えばサトウキビ甜菜からの糖
汁あるいは廃糖蜜、澱粉。
源、無機イオンその他の栄養素の含有する通常の培地が
用いられる炭素源として例えばサトウキビ甜菜からの糖
汁あるいは廃糖蜜、澱粉。
加水分解物等の糖質原料等または酢酸等の有機酸等を用
いる。窒素源としては通常のＬ−グルタミン酸発酵に用
いられる例えば、アンモニウム塩・アンモニア水、尿素
等が用いられ、その他リン酸イオン、マグネシウムイオ
ン等の無機イオンが必要に応じて適宜使用され、又ピオ
チンに関してもピオチン又はビオチン活性物質が生育の
適量以下の制限条件下において行われ、廃糖蜜等のビオ
チン過剰原料を炭素源として使用するときはペニシリン
Ｇ、Ｆ、Ｋ・Ｏ，Ｖ、Ｘ等の４ニシリｙ類あるいはシュ
ークｏ−ス％ ／ ｚ！ルミテート、ポリオキシエチレ
ンソルビタンモノパルミテート等の高級脂肪酸又はその
誘導体よりなる界面活性剤をビオチン抑制物質として添
加する等の方法で行われ、培養条件についても温度３０
〜４０℃、ｐＨ６〜８．５の範囲内で好気的条件で実施
する等常法によって実施する。
いる。窒素源としては通常のＬ−グルタミン酸発酵に用
いられる例えば、アンモニウム塩・アンモニア水、尿素
等が用いられ、その他リン酸イオン、マグネシウムイオ
ン等の無機イオンが必要に応じて適宜使用され、又ピオ
チンに関してもピオチン又はビオチン活性物質が生育の
適量以下の制限条件下において行われ、廃糖蜜等のビオ
チン過剰原料を炭素源として使用するときはペニシリン
Ｇ、Ｆ、Ｋ・Ｏ，Ｖ、Ｘ等の４ニシリｙ類あるいはシュ
ークｏ−ス％ ／ ｚ！ルミテート、ポリオキシエチレ
ンソルビタンモノパルミテート等の高級脂肪酸又はその
誘導体よりなる界面活性剤をビオチン抑制物質として添
加する等の方法で行われ、培養条件についても温度３０
〜４０℃、ｐＨ６〜８．５の範囲内で好気的条件で実施
する等常法によって実施する。
以下本発明の高濃度塩類存在下で生育可能な変異株を用
いた実施例を次に示す。
いた実施例を次に示す。
実施例１
グル：Ｉ−ス５０ ｍ９／ｍｌｚ尿素２ｍｇ／ｍｅ、Ｋ
Ｈ２ＰＯ４１ｍ’ｌＡｌ、ＭｇＳＯ４・７ ａｑ ０．
４ ｍ９／ｄ−ＦｅＳＯ４・７ａｑ １０ μｐ／＆／
ｌＭｎＳＯ４Ｈ４ａｑ １０μｋＭ、大豆蛋白酸加水分
解物（「味液」）５μ々Ｕサイアミン塩酸塩１００μ９
ｙｆｎｌ 、ピオチンｚ５μ９７／ｌ ＮａＣ２２５≠
ｌを含有する培地を調製しその２０ｍづつを５００４容
の振盪フラスコに人れ１１５℃で１０分間加熱殺菌した
。この培地に次に示す菌株を温度３１．５℃で往復振盪
培養を行りた。培養中、培養液をｐＨ６，０から＆５に
保つように４５０ ｍ９／ｍｌの濃度の尿素溶液を少量
づつ添加した。３０時間で発酵を終了し発酵液中に蓄積
したし一グルダミン酸の対糖収率を測定した。そのわ 結果、第２表に示すように、いづれφ高濃度塩類存在下
で生育可能な株ン良好蓄し−グルタミン酸を蓄積した。
Ｈ２ＰＯ４１ｍ’ｌＡｌ、ＭｇＳＯ４・７ ａｑ ０．
４ ｍ９／ｄ−ＦｅＳＯ４・７ａｑ １０ μｐ／＆／
ｌＭｎＳＯ４Ｈ４ａｑ １０μｋＭ、大豆蛋白酸加水分
解物（「味液」）５μ々Ｕサイアミン塩酸塩１００μ９
ｙｆｎｌ 、ピオチンｚ５μ９７／ｌ ＮａＣ２２５≠
ｌを含有する培地を調製しその２０ｍづつを５００４容
の振盪フラスコに人れ１１５℃で１０分間加熱殺菌した
。この培地に次に示す菌株を温度３１．５℃で往復振盪
培養を行りた。培養中、培養液をｐＨ６，０から＆５に
保つように４５０ ｍ９／ｍｌの濃度の尿素溶液を少量
づつ添加した。３０時間で発酵を終了し発酵液中に蓄積
したし一グルダミン酸の対糖収率を測定した。そのわ 結果、第２表に示すように、いづれφ高濃度塩類存在下
で生育可能な株ン良好蓄し−グルタミン酸を蓄積した。
第 ２ 表 。
実施例２
廃糖蜜（グルコース換ｇ ） ６０ ｍ９／ｍｌ、 Ｋ
Ｈ２ＰＯ４１”ｉ’／！Ｉｔｌ、ＭｇＳＯ４・７ａｑ
１ｍ９／ｍ！、サイアミン塩酸塩１００μＶノの組成と
更に培養液中の浸透圧を高めるべく食塩２５■／ｍｌを
添加した培地を調製しくＦＪ−１７、０） 、その２０
ゴづつを５００ｍ振盪フラスコに分注し１１５℃−１０
′加熱殺菌した。これらの培地に下記の菌株を接種し、
往復蛋盪機により３１．５℃で培養を行った。
Ｈ２ＰＯ４１”ｉ’／！Ｉｔｌ、ＭｇＳＯ４・７ａｑ
１ｍ９／ｍ！、サイアミン塩酸塩１００μＶノの組成と
更に培養液中の浸透圧を高めるべく食塩２５■／ｍｌを
添加した培地を調製しくＦＪ−１７、０） 、その２０
ゴづつを５００ｍ振盪フラスコに分注し１１５℃−１０
′加熱殺菌した。これらの培地に下記の菌株を接種し、
往復蛋盪機により３１．５℃で培養を行った。
培養中、培養液をｐＨ６，０〜８．５に保つように４５
０ ｖｕｙ／ｒｒｔｌの濃度の尿素溶液を少量づつ添加
した。
０ ｖｕｙ／ｒｒｔｌの濃度の尿素溶液を少量づつ添加
した。
培養液の２６倍希釈液が５６２ｍμの吸光度で０，３゜
に到達した時に？リオキシェチレンソルビクンモノパル
ミテー） （ＰＥ５Ｐ ）を添加した。３６時間で発酵
を終了し、発酵液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖
収率を測定した。その結果第３表に示すように高浸透圧
下の条件でもＬ−グルタミン酸を良好に蓄積した。
に到達した時に？リオキシェチレンソルビクンモノパル
ミテー） （ＰＥ５Ｐ ）を添加した。３６時間で発酵
を終了し、発酵液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖
収率を測定した。その結果第３表に示すように高浸透圧
下の条件でもＬ−グルタミン酸を良好に蓄積した。
第 ３ 表
実施例３
廃欅蜜（グルコース換算） １５０ ｒｖ／Ｒ１，ＫＨ
２ＰＯ４１ｒｎ９／ｍｌ 、 ＭｇＳＯ４・７ａｑ 、
Ｉ Ｉｎ９／’１サイアミン塩酸塩１００μＶ！、消
泡剤０．０２ ｄ／ｌツルくトールｓｏｍｐ、’ｍｌを
有した培地を調整しくｐＨ７，０）ＩＡ’ 容のジャー
ファーメンタ−に３ｏｏｎ＠張り込み１２０℃−１０’
加熱殺菌した。
２ＰＯ４１ｒｎ９／ｍｌ 、 ＭｇＳＯ４・７ａｑ 、
Ｉ Ｉｎ９／’１サイアミン塩酸塩１００μＶ！、消
泡剤０．０２ ｄ／ｌツルくトールｓｏｍｐ、’ｍｌを
有した培地を調整しくｐＨ７，０）ＩＡ’ 容のジャー
ファーメンタ−に３ｏｏｎ＠張り込み１２０℃−１０’
加熱殺菌した。
下記の菌を接覆し３１，５℃で通気攪拌培養を行った。
培養中アンモニアガスを７アーメンターに通し培養液を
ｐＨ７，８に調整した培養液の２６倍希他 釈液が５６２ｍμの吸腺度で０．３５に到達した時にＰ
Ｅ５Ｐを添加した。発酵終了後発酵液中に蓄積したＬ−
グルタミン酸の対糖収率を測定した。その結果第４表に
示すように高濃度塩類存在下で生育可能な菌株は生育し
ない菌株に比較しＬ−グルタミン酸を良好に蓄積した。
ｐＨ７，８に調整した培養液の２６倍希他 釈液が５６２ｍμの吸腺度で０．３５に到達した時にＰ
Ｅ５Ｐを添加した。発酵終了後発酵液中に蓄積したＬ−
グルタミン酸の対糖収率を測定した。その結果第４表に
示すように高濃度塩類存在下で生育可能な菌株は生育し
ない菌株に比較しＬ−グルタミン酸を良好に蓄積した。
第 ４ 表
手続補正器
昭和６２年５月１９日
Claims (1)
- ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属に属
しＬ−グルタミン酸生産能を有しかつポリペプトン１％
、酵母エキス１％、寒天２．０％に食塩を１０ｇ／ｄｌ
以上添加した培地中で３１．５℃で４８時間で生育する
変異株を液体培地中で好気的に培養して培養液中にＬ−
グルタミン酸を生成・蓄積せしめ、これを採取すること
を特徴とするＬ−グルタミン酸の製造法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61169555A JPH0822235B2 (ja) | 1986-07-18 | 1986-07-18 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
| KR1019870007743A KR960009066B1 (ko) | 1986-07-18 | 1987-07-16 | L-글루탐산을 제조하는 발효방법 |
| PH35552A PH23987A (en) | 1986-07-18 | 1987-07-17 | Fermentation process for producing 1-glutamic acid |
| BR8703741A BR8703741A (pt) | 1986-07-18 | 1987-07-17 | Processo de fermentacao para produzir acido i-glutamico |
| FR878710164A FR2601691B1 (fr) | 1986-07-18 | 1987-07-17 | Procede de fermentation pour la production d'acide-l-glutamique |
| MYPI87001056A MY102872A (en) | 1986-07-18 | 1987-07-18 | Fermentation process for producing l-glutamic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61169555A JPH0822235B2 (ja) | 1986-07-18 | 1986-07-18 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6324896A true JPS6324896A (ja) | 1988-02-02 |
| JPH0822235B2 JPH0822235B2 (ja) | 1996-03-06 |
Family
ID=15888634
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61169555A Expired - Lifetime JPH0822235B2 (ja) | 1986-07-18 | 1986-07-18 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0822235B2 (ja) |
| KR (1) | KR960009066B1 (ja) |
| BR (1) | BR8703741A (ja) |
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